【CN110007091A】一种脂联素检测试剂盒及其制备方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910261668.4

(22)申请日 2019.04.02

(71)申请人 杭州博谱医药科技有限公司

地址 311121 浙江省杭州市余杭区仓前街

道龙潭路8号1幢105室

(72)发明人 朱永良　陈佳明　周沛沛　郑毓婕　

(74)专利代理机构 杭州杭诚专利事务所有限公

司 33109

代理人 尉伟敏

(51)Int.Cl.

G01N 33/68(2006.01)

G01N 33/74(2006.01)

(54)发明名称一种脂联素检测试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明属于医学检验领域，具体涉及一种人体内脂联素含量的检测试剂盒，其包括试剂R1以及试剂R2；试剂R1为包被脂联素单抗1的胶乳颗粒；试剂R2为包被脂联素单抗2的胶乳颗粒。本发明克服了现有的胶乳免疫比浊法脂联素检测试剂盒中试剂R1以及试剂R2在使用过程中会出现混合不均的现象，导致试剂空白以及反应幅度波动，同时试剂R2中的多抗会与Ⅷ型胶原、补体C1q 和Ⅷ因子有交叉反应，影响测试结果准确性，本发明中的试剂R1以及R2均为胶乳试剂，提升两者的混合均匀性，避免出现试剂空白以及反应幅度大幅波动的现象；通过将脂联素单抗替换传统试剂中使用的脂联素多抗，避免了额外的交叉反应，

提升了试剂的检测精确性以及稳定性。权利要求书1页 说明书9页 附图1页CN 110007091 A 2019.07.12

C N 110007091

A

1.一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括试剂R1以及试剂R2；

所述的试剂R1为包被脂联素单抗1(Adiponectin Monoclonal Antibody)的胶乳颗粒；

所述的试剂R2为包被脂联素单抗2(Mouse Anti-Human Adiponectin)的胶乳颗粒。

2.根据权利要求1所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂R1制备方法如下：将胶乳颗粒在活化准备液的作用下形成活性酯，再将所述活性酯与含有脂联素单抗1 (Adiponectin Monoclonal Antibody)的抗体溶液1反应，然后再加入封闭剂完成偶联，得到包被脂联素单抗1(Adiponectin Monoclonal Antibody)的胶乳颗粒R1。

3.根据权利要求2所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体溶液1中脂联素单抗1(Adiponectin Monoclonal Antibody)的浓度为2mg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂R2制备方法如下：将胶乳颗粒在活化准备液的作用下形成活性酯，再将所述活性酯与含有脂联素单抗2 (Mouse Anti-Human Adiponectin)的抗体溶液2反应，然后再加入封闭剂完成偶联，得到包被脂联素单抗2(Mouse Anti-Human Adiponectin)的胶乳颗粒R2。

5.根据权利要求4所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体溶液2中脂联素单抗2(Mouse Anti-Human Adiponectin)的浓度为2mg/mL。

6.根据权利要求2或4所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的活化准备液为活化准备液1以及活化准备液2的组合物，其中所述的活化准备液1为N-羟基琥珀酰亚胺纯化水溶液，所述的活化准备液2为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐纯化水溶液。

7.根据权利要求6所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的活化准备液1的配制方法如下：准确称量50mg N-羟基琥珀酰亚胺，用2mL纯化水溶解，摇晃均匀得到活化准备液1；所述的活化准备液2的配制方法如下：准确称量30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，用4mL纯化水溶解，摇晃均匀得到活化准备液2。

8.根据权利要求2或4所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的封闭剂为BSA 溶液或者吐温20溶液中的一种或两种的组合物。

9.根据权利要求8所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的BSA溶液为2%BSA 溶液，溶剂为纯化水；所述的吐温20溶液为5%吐温20溶液，溶剂为纯化水。

10.一种制备如权利要求1

~9所述的脂联素检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

（1）试剂R1的制备：制备包被脂联素单抗1(Adiponectin Monoclonal Antibody)的胶乳颗粒R1；（2）试剂R2的制备：制备包被脂联素单抗2(Mouse Anti-Human Adiponectin)的胶乳颗粒R2；（3）将试剂R1以及试剂R2单独分装，密封保存即得。

权　利　要　求　书1/1页

2

CN 110007091 A

发明专利-方法类技术交底书模板

专利技术交底书的撰写 一份清楚明了的专利交底书有利于代理人深入理解发明人的构思。专利技术交底书主要包含发明名称、技术领域、背景技术、发明内容、附图和具体实施方式，下面介绍在撰写计算机领域的专利交底书时应注意的问题。 一、发明名称：（表明本发明创造所要保护的主题，不能超过25个字，不能用商业宣传语。） 例如：一种煤气灶点火装置自动装配机的控制方法 二、技术领域：（本技术方案所属或直接应用的具体技术领域，不是上位和相邻的技术领域，也不是技术方案本身。） 例如：本发明涉及煤气灶点火装置的技术领域，尤其涉及一种煤气灶点火装置自动装配机的控制方法 三、背景技术：（发明人在申请专利之前应进行全面地检索（可在国家知识产权局网https://www.wendangku.net/doc/258811812.html,进行检索），检索出在相同领域、相似领域里与本发明最接近的现有技术，也就是采用与本发明基本相同或相似的技术手段，解决基本相同或相似的技术问题，达到基本相同或相似的技术目的的现有技术，或者公开了本发明的特征最多的现有技术，最接近的现有技术可能有一个或多个。分析最接近的现有技术所存在的缺陷，以便突出本发明的创新点。检索范围包括国内外的专利文献和非专利文献，如期刊、杂志等公开出版物。在背景文件中，还应该写明对本发明创造的理解和审查有用的其它背景技术。） 例如： 四、解决的技术问题（在分析了背景技术存在缺陷的基础上，写明本发明的

