HPLC-UV的使用及注意事项

高效液相色谱仪使用说明

HPLC-UV（JASCO）使用程序

1、相色谱仪开启程序：

1）、打开电脑，进入系统workstation version 4.0。

2）、打开反控开关分别打开检测器、泵、柱温箱、进样器的开关更换流动相用注射器抽气.

3）、打开borwin工作站打开工具栏中control edit run control method建立方法（流速、温度、波长、时间等） monitor baseline 选择所建立的方法按run

4）、待基线平稳后打开工具栏中run，如连跑两针样品以上可选择working list(0n system1),如果跑单针则选择start single run(0n system1) 根据自己的情况填写vial、runname、idnum、control、runlong、injvol 几项，但要注意所填写的内容要与工具栏control中建立的方法一致，否则容易造成程序不工作或死机。

2、关闭程序：当结束实验室后，先关闭工作站的pump，使其停止工作，退出borwin 工作站，然后关闭检测器、柱温箱、进样器、反控器的开关，不关闭泵的开关。

3、清洗色谱柱：先按下flow，调流速为0.5ml/min，再按下enter,然后按pump。用处理好的纯水冲柱半小时以上至柱压平稳，再用甲醇冲柱半小时以上至柱压平稳后，关闭泵。切记更换流动相时一定要先抽气，确保没有气泡进入泵中，再打开pump。

4、色谱图考取：进入windows系统我的电脑c:borwin/default中把所需图谱考到217电脑d:borwin/default中进行处理。

5、在两台色谱仪都闲置且不跑梯度的前提下，优先使用单泵色谱仪。

6、在线扫描样品的紫外吸收波长：HPLC-UV（双泵）检测器可以在线扫描样品的紫外吸收，操作如下：1）首先要知道所测样品的出峰位置，在样品要出峰前1-2min点击HSS1500monitor-system#1体统中的Uv-base,当样品峰出现一定高度时，点击Uv-spc进行扫描，图谱自动保存。2）打开路径：打开桌面上的JWEXPL32系统spectra analysis file open c:borwin/default 所扫图谱。

7、UV检测器的特点：UV检测器是HPLC中应用最广泛的检测器，当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可见检测器。它灵敏度高，噪音低，线性范围宽，对流速和温度均不敏感，可于制备色谱。由于灵敏高，因此既使是那些光吸收小、吸光系数低的物质也可用UV检测器进行微量分析。但要注意流动相中各种溶剂的紫外吸收截止波长。如果溶剂中含有吸光杂质，则会提高背景噪音，降低灵敏度（实际是提高检测限）。此外，梯度洗脱时，还会产生漂移。

8、色谱柱：反相键合相C18

高效液相色谱仪使用注意事项

1、色谱柱的使用：1）、可根据自己的样品选择色谱柱，但在安装时一定要注意

柱子的安装方向；2）、Diamonsil(钻石)HPLC色谱柱又高压匀浆法装填，能够承受较高压力。为获得最佳分离效果，使用时请不要超过200bar，最高操作温度不要超过60℃；3）保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头

要用配套的螺旋帽拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。

2、样品制备：样品应尽可能溶解在与流动相互溶的溶剂中，一是避免出现拖尾

峰、怪峰，二是避免样品在系统中由于溶解度降低而析出。并且样品必须使用针头式过滤器对样品预先过滤。

3、流动相的使用：在使用前一定要超声脱气，如流动相为纯水或缓冲盐溶液，

首先要过滤，然后超声的同时使用真空泵抽气，一般超声20min。注意：过滤时，所需滤器和装滤液的瓶子一定要用虑好的滤液清洗干净；如虑缓冲盐后一定要用注射用水把所用滤器清洗干净。

4、流动相的选择：实验室的色谱柱一般允许流动相的pH范围为2-7.5，所以要

选择适宜的流动相。

5、流动相的更换：每次更换流动相时，一定要关闭pump，且用注射器在泵头管

处抽出大约两管的流动相，排除更换流动相时所带入得气泡，确保气泡未进入泵中。

6、打开pump后，一定要观察流动相进入泵时是否有气泡，如有气泡一定要关闭

以防进入泵中。处理方法：1）可能是流动相没有超好，可在超声脱气；2）可能是流动相入口滤板和泵头的滤板堵塞或漏气等，可将两处滤板卸下用注射用水和甲醇交替超声几次，直至干净为止。

7、在打开所有程序之前，一定要检查一下废液缸是否已满，要及时更换。并且

一定要注意清洗针头的瓶中是否还有洗液，确保瓶中有洗液。洗液一般为甲醇水。

8、程序启动后，如果柱压很高，首先停止泵的运行，把柱子入口端断开，观察

压力是否很高，如柱前压高，可把流动相入口的滤板和泵头前的滤板卸下超声清洗；如柱前压不高，说明柱子本身压力高，可把柱子上端与检测器断开，用低流速的甲醇冲柱。

9、气泡排除：如泵里有气泡，可把色谱柱的进样段断开，使用处理好的注射用

水以1ml/min的流速冲洗2h以上；如色谱柱进气泡，则把柱子与检测器连接处断开，使用处理好的注射用水以0.5ml/min的流速2h以上冲洗；如检测器进入气泡，可把柱子卸掉，把柱两头接口用连接器连接后，用处理好的注射用水以2-3ml/min的流速冲洗。以上操作时间可根据进入气泡的严重性而定。

