汉恒生物-micorRNA研究整体策略

microRNA整体解决方案汉恒Th物技术服务手册

microRNA研究总体策略

功能模型芯片筛选

芯片结果的QPCR验证

过表达和抑制miRNA实验及功能分析

靶基因Th物信息学预测及内源性分析

靶标蛋白的内源性和外源性验证

3’UTR靶标回复实验（rescue实验）

研究实例

8

选用有功能差异对比的样本，进行mir 芯片筛选

（mir-array ），筛选出变化明显的mir 。

现在主流的芯片平台是

Agilent 和Affymetrix ，

Agilent 只检出成熟体，而

Affy 的芯片前体和成熟体

皆 检出，假阳性率较高，

但 Affy 的容量相比

Agilent 的 大很多。

汉恒Th 物（Hanbio ）

提 供Agilent 和

Affymetrix 平 台的

mirarray 筛选服务及后 续

的芯片数据分析及靶基因

聚类分析。

mir 进行

QPCR 验证，挑选出丰度高且变化显著的mir （以下简称mir- X ）。

Mir 的QPCR 验证最首选的当然是Life 的Taqman 系列探针和kit 权威，但价格极其昂贵。与之相比，特定引物SYBR 法检测mir 价 格适中，但误差率较高。

1

汉恒Th物（Hanbio）特有一步反转技术，特异性好，简单易用。汉恒已开发出针对不同种属mir的miRNA快速检测技术

MiRQeasy，与市面一般的mir引物相比，信号更单一，且操作极其简便。汉恒独有MiRTeasy一步法反转录试剂，一次性转录，兼顾了专一性和通用性。

过表达和封闭miRNA实验及功能验证

原则：

与mir变化相反的处理是否取缔功能表型的变化，而同向mir变化处理是否能模拟出功能表型变化。比如我们发现mir-X在细胞某种诱导分化后升高，则诱导时取缔这种升高是否会抑制分化，而单单升高该mir 能否模拟出细胞分化表型。

1）初筛选：

选取出若干芯片与QPCR验证变化一致，且组织表达丰度较高的Mir，运用Mimics（过表达）和inhibitor（封闭）分别在

细胞中过表达和封闭特定的mir，观察细胞功能的变化。

注：Mimics和inhibitor表达时程很短，一般72-96小时，所以一般只作为初筛。

2）m i r与A n t i-m i r的克隆高表达：Mir过表达：从miRbase上调出pri-mir序列，直接克隆pri-

mir至表达载体。

pri-m i r表达载体示例：

M i r下调：构建m i r的下调即封闭，主要的技术是s pong es 技术。将若干段连续mir成熟序列互补序列串联，使之在细胞内表达，吸附目标m i c r o RNA，所以称之为s pong es（海绵）。

汉恒Th物（Hanbio）已开发并完善病毒载体介导的microRNA 过表达和封闭技术平台，可针对不同的microRNA不同的实验要求为客户提供定制服务。您也可直接购买我们已经构建好的 microRNA 病毒颗粒或病毒载体。

3）T r a n s g e n i c&K no ck ou t

如果想考察microRNA在

机体发育中的特定作用，

Transgenic（TG）& Knockout

（KO） mice 肯定是最好的选

择。此外，斑马鱼由于其周期

短，鱼身透明等特点，也为

microRNA功能研究提供了很好

的便利。

汉恒Th物（Hanbio）与各

转基因研发中心有长期合作关

系，并已拥有部分已构建好的

microRNA TG及KO小鼠，详情

可咨询汉恒Th物销售人员。

4）功能验证

在目的细胞（病毒法）或者动物脏器（转基因小鼠）中高表

达mir-X，观察细胞或动物的功能表型，具体功能表型依照各方向类别而不同，如细胞分化，则观察分化率等，如肿瘤，可参考《汉恒Th物肿瘤学功能研究概述》技术文件，也可来电来信与我

们的实验技术工程师交流。

4

1）靶基因的预测：Th物信息学比对

目前通过Th物信息学比对找出特定microRNA对应可能的靶点蛋白主要有以下几个引擎：

a.PicTar：基于microRNA或microRNA靶标联合作用等特征开发的搜寻动物的microRNA靶基因。假阳性率也较低。Rajewsky实验室开发的。

网址：http://pictar.mdc-berlin.de/

b． targetScan: 基于靶mRNA序列的进化保守等特征搜寻动物的microRNA靶基因。是预测microRNA靶标假阳性率较低的软件。Bartel实验室开发的。

网址：https://www.wendangku.net/doc/2a415194.html,/

2）表达谱芯片：

如果有条件，将

样本中做mirarray同

时，进行表达谱芯片

分析，然后通过Th

物信息学预测与表

达谱芯片结果交叉

比对，可得出把握

度大的候选靶基因。

1)靶标蛋白的内源性初步验证：

一般有候选的2-4个靶标蛋白为指标，应用mir基因靶向操作的细胞或组织样本进行靶标蛋白的western验证，从中找出和mir-X趋势相反且变化最明显的1-2个靶标。

2）靶蛋白的外源性luciferase验证：将5中确定的靶标蛋白基因3’UTR区克隆至luciferase报告

基因载体（如下图，psicheck-2，最常用的microRNA报告基因

载体，promega公司产品），并与mir-X共转293T细胞，验

证 mir-X转入后luciferase的信号下调效率，进一步确定靶标。

为了实验的严谨性，可加入靶标基因3’UTR区microRNA预测结合区域的突变体作为对照，进一步说明问题。

汉恒生物运用psicheck2报告基因检测系统构建您所要研究的miRNA 靶基因3′UTR区域，进行靶点筛选及鉴定。

6

(可选做)

一个microRNA有很多靶基因，那么在我们的模型中，我们研究的microRNA是否是通过对我们关注的靶基因的调控，起到了对功能表型的影响？

为了进一步说明这个问题，靶标蛋白功能回复实验（rescue实验）的重要性不言而喻。说选做，是由于工作量大，

单单做到外源性验证已经可以发表SCI paper。

Rescue实验的原理：在3’的mir的基因操作模型中，一

般

情况下microRNA与靶蛋白都是反向变化的。即过表达mir都导致靶蛋白的下调，而封闭mir有可能导致靶蛋白的表达升高。注：封闭m i r导致靶蛋白升高也有很多例外，首先，可能本底该mir的表达量并不高，也不会对靶蛋白的量有太大影响；再次，m i c r o RN A对靶基因的调节都是比较温和的，而不像外源的s iR N A。

