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牛血清白蛋白定量分析试剂盒说明书

牛血清白蛋白定量分析试剂盒说明书
牛血清白蛋白定量分析试剂盒说明书

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全球领先的牛血清白蛋白(BSA)定量分析试剂盒

关键词:BSA,Bovine Serum Albumin,牛血清白蛋白

什么是牛血清白蛋白(BSA)?

牛血清白蛋白(BSA)是来自牛的血清白蛋白,是一种小而稳定的中等非反应性蛋白,它通常用作测定蛋白质浓度的标准品和免疫组织化学中的阻断剂。在免疫组织化学中,组织切片通常与BSA阻断剂孵育以结合非特异性结合位点。BSA也用作细胞和微生物培养物中的营养物质。在限制性消化中,BSA用于在DNA消化过程中稳定一些酶,并防止酶对反应管,移液管吸头和其他血管的粘附。

BSA结构图

对于某些特殊实验用途,研究者希望了解样品中BSA的含量,但是市场上却没有此类产

品,现在艾美捷科技为您推荐全新开发的BSA

原理:试剂盒利用双抗夹心法原理,基于BSA标准品,定量检测样品中BSA的含量,颜色强度与BSA含量呈正比。

*试剂盒检测牛血清白蛋白(BSA),而不是检测人血清白蛋白(HAS)

试剂盒特点:

1.比色法检测,无放射性

2.检测范围:468 – 30000 ng/ml

3.灵敏度:216 ng/ml

4.样品类型:血清,血浆,组织裂解液,细胞裂解液,细胞培养上清,以及其它生物液体

可靠精准的标准曲线图展示

牛血清白蛋白的提取与鉴定演示教学

如有侵权请联系网站删除 牛血清白蛋白的提取与鉴定 一、实验目的 1. 掌握牛血清白蛋白的提取与鉴定方法 2.掌握盐析法、透析法及电泳法 二、实验原理 牛血清白蛋白是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量68kD。等电点4.8。应用相同浓度硫酸铵盐析法将血清中白蛋白与其它球蛋白分离,最后用透析法除盐,即可提取白蛋白。再利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠度等有关,对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。 三、操作步骤 (一)盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS(磷酸盐缓冲生理盐水)稀释血清,摇匀后,逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL,边加边摇,充分混匀,然后静止放臵10分钟,再离心(2000r/min)10min,将上清液倾入试管中。 (二)透析(1 )取干净的比色板,在各孔内滴加一滴纳氏试剂 (2)透析袋未放入水中时,立即取水中液体检查有无NH4+ (3)取玻璃纸一张,折成袋形,将离心后的上清液倒入袋内,用线扎紧上口(注意要留有空隙),用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内,使透析袋下半部侵入水中,对蛋白液进行透析,常用玻璃棒搅拌袋外(烧杯中)液体,以缩短透析时间。 (4)每隔2分钟检查一次,更换蒸馏水多次,用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+,观察颜色变化并记录,直至袋内盐分透析完毕。 (5)将袋内液体倾入试管,即得牛血清白蛋白溶液。 (三)电泳(1)点样取一张膜条,将薄膜无光泽面向下,放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透,取出,用干净滤纸吸去多余的缓冲液,以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处作点样线,将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。标准液点一次,待测液点三次。 (2)电泳将点样后的膜条臵于电泳槽架上,放臵时膜条无光泽面向下,点样端臵于阴极,待平衡5min后,打开电源,调节电泳仪的电压为160伏,通电60min,关闭电源后用镊子将膜条取出。 (3)染色将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中,染2分钟取出,立即浸于漂洗液中,分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5min,直至背景漂洗干净为止,用滤纸吸干薄膜。(4)鉴定比较样品与待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果,看位置是否一致。 四、仪器和试剂 仪器:离心管、离心机、试管、玻璃纸、烧杯、比色板、滴管、玻璃棒、电泳仪、醋酸纤维素薄膜、天平 试剂:牛血清待测液、牛血清样品、PBS(磷酸盐缓冲生理盐水,用0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)配制的0.9%NaCl溶液)、pH7.2饱和硫酸铵溶液、纳氏试剂、巴比妥缓冲液、氨基黑10B染色液、漂洗液 五、预测结果位置一致,实验成功。若在待测液的电泳结果中出现其他球蛋白的黑带区域,则说明提取不够纯。 六、参考文献[1]陆红玲.生物化学与分子生物学实验教程.西安:第四军医大学出版社,2010 精品资料