如果严重可用甲醇代替水，排气泡更快。

10、保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洗；用试剂瓶作贮液瓶时，要

经常更换。

11、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行

预处理，去除杂蛋白，以免堵柱。

主要安全工器具的使用与维护注意事项

主要安全工器具的使用与维护注意事项 姓名：XXX 部门：XXX 日期：XXX

主要安全工器具的使用与维护注意事项 （1）使用前，应先检查绝缘棒是否超过了有效试验期。 （2）操作者的手握部位不得超过护环。 （3）使用时，工作人员应戴绝缘手套和穿绝缘靴。 （4）在下雨、下雪天用绝缘棒操作室外高压设备时，绝缘棒应有防雨罩，以使罩下部分的绝缘棒保持干燥。 （5）绝缘棒应统一编号，并存放在干燥的地方，以防止受潮。一般应放在特制的架子上或垂直悬挂在专用挂架上，以防弯曲变形。 （6）绝缘棒不得直接与墙或地面接触，以防碰伤其绝缘表面。检查与试验 （l ）绝缘棒一般应每三个月检查一次。检查时要擦净表面，检查有无裂纹、机械损伤、绝缘层损坏。 （2）绝缘棒一般每年必须试验一次。 2、绝缘夹钳使用和保管注意事项 （l ）绝缘夹钳上不允许装接地线，以免在操作时，由于接地线在空中游荡而造成接地短路和触电事故。 （2）在潮湿天气时，只能使用专用的防雨绝缘夹钳。 （3）作业人员工作时，应带护目眼镜、绝缘手套和穿绝缘靴（鞋）或站在绝缘台（垫）上，手握绝缘夹钳要精力集中并保持平衡。 （4）绝缘夹钳要保存在专用的箱子里或匣子里，以防受潮和磨损。检查与试验 （1）绝缘夹钳与绝缘棒一样，应每年必须试验一次。 3、验电器的使用

（1）低压验电时，笔尖金属体应触到被测设备上，手握笔尾，看 氖管灯泡是否发亮，如果被测设备有电，即使操作人员穿上绝缘鞋或站绝缘垫上，氖灯也会发光。同时可以根据发光的程度，判断出电压的高低。 （2）低压验电前，应先在有电的部位试一下，以防因验电器故障造成误判断而导致触电事故。 （3）低压验电器只能在100-500v 范围内使用。 （4）高压验电前，应先检查验电器的工作电压与被测设备的额定电压是否相符，验电器是否超过有效试验期。 （5）利用高压验电器的自检装置，检查验电器的指示器叶片是否旋转以及声、光信号是否正常。 （6）高压验电时，工作人员必须戴绝缘手套，并必须握在绝缘棒护环以下的握手部分，不得超过护环。 （7）高压验电时，应将验电器的金属接触电极逐渐靠近被测设备，一旦验电器开始正常回转，且发出声、光信号，即说明该设备有电，应立即将金属接触电极离开被测设备。 4、低压钳型电流表 （1）使用低压钳型电流表时，应注意电流表的电压等级和电流值档位。测量时，应特别注意人体与带电部分保持足够的安全距离。 （2）测量回路电流时，应选有绝缘层的导线上进行测量，并与其他带电部分保持安全距离，防止相间短路事故发生。禁止在测量中更换电流档位。 5、绝缘手套 （1）使用绝缘手套前，应检查是否超过有效试验期。 （2）使用前，应进行外部检查，查看橡胶是否完好，查看表面有无损伤、磨损或破漏、划痕等。如有粘胶破损或漏气现象，应禁止使用

高效液相色谱仪(HPLC)校正方法

高效液相色谱仪（HPLC）校正方法 0.1输液系统： 0.1.1梯度误差G C不超过±3% 0.1.2泵流量设定值误差 S s＜±2% 0.1.3流量稳定性误差 S R＜±2% 0.2紫外检测器性能 0.2.1基线噪声不超过5×10-4AU，基线漂移不超过5×10-3AU 0.2.2定量测量重复性误差（6次进样）RSD≤1.5% 0.2.3最小检测浓度不超过1×10-7g/ml萘/甲醇溶液 0.2.4可调波长紫外可见光检测器波长示值不超过±2nm(HP1100高效液相色谱仪可由仪器自身完成) 1校正条件 1.1环境温度10-30℃，相对湿度低于65% 1.2校正设备 1.2.1秒表分度值小于0.1 s 1.2.2分析天平最大称量200g,最小分度值0.1mg 1.2.3容量瓶 1.2.4微量注射器 1.3标准物质和试剂 1.3.1HPLC用甲醇、纯水，分析纯的丙酮 1.3.21×10-4g/ml，1×10-7g/ml的萘甲醇溶液 1.3.3紫外波长标准溶液 2校正方法 2.1梯度误差G C的校正 2.1.1进行梯度洗脱程序，A溶剂为水，B溶剂为0.1%丙酮的水溶液，B经5个阶段从0变到100%， 20%—40%—60%—80%—100%，重复测量两次，取平均值，求各段梯度误差Gci，取最大作为仪器梯度误差，公式：Gci=（Li—Lm）/Lm×100% Li：第i段信号值的平均值； Lm ：各段输出信号平均值的平均值 可接受标准： -3%≤Gci≤3% 2.2泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S R的校正 2.2.1将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，按表一设定流量，待 流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确的收集10-25

高效液相色谱仪使用注意事项[1]

岛津液相色谱仪使用注意事项 1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。 9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。 11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。液相色谱柱使用经验谈 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样品的前处理： a、最好使用流动相溶解样品。 b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。