目的是要解决什么问题） 例如： 五、发明内容以及实施方式（所采用的技术手段是如何克服现有技术的缺陷的。计算机领域的发明创造一般涉及到系统结构和方法（包括数据处理方法、控制方法等）。涉及系统结构的应写明整个系统的组成部分，以及各部分之间的连接和通讯关系。涉及方法的应写明执行方法的逻辑步骤，以及执行方法后所达到的目标和效果。） 方法步骤，例如： （可对方法中每个步骤进行更加详细的描述，也可列举具体实施例，便于专利工程师理解技术方案，在撰写过程中对技术方案进行完全公开，利于后续专利的授权。）

脂联素与乳腺癌的关系研究进展

·综述· 脂联素与乳腺癌的关系研究进展 刘爱蕙 吴玉梅① 首都医科大学附属北京妇产医院乳腺科100006 中国图书分类号 R737.9 文献标识码 A 文章编号1001- 4411（2012）24-3827-04①通讯作者 脂联素（adiponectin ，ADP ），一种由脂肪组织分泌 的脂肪细胞因子于1996年被发现，与瘦素、血管内皮生长因子、血管紧张素、抵抗素、纤维酶原激活物抑制剂1（PAI1）、肝细胞生长因子、肿瘤生长因子－α、白细胞介素－6和酰化刺激蛋白（ASP ）等不同，它是迄今为止发现的唯一对人体有保护作用的脂肪细胞因子。已有多项研究证明脂联素可以抑制乳腺癌的发生发展，但最近有了不同于之前假设的研究发现。该文就脂联素与乳腺癌的关系研究进展做一综述。1脂联素及其受体概述1.1 脂联素的结构与存在形式 脂联素是1996年发 现的脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽，也称为GBP28、AdipoQ 、ACRP30、apM1。人脂联素基因定位于染色体3q27，编码244个氨基酸，相对分子质量30000，由3个外显子和2个内含子组成。脂联素由一个羧基球形结构域、胶原样纤维结构域以及氨 基端信号序列三部分组成。脂联素在血清中主要以3种形式存在：三聚体、六聚体和高分子质量多聚体（HMW ）。绝大多数细胞内的脂联素由HMW 构成，然而低分子量的三聚体、六聚体是循环系统中的主要存在形式。人血浆脂联素水平一般为1.9 17.0mg /L 。1.2脂联素受体的基因定位Yamauchi 等〔1〕的研究于2003年2月首次从人的骨骼肌细胞克隆出两类脂联素受体基因，并分别命名为AdipoR1和AdipoR2。AdipoR1的基因定位于染色体1p36.13 q41和1E4，而AdipoR2的基因定位于染色体12p31.31和6F1。AdipoR1和AdipoR2的结构高度相关，有66.7%的同源性。AdipoR1表达广泛，以骨骼肌表达最为丰富，而AdipoR2则主要表达于肝脏组织。AdipoR1对球形脂联素有高度亲和性，但对全长型脂联素的亲和力很低；AdipoR2对球形脂联素和全长型脂联素都有着中度亲和性。AdipoR1和AdipoR2包含7个跨膜结构域，它们似乎不与G 蛋白耦联，但激活唯一的一套信息分子如过氧化物酶体增殖物激活受体α、腺苷酸活化蛋白激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶。2004年Hug 等〔2〕用与Yamauchi 同样的实验方法得出结论：T －cadherin 是脂联素六聚体和高分子质量多聚体的受体，不与脂联素球状结构域、脂联素三聚体结合，并且只可以与真核生物表达的脂联素结合。 1.3脂联素的一般生理功能脂联素单体只存在于脂肪细胞中， 单体只有形成多聚体后才能被分泌至细胞外，发挥生物学活性。动物实验及临床研究均提示，血浆脂联素水平与机体胰岛素敏感性有很强的相关性，脂联素具有抗动脉粥样硬化、降低低密度脂蛋白和甘油三酯水平、改善胰岛素抵抗、降血糖、抗炎等生物学作用，在肥胖、胰岛素抵抗、Ⅱ型糖尿病时血中脂联素水平下降。脂联素除了直接作用于外周组织，也通过作用于脑来提高葡萄糖代谢和减轻体重，能够通过循环进入脑脊髓液而作用于神经元细胞。这些中央释放的脂联素能够提高能量消耗使老鼠的体重减轻，脂肪减少，不同于瘦素通过减少食物摄取来减轻体重。脂联素与胰岛素抵抗关系密切，其改善胰岛素敏感性的机制为：①增加肝脏和骨骼肌脂肪酸氧化，循环中的游离脂肪酸及组织中的三酰甘油均参与胰岛素抵抗的发病；②直接促进胰岛素受体及受体后水平信号转导；③抑制糖异生，通过抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和葡萄糖－6－磷酸酶的活性，增强胰岛素对肝细胞内糖异生和肝糖输出的抑制作用；④抑制脂肪组织TNF － α信号转导， TNF －α与血浆脂联素呈负相关，TNF －α活性减少可改善胰岛素敏感性。 1.4脂联素的抗肿瘤功能脂联素的抗肿瘤作用被广泛研究，有可能的机制包括：脂联素选择性地与促有丝分裂的生长因子PDGF －BB 、碱性成纤维生长因子（bF-GF ）、HB －EGF 结合，限制它们的作用从而抑制血管平滑肌细胞增殖来抑制肿瘤细胞的生长。脂联素可以使血管内皮细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶caspase －8、－9和－3激活，通过抑制内皮细胞分裂与迁移诱导内皮细胞凋亡而抗血管生成，从而对肿瘤进展产生抑制作用。脂联素能够直接抑制STAT －3激活，诱导细 胞凋亡。Yokota 等〔3〕 的研究表明脂联素可以抑制骨髓单核细胞株在体外的生长，诱导骨髓单核祖细胞的凋亡， 调整凋亡相关基因在M1细胞中的表达以及向下调节Bcl －2基因的表达。脂联素还可抑制NF －κB 活性，而NF －κB 可以增量调节VEGF 在乳腺癌细胞中的表达。研究表明脂联素可以诱导抗细胞增殖与增加促细 · 7283·刘爱蕙等脂联素与乳腺癌的关系研究进展第24期

