细菌培养采样方法

供应室工作环境监测

各类环境空气、物体表面、医务人员手细菌菌落总数卫生学标准如下：

消毒液的采样及检查方法

采样方法：用无菌吸管吸取使用中的消毒液1ML，置于备好的试管内及时送检，送检时间不超过4时，必要时试管中加中和剂。

采样前准备：洗手，手套，口罩，无菌吸管，试管，酒精灯，打火机，无菌剪刀

浸泡使用的消毒液细菌培养：用于灭菌的消毒液没有检出任何微生物为合格；用于消毒物品的消毒液其染菌量﹤100cfu/ml.未检出致病菌或细菌生长均为合格;

空气采样及检查方法

检查原则：每个月一次，空气消毒结束后进行，一般不超过消毒后4小时，采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超

过4h。未检出致病菌为合格，不得检出乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等其它致病菌，不得超过规定区域所执行的标准参数；

空气采样及检查方法：

采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样；

采祥高度：与地面垂直高度80－150cm；

布点方法：室内面积≤30M2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m处各取一点;室内面积>30m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m，注意采样时不走回头路，不得逆行；

采样方法：用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。

采样前准备：洗手，戴口罩，培养皿（看采样面积大小准备）；

物体表面采样及检查方法

采样时间：选择消毒处理后4小时内进行采样；

采样面积：被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2；

采样方法：用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭子。连续采样1-4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。不规则样物品如门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。

采样前准备：试管，酒精灯，无菌生理盐水，棉拭子，打火机，无菌剪刀，手套，口罩，无菌规格板

医护人员手采样及检查方法

采样时间：在接触病人、从事医疗活动前进行采样。

采样面积及方法：被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm2〕，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位；将棉试子放入装有10ml采样液的试管内这位。采样面积按平方厘米（cm2）计算。采样前准备：试管，酒精灯，无菌生理盐水，棉拭子，打火机，无菌剪刀，手套，口罩

灭菌后无菌物品采样及检查方法

在无菌操作下按物体表面采样方法采样，放入肉汤试管中培养；

将嗜热脂脉杆菌片放于用专用毛巾制成的测试包中，打包成规格为23*23*15大小的标准测试包中，放于排汽口上方，经过一个灭菌周期后，在无菌操作下取出嗜热脂肪杆菌片放于培养皿中，经过48小时56℃培养箱培养后观察结果。

物品准备：培养皿，二把无齿镊

细菌培养采样方法

供应室工作环境监测 各类环境空气、物体表面、医务人员手细菌菌落总数卫生学标准如下： 消毒液的采样及检查方法 采样方法：用无菌吸管吸取使用中的消毒液1ML，置于备好的试管内及时送检，送检时间不超过4时，必要时试管中加中和剂。 采样前准备：洗手，手套，口罩，无菌吸管，试管，酒精灯，打火机，无菌剪刀浸泡使用的消毒液细菌培养：用于灭菌的消毒液没有检出任何微生物为合格；用于消毒物品的消毒液其染菌量﹤100cfu/ml.未检出致病菌或细菌生长均为合格; 空气采样及检查方法 检查原则：每个月一次，空气消毒结束后进行，一般不超过消毒后4小时，采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h。未检出致病菌为合格，不得检出乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等其它致病菌，不得超过规定区域所执行的标准参数；

空气采样及检查方法： 采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样； 采祥高度：与地面垂直高度80－150cm； 布点方法?：室内面积≤30M2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m 处各取一点;室内面积>30m2，设东、西、南、北、中 5点，其中东、西、南、北点均距墙1m，注意采样时不走回头路，不得逆行； 采样方法：用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。 采样前准备：洗手，戴口罩，培养皿（看采样面积大小准备）； 物体表面采样及检查方法 采样时间：选择消毒处理后4小时内进行采样； 采样面积：被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2； 采样方法：用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭子。连续采样1-4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。不规则样物品如门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。 采样前准备：试管，酒精灯，无菌生理盐水，棉拭子，打火机，无菌剪刀，手套，口罩，无菌规格板 医护人员手采样及检查方法 采样时间：在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 采样面积及方法?：被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm2〕，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位；将棉试子放入装有10ml采样液的试管内这位。采样面积按平方厘米（cm2）计算。 采样前准备：试管，酒精灯，无菌生理盐水，棉拭子，打火机，无菌剪刀，手套，口罩

细菌室标本采集及保存要求

细菌室标本采集及保存要求 1、总则：用于细菌培养的标本在收集时应注意严格无菌操作和及时送检，检测后标本应妥善保存。 2、临床标本的采集 2.1、下呼吸道分泌物（痰液） 令患者早上起床后用清水澈口，不要刷牙，立即从下部呼吸道咳出第一口痰，吐在无菌塑料痰盒中， 及时送检。 2.2、尿液（中段尿） 护理人员协助采取中段尿约3ml入无菌塑料盒中，及时送检。 2.3、粪便 取有粘液、脓血部分的粪便置无菌塑料盒中及时送检。 2.4、眼、耳、鼻、喉拭子 将棉拭子沾取少许无菌生理盐水（如沾取的太多，可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒悬于无菌塑料盒中，及时送检。 2.5、脓液 用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液，要尽量多取

