细胞增殖实验(MTT法)的步骤及方法

细胞增殖实验（MTT法）的步骤及方法

一、技术简介

细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老和死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。必须强调指出，通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。可见，细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。真核细胞的分裂方式有三种，即有丝分裂、无丝分裂和减数分裂。

MTT是3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide的简称。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。然后采用二甲基亚砜（DMSO）溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570 nm波长处测定其光吸收值，反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

二、实验流程（以贴壁细胞为例）

1. 收集对数期细胞，调整浓度。

2. 将细胞种植于96孔板中，待细胞贴壁后（约4-12 h）加药。

3. 5% CO2，37 o C孵育一定时间。

4. 每孔中加入200 μL MTT溶液（配制成5 mg/ml），培养4 h。

5. 吸去孔内的培养液，加入150 μL DMSO，可继续孵育4 h，使结晶物充分溶

解。

6. 取出96孔板，将其置于酶联免疫检测仪上，震荡15 s，然后在570 nm下

测量吸光值。

7. 结果统计分析。