【CN110007091A】一种脂联素检测试剂盒及其制备方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910261668.4 (22)申请日 2019.04.02 (71)申请人 杭州博谱医药科技有限公司 地址 311121 浙江省杭州市余杭区仓前街 道龙潭路8号1幢105室 (72)发明人 朱永良　陈佳明　周沛沛　郑毓婕　 (74)专利代理机构 杭州杭诚专利事务所有限公 司 33109 代理人 尉伟敏 (51)Int.Cl. G01N 33/68(2006.01) G01N 33/74(2006.01) (54)发明名称一种脂联素检测试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明属于医学检验领域，具体涉及一种人体内脂联素含量的检测试剂盒，其包括试剂R1以及试剂R2；试剂R1为包被脂联素单抗1的胶乳颗粒；试剂R2为包被脂联素单抗2的胶乳颗粒。本发明克服了现有的胶乳免疫比浊法脂联素检测试剂盒中试剂R1以及试剂R2在使用过程中会出现混合不均的现象，导致试剂空白以及反应幅度波动，同时试剂R2中的多抗会与Ⅷ型胶原、补体C1q 和Ⅷ因子有交叉反应，影响测试结果准确性，本发明中的试剂R1以及R2均为胶乳试剂，提升两者的混合均匀性，避免出现试剂空白以及反应幅度大幅波动的现象；通过将脂联素单抗替换传统试剂中使用的脂联素多抗，避免了额外的交叉反应， 提升了试剂的检测精确性以及稳定性。权利要求书1页 说明书9页 附图1页CN 110007091 A 2019.07.12 C N 110007091 A

1.一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括试剂R1以及试剂R2； 所述的试剂R1为包被脂联素单抗1(Adiponectin Monoclonal Antibody)的胶乳颗粒； 所述的试剂R2为包被脂联素单抗2(Mouse Anti-Human Adiponectin)的胶乳颗粒。 2.根据权利要求1所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂R1制备方法如下：将胶乳颗粒在活化准备液的作用下形成活性酯，再将所述活性酯与含有脂联素单抗1 (Adiponectin Monoclonal Antibody)的抗体溶液1反应，然后再加入封闭剂完成偶联，得到包被脂联素单抗1(Adiponectin Monoclonal Antibody)的胶乳颗粒R1。 3.根据权利要求2所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体溶液1中脂联素单抗1(Adiponectin Monoclonal Antibody)的浓度为2mg/mL。 4.根据权利要求1所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂R2制备方法如下：将胶乳颗粒在活化准备液的作用下形成活性酯，再将所述活性酯与含有脂联素单抗2 (Mouse Anti-Human Adiponectin)的抗体溶液2反应，然后再加入封闭剂完成偶联，得到包被脂联素单抗2(Mouse Anti-Human Adiponectin)的胶乳颗粒R2。 5.根据权利要求4所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体溶液2中脂联素单抗2(Mouse Anti-Human Adiponectin)的浓度为2mg/mL。 6.根据权利要求2或4所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的活化准备液为活化准备液1以及活化准备液2的组合物，其中所述的活化准备液1为N-羟基琥珀酰亚胺纯化水溶液，所述的活化准备液2为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐纯化水溶液。 7.根据权利要求6所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的活化准备液1的配制方法如下：准确称量50mg N-羟基琥珀酰亚胺，用2mL纯化水溶解，摇晃均匀得到活化准备液1；所述的活化准备液2的配制方法如下：准确称量30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，用4mL纯化水溶解，摇晃均匀得到活化准备液2。 8.根据权利要求2或4所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的封闭剂为BSA 溶液或者吐温20溶液中的一种或两种的组合物。 9.根据权利要求8所述的一种脂联素检测试剂盒，其特征在于，所述的BSA溶液为2%BSA 溶液，溶剂为纯化水；所述的吐温20溶液为5%吐温20溶液，溶剂为纯化水。 10.一种制备如权利要求1 ~9所述的脂联素检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括： （1）试剂R1的制备：制备包被脂联素单抗1(Adiponectin Monoclonal Antibody)的胶乳颗粒R1；（2）试剂R2的制备：制备包被脂联素单抗2(Mouse Anti-Human Adiponectin)的胶乳颗粒R2；（3）将试剂R1以及试剂R2单独分装，密封保存即得。 权　利　要　求　书1/1页 2 CN 110007091 A

