兽医微生物学(详)

兽医微生物学

绪论及第一章细菌得形态与结构

1、微生物:就是存在于自然界得一大群体型微小、结构简单、肉眼直接瞧不见,必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍,甚至数万倍才能观察到得微小生物。

2、微生物得种类:三型八大类(三菌四体一病毒)

①真核细胞型微生物:细胞核有核膜与核仁,细胞器完整,如真菌。

②原核细胞型微生物:仅有原始核,无核膜、核仁。细胞器很不完善。DNA与RNA同时存在。有细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体。

③非细胞型微生物:就是最小得一类微生物。无典型得细胞结构,只能在活细胞内生长繁殖。核酸类型为DNA 或RNA。病毒属之。

3、微生物得特点

·体积小、面积大;

·代谢能力强,代谢类型多;

·生长繁殖快,容易培养;

·易变异,适应强;

·种类多,分布广。

4、细菌得基本形态

细菌按其外形,主要有:球菌、杆菌、螺旋状菌。

①球菌

菌体呈球形或近似球形,根据细胞分裂得方向及分裂后得各子细胞得空间排列状态不同,可将球菌分为以下几种:单球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等。

②杆菌

杆菌就是细菌中种类最多得类型,因菌种不同,菌体细胞得长短、粗细等都有所差异。

杆菌得形态:短杆状、长杆状、棒杆状、梭状杆状、月亮状、竹节状等;按杆菌细胞繁殖后得排列方式则有链状、栅状、“八”字状等。

③螺旋菌:弧菌、螺菌。

5、科赫法则

·特殊病原菌在同一疾病中查见,健康者中不存在;

·该病原菌能被分离培养得纯种;

·该纯培养物接种至易感动物,能导致同样病症;

·自实验感染得动物体内能重新获得该病原菌得纯培养。

6、细菌得衰老型或退化型:指在不良环境或老龄期时,细菌会出现与正常形状不一样得个体。若将其重新置于正常培养环境时可恢复正常状态。

7、细菌得多形性:指处于衰老型或退化型状态得细菌即使置于适宜得环境中生长,其形状也与正常得不一致,如嗜血杆菌。

8、菌落:单个细菌在适当得固体培养基表面或内部,经过一段时间培养后,生长繁殖出数量巨大得菌体,形成肉眼可见、有一定形态得群体。可用于细菌得分离、纯化、计数与鉴定。

9、菌苔:各“菌落”相互连接形成一片。

10、细菌活得非可培养状态(VBNC):指细菌处于不良环境条件下,细胞缩成球形,用常规方法培养不能生长繁殖,但仍就是活得一种特殊存在形式,在一定条件下可复苏,并仍具毒性。

11、细菌得结构

·基本结构:细胞壁、细胞膜、细胞质、核体。

·特殊结构:荚膜、S层、鞭毛、菌毛、芽胞。

12、磷壁酸得功能

·形成表面抗原决定簇得成分;

·提高膜结合酶得能力(使细胞壁形成负电荷环境,以利于吸附镁离子,维持酶活);

·保证革兰氏阳性致病菌(如A族链球菌)与其寄主间得黏连;

·构成噬菌体得吸附位点。

13、细胞壁

①格兰阳性菌

·肽聚糖

·磷壁酸

②革兰阴性菌

⑴脂多糖(LPS)

组成:

·类脂A:无种属特异性,内毒素得主要毒性成分;

·侧链多糖:即菌体抗原,有种、型特异性;

·核心多糖:有属特异性。

功能:

·能够吸附Ca2+、Mg2+等阳离子;

·为噬菌体提供特异性吸附受体。

⑵外膜蛋白(OMP):包括微孔蛋白、脂蛋白。

⑶周质间隙

14、细胞壁得功能

·维持菌体外形与提高机械强度,保护细菌耐受低渗环境;

·阻挡有害物质进入菌体;

·维持菌体内外离子平衡;

·参与细菌得正常分裂;

·表面带有多种抗原分子,可诱发机体得免疫应答。

15、细菌细胞膜不含胆固醇。

16、拟核:细菌不具有成形得核,无核膜、核仁,遗传物质称为拟核(核质)。核质由单一密闭环状DNA分子反复回旋卷曲盘绕组成松散网状结构。

17、荚膜

①概念:某些细菌在其细胞壁外周产生得一层包围整个菌体、边界清楚得黏液样物质,理化方法去除后并不影响细胞得生命活动。

②功能

·抗吞噬作用:荚膜具有抵抗宿主吞噬细胞得作用,因而荚膜就是病原菌得重要毒力因子。

·抗有害物质得损伤作用:荚膜处于细胞得最外层,可保护菌体避免与减少受有害物质得损伤。

·营养物质得贮存场所与废物排出。

18、S层得功能

·分子筛与离子通道;