方法：在过表达mir-X时，同时过表达靶标蛋白，或者在

mir-X封闭的条件下，同时干扰靶标蛋白，如果我们在这个基础

上，再过表达靶蛋白，如果细胞或者动物在功能上重新回归或

者部分恢复到对照水平，则充分说明mir-X是通过或部分通过

该靶蛋白通路，影响了功能表型。注：Th物体内上下游信号

通路错综复杂，很难只改变一种因素就把Th物体回归到正常，所以部分恢复也是很有意义的。

7

人Mi r9靶基因外源性l u c i f e r ase验证方案

一、人m i r9过表达载体和H ES1基因3’UTR区报告载体的

构建1.包含m i r9前体的片段的调取

从m i r d a t a b ase中查找m i r9前体片段，然后往上下游各推100bp左右作为目的片段，设计引物进行调取。

2.m i r9过表达质粒构建将调取的含有mir9前体的片段通过酶切，

连接装入克隆载体，

进行mir9过表达质粒构建，并测序鉴定。3.H ES1基因的3’UTR

区调取

通过pubmed查找HES1基因的3’UTR区序列，针对序列设计特异性引物进行片段调取，或者通过直接合成获得HES1基因

的3’UTR区。

4.H ES1基因的3’UTR区报告载体的构建将HES1基因的3’UTR

区片段通过酶切、连接克隆入含有荧光

素报告酶基因的p s i C h eck载体上，并进行测序鉴定。

二、Mir9靶基因外源性验证1.M i r9过表达质粒和含有H ES1基因的3’U T R区报告载体共转染目的细胞

大量扩增M i r9过表达质粒和含有H ES1基因的3’UTR区报告载体按照转染试剂说明书要求共同转染293T细胞，进行Mir9靶基因外源性验证。

2.M i r9靶基因外源性l u c i f e r ase验证

根据P r o m e g a D u a l-Lu c i f e r ase sys t e m试剂盒操作说明，

用测定仪分别测定h l u c和R l u c发光值，并记录。

如何实施高效课堂教学策略

如何实施高效课堂教学策略 第一、以有效的课前准备保障高效的课堂。 “台上一分钟，台下十年功”，要实现课堂高效，必须下足课前准备功夫，备课不是单纯地写教案,而必须备教材、备学生，不但要花功夫钻研教材、理解教材，仔细琢磨教学的重难点，更要了解学生的实际情况，根据学生的认知规律选择课堂教学的“切入点”，合理设计教学活动。仔细考虑课堂教学中的细节问题，对于课堂上学生可能出现的认知偏差要有充分的考虑，针对可能发生的情况设计应急方案，确保课堂教学的顺利实行。还要设计高质量的有针对性的课堂练习。再根据教学过程的设计和教学的实际需要制作好教学所必须的教具或课件、学生操作的学具等。 第二、改进课堂教学结构和教学方法，营造轻松和谐愉悦的课堂教学氛围，充分调动学生学习的积极性和主动性，提升课堂效率。 教学有法，教无定法,贵在得法。要提升课堂教学的效率，就必须对传统的课堂结构实行改进。依据教学内容，结合学生的实际，把握好课堂教学的最佳时机，合理调整教学环节的时间分配，精讲精练，讲练结合，达到课堂结构的最优化，课堂效果的最佳化。 心理学家研究发现：人在轻松的氛围中思维处于最佳的状态。学生也只有在轻松和谐愉悦课堂氛围中，才能有最理想的学习状态。教师应善于使用一些策略，创建和谐的课堂氛围。教师亲切的笑容、适度的幽默、鼓励性语言、师生平等互动以及小游戏等都有助于营造良好氛

围。如果我们能够营造出“民主、平等、尊重、理解、注重、赏识”的新型的师生关系和和谐愉悦的课堂教学氛围课堂氛围，就能够使学生身心愉快、思想活跃，结出课堂教学高效率的硕果。 第三、课堂教学必须“务实”才能“高效”。 当前课堂教学不同水准存有形式主义、惟美主义，华而不实的花架子。课堂教学必须务实才能高效。 1、高效课堂理应是平实的。也就是指在教学中要讲求实在。实实在在地设计教学，实实在在地落实教学目标，实实在在地完成教学任务，而不是为了炫耀教师水平而追求“奇”、“特”、“巧”等。 2、高效课堂理应是真实的。所谓真实，指的是还课堂的本来面目。但必须从教学实际出发，在继承优良的基础上改革和创新提倡自主创新、张扬个性与合作学习。 3、高效课堂理应是丰实。所谓丰实，指的是课堂有生成性，即在教师指导下，学生在掌握基本知识的前提下有所升华。 4、高效课堂理应是扎实的。所谓扎实，是指课堂教学要有实际意义，要根据已经设计的目标、方法和学生的学习任务而使绝绝大部分学生能够学有所得，而不是仅限于少数学生与教师互动，绝绝大部分学生充当听众。 2、总来说之，课堂是我们教学的主阵地，要切实的提升教育教学效率，课堂就是我们的主战场。影响课堂效率的因素很多，但课堂教学因素占了相当的比例，我们只有理性地理解我们的课堂教学，客观地面对我们的课堂教学存有的问题，才能持续改进我们的课堂教学。

代谢相关疾病基因功能研究介绍

代谢相关疾病基因功能研究介绍 代谢是生物体内所发生的用于维持生命的一系列有序的化学反应的总称。常见的代谢性疾病有糖尿病、肥胖症、骨质疏松、痛风、脂质代谢紊乱以及甲状腺、垂体、肾上腺、性腺、甲状旁腺等疾病。 一、疾病模型 (一)糖尿病模型。糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素 分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。在对糖尿病的研究中，常见的模型 包括： 1.一型糖尿病模型 A药剂诱导型：①STZ (streptozocin), 链脲菌；②Alloxan,四氧嘧啶 B自发型：①NOD (non-obese diabetes)小鼠；②AKITA小鼠 2.二型糖尿病模型 A肥胖二型糖尿病模型 ①db/db小鼠 ②ob/ob 小鼠 ③Zucker fatty大鼠 ④ZDF (Zucker diabetic fatty) 大鼠 ⑤果糖（fructose）长期饮食的二型糖尿病动物模型 ⑥果糖短期饮食+低剂量STZ一次投药 B瘦型二型糖尿病模型 GK(Goto-Kakizaki )大鼠 (二)肥胖症模型。肥胖症是一组常见的，古老的代谢症群。当人体进食热量多于消耗热 量时，多余热量以脂肪形式储存于体内，其量超过正常生理需要量，且达一定值时 遂演变为肥胖症。在对肥胖的研究中，常见的模型有： 1.谷氨酸钠(MSG)诱导的肥胖动物模型 新生小鼠或大鼠皮下注射MSG可诱导其产生肥胖。脂肪堆积是MSG肥胖动物的主要表现,其体脂在2周龄时即显著增加,一直增加到4月龄时。在30～90d时即已形成脂肪肝。 2.金硫葡萄糖(GTG)致肥胖模型 给成年小鼠腹腔注射GTG可诱导其产生肥胖, GTG所诱导的肥胖,被人们普遍认为系下

