多肽合成常用试剂

多肽合成常用试剂(Reagents for Peptide Synthesis)：

O-苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)英文名称：O-Benzotriazole-N,N,N',N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate

分子式：C11H16BF4N5O

分子量：321.10

CAS号：125700-67-6

结构式：

理化性质:性状：白色结晶

纯度：≥98%

干燥失重：小于1.0%

熔点：大于205℃

N,N-二异丙基乙胺（简称DIPEA）

产品简介

一、理化性质：

别名：N，N-乙基二异丙胺（简称DIPEA）

英文名：N，N-Diisoproylethylamine

结构式：［（CH3）CH］2NCH2CH2

分子量：129.24

外观：无色液体

密度：0.742

沸点：128℃

折射率：1.412

闪点：10℃

CAS号：7087-68-5

本产品溶于醇及其它多数溶剂，易挥发，呈碱性

二、质量标准

指标名称优级品一级品二级品

含量％≥99.599.098.0

二乙胺％≤0.020.030.05

水分％≤0.020.030.03

三、用途：N，N-二异丙基乙胺，是重要的有机化工中间体，其重要用途有以下几个方面：

1、重要的医药。农药中间体，可用来制造医药麻醉剂，农药除草剂等；

2、用作缩合剂，如用于胺。CO2和卤代轻缩合生成脲烷的反应中

3、用作催化剂，如用作高压条件下酯水解的催化剂；在苯基氯甲酸的水解或缩合中用作催化剂；在三氟苯存在下作为二氢呋喃芳基化的催化剂等。

四、包装

200L镀锌铁桶装，也可根据客户要求定做。

产品特征?

产品型号特级品

产品产量400吨/年

N-羟基苯并三氮唑(HOBT)

N-羟基苯并三氮唑

英文名称：N-Hydroxybenzotriazole hydrate(HOBT)

分子式：C6H5N3O·H2O

分子量：135.13

CAS号：123333-53-9

结构式：

理化性质

性状：白色结晶

纯度：≥98%

干燥失重：小于1.0%

熔点：155-158℃

苯并三氮唑-n，n，n'，n'，-四甲基脲六氟磷酸酯 [HBTU]

英文名称：o-benzotriazole-n,n,n',n'-tetramethyluronium hexafluorophos phate

分子式： c11h16f6n5op

分子量： 379.25

cas号： 94790-37-1

结构式：

理化性质

性状：白色结晶

Molecular Weight: 379.3

Appearance: White crystal

Purity: no less than 99%

Melting Point: 202~212 °C (dec.)