一些，然后将棉拭置于无菌塑料盒中，及时送检。 2.6、血液 261、凡怀疑菌血症和败血病的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素, 应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，应在病人 第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。当然在病人 发热或寒颤时采集也可。 262、成人每次采血5?10ml,小儿采血3?5ml。 2.6.3、严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。 264、从抽血到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固，同时要及时送检。 2.7、穿刺液 胸腹水、心包液、关节腔液、鞘膜积液，严格无菌抽取后，注入含肝素抗凝的无菌试管中，轻轻颠倒试管10余次，使肝素与穿刺液混匀达到抗凝的目的, 或直接无菌注入血培养瓶内及时送检。 2.8、胆汁 由专科医生以无菌方法取引流液10ml注入无菌塑料盒内。 2.9、脑脊液

检验标本采集规范

检验标本采集规范 一、常规标本采集规范 （一）静脉血标本采集规范 1．真空采血标本对应真空管 真空管项目备注 血培养瓶血培养 儿童1-2ml 成人8-10ml 枸橼酸抗凝管（1：9抗凝）（蓝帽） 凝血全项 （PT、APTT、FIB、TT、D-D、FDP、 AT3） 标本采集2ml （不能多不能少） 枸橼酸抗凝管 （1：4）抗凝（黑色）血沉 至刻度线 （不能多不能少） 促凝剂管（黄帽）生化全项、肝功能、肾功能、血糖、血 脂、心肌酶、电解质、RF、ASO、血 清铁、血清同型半胱氨酸、淀粉酶 标本采集量4-5ml 促凝剂管 （黄帽） 肌钙蛋白I、人绒毛膜促性腺激素标本采集量4-5ml 无添加剂管 （红帽） 乙肝三系、病毒四项标本采集量4-5ml 无添加剂管甲状腺激素五项，雌激素五项，甲胎蛋标本采集量4-5ml

（红帽）白、癌胚抗原、CA125、CA19-9、CA15-3 总前列腺特异性抗原 无添加剂管 （红帽） 结核抗体、肺炎支原体标本采集量4-5ml 无添加剂管 （红帽） PCR 标本采集量4-5ml EDTA-2K 抗凝管（红帽）血常规、血型、CRP 标本采集量2ml 可以使用同一管 血 网织红细胞计数 外周血涂片 糖化血红蛋白标本采集量2ml 交叉配血标本采集量2ml 2．理想的采集血标本的时间是早晨7∶00～8∶00。 3．采血部位和数量成人首选肘部血管：正中静脉、贵要静脉、头静脉等，婴幼儿可采用大隐静脉、颈外静脉、股静脉等。 4．采血顺序 为血培养管→凝血项目管（蓝帽）→血沉管（黑帽）→促凝剂管（黄帽）→无添加剂管（红帽）→EDTA管（紫帽） 5．在实际工作中，如患者静脉条件较差，有可能采血不足，血培养优先考虑需氧瓶，其他管应首先考虑凝血（蓝帽）和血沉（黑帽）检测管，因为这2种标本对血量要求最严格，且二者抗凝剂均为枸橼酸钠。 6．检验申请条码贴在采血管上时，请注意不要将采血管完全包裹，应留出空白，以便观察液面高和血液状态，若未打印条码，请将采血管上的

微生物标本采集 送检及处理原则

微生物标本采集、送检及处理原则 一、标本采集的一般原则： 1、病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素前。 2、无菌采集应无污染，严格进行无菌操作。 3、根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本，采集量不应过少。 4、注意在不同病程采集不同部位标本。 5、采集标本时要防止传播和自身感染。 二、标本的处理： 1、标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。 2、标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。 3、厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。 Ⅰ血液及骨髓标本： 血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤

寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。 1、采血时间及次数 2、抽血部位及抽血量 3、报告方式：培养5d无菌生长者报告“培养5d无菌生长”。 查见细菌报告菌名和药敏结果。 4、菌血症、败血症的诊断标准：1）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）； 2）发病星期后血中抗体滴度上升。 Ⅱ脑脊液标本： 脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有重要价值。正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。 常见的病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、链球菌（A、B群和肺炎链球菌）、葡萄球菌、产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌等。 1、涂片检查： (1) 一般细菌涂片检查：例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。 (2)结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查

常用标本采集方法

血培养标本采集、运送与报告标准操作规程 一、血培养指征 患者出现寒战，体温超过38℃或低体温，怀疑血流感染时，尤其存在以下情况时，应抽血做细菌和真菌培养：医院内肺炎；留置中心静脉导管超过72 h；感染性心内膜炎；骨髓炎；有严重基础疾病、免疫缺陷伴全身感染症状；临床医生怀疑有血流感染可能的其他情况。 二、采血时机 一旦怀疑有血流感染可能，应立即采血做血培养，最好在抗菌治疗前或停用抗菌药物24 h后，以寒战、发热时采集为宜。 三、采血流程 （一）消毒 1．培养瓶消毒程序：用消毒液消毒培养瓶橡皮塞，待干燥后使用。 2．皮肤消毒程序：用消毒液从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达5 cm 以上，待消毒液挥发干燥后（常需30 s以上）穿刺采血。 （二）静脉穿刺和培养瓶接种 成人用注射器无菌穿刺取血后，排尽针头内空气，直接注入血培养瓶，勿换针头（如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，应换针头），先注于厌氧培养瓶，避免注入空气，然后注入需氧培养瓶，轻轻混匀以防血液凝固。近年来，临床普遍采用负压血培养瓶，将血从患者静脉直接吸入血培养瓶，减少污染环节。 （三）注意事项 1．检验单需注明抗菌药物使用情况、血液采集时间和部位、临床诊断等患者信息。 2．采血部位通常为肘静脉，疑为细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采血。除非怀疑有导管相关的血流感染，否则不应从留置静脉或动脉导管取血，因为导管易被皮肤正常菌群污染。 3．采血次数：对于成年患者，应该同时分别在两个部位采集血标本，在两个不同部位分离到同样菌种才能确定是病原菌。 4．细菌性心内膜炎：在24 h内取血3次，每次间隔不少于30 min;必要时次日再做血培养2次。 5．采血量：以培养基与血液之比10：1为宜，以稀释血液中的抗菌药物、