常用工具使用注意事项

手动工具安全使用规范 (一)一般要求 (1)使用工具人员,必须熟知工具的性能、特点、使用、保管和维修及保养方法。 (2)各种施工工具必须是正式厂家生产的合格产品。 (3)工作前必须对工具进行检查,严禁使用腐蚀、变形、松动、有故障、破损等不合格工具。 (4)电动或风动工具在使用中不得进行高速和修理。停止工作时,禁止把机件、工具放在机器或设备上。 (5)带有牙口、刃口尖锐的工具及转动部分应有防护装置。 (6)使用特殊工具时(如喷灯、冲头等),应有相应安全措施。 (7)小型工器具放在工具袋中妥善保管。 4.其他手动工具 (1)携带: 1)手工具携带时应放在专用的套带里或工具袋、工具桶中,不要放在衣裤的口袋里, 更不要插在腰带上。 2)对暂时不用的工具,存放位置要得当,安放应平稳,便其不易脱落伤人,不要放在脚手架上,架空的管道及机械的动部件上。 3)作业人员之间应手递手的传递工具,不要抛掷;传递带刃口锋利的工具时,要把柄部向着接受工具的人。 4)对于撬棍之类须用肩扛的工具,在携带时要注意前后左右,使之不与其他物体和 人员相碰,放下时要稳。 5)携带有软线的轻便动力工具时,要注意保护好软线,使其远离尖锐物、热源、油 或溶剂,以免损坏或软化绝缘。 (2)手工具的柄部: 1)受锤子击打的工具柄部,长期受击打易出现局部碎裂,碎块飞出难以防备,为此 因在如錾子、冲头、岩石钻等柄部端头安装金属箍(青铜环)。 2)对于需装木柄的手工工具,其木柄应采用有韧性的硬木(如柞木、榆木、胡桃木、 槐木、枫木等)制作。木柄应表面光滑,不应有节疤、裂口和其他疵病。 3)木柄与锤头、斧头的连接必须牢靠、坚固,以防使用时木柄折断或锤头飞出,在 使用中如发现有松动现象的手柄,必须立即楔紧;切不可只靠楔子紧固,木柄与装备孔配合好更重要。 4)为防止木柄在手中打转打滑,木柄宜做成椭圆形。 (3)金属切割工具: 1)錾子: ①錾子是錾削用的工具,通常是用碳素钢制作的,不可用高速钢作錾子。 热处理后的硬度为HRC(48-52);錾顶不准淬火,不准有裂纹和毛刺。 ②一般錾削毛 坯表面的毛刺,浇冒口和分割材料可用扁錾(阔錾);錾槽及分割曲线形板料可用尖錾 (狭錾);錾削油槽使用油槽錾。 ③握錾方式和操作要正确。錾子要用左手中指、无名指和小指握着,大拇指和食指自然合拢,錾子头部伸出20mm左右;如减少錾击对手的震动,錾子不要握的太紧。 ④錾削时,应从工作侧面的尖角处轻轻起錾,錾开缺口后再全刃工作,否则,錾子容易弹开或打滑;切削距工件尽头lOmmn处时,应掉头錾削。

高效液相色谱(HPLC)

高效液相色谱（HPLC）操作规程 一操作 1.准备工作 ⑴流动相的准备 应根据实验选择合适的流动相，所有流动相原则上应选择HPLC级别，水应选择超纯水，并应保持新鲜。 所有流动相在进行实验前应经过相应的脱气处理，脱气时间应根据流动相的量相应增加，但一般超声脱气不应少于20min。 在实验过程中应保证足够的流动相，流动相的量与流速、洗脱时间等有关，应根据具体情况进行准备。 ⑵样品的准备 对于待测的样品，在进样之前应经过滤膜过滤，根据样品的不同选择不同种类、不同直径的滤膜。 2. 排气 打开purge阀，键入stop→prime，直到无气泡停止stop。 B泵同样操作。 关闭purge阀。 3. 开机 打开电脑主机和显示器，点击Galaxie，进入工作站。选择系统，点击Agilent HPLC. 点击overview，可观察仪器各部分状态。 打开泵及检测器的电源。 二 分析方法建立 1.进入工作站系统界面。 点击数据，文件→新建→方法，出现视窗，点击前进即可。 键入方法名和相应描述→点击ok后出现方法文档。 2.210的设定 点击控制→210图标→Elution。 选择流动相A和B的种类。 Compressibility、Pressure Constant以及Refill Time属于内置参数无需设定。 设置A、B流动相的比例，通过改变B的比例设定。 如需梯度洗脱，则根据方法对Equilibrium Time 和Hold Time进行设定。 点击Misscellaneous。 Start Mode选择Inject Trigger on Pump A。 End of Sequence 选择Leave Pump on。 210设定结束。 3.325的设定 点击325图标，选择Signal。 其中Detector Bunch Rate建议设置成2（10Hz），Noise Monitor Length建议设定成64，Response Time建议设定0.5。 根据方法设定相应波长。 其余三项包括Peak Sensor、Relay、Misscellaneous不需设定。 325设定结束。 此时方法已经建立，选择文件，保存方法即可。