Loss on dryging: no more than 0.5%

Heavy metals: no more than 20ppm

小分子肽在高血压中的作用

小分子肽在高血压中的作用 摘要：心血管生物活性多肽是维持人体生命活动最重要的物质基础，它们在调节和整合心血管系统的生长发育及疾病的发生发展等方面均起到了重要的作用。小分子活性多肽是心血管活性多肽的一大类，具有分子量小（相对分子质量一般小于10000）、结构简单、组织分布广泛、生物效应多样、合成与代谢迅速和免疫原性低等特点，是心血管自稳态调节的最重要成分，其功能紊乱具有重要的发病学意义。高血压是最常见的心血管疾病之一，神经、体液因素网络调节异常和平衡失调以及心血管局部旁/自分泌功能紊乱是高血压病的发病基础，高血压发病过程中多种小分子活性肽参与其中，如肾素-血管紧张素系统（renin angiotensin system, RAS）、钠尿肽（natriuretic peptides，NPs）、内皮素等，以及新发现的Apelin、偶联因子6（Coupling Factor 6）等，形成复杂的网络调节系统，共同参与高血压的发生和发展。对小分子活性肽在高血压中作用的研究，可进一步认识高血压的发病机制，以小分子活性肽为靶点防治高血压可能具有广阔的临床应用前景。 近年心血管分子生物学、反向生理学、反向药理学和反向药物学以及孤儿G蛋白偶联受体策略的应用极大促进了心血管活性多肽的发现及其功能的研究，开拓了生物活性分子研究的新领。这些活性多肽大多都是小分子物质，称作小分子肽，是心血管自稳态调节的最重要成分，其功能紊乱具有重要的发病学意义。近年来，心血管活性多肽对高血压调节作用及在高血压发生机制及诊断、治疗和早期干预措施中的作用正被大家重视，其基础和临床研究不断取得新的进展，已成为当前生命科学研究中最活跃、发展最迅速的领域之一。本文将主要从最近几年在小分子活性肽的生物学效应、参与高血压发病的机理以及其在高血压中可能具有的临床应用等方面的研究作一论述。 一、肾素-血管紧张素体系（renin angiotensin system, RAS） 肾素-血管紧张素系统（renin angiotensin system, RAS）)是人体经典的循环调节系统，通过对心脏、血管、肾脏的调节维持机体水、电解质及血压的平衡，是人类生理功能的一个重要调节机制。它的过度激活是高血压和其他心血管疾病发展的重要决定因素，并因此成为高血压治疗的重要靶点。近年来发现组织中包括血管壁、心脏、中枢神经、肾皮质髓质中亦有肾素一血管紧张素系统，这又引申出新的RAAS的作用机制：局部组织性RAS，它在细胞中通过自分泌、旁分泌和胞分泌各自在其组织细胞发挥作用。随着近年来研究的深入，又发现了血管紧张素转换酶(ACE)的同族物——ACE2以及ACE的各种旁代谢产物如血管紧张素1-9(Angl-9)、血管紧张素1-7(Ang 1-7)以及Ang 1-7的受体Mas等，其中ACE2、Ang 1-7成为研究的热点，它们在血压调节中发挥着与ACE、AngⅡ相抗衡的作用，目前被看成是心血管系统保护因子。 Ang1-7是近年发现的Ang新成员，在ACE2、脯氨基内肽酶、中性肽酶等酶的作用下水解水解Ang II、Ang I产生，与G蛋白偶联Mas受体结合，从而形成ACE2-Ang(1-7)-Mas轴，拮抗传统RAS中关键轴ACE-Ang lI-AT1的生物学活性，在体内发挥广泛的生物学效应，如强大的利钠利尿作用，具有强大的舒张血管、抗细胞增殖等作用，以及增强缓激肽效应发挥降低血压的作用。新的RAS体系参与血压调控主要依赖于ACE与AngⅡ，ACE2与Ang(1-7)两条途径，一条起升压效应；另一条对抗前一路径，引起血压下降。ACE与ACE2一旦失衡，将使体内血压改变。在ACE2相对缺乏状态，AngⅡ作用占优势，导致血管收缩增强，引发高血压。 大量研究已表明，肾素-血管紧张素系统在高血压的发病以及高血压所引起的心脏和血管重塑等病理生理过程中发挥了重要的作用。心肌重塑是高血压最常见、最重要的并发症，它是导致多种心血管疾病独立的危险因子。最近发现，ACE2-Ang（1-7）-AT1轴在抑制心肌重塑方面发挥重要的作用。用慢病毒携带ACE2基因体内转染自发性高血压大鼠（SHR），ACE2基因