脂联素与代谢综合征的研究进展

关于脂联素与代谢综合征的研究进展

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关于脂联素与代谢综合征的研究进展 ? 摘要:代谢综合征(MS)是以腹型肥胖、高血压、糖脂代谢异常等多重心血管危险因素聚集为特征的临床综合征,是近年来国内外共同关注的热点。研究发现［1］，脂肪组织不仅仅只是能量贮存的场所,而且是一个高度活跃的内分泌器官,其分泌多种脂肪细胞因子包括瘦素、肿瘤坏死因子(TNＦα）、白细胞介素６（IＬ6）、血管紧张素原、C反应蛋白、脂联素(adｉｐoｎecｔin)等。大多数的脂肪细胞因子通过内分泌和旁分泌途径促进局部和远端的炎症反应,并促进ＭS及其并发症心血管疾病的发展进程,脂联素在这一过程起着明显的保护作用［2－4]。本文就脂联素与ＭS关系作一综述。?关键词: 脂联素代谢综合征胰岛素抵抗?? 1 脂联素概述?脂联素分子生物学特性 脂联素是白色脂肪组织分泌的由２４4个氨基酸组成的活性多肽，由位于染色体3q27的ａpM１基因编码，亦被称为GBP28、ＡdipoQ和Acrｐ３0。正常人血浆脂联素浓度可达５~3０μg/mL，约占血浆蛋白总量的%。脂联素蛋白分子有4个主要的结构域:氨基末端的分泌信号序列、一小段高变非同源序列、类胶原结构域以及羧基端的球形结构域。球状结构部分具有广泛的生物活性，可被白细胞弹性蛋白酶切开成为全长型脂联素,全长型脂联素能够抑制肝细胞糖原异生和葡萄糖释放。血清中全长型脂联素主要以3种形式存在:三聚体、六聚体和高分子量多聚体。三聚体是脂联素的基本结构形式，呈球丙状结构；六聚体则由2个相邻的三聚的球形结构域和一个单一的胶原柄, 通过二硫键（由22位的胱氨酸介导形成)结合形成; 高分子量寡聚体则由4～6个三聚体通过它们的胶原样结构域结合装配而成。不同亚型的脂联素在调节代谢及炎症过程中发挥不同的作用。 脂联素受体? 脂联素受体有3种［５］，包括：AdipoR１、AdipoR２和Ｔ钙黏蛋白(T ca ｄhｅrin)。AdipoR1在全身各组织均可见表达,骨骼肌中表达最丰富。AdｉpoR ２主要在肝脏中表达。两者在人动脉粥样硬化损伤区、巨噬细胞和血小板上均可见这两种受体的表达[６]。Ｔ钙黏蛋白是六聚体和高分子量多聚体形式脂联素的受体［7],在心血管系统表达丰富，而在骨骼肌中较少存在,主要表达于血管平滑肌及内皮细胞上。不同的受体及不同种类的脂联素反应了脂联素调节糖脂代谢的多样性。?? 2 脂联素的作用及与代谢综合征的关系