显微镜的使用注意事项

注意事项 ■持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。 ■轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，应放在距边缘10cm处，以免碰翻落地。 ■保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。 ■水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即用擦镜纸擦净。■放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。 ■要养成两眼同时睁开观察的习惯，以左眼观察视野，右眼用以绘图。 ■不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。 ■使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使镜头离开通光孔，下降镜台，平放反光镜，下降集光器(但不要接触反光镜)、关闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。最后填写使用登记表。 故障原因 一、检定方法把标准刻线尺放置在硬度计(或显微镜)的工作台上，检查时先调好焦距，使在目镜视野内或投影屏上能清晰地看到标准刻线尺的刻线，并调整到与目镜内的刻线重合，然后将读数显微镜的刻线与标准刻线尺的刻线进行比较，应至少在整个测量范围的5个间隔段进行测量，各间隔段比较3次，取3 次比较结果的平均值，其相对误差W按下式进行计算: W=(Li-L)/L×100% 式中:W——相对误差(mm)；Li——读数显微镜的比较段所测出的长度(mm)， (i=1～5)；L——标准刻线尺比较段的实际长度(mm)。 读数显微镜的刻度按上述方法逐段进行比较，其误差应不大于±0.5%。 二、故障原因与调修 1.显微镜混浊不清 主要原因:镜片不洁或发霉。 排除方法:当镜片上存有灰尘或污物时，应用毛刷、羽毛除去，继而用镜头纸或用脱脂棉蘸少许无水酒精或乙醚细心地沿环形轨迹擦拭，但不要让擦拭液体流失。 2.镜内不能清晰地看到压痕边缘 主要原因:部分镜片有松动现象。 排除方法:重新固紧镜片松动之处。 3.读数显微镜刻度值与标准尺刻度不重合 主要原因:物镜镜头松动或物镜镜头与镜筒连接处垫圈丢失，焦距变化所致。 排除方法:将物镜镜头紧固，若垫圈丢失，应经过反复调试其厚度，配上合适的垫圈，至刻度误差最小的位置为止。

高效液相色谱方法的验证

高效液相色谱方法的验证 ?方法验证的目的 ?方法验证的内容 ?方法验证的项目及测定方法

方法验证的目的 目的：证明采用的方法适合相应检测的要求。 方法验证是实验室针对特定方法的研究过程，通过设计方案，有步骤、系统地收集、处理实验数据，最终形成文件，以证明所用试验方法准确、灵敏、专属并重现。同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。

方法验证的内容 ?准确度 ?精密度 ?专属性 ?检测限 ?定量限 ?线性和范围 ?耐用性

准确度 定义：方法测定结果与真实值或参考值的接近程度。一般用回收率%表示。 1. 主成分含量测定 原料药：对照品或方法比对 2. 制剂、中药：标准加样回收 杂质定量 测定：加样回收（n 3 9） 杂质对照品 方法比对 回收率 C-A %=′ B 100% 杂质与主成分的相对含量 A:试验供试品中被测成分的量 （通常为含量测定量的50%） B: 试验供试品中加入的对照品的量 （通常为±20%） C:试验测定值

精密度 定义：在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用偏差，相对偏差和相对标准偏差 1. 重复性（n 9） 3 2. 中间精密度 3. 重复性 测定：HPLC方法的精密度测试，应从样品制备开始，设计3个浓度， 分别平行制备3份，以测定含量计算相对标准偏差；或同一样品平行制备6份供试品，分别进样，以峰面积计算相对标准偏差。 同一份供试品连续进样6次，计算得到的相对标准偏差只能表征进样精密度，不能作为方法精密度。

专属性 定义：在其它成分可能存在下，方法能正确测定出被测物的特性。 1. 鉴别反应 2. 含量测定 杂质测定 测定： 限量检查 空白制剂，模拟复方 加速破坏试样测试 DAD峰纯度检查

高效液相色谱仪操作步骤

高效液相色谱仪操作步骤： 1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。 2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)．设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)．进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)．填写登记本，由负责人签字。 注意事项： 1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

学生显微镜的使用方法和注意事项

显微镜是人类20世纪最伟大的发明物之一。在它发明出来之前，人类关于周围世界的观念局限在用肉眼，或者靠手持透镜帮助肉眼所看到的东西。显微镜把一个全新的世界展现在人类的视野里，人们第一次看到了数以百计的"新的"微小动物和植物，以及从人体到植物纤维等各种东西的内部构造。近年来，由于科学技术的发展和人们生活水平的提高，显微镜开始在各大学校普及，越来越多的学生有机会亲自接触到显微镜了。那么关于学生在使用显微镜做实验的时候有哪些使用方法和操作注意事项呢？下面将给您详细讲解。 1.取镜 取下需替换的镜头放入镜头瓶中，镜头调整好位置，旋紧于镜头盖上，最后放置于物镜瓶中旋紧。 2.安装新镜头 将物镜通过旋转安装到物镜转换器上，安装的时候需要按着顺时针的方向旋转转换器，物镜这时候的物镜倍率是由低到高。 3.安装确认无误后，即可进行使用

显微镜安装好以后，需要检测是否齐焦，若不齐焦，检查物镜是否旋紧，安装好物镜后，即可正常使用。 4.调节 把所观察的标本放到载物台上。注意:使有盖玻片的一面朝上,且被观察的部分位于通光孔的正中央,再用压片夹夹住。转动准焦螺旋,将镜筒尽量调低。注意:从侧面观察物镜,不要让物镜压到标本上,以防镜头将标本压碎。 左眼注视目镜内,同时逆时针方向转动准焦螺旋,使镜筒缓缓上升,直到看清物像为止。如果物像偏离视野,可慢慢移动标本。移动时应注意标本移动的方向与视野中看到的物像移动的方向相反。 5.观察与记录 用左眼对准镜内观察,同时右眼看桌面的记录本,并做好记录。注意:观察时,不能随便移动显微镜的位置。 6.还原

显微镜使用完后,将标本取下放回原处,然后将镜筒降到低处,一手握镜臂,一手托镜座,将显微镜放回镜箱内。 深圳市爱科学教育创新有限公司(以下简称爱科学)成立之初是 一家专注于研制新一代教学显微镜的科技型企业，公司致力于将先进的影像技术、电子信息技术及新时期的人文需求融入到传统光学仪器中，创造出一系列更加适合教学的显微镜产品。风雨中成长的几年里，爱科学掌握了数十项核心技术，于多项评比中荣获“自主创新银奖”、“中国教育装备产品创新奖”、教育装备“金奖产品”、“金点设计奖”、“红棉中国设计奖”等荣誉。这一切艰苦奋斗的成果，使得爱科学将目光由显微镜领域扩展到整个实验室装备领域中。