多肽合成方法

多肽合成中肽键形成的基本原理 一个肽键的形成（生成一个二肽），从表面上看是一个简单的化学过程，它指两个氨基酸组分通过肽键（酰胺键）连接，同时脱去水。 在温和反应条件下，肽键的形成是通过活化一个氨基酸（A）的羧基部分，第二个氨基酸（B）则亲核进攻活化的羧基部分而形成二肽（A－B）。如果羧基组分（A）的氨基未保护，肽键的形成则不可控制，可能开有成线性肽和环肽等副产物，与目标化合物A－B混在一起。所以，在多肽合成过程中，对不参与肽键形成的所有官能团必须以暂时可逆的方式加以保护。 因此，多肽合成－即每一个肽键的形成，包括三个步聚： 第一步，需要制备部分保护的氨基酸，氨基酸的两性离子结构不再存在； 第二步，为形成肽键的两步反应，N－保护氨基酸的羧基必须先活化为活性中间体，随后形成肽键。这一耦合反应既可作为一步反应进行，也可作为两个连续的反应进行。 第三步，对保护基进行选择性脱除或全脱除。尽管全部脱除要等到肽链全部组装完成后才能进行，但为了继??? 续肽合成，选择性脱除保护基也是必需的。 由于10个氨基酸（Ser、Thr、Tyr、Asp、Glu、Lys、Arg、His、Sec和Cys）含有需要选择性保护的侧链官能团，使肽合成变得更加复杂。因为对选择性的要求不同，所以必须区分临时性和半永久性保护基。临时性保护基用于下一步要反应氨基酸的氨基或羧基官能团的暂时保护，在不干扰已经形成的肽键或氨基酸侧链的半永久性保护基才脱除，有时也在合成过程中脱除。 在理想状态下，羧基组分的活化和随后的肽键形成（耦合反应）应为快速反应，没有消旋或副产物形成，并应用等摩尔反应物以获得高产率。但遗憾的是，还没有一种能满足这些要求的化学耦合方法相比，适用于实际合成的方法很少。 在肽合成过程中，参与多种反应的官能团常常与一个手性中心相连（甘氨酸是唯一的例外），存在发生的消旋的潜在危险。 多肽合成循环的最后一步，保护基要全部脱除。除了在二肽的合成中需要全脱保护以外，选择性脱除保护基对于肽链延长具有非常重要的意义。合成策略要深思熟虑地规划，依战略选择，可以选择性脱除Nα－氨基保护基或羧基保护基。“战略”一词这里是指单个氨基酸的缩合反应顺序。一般来说，在逐步合成和片段缩合之间是有区别的。在溶液中进行肽合成（也指“常规合成”），对困难序列，多数情况下，用肽链逐步延长法只能合成较短的片段。要合成更长的肽时，目标分子必须分割成合适的片段，并确定在片段缩合过程中，它们能使能C端差向异构化程度最小。在单个片段逐步组装完成后，再连接产生目标化合物。肽合成战术包括选择最恰当的保护基组合和最佳的片段偶联方法。 最初的固相多肽合成（SPPS）只是肽和蛋白质逐步合成法的一种变化，其概念是将增长的肽链连接到一个不溶性的聚合物载体上，由Robert Bruce Merrifield在1963年首次报道。今天，为纪念他1984年获得诺贝尔奖而称之为Merrifield。在聚合物载体上，也可以进行片段缩合反应。

缓释控释制剂制剂习题及答案

缓释、控释制剂和口服定时、定位给药系统练习题： 1．缓释制剂 2．控释制剂 3．迟释制剂 4．脉冲制剂 5．结肠定位制剂 6．肠溶制剂 7．释放度 8．生物粘附 二、选择题 （一）单项选择题 1．渗透泵片控释的基本原理是 A.片剂膜内渗透压大于膜外，将药物从小孔压出 B.药物由控释膜的微孔恒速释放 C.减少药物溶出速率 D.减慢药物扩散速率 E.片外渗透压大于片内，将片内药物压出 2．以下可用于制备亲水凝胶骨架片的材料是 A.海藻酸钠 B.聚氯乙烯 C.脂肪酸 D.硅橡胶 E.蜂蜡 3．以下对渗透泵片的叙述中，错误的是

A.释药不受胃肠道pH的影响 B.当片芯中药物浓度低于饱和溶液浓度时，药物以非零级速率释放 C.当片芯中的药物未被全部溶解时，药物以一级速率释放 D.药物在胃与肠中的释药速率相等 E.药物的释放与半渗透性衣膜的厚度有关 4．下列数学模型中，不是作为拟合缓（控）释制剂的药物释放曲线的是 A.零级速率方程 B.一级速率方程 C. Higuchi方程 D.米氏方程 E. Weibull分布函数 5．下列关于骨架型缓控释片的叙述中，错误的是 A.亲水凝胶骨架片中药物的释放比较完全 B．不溶性骨架片中要求药物的溶解度较小 C.药物从骨架片中的释放速度比普通片剂慢 D.骨架型缓控释片一般有三种类型 E.骨架型缓控释片应进行释放度检查，不进行崩解时限检查 6．可作为渗透泵制剂中渗透促进剂的是 A.氢化植物油 B.脂肪 C.淀粉浆 D.蔗糖 E.邻苯二甲酸醋酸纤维素7．下列不是缓、控释制剂释药原理的为

A.渗透压原理 B.离子交换作用 C.溶出原理 D.扩散原理 E.毛细管作用 8．可作为溶蚀性骨架片的骨架材料是 A.硬脂酸 B.聚丙烯 C.聚硅氧烷 D.聚乙烯 E.乙基纤维素 9．最适合制备缓(控)释制剂的药物半衰期为 A．15h B．24h C．48h D．＜1h E．2～8h 10．可作为不溶性骨架片的骨架材料是 A.聚乙烯醇 B.壳多糖 C.果胶 D.海藻酸钠 E.聚氯乙烯 （二）配伍选择题（备选答案在前，试题在后；每组均对应同一组备选答案，每题可能有一个或多个正确答案；每个备选答案可重复选用，也可不选用。） 【1-5】 A.聚乙二醇 B.乙基纤维素 C.羟丙甲纤维素 D.单硬脂酸甘油酯 E.硅橡胶 1．可作为不溶性骨架材料的是 2．可作为控释膜材料的是 3．可作为渗透泵片的推动剂的是 4．可作为生物溶蚀性骨架材料的是