牛血清白蛋白的提取与鉴定

第八次实验: 牛血清白蛋白的 提取与鉴定 一、实验名称牛血清白蛋白的提取与鉴定 二、实验目的1、掌握盐析法提取牛血清白蛋白 2、掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法 鉴定牛血清白蛋白 3、了解用溴甲酚绿鉴定血清蛋白 三、实验原理1,蛋白质是水化作用较强的高分子物质, 向其加入碱土金属的中性盐类可是蛋白质胶粒脱水并失去 电荷,从溶液中沉淀出来。球蛋白在半饱和的硫酸铵溶液 中可析出,而清蛋白则需在饱和的硫酸铵溶液中可析出。 可将血清中白蛋白与其它球蛋白分离,最后用透析法除盐, 即可提取白蛋白。2,利用电泳过程中带电粒子的移动速度

与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠 度等有关,可对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。3,血清中 的白蛋白与溴甲酚绿在ph=4.2的条件下结合生成绿色化合 物,溶液由黄色变为绿色,而球蛋白基本不与之反应,缩 短反应时间可去除干扰,其颜色的深浅与白蛋白浓度成正 比,可用于鉴定牛血清白蛋白。 四、实验步骤 (一)盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS磷酸盐缓冲生理盐水稀释血清,摇匀后,逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL,边加边摇,充分混匀,然后静止放臵10分钟,再离心(4000r/min)10min,将上清液倾入试管中。 (二)透析取玻璃纸一张,折成袋形,将离心后的上清液倒入袋内,用线扎紧上口(注意要留有空隙),用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内,使透析袋下半部侵入水中,对蛋白液进行透析,常用玻璃棒搅拌袋外(烧杯中)液体,以缩短透析时间。更换蒸馏水多次,用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+,观察颜色变化,直至袋内盐分透析完毕。将袋内液体倾入试管,即得牛血清白蛋白溶液。(三)BCG法鉴定 白蛋白+溴甲酚绿ph=4.2 绿色复合物 或(三)电泳鉴定

牛血清白蛋白

BSA牛血清白蛋白 牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种球蛋白,包含583个氨基酸残基,分子量为66.430 kDa,等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用,例如在western blot中作为Blocking agent。 CAS号:9048-46-8 英文名称:Bovine albumin 英文同义词:nhsa;BSA-C;AC-BSA;ALBUMIN, PIG;albumenpowder;SERUM ALBUMIN;ACETYLA TED BSA;BSA ACETYLATED;Bovine albumin;BSA, METHYLA TED 中文名称:牛血清白蛋白 中文同义词:蛋白粉;牛白蛋白;卵蛋白粉;血清蛋白;血清白蛋白;牛血蛋白质;复合氨基酸;牛血清蛋白;牛血清白蛋白;血清白蛋白(牛) CBNumber: CB5107573 分子式:N/A 英文别名:Bovine serum albumin 化学性质 储存条件: 2-8°C 溶解度: PBS: >40 毫克/毫升 form : lyophilized powder Merck : 13,8542 稳定性:Stable. Incompatible with strong oxidizing agents and strong acids. Refrigerate. EPA化学物质信息:Albumins, blood serum(9048-46-8) 用途 1、用于生化研究、遗传工程和医药研究 2、用作医药保健食品、调味品 3、维持渗透压、pH缓冲、载体作用 4、在PCR体系中有助于Taq酶的稳定性及活性,可以提高PCR的效率

牛血清白蛋白分离提纯工艺

课程设计说明书 课程名称:生物分离工程 设计题目:牛血清白蛋白的分离提纯工艺 院系:环境与化学工程学院 学生姓名:孙盼盼 学号:41004020111 专业班级:10级生物工程01班 指导教师:王晓军 2013年6月20日

目录 1.设计任务书 (1) 2.设计背景 (1) 2.1 牛血清白蛋白分离提纯的简介 (1) 2.2 牛血清白蛋白分离提纯的意义 (1) 3.设计原理 (2) 4.设计工艺流程及设计方案说明 (2) 4.1对原材料的粗分级分离 (3) 4.2对粗分离成分进行细分级分离 (3) 4.3 蛋白的结晶与重结晶 (3) 4.4 对分离出的蛋白质进行纯度鉴定 (3) 4.5 牛血清白蛋白质分离提纯的整个工艺流程 (3) 5.操作过程 (4) 5.1蛋白质分离的准备阶段 (4) 5.2细分级分离设备的设计 (4) 5.3蛋白质的纯度鉴定 (8) 6.参考文献 (8) 7.课程设计心得 (9)