探讨高中生物高效课堂的构建策略 崔卫国 吕 敏

探讨高中生物高效课堂的构建策略崔卫国吕敏 发表时间：2015-02-03T10:50:38.660Z 来源：《素质教育》2014年12月总第167期供稿作者：崔卫国吕敏 [导读] 新课程改革对高中生物课堂教学提出的要求是不断追求常态课中的高效教学。 崔卫国吕敏山东省寿光市第二中学262713 摘要：高中生物是一门较为基础的课程，它能够帮助学生以更加科学、客观的眼光认识生活中的常见生物现象，与学生的现实生活息息相关，因此加强高中生物教学就显得尤为重要。在新课程改革的背景下，必须要通过构建“高效课堂”提高高中生物的教学效率与教学质量，使学生的生物能力得到快速、有效的提升。 关键词：高中生物高效课堂构建策略 新课程改革对高中生物课堂教学提出的要求是不断追求常态课中的高效教学，显而易见，如何构建高效课堂成了目前高中生物课堂教学面临的主要任务。在新课程改革之下，最重要的是改善传统教学，构建高校课堂，不仅要提高课堂教学的有效性，让学生学到知识和技能，还要让学生获得影响今后发展的学习方法和学习习惯，掌握科学的思维方式，形成正确的人生观和价值观，进而促进个人的全面发展。为了做到这一点，需要对高中生物课堂教学进行详细的设计，逐步构建高效课堂，为学生提供一个相对高效、成熟的学习环境。 一、高中生物课堂教学中存在的弊病 1.教师教学理念传统保守，课堂教学方法落后。现如今在生物课堂教学中普遍存在的问题之一是教师与学生之间的教与学的默契问题。课堂教学氛围不浓，缺乏学生与教师的互动，缺乏深层次的思想碰撞与情感交流，缺乏课堂教学的实效性提高。导致以上问题产生的主要原因还是教师对新课程标准教学理念的解读不够彻底，依旧秉承传统教学理念进行教学研究，不注重教学方法的创新研究。 2.学生主体地位被忽视，学生学习生物热情丧失。新课程标准的主要核心教学理念就是“以学生主体，教师为主导”的新型创新教学。教师在教学活动中应当以引导学生自主学习为主要教学目标，挣脱传统教学理念的束缚，重视启发式教学模式的合理引导，真正实现课堂教学的民主。但是现阶段生物教学却暴露出严重的课堂教学“反噬”现象，教师仍然采用“满堂灌”的教学形式，置学生学习的主体性于不顾，学生学习热情逐渐丧失。教学现状不容乐观，亟待反思。 3.实验教学定义模糊，多以观摩实验为主。高中生物课程作为一门理科课程，不容忽视的一点就是实验课程的教学．然而，由于生物课程的开课阶段较晚，学校、教师与学生的重视程度都远低于物理、化学等学科。虽然许多学校都开设了生物实验课程，却是名存实亡，实验课程被当作理论课程开展教学的现象屡屡存在，本来的动手实验教学变成了“黑板实验教学”、“多媒体投影教学”、“录像演示实验教学”等．这使得原本锻炼学生动手实践的实验课成了学生被动接受实验数据的讲授课。不仅严重妨碍学生动手创新能力的发展，而且其学习兴趣也在反复与枯燥中逐渐消耗殆尽。 二、生物教学高效课堂的构建策略 1.改变教学观念，发挥学生主动性。新课程标准下的课堂教学是为生命意义而发展，并不是为传授知识而存在。因此，要变权威型的师生关系为伙伴关系，突出学生学习主体地位，明确教师的指导作用，让学生由被动接受教育转变为主动发现学习，即把“要我学”变为“我要学”，让学生的探索求知在先，教师的指导帮助在后，使教师的“教”由学生的“学”来安排确定，真正把课堂变为“学堂”。教师应经常树立这样的思想：学生是学习的主人，教师只是帮助学生学习。因此，在教学中，教师应成为学生学习活动的积极参与者。教师要对学生的所想、所乐、所忧心中有数，通过认知引导、个体疏导、情感诱导、操作指导等方法，以宽容之心、鼓励之态尽到自己“导”的职责。同时，也正是在参与中，教师可以从中学到很多新东西，在参与中学习，在学习中指导。 2.用生动灵活的教学方式，激发课堂活力。新课标要求我们建立以自主、合作、探究为主的教学模式，激活学生的好奇心、探究欲，培养学生主动思考、质疑、求索以及善于捕捉新信息的能力，并把这种能力的培养定为课堂教学的终极目的。为此，我们仔细研究教育心理，准确把握初一学生的心理特征和思维特点，积极探索有利于激发兴趣、激活思维、激励探讨的课堂教学方法。 3.重视实践教学，培养学生创造性。生物作为一门建立在实验实践基础上的学科，实验在教学中有着十分重要的地位，对促使学生具备初步的生物实验操作的技巧，形成一定的科学实验探究能力，培养学生的科学严谨的思维逻辑发挥着不可替代的作用。以往的高中实验教学中，实验多为验证性实验，教学也多是教师做、学生看的教学模式，学生自己实际动手操作的机会较少，难以激发学生对实验课的兴趣。高中生物探究性实验教学需要学生积极地参与进去，可以最大限度地激发学生的兴趣和创造力，同时能体现学生的自主性。探究性实验不具备确定性，需要学生切实的实验，才能得出结论，这就开拓了学生的视野，培养了思考能力，有利于创新意识和实践能力的提高，探究性实验具有相对的灵活性，有利于学生形成发散性思维和素质的全面培养，能够引导学生积极参与课堂教学，提高学生的主动性，增加学生的兴趣，有效地提高课堂效率。 参考文献 [1]吴海防优化教学,赢得高效———浅析新课程下构建高中生物高效课堂的教学策略[J].课程教育研究，2014，（10）:177-178。 [2]赵素格怎样构建高中生物高效课堂[J].现代教育科学(中学教师)，2010，（4)：13O。 [3]孟晓红高效生物课堂模式浅淡[J].新课程(教育学术)，2010，（6):124。