小分子肽多肽

百病本源——神奇的小分子肽（免疫球蛋白小分子肽） 益寿康免疫球蛋白小分子肽 配料表：胶原蛋白肽、牛初乳冻干粉、葡萄糖、安赛蜜、卵白蛋白 规格：75g（5g×15） 用量：请在医生的指导下服用。（温馨小提示：本品一定要用温水冲调，记着是温水哦） 本品每袋含免疫球蛋白1Gg 抗体含量560mg 免疫球蛋白来源于“黄金奶源带”的牛初乳中提取；牛初乳到加工车间加工过程不超过20分钟，以保证营养含量和抗体含量不流失。 胶原蛋白肽：胶原蛋白肽来源于深海鳕鱼身上提取的。是由胶原或明胶经蛋白酶降解处理后制成的一种胶原蛋白前体产品，比普通胶原蛋白分子量小，更易消化吸收。针对于人体衰老细胞分裂、衰竭、萎缩，微整形术后损伤、新细胞再生受阻、细胞生长变异、增生等多项细胞修复功能障碍问题研发的医生营养。 大量国内外研究证明，胶原蛋白肽具有多种功效，例如抑制血管紧张素转化酶活性，具有抗氧化活性，能消除自由基，减少膝关节或髋关节等骨关节炎患者的疼痛，增强骨密度，维持骨代谢平衡等。 益寿康免疫球蛋白中的肽是以小分子肽的形式出现。小分子肽又称寡肽，或称为低聚肽，一般由2～10个氨基酸组成，拥有很多独特的生物活性，是蛋白质结构的功能片断，在生物体内具有重要的生理功能，小分子肽可介导细胞与细胞、蛋白质与蛋白质、细胞与蛋白质及其他非肽类药物、蛋白调控因子与基因表达之间的相互作用。所以，小分子肽虽然在生物体中含量较少，但活性强、作用大，是细胞分化、识别、免疫、应激、衰老及分子进化等一切生命过程的参与者或调节因子。 小分子肽的优势： 抑制——抑制细胞变性，增强人体免疫力。 激活——激活细胞活性，有效清除对人体有害的自由基。 修复——修复人体变性细胞，改善细胞新陈代谢。 促进——促进、维持细胞正常平衡的新陈代谢。 A、四大优势 1.直接 直接吸收，不需要消化，直接作用于细胞，激活细胞活性，修复基因。 2.快速 快速吸收，如同针剂。主动吸收，运送营养。100%吸收，无排泄废物。 3.全面 调控人体八大系统，使人体器官达到最佳运转机制。 4.安全 与人体自身分泌的完全一样，对人体无任何毒副作用。 B、五大作用 作用一：健壮筋骨，预防风湿、类风湿、骨质疏松、松骨、骨膜、滑膜、关节等。 作用二：提高免疫力，预防白血病、白癜风、牛皮癣、甲亢、癌症等。 作用三：延缓机体衰老，恢复心、肝、肺、肾等脏器功能。 作用四：修复受损组织，包括胃肠粘膜、鼻粘膜、口腔粘膜、眼角膜、视网膜、虹膜等。 作用五:修复肝损伤，改善心脑血管、促进造血和代谢功能，调节内分泌，术后和化疗后体能恢复等。