1.设计任务书 现有一混合物料液中含有酪蛋白(分子量:57000Da,pI 4.5)、β-乳球蛋白(分子量:35000Da,pI 5.1)、α-乳白蛋白(分子量:14000Da,pI 4.2)和牛血清白蛋白(分子量:66200Da,pI 4.7),设计一个分离纯化工艺纯化其中的牛血清白蛋白。 2.设计背景 2.1 牛血清白蛋白分离提纯的简介 蛋白质是(protein)是生命的物质基础,没有蛋白质就没有生命。因此,它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%,即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多,性质、功能各异,但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的,并在体内不断进行代谢与更新。 蛋白质具有很多生物化学共性,运用相关性质进行蛋白质的分离制备多种不同的单一蛋白质,更好的为人们所有。蛋白质的分离提纯技术已经很成熟,相关的工艺流程包含各种不同的分离提纯设备,这些设备运用蛋白质的不同原理对其进行分离纯化,单一蛋白质的分离提纯在现实生活中具有重要意义! 2.2 牛血清白蛋白分离提纯的意义 牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%,含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫

实验二牛血清白蛋白的提取与鉴定

牛血清白蛋白的提取与鉴定 一、实验目的掌握牛血清白蛋白的提取与鉴定方法 二、实验原理 牛血清白蛋白是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38 g/100 ml),分子量68 kD。等电点4.8。应用相同浓度硫酸胺盐析法将血清中白蛋白与其它球蛋白分离,最后用透析法除盐,即可提取白蛋白。再利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的粘稠度等有关,对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。 二、实验步骤 (一)盐析取离心管一支加入牛血清2 ml、加入等量PBS(磷酸盐缓冲生理盐水)稀释血清,摇匀后,逐滴加入pH 7.2饱和硫酸铵溶液2ml,边加边摇,充分混匀,然后静止放置10分钟,再离心(4000 r/min)10 min,将上清液侵入试管中。 (二)透析取玻璃纸一张,折成袋形,将离心后的上清液倒入袋内,用线扎紧上口(注意要留有空隙),用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100 ml烧杯内,使透析袋下半部侵入水中,对蛋白液进行透析,常用玻璃棒搅拌袋外(烧杯中)液体,以缩短透析时间。更换蒸馏水多次,用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+,观察颜色变化,直至袋内盐分透析完毕。将袋内液体倾入试管,即得牛血清白蛋白

溶液。 (三)电泳 (1)点样取一张膜条,将薄膜无光泽面向下,放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透,取出,用干净滤纸吸去多余的缓冲液,以薄膜的无光泽面距一端1.5 cm处作点样线,将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。 (2)电泳将点样后的膜条置于电泳槽架上,放置时膜条无光泽面向下,点样端置于阴极,待平衡5 min后,打开电源,调节电泳仪的电压为160V,通电60 min,关闭电源后用镊子将膜条取出。 (3)染色将膜条直接浸入盛有氨基黑10B的染色液中,染2分钟取出,立即浸入漂洗液中,分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5 min,直至背景漂洗干净为止,用滤纸吸干薄膜。 (4)鉴定比较样品与待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果,看位置是否一致。 四、实验仪器和试剂 仪器:离心管、离心机、试管、玻璃纸、烧杯、比色磁盘、滴管、玻璃棒、电泳仪、醋酸纤维素薄膜、分光光度计。 试剂:牛血清待测液、牛血清样品、PBS(磷酸盐缓冲溶液,用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)配制的0.9% NaCl溶液)、pH7.2饱和磷酸铵溶液、纳氏试剂、巴比妥缓冲液、氨基黑10B染色液、漂洗液、0.4N氢氧化钠溶液。 五、预测结果 位置一致,实验成功。若在待测液的电泳结果中出现其他球蛋白的黑带区域,则说明提取不够纯。 六、参考文献 【1】陆红玲. 生物化学与分子生物学实验教程。西安:第四军医大学出版社,2010. 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成2000ml,即得。

