乙肝病毒基因型对武汉地区慢性乙型肝炎患者干扰素_2b疗效的影响

doi:1013969/j1issn1100520264120101021007

乙肝病毒基因型对武汉地区慢性乙型肝炎患者

干扰素α22b疗效的影响

蔡艳萍1　黄元成2　张美珍1　汪全红1

11武汉市医疗救治中心(湖北武汉,430032)　21同济医科大学附属同济医院

摘　要　目的:探讨武汉地区慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV基因型对干扰素α22b疗效的影响。方法:以患者年龄、性别、基线指标进行匹配,按照基因分型结果分组,比较干扰素治疗48周时的应答情况。结果:在治疗48周结束时,基因B型HBV感染的患者完全应答率和HBe Ag阴转率分别为4318%(28/64)和6812%(15/22),显著高于C型患者的完全应答率[2212%(10/45)]和HBe Ag阴转率[2816%(4/14)]。结论:CHB患者HBV的基因型可影响干扰素α22b的治疗效果,基因B型在治疗48周时应答情况优于基因C型。

关键词　肝炎,乙型,慢性;乙肝病毒基因库;干扰素α22b/治疗应用

Rel a ti on sh i p between hepa titis B v i rus genotype and eff i cacy of i n terferon a l2 pha22b i n W uhan

CA I YAN2PIN G1,HUAN G YUAN2CHEN G2,ZHAN G M EI2ZHEN1,et al1W uhan Center of M edical and T reat m ent Service(W u2 han Hubei,430032)China

Abstract　O bjecti ve:To investigate the relati onshi p bet w een hepatitis B virus(HBV)genotype and efficacy of interfer on al pha22b in W uhan district1M ethods:Patients were gr ouped according t o HBV genotype and matched by age,gender and char2 acteristics of baseline1Results:The comp lete res ponse rate(4318%,28/64)and rate of l oss of HBe Ag(6812%,15/22)in patients with genotype B HBV were better than genotype C(2212%,10/45and2816%,4/14res pectively)1Conclusi on: Genotype of HBV is related t o efficacy of interfer on al pha22b1A t end of treat m ent with interfer on al pha22b,res ponse of patient with genotype B HBV infecti on is better than genotype C1

Key W ords　chr onic hepatitis B;HBV genotype;interfer on al pha22b/therapeutic use

慢性乙型病毒性肝炎(CHB)是严重危害人类健康的传染病,呈全球广泛分布。自1988年Oka mot o等[1]首次提出乙型肝炎病毒(HBV)基因型这一概念以来,根据HBV全基因序列的异质性≥8%或S基因序列的异质性≥4%,将其分为A～H8个基因型,最近有报道发现新的HBV基因型[2],使得HBV基因型增加到9个。为了解武汉地区HBV基因型对干扰素治疗的影响,我们对109例采用干扰素α22b治疗的患者进行了研究,报道如下。

1　资料与方法

111　研究对象　以年龄、性别、基线ALT和HBV DNA载量匹配,按照基因分型(见113)选取2006年9月至2009年11月在上述两个医院用干扰素α22b治疗48周的CHB患者,其中基因B型患者64例,基因C型45例(因BC混合型样本量太少且难以匹配,故未被纳入)。所有患者均满足:HB s Ag阳性至少持续6个月以上,ALT>2×ULN,但<10×ULN,HBV DNA≥106cop ies/m l,1年内未接受过抗病毒治疗。所有患者均排除丙、丁型肝炎病毒感染。干扰素α22b剂量为500万I U/次,隔日1次,疗程为48周。待测标本于-70℃冰箱保存,集中检测。