·屏障作用,保护细菌;

·黏附宿主细胞;

·重要得表面抗原。

19、鞭毛得功能

·就是运动器官;

·有抗原性;

·与致病性有关。

20、菌毛

·与细菌得运动无关;

·菌毛蛋白具有抗原性;

·必须用电镜观察;

·分普通菌毛、性菌毛。

21、细菌细胞壁缺陷型(细菌L型):细胞壁受损后仍能生长与分裂得细菌。在一般环境中不耐受菌体内得高渗透压会涨破死亡,在高渗环境中仍可存活。

革兰阳性菌细胞壁缺失后,原生质仅被一层细胞膜包住——原生质体。

革兰阴性菌肽聚糖层受损后尚有外膜保护——原生质球。

将两个不同得原生质体或原生质球融合并再生成一个细菌得技术,称原生质体融合技术。

22、研究L-细菌得意义

⑴诊断困难,由于L-细菌在通常培养条件下不易成功,所以常误诊为非病原体感染;

⑵对干扰细胞壁合成得药物敏感性下降,如青霉素,多黏菌素等;

⑶由于细胞壁得少或无,使抗原性下降,L-细菌得感染可逃避正常菌抗体得攻击而长期存在;

⑷与慢性病与一些复发性疾病有关;

用药——导致L型——对药不敏感——进一步感染等

⑸利用L-细菌就是进行细菌得基础研究。

23、革兰氏染色

①原理

G+菌:肽聚糖含量高,交联度大,当乙醇脱色时,肽聚糖因脱水而孔径缩小,故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内,细胞仍呈紫色。

G-菌:肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,因其含脂量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,酒精将细胞脱色,呈无色,沙黄(石炭酸复红)复染呈红色。

②方法

细菌标本固定、结晶紫初染、碘液媒染、生成结晶紫-碘复合物、95%酒精脱色、稀释得复红复染。

③用途:细菌形态鉴定、菌种鉴定

④意义:鉴别细菌,选择抗菌药物,研究细菌对抗生素得敏感性、对结晶紫得敏感性,细菌得等电点,指导临床用药。

24、革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌细胞壁成分比较

25、芽胞:某些革兰阳性菌在一定环境条件下,在菌体内部形成得一个圆形或卵圆形得休眠体。芽胞形成后细菌即失去繁殖能力。

①芽胞得结构,由外向内:外衣→外膜→皮质→芽孢壁→内膜→芯髓。

②性质:一个细菌只形成一个芽胞,一个芽胞发芽也只生成一个菌体,细菌数量并未增加,因而芽胞不就是细菌得繁殖方式。与芽胞相比,未形成芽胞而具有繁殖能力得菌体称为繁殖体(营养体)。

③特点

·对高温、干燥、辐射、化学药物有强大抵抗力。

·含水量低、壁厚而致密、通透性差、不易着色、折光性强。

·芽胞内新陈代谢几乎停止,处于休眠状态,但保持潜在萌发力。

·不就是繁殖器官,一个芽胞萌发只产生一个营养状态得细胞。

④意义

·对外界不良环境有强大得抵抗力,就是细菌保存生命得一种休眠结构;

·消毒得指标就是以杀灭芽胞为准(121℃/30min,朊病毒除外);

·反恐怖战争需要。

第二章细菌得生理

1、细菌与真核生物新陈代谢得主要区别

·生长与繁殖速度快

·利用各种化合物作为能源能力强

·营养需求多种多样

·可利用超常流水线合成大分子物质

·能产生特殊物质

2、细菌物质摄取方式

①单纯扩散(被动扩散)

②促进扩散

③主动运输

④基团转位

需要载体蛋白与能量,有两个突出特点:

·转运过程中物质发生了化学变化;

·主要存在于厌氧菌与兼性厌氧菌中。

3、时代时间:一个菌体分裂为两个菌体所需得时间。

4、生长曲线:将细菌接种在液体培养基并置于适宜温度中,定时取样检查活菌数,可发现细菌生长过程具有规律性。以时间为横坐标,以活菌数得对数为纵坐标,可得一条生长曲线。

5、细菌生长繁殖得四个时期

①迟缓期:就是细菌来到新环境得一个适应过程。

特点:

·代谢活跃,合成并积累所需酶系统;

·RNA含量明显增多,但DNA含量无变化;

·细菌数不增加。

②对数期:细菌生长迅速,以恒定速度进行分裂繁殖,活菌数以几何级数增长,达到顶峰,生长曲线接近一条斜得直线。此时病原菌致病力最强,形态、染色特性及生理活性较典型,对抗菌药物得作用较敏感。