牛血清蛋白BSA

牛血清白蛋白 简介 牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种球蛋白,包含583个氨基酸残基,分子量为66.430 kDa,等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用,例如在western blot中作为Blocking agent。 CAS号:9048-46-8 英文名称:Bovine albumin 英文同义词:nhsa;BSA-C;AC-BSA;ALBUMIN, PIG;albumenpowder;SERUM ALBUMIN;ACETYLATED BSA;BSA ACETYLATED;Bovine albumin;BSA, METHYLATED 中文名称:牛血清白蛋白 中文同义词:蛋白粉;牛白蛋白;卵蛋白粉;血清蛋白;血清白蛋白;牛血蛋白质;复合氨基酸;牛血清蛋白;牛血清白蛋白;血清白蛋白(牛) CBNumber: CB5107573 分子式:N/A 英文别名:Bovine serum albumin 化学性质 储存条件: 2-8°C 溶解度: PBS: >40 毫克/毫升 form : lyophilized powder Merck : 13,8542 稳定性:Stable. Incompatible with strong oxidizing agents and strong acids. Refrigerate. EPA化学物质信息:Albumins, blood serum(9048-46-8)

用途 1、用于生化研究、遗传工程和医药研究 2、用作医药保健食品、调味品 3、维持渗透压、pH缓冲、载体作用 4、在PCR体系中有助于Taq酶的稳定性及活性,可以提高PCR的效率,在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性的。 生产方法 以牛血为原料分离出血清,用硫酸铵分级沉淀后,经辛酸处理精制而得。 贮存方法 每10克加100毫升水进行溶解,或用PBS溶解也可,视用途而决定。然后分装成小支。若不使用防腐剂可贮存在零下20或30摄氏度的恒温柜中,若使用防腐剂(如0.1%叠氮化钠)则可贮存在零上4摄氏度的环境下。一般可存放数月不变质。防腐剂可能对牛血清白蛋白的效果造成影响,应慎用。 编辑本段结构与作用 成分结构 牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%,含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种球蛋白,包含583个氨基酸残基,分子量为66.430 kDa,等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用,例如在western blot中作为Blocking agent。它是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%,含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。

牛血清白蛋白-9048-46-8(MSDS)

牛血清白蛋白-9048-46-8(MSDS) 牛血清白蛋白 化学品安全技术说明书 第一部分化学品及企业标识 化学品中文名称: 牛血清白蛋白化学品英文名称: Bovine albumin 企业名称: Shenzhen Biochemilogic Co. Ltd. 地址: 广东省深圳市宝安区龙华镇大浪明君工业园A2栋4楼邮编: 518109 电子邮件地址: 传真号码: 企业应急电话: 技术说 明书编码: 生效日期: 2010年02月26 日国家应急电话: 第二部分成分/组成信息 纯品 , 混合物 ? 化学品名称:牛血清白蛋白有害物成分:牛血清白蛋白浓度: ?95% CAS No.:9048-46-8 第三部分危险性概述 危险性类别: 无资料侵入途径: 吸入,食入,经皮吸收。健康危害: 刺激眼睛,呼吸系统和消化系统,引起皮肤过敏。环境危害: 对环境有危害,曝光或遇 热分解对大气可造成污染。燃爆危险:无资料 第四部分急救措施 第 1 页共 6 页 牛血清白蛋白皮肤接触: 立即脱去被污染的衣服,用清水或肥皂水彻底冲洗 皮肤至少15分钟, 如果暴露皮肤的外观发生了变化或疼痛,就医。眼睛接触: 立即提起眼睑, 用大量流动清水冲洗至少15分钟。即使没用急性疼

痛或外观变化,一定要就医。吸入: 迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难,不能进 行人工呼吸,给输氧,就医。食入:不能催吐,喝2-4杯牛奶或水,立即就医。 第五部分消防措施 危险特性:在足够的浓度下与空气可形成爆炸性混合物。有害燃烧产物: 一氧化碳、二氧化碳、刺激性和有毒烟雾和气体。灭火方法及灭火剂: 消防人员必须穿全身防护服,戴防护眼镜,佩戴自给式呼吸 器。使用适合周围环境的灭火设施。灭火剂:雾状水、泡沫、 干粉、二氧化碳。灭火注意事项: 没有配备全身防火防毒服和供氧设备请不要待在危险区。 第六部分泄露应急处理 应急处理: 应急处理人员须穿戴化学防护衣进入现场。化学品未经处理严禁向环 境排放。消除方法: 隔离泄漏污染区,限制出入。切断火源。确保有足够的通风,建议应 急处理人员戴防尘面具(全面罩),穿防毒服。避免扬尘,小心扫起, 置于袋中转移至安全场所,防止流入水渠。收集回收或运至废物处理 场所处置。 第七部分操作处置与储存 操作注意事项: 密闭操作,全面通风。防止粉尘释放到车间空气中。操作人员必 第 2 页共 6 页 牛血清白蛋白

