抗坏血酸过氧化物酶(ascorbateperoxidase ,APX)活性测定试剂盒 使用说明

抗坏血酸过氧化物酶（ascorbateperoxidase ，APX）活性测定试剂盒使用说明

微量法100T/96S

产品简介：

APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX 具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H 2O 2氧化AsA，是植物AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影响到AsA

的含量，在胁迫和解胁迫条件下，APX 与AsA 具有一定的负相关性。

APX 催化H 2O 2氧化AsA，通过测定AsA 的氧化速率，可计算得APX 活性。

试验中所需的仪器和试剂：

低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容：

试剂一：液体×2瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加3mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1支，4℃保存。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

称取约0.1g 样品，加1mL 试剂一，冰上充分研磨，13000g 4℃离心20min，取上清液。

二、测定操作表：

1.分光光度计预热30min 以上，调节波长到265nm，用蒸馏水调零。

2.试剂一在25℃中预热30min 以上。

3.空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL 蒸馏水、140μL 预热的试

剂一、20μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收。

4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL预热的试剂

一、20μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收。

APX活力计算：

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA为1U。

APX(U/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T=0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

活性单位定义：每克样品每分钟氧化1μmol AsA为1U。

APX(U/g鲜重)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(V样÷V样总×W)÷T=0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷Wε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1cm；V反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；W：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；T：催化反应时间（min），2min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

（1）按蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA为1U。

APX(U/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T=0.1848×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

活性单位定义：每克样品每分钟氧化1μmol AsA为1U。

APX(U/g鲜重)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(V样÷V样总×W)÷T=0.1848×(△A测定管-△A空白管)÷Wε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104L/mol/cm；d：96孔板光径（cm），0.5cm；V反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；W：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；T：催化反应时间（min），2min。

抗坏血酸氧化酶(ascorbate oxidase ,AAO )活性测定试剂盒说明书

货号：QS1303 规格：50管/48样抗坏血酸氧化酶（ascorbate oxidase ，AAO）活性测定试剂盒说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO 与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素b还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。 测定原理： AAO可直接氧化AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。 自备实验用品及仪器： 低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。 粗酶液提取： 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 AAO测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到265 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。 3. 依次在1 mL石英比色皿中加入100μL上清液、850μL预热的试剂二和50μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10 s和130 s光吸收A1和A2，△A =A1-A2。 AAO活性计算公式： (1). 按蛋白浓度计算 AAO活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。 AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T = 92.4×△A÷Cpr (2). 按样本质量计算 AAO活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。 AAO(nmol/min/g鲜重) = △A÷(ε×d）×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T = 92.4×△A÷W ε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10-3L；106：1mol=1×109nmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。 第1页，共2页

PH0728 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒实验方法与常见问题

PH0728|DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒 DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit Catalog No：PH0728Size：?2×50mL|?2×100mL Store at-20℃ DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种借助辣根过氧化物酶(HRP)，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。 DAB，即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下，DAB会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB显色后，还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。 本试剂盒可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可以用于Western等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。 组分 Component2×50mL2×100mL Storage DAB显色液A50mL100mL-20℃避光 DAB显色液B50mL100mL-20℃ 使用参考 1.对于组织切片或细胞样品或膜，在与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。 2.按照1:1的比例将显色液A、B液混匀，混匀后即配制成DAB染色工作液。 3.最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保能充分覆盖样品。 4.室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。 5.去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应。 6.对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。 注意事项 DAB对人体有害，请注意适当防护。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