112　HBV血清标志物和HBV DNA定量　血清标志物检测采用E L I S A法检测(上海科华公司),血清HBV DNA定量分别采用上海复星科技股份有限公司、中山大学达安基因公司试剂盒,均严格按说明书操作。

113　基因分型　参考Nait o等[3]的方法(具体引物序列见表1):第1轮PCR用通用引物P1和S1扩增,反应条件为95℃8分钟,94℃30秒,58℃30秒,72℃70秒,40个循环, 72℃延伸10分钟。第2轮PCR第1组用A、B、C分型引物扩增,第2组用D、E、F分型引物扩增,模板均为2μl第1轮PCR扩增产物,反应条件均为94℃8分钟,94℃30秒, 59℃30秒,72℃60秒,30个循环,72℃延伸10分钟,分别

可扩增至68、281、122、119、167、97bp 的片段,分别为

HBV 基因型A 、B 、C 、D 、E 和F 型。扩增产物经琼脂糖凝

胶电泳分析。

表1　HBV 基因分型引物

反 应

引物名称

序 列

PCR 第1轮

P15’2TCA CCA T AT TCT TGG G AA CAA G A 23’S1

5’2CG A ACC ACT G AA CAA ATG GC 23’PCR 第2轮第1组B25’2GGC TC M AGT TC M GG A ACA GT 23’A 5’2CTC GCG G AG ATT G AC G AG ATG T 23’B 5’2CAG GTT GGT G AG TG A CTG G AG A 23’C

5’2GGT CCT AGG AAT CCT G AT GTT G 23’PCR 第2轮第2组D 5’2GCC AAC AAG GT A GG A GCT 23’E 5’2CAC CAG AAA TCC AG A TTG GG A CCA 23’F 5’2GYT ACG GTC CAG GGT T AC CA 23’B2R

5’2GG A GGC GG A TYT GCT GGC AA 23’

“M ”代表核苷酸A 或者C,“Y ”代表核苷酸C 或者T

114　应答定义　参照2005年慢性乙型肝炎防治指南

[

4]

:①

完全应答:HBe Ag 阳性患者ALT 恢复正常,HBV DNA 检测不出(<1000cop ies/m l ),HBe Ag 血清学转换:HBe Ag 阴性患者

ALT 恢复正常,HBV DNA 检测不出;②部分应答:介于无应

答和完全应答之间;③无应答:未达到以上应答。

115　统计学方法　运用SPSS 1310软件,正态分布资料以

x ±s 表示,偏态分布资料以中位数(全距)表示。计量资料两组间比较采用Student t 检验或M ann 2whitey U 检验,计数资料

比较采用χ2

检验或Fisher 精确概率法,P <0105为差异有显

著性意义。

2　结果

211　基因分型结果　分型结果判断见图1,产物长度为281bp 的属于基因B 型HBV,122bp 的为基因C 型HBV 。109

例患者中,基因B 型患者共64例(5817%),基因C 型45例

(4113%)。

图1　HBV 型特异性PCR 基因分型

Lane1、2、3:基因B 型HBV;Lane 4、5、6:基因C 型HBV

212　基线情况　见表2。两组间各参数的基线水平差异均无

显著性意义(P >0105)。

213　应答情况　在干扰素α22b 治疗48周结束时,两组间的

应答情况进行了比较。HBV 基因B 型组的完全应答率为

4318%,显著高于基因C 型组的2212%(P =01020);而基

因C 型的无应答率(5111%)则显著高于基因B 型的2616%

(P =01009)。两组患者部分应答率差异无显著性意义(P =01731),详见表3。

表2　治疗前各指标的基线水平

基线特征基因B 型(n =64)

基因C 型(n =45)

P 值

年龄(y )3716±11193912±121201335男性比例(%)

46(7119)34(7516)01669ALT (×ULN )415(2～1010)510(2～1010)01407HBeAg 阳性数(%)22(3414)14(3111)01721HBV DNA (copies/ml )

114×106

115×106

01319

表3　HBV 基因B 型与C 型患者的治疗应答情况[n (%)]

HBV 基因型

n 完全应答

部分应答

无应答

B

6428(4318)19(2917)17(2616)C

4510(2212)#12(2617)23(5111)3合计

109

38(3419)