空气细菌培养的采样方法

1空气的采样方法检测空气的培养法平板暴露法。此法简便，目前大部分医疗单位采用。在处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。基本原理是：空气中细菌等可随尘粒一起下降，在室内各采样点处放好平板，采样高度距地面～，采样时，将平板盖打开，暴露5min或10min，盖好平板。将平板置于37℃培养48h计算菌落数。2细菌数的细菌总数（c f u/m3=4500N/A×T）式中A=平板面积（cm2） T——平板暴露时间（min） N——平均菌落数（cfu） 这个计算公式是根据在面积100cm3的表面，5min落下的细菌相当于10L空气中含的细菌数而推算出来的。 3效果和污染状况的评价

空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用GB15982——1995规定：Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域细菌总数≤500c f u/m3并且未检出致病菌为消毒合格。 Ⅰ类环境包括层流和层流洁净病房只能采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。Ⅱ类环境包括普通、产房、婴儿室、室、普通室、、烧伤病房、病房、采用循环风或式空气消毒器，这类均为有人房间，必须采用对人无毒无害且可连续消毒才能使空气中的微生物减到此标准以下。Ⅲ类环境包括儿科病房、检查室、、换药室、、供应室、、、各类普通病房室和房间，采用，或喷雾消毒。 据统计，目前世界上有41种主要，其中经空气传播的就有14种，占首位［1］。空气是疾病的主要传播媒介，而儿科门诊输液室是患儿及家长聚集的地方，的好坏，不仅对患儿的影响很大，也同时给家长的健康带来威胁。这已成为重要的，也对提出严峻的考验。调查表明，空气中浮离菌数在700 cfu/m3~1 800 cfu/m3时，就有发生感染的危险性，而如果细菌总数不足180 cfu/m3时，则这种危险性似乎很小［2］。本次研究发现使用2 h后的输液室空气细菌总数平均为748 cfu/m3，并随着时间的推移，细菌总数逐步上升，在使用4 h后的细菌总数平均值达到1 785 cfu/m3。这样的环境都有可能导致疾病通过空气传播。儿科门诊患者大多是急性或，在患者咳出的、痰液及分泌物中含有多种致病菌，同时每个患儿通常都有家长陪护，导致空气细菌含量较高。因为患儿本身较低，所以儿科输液室空气质量的好坏更能影响患儿疾病的转归，这一点应该引起高度重视。本次研究发现，儿科门诊输液室空气消毒后效果监测，符合标准，而且指数较低，输液患者后细菌数逐渐上升，2 h、4 h均超标，因此，儿科门诊输液室在人员流动的情况下，无法持续进行，仅靠一天两次的紫外线消毒是不能保证空气质量。降低菌落数的效果较持久。自然通风通过换气持续30 min，可以显着减少空气中的含量，降低室内CO及废气的浓度。每天累计通风2 h~3 h，能持久降低中的菌落数。有报道通风流出和进入的空气达到本房间容积时为换气1次，可清除原细菌数的%，所以通风是最简单的消毒方法［3］。另外，也应注意及时关闭,保持已清洁消毒后的室内净化效果。通过对空气中菌落的初步鉴定发现主要以革兰阳性菌为主，其中葡萄球菌、微球菌、奈瑟

院感细菌培养操作

1.目的: 医院是病原微生物较集中,抵抗力低的人群密集的地方,加之化疗、放疗等手段的采用，影响病人免疫机能下降，大量使用抗生素，引起耐药菌株增多，菌群失调，以及先进医疗仪器广泛应用等原因，增加消毒灭菌的难度，致使院内感染已成为当前医疗实践的严重障碍，直接影响医疗效果。进一步规范院内感染监测标本的程序，更好、更快检测病原微生物的生长情况，预防医院感染的发生。 2.设备、试剂与材料 VITEK 2 compact鉴定药敏分析系统 VITEK 32鉴定药敏分析系统 美国FORMAⅡ级生物安全柜 显微镜 酒精灯 接种环 恒温培养箱 各种培养基 革兰氏染色液 触酶试剂 氧化酶试剂 移液器 无菌吸嘴 3.院感标本采集 3．1空气的采样 3．1．1采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。 3．1．2采样高度与地面垂直高度80-150CM。 3．1．3布点方法室内面积＜30m2，设一条对角线上取三点，即中心一点，两端各距墙1m 处各取一点；室内面积＞30m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。 3．1．4采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检。