高效液相色谱操作知识

高效液相色谱操作知识 （一）高压恒流泵的维护注意事项 泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意保养和定期更换。应采取下列措施以延长使用寿命： 绝对不允许在没有流动相的或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲的溶液或有机溶剂中。长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。 要用HPLC级试剂 输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。压力下限应设置在0.5~1MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞的干磨有柱后清洗功能的高压恒流泵还要注意保持清洗液，否则将失去柱后清洗效果。 (二)流动相使用的注意事项 必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45?m薄膜过滤。 过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体（如02），如不脱气易产生气泡，增加基线噪声，造成灵敏度下降，甚至无法分析。 几种脱气方法比较： 1、氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好但成本高。 2、加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。 3、抽真空脱气法：易抽走有机相 4、超声脱气法：一种较为常见的脱气法。流动相放在超声波容器中，用超声波震荡10~15 分钟，此法效果并不太好但操作简单。 如果管路中使用peek树脂部件，请不要使用下列流动相： 浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜 特别注意HPLC使用过后的系统清洗： 含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法： 1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。 此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗 2、再用5：95的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。 3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。

电气工具的使用及注意事项

电气工具的使用及注意事项 在电气各类操作当中我们经常使用的安全器具是：验电器（笔）、摇表、万用表、地线、绝缘手套、绝缘靴），它们大体可分以下几类： 1.防护用具：它包括绝缘手套、绝缘靴 1.1绝缘手套使用保管注意事项： 1.使用前要进行充气检查，应该不漏气； 2.绝缘手套要在干燥并且无尖锐物体的地方存放； 3.绝缘手套不得和具有腐蚀性的物质存放在一起； 4.绝缘手套必须定期(6个月)进行校验，并有试验标记。 5.使用绝缘手套时应注意绝缘等级，严禁超量程使用。 1.2绝缘靴使用注意事项： 1.绝缘靴使用前应该进行外部检查完好； 2.使用绝缘靴时应注意绝缘等级，严禁超量程使用； 3.定期(6个月)对绝缘靴进行校验,并有试验标记。 2.验电器具可分为：验电笔、万用表、高压验电器、绝缘杆。 2.1验电器具的使用划分： 1.低压验电设备：万用表、验电笔（依据等级选用）。 2.高压验电设备：高压验电器、绝缘拉杆（一般不采用，它只是在室外构架高，无法使用验电器时采用）。 2.2验电器具使用注意事项： 1.验电器具在使用时必须根据所测的电压等级选用相应等级的验电器具； 2.验电器在使用前必须先进行验电器模拟试验，检查声光显示良好，设备电路完好。 3.验电器具必须在使用前进行外部检查，应该清洁无破损； 4.在室外验电时，严禁在雷雨天进行该项工作； 5.高压验电时必须戴绝缘手套，穿绝缘靴； 6.使用可伸缩式验电器时手不得超过护柄； 7.在验电器具使用时，应先在有电的设备上试验检查确认其完好； 8.对设备的验电应逐项进行，在停电设备两侧，应对进出线都分相进行验电； 9.试验验电器时不必直接接触带电导体，通常所测电压不大于额定电压的25%验电器就能清晰发光。 10.验电器必须定期(6个月)进行校验。 2.3万用表的使用注意事项 （1）.基本功能是测量电阻，电压，电流，使用前首先检查指针是否在零位，否则可机械调整至零位。 （2）一般红色表笔接“＋”黑色表笔接“－” （3）根据电压等级选用万用表的合适的档次；如果电压等级不好判断先从大的量程开始（4）不可用测量电流或电阻的档位区测量电压，容易烧坏万用表。 （5）万用表验电时必须在电压档进行测试； （6）验电前应对万用表导线进行检查绝缘良好；

显微镜操作步骤和注意事项

操作步骤和注意事项 （一）正置显微镜 1、安放 右手握住镜臂,左手托住镜座,使镜体保持直立.桌面要清洁、平稳,要选择临窗或光线充足的地方.单筒的一般放在左侧,距离桌边3～4厘米处. 2、清洁 检查显微镜是否有毛病,是否清洁,镜身机械部分可用干净软布擦拭.透镜要用擦镜纸擦拭,如有胶或粘污,可用少量二甲苯清洁之. 3、对光 镜筒升至距载物台1～2厘米处,低倍镜对准通光孔.调节光圈和反光镜,光线强时用平面镜,光线弱时用凹面镜,反光镜要用双手转动. 若使用的为带有光源的显微镜,可省去次步骤,但需要调节光亮度的旋钮. 4、安装标本 将玻片放在载物台上,注意有盖玻片的一面一定朝上.用弹簧夹将玻片固定,转动平台移动器的旋钮,使要观察的材料对准通光孔中央. 5、调焦 调焦时,先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒,并从侧面仔细观察,直到物镜贴近玻片标本,然后左眼自目镜观察,左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒,直到看清标本物像时停止,再用细调焦旋钮回调清晰. 操作注意：不应在高倍镜下直接调焦；镜筒下降时,应从侧面观察镜筒和标本间的间距；要了解物距的临界值. 若使用双筒显微镜,如观察者双眼视度有差异,可靠视度调节圈调节.另外双筒可相对平移以适应操作者两眼间距. 6、观察 若使用单筒显微镜,两眼自然张开,左眼观察标本,右眼观察记录及绘图,同时左手调节焦距,使物象清晰并移动标本视野.右手记录、绘图. 镜检时应将标本按一定方向移动视野,直至整个标本观察完毕,以便不漏检,不重复. 光强的调节：一般情况下,染色标本光线宜强,无色或未染色标本光线宜弱；低倍镜观察光线宜弱,高倍镜观察光线宜强.除调节反光镜或光源灯以外,虹彩光圈的调节也十分重要. （1）低倍镜观察 观察任何标本时,都必须先使用低倍镜,因为其视野大,易发现目标和确定要观察的部位. （2）高倍镜观察 从低倍镜转至高倍时,只需略微调动细调焦旋钮,即可使物像清晰. 使用高倍镜时切勿使用粗调焦旋钮,否则易压碎盖玻片并损伤镜头. 转动物镜转换器时,不可用手指直接推转物镜,这样容易使物镜的光轴发生偏斜,转换器螺纹受力不均匀而破坏,最后导致转换器就会报废.