有效课堂管理的策略

有效课堂管理的策略 摘要：良好的课堂管理既可以保证教学目标的实现，也可以促进学生身心健康发展，教师要顺利完成教学各个环节的任务，必须对课堂进行有效的管理策略：建立积极、正向、有序的课堂规则，教师灵活多变的管理方式，科学合理地编排座位。 关键词：课堂管理课堂规则教师 随着新课程改革的不断深入，传统的课堂管理方式已经逐渐显露出其固有的弊端。课堂教学及评价正渐渐地显示出其改革的意志和努力的方向，但课堂管理似乎在这场变革中显得异常“冷清”，要实践新课程理念指导下的课堂教学和评价，显然离不开有效的课堂管理。下面就有效管理课堂谈谈自己的拙见： 一、建立积极、正向、有序的课堂规则， 积极、正向、有序的课堂规则能规范课堂行为，维持课堂秩序。课堂规则是课堂成员应该遵守的保证课堂秩序的基本行为规范和要求，具有规范、指导和约束课堂行为的效力，使学生明白什么行为是好的，什么行为是不好的，什么应该做，什么不应该做，有助于维持良好的课堂秩序和及时纠正问题行为，建立良好的课堂内部环境。从这个意义上说，课堂规则具有维持功能。此外，课堂规则一旦被学生接受、内化以后，就会变成学生自觉主动的行为，激发学生主体意识和自我管理的动机状态，形成和发展学生的自律品质，养成良好习惯。 制定课堂规则的原则和要求： 1.首先，课堂规则应由教师和学生充分讨论，共同制定。课堂规则不是目的，只是手段。由学生参与讨论而制定的课堂规则，会在很大程度上满足学生的需要和愿望，容易被学生接受和内化，从而自觉遵守课堂规则。因此，教师应提供机会让学生参与制定课堂规则，但在确定所期望的学生课堂行为标准时，教师要考虑这样几个问题：所确定的行为要求是否有利于学生的身心发展?行为要求是否影响课堂秩序和学生的学习?行为要求是否体现了对学生的尊重?行为要求是否 切实可行?行为要求是否具有改变或修正的可能性?等等。 2.其次，课堂规则应少而精，内容表述以正向引导为主。课堂规则应是所有学生均应共同遵守的课堂行为规范与要求，因此应尽量制定出最简明、最基本、最适宜的规则。一般以5-10条为宜。消极、负向的课堂规则不利于课堂学习纪律的管理。这样的规则常常会引导学生关注消极方面，反而淡化学生的积极动机与态度，从而进一步强化低水平的道德发展，无助于发展学生高水平的、具有社会价值的道德水准。因此，在制定规则时应坚持正面表述为主，多用积极的语言，

对高中生物课堂有效教学的初步探索-文档资料

对高中生物课堂有用教学的初步探索 课堂教学的有用性主要是通过转变教学观念，合理设计教学内容，对教材进行整合，在实验中引导学生探究与发现，通过模型来建构知识。我在教学中对高中生物课堂的有用教学主要在以下几个方面进行了分析。 一、对课堂教学有用性的理解 课堂教学有用性主要是指通过课堂教学使学生得到了应有的进步和提高。也就是让学生的认知由不会到会，由不知到知，学生的学习态度由不喜欢到喜欢，从没有兴趣到非常感兴趣的过程。 有用教学的目的是提高工作的效益，实现课堂高效的教学理念，在这种教学过程中不做无用功，使教育教学具有针对性、有用性以及策略性。 二、实现高中生物课堂教学有用性的基础 1.提高教学目标的有用性 高中生物教学目标是教师活动的指导方向，目标能否实现也是对课堂教学是否有用的判断依据，所以在进行教学设计时，一定要详尽、明确，具有可操作性。 2.提高课前备课的有用性 通过各种集体研讨制度提高备课的有用性，备课组长确定集体备课的详尽时间、详尽地点，明确备课目标，再就是优化集体备课的方法，使集体备课的质量得到提高。 3.提高课前预习的有用性 教师给学生提供预习的方法，课前教师根据教学内容布置一些预习题，预习以后要进行课堂检查。 三、高中生物有用教学的设计策略 1.自主建构式策略

自主学习主要是通过学生自主建构知识，以实现高品质的学习为主要特征。高中生物中的某些知识不需要教师的讲解与指点学生就能自己掌握，对于这类章节可以让学生通过主动建构的方式来实现自主学习的目的。对于这类知识，教师可以为学生创设一定的情境，通过已有的学习经验及同学、老师的帮助，借助于学习资料进行学习。在这种意义建构的基础上，使学生成为主动学习者，在学习的过程中实现自主体验、自主探究、自主实践的学习态度。这段时间内，教师对建构的知识进行设计，学生在课堂上进行支持并实施。 比如，我在和学生学习生态系统的类型和结构这一部分的知识时，在课堂上提出本节学习的任务，让学生通过自主学习的方式。学生自学课本内容，观看教师播放的课件及本节的素材对知识进行探索，再通过互相交流，对知识做到整体把握，教师根据学生不能完成的任务进行教学，并引导学生结合所学知识进行理解，必要的情况下要进行讲解与点拨，使学生受到启发，这种教学方法比纯正地讲解更有用，再就是在其他几章的学习中，也通过这种方式进行教学，取得了优良的教学效果，学生对知识的掌握有一定程度的提高。 2.合作互动式策略 在生物课堂上，我给学生进行分组，以小组合作的形式，以团体成绩作为评价标准，对例外基础的学生进行明确分工，在合作互助中掌握知识，使学生的思维及能力实现互补，让学生在动脑、动手、动口中提高自己，通过集体学习培养与他人合作的能力，并在合作中掌握了知识，师生间还不断交换思想，分享获取知识的经验，使班集体的整体认知水平有所提高，通过合作互动的学习方式实现有用的教学策略。 作为一名教师，在高中生物课堂中为了达到有用教学的目标，我们更需要认真学习，从中领会新课程的理念，我们要对学生资源加以关注并不断开发，以现代教育理念为指导，通过不断反思，使课堂的有用性得到提高，教学的效率得到有用提高，使教师自身专业水平有更大的提高。

汉恒生物 荧光素酶实验原理

汉恒生物 荧光素酶检测服务 汉恒生物科技（上海）有限公司 地址：上海浦东新区蔡伦路150号1号楼

psiCHECK2---miRN A与其靶点相关分析,包括miRNA靶基因验证(参考案例二A和B)、lncRNA (参考案例三)与circRNA (参考案例四)吸附miRNA 验证等。需要把miRNA 潜在结合靶点克隆到R-Luciferase (hRLuc) 3’UTR区域，然后与待测miRNA共同转染细胞内测定R-Luciferase活性高低，F-Luciferase （hLuc+）作为校正内参校正不同样品之间转染的转染效率。 pGL3-Basic---用于转录因子结合位点与启动子活性分析。把待分析启动子区段构建到F-Luciferase上游，和转录因子共转染分析F-Luciferase活性即可反应启动子的活性高低。该质粒通常需要结合持续性表达R-Luciferase的载体作为内参以校正不同样品之间转染的转染效率(参考案例一)。 两种常用载体类型极其应用场景 技术线路 学术、技术团队根据顶级学术论文真实案例协助方案设计 根据实验目的确定设计方案 采用汉恒HB-Infusion TM 无缝克隆策略，提高载体构建效率 根据实验目的确定设计方案 独家定制的转染试剂和病毒转导 系统确保基因转导效率 根据实验目的确定设计方案 顶级商品化检测试剂盒和强大高 效的检测仪器 根据实验目的确定设计方案 详实的原始数据，细致的结果分 析，清晰的实验结论 根据实验目的确定设计方案