31(2814)

40(5119)

与B 型比较,#P <0105,3P <0101

214　血清学应答情况　见表4。从表4中可见,基因B 型的HBe Ag 阴转率显著高于基因C 型(6812%vs 2816%,P =01020)。而HB s Ag 阴转率两组间差异则无显著性意义(P =01684)。

表4　两组患者血清学应答情况[%(治疗后阴转例数/总例数)]

HBV 基因型

HBeAg 阴转率HB s Ag 阴转率B 6812(15/22)613(4/64)C

2816(4/14)#414(2/45)合计

5218(19/36)

515(6/109)

与B 型比较,#P <0105

3　讨论

目前临床上用于CHB 抗病毒治疗的药物主要有干扰素和核苷(酸)类似物两类。干扰素作为一种抗病毒细胞因子和免疫调节剂,可能对治疗的持续应答起着重要作用。它能够通过上调肝细胞表面递呈HBc Ag 的MHC 2Ⅰ类分子的表达而增强CT L 的应答[5]。但目前的临床研究发现其有效率只有

30%～40%

[6,7]

,这可能与HBV 的基因型、干扰素抗体以及

HBV 基因的突变有关

[8～11]

。

本研究结果发现,基因B 型的CHB 治疗48周时的完全应答率显著高于基因C 型的患者,而无应答率则显著低于基因C 型患者,这与Luo K 等[12]的结果并不一致。Norder 等[13]发现随着地域的不同,基因B 型和C 型的HBV 可进一步分为

4个亚型,而这些亚型间在临床结局和治疗方面的差异目前仍

不清楚,因此可能导致各研究者关于基因B 型和C 型之间差异的报道有所不同。例如,最近有报道发现A1762T/G1764A

双突变在C型HBV中发生的频率更高,而A1762T/G1764A 双突变已被证实与HCC发生高度相关[14],而N i等发现在幼儿时期感染HBV后导致的HCC患者中,基因B型的HBV感染却是占主要的[15]。另外,本组资料显示,在干扰素α22b治疗48周结束时,基因B型HBV感染的CHB患者中,HBe Ag 的阴转率为6812%,显著高于基因C型的2816%。但之前已有文献报道基因B型的CHB患者HBeAg的自发血清学转换率显著高于基因C型,基因B型HBV感染是CHB患者HBe Ag 自发血清学转换的主要影响因素[16]。因此,本研究中HBe Ag 的变化主要由于基因B型CHB患者HBe Ag自发清除导致,还是干扰素治疗的结果,仍有待进一步研究证实。

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17621

(收稿日期:2010-01-27　编辑:程良斌)

?征文通知?

第三次全国中西医结合传染病学术会议征文

由中国中西医结合学会传染病专业委员会主办的第三次中西医结合传染病学术会议拟于2010年5月下旬在广西桂林召开。会议征文内容:①各种传染病的中西医结合诊疗和实验研究;②中医药和中西医结合防治传染病的经验总结;③中西医结合防治传染病的研究方法、思路和发展战略;④中医药和中西医结合诊疗传染病的进展和评价;⑤运用多种疗法(如针灸、气功等)、多种给药途径(栓剂、保留灌肠、皮肤给药、器官给药、腧穴给药等等)治疗各种传染病的应用和配合研究;⑥各种传染病动物模型、病理机制、检测技术、诊断标准的最新进展及动态。

征文要求如下:①稿件要求在5000字以内,未经正式发表,并提供500字以内的中文摘要,写清作者姓名、单位名称、地址及邮编或E2mail地址。②收稿人:广东省深圳市布心路2019号(邮编:518020)深圳市东湖医院聂广(电话: 138********),欢迎通过电子邮件发至zxyjhcrb@1631com,并注明“会议征文”。

中国中西医结合学会传染病专业委员会

2009年12月1日