高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项

高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项 一、操作步骤： 1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能） 注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。 2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。 3.排气结束后，关闭所有排气阀。先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。 注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同） 4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。 二、使用中常见的问题及注意事项 1.过滤时有时会出现流动相漏液。可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。 注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。 2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。

金相显微镜使用注意事项

金相显微镜使用注意事项 金相显微镜使用注意事项： （1）操作时必须特别谨慎，不能有任何剧烈的动作。不允许自行拆卸光学系统。 （2）严禁用手指直接接触显微镜镜头的玻璃部分和试样磨面。若镜头上落有灰尘，会影响显微镜的清晰度与分辨率。此时，应先用洗耳球吹去灰尘和砂粒，再用镜头纸或毛刷轻轻擦拭，以免直接擦试时划花镜头玻璃，影响使用效果。 （3）切勿将显微镜的灯泡（6~8V）插头直接插在220V的电源插座上，应当插在变压器上，否则会立即烧坏灯泡。观察结束后应及时关闭电源。 （4）在旋转粗调（或微调）手轮时动作要慢，碰到某种阻碍时应立即停止操作，报告指导教师查找原因，不得用力强行转动，否则会损坏机件。 3.金相显微镜仪器维护 为了使仪器在正常使用条件下，保持它的有效性能，除了必须使用恰当外，还必须注意加强维护保养，现就维护保养问题提出下列几点要求（仅供参考）。 （1）仪器应贮放在空气流通和较干燥的地方，避免过冷过热和接触腐蚀性气体，不能与化学用品（干燥剂除外）同时贮放于同一地方。使用后宜用罩子遮盖并抹擦干净。不用时,要及时移走试样（玻片），用擦镜纸擦拭镜头，并将镜头转成八字式，同时下降镜筒固定，以免物镜镜头与集光器上的透镜相击而受损。再将显微镜装放入木箱内，放置在干燥、通风处。在可能条件下，最好每隔一定的时间，选择天气好的日子，将仪器和附件从木箱中取出，一起在室内宽敞、干燥、空气流通的地方，作两、三小时的室内晾曝。在高温天气作业完毕后，应注意贮放地点的温度，如温差悬殊，用毕后即收藏会在仪器上面产生湿气，容易使仪器发潮损坏。 （2）使用后应给目镜斜管盖上防尘盖子，如没有防尘盖子亦应套上目镜，以免灰尘落入斜管内，影响镜座光具的清洁。 （3）不宜随便拆卸和揩抹光学系统内部的半反射镜。除此之外，在透镜或玻璃表面不慎接触油污尘垢，可用细洁亚麻布或洁净脱脂棉花，沾少许二甲苯拭除（但不能用酒精，以免浸入透镜内层影响质量），由镜头中心向外旋转擦拭，并用擦镜纸或软绸布轻轻拭净,否则易于脱胶，或模糊而影响检测效果。如只是沾上灰尘，可用橡皮小吹风球把灰尘吹掉（不可用口吹），或用软毛笔或用细木棒卷上棉花，轻轻擦除之。镜头表面镀有一层兰透光膜，不要误作污物擦拭，禁止用金属工具来代替棉签进行擦拭。 （4）使用油浸系物镜后，必须立即采用上述方法把油垢除去，抹擦干净，抹时千万小心，特别注意不能按压镜面，否则容易使透镜脱离镜座。 （5）仪器长期使用后，粗动滑板部分及载物台滑动部分可能出现油脂不足或干涸现象，此时应及时添加润滑油脂。粗（微）动机构宜用流动性油脂，载物台滑动部分宜用有适当粘度的（但注意不能含有酸性）油脂。

高效液相色谱仪使用中的注意事项

高效液相色谱仪使用中的注意事项 在现代仪器分析中，作为色谱分析的重要分支，高效液相色谱已得到日益广泛的应用。它与气相色谱相比较其基本原理是相同的，因结构和工作方式等特点而具有使用上的特殊性，它是以液体为流动相，不受样品的挥发性和热稳定性的限制，对样品的适应性广，适用于在生物学和医药上有重要意义的大分子、不稳定的天然产物及高分子量化合物、离子型物质的分析。 高效液相色谱仪从结构上大致可分为输液泵、进样器、色谱柱及柱温箱、检测器等单元。储液器中存储的除气载液经过滤后由高压泵输送到色谱柱入口，梯度洗脱时为单（双泵）送液，样品由进样器注入载液系统，送到色谱柱进行分离，分离后的组分由检测器检测，输出信号供给记录或数据处理设备。以下按流动相的流路顺序以等度系统为例分别对各单元加以说明。 一、流动相 液相色谱所用流动相根据分析目的可分为单一或混合流动相，固定相一定时，流动相的种类、配比都严重影响分离效果，最好使用重蒸馏水或HPLC级的有机试剂。依据其所流过单元的特殊性，在使用前必须对其进行过滤和脱气处理。过滤的目的是除去其中微米级的机械杂质，以避免系统污染、磨损和堵塞。脱气则是除去溶解或因混合而产生的气泡，以免引起流量和压力的稳定性及检测器的噪声，最终导致分析数据的重现性变差。应避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂，流动相对试样有适宜的溶解度，本身粘度要小，与所用检测器相匹配。 韦氏滤瓶是目前过滤流动相的最常用工具，常用滤膜有0.22微米和0.45微米，又分为有机系和水系两种，过滤不同的试剂应使用相应的过滤膜。在处理混合流动相时，应先过滤后混合，还要注意操作过程中的防尘。