重组蛋白和多肽的分离纯化

重组蛋白和多肽的分离纯化 1.概述 分离纯化组成了基因工程的下游处理（downstream processing）阶段，这一过程又和上游过程紧密相联系，上游过程的诸方面影响到下游的分离纯化，所以在进行目标蛋白质表达纯化时要统一考虑和整体设计，并充分考虑上游因素对下游的影响，如是否带有亲和标签，是否进行分泌表达。目前应用最广泛的表达系统有三大类，分别是大肠杆菌表达系统、酵母表达系统和CHO细胞表达系统，不同的表达系统和培养方法显著影响下游的处理过程，目标蛋白表达是否形成包涵体，目标蛋白表达的定位（胞内、细胞内膜、周质空间和胞外），蛋白表达的量都依赖于所选择的表达系统。选择将所表达的蛋白分泌到细胞外或周质空间可以避免破碎细胞的步骤，并且由于蛋白质种类少，目标蛋白容易纯化；而在细胞质内表达蛋白，可能是可溶性表达，可能形成包涵体，可溶性的蛋白往往需要复杂的纯化步骤，而包涵体易于分离，纯度较高，但回收具有生物活性的蛋白却变的相当困难，需要对聚集的蛋白进行变复性，通常活性蛋白的得率比较低，表1列出了不同策略对表达、纯化的影响，对于其中的有些缺点可以通过一定的方法进行克服和避免，如利用DNA重组技术给外源蛋白加上一个亲和纯化的标签，有助于可溶性外源蛋白的选择性纯化，并能保护目标蛋白不被降解（96）。 表 1 重组蛋白不同表达策略的优点和缺点 表达策略优点缺点 分泌表达至细胞外增强正确二硫键的形成 降低蛋白酶对表达蛋白的降解 可获得确定的N末端 显著减少杂蛋白水平，简化纯化 不需要细胞破碎表达水平低 多数蛋白不能进行分泌表达表达蛋白需要进行浓缩 细胞周质空间表达增强正确二硫键的形成 可获得确定的N末端 显著减少杂蛋白水平，简化纯化好些蛋白不能分泌进入周质空间 没有大规模选择性的释放周质空间蛋白的技术 周质蛋白酶可引起重组蛋白酶解 胞内包涵体表达包涵体易于分离 保护蛋白质不被降解 蛋白质不具有活性对宿主细胞生长 没有大的影响，通常可获得高的表 达水平需要体外的折叠和溶解，得率较低具有不确定N末端 胞内可溶性蛋白表达不需要体外溶解和折叠 一般具有正确的结构和功能高水平的表达常难以得到需要复杂的纯化 可发生蛋白质的酶解 具有不确定的N末端 在细胞的提取物中，除了目标蛋白外，还含有其它各种性质的蛋白、核酸、多糖等。在这样一个混合体系中，蛋白质纯化要求将目标蛋白与其它的成分分离，得到一定的量，达到一定的纯度，同时要尽可能保留蛋白的生物活性，并使蛋白保持完整。所以蛋白质的分离纯化可以看作是一系列的分部收集过程，总是希望目标蛋白富集于其中的一个收集部位，而大量的杂蛋白存在于其它的收集部位。当然对目标蛋白纯度的要求要根据纯化蛋白的用途而定，对于治疗性的蛋白要求有大于99%的纯度，并对处方有活性和稳定性的要求，对于某些酶的纯度则要求较低，需要在纯度和得率之间进行一个平衡，所以下游的工艺流程取决于最终对目标蛋白的要求。 蛋白质的功能依赖于蛋白质的结构，对于有生物活性的蛋白质，在分离纯化过程中必须根据目标蛋白的特点，采用合适的操作条件和方法，保证目标蛋白的活性尽量不损失。除了在分离纯化的初期，要采用快速的方法除去影响目标蛋白稳定性的杂质，还要严格控制涉及蛋白质变性的各种因素，来避免蛋白质失去活性。蛋白质的构象稳定性可以通过测定蛋白质变性反应时折叠（f）和去折叠（u）间自由能的变化（ΔG f→u）来衡量，ΔG f→u越大蛋白质就越稳定。根据报导蛋白质的ΔG f→u在5—20kcal/molX围之间，单个氢键可造成0.5—2kcal/mol自由能的变化，一个离子对可造成0.4—1.0kcal/mol自由能的变化，因此ΔG f→u相对比较小，这样天然状态仅仅比去折叠状态稳定一点，所以必须克服蛋