3．2．1采样时间选择消毒处理后4小时内进行采样。 3．2．2采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面＞100cm2，则取100cm2。3．2．3采样方法用5×5 cm2的标准来灭菌规格板，放在被检物体表面，用无菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1-4个规格板面积，剪支手接触部位，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。3．3医护人员手采样 3．3．1采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 3．3．2采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一枝在双手指曲面从指跟到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30 cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米（cm2）计算。 3．4医疗用品采样 3．4．1采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。 3．4．2采样方法右用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器和注射针等，取其中的一部分放培养液中培养。对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。 3．5使用中消毒剂的采集 3．5．1采样时间采取使用中的消毒剂。 3．5．2采样方法在无菌条件下，用无菌注射器抽取1ml被检样品，加入10ml稀释液混匀。（对于醇类与酚类消毒剂稀释液用灭菌生长盐水；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入%硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%（w/v）吐温80和%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%（w/v）吐温80，以中和被检样液的残效作用。）

护理7种常用标本采集

护理7种常用标本采集 正确的检验结果对疾病的诊断、治疗和预后判断具有非常重要的意义,而正确的检验结果与正确采集标本关系密切。作为标本采集者，护士应了解各种检验的目的，掌握正确采集标本的方法，采集过程中严格执行查对制度、遵守无菌技术操作原则及标准预防措施，以保证检验结果的准确性。 一、血标本采集 （一）评估和观察要点。 1.评估患者病情、意识及配合程度，需空腹取血者了解是否空腹。 2.评估穿刺部位皮肤、血管状况和肢体活动度。 （二）操作要点。 1.真空采血法：根据标本类型选择合适的真空采血管，将采血针与持针套连接，按无菌技术操作规程进行穿刺，见回血后，按顺序依次插入真空采血管。 2.注射器直接穿刺采血法：根据采集血标本的种类准确计算采血量，选择合适的注射器，按无菌技术操作规程进行穿刺。采集完成后，取下注射器针头，根据不同标本所需血量，分别将血标本沿管壁缓慢注入相应的容器内，轻轻混匀，勿用力震荡。 3.经血管通路采血法：外周血管通路仅在置入时可用于采血，短期使用或预期使用时间不超过48h的外周导管可专门用于采血，但不能给药。采血后，血管通路要用足够量的生理盐水冲净导管中的残余血液。（三）指导要点。

1.告知患者血标本采集的目的及配合方法，如需空腹采血应提前告知。 2.告知患者按压穿刺部位及按压时间。 （四）注意事项。 1.在安静状态下采集血标本。 2.若患者正在进行输液治疗，应从非输液侧肢体采集。 3.同时采集多种血标本时，根据采血管说明书要求依次采集血标本。 4.采血时尽可能缩短止血带的结扎时间。 5.标本采集后尽快送检，送检过程中避免过度震荡。 二、血培养标本采集 （一）评估和观察要点。 1.评估病情、治疗、心理状态及配合程度。 2.了解寒颤或发热的高峰时间。 3.了解抗生素使用情况。 4.评估穿刺部位皮肤、血管状况和肢体活动度。 （二）操作要点。 1.注射器直接穿刺采血法（同血标本采集）。 2.经血管通路采血法（同血标本采集）。 3.经外周穿刺的中心静脉导管取血法：取1支注射器抽生理盐水20ml 备用，另备2支注射器。取下肝素帽，连接1支空注射器，抽出5ml 血液弃去；如正在静脉输液中，先停止输液20s，再抽出5ml血液弃去。另接1支注射器抽取足量血标本。然后以生理盐水20ml用注射器以脉冲式冲洗导管。消毒导管接口，清除残留血迹。连接肝素帽或

临床细菌检验标本的采集、运送、保存和处理

临床细菌检验标本的采集、运送、保存和处理 正确的标本采集、运送、保存和处理对于保证临床细菌室的工作质量非常重要，应予高度重视。实验室有责任将标本选择（包括时间和解剖部位）、收集、保管、运送、接受和安全等 关键性信息，用户里手册的形式提供给各临床部门参考。 一、标本管理的安全警示 1．所有标本的采集、运送和处理应在无菌操作，防止污染的原则下认真进行。 2．已采集原始标本都应置于防漏、密封的无菌容器中运送。 3．带针头的注射器运送标本时用无菌试管或防护装置套住注射针，再置于防漏塑料袋中运送至检验科。 4．采集足够量标本，材料不足可能导致假阴性。 5．每份标本都应标记患者姓名、送检号码、标本来源、具体部位、日期、时间及相关临床信息。 6．常规性细菌学检验的标本，采集后不能超过１小时送至检验科，4℃保存也不能超过24小时，怀疑厌氧菌感染的标本应在半小时内送至检验科（不能及时运送组织标本必须在 厌氧环境中25℃不超过24小时）。 7．脑脊髓液、生殖道、眼睛、内耳标本应立即送检，绝不可冷藏。 二、标本的处理和要求 1．血液和骨髓： 1）急性脑膜炎、骨髓炎、关节炎、细菌性肺炎、肾盂肾炎发热患者，应在抗生素治疗或更换前，从不同部位采集血液标本，做2次血液培养，分别接种于各种培养瓶中 立即送检置于孵箱内培养 2）疑似心内膜炎患者：急性病例在抗生素治疗或更换前1—2小时，从不同部位采集血液标本，做3次血液培养 3）亚急性病例：第一天24小时内，相隔1小时连续采集3次血液做培养，若24—48小时全部阴性，再采集2—3次血液做培养 4）若已经抗生素治疗患者，连续3天，每天取2次血液做培养 5）严格无菌技术采集血液血培养瓶后立即送检，切不可放冰箱暂存。 2．脑脊液： 脑脊液采集后，置于无菌试管中，15分钟内送检，绝不可冷藏。每种检验最小需 要量：细菌培养≥1ml,真菌≥2ml,抗酸杆菌≥2ml. 3．尿液： 1）中段尿采集：清洁外阴及尿道口周围，自然排尿，让尿流不间断，截留中段尿，，置于无菌尿杯中立即送检。尿量不少于1ml. 2）直接插导管采尿：一般插入导管后先让尿流弃15ml再留取培养标本。尽量不采用此法，极易将尿道细菌丛进入膀胱增加医源性感染危险。 3）滞留导管采集尿：用75%酒精消毒导管口，用针筒抽取5—10ml尿置于无菌容器中立即送检，滞留导管会使膀胱带有细菌，尽可能不采用。 4）尿液采集后2小时内必须送检，立即处理。规定每日一次。 5）若同一份标本检到3种以上不同细菌则认为标本污染。一般认为革兰氏阴性杆菌菌落计数大于105cfu/ml,革兰氏阳性球菌菌落计数大于104cfu/ml,方有诊断意义。 4．痰液： 1）先用冷开水漱口清洗咽喉，用力咳出痰液置于无菌容器中立即送检，2小时内接种。 2）符合要求的痰液应在低倍镜视野中鳞状上皮≤10个，白细胞≥25个。