LncRNA转录因子结合位点与启动子活性分析 论文来源: Wang, P ., et al. (2014). "The STAT3-binding long noncoding RNA lnc-DC controls human dendritic cell differentiation." Science 344(6181): 310-313. 本文是曹雪涛实验室在2014年发表在Science上一篇研究性论文。作者通过芯片鉴定出DC (树突状细胞)发育相关的一个lncRNA，命名为lnc-DC。同时高通量测序也发现了这条差异lncRNA的存在。进而作者通过Northern Blot验证了这条lnc-DC。由于lnc-DC极其特异和稳定地高表达在DC发育过程的某一时期，所以作者假设lnc-DC可能是和表观遗传学调控事件相关的。为了验证这一假设，作者通过染色体免疫沉淀结合测序的技术-CHIP-seq和qPCR发现lnc-DC的转录起始位点（TSS）附近富集了Pol II、H3K4me3和H3K27ac等蛋白（下图A），提示DC发育过程中表观遗传学变化与lnc-DC的转录增强事件相对应。进而作者通过序列分析发现在lnc-DC的转录起始位点附近（+44-+50）存在一个经典的PU.1结合位点。作者假设PU.1参与了lnc-DC的特异性表达。于是作者设计了如下实验进行了进一步的验证（下图B）。 作者把lnc-DC的启动子区段（-1447-+223）及其不同的突变体版本分别克隆到F-Luciferase表达框上游，然后和转录因子PU.1表达质粒或者空载体（Vector）共同转染到模式细胞系HEK-293T，通过测量荧光强度的变化间接反应转录活性的高低。最终证明转录因子PU.1通过经典结合位点（+44-+50）介导了lnc-DC在DC发育过程中的特异表达。 LncRNA通过吸附miRNA调控靶基因mRNA的表达 (ceRNA) 论文来源: Cesana, M., et al. (2011). "A long noncoding RNA controls muscle differentiation by functioning as a competing endogenous RNA." Cell 147(2): 358-369. 作者通过表达分析发现了一条肌肉发育相关的lncRNA---lnc-MD1.前期功能研究发现lnc-MD1可以调控肌肉分化的时间。信息学分析发现这条肌肉特异的lncRNA上包含36个miRNA的结合位点。如果只考虑肌肉发育相关的miRNA和基因，36个候选miRNA里面只剩下miR-133和miR-135。作者通过荧光素酶实验进行了验证。首先作者把野生型及其缺失miR-133和miR-135结合位点的Lnc-DC1克隆到进R-Luc的3’UTR，然后分别与表达miR-133和miR-135前体的质粒共同转染到细胞进行荧光素酶活性检测（下图A和B）。证明lnc-MD1缺失存在miR-133和miR-135的结合位点。 进一步的信息学预测，miR-133和miR-135分别靶向两个基因- MAML1 和 MEF2C。同样，作者还是通过荧光素酶实验进行验证。研究者把MAML1 和 MEF2C的3’UTR （WT）和miRNA结合位点缺失突变体（-mut）分别克隆在RLuc表达框的下游，然后和miRNA过表达载体共转染细胞进行酶活测定。结果显示miR-133和miR-135确实分别靶向了MAML1 和 MEF2C两个基因（下图C）。最后的模型是lnc-MD1通过ceRNA机制吸 附miR-133和135，正向调控了MAML1 和 MEF2C的表达，参与调控肌肉发育。 经典应用案例二

促进课堂教学有效性的管理策略

促进课堂教学有效性的 管理策略 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】

促进课堂教学有效性的管理策略 江苏省丰县欢口中学李景民 [摘要] 低效课堂的六多六少现象，学校从重视教师观念更新，同课异构，评价引导，校本研修，人本化管理等方面，对促进课堂教学有效性作了尝试。 [关键词]有效教学；管理策略 教育质量不等于考试成绩，不等于升学率。但在现实中，社会评价一所学校的时候，总是情不自禁、不由自主的首先看甚至只看考试成绩和升学率，社会评价在一定程度上决定着学校的生路。在这种情况下，我们不重视成绩和升学不行，那就等于对学生的“前途”不负责任，就是人民不满意的教育。但重视成绩的方式如果错了，扼杀学生的学习欲望，蔑视学生受用终身的学习方法和习惯，损害学生的身心健康，更是对学生、对社会的不负责任。在我们实际工作中，重视成绩、提高成绩，而采取最多的方法常常是挤占学生的休息、锻炼时间，甚至个别教师抢占学生自修时间反复讲授。因为只要最后成绩好了，一切的不合理也都合理了。因此，作为教育工作者知道这种方式是有损于学生的学习热情，有害于学生身心的发展，又希望用合理的方式争取好成绩，怎么办有位学者说：追求升学的世俗价值观，合情；讲求素质的理想价值观，合理，我们只能在两者之间寻找一种平衡点，这一平衡点就是有效教学。有效教学关注学生的进步和发展，不等于考试的高分数，但不排斥考试高分。也就是在效果＝效率×时间公式中，不单是关注时间要素，更重要的是关注效率要素，而目前的相当

一部分教师课堂教学有效性严重缺失，低效甚至是无效课堂，总结开学以来的四十多节听课，存在着以下现象： 1．理念了解多，实际运用少 多数教师在教育教学理念方面都能说出个一二三，比如：以学生为本，教学民主，回归生活，关爱自然，促进学生个性发展，为学生的终身发展奠基等等。而在课堂教学实施过程中却看不到新理念的踪影，体现不出学生为本的思想，置学生于被动学习地位，以静坐、静听的方式接受和记忆知识，学生的思维过程为教师所把持和牵制，是教师思维的再现与印证，教师也常常是为自己设计的教案和思路所束缚，预设有余，生成不足，不能放手，教学无创意，缺乏学生主动参与学习的机会。 2．知识讲授多，方法引导少 备课笔记多是知识点的罗列，课堂教学上对知识点求全求美，缺乏知识传授的方法、措施、手段，看不到学生参与的形式、时间、空间，课后常说的是哪一点没讲到，而不是哪一处学生没参与好。备课上课不关注学生的情感需要、认知需要、学习策略需要，更不关注学生的最近发展区。学生对某一知识点的认识和理解深度，常常是随学生学习的逐步深入而深化，不是一节课就可以理解到位，而一些教师为追求知识的系统性、完整性，在某一新知识刚刚建立时，就将其相关内容一股脑抛给学生，搞得学生一头雾水，挫伤了学生的学习成功感，降低了学习热情，违背循序渐进规律。更缺少对学生阅读、听课、思考、探究、概括、笔记等学习方法的指导。 3．结论告知多，过程探究少