美极客小分子肽-徐老师

美极客小分子肽-徐老师 要想知道获得健康，那么就要知道人类为什么会生病，是吗？从根源找起。徐老师微信：746894458我们人体是由什么组成的？细胞对吗？那么我们人类就不该有成千上万种病，而是只有一种病，那就是细胞故障，我们的细胞生病了为什么我们的细胞会生病呢？细胞得不到需要的营养，因为我闷偏食，喜欢的就拼命吃，不喜欢得一口不吃，又因为平时我们吃的东西都含有一定得毒素，时间一长造成了毒素超载，从而细胞就生病了了！我们身体的毒素只有20%通过排便系统排出来的。剩下得80%都将进入我们得血液里，最后导致疾病，那么得病了怎么办？ 世界卫生组织告诉我们说，治愈疾病的最有效的途径就是修复细胞，改善细胞，激活细胞，如何做到这些呢，那就是要补充能够合成肽的物质，叫做活性肽。徐老师微信：746894458什么是肽？肽是两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，是介于大分子蛋白质和氨基酸之间的一段最具活性、最易吸收、生理功能效价高的一种崭新营养。分子量段在5000~180之间的才能称为“肽”。分子量段在5000~3000之间的肽称为“大肽”；分子量段在3000~1000之间的肽称为“多肽”，分子量段在1000~180之间的称为“小肽”、“寡肽”、“低聚肽”，也称为小分子活性多肽，一般由

2~6个氨基酸组成。生物学家将肽称为“氨基酸链”，将小分子活性多肽统称为“生物活性肽”。“酶法多肽”是生物活性肽中一类具有极强活性和多样性，具有天然绿色食品属性，功效营养成份最完整的小分子活性肽。到现在，人们已发现100多种存在于人体的肽，对于多肽的研究和利用，在世界范围内已经出现了一个空前的繁荣景象。肽的特点就是直接吸收不需要经过肠胃消化，第二就是快速吸收，喝下去5-10分钟就进入我们所有器官血液，徐老师微信：746894458肽是构成人体细胞的基本材料，人体的一切活性物质都是以肽的形式存在，没有肽生命就会停止。科学家研究发现，30岁以后，活性肽在体内的分泌量会逐渐下降，尤其是生存环境的破坏以及不健康的生活方式导致现代人严重缺肽，缺肽会导致细胞逐渐萎缩，分裂减缓，并失去原有的活力，这时组织器管慢慢萎缩，功能渐渐退化，身体开始快速衰老并且疾病丛生。人体各个领域，包括激素，神经，生殖及细胞的更新，代谢，生长，修复，以及各个器官和细胞得生理功能都有肽的参与，所以我们要健康就要立刻补肽，是不是，很多运动员或者健美人士都知道要补蛋白质，所以去喝那些桶装蛋白质粉，其实他们不知道直接喝蛋白质作用不是很大，为什么呢？第一就是液体蛋白，人体分解它的能力很弱，第二呢，液体蛋白遇酸就会变性，而我闷得胃是不是酸性的，所以大多数的蛋白质都被破坏了！而只有小分

药剂学第十九章缓释、控释制剂和迟释制剂

第十九章缓释、控释制剂和迟释制剂 一、概念与名词解释 1．controlled-release preparations 2．生物利用度 3．生物等效性 4．sustained release formulations 5．靶向制剂 6．主动靶向制剂 7．EPR效应 二、判断题(正确的划√，错误的打×) 1．药物制剂的发展可将制剂分为5代。( ) 2．缓控释制剂以静脉注射剂作标准参比制剂，两者血中药物浓度不呈现明显差别时，即认为生物等效。( ) 3．抗菌素类药物宜于制成缓控释制剂。( ) 4．剂量大于l克的药物不宜制成缓控释制剂。( ) 5．半衰期小于1小时或大于12小时的药物，一般不宜制成缓、控释制剂。( ) 6．半衰期很长的药物不宜制成缓、控释制剂。( ) 7．缓、控释制剂在获得预期疗效的同时，可以减小药物的毒副作用。( ) 8．缓、控释制剂主要有骨架型和贮库型两种类型。( ) 9．减小药物的粒径，降低药物的溶出速度，可使药物缓慢释放，达到长效。( ) 10．缓释制剂可以通过适当的制备手段使得所有药物都可以缓释。( ) 11．邻苯二甲酸酞酸酯(CAP)、Eudragit E、L和S都为肠溶性材料。( ) 12．缓、控释制剂的生物利用度应为普通制剂的譬80％一120％。( ) 13．渗透泵片中药物的释放速率为零级，并与pH无关。( ) 14．某些药物需包肠溶衣，这是为了防止其在胃内分解或对胃有刺激。( ) 15．制成塑料骨架片形式长效制剂，药物必须是易溶于水。( ) 16．在胃肠分解的药物应包肠溶衣。( ) 17．缓控释制