细菌培养技术

第二节细菌培养检测技术 节概述 细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。大多数细菌均可用人工方法培养，只有将细菌培养出来才能对它进行研究和鉴定 知识点导航 一.培养基的种类 培养基（culture medium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养基 能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、选 择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。 （一）基础培养基 只含有细菌生长所需的最基本营养成分，应用最广泛，为制备多种培养基的基础，常见的有肉 汤培养基、琼脂培养基。 （二）营养培养基 在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细 菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。 （三）选择培养基 利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的 培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别 。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。 （四）鉴别培养基 培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴 别和鉴定细菌。 （五）厌氧菌用培养基 专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。 （六）特殊培养基 为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良Kagan氏培养基等。 二.培养基的制备 制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整pH、过滤、分装、灭菌及检定和 保存。 三.细菌检验室的注意事项及无菌技术

病原微生物标本采集 运送

病原微生物检验标本采集、运送操作规程正确的标本采集，运送，保存和处理对于微生物检验工作质量至关重要，为了准确检出病原菌，避免漏检与误诊，临床医护人员和实验室工作人员应掌握微生物标本的选择，采集，运送，保存及处理的一般原则。 一、标本采集的一般原则 1.早期采集 采集时间最好在病程早期，急性期，且必须在使用抗菌药物之前采集，确保病原菌的检出。 2.无菌操作 采集标本时应尽量减少或避免感染部位附近或皮肤黏膜正常菌群的污染，使病原菌与正常菌群混淆，造成临床误诊。采集的标本应存放在无菌容器内，容器不能使用消毒剂处理，标本中也不能添加防腐剂，以免降低病原菌的检出。 3.适量的标本 标本量过少可能导致假阴性结果。 4.适当的采集方法 对于厌氧菌，需氧菌或兼性厌氧菌的采集方法是不同的，用于厌氧菌培养的标本应尽量用注射器采集抽取物，室温保存，不能冷藏和冷冻。 5.盛放标本的容器 采集标本应存放在无菌，防漏，应带有螺旋盖的容器内。 二、标本的运送 1.标本采集后立即送检，若有延迟也应在2小时内送到实验室，否则会影响病原菌的检出，一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。 2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。 三、不同标本的采集，运送

（一）血液标本采集，运送 1.血培养指针征 当患者出现：发热（大于38度）或低温（小于36度），寒战，白细胞增多,皮肤黏膜出血，休克，多器官衰竭，血压降低，c反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，具备上述一种或几种体征时，临床怀疑菌血症应采集血液标本进行血培养，对入院危重感染患者应在未使用抗菌药物治疗前，及时做血培养。 2.对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集２套以上血培养标本。成年患者：推荐同时采集２－３套（不同部位）血培养标本（即双瓶双臂同时采集血培养标本），采血量每瓶不少于5ml;婴幼儿患者：推荐同时采集２次（不同部位）血培养标本,采血量每瓶不少于2ml。（少于病人总血容量的1%）.在采取血培养后的2—5天内，无需重复采取血培养。两个例外：细菌性心内膜炎和金黄色葡萄球菌菌血症。 3.血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。 检出率与采血量成比例增长，每增加1ml的血液，病原菌的检出率就会相应增加。儿童患者血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。采用一对（需氧瓶+厌氧瓶）组合，比采用二个需氧瓶的组合可检出更多的葡萄球菌、肠杆菌科细菌和厌氧菌。采血量不能满足推荐的量时，应首先满足需氧瓶的需要。 推荐从外周静脉采集血液标本,不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性结果的判读。 4.血标本采集的注意事项 在采血之前，血培养瓶的橡皮塞需使用75%酒精消毒并干燥。然后再进行穿刺部位的皮肤消毒。严格按照“酒精、含碘消毒剂、酒精”的消毒步骤操作，并等待足够的消毒时间。严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套.不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头;采集后的血培养瓶应在1小时之内送往实验室,血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏或冷冻。 (二)痰培养标本采集，运送 1.痰培养指征