高中生物课堂教学有效性的建议

高中生物课堂教学有效性的建议 【摘要】新课程改革必须面对的一个问题就是如何实施有效的课堂教学，使课堂教学效益最大化。本文从系统全面深入地解读课标，精选整合教学内容，自主、合作、探究的学习方式，有效的教学方式、提高教学效益，激励性多元化的教学评价等五方面论述了实现课堂教学有效性的建议。 关键词：新课程课堂教学有效性 “以人为本，以学生的发展为本”是新课程改革的核心理念之一，其具体目标就是要改变过去强调接受学习、死记硬背、机械训练的现象，让学生自主地学习、积极地参与、主动地探究，自由地放飞心智与心灵。培养学生搜集和处理信息的能力、获取新知的能力、分析和解决问题的能力以及交流与合作的能力。然而，我们清醒地认识到在活跃与主动的背后，折射出放任与浮躁，我们的课堂教学多了些新颖的形式和茫然的教学行为，却忽视了课堂教学的有效性。如何提高课堂教学的有效性，让课堂教学更科学、更有效？让课堂焕发出生命的活力，这是每一位一线教师的追求。 1对课堂教学有效性的认识和理解 1.1课堂教学有效性指什么 查阅了很多资料，认为教育部课程改革专家组核心成员、福建师大余文森教授的解释比较全面：“有效性课堂教学是指通过课堂教学使学生获得知识、技能，过程、方法与情感、态度、价值观三者（三维目标）的协调发展。”通俗地说，课堂教学的有效性是指通过课堂教学活动，学生在学业上有收获，有提高，有进步。具体表现在：学生在认知上，从不懂到懂，从少知到多知，从不会到会；在情感上，从不喜欢到喜欢，从不热爱到热爱，从不感兴趣到感兴趣。 1.2课程教学有效性的考量标准 对于“课堂教学的有效性有哪些标准？余教授认为，“课堂教学的有效性特征（或表现）可以列举很多，但最核心的一点是看学生是否愿意学、主动学以及怎么学、会不会学”。学生学习有效性的三个考量指标，学习时间、学习结果、学习体验。从更高的更广阔的视野来分析这三个指标：学习时间（投入）：学习特定内容所需要的时间，它意味着学习效率，即学习速度的快慢；学习效果（产出）：指学生经过学习所发生的变化、获得的进步和取得的成绩，即学习收获，通过学习获得什么。学习体验：指学生的学习感受，即学习活动所伴随或产生的心理体验。 2基于新课程背景下高中生物课堂教学有效性的建议 2.1系统全面深入地解读课标 国家课程标准是教材编写、教学、评估和考试命题的依据，是国家管理和评价课程的基础。它体现国家对不同阶段的学生在知识与技能、过程与方法、情感态度与价值观等方面的基本要求，规

自噬监测——LC3双标腺病毒(完整版)

自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南 1 自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南 背景： 自噬是细胞内的一种“自食（Self-eating ）”的现象，凋亡是“自 杀（Self-killing ）”的现象，二者共用相同的刺激因素和调节蛋白， 但是诱发阈值和门槛不同，如何转换和协调目前还不清楚. 自噬是指 膜（目前来源还有争议，大部分表现为双层膜，有时多层或单层）包 裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体，最后与 溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，以实现细胞稳 态和细胞器的更新。目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略 和手段有：通过western blot 检测LC3的剪切；通过电镜观测自噬体 的形成；在荧光显微镜下采用GFP （-RFP ）-LC3等融合蛋白来示踪自 噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多，针对于此我们 汉恒生物科技（上海）有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流) 的mRFP-GFP-LC3腺病毒，mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指 示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对 酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检 测到红色荧光。这种串联的荧光蛋白表达载体系统直观清晰的指示了 细胞自噬流的水平，是我们自噬研究尤其是自噬流研究不可或缺的利 器。

mRFP-GFP-LC3腺病毒的操作 收到病毒后的处理 （一）、腺病毒的储存 1、腺病毒采用冰袋运输。 （1）、收到病毒液后如未融化请置于-80℃冰箱，下次使用时再进 行分装； （2）、如客户收到时腺病毒已融化，请直接分装后置于-80℃冰箱 保存；若短期内用于实验，可分装部分于4℃保存（尽量一周内用完）。 2、尽量避免反复冻融，否则会降低病毒滴度（每次冻融会降低病 毒滴度10%）。建议不要在-20℃下长期保存。如果病毒储存时间 超过6个月，应该重新测定病毒滴度。 3、建议收到病毒产品后根据实验需求自行分装或购买经过分装的小 包装病毒产品（购买时请提出）。 （二）、腺病毒的稀释需要稀释病毒时，将病毒取出后置于冰上融解，使用培养目的细胞 用PBS 或培养基稀释到所需浓度后混匀分装后4℃保存，并尽快用于 实验（尽量一周内用完），动物实验建议使用注射用平衡液来稀释， 并尽快用完。 感染目的细胞 2

课堂管理的有效策略

课堂管理的有效策略 1．聚焦 在你开始上课之前，一定把教室里所有人的注意力都集中在你的身上，如果有人在私下聊天，你不要讲课。 没有经验的教师或许会认为，只要开始上课了，学生自然就会安静下来，以为学生会看到课堂已经开始，该进入学习状态了。有时这会起作用，但学生并不一定总会这么想，他们会认为你能接受他们的行为，不在意你讲课时有人说话。 聚焦这个技能意味着，你应该在开始上课之前要求学生集中注意力，即只要还有人没安静下来，你就一直等下去。有经验的教师的做法是，在所有学生都完全安静下来之后，再停顿三五秒钟，然后才开始用低于平时的音调讲课。 讲课语气温和的教师，通常比嗓门大的教师课堂更加安静。学生为了听到他的声音会保持安静。 2．给学生交底 如果学生对这节课的安排心中无数，这就会增加他们在课堂上的不安定感。所以，教师应该在每节课的一开始就明确地告诉学生这节课要做什么，以及每个环节大约需要多少分钟。 为了使学生积极配合教师完成教学任务，教师能够让学生的心中有一个“盼头”，告诉他们在这节课的结尾阶段他们能够做的事情。比如，在向他们说明了本节课的教学安排后，能够说：“如果实行顺利，我能够让你们在这个小时的最后阶段跟朋友聊天，或到图书馆去，也能够赶做其他科的作业。”这样的安排也会让那些喜欢上课讲话的学生有所收敛。 如果教师知道他完成教学目标有富裕的时间，他也就更愿意在上课之初等待大家都集中注意力。学生们会很快意识到，教师等待他们的时间越长，他们在课堂结束前的自由时间就越少。 3．实时监控 实施这个条的关键是在教室里四处走动。当学生在做作业时，在教室里巡回走动，检查他们做的情况。 有经验的教师会在学生开始做作业两分钟后对教室实行巡视，看是不是所有学生都开始做了，都在做该做的事情。延迟两分钟是很重要的，因为学生已经做出了一两道题，或写完了几个句子，这样你就能够检查是否准确。对于需要协助的学生，教师应提供个性化的辅导。 那些还没怎么开始做的学生会因为老师走到跟前而加快速度，而开小差的学生也会被其他同学提醒。除非教师发现了共性的问题，教师不要打断全体学生，不要集体指导。 4．以身作则 教师在课堂上应该给学生做出榜样，做到彬彬有礼、行动果断、持重而不缺乏激情，有耐心、有条理。如果教师让学生“照我说的做，不要跟我做的学”，只会让学生思想混乱，并引发不良行为。 如果你希望学生在课堂上用温和的声音说话，当你在教室四处走动，给学生提供协助时，你也应该用温和的声音说话。 5．非语言提示 过去，教室里有一个供教师使用的标准物件，那就是讲台上的摇铃。多年来，教师在使用非语言提示方面已有了很多创新。非语言提示包括面部表情、身体姿