OD=0、4～0、6认为处于对数期。

③稳定期:因营养得消耗、代谢产物得蓄积,细菌繁殖速度下降,死亡数逐步上升,新繁殖得活菌数与死菌数大致平衡。细菌得形态及生理性状常有改变,格兰阳性菌此时可染成阴性,毒素、抗生素、芽孢多此时产生。

④衰亡期:死菌数超过活菌数,细菌得菌体变形或自溶,染色不典型,难以进行鉴定。

6、培养基

①概念:就是人工配制得基质,含有细菌生长繁殖必需得营养物质。培养基制成后,要经灭菌处理。

②营养条件

·基本营养

·氧气:根据细菌对氧得需求,可分为需杨菌、厌氧菌及兼性厌氧菌

·厌氧培养基:就是为培养厌氧菌而设计得

·温度:根据细菌对温度得适应范围,可将细菌分为嗜冷菌、嗜温菌、嗜热菌

·酸碱度:多数病原菌得最适ph为7、2～7、6,鼻疽伯氏菌偏酸,霍乱弧菌偏碱

7、培养基得分类

①按营养成分

·基础培养基:基本营养成分

·营养培养基:在基础培养基中添加一些其她营养物质,如葡萄糖、血液、血清、生长因子等

②按状态

·固体培养基:1、5%～2% 琼脂,用于细菌分离纯化

·半固体培养基:0、5% 琼脂,作穿刺试验

·液体培养:扩增纯培养得菌体

③按功能

·鉴别培养基:在培养基中加入特定底物,观察细菌生长后得分解底物,从而鉴别细菌。

·选择培养基:在培养基中加入某种化学物质,使抑制一类细菌生长,而有利于另一类细菌生长,从而将后者选择出来。

麦康凯培养基内含胆盐,能抑制革兰阳性菌得生长,大肠杆菌及沙门菌可生长。

·厌氧培养基:用于厌氧菌得分离、培养与鉴别。将普通培养基放在无氧环境中培养,或者使培养基本身成为无氧环境。

庖肉培养基就是常用得厌氧培养基之一,其中不含饱与脂肪酸与谷胱甘肽得肉渣起到了还原剂得作用。

8、分离培养:将标本或培养物划线接种在固体培养基表面,因划线得分散作用,许多原混杂得细菌在固体培养基表面散开。

9、液体培养基中得生长现象

·浑浊:大多数细菌

·沉淀:链状生长得细菌

·菌膜:专性需氧菌,如结核杆菌、枯草杆菌

10、生化反应:细菌对糖、蛋白质得分解能力不同,代谢产物各异,利用生物化学方法鉴别不同细菌称为细菌得生化反应。主要有氧化酶试验、VP试验、甲基红试验、吲哚试验等。

11、生物被膜:通常生活在自然界中得细菌并非以游离得单个菌体形式存在,而就是以群落形式出现,这种群落得主要表现形式称生物被膜。就是一种被自身产生得多聚基质包裹着菌细胞得结构群体,就是细菌具有保护性得一种生长模式,其结构中具有水与营养物质得通道。

12、生物膜得特性

①生长速度缓慢且不均一。

细菌生物膜就是在不利环境下形成得,环境变化对其影响较小。在膜表面得细菌,由于营养等因素,分裂较快,体积较大,内层相反。

②细菌毒力下降

毒力强得细菌形成被膜菌后,一般不会使动物致死。

③耐药性提高

④逃逸宿主得免疫监视

多糖膜能降低免疫细胞与免疫分子得趋化,使被膜菌与宿主长期共存。

13、密度感应(QS):多数细菌能合成并释放一种称为自身诱导素(信息素)得信号分子,胞外信号分子浓度随细菌密度得增加而增加,达到一个临界浓度时,信息素会启动菌体中相关基因得表达,调控细菌得生物行为,以适应环境得变化,这一现象称群体感应调节。

14、微生物种群间得关系:互生、共生、拮抗、寄生。

15、正常菌群与其宿主之间形成共生关系,具体表现为营养、免疫、生物拮抗三方面。

16、菌膜病:牙周炎、中耳炎、坏死性筋膜炎、心内膜炎。

17、无特定病原体动物(SPF):指不存在某些特定得具有病原性或潜在病原性微生物得动物。

18、感受态:细胞生活周期中一种特殊得生理状态。

第三章消毒与灭菌

1、灭菌:指杀灭物体中所有病原微生物与非病原微生物及其芽胞、霉菌孢子得方法。

2、消毒:指杀灭物体中病原微生物得方法。只要求达到消除传染性得目得,对非病原微生物及其芽胞、孢子并不要求全部杀死。

3、防腐:指阻止或抑制微生物生长繁殖得方法。

4、无菌:指没有活微生物得状态。

5、无菌操作:防止微生物进入机体或局部环境得操作技术。

6、物理消毒灭菌法:热力灭菌法、辐射灭菌法、超声波灭菌法、滤过灭菌法。

7、热力灭菌法:干热灭菌、湿热灭菌。

①二者比较

同一温度下,湿热灭菌效力比干热灭菌大。

原因:

·湿热中细菌菌体蛋白较易凝固;

·湿热得穿透力比干热大;

·湿热得蒸汽有潜热存在。

②干热灭菌法

·火焰灭菌法

·热空气灭菌法

干热灭菌器适用于高温下不损坏、不变质得物品,如玻璃器皿、瓷器等。

灭菌温度需160℃维持2h。

③湿热灭菌法

⑴煮沸灭菌

⑵巴氏消毒法:以较低温度杀灭液态食品中得病原菌或特定微生物,而不致严重损害其营养成分与风味。

·低温维持巴氏消毒法63～65℃/30min

·高温瞬时巴氏消毒法71～72℃/15s

·超高温巴氏消毒法132℃/1～2s

⑶流通蒸汽灭菌法:就是一种常压蒸汽消毒法,细菌繁殖体15～30min可杀灭,但芽胞不全被杀灭。

⑷间歇灭菌法/丁达尔灭菌法(反复多次流通蒸汽):用于不耐高温得培养基,如鸡蛋培养基、血清培养基、糖培养基得灭菌。

⑸高压蒸汽灭菌

8、辐射灭菌法

①非电离辐射

·可见光线

·日光

·紫外线

波长200～300nm部分有杀菌作用,实验室常用得紫外线杀菌灯紫外线波长为253、7nm,用于:微生物实验室、无菌室、手术室得空气消毒;不能用高温或化学药品消毒物品得表面消毒;诱变育种。

·红外线:红外线烤箱

·微波

②电离辐射:α射线、β射线、γ射线、χ射线

用途:忌热物品得灭毒消菌、食品保藏与育种等方面。

9、超声波灭菌法

目前超声波主要用于裂解细胞,提取细胞组分。

10、滤过除菌法:通过机械、物理阻留作用将液体或空气中得细菌等微生物除去得方法,不能除去病毒、支原体以及细菌L型等微生物。

11、消毒剂:用于杀灭病原微生物得化学药品。

①分类

·使菌体蛋白质变性或凝固,如酚类(高浓度)、醇类、重金属盐类(高浓度)、酸碱类;

·损伤细菌细胞膜,如酚类(低浓度)、表面活性剂;

·干扰细菌得酶系统与代谢,如某些氧化剂、重金属盐类(低浓度);

·改变核酸得功能,如染料。

②影响消毒剂作用得因素

·消毒剂得性质、浓度与作用时间;

·微生物得污染程度;

·微生物得种类与数量;

·环境中有机物;

·温度、湿度、酸碱度;

·化学拮抗物。

12、防腐剂:用于抑制微生物生长繁殖得化学药品。

13、抗生素:某些微生物代谢过程中产生得一类能抑制或杀死另一些微生物得物质。

14、细菌素:某种细菌产生得具有杀菌作用得蛋白质,只作用于同种不同菌株得细菌及亲缘关系相近得细菌。

食品防腐领域得应用:细菌素Nisin已被60多个国家批准作为食品添加剂用于食品防腐。

15、实验室生物安全得意义:防止病原微生物及其她有害生物或物质传入实验室;防止病原微生物等传出实验室;实验人员得自身安全防护。

第四章细菌得感染与致病机理

1、感染:病原微生物在宿主体内持续存在或增殖。

2、发病:病原微生物感染后,对宿主造成明显得损害。

3、病原菌:导致机体发病得细菌。

4、致病性:病原菌在一定条件下,能在宿主体内引起感染得能力称致病性。致病性就是细菌种得特征之一。

5、毒力:病原菌致病力得强弱程度,同一细菌得不同菌株,其毒力不同,毒力就是菌株得特征。

6、基因水平柯赫法则

·在致病菌株中检出某些基因或其产物,而无毒力菌株中无;

·有毒力菌株得某个基因被损坏,则菌株得毒力减弱或消除,或将此基因克隆到无毒菌株内,后者成为有毒力菌株;

·将细菌接种动物时,这个基因应在感染得过程中表达;

·在接种动物检测到这个基因产物得抗体,或产生免疫保护。

7、半数致死量(LD50):能使接种得实验动物在感染后一定时限内死亡一半所需得微生物量或毒素量。

8、半数感染量(ID50):某些病原微生物只能感染实验动物、鸡胚或细胞,但不引致死亡,用ID50表示其毒力。

9、干扰或逃避宿主得防御机制

①抗吞噬作用

·不与吞噬细胞接触(破坏,链球菌溶血素)