脱气的方法有多种，综合效果和成本而言，在等度分析中常用超声波清洗器完成一般脱气,脱气后的流动相在使用前应注意密封和温度的平衡。严格讲应使用在线脱气装置，有膜脱气和氦气脱气两种。流动相应在使用前进行过滤和脱气处理。试样也必须过滤，可用一次性针头式过滤器完成。 废液的处理应注意污染问题，可采用燃烧或掩埋等方法。 二、溶剂输送泵 因固定相粒度细，流动相具有一定的粘度，必须借助高压泵强使流动相以一定的速度通过柱子。泵的性能直接影响分析过程的稳定性和结果的精密度，它将单一或混合流动相依据分析目的不同以恒流、恒压或等（变）梯度的方式送入系统中。梯度洗脱是在分离过程中让含有两种或两种以上溶剂组成的流动相按一定程序连续变化，产生相应的浓度梯度、极性梯度、离子梯度和PH值梯度，可改善分离、加快分析速度、提高柱效，有利于痕量组分的检测，保持柱性能长期良好，但不同溶剂的紫外吸收程度稍有差异，能引起基线漂移。泵的结构以串联双柱塞和微体积双柱塞为主，使用脉动阻尼器可减少流量的脉动，可用0.1mmX2m不锈钢管作阻尼管。其液腔体积小，易清洗和更换溶剂。 在使用中注意色谱柱所能承受的最高压力，不得超过其上限。使用缓冲盐作流动相时，分析完成后立即用不含盐流动相或处理后的重蒸馏水冲洗泵单元及整个系统，防止盐结晶析出而加速系统磨损造成的漏夜和系统的堵塞。 送液前应注意使用排液（开关）阀排出泵前的气泡或旧流动相。在使用中若不断有气泡被吸入，检查吸滤器与管路及管路与泵入口处是否漏气，否则拆洗或更换吸滤器。 三、进样系统 因工作在压力较高的状态下，常用手动高压六通进样阀完成进样，如：7725i，标准配置为20微升定量环。废液瓶中排液管出口应水平于进样口的针

绝缘工具的介绍及使用注意事项

前言 1绝缘的概念 绝缘是指用绝缘材料把带电体封闭起来，借以隔离带电体或不同电位的导体，使电流能按一定的通路流通。 2绝缘的必要性 良好的绝缘是保证设备和线路正常运行的必要条件，也是防止触电事故的重要措施。 3绝缘材料的作用 绝缘材料还起着其他作用：散热冷却、机械支撑和固定、储能、灭弧、防潮、防霉以及保护导体等。 4绝缘工具的概念及分类 4.1绝缘工具是采用绝缘材料进行加工并适用于电气管理中的使用工具。 4.2绝缘工具分为基本安全绝缘工具和辅助安全绝缘工具。 5基本安全绝缘工具 基本安全绝缘工具是指绝缘强度足以承受电气运用电压的安全用具，如绝缘棒、绝缘夹钳、绝缘台（梯）。 6辅助安全绝缘工具 辅助绝缘工具是指不足以承受电气运行电压，在电气作业中，配合基本安全用具（如绝缘手套、绝缘垫、绝缘鞋等）不可以接触带电部分。

绝缘棒 1定义 绝缘棒又称令克棒、绝缘拉杆、操作杆等，属于基本安全用具。2构成 绝缘棒由工作头、绝缘杆和握柄三部分构成。 3适用范围 绝缘棒主要用在闭合或拉开高压隔离开关，装拆携带式接地线，以及进行测量和试验时使用。 4样式 5绝缘棒的操作要求 5.1为保证操作时有足够的绝缘安全距离，绝缘操作杆的绝缘部分长度不得小于0.7m。 5.2要求它的材料要耐压强度高、耐腐蚀、耐潮湿、机械强度大、质轻、便于携带，一个人能够单独操作。

5.3三节之间的连接应牢固可靠，不得在操作中脱落。 6绝缘棒的使用注意事项 6.1使用前必须对绝缘操作杆进行外观的检查，外观上不能有裂纹、划痕等外部损伤。 6.2必须是经校验后合格的，不合格的严禁使用。 6.3必须适用于操作设备的电压等级，且核对无误后才能使用； 6.4雨雪天气必须在室外进行操作的要使用带防雨雪罩的特殊绝缘操作杆。 6.5操作时在连接绝缘操作杆的节与节的丝扣时要离开地面，不可将杆体置于地面上进行，以防杂草、土进入丝扣中或粘缚在杆体的外表上，丝扣要轻轻拧紧，不可将丝扣未拧紧即使用。 6.6使用时要尽量减少对杆体的弯曲力，以防损坏杆体。 6.7使用后要及时将杆体表面的污迹擦拭干净，并把各节分解后装入一个专用的工具袋内，存放在屋内通风良好、清洁干燥的支架上或悬挂起来，尽量不要靠近墙壁，以防受潮，破坏其绝缘。 6.8对绝缘操作杆要有专人保管。 6.9半年要对绝缘操作杆进行一次交流耐压试验，不合格的要立即报废，不可降低其标准使用。