浅谈基于核心素养的高级高中生物课堂教学策略

浅谈基于核心素养的高级高中生物课堂教学策 略 文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]

浅谈基于核心素养的高中生物课堂教学策略 秦志兴 【摘要】本文基于新课标与教学改革发展的趋势，探讨在高中生物课堂中培养学生的核心素养。以科学素材为媒介，构建学生的生命观念；以科学论证为导向，培养学生的理性思维；以合作探究为载体，提高学生的探究能力；以情境活动为载体，培养学生的社会责任感。 【关键词】核心素养高中生物课程标准 最新生物课程标准指出：高中阶段的生物课程既要让学生理解基础的生物学知识，又要让学生领悟生物科学家在研究过程中所持有的观点以及解决问题的技巧和方法。因此，学科教学不应仅仅为了获得学科的若干知识、技能和能力，而应同时指向学生的价值观、思维方式、思想情感等素养的培养与提高。生物学科核心素养的培养，需要紧密联系教学过程，通过不同形式的教学活动将知识转化为智慧，从而提高学生的综合素养。高中阶段的生物学科核心素养主要包括生命观念、科学思维、科学探究、社会责任等。基于课标与教学发展的趋势，本人结合自己的教学实践与思考，粗浅探讨在高中生物课堂中如何培养学生的核心素养。 一、以科学素材为媒介，构建学生的生命观念 生物学中的生命观念是指对观察到的生命现象及相互关系或特性进行解释后的抽象，是经过实证后的想法或观点，有助于理解或解释较大范围的相关事

件和现象的意识、观念和思想方法。学生应在较好理解生物学概念性知识的基础上形成生命观念，如结构与功能观、进化与适应观、物质与能量观等，并能用生命观念认识生命世界、解释生命现象。教师在教学中，应该充分挖掘和利用科学素材，为学生呈现生动的生命世界和生命现象，构建学生的生命观念。 例如：本人在教学《生物的生殖——减数分裂》时，这是理解生命如何延续的关键一节，理解了它也就理解了生命孕育的本质，懂得了生命的珍贵，在上这一节课时，教师可以用模拟实验来帮助学生理解生命信息如何传递的。首先教师要选择三对男同学和三对女同学（每对最好体型特征相像的，代表姊妹染色单体），然后每对中抽出一个同学组成一个“精原细胞”，一个男同学和一个女同学背靠背用胳膊勾起来，代表一条同源染色体，男同学代表来自父本的，女同学不代表来自母本的，教师在一旁讲解，当讲到染色体进行复制时，“精原细胞”中的每个同学就寻找事先安排好的“姊妹染色单体”，“姊妹染色体单体”要面对面抱在一起，当教师讲到同源染色本分离并自由组合时，每条“染色体”中的男同学和女同学分开，并分别到不同的“初级精母细胞”内，以示减数分裂第一次分裂完成，以后的过程以此类推，采用这种模拟实验的方法，可以形象地展示教学内容，让学生明白生命信息是如何传递的。同时，教师还要在其中作出假设，加入姊妹染色单体在分离时没分开，那么会怎样这种多了一条染色体或少了一条染色体的细胞会发育成一个健康的个体吗那么你应该怎么样珍惜自已健康的活泼的生命呢在生物教学中，教师要积极挖掘科学素材，通过不同的形式构建学生的生命观念，让学生学会认识自我、健康生活。

《高中生物课堂有效教学策略的研究》结题报告

《高中生物课堂有效教学策略的研究》结题报告 上传: 胡剑更新时间：2015-3-25 20:01:47 一、课题研究背景和价值 （1）背景 《中国教育报》2006年4月18日第8版载文说：“教育改革最终发生在课堂上，从某种程度上说，课堂是教育改革成败关键所在。”东京大学佐藤教授在《静悄悄的革命》中说：“现在一所学校要有发展，要有改进，教师要敞开教室的大门，相互评论，连环跟进，除此之外，别无他法！”从上面可以看出，无论国内还是国外，课堂教学事关重大。课堂教学工作是学校一切工作的中心，它是达成教育目标、实施素质教育的主渠道。 1.课程改革的需要。 近几年来国家课程改革始终贯穿着一个非常清晰地教学改革逻辑，即教育改革的核心领域是课程改革，课程改革的核心领域是课堂教学改革。课堂的“有效教学”是新一轮基础教育课程改革必须跨过去的一个坎。否则，再理想的课程计划、课程标准和教科书，都不能化为现实，只是纸上谈兵。因此，研究高中生物课堂有效教学，是课程改革的需要。 2.事业的需要。 在第20个教师节，曾受到胡锦涛总书记接见的著名生物教育家，原北师大附中校长朱正威曾这样讲过：“高中生物学科教育，在基础教育的多学科中，虽只占一席之地，然而，它所承载的促进人的全面发展的任务却是全面的、艰巨的。如同一滴水珠能折射出阳光所包含的红、橙、黄、绿、蓝，靛、紫全部波长的光那样。”教育是有目的地有效地促进人发展的事业，所以说研究高中生物有效教学是我们事业的需要。 3.经济社会发展的需要。 温家宝总理曾深情地说：我的脑子里充满了忧患。“名为治平无事，实有不测之忧。中国经济存在着巨大问题。”江泽民同志对当今世界时代特征分析指出:当今世界，科学技术突飞猛进，知识经济已见端倪，国力竞争日趋激烈。科学技术突飞猛进，四大技术大显风采(1)生物技术(2)信息技术(3)纳米技术(4)认知科学。其中两大技术和生物有关。大家知道，技术的突破，将给经济带来巨大的效益。例如全世界治疗血友病，传统用献血，需500万人提供血浆。用转基因奶山羊来生产，那就只需1头这种转基因羊就可满足需要。一头转基因动物就是一座天然基因药物制造厂。世界上把生物制药产业称为钻石产业。如果没有今天有效的教学，就不可能有明天经济的腾飞。为此，研究高中生物学的有效教学，也是经济社会发展的需要。 4.现实的需要。 医生的成果在手术台上，袁隆平的成果在大地上，教师的成果应在课堂上。基于教学的出发点和归宿点。“有效教学”是我们每一个教师孜孜追求的东西，我们每一天的辛苦工作，就是要追求“理想的教学”：让学生学有所获，力求高效的最大限度的收获（实施有效教学）。我们一生的辛勤劳作，就是要追求当“理想的教师”：付出有回报，不做无效劳动，避免微效劳动（做能实施有效教学的教师）。通过我们有效的教育，提高教育质量，为国家培养更多的人才，为学校赢得更好的声誉。在一所学校里，若教师人人争当有效教师，个个实施有