人脂联素基因的原核表达、纯化及活性检测

里！型！！塑型！！垫！婴！型塑坠！ 人脂联素基因的原核表达、纯化及活性检测。 刘德敏杨莉丽丁玉静孙颖于德民 摘要目的：在大肠杆菌中表达具有活性的重组人脂联素蛋白。方法：利用ＰＣＲ技术扩增人脂联素基因完全编 码序列，选用Ｇａｔｅｗａｙ原核表达体系，经过ＢＰ反应、ＬＲ反应两步反应，将ＰＣＲ产物克隆人ｐＥＴ—ＤＥＳＴ４２质粒，构建 融合表达载体ｐＥＴ—ＤＥＳＴ４２，ａｔｔＢ—ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ，转化大肠杆菌Ｂ１２１（ＤＥ３），以异丙基硫代一Ｂ—Ｄ一半乳糖苷（ＩＹｒＧ）诱 导表达脂联索融合蛋白，经镍柱亲和层析纯化，ＮＤＳＢ２０１高效复性后，使重组蛋白作用于体外培养的肝细胞，ＲＴ ＰＣＲ法检测重组脂联素对肝细胞葡萄糖一６一磷酸酶转录水平的影响。结果：成功构建了表达载体ｐＥＴ—ＤＥＳＴ４２／ａｔｔＢ— ａｄｉｇｎｎｅｃｔｉｎ，ＤＮＡ序列测定结果与预期一致。ＩＰｒＧ诱导表达的融合蛋白经纯化后ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定具有人脂联素抗 原性，并可使培养的肝细胞中葡萄糖－６一磷酸酶转录水平下降。结论：获得具有生物学活性的重组人脂联素为进一 步研究脂联素的生理机制奠定了基础。 关键词脂联索克隆，分子基因表达肝细胞重组蛋白质类葡糖一６—磷酸酶大肠杆菌 ＰｒｏｋａｒｙｏｔｉＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＡｃｔＭｔｙＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＨｕｍａｎＡｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎＧｅｎｅ Ｌ１ＵＤｅｎｔｉｎ，ＹＡＮＧＬｉｆｔ，ＤＩＮＧＹ删抽ｇ，ＳＵＮＹｉｎｇ，ＹＵＤｅｍｉｎ ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｗｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭｅｔａｂｏｌｉｃＨｏｐｉｔｕｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７０，Ｃｈｉｎａ ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｌｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｒｅｓｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎａｄｉｐｏｎｅｅｔｉｎｗｉｔｈｂｉｏｌｏ咖ａｌａｅｆｉｖｉＶｉｎＥｃｏｌｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｅＤＮＡｃｏｄｉｎｇｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎｇｅｎｅⅧａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲＧａｔｅｗａｙｐｍｋａｒｙｏｆｉｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓｕｓｅｄ ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐＥＴ－ＤＥＳＴ４２ｐｌａｓｍｉｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｆｕｓｉｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ—ＤＥＳＴ４２／ａｔｔＢ－ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｓｉｔｅｒＢＰｒｅａｃｆｉｃｍａｎｄＬＲｒｅａｃｔｉｏｎｐＥＴ－ＤＥＳＴ４２／ａｎＢ—ａｄｉｐｏｎｅｅｔｉｎＷａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｅｏｌｉＢ１２｜ａｎｄｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｗⅡｅ ｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩＰＴＧｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｄｉｐｏｎｅｅｔｌｎ，ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＷ８８ｐｕｎｆｉｅｄｂｙＮｉ?ＮＴＡａⅡｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆ ｐｕｒｉｆｉｅｄｒｅｃｏｍｂｍａｔａｎｔ ａｄｉｐｏｎｅｅｆｉｎｏｎｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈ０８ｐｈａｔｏｎｅｗ∞ｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｓｈｏｗｅｄ出啦ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒｅｃｔｏｒｐＥＴ—ＤＥｓＴ４２ｆ戬啦＿ａｄｉｐ叫ｅｃ血ｗ啦ｅｍａｓｔｒｕｃｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．ｐｕｒｉｆｉｅｄａｄｉｐｏｎｅｅｔｉｎｓｈｏｗｅｄａｎｄｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎｄｒｅｄｕｃｅｄｓｋｏ”６一ｐｈ０８ｐｈａｔａｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｗｅｈａｖｅｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈａｍａｎａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎｗｉｔｈｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙ．ｗｈｉｃｈｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｖ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓａｄｉｐｏｎｅｅｔｉｎｃｌｏｎｉｎｇ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓｇｌｕｅｏｓｅ一６一 ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｅｓｃｈｅｆｉｃｈｉａｃｏｌｉ 人脂联素（ａｄｉｐ（、ｎｅｃｔｉｎ）基因全长１７ｋｂ，位于染色体３ｑ２７，包含３个外显子和２个内含予。该基因编码的脂联素蛋白在血浆中分子质量为２８ｋｕ。脂联素在血循环中含量较高，其血浆浓度约占总血浆蛋白的Ｏ０１％ｒ”。目前，脂联素在调节血糖稳态、抗动脉粥样硬化及抗炎等方面的作用已有较为肯定的认识［２１。脂联素在治疗领域的尝试也已开始，为了能够更好地了解脂联素的结构及作用机制，本研究利用Ｇａｔｅｗａｙ表达系统快速构建了人脂联素原核表达载体，表达并纯化了重组脂联素蛋白。 １材料与方法 １．１材料大肠杆菌ＤＨＳａ及Ｂ１２１（ＤＥ３）均为本实验室保存，质粒ｐＭＤｌ８一Ｔ，ｒＴａｑＤＮＡ聚合酶，ＤＮＡ凝胶回收试剂盒为大连宝生物公司产品。质粒ｐＤＯＮＲ２０１，ｐＥＴ—ＤＥＳＴ４２以及Ｇａｔｅｗａｙ表达体系均为［ｎｖｉｔｒａｇｅｎ公司产品（澳大利亚新南威尔士大学齐建成教授馈赠）。Ｍ－ＭＬＶ逆转录酶为ｐｍｍｅｇｎ产品。兔抗人脂联素多克隆抗体购自Ｂｉｏｖｅｎｄｏｒ公司；辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的羊抗兔ｌｇＧ为北京中杉公司产品。蛋白纯化试剂盒以及１６４０培养基为Ｎｏｖｏｇｅｎ公司产品。蛋白复性用ＮＤＳＢ２０１由美国Ｓａｎｔａｃ［ｕｚ公司ＴｏｍｍｉｅＬｅｅＳｔａｄｉｎｇ先生馈赠。异丙基硫代一８一Ｄ一半乳糖苷（Ｉ丌Ｇ），二硫苏糖醇（ＤＷｒ）等均为进口或国产分析纯试剂。 １，２方法 １．２．１人脂肪组织总ＲＮＡ的提取和脂联素基因的克隆新鲜皮下脂肪组织标本取自一行子宫痛切除术且无代谢性疾病者。提取总ＩＬＮＡ。将１ｔｒｇ总ＲＮＡ．７２℃变性２ｍｉｎ后迅速冰浴降温，加入１５此逆转录酶混合液（２ＵＲｎａｓｅ抑制剂， ?天津市教委基金资助项目（项目编号：２００３０２５）；天津市自然科学基金资助项目（项目编号：０４３６０９２１１） 作者单位：３（ｍ０７０天津医科大学代谢病医虢 　万方数据