临床标本细菌培养鉴定常见的个疑问

临床标本细菌培养鉴定常见的个疑问

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问题1:如何正确应用药物敏感结果? 正确运用药敏试验结果应考虑以下3个方面: 首先要确定病原菌，如未找到真正的致病菌，药敏实验不但不能指导用药甚至可能误导临床； 重视耐药监测，这是经验用药的一个重要的参考； 考虑到药敏试验的局限性:体外报告敏感的药物体内治疗不一定有效，而体外报告耐药的药物体内治疗不一定无效。 问题２:是否MIC越低的药物越好？ 不一定。因为不同药物对同种细菌，同一药物对不同细菌的折点均可不同，并且若细菌产生某些特殊耐药机制时，即使体外敏感也应报耐药，另外尚需考虑药动学和耐受性。因此，不能单纯比较MIC值而认为ＭＩＣ越低的药物就一定越好。ＭＩC只表示一种药物对某一株细菌抗菌作用的强弱，MIC越低（离中介值越远)说明该药物对相应的病原菌的作用越强。只能比较同一种药对同一株菌，若MIC值升高，可认为其耐药性提高。 问题３：是否所有报告的细菌均为病原菌? 不一定。原因如下: 所报告细菌为污染菌或定植菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关。如为血液等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染,尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。 可能为应用抗菌药后的菌群交替或菌群失调。特别是原为复数菌感染时,针对优势菌治疗一段时间后可能非优势上升为优势菌，或广谱抗菌药治疗后可能

出现真菌感染。 有2种以上病原菌时因生长速度不同、营养要求不同，培养结果不能真实反映病原菌的种类、数量。 问题4:为什么有时痰涂片结果与痰培养结果不一致？ 由于痰标本进行培养和涂片时选取的部位不一致; 某些快生长菌所占比例并不多，但由于生长速度快、营养要求低,能在培养过程中迅速变为优势菌而掩盖其他菌的生长； 标本从采集到接种的时间过长,造成部分苛养菌死亡，在涂片中看到的只是菌的残骸而非活菌。 问题５:我们想用的药物在药敏试验中没有做? 1.天然耐药 ２.可能是药物的敏感性被其他药物所预报 问题6：为什么有的菌报告很多种药物,有的仅报告几种药物? 报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多,而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少。 问题７:是否能将所用的药都做药敏试验? 1．没有必要:通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性 2.没有可能:不是所用药物都可以做药敏试验(需要药物在体外稳定,需要有操作标准和解释标准） 问题8:选择药敏报告敏感的药物,为什么临床治疗无效？ ①体外药敏试验只能预测体内治疗效果,并不等同；一般来说，耐药＝治疗无效;敏感≠治疗有效；

产房细菌培养采样方法

产房细菌培养采样方法 一采样及检查原则 采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h,若样品保存于0 － 40C条件时，送抢时间不得超过24h。 二空气采样及检查方法 采样高度时间 选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。 采祥高度 与地面垂直高度80－150cm。 布点方法 室内面积≤30㎡，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m处各取 一点; 室内面积>30㎡，东、西、南、北、中 5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。 采样方法 用9m直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。 细菌菌落总数检查 产房空气细菌菌落总数≤200cfu/m3

三物体表面采样及检查方法 采样时间 选择消毒处理后4h内进行采样。 采样面积 被采表面<100㎡，取全部表而；被采表面≥100㎡,取100㎡ 采样方法 用5×5㎡的标准灭菌规格板,放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格权内横竖往返各涂抹5次,并随之转动棉拭子，连续采样1—4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。 门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。 细菌菌落总数检查 规定执行。 结果计算 物体表面细菌菌落总数≤5cfu/㎡ 四医护人员手采样及检查方法 采样时间

在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 采样面积及方法 被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双 手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积 30cm2〕，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位。 将棉试子放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方 厘米（cm2）计算。 细菌菌落总数检查 手细菌菌落总数≤5cfu/ cm2 五医疗用品采样及检查方法 采样时间 在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。 采样量及采样方法 浸有无菌生理盐水采样液的棉试子在被检物体表面涂抹采样， 被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取 100cm2。 使用中消毒剂与无菌器械保存液 采样时间 采取更换前使用中的消毒剂

各种标本的采集方法

各种标本的采集方法 1．粪便标本：对水样便以吸管吸取1～3毫升，成型便采集成人拇指大小的便量，置于灭菌管内或经增菌后送检。任何容器均应加橡皮塞或将螺旋盖旋紧，容器外壁不可沾染粪便。采集肛拭子标本，以直肠拭子用保菌液或生理盐水润湿后，由肛门插入直肠内3～5厘米处采集，转动取出，插入保存液或无菌试管内送检。粪便标本应在2小时内尽快送检，否则标本应放入Cary-Blair运送培养基中。沾染粪便的衣物、物品、地面，以及尸体肠内容物等也可作为检材。所有采集的拭子标本（肛拭子、食品及操作台等的涂抹拭子），当直接用于PCR检测时，不能使用棉拭子和木质拭子棒，因为这类材料中含有核酸扩增抑制剂，而要使用灭菌人造纤维拭子和塑料棒。 2．呕吐物标本：以吸管吸取1～3毫升，置可密闭样品管立即送检。 3．食品标本：采集50～100克置于可密闭灭菌广口瓶、塑料瓶或厚的自封塑料袋内，常温下迅速送实验室。 4．水产品标本：通常选取活的或新鲜水生动物为采集对象，冰冻水生动物也可作为采集标本。采集水生动物鳃部和/或肠内容物等标本，置于采样瓶（管）或食品采样袋中密封，常温下送检；同时，以无菌棉签涂抹五只（条）以上的某类水生动物体表和/或水生动物肛门，置于碱性蛋白胨水中送检，每管碱性蛋白胨水作一份样品看待。有条件的可将水生动物整体采回实验室再进行处理。 5．水体标本：用灭菌的500毫升玻璃瓶采集相对静止的表层水（深度30 厘米以内）500毫升，加盖密封后以牢固自封塑料袋包裹密封，常温下送实验室。取水点的选择应结合流行病学调查资料而确定；每个采样点应相距数米；同一采