语文高效课堂的教学策略

语文高效课堂的教学策略 摘要：高效的语文课堂是语文教学研究的重点，也是新课程改革提出的要求。随着经济的发展，时代的进步，人们越来越认识到效率的重要性，教师对于如何提高课堂效率，形成高效课堂的研究也是多种多样、精彩纷呈。给学生一个怎么样的课堂，让学生得到怎么样的发展显得尤为重要。 关键词：情感交流开放感悟 从教多年，为了能给学生更好的课堂，将知识以更艺术的方式传播给他们，我阅读了许多有关教育教学的书籍和名著。最近我拜读了《经典课堂》一书，此书收录了多位名师的经典教学实录，让我的确受益匪浅。拜读名著的同时，我常常在反思自己的语文教学：究竟给孩子们一个什么样的语文课堂？课程改革对于学生的影响非常深远，课程改革虽是一个实验的过程，但它却关系着千千万万个孩子一生的命运！教育家杜威先生说过：“给孩子读一个什么样的教育，就意味着给孩子一个什么样的生活！”我认为：教师在乎什么，学生就发展什么！教师给孩子什么样的课堂，孩子就拥有什么样的人生！如何给孩子一个经典的课堂呢？我有以下几点看法和体会：

一、情感的课堂 1.一个优秀的语文教师必须在课堂中引导学生，让学生在课堂中充满“激情”。在语文课中，如何体现语文学科的“人文性”，其基点就在于“情感”。一个充满激情的教师，才能调动学生的情感，让学生充满热情地学习。教师应该展现给学生一个“充满激情的我”，陪伴孩子度过每一段“燃烧的岁月”！让学生在充满激情的课堂中学习和成长。如教授《渔歌子》一课，教室通过激情的配乐朗读，让学生穿越时空隧道，与作者张志和同喜同乐，达到情感的共鸣。 2.教学活动中要注重置师生于课文、作者、情景之中，也就是“溶情”。“登山则情满于山，观海则意溢于海”，教学当中的“情”犹如教与学双边活动的“催化剂”，有了它，学生才会在教师的点拨下进入课文佳境。有了它，才能在课堂中使学生充满情感，融情于课堂，融情于人生。在“情”中体验人生，学会成长。 二、交流的课堂 生活中没有交流，就没有快乐；事业中没有交流，就没有成功；教学中没有交流，就没有乐趣。以前的语文课堂，学生只是可怜的倾听者，谈不上和谁去“交流”。交流是建立牢固、友好、长久的人际关系的重要条件。因此，为了避免这一点，我们在课堂教学中要还给学生一个“交流”的课堂，面对面的交流，心与心的对话，实现“文本对话”、“师

逆转录病毒试用装操作手册

汉恒逆转录病毒操作手册 一、逆转录病毒的试用装分装与储存 1.收到汉恒生物逆转录病毒产品后，请先对逆转录病毒产品进行分装处理，建议20-50μl/管。如1-2天内使用，则留足够量病毒4℃保存，余下逆转录病毒置于-80℃长期保存。 2.病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前重新测定病毒滴度。 3.反复冻融会降低逆转录病毒滴度：逆转录病毒滴度越低，冻融对滴度的影响越大，108IU/ml的逆转录病毒冻融2次滴度没有显著性差异，第3次冻融开始，每冻融一次滴度降低约10%；滴度107IU/ml滴度逆转录病毒，从第2次冻融开始，每次冻融病毒滴度下降10%-15%。 二、逆转录病毒试用装实验策略与关键知识点 1.逆转录病毒感染策略：逆转录病毒本身的病毒滴度不高，感染细胞时病毒消耗量较大，试用装体积较小，建议使用96孔板进行MOI梯度感染测试。逆转录病毒感染细胞后会反转录并插入基因组形成稳转，因此逆转录病毒感染一般采用感染少量细胞，然后将细胞放大化培养。而不是直接大量感染。 注意：对于一些传代能力较差的原代细胞，比如BMSC等，建议采用腺病毒感染。 2.逆转录病毒感染关键知识点 1）细胞准备：由于试用装体积有限，请使用96孔板准备细胞，逆转录病毒感染细胞前，请确保目的细胞状态良好、无支原体污染。逆转录病毒感染的时候细胞汇合率为40%～60%间为宜。 2）感染细胞最佳MOI的测定：MOI（感染复数）是指每个细胞感染的病毒数。 逆转录病毒对于不同种类不同来源的细胞，其最适MOI各有差别，原则上最适MOI是感染效率较好的最低MOI。MOI一般以3：10：30：100的比例递增进行梯度摸索，一般的细胞基础逆转录病毒感染MOI 可从3为开始，即设立4个常规的MOI摸索，即3，10，30，100。 3)助转剂polybrene的选择：实验证明，polybrene可提高逆转录病毒对大部分细胞的感染效率，但polybrene 有一定的细胞毒性，不同细胞对polybrene的敏感度不同，polybrene最常用的工作浓度为5～8μg/ml。 4）MOI对应病毒体积的换算（非常重要） 感染时细胞数（一般以传代计数细胞数×2计算）×MOI=病毒个数；则加入的病毒体积数=病毒个数/病毒滴度。

构建初中生物高效课堂的思路及策略

构建初中生物高效课堂的思路及策略 孟宪英 构建高效课堂，提高生物教学的信度，使生物教学真正做到“高效”，是我们生物教师首要的思考问题，是切实推进教与学方式转变，把新课程理念落实到日常教育教学行为的重要举措，是促进教师专业化发展和学生全面发展与个性发展的有效途径，是提高教育教学质量、减轻学生过重的课业负担的现实要求。 要构建高效课堂，首要要明白什么是高效课堂。高效课堂是基于有效教学理论的课堂教学追求，就是要追求课堂教学的高效率、高效果、高效益。课堂教学高效性是指在常态课堂教学中，通过教师的引领和学生的主动思维，在单位时间内高效率、高质量地完成教学任务、促进学生获得高效发展。它是教学过程的最优化，教学效果的最大化，是师生完美配合的结晶。评价高效课堂的基本原则不是看教师教学任务完成情况，而是要看学生意义建构情况，要看单位时间内真正学到的有用知识，要看所学知识的实际运用能力，要看学生精力投入与学业收获之间的效益比。 从教师角度来说，高效课堂应具备以下三个条件：一是教师能够依据课程标准的要求和学生的实际情况，科学合理地确定课堂的三维教学目标。因为教学目标的预设与课堂的实际情况不可能完全吻合，这就需要教师在教学的过程中对教学目标作出适时调整，最大限度地面向全体学生，使其更好地体现教学目标的适应性。二是教学的过程必须是学生主动参与的过程。这种主动参与主要体现在教师能否采取灵活机动的教学策略调动学生学习的积极性，能否积极引导学生积极思维，能否给予学生更多的时间和机会进行必要的合作和展示，使全班学生分享彼此的学习成果。三是教学中适时跟进、监测、反馈、消化，以多种方式巩固学生的学习成果，使三维教学目标的达成度更高。