发明专利的种类有哪些

发明专利的种类有哪些 【为您推荐】洪洞县律师武冈市律师吴江市律师新津县律师恩施市律师新会区律师宿城区律师 专利的分类主要是分为两种类型，一种是发明型专利，一种是实用性专利，他们之间是有一定的区别的，包含的类型也是不同的。那么，发明专利的种类有哪些呢?我们如何进行区分呢?下面，小编会为大家带来相关的法律知识的介绍。 发明专利的种类有哪些 根据不同的分类标准，可以将发明划分为不同的种类。如根据发明完成的状况，可分为已完成的发明和未完成的发明。未完成的发明，因不具备专利法要求的实用性，在各国专利法中都不授予其专利。根据完成发明的人数，可将发明分为独立发明和共同发明。根据发明人的国籍划分，可分为本国发明和外国发明。但发明专利申请人的权利基本是相同的。根据发明的权利归属划分，可分为职务发明和非职务发明。根据发明间的依赖或制约关系划分，可分为基本发明和改良发明。在专利法上最常见的、也是最基本的分类，是将发明划分为产品发明和方法发明。我国《专利法》将发明专利划分为产品发明、方法发明和改进发明三类。 (一)产品发明 产品发明，是指通过人们的智力活动创造出各种前所未有的新产品。需说明的是，各国专利法对产品发明的保护范围都有一定的限制，并非所有产品的发明都能取得专利权，如违反国家法律、社会公共利益的产品发明，用原子核变换方法获得的物质等，均不能获得发明专利。专利法上的产品可以是一个独立、完整的产品，也可以是一台设备或机器中的零部件。产品的发明，又可以划分为以下几种情况： 1、制造品的发明摇如各种机器、设备、装置和各种用具等。 2、物质的发明摇如化学物质、药品、食品等。 3、材料的发明摇如玻璃、陶瓷、人造金刚石、人工合成胰岛素等。 4、产品新用途的发明摇这是在不改变物品固有的性质和状态下，揭示出该物品前所未有的用途和功能。如发现木炭可以用以制造火药。需要指出的是，如果发现了一种完全处于自然状态下，未经过任何人工加工、创制的前所未有的新物品，则不是产品的发明，而属于科学发现。 (二)方法发明 方法发明，是指将一种物品或者物质改变成另一种状态或另一种物品或物质所采取的步骤或技术手段的发明。方法发明的保护始于员怨世纪中叶，但目前世界各国对方法

人脂联素(ADPN)

人脂联素（ADPN)酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人脂联素（ADPN)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中脂联素（ADPN)的测定。 工作原理 本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人脂联素（ADPN)的水平。向预先包被了人脂联素（ADPN)单克隆抗体的酶标孔中加入脂联素（ADPN)，温育；洗涤后，加入HRP标记过的脂联素（ADPN)抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人脂联素（ADPN)的浓度呈正相关。 试剂盒组成 需要而未提供的试剂和器材 1．37℃恒温箱。 2．标准规格酶标仪。 3．精密移液器及一次性吸头 4．蒸馏水， 5．一次性试管 6．吸水纸 注意事项 1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。 3．建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释

液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 4．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。 5．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 6．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 7．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 操作程序 1．标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比 2 测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。 轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 3．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。 如此重复5次，拍干。 4．每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 5．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。 如此重复5次，拍干。 6．每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。 7．取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 8．测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。 9．根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。 操作程序总结：

脂联素的检测意义

脂联素的检测意义 检测方法： LC-MS/MS 送检要求： 样本采集：早晨7:30-10:30用EDTA抗凝管（紫帽管）空腹采血，成人4ml，儿童2ml。采血时根据医嘱要求坐位或卧位采集相应血液样本。 样本保存：样本采集后应及时分离血浆（离心条件:×1000g，5-10分钟），装入冻存管并冷冻避光保存待检。48h内全程冷冻避光运输至实验室。 注意事项： ①采血前患者准备：抽血前1天应以清淡饮食为主，避免抽烟，禁止喝酒，避免熬夜。应提前半小时到采血地点静坐或站立等待采血，避免剧烈运动及情绪激动后采样。当日采血前停用激素治疗药物。 ②拒收样本：非EDTA抗凝血浆。

激素在人体内含量低，结构相似物多，甚至有同分异构体存在。传统的免疫学技术因检测方法的局限性，易受多因素干扰，其灵敏度和特异性较低。质谱技术可以准确识别化合物小分子，检测浓度可达ng 级、pg级甚至fg级，大大提高了检测的灵敏度和特异性。2013年美国内分泌学会在临床内分泌与代谢杂志（Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism）发表声明，宣布自2015年开始只接受质谱方法检测激素的研究结果，这无疑肯定了质谱方法在内分泌激素检测中的重要性。 金域采用Waters UPLC I-Class-TQ-S建立的液相色谱质谱方法特异性高，可实现11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、皮质酮的色谱分离和17-羟孕酮、11-脱氧皮质酮的色谱分离；检测范围宽和灵敏度高，如雌酮、雌二醇、雌三醇、睾酮、双氢睾酮检测下限可至50pg/ml，检测上限可至20000pg/ml。检测下限可同时实现男性中雌激素和女性中雄激素的检测，检测上限也能满足男性中雄激素和女性特殊时期中雌激素的检测。建立的方法不仅满足了很好的灵敏度，而且实现了优良的特异性，充分发挥了液相色谱串联质谱在激素检测中的优势。

人脂联素(ADP)ELISA试剂盒说明书

人脂联素ADP)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中脂联素（ADP)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人脂联素（ADP)水平。用纯化的抗-脂联素（ADP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂联素（ADP)，再与HRP 标记的脂联素（ADP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂联素（ADP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人脂联素（ADP)浓度。 试剂盒组成： 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程