样点采集样本不少于2瓶，用于平行检测。采集标本的水体按可能污染有霍乱弧菌对待，因此采样者应注意自身防护，同时避免水样沾染周围环境。 6．物体表面标本：以灭菌拭子蘸碱性蛋白胨水涂抹可疑物体表面，置于装有碱性蛋白胨水的可密闭玻璃或塑料试管中，常温送检。

细菌标本采集规范

临床微生物学标本采取和处理的规范化要求 正确的采取、处理与运送用于细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键。标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不当将严重影响检验结果，给临床以误导，延误对患者的正确治疗。为此，我们提出初步的参考意见，并希望在实践中不断完善。 一、血液细菌培养标本的采集和处理 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。 1．采集方法：静脉采血，以无菌操作方法抽取血液后，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中，再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。 2.采血时间以及血培养份数：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，用药前24小时内采集2～3次血液标本，可使细菌检出率高达99%。对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1小时采血，亦可在寒战或发热后1小时采集血液标本。特殊感染患者采血培养时应遵循以下原则： （1）可疑急性发热性菌血症、败血症患者：应在使用抗菌药物之前，在24小时内从不同部位采集2～3份血液标本培养。 （2）可疑细菌性心内膜炎患者、感染性心内膜炎患者：在1～2小时内采集3份血标本培养，如果24小时后阴性，再采集两份血标本培养。 （3）不明原因发热患者：先采集2～3份血标本，抽血间隔60 min，24～36小时后体温升高之前，再采集2份血标本进行培养。因为1次血培养不足以说明问题，可能会遗漏阳性结果。

（4）可疑菌血症但血培养持续阴性时；应改变血培养方法，以获得罕见或苛养的微生物。 （5）在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎，需马上做抗菌治疗；或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者，应立即从两臂分别取2份标本。 3.采血部位：采血部位通常为肘静脉。疑为亚急性心内膜炎的患者，以肘动脉或股动脉采血为宜。疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓。多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。要避免从血管插管内取血，因插管常被污染，其培养结果不能反映真实情况。在不同部位取血，2次分离出同样菌种才是确定病原菌的有力证据。采血时要求严格无菌操作，防止皮肤正常菌群污染。 4.采血量：采血量与血培养的检出率相关，所以采血量一定要足够。成人一般为8～10ml/瓶，新生儿与婴幼儿为1～5 ml/瓶，骨髓采血量为1～2ml/瓶。 5.标本运送与保存：含血样的培养瓶应立即送往实验室；不能及时送检的标本，应将其放在室温，切忌冰箱存放，因为某些苛养菌可在低温环境中死亡，而使培养阳性率下降。 二、下呼吸道分泌物(痰培养)的标本采取和处理 下呼吸道分泌物(痰)的细菌学检查对病原学诊断起着重要作用，但痰标本的质量往往难以保证，造成病原学诊断和实际引起感染的病原菌脱节，直接影响抗菌药物的应用、甚至耐药菌的出现或流行。痰标本的细菌学检验地带网检查应注意如下几个问题。 1.标本的采集：痰液标本最好在应用抗菌药物之前采集，以深咳晨痰最好，主 要有自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法、小儿采痰法和气管穿刺法等。

血培养标本采集操作流程及要点说明

【护理目标】 遵循无菌操作原则,患者、标本、送检准确。 【操作重点步骤】 1、严格执行查对制度、无菌技术操作原则、标本采集原则。 2、需两人共同核对医嘱,患者的血型必须与用血申请单、交叉配血申请单、血型 检验报告单、医嘱上的血型相符。 3、告知患者/家属交叉配血的目的与配合方法及采血后的注意事项。 4、按静脉采血法评估患者的静脉、皮肤情况并进行采血。 5.根据申请用血量决定交叉配血标本的量,若申请用血为200 ｍＬ则标本量为２mL,申请用血量每增加200 mL标本量增加1 ｍＬ。 6、床旁采血前再需两人同时在床旁再次核对医嘱、患者(按采血容器标签上内容)、患者血型、用血申请单、交叉配血申请单。 ７、采血完毕,标本连同输血申请单马上送输血科(或检验科)。 8、医疗废物按“感染性医疗垃圾”处理。 【结果标准】 1.患者／家属对所做的护理操作与解释表示理解与满意。 2、采血准确、送检及时。 【操作流程及要点说明】 与静脉采血法流程图同。