抗坏血酸检测的实验步骤

动物血清中抗坏血酸（Vc）的测定 一、实验目的 抗坏血酸（Ascorbic Acid）又叫维生素C（Vitamin C），是一种水溶性维生素.正常成人体内的抗坏血酸代谢活性池中约有1500mg抗坏血酸，最高储存峰值为3000mg抗坏血酸.抗坏血酸在氧化还原代谢反应中起调节作用，缺乏它可引起坏血病.抗坏血酸是一种强力的抗氧化剂、抗病毒和抗炎剂.广泛存在于食品和生物样本中，是一种免疫刺激剂.因此检测抗坏血酸在上述样本内的分布和含量就显得非常重要。 二、实验原理 三、实验仪器 试管、移液枪、漩涡混匀器、水浴锅、离心机、可见分光光度计。 四、试剂的配制 1.试剂一应用液的配制（5ml）：试剂一储备液：双蒸水=1：14稀释，混匀制 备。 2.试剂二应用液的配制：用时取一支粉剂加0.36 ml的冰醋酸再加水至40 ml, 溶解，4℃保存。 3. 试剂三应用液的配制：因溶解困难，使用前2-4h加无水乙醇60 ml充分 溶解，制备，4 ℃保存。 4. 试剂四应用液的配制：用时取0.15 ml 试剂四储备液加水至25 ml制备， 避光保存。（现用现配） 5.试剂五：液体6 ml，4 ℃保存。 6.600 ug/ml标准品应用液的配制：取一支标准品粉末溶于10 ml试剂一应用 液中，充分混匀，4℃保存。 6ug/ml标准品应用液的配制：取600 ug/ml Vc标准应用液再用试剂一应用液100倍稀释备用，现用现配。 注意：维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配标准，并在10 min内进行检测。 五、实验步骤 1.取实验小鼠，断颈处死，摘除眼球，眼眶取血至1.5 ml EP管，取完血液， 然后静置半小时，然后3000 rpm, 离心15 min,然后取上清至新1.5 ml EP 管，3000 rpm, 离心15 min,取上清备用 2.上清液的制备：取步骤一中上清0.15 ml加试剂一应用液0.45 ml,漩涡混 匀，放置15 min分钟后离心，3500-4000转/分，离心10分钟，上层清亮 液体为上清液。 3.上清液中Vc的测定：

单脱氢抗坏血酸还原酶活性测定试剂盒使用说明

单脱氢抗坏血酸还原酶活性测定试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC0650 规格：50T/48S 产品内容： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体×1瓶，室温保存； 试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前加入5mL双蒸水充分溶解； 试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5mL双蒸水充分溶解； 试剂五：液体×1瓶，4℃保存。临用前加入5mL试剂二充分溶解。 试验中所需的仪器和试剂： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、蒸馏水。 产品说明： MDHAR催化MDHA还原MDHA生成AsA；在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。MDHAR催化NADH还原MDHA生成AsA和NAD＋，NADH在340nm有特征吸收峰，但NAD＋没有。通过测定340nm光吸收下降速率，来计算MDHAR活性。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1ml试剂一进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500-1000：1的比例 （建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声超声破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 二、DHAR测定操作： 1.分光光度计预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min以上。 3.空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL试剂三、100μL试剂四和100μL 试剂五、600μL试剂二，最后加入100μL蒸馏水，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。 4.测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL试剂三、100μL试剂四和100μL 试剂五、600μL试剂二，最后加入100μL上清液，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值A3和A4，△A=A3-A4。。 三、DHAR活力计算： （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH为1U。 MDHAR(U/mg prot)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷（Cpr×V样）÷T =0.804×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr （2）按样本质量计算 活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化1μmol NADH为1U。 MDHAR(U/g)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷（W×V样÷V样总）÷T