中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为900μg/ L,600μg/ L ,300μg/ L, 150μg/ L, 75μg/ L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

脂联素的检测意义

脂联素： 脂肪组织主要由大量聚集成团的脂肪细胞构成，脂联素是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质。脂联素是一种胰岛素增敏激素，能改善小鼠的胰岛素抗性和动脉硬化症；对人体的研究发现，脂联素水平能预示II型糖尿病和冠心病的发展，并在临床试验表现出抗糖尿病、抗动脉粥样和炎症的潜力。 概述： 研究人员发现了一种调节脂联素的新化合物，从而为研究脂联素功能和胰岛素敏感性机制提出了一种新途径。胰岛素是由胰脏β细胞分泌出来的激素，主要功能是促进血液中的葡萄糖进入肌肉或脂肪组织，提供人体所需的能量。当胰岛素不能发挥作用时，血液中的葡萄糖便无法转化为人体所需的能量，导致血糖升高，糖尿病由此发生。而胰岛素抗阻是指细胞不能有效利用胰岛素甚至对胰岛素的反应不再敏锐，这是造成糖尿病的最主要原因。科学家们相信游离脂肪酸和某些脂肪所释放的分子是引发胰岛素抗阻现象的罪魁祸首。Lily Dong和合作者一直在寻找与脂联素受体相关的蜂窝状蛋白质，以期发现调节脂联素激素功能的新靶标。 脂肪因子是由脂肪组织分泌的具有生物活性的细胞因子及激素,与胰岛素抵抗冠状动脉粥样硬化等代谢过程密切相关。其中,脂联素是外周血中含量最高的脂肪因子,在健康人中血浆脂联素水平为 5~30μg/mL。脂联素与其受体结合后,通过激活腺苷酸活化蛋白激酶(adenosinemonophos-phate-activatedproteinkinase,AMPK)、

p38丝裂原活化蛋白激酶和过氧物酶体增殖物激活受体(peroxidaseproliferationactivatedreceptor,PPAR)等信号分子发挥抗炎、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化等多种生物学作用。在动物实验中,脂联素基因敲除小鼠较正常小鼠容易发生严重的免疫排斥反应,注射脂联素后排斥反应明显改善,表明脂联素可以降低小鼠的免疫排斥反应。而Wilk等研究发现，脂联素对抗原激活的效应T细胞有抑制作用,推测脂联素与免疫调节有关。 风湿性疾病泛指影响骨、关节及周围软组织的一组疾病,主要的病理改变有炎症和非炎症性病变。炎症性反应除痛风性关节炎是因尿酸结晶导致外，其余大部分因免疫反应引起。进一步研究显示，脂联素在类风湿关节炎(heumaticarthritis，RA)患者血浆及关节液中表达水平升高,且关节液中脂联素水平与白细胞数呈负相关。在系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)患者血清中的表达水平高于正常对照者,且与患者的疾病活动度明显相关。 生化特征： 在脂肪细胞分泌的具有生物活性的一类蛋白质因子中脂联素是脂肪组织基因表达最丰富的蛋白质产物之一，大量存在于血液循环中。在人体内以3-30ug/ml的浓度出现在循环血浆中。脂联素又被称作Acrp30、apM1、AdipoQ、GBP28，最初, 脂联素是在人体皮下脂肪组织、血浆和鼠科动物的脂肪细胞中被发现。人体内的脂联素由244个氨基酸组成，分子量为30KD.由氨基末端的分泌信号序列( aa 1-18) ，一段特异序列(aa19-41),一组由22个氨基酸组成

脂联素的检测意义

脂联素水平测定的临床意义 肥胖（肥胖儿童，肥胖成人，内脏肥胖） 评估肥胖的程度和类型，监测肥胖的发生和发展，预测II型糖尿病和动脉粥样硬化的发生和发展以及判断肥胖的预后是早期干预的目标，也是减肥效果的指标，并可以用于监测药物引起的肥胖症（抗精神病药）。 葡萄糖代谢异常，脂质代谢异常，胰岛素抵抗 脂联素的变化在预测心血管疾病风险方面比葡萄糖代谢紊乱和脂质代谢紊乱更早，这是胰岛素敏感性的评价指标之一，也是胰岛素抵抗发生和发展的重要标志。 代谢综合征 作为特征标记之一，它可用于预测疾病的发生和发展，并观察疾病的动态。它是干预治疗的目标。 II型糖尿病

它是儿童II型糖尿病的预测，早期诊断，鉴别诊断，预后和治疗的重要标志。它用于监测II型糖尿病及其并发症的发生和发展，并作为II型糖尿病及其并发症的治疗靶标。第一代糖尿病患者中II型糖尿病的早期指标。 冠状动脉心脏疾病 冠心病的发生，发展和严重程度的监测指标可用于预测冠心病的状况，诊断冠心病和评估治疗效果。 高血压 严重程度判断的新指标是糖代谢异常的原发性高血压的特征指标。它也可用于判断原发性高血压患者的左心室舒张功能和左心室肥大。它是高血压肥胖症治疗的目标。 心血管疾病 它是预测心血管事件发生的重要指标。急性心肌梗塞的发生和发展，动态观察指标；急性脑梗塞的发生预测，病情变化和预后判断，脑梗塞的治疗目标；预测不稳定型心绞痛的发生和治疗目标，对心绞痛患者的动脉粥样硬化疾病发展进行预测；慢性心力衰竭