显微镜操作步骤和注意事项

显微镜操作步骤和注意 事项 集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-

操作步骤和注意事项 （一）正置显微镜 1、安放 右手握住镜臂,左手托住镜座,使镜体保持直立.桌面要清洁、平稳,要选择临窗或光线充足的地方.单筒的一般放在左侧,距离桌边3～4厘米处. 2、清洁 检查显微镜是否有毛病,是否清洁,镜身机械部分可用干净软布擦拭.透镜要用擦镜纸擦拭,如有胶或粘污,可用少量二甲苯清洁之. 3、对光 镜筒升至距载物台1～2厘米处,低倍镜对准通光孔.调节光圈和反光镜,光线强时用平面镜,光线弱时用凹面镜,反光镜要用双手转动. 若使用的为带有光源的显微镜,可省去次步骤,但需要调节光亮度的旋钮. 4、安装标本 将玻片放在载物台上,注意有盖玻片的一面一定朝上.用弹簧夹将玻片固定,转动平台移动器的旋钮,使要观察的材料对准通光孔中央. 5、调焦 调焦时,先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒,并从侧面仔细观察,直到物镜贴近玻片标本,然后左眼自目镜观察,左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒,直到看清标本物像时停止,再用细调焦旋钮回调清晰. 操作注意：不应在高倍镜下直接调焦；镜筒下降时,应从侧面观察镜筒和标本间的间距；要了解物距的临界值.

若使用双筒显微镜,如观察者双眼视度有差异,可靠视度调节圈调节.另外双筒可相对平移以适应操作者两眼间距. 6、观察 若使用单筒显微镜,两眼自然张开,左眼观察标本,右眼观察记录及绘图,同时左手调节焦距,使物象清晰并移动标本视野.右手记录、绘图. 镜检时应将标本按一定方向移动视野,直至整个标本观察完毕,以便不漏检,不重复. 光强的调节：一般情况下,染色标本光线宜强,无色或未染色标本光线宜弱；低倍镜观察光线宜弱,高倍镜观察光线宜强.除调节反光镜或光源灯以外,虹彩光圈的调节也十分重要. （1）低倍镜观察 观察任何标本时,都必须先使用低倍镜,因为其视野大,易发现目标和确定要观察的部位. （2）高倍镜观察 从低倍镜转至高倍时,只需略微调动细调焦旋钮,即可使物像清晰. 使用高倍镜时切勿使用粗调焦旋钮,否则易压碎盖玻片并损伤镜头. 转动物镜转换器时,不可用手指直接推转物镜,这样容易使物镜的光轴发生偏斜,转换器螺纹受力不均匀而破坏,最后导致转换器就会报废. （3）油镜的观察 先用低倍镜及高倍镜将被检物体移至视野中央后,再换油镜观察.油镜观察前,应将显微镜亮度调整至最亮,光圈完全打开.

岛津液相色谱使用方法和注意事项

【转帖】岛津液相色谱仪注意事项 岛津液相色谱仪注意事项 1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。 9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。 11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。 高效液相色谱常见故障的断定及解决 可能的原因及解决方法 (一)保留时间变化 1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱 2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液 4.柱污染每天冲洗柱 5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相 6.柱快达到寿命采用保护柱 (二)保留时间缩短 1.流速增加检查泵,重新设定流速 2.样品超载降低样品量 3.键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀 5.温度增加柱恒温 (三)保留时间延长 1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱 3.键合相流失同前(二)3 4.流动相组成变化同前(二)4 5.温度降低同前(二)5 (四) 出现肩峰或分* 1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂

液相色谱进阶讲座之梯度洗脱

主题：液相色谱进阶讲座之梯度洗脱 简介：通过实例详细介绍“梯度洗脱”的意义、应用领域、操作方法以及优化，相信能够使广大网友的液相色谱 技术有一些崭新的提高 欢迎参与交流和讨论 梯度洗脱gradient elution 1 简介 通常情况下，液相色谱操作中的流动相组成和比例是恒定的，这种洗脱化合物的方式被称为等度洗脱；但是为了改善分析结果，某些操作需要连续改变流动相中各溶剂组分的比例以连续改变流动相的极性，使每个分析组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离，这种洗脱方式称为梯度洗脱。 2 梯度洗脱的应用 梯度洗脱可在下列情形中发挥重要作用： A 在等度下具有较宽k值的多种样品分析。 B 大分子样品分析。 C 样品含有强保留的干扰物，在目标化合物出峰后设置梯度洗脱，将干扰物洗脱出来，以免其影响下一次分析。 D 单组份化合物方法建立时，不知道其洗脱情况，使用梯度洗脱，找出其较优的洗脱条件。 (1)多组分分析时，这些组分往往具有很宽的k值范围。假如使用等度洗脱，这些化合物的k值无法同时落在1~10之间，结果就是，无法同时得到较好的分离度、较短的分离时间、较高的响应值。 图T1、T2、T3是笔者不同条件下分析邻苯二甲酸酯类化合物得到的色谱图。 图T1 (等度，流动相：80%乙腈水溶液) 图T2 (等度，流动相：100%乙腈)

图T3 (梯度，0-5 min，乙腈由70%上升到90%，5-10 min乙腈由90%上升到100%，10-18min，乙腈100%) 其他色谱条件： 色谱柱：Diamonsil C18(2)，250*4.6 mm，5 μm 流速：1.0 ml/min 检测器：UV254 nm