辣根过氧化物酶制作过程

过氧化物酶体与溶酶体不同，过氧化物酶体不是来自内质网和高尔基体，因此它不属于内膜 系统的膜结合细胞器。过氧化物酶体普遍存在于真核生物的各类细胞中，但在肝细胞和肾细 胞中数量特别多。过氧化物酶体含有丰富的酶类，主要是氧化酶，过氧化氢酶和过氧化物酶。氧化酶可作用于不同的底物，其共同特征是氧化底物的同时，将氧还原成过氧化氢。过氧化 物酶体的标志酶是过氧化氢酶，它的作用主要是将过氧化氢（H2O2，Hydrogen Peroxide）水解。氧化酶与过氧化氢酶都存在于过氧化物酶体中，从而对细胞起保护作用。 HRP的制备 ⒈水提取： 称取 10斤用水冲刷干净的鲜辣根（辣根皮中亦含有丰富的HRP），用菜刀切成小碎块，在 搅肉机中搅碎1~2次。碎渣浆用1倍体积的水在低温下搅拌提取过夜（亦可采用高速抽提法）。次日用甩干机（或离心机）甩干，收集滤液，碎渣再用1/4倍体积水浸泡提取一次， 合并两次滤液，量总体积和度，0。 ⒉硫酸铵分级分离： 在不断搅拌下，每升滤液中慢慢加入226克硫酸铵粉末（相当于0.40饱和度），大约在1~2 小时内加完，置冷室中放置过夜。次日将上清液小心地用虹吸管移出，下面浑浊液以3000转/分离心15分钟，弃沉淀，合并上清液。再按每升上清液加258克硫酸铵粉末（0.8饱和度） 随加随搅拌，当硫酸铵全部溶解后，置冷室过夜。次日，虹吸出上清液，沉淀部分在冰冻离 心机中以13000转/分离心20分钟，弃去上清液，收集沉淀。将沉淀悬浮于100~150毫升蒸 馏水中（加水量要使沉淀全部溶解为止），分装于透析袋内，放在流动自来水中进行透析 1~2天，直到硫酸铵透析完毕为止（可用5%乙酸钡溶液或奈氏试剂进行检查）。然后改换成 用蒸馏水透析，中间更换2~3次，用0.1 mol/L硝酸银溶液检查透析外液无氯离子为止。 将透析液合并，在冰冻离心机中以 4000转/分离心 15分钟；去沉淀，量上清液的体积。 ⒊丙酮分级分离： 将上清液倒入烧杯并置冰盐浴中，在不断搅拌下，用细滴管沿杯壁加入1倍体积预冷至-15℃ 的丙酮，放置片刻，在冰冻离心机中以4，000/分离心15分钟，弃去沉淀。上清液再加入0.8体积（按原上清液体积）-15℃丙酮，（操作同上），静置后，在冰冻离心机中离心收集沉淀。将沉淀溶于少量蒸馏水中，透析除丙酮。可得Rz值近于1的酶溶液。 ⒋精制： 将上步酶液适当稀释，滴加1M硫酸锌溶液，使酶液中锌离子浓度为10-3M，5000转/分离心10分钟，得上清液。再将沉淀用少量蒸馏水洗涤，离心，洗液与清液合并，分装于透析袋内，对水透析除盐，用微孔滤膜过滤，进行真空冷冻干燥（约得20毫克），产品呈米黄色纤维状松软物，HRP产品的Rz值可达3.0左右，置真空干燥器中低温保存。

抗坏血酸(维生素C)的测定方法

抗坏血酸（维生素C）的测定方法（1） 在测定维生素C的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。 一、荧光法 1．原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3．仪器 3．1．实验室常用设备。 3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。 3．3．打碎机。 4．试剂 本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。 （1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。4℃冰箱可保存7～10天。 （2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。 （3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。 （4）50％乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。 （5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。临用前配制。（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。 （7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。 变色范围：pH=1.2 红色 pH=2.8 黄色 pH＞4.0 兰色 （8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。 （9）标准 抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：准确称取50mg抗坏血酸，用溶液（4.1）溶于50ml容量瓶中，并稀释至刻度。 抗坏血酸标准使用液（100μg/ml）: 取10ml抗坏血酸标准液，用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml。定容前试pH值，如其pH＞2.2时，则应用溶液（4.3）稀释。 标准曲线的制备：取下述"标准"溶液（抗坏血酸含量10μg/ml）0.5、1.0、1.5和2.0ml 标准系列，取双份分别置于10ml带盖试管中，再用水补充至2.0ml。 5.操作步骤 5.1 样品制备 全部实验过程应避光。 称取100g鲜样，加100g偏磷酸-乙酸溶液，倒入打碎机内打成匀浆，用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色，即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释，若呈黄色或兰色，则用偏磷