的治疗目标；动脉粥样硬化的替代指标（脂联素和动脉僵硬度），内膜中层厚度或狭窄程度。 多囊卵巢综合征 疾病发展的长期指标之一。 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 疾病监测和治疗的目标。 肝病 脂肪肝，非酒精性脂肪肝的治疗目标，肝纤维化的可能目标。 肾脏疾病 它是预防和干预多种肾脏疾病中心血管疾病的指标。 妊娠 预测早产，监测妊娠高血压的发生和发展，预测妊娠先兆子痫，预测和评估妊娠糖尿病。

方法发明专利撰写实例2

说明书摘要 本发明公开了一种甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，它为甘蔗组培苗提供了一种透光、保湿、保温的大田移栽环境——小拱棚，使得幼小的甘蔗组培苗在不经培养室壮苗培养和营养杯假植壮苗阶段而直接进行大田移栽也能保证较高的成活率（90%以上）。应用本发明可缩短育苗周期（缩短50～130天），减少中间生产环节，降低运输成本、育苗成本和蔗农的种植管理成本，最终实现育苗企业和蔗农双赢。

权利要求书 1.一种甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，其特征在于：甘蔗组培苗瓶苗在培养室中经过 3～4代的增殖培养后直接进行生根培养，瓶苗生根后从瓶中取出洗干净，分成4～7株/丛在育苗圃中假植18～22天即进行分单株移栽至备耕好的种苗繁育大田；移栽前先把植蔗沟用水淋湿淋透，移栽完毕在植蔗沟上方搭建小拱棚，根据行距及小拱棚高度选择尺寸适合的薄膜覆盖在小拱棚上，四周用土压实防风，移栽当天在小拱棚顶部每隔50～70㎝开一个直径1㎝透气孔，移栽3～4天后，扩大透气孔至直径10㎝，移栽7天后将薄膜完全掀开，开始进行施肥等田间管理工作。 2.根据权利要求1所述的甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，其特征在于：所述增殖培养 每一代的培养时间为15～20天。 3.根据权利要求2所述的甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，其特征在于：所述瓶苗生根 后从瓶中取出洗干净是将瓶苗取出后在流动的水中冲洗1～3分钟至干净。 4.根据权利要求3所述的甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，其特征在于：所述假植是将 分好的甘蔗组培苗按照丛距5～6㎝、行距6～8㎝种植在准备好的苗床，种植深度为丛苗基部插入苗床基质0.8～1㎝。 5.根据权利要求4所述的甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，其特征在于：所述苗床基质 为黄泥或河沙。 6.根据权利要求5所述的甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，其特征在于：所述小拱棚由 多个与植蔗沟垂直的支撑结构组成，所述支撑结构由条状或片状树枝、竹片弯成弧形，弧顶朝上，两头插在植蔗沟两边。 7.根据权利要求6所述的甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，其特征在于：所述弧顶距离 植蔗沟50～70㎝，每个支撑结构间隔60～80㎝。 8.根据权利要求7所述的甘蔗组培苗小拱棚大田移栽方法，其特征在于：所述薄膜是厚 度为0.005㎜的透光地膜。

人脂联素ELISA试剂盒

人脂联素ELISA试剂盒 产品编号：SEKH0079 适用于人血清、血浆或细胞培养上清液等样本 仅供研究，不用于临床诊断

目录 背景介绍 (01) 检测原理 (01) 注意事项 (02) 安全提示 (02) 试剂盒组成及储存 (03) 自备实验器材 (03) 样品收集及储存 (03) 试剂准备 (04) 检测步骤 (06) 结果判断 (06) 参数表征 (07) 参考文献 (09) 常见问题分析及解决办法 (10)

背景介绍： 脂联素（Adiponectin,ADPN）又称Acrp30、adipoQ、apM1和GBP28，是脂肪细胞分泌的一种内源性蛋白，在葡萄糖和脂质稳态中具有潜在作用。体液中循环脂联素水平较高，约占血浆总蛋白的0.01%。脂联素分子N端为胶原样结构域，C端为球状序列，其中球状区是脂联素生物活性的关键部位，该结构特征与补体因子C1q有明显的序列和结构相似性。虽然它们氨基酸序列几乎不存在同源性，但相似的三维结构和某些保守的氨基酸残基表明脂联素C1q样结构域与TNF超家族成员之间存在进化联系。脂联素可聚集成不同分子量的聚合物，包括三聚体(低分子量)、多聚体(中等分子量)和可能影响生物活性的高聚体(高分子质量)。脂联素在脂肪细胞分化过程中被诱导，胰岛素可刺激脂联素的分泌。脂联素受体有两种形式，分别为AdipoR1和AdipoR2，AdipoR1在骨骼肌中高表达，而AdipoR2主要在肝组织中表达。 检测原理： 本ELISA试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗人Adiponectin单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的人Adiponectin会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗人Adiponectin抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的人Adiponectin发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的人Adiponectin，则HRP会使无色TMB变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；最后，在λmax=450nm（OD=450nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的人Adiponectin浓度与OD成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中人Adiponectin 的浓度。 原理图：

大鼠脂联素(ADP)ELISA试剂盒说明书

大鼠脂联素（ADP)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中脂联素（ADP)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠脂联素（ADP)水平。用纯化的大鼠脂联素（ADP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂联素（ADP)，再与HRP标记的脂联素（ADP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂联素（ADP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠脂联素（ADP)浓度。 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程

中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤： 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为90 μg/L，60 μg/L ，30 μg/L，15 μg/L，7.5 μg/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。