【护理目标】 标本采集时间及容器符合检查要求,标本无污染,患者安全。 【操作重点步骤】 １、严格执行查对制度、无菌技术操作原则、标本采集原则、标准预防原则。 2、评估患者的病情、抗生素使用情况,准备血培养基。 3、告知患者/家属采血的目的、方法及采血后的注意事项。 ４.根据医嘱、评估结果选择恰当的血培养基与采血量。 5、采血过程中严格无菌技术操作,防止污染。 6.在申请单上准确记录采血量、采血时间、操作者姓名。 7.采血后,标本马上送检验室,防止标本变质、被污染。 8.医疗废物按“感染性医疗垃圾”处理。 【结果标准】 １.患者/家属对所做的解释与护理表示理解与满意。 ２.采取标本方法正确,标本符合检验要求。 3.标本送检与异常结果回报及时,异常情况得到及时处理。

细菌室标本采集规范

血样采集和培养瓶接种 （一）采血指征 对入院的危重病人未进行系统性抗生素治疗时，应及时进行血液培养，病人出现以下临床表现时可作为采集血培养的重要指征。 1. 发热（>38℃）或低温（<36℃） 2. 寒战 3. 白细胞增多（>10×10^9/L，特别有“核左移”未成熟的或杆状的白细胞增多） 4. 粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×10^9/L） 5. 血小板减少 6. 皮肤、粘膜出血 7. 昏迷 8. 多器官衰竭 9. 血压降低 10. 呼吸加快 或同时具备上述几种临床表现时应采集血培养。在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低温外，很少培养出细菌，应该增加尿液和脑脊液培养。肺炎链球菌与流感嗜血杆菌菌血症患儿（特别是2岁或2岁以下的幼儿）一般在门诊就诊，常伴有明显发热（>38.5℃）和白细胞增多（>20×10^9/L）。老年菌血症病人可能不发热或不低温，如伴有身体不适、肌痛或中风，可能是感染性心内膜炎的重要指征。 （二）消毒程序 要点：防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养的关键问题。由污染菌引起的假阳性增加了病人抗生素的使用量。然而，在理想的消毒条件下，仍有3%-5%血培养中混有污染菌，它们来源于皮肤（表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、梭杆菌属、类白喉群）或环境（革兰阳性芽孢杆菌属、不动杆菌属），故进行血培养阳性统计处理时，通过将单次血培养生长革兰阳性芽孢杆菌属、棒状杆菌属、痤疮丙酸杆菌或凝固酶阴性葡萄球菌的标本视为污染，一次血培养的阳性瓶数对区分真正的病原菌和污染菌无太大帮助。 皮肤消毒：血培养为防止皮肤寄生菌污染，可使用消毒剂[碘酊或聚维酮碘(碘伏)]对皮肤进行严格仔细的消毒处理，最大限度地降低皮肤污染。 培养瓶消毒：用70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子；酒精作用待60S；在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。 （三）采血量和血培养的数量 采血量：对从菌血症或真菌菌血症病人血培养中获得的微生物，每个培养瓶抽取的血量是唯

标本采集及保存要求

标本采集及保存要求 一、总则：用于细菌培养的标本在收集时应注意严格无菌操作和及时送检，检测后标本应妥善保存。 二、临床标本的采集 （一）下呼吸道分泌物（痰液） 令患者早上起床后用清水濑口，不要刷牙，立即从下部呼吸道咳出第一口痰，吐在无菌塑料痰盒中，及时送检。 （二）、尿液（中段尿） 护理人员协助采取中段尿约3ml入无菌试管中，及时送检。 （三）、粪便：取有粘液、脓血部分的粪便置玻璃大便专用管中，如为稀水便，可直接收集于玻璃管中，及时送检。 （四）、眼、耳、鼻、喉拭子：将棉拭子沾取少许无菌生理盐水（如沾取的太多，可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒悬于无菌试管内,及时送检。（五）、脓液：用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液，要尽量多取一些，然后将棉拭置于无菌试管中，及时送检。 （六）、血液： 1、凡怀疑菌血症和败血病的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素， 应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，应在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。 当然在病人发热或寒颤时采集也可。 2、成人每次采血5—10ml，小儿采血2—3ml； 3、严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀， 4、从抽血到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固，同时要及时送检。 （七）、穿刺液：胸腹水、心包液、关节腔液、鞘膜积液： 严格无菌抽取后，注入含肝素抗凝的无菌试管中，轻轻颠倒试管10余次，使肝素与穿刺液混匀达到抗凝的目的，或直接无菌注入血培养瓶内及时送检。 （八）、胆汁：由专科医生以无菌方法取引流液10ml注入无菌试管。 （九）、脑脊液：以无菌方法取脑脊液3-5ml，置无菌试管内，常温保存送检，如只做培养可直接无菌注入血培养瓶内，及时送检。 （十）、生殖器官标本：阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，收集于无菌试管内送检。 如疑为淋病奈瑟菌感染，做培养检查时，采集的标本应床旁接种并及时放入孵箱培养。（十一）、烧伤标本：以无菌棉拭子直接采取多个部位创面的脓汁分泌物放入无菌试管中. （十二）、支原体（解脲、人型）培养+药敏的标本采集 1、支原体对干、热抵抗力差，标本采集后应尽快接种支原体运送培养基送检。 2、男性：用细的无菌棉拭子沾取无菌盐水少许深入尿道口内2.5-3cm。 三、临床标本的保存 细菌室标本原则上要求及时送检、及时处理，不得保存。