单脱氢抗坏血酸还原酶(monodehydroascorbate reductase,MDHAR)活性测定试剂盒说明书

货号: QS1008 规格：50管/48样单脱氢抗坏血酸还原酶（monodehydroascorbate reductase,MDHAR） 活性测定试剂盒说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： MDHAR催化MDHA还原生成AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。 测定原理： MDHAR 催化 NADH 还原MDHA 生成 AsA和NAD+，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD+没有。通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算出MDHAR活性。 自备实验用品及仪器： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水 试剂组成和配置： 试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体50mL×1瓶，室温保存。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。 试剂五：液体25μL×1瓶，4℃保存。临用前加5mL试剂二充分溶解。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2.. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议 500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g ，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。 3. 血清等液体：直接测定。 MDHAR测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。 3. 依次在比色皿中加入100μL试剂三、100μL试剂四、100μL试剂五和600μL试剂二，最后加入100μL上清液，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。 MDHAR活性计算公式： (1). 按蛋白浓度计算 MDHAR活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109]÷（Cpr×V样）÷T = 804×△A ÷Cpr (2). 按样本质量计算 第1页，共2页

谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)活性测定试剂盒说明书

货号：QS1111 规格：50管/48样 谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）活性测定试剂盒说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。 测定原理： GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水 试剂组成和配置： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5.0 mL蒸馏水，混匀。 试剂三：液体×1支，4℃保存。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。 3.血清等液体：直接测定。 操作步骤： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min。 3. 空白管：取1mL石英比色皿，加入850μL试剂一，100μL试剂二，50μL试剂三，充分混匀，于340nm 处测定10 s和190 s吸光度，记为A空1和A空2，△A空白管= A空1﹣A空2。 4. 测定管：取1mL石英比色皿，加入750μL试剂一，100μL试剂二，100μL上清液，50μL 试剂三，充分混匀，于340nm测定10 s和190 s吸光度，记为A测1和A测2，△A测定管= A 测1﹣A测2。 注意：空白管只需要测定一次。 计算公式： 第1页，共2页

抗坏血酸过氧化物酶(ascorbateperoxidase ,APX)活性测定试剂盒 使用说明

抗坏血酸过氧化物酶（ascorbateperoxidase ，APX）活性测定试剂盒使用说明 微量法100T/96S 产品简介： APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX 具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H 2O 2氧化AsA，是植物AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影响到AsA 的含量，在胁迫和解胁迫条件下，APX 与AsA 具有一定的负相关性。 APX 催化H 2O 2氧化AsA，通过测定AsA 的氧化速率，可计算得APX 活性。 试验中所需的仪器和试剂： 低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。 产品内容： 试剂一：液体×2瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加3mL 蒸馏水充分溶解。 试剂三：液体×1支，4℃保存。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 称取约0.1g 样品，加1mL 试剂一，冰上充分研磨，13000g 4℃离心20min，取上清液。 二、测定操作表： 1.分光光度计预热30min 以上，调节波长到265nm，用蒸馏水调零。 2.试剂一在25℃中预热30min 以上。 3.空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL 蒸馏水、140μL 预热的试

剂一、20μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收。 4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL预热的试剂 一、20μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收。 APX活力计算： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA为1U。 APX(U/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T=0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr （2）按样本鲜重计算 活性单位定义：每克样品每分钟氧化1μmol AsA为1U。 APX(U/g鲜重)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(V样÷V样总×W)÷T=0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷Wε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1cm；V反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；W：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；T：催化反应时间（min），2min。 b.使用96孔板测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA为1U。 APX(U/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T=0.1848×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr （2）按样本鲜重计算 活性单位定义：每克样品每分钟氧化1μmol AsA为1U。