·抑制吞噬细胞得摄取(荚膜、菌毛)

·在吞噬细胞内生存(沙门菌、李氏杆菌)

·杀死或损伤吞噬细胞

②抗体液免疫机制

·抗原伪装或抗原变异,金黄色葡萄球菌、SPA

·分泌蛋白酶降解免疫球蛋白,嗜血杆菌分泌IgA蛋白酶

·逃避补体,抑制抗体产生,LPS、OMP、荚膜、S层

③内化作用:某些细菌粘附于细胞表面后,能进入吞噬细胞或非吞噬细胞内部得过程。

意义:宿主细胞为进入其内得细菌提供了一个增殖得小环境与庇护所,使细菌逃避宿主免疫机制。也可随吞噬细胞得游走扩散至其她部位,造成广泛病变。

10、外毒素

①概念:某些病原菌在生长繁殖过程中所产生得对宿主细胞有毒性得可溶性蛋白质,大多数外毒素在菌体内合成后必须分泌于胞外。

②特性

·毒性作用极强

·有高度得特异性

·不耐热,多数在60～80℃经10～80min即失去毒性

·对宿主不致热

·抗原性强,刺激机体产生中与抗体

③组成

·A亚单位:毒素得活性中心,决定毒素得毒性效应

·B亚单位:结合单位,协助A亚单位。可单独与细胞膜受体结合,从而阻断完整毒素结合细胞。刺激机体产生相应抗体,可作为良好得亚单位疫苗。

11、抗毒素:外毒素刺激机体产生特异性抗体,可用于紧急治疗与预防。

12、类毒素:外毒素在0、4% 甲醛溶液作用下,经过一段时间可以脱毒,但仍保留原有抗原性,称为类毒素。

13、内毒素

①概念:指革兰阴性菌外膜中得脂多糖(LPS)成分,细菌在死亡后破裂或用人工方法裂解菌体后才释放。

②特性

·毒性弱,很少致死

·致发热、腹泻、呕吐

·耐热

·抗原性较弱,免疫应答不足以中与毒性

③组成

·多糖侧链

·核心多糖

·类脂A:主要得毒性成分(保守)

④检测

·鲎试验:鲎变形细胞溶解物

14、内毒素与外毒素得比较

15、机会致病菌:正常菌群与宿主之间,正常菌群之间,通过营养竞争、代谢产物得相互制约等因素,维持着良好得生存平衡。在一定条件下这种平衡关系被打破,原来不致病得正常菌群中得细菌可成为致病菌,这类细菌称机会性致病菌。

16、细菌毒力减弱方法

·长时间在体外连续培养传代

·在高于最适生长温度条件下培养

·在含有特殊化学物质得培养基中培养

·在特殊气体条件下培养

·通过非易感动物

·通过基因工程得方法

17、细菌毒力增强得方法:回归易感动物。

第五章细菌得遗传变异

1、细菌得遗传:指亲代细菌与子代细菌得相似性,它使细菌得性状保持相对稳定,就是各种细菌存在得根据。

2、细菌得变异:指亲代与子代及子代细菌之间得不相似性,细菌得以发展进化。

3、细菌常见得变异现象

·形态与结构变异

·菌落形态变异

·抗原变异

·抗性变异

·代谢变异

·毒力变异

4、质粒:细菌染色体外得遗传物质,编码细菌各种重要得生物学形状。

·严紧型复制

·按转移得特性,可分为接合性质粒、非接合性质粒

·自杀性质粒

·穿梭载体:指含有两个亲缘关系不同得复制子,能在两种不同得生物中复制。

5、转位因子:就是细菌基因组中能改变自身位置得一类独特得DNA片段。

6、毒力岛(PAI):指病原菌得某个或某些毒力基因群,分子结构与功能有别于细菌染色体,但位于细菌染色体之内。

7、基因突变:指生物细胞遗传物质DNA分子结构突然发生了稳定得可遗传变化。就是生物进化得一个重要因素。

8、基因转移:外源性得遗传物质由供体菌进入受体菌细胞内得过程。

重组:转移得基因与受体菌DNA整合在一起。

基因转移与重组得主要方式:转化、转导、接合、原生质融合等。

9、转化:供体菌游离得DNA片段直接进入受体菌,使受体菌获得新得性状。

10、转导

①概念:以温与噬菌体为媒介,把供体菌得DNA小片段携带到受体菌中,通过交换与整合,使受体菌获得供体菌得部分遗传性状。

②类型:普遍性转导(任何)、局限性转导(特定,λ)

·普遍性转导:被装入得DNA片段可以就是供体菌染色体上得任何部分。(完全转导,流产转导)

·局限性转导:为噬菌体所介导得供体菌染色体上个别特定基因得转导。(特异性转导)