牛血清蛋白简介

基本信息 【词条中文名称】牛血清白蛋白【词条拼音名称】Níuxuèqīng báidànbái 牛血清白蛋白 【词条英文名称】Bovine albumin 【词条英文别名】Bovine serum albumin 【词条分类性质】名词词组,偏正词组【词条适用范围】医学领域,药学领域【CAS 数字登录号】9048-46-8 BSA简介 BSA结构 CAS号:9048-46-8 英文名称:Bovine albumin 英文同义词:nhsa;BSA-C;AC-BSA;ALBUMIN, PIG;albumenpowder;SERUM ALBUMIN;ACETYLATED BSA;BSA ACETYLATED;Bovine albumin;BSA, METHYLATED 中文名称:牛血清白蛋白 中文同义词:蛋白粉;牛白蛋白;卵蛋白粉;血清蛋白;血清白蛋白;牛血蛋白质;复合氨基酸;牛血清蛋白;牛血清白蛋白;血清白蛋白(牛) CBNumber: CB5107573 分子式:N/A 英文别名:Bovine serun albumin 化学性质 储存条件: 2-8°C 溶解度: PBS: >40 mg/mL form : lyophilized powder Merck : 13,8542 稳定性:Stable. Incompatible with strong oxidizing agents and strong acids. Refrigerate. EPA化学物质信息:Albumins, blood serum(9048-46-8) 用途 1、用于生化研究、遗传工程和医药研究 2、用作医药保健食品、调味品

牛血清白蛋白的提取与鉴定

牛血清白蛋白的提取与鉴定 一、实验目的 1.掌握牛血清白蛋白的提取与鉴定方法 2.掌握盐析法、透析法及电泳法 二、实验原理 牛血清白蛋白是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量68kD。等电点4.8。应用相同浓度硫酸铵盐析法将血清中白蛋白与其它球蛋白分离,最后用透析法除盐,即可提取白蛋白。再利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠度等有关,对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。 三、操作步骤 (一)盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS(磷酸盐缓冲生理盐水)稀释血清,摇匀后,逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL,边加边摇,充分混匀,然后静止放臵10分钟,再离心(2000r/min)10min,将上清液倾入试管中。 (二)透析(1)取干净的比色板,在各孔内滴加一滴纳氏试剂 (2)透析袋未放入水中时,立即取水中液体检查有无NH4+ (3)取玻璃纸一张,折成袋形,将离心后的上清液倒入袋内,用线扎紧上口(注意要留有空隙),用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内,使透析袋下半部侵入水中,对蛋白液进行透析,常用玻璃棒搅拌袋外(烧杯中)液体,以缩短透析时间。 (4)每隔2分钟检查一次,更换蒸馏水多次,用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+,观察颜色变化并记录,直至袋内盐分透析完毕。 (5)将袋内液体倾入试管,即得牛血清白蛋白溶液。 (三)电泳(1)点样取一张膜条,将薄膜无光泽面向下,放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透,取出,用干净滤纸吸去多余的缓冲液,以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处作点样线,将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。标准液点一次,待测液点三次。 (2)电泳将点样后的膜条臵于电泳槽架上,放臵时膜条无光泽面向下,点样端臵于阴极,待平衡5min后,打开电源,调节电泳仪的电压为160伏,通电60min,关闭电源后用镊子将膜条取出。 (3)染色将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中,染2分钟取出,立即浸于漂洗液中,分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5min,直至背景漂洗干净为止,用滤纸吸干薄膜。(4)鉴定比较样品与待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果,看位置是否一致。 四、仪器和试剂 仪器:离心管、离心机、试管、玻璃纸、烧杯、比色板、滴管、玻璃棒、电泳仪、醋酸纤维素薄膜、天平 试剂:牛血清待测液、牛血清样品、PBS(磷酸盐缓冲生理盐水,用0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)配制的0.9%NaCl溶液)、pH7.2饱和硫酸铵溶液、纳氏试剂、巴比妥缓冲液、氨基黑10B染色液、漂洗液 五、预测结果位置一致,实验成功。若在待测液的电泳结果中出现其他球蛋白的黑带区域,则说明提取不够纯。 六、参考文献[1]陆红玲.生物化学与分子生物学实验教程.西安:第四军医大学出版社,2010

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