辣根过氧化物酶标记 Streptavidin

辣根过氧化物酶标记Streptavidin 产品简介： 本辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-labeled Streptavidin)也称HRP-Streptavidin、Streptavidin-HRP或辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，为进口分装，可以用于生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等。 本HRP-Streptavidin用高纯度的Streptavidin和超纯的辣根过氧化物酶交联而成，确保产生最低的本底和最高的灵敏度。本产品的浓度为1mg/ml。 Streptavidin的分子量为66kD，可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。Streptavidin和生物素的亲和常数为K d=10-15M。 Streptavidin是一个4聚体蛋白，可以同时结合4个生物素分子。Streptavidin的中文名为链霉亲和素，从Streptomyces adidinii 中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。Avidin的pI= ~10.5，在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin 和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。 辣根过氧化物酶即horseradish peroxidase (HRP)，可以在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化ECL类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光，可以在ELISA时催化TMB产生蓝色，也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western blot 检测时催化DAB产生棕色沉淀。 本辣根过氧化物酶标记Streptavidin用于各种常规用途的推荐稀释比例参考下表，实际实验操作过程中需根据具体情况适当调节辣根过氧化物酶标记Streptavidin的稀释比例。对于Western，推荐的稀释范围为1:2000-10000。 本产品如果用于常规的Western检测，以每次检测需10毫升1:2000稀释的本产品计，可以检测40次。 保存条件： -20℃保存，一年有效。 注意事项： 叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性，在含有辣根过氧化物酶的溶液中不可加入叠氮钠。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等请参考相关实验步骤进行。起始 稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。 使用本产品的文献： 1. Liu H, Jiang C, Xiong C, Ruan J. DEDC, a new flavonoid induces apoptosis via a ROS-dependent mechanism in humanneuroblastoma SH-SY5Y cells. Toxicol In Vitro. 2012 Feb;26(1):16-23. 2. Liu J, Qian X, Chen Z, Xu X, Gao F, Zhang S, Zhang R, Qi J, Gao GF, Yan J. Crystal structure of cell adhesion molecule nectin-2/CD112 and its binding to immune receptorDNAM-1/CD226. J Immunol. 2012 Jun 1;188(11):5511-20. 3.P Xiao, X Lv. Immobilization of Chymotrypsin on Silica Beads Based on High Affinity and Specificity Aptamer and Its Applications.

维生素C

维生素C又称L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素。抗坏血酸在大多的生物体可借由新陈代谢制造出来，但是人类是最显著的例外。最广为人知的是缺乏维生素C会造成坏血病。 维生素C的药效基团是抗坏血酸离子。在生物体内，维生素C是一种抗氧化剂，因为它能够保护身体免于氧化剂的威胁，维生素C同时也是一种辅酶。 但是由于维生素C是一种必需营养素，它的用途与每天建议使用量经常被讨论。当它作为食品添加剂，维生素C成为一种抗氧化剂和防腐剂的酸度调节剂。多个E字首的数字（E number）收录维生素C，不同的数字取决于它的化学结构，像是E300是抗坏血酸，E301为抗坏血酸钠盐，E302为抗坏血酸钙盐，E303为抗坏血酸钾盐，E304为酯类抗坏血酸棕榈和抗坏血酸 [1] 基本知识:维生素Ｃ又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。在所有维生素中，维生素Ｃ是最不稳定的。在贮藏，加工和烹调时，容易被破坏。它还易被氧化和分解。 水溶性；大多数动物体内可自行合成维生素c,但是人类、猿猴、天竺鼠等必须从食物中摄取；维生素C在胶原质的形成上扮演很重要的角色。胶原质对于人体的组织细胞、牙龈、血管、骨骼、牙齿的发育和修复是一种重要的物质；帮助人体内铁的吸收；计量单位是毫克(mg)；在紧张状态时，会加速维生素C的消耗； 成人的建议每日摄取量是60mg(妊娠、哺乳期需要更多的量-70-95mg)； 常被推荐为预防婴儿猝死症(SIDS)的物质；抽烟者和老人需要更多的维生素C。(一支香烟 分子式：C6H8O6；分子量：176.12u；CAS号：50-81-7；酸性，在溶液中会氧化分解。 物理性质 外观：无色晶体；熔点：190 - 192℃；沸点：（无）；紫外吸收最大值：245nm；荧光光谱：激发波长－无nm，荧光波长－无nm； VC[维生素C简称] 溶解性：水溶性维生素；推荐摄入量：每日60毫克；最高摄入量：引起腹泻之量； 对生物以及人体有意义的"维生素C"是纯的左式右旋光（光学异构）抗坏血酸；相对的"左旋光"异构物在生物体内毫无用处。这两种是同分异构物。但是一般广告经常以左旋C称呼，