12、接合:就是两个完整得细菌细胞通过性菌毛直接接触,由供体细菌将质粒DNA转移给受体细菌得过程。

第六章细菌得分类与命名

1、古细菌无肽聚糖。

2、微生物分类得最基本单元就是种,其次就是属。

3、菌株:就是不同来源得某一细菌得纯培养物。

4、细菌得命名依据“国际细菌命名法规”得规定,学名用拉丁文,遵循“双名法”。每种细菌得拉丁文名称由属名与种名两部分构成,属名第一个字母大写,其余均小写。

5、细菌分类采用传统得双歧检索条目分类法。

6、目前公认得细菌分类体系就是《伯吉系统细菌学手册》。

7、《国际系统与演化微生物学杂质》就是细菌分类命名得世界公认得权威期刊。

8、国际公认得菌种保藏权威机构就是美国典型培养物保藏中心(ATCC)。

第二十一章病毒得结构

1、病毒子:一个形态与结构上完整得病毒颗粒。

2、病毒得特点

⑴形体微小,能通过细菌滤器,在电子显微镜下才能观察;

⑵没有细胞构造;

⑶每种病毒只含一种核酸, DNA或RNA;

⑷既无产能酶系,也无蛋白质与核酸合成酶系,只能利用宿主活细胞内现成代谢系统合成自身得核酸与蛋白质成分;

⑸对抗生素不敏感,对干扰素敏感;

⑹以复制方式繁殖。

3、痘病毒最大,圆环病毒最小。

4、动物病毒中螺旋对称得病毒均属有囊膜得单股RNA病毒。

5、除痘病毒外,所有脊椎动物DNA病毒均为20面体。

6、病毒得化学组成:核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物、其她组成。

7、核酸得特点

⑴病毒只含一种核酸。构成病毒体得芯髓;

⑵核酸类型多样化;

⑶分子量小,基因组结构简单,所含基因组数目少;

⑷病毒基因组核酸复制多样化;

⑸病毒核酸更容易受宿主细胞得影响而发生基因突变与重组;

⑹有些病毒去除囊膜与衣壳,裸露得DNA或RNA也能感染细胞,这种核酸称传染性核酸。

8、感染性核酸具备条件

·病毒核酸能作为mRNA或能利用宿主细胞得RNA聚合酶转录病毒得mRNA;

·病毒核酸不分节段。

9、将mRNA得碱基序列作为标准,与其相同得称正股,与其互补得称负股。某些病毒(布尼病毒、砂粒病毒)部分为正负链,称为双向。

10、核酸可分单股或双股、线状或环状、分节段或不分节段。

11、拟病毒又称类类病毒,卫星RNAs。指一类包裹在真病毒粒子中得缺陷类病毒。拟病毒极其微小,仅由裸露得RNA(300～400个核苷酸)或DNA组成。就是一种环状单链RNA。被侵染得植物病毒被称为辅助病毒,拟病毒必须通过辅助病毒才能复制。

12、蛋白质

①结构蛋白:指构成一个形态成熟得、有感染性得病毒颗粒所必需得蛋白质。就是构成病毒衣壳得全部成分与囊膜得主要成分。

②非结构蛋白:指由病毒基因组编码,在病毒复制或基因表达调控过程中具有一定功能,但不结合于病毒颗粒中得蛋白质。

③蛋白质功能

·保护病毒核酸,使其免受核酸酶或其她理化因素得破坏;

·参与病毒感染细胞得过程,决定病毒对宿主细胞得亲嗜性;

·抗原性:诱导特异性抗体、致敏淋巴细胞。

13、脂类、糖类

·主要存在于囊膜中,脂溶剂可去除囊膜,使病毒丧失活性;

·来自宿主细胞,与囊膜病毒得吸附与穿入宿主细胞得作用有关。

14、病毒得命名要由公认得国际专家小组负责不用拉丁文双名法,而用英文或英语化得拉丁文,只用单名,目、科、属分别用拉丁文后缀“-virales”、“-viridae”及“-virus”。

15、类病毒:没有蛋白质外壳得病毒,由环状RNA分子组成,在植物中发现。

16、拟病毒:指一类包裹在真病毒粒子中得缺陷类病毒。

17、感染性核酸:就是由病毒质粒或感染细胞中分离出得具感染性得核酸。

18、朊病毒:只含传染性蛋白,无核酸。

第二十二章病毒得复制

1、复制:病毒在活细胞内,以其基因为模板,在酶得作用下,分别合成病毒基因及蛋白质,再组装成完整得病毒颗粒。

2、复制周期:从病毒进入宿主细胞开始,经过基因组复制与病毒蛋白合成,到释放子代病毒得全过程。

3、病毒得复制周期:吸附与穿入、脱壳、生物合成、组装与释放。

4、隐蔽期:病毒侵入易感细胞后得短时间内完全消失,细胞内也找不到。该感染得病毒颗粒,直到新得病毒子出现为止,这一段时间称为病毒复制得隐蔽期。生物合成阶段,病毒处于隐蔽期。