石墨烯负载铂纳米粒子,抗坏血酸还原

高效、清洁的石墨烯负载的铂纳米团簇的合成在直接甲醇燃料电池的应用 摘要 石墨烯负载的铂纳米团簇是由一个高效、清洁的方法合成，使用这个方法时石墨烯氧化物和铂离子的前体会因为抗坏血酸而在一步法工艺中降低。所得到的铂纳米团簇连接的石墨烯复合材料（PtNCs /石墨烯）通过X-射线衍射（XRD），场发射扫描电子显微镜（FE-SEM），透射电子显微镜（TEM）和能量色散X射线光谱（EDS）检测，可以直接显示，Pt纳米团簇可以成功的在石墨烯上形成,并很好地分布在石墨烯薄片的边缘和褶皱上。进一步的电化学表征——包括循环伏安法（CV）和当前的方法表明：与普通的炭黑Vulcan XC-72和石墨负载Pt纳米团簇相比较，PtNCs /graphene具有明显更高的电催化活性和甲醇电氧化稳定性。这将导致PtNCs/graphene进一步作为一种新的电极材料在直接甲醇燃料电池（DMFC）中的应用。 1.介绍 几十年来，在直接甲醇燃料电池(DMFC)中，一直使用甲醇作为燃料而产生强化利益。DMFC 与其他的燃料电池相比，主要的优点是它具有便携性、它所需的原料甲醇容易获得、它具有较高的能量密度——一个数量级大于压缩氢气。然而甲醇交叉和中间物的毒效应,如一氧化碳(CO)对催化剂的毒性影响是影响DMFC在商业市场上应用的主要限制。减少中间物产生的不良效应和提升催化剂效率是当前研究DMFC的主要问题。在DMFC的甲醇氧化反应中主要选择铂作为催化剂，是由于它是在这个反应中催化活性最高的纯金属。但是铂高昂的价格和自然界中的有限供应束缚了它在DMFC中的应用。而铂不稳定的催化能力会产生具有毒效应的中间产物，是另外一个主要的障碍。众所周知，催化剂的比活性主要取决于它们的分布和大小。为了降低铂的负载和提高它的催化活性，可以控制铂的大小在纳米尺寸之类，这个方法也是最有效的。由于具有很高的表面积体积比，拥有小而窄的分布特征的铂纳米粒子是高效电催化活性材料的理想当选者。因此，具有高比表面和强导电性的支持材料对增强铂的电催化活性和利用率是至关重要的。 石墨烯，这非凡的二维材料带来了广泛的利益，作为铂的支持材料，它被寄予厚望。与传统的碳材料相比，石墨烯具有更大的比表面积、更好的机械强度和更高的导电性。所有的碳原子以sp2杂化形式紧密的结合在一起，这使得这种特殊的材料具有蜂巢晶格和原子厚度。因此，作为电极材料，石墨烯在许多领域展现了美好的发展前景，比如燃料电池、超级电容器、太阳能电池。考虑到它的高比表面及极好的机械电导性能，石墨烯被认为是最有发展前景的负载铂纳米粒子的支持材料。 因此，最近几年许多科学家在研究将石墨烯与铂纳米粒子结合起来的方法。一般情况下，它们是分离的，需要在胶质分子聚合物的帮助下结合在一起。逐步的程序将操作和桥接代理使用变得复杂，这将会降低铂的催化活性。我们以前的报告认为，通过抗坏血酸（在甲醇氧化反应中表现了很高的催化活性）来减少铂前体的产生从而在基质上合成铂纳米粒子是有可能的。在最近的报道中，也证实了抗坏血酸会减少氧化石墨烯表面的氧化官能团如羧基和环氧

DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒

DAB 辣根过氧化物酶显色试剂盒 简介： DAB 辣根过氧化物酶显色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western 、Southern 、Northern 、EMSA 等膜显色的试剂盒。DAB 即3,3N-Diaminobenzidine T ertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、常规组织切片、细胞样品、膜与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次。 2、按(A):试剂(B):试剂(C)=5000:5000:3的比例混合, 即为DAB 染色工作液，即配即用。 3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB 染色工作液，确保覆盖样品。 4、室温避光孵育或更长时间，直至显色至预期深浅。 5、去除DAB 染色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。 6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。 注意事项： 1、 DAB 是致癌物，请注意适当防护。 2、 试剂(A)、试剂(B)避免反复冻融。 2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 编号 名称 PW0072 2×50ml Storage 试剂(A): DAB 显色液A 50ml -20℃ 避光 试剂(B): DAB 显色液B 50ml -20℃ 避光 试剂(C): DAB 显色液C 100ul RT 使用说明书 1份

抗坏血酸氧化酶活性测定试剂盒使用说明

抗坏血酸氧化酶活性测定试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC1260 规格：50管/48样 产品说明： AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO 与细胞壁代谢和生长有着密切的联系。AAO氧化AsA所形成的MDHA可通过质膜上的细胞色素b还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。 AAO可直接氧化AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。 实验中所需仪器及设备： 低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入10mL蒸馏水充分溶解。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 按照组织质量g：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 二、AAO测定操作： 1.分光光度计预热30min，调节波长到265nm。 2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min。 3.空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、850μL预热的试剂二和 50μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。

4.测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、850μL预热的试剂二和50μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收A3和A4，△A测定管=A3-A4。 三、AAO活性计算： （1）按蛋白浓度计算 AAO活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA为1U。 AAO(U/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T =0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr （2）按样本质量计算 AAO活性单位定义：25℃中每毫克样本每分钟氧化1μmol AsA为1U。 AAO(U/g)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(W×V样÷V样总)÷T =0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷W ε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为 5.42×104L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V反总：反应体系总体（L），1000μL=1×10-3L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样：加入反应体系中上清液体（mL），100μL=0.1mL；V样总：加入提取液体，1mL；W，样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。

高等植物中维生素C合成及其相关酶研究进展

高等植物中维生素C合成及其相关酶研究进展1 尚增振，马锋旺*，李威 西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌（712100） E-mail：fwm64@https://www.wendangku.net/doc/2e9098810.html, 摘要：维生素C即抗坏血酸（AsA），是一种重要的抗氧化物质，在植物和动物的代谢方面发挥着重要作用。自1998年拟南芥AsA缺乏突变体VTC1的鉴定和L-半乳糖途径的提出，高等植物中AsA代谢研究发展较快。合成相关新基因的鉴定与克隆，检测到其他的合成途径，表达动物AsA合成基因后，不可预知的生物表型观察等表明植物AsA合成的复杂性。本文根据相关文献对植物中维生素C的合成途径和相关酶基因的研究进行了综述。 关键词：高等植物，维生素C，生物合成途径，合成相关酶 维生素C（Vc）,又称抗坏血酸（ascorbic acid, AsA），是普遍存在于植物组织中的高丰度小分子抗氧化物质。某些动物如人类由于缺乏其合成关键酶L-古洛糖内酯氧化酶不能自身合成维生素C，并且其在人体内不能长久贮存，只能不断从食物中获取AsA，而作为主要Vc 来源的水果和蔬菜其AsA水平差异较大。因此AsA 含量已成为衡量农产品品质的重要指标。此外，植物中的AsA 还在抗氧化和清除自由基、光合作用和光保护、细胞的生长和分裂以及参与某些次生代谢物和乙烯的合成等诸多方面起着非常重要的生理功能。同时有关AsA生物合成和调控的研究也取得重要进展。本文综述了近来年人们在AsA生物合成及其相关酶方面的研究进展。 1．植物AsA合成途径 1.1 与动物合成途径类似的古洛糖途径 Isherwood 等[2]最早提出的类似于动物合成途径的高等植物AsA生物合成途径，该途径认为植物由D-半乳糖经D-半乳糖醛酸和L-半乳糖内酯(L-GalL)等重要中间物质最终形成AsA，其间发生了类似动物的碳链倒位。支持该途径的证据为在植物体内确实存在天然 L-GalL并可通过半乳糖内酯脱氢酶(GalLDH)氧化生成AsA，同时D-半乳糖醛酸(甲酯)也可作为AsA合成的底物。但随后的同位素放射性示踪证明植物合成AsA的过程并未发生碳链的倒位[3]。虽然有证据显示L-GalL是植物合成AsA的底物，但D-半乳糖醛酸并不是植物合成AsA 的主要物质[10,12]。 1.2 邻酮醛糖途径 为符合同位素放射性示踪实验结果，Loewus等[28]提出的一条非倒位途径即临酮醛糖途径。在该途径中D-葡萄糖首先在C-2位上被氧化生成D-葡萄糖醛酮然后在C-5位经表异构酶催化形成L-山梨糖醛酮，并进一步在山梨糖醛酮脱氢酶作用下被氧化为AsA。此途径虽然没有碳骨架的倒位，但至今还没有明确的实验证据支持这一途径[29]。因为尚未发现催化前两步反应的酶。Conklin 等[30]对拟南芥AsA缺乏的突变体vtc1的研究表明增加D-葡萄糖醛酮和L-山梨糖醛酮并不能导致AsA的积累。L-山梨糖醛酮也未能明显增加拟南芥悬浮细胞内源AsA含量. Saito et al 利用14C标记实验发现，前体培养的24h后，D-(14C)-葡糖醛酮有4.1%的转化成AsA；D-(14C)-葡萄糖有0.6 %转化成AsA，而且没标记的D-葡糖醛酮抑制了D-(14C)- 1本课题得到西北农林科技大学“拔尖人才支持计划”和西北农林科技大学国家生命科学与技术人才培养基地科技创新基金的资助。

食品中还原型抗坏血酸的测定

食品中还原型抗坏血酸的测定 1 范围 本标准规定了食品中抗坏血酸的分光光度法。 本标准适用于各类食品中的还原型抗坏血酸的测定。 本标准不适用于脱氢行抗坏血酸的测定。 2 原理 在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物，在最大吸收波长420处测定吸光度，与标准系列比较定量。 3 试剂 3.1 乙酸溶液（12%）：吸收12mL冰乙酸，加水稀释至100mL。 3.2 乙酸溶液（2%）：吸收2mL冰乙酸，加水稀释至100mL。 3.3 乙二胺四乙酸二钠溶液（35g/L）：称取 3.5g乙二胺四乙酸二钠[C10H14N2O8Na·2H2O]于水中，加热使之溶解后，放冷，并稀释至100 mL。 3.4 蛋白沉淀剂 3.4.1 乙酸锌溶液（220g/L）：称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O],加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100 mL。 3.4.2 亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)4·3H2O],加水溶解至100 mL。 3.5 显色剂：固蓝盐B（Fast Blue Salt B）溶液（2g/L）：准确称取0.3125g固蓝盐B，加水溶解于100 mL。 3.6 抗坏血酸标准储备溶液（2.0mg/mL）：精密称取0.2000g抗坏血酸，加20 mL 乙酸溶液（12%），溶解后移入100 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于2.0mg抗坏血酸（10℃下冰箱内贮存在2d内稳定）。 3.7 抗坏血酸标准使用液（0.1g/L）：用移液管精密吸取5.0 mL抗坏血酸标准储备溶液（2.0g/L）于100 mL棕色容量瓶内，加5 mL乙酸溶液（12%），用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于100μg/mL抗坏血酸（临用时配制）。 4 仪器 4.1 分光光度计。 4.2 捣碎机。 4.3 离心沉淀机。 4.4 10mL具塞玻璃比色管。 5 分析步骤 5.1 试样溶液的制备 5.1.1 非蛋白性食