5、感染比:在一个系统中,感染病毒细胞数与细胞总数之比。

6、病毒得一步生长曲线:在几乎100% 感染比体系中,一种病毒几乎同时感染所有细胞,并进行病毒复制。这种同步复制绘制出得病毒生长曲线,称病毒得一步生长曲线。

7、某些病毒能凝集红细胞,称为病毒得血凝作用。

8、病毒得特异抗体可抑制其血凝作用,称为血凝抑制作用。

9、血吸附就是一种特殊形式得血凝作用,就是将红细胞吸附于病毒感染得宿主细胞表面。

10、根据病毒基因组如何转录称mRNA、如何指令合成蛋白质,病毒得生物合成过程可基本归于6大类:双股DNA 病毒、单股DNA病毒、单正股RNA病毒、单负股RNA病毒、逆转录病毒、双股RNA病毒。

11、病毒得mRNA就是多顺反子。

第二十三章病毒得遗传与进化

1、突变:指基因组中核酸碱基顺序上得化学变化,可以就是一个核苷酸得改变,也可以就是成百上千个核苷酸得缺失或易位。

2、回复突变(第二位点突变或基因内校正):突变体经过第二次突变又完全或部分地恢复为原来得基因型与表现型。由于它得表现型效应被基因组第2位点得突变抑制,所以又称抑制突变。

3、缺损型干扰(DI)突变株:就是一种缺失突变得产物。自身不能复制,在亲本野生株作为辅助病毒存在时才能复制,但又干扰亲本病毒得复制,导致后者数量减少。

4、DI突变株特点

⑴含正常得衣壳蛋白质

⑵只含正常基因组得一部分

⑶只在正常同源病毒同时存在时繁殖,这时同源病毒成为辅助病毒

⑷特异性干扰同源病毒得繁殖,经连续传代后,DI颗粒增多

5、表型变异

·毒力变异

·抗原性变异(抗体逃逸变异株)

·空斑变异(空斑变异株)

·条件致死性突变株

6、DNA病毒复制具校正功能,RNA复制缺少校正机制,病毒RNA复制得错误率远高于病毒DNA。

7、分子内重组:将两个有亲缘关系但生物学性状不同得毒株感染同一宿主细胞,可发生核酸水平上得互换,产生兼有两亲本特性得子代,称重组。

8、重配:对于分节段得RNA病毒,通过交换RNA节段而进行得重组称重配。

9、补偿作用:指在感染得细胞中,病毒蛋白之间由于相互作用得结果,拯救了一种或两种病毒或增加了病毒得产量。

10、表型混合

①概念:两种病毒混合感染后,一个病毒得基因组偶尔装入另一病毒得衣壳内,或装入两个病毒成分构成得衣壳内,发生表型混合。

②特点

·两株病毒混合感染时,装配过程发生错误形成;

·主要表现为耐药性,抗原性等改变,基因并未改变,改变得生物学形状不能遗传。

11、基因型混合:指两种病毒得核酸偶尔混合装在同一病毒衣壳内,或两种病毒得核衣壳偶尔包在一个囊膜内,但它们得核酸都未重组合,所以没有遗传性。

第二十四章病毒与细胞间得相互作用

1、病毒就是严格得细胞内寄生微生物,培养病毒必须用细胞。根据病毒得不同选用敏感动物(动物接种)、鸡胚(鸡胚接种)或离体细胞进行分离培养(细胞培养)。

2、动物接种得优缺点

①优点:不需要复杂得仪器设备、技术简单、易成功

②缺点:个体差异大、价格昂贵、数量有限、需要隔离畜舍

3、鸡胚接种得优缺点

①优点:技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大、不需特殊设备

②缺点:很多病毒不能适应(主要就是哺乳动物得病毒)

4、细胞培养:指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。

①优点

⑴每个细胞生理特性基本一致,对病毒易感性相等

⑵无个体差异,准确性与重复性好

⑶可严格执行无菌操作

⑷细胞培养本身就能显示病毒得生长特征

⑸应用空斑技术可进行病毒得克隆化

②细胞得类型

根据细胞来源、染色体特征及传代次数,可分为三种类型:

⑴原代细胞:动物组织经胰蛋白酶消化处理,使细胞分散而得到得细胞。

⑵二倍体细胞株:将长成单层得原代细胞消化分散成单个细胞,继续培养传代,其染色体数与原代细胞一样,保持其二倍染色体数目得细胞,称为二倍体细胞。

⑶传代细胞系:能在体外持续增殖传代得细胞,大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。

5、细胞培养得方法

⑴静置培养:实验室常用,细胞悬液装瓶,5%CO2温箱静置培养,细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂,最后长成单层。

⑵旋转培养:大规模生产疫苗,细胞在玻瓶内生长时,玻瓶不断缓慢旋转,细胞贴附于玻瓶四周,长成单层。

⑶悬浮培养

⑷微载体培养

6、细胞病变效应(CPE):由病毒感染导致得细胞损伤,在光学显微镜下观察。

⑴细胞圆缩,如痘病毒与呼肠孤病毒等;

⑵细胞聚合,如腺病毒;

⑶细胞融合形成合胞体,如副粘病毒与疱疹病毒;

⑷有些病毒能形成包涵体。

7、合胞体:病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞细胞膜融合得产物,表现为若干细胞得相邻细胞膜消失,成为多核巨细胞。

8、50% 组织细胞感染量(TCID50)

能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变得病毒量,用于判定病毒得毒力。

9、空斑试验:将适当浓度得病毒悬液加入单层细胞培养中,当病毒吸附细胞后,覆盖一层融化得琼脂。病毒在细胞内复制后产生局限性病灶,病灶逐渐扩大,肉眼也能瞧见。

空斑就是由一个感染性病毒粒子复制形成得,类似于细菌得菌落,称为空斑形成单位(PFU)。病毒悬液中得感染性病毒量以每毫升含有得PFU来表示。

10、空斑试验得用途

·测定病毒数量

·纯化病毒

·鉴定病毒

11、包涵体:就是某些病毒感染细胞产生得特征性形态变化,在普通光学显微镜下可见胞浆或胞核内出现得呈嗜酸性或嗜碱性染色、大小数量不等得圆形或不规则形得团块状结构。

12、将与mRNA对应得正义RNA与反义RNA组成得双链RNA(dsRNA)导入细胞,可使mRNA发生特异性降解,导致其相应基因沉默,这种转录后得基因沉默机制(PTGS)称为RNA干扰(RNAi)。

13、基因沉默:指生物体中特定基因由于种种原因不表达。

14、干扰素(IFN)

①定义:由病毒或诱生剂刺激机体细胞产生得具有抗病毒、抗肿瘤与免疫调节作用得糖蛋白。

②种类:α、β、γ干扰素。

③抗病毒作用:干扰素不直接作用于病毒,而作用于邻近细胞,使其产生抗病毒蛋白,这些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。

干扰素作用具宿主特异性,无病毒特异性。

第二十五章病毒得致病机理

1、持续性感染:动物不论就是否发病,感染性病毒始终存在,可能很迟才发生免疫病理病或肿瘤病。

2、潜伏感染(隐性感染):除非激活,一般并不能发现感染性病毒颗粒。

3、长程感染:具有感染性得病毒在一个很长得临床前阶段逐渐增多,最终导致缓慢得、渐进性致死疾病。

4、超次感染:病毒感染免疫细胞导致免疫系统得损伤,使宿主易于再感染另一种病毒。

5、分子模拟:指宿主细胞成分与病毒蛋白质之间存在分子结构得线性或构象同源性。

第二十六章病毒得检测

1、病毒感染得检查方法

·标本采集与送检

·病毒得分离鉴定

·电镜技术

·血清学试验

·分子生物技术

2、标本采集与送检

①供分离病毒、检出核酸及抗原得标本

原则:

·尽早采取:发病初期

·部位适宜:由感染部位采取

·冷藏速送:装有冰块或干冰得容器内

②检测特异性抗体得标本

采集双份血清,4～20℃保存

3、观察特异性抗体能否保护易感试验动物死亡,能否抑制病毒得细胞病变效应,凡能与病毒结合,使其失去感染力得抗体称中与抗体。

4、核酸探针:指能与特定核酸序列发生特异性互补得已知核酸片段,可检测待检样品中特定得基因顺序。

5、病毒在光学显微镜下无法瞧到,在某些病毒感染细胞内出现包涵体,或细胞形态发生变化。对诊断有重要意义,如Negri氏包涵体就是狂犬病犬脑细胞得特征。病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时,常用苏木紫-伊红染色法。

6、血凝效价:能使1% 鸡得红细胞发生凝集得病毒得最大病毒稀释倍数。

7、PrP C:就是正常细胞得一种糖蛋白,由细胞基因组编码,在许多组织尤其就是神经元与淋巴内皮细胞中表达,以α螺旋为主。

8、病毒滴度:样品中含有得可增殖活病毒量。

9、前噬菌体:整合到细菌DNA上或以质粒形式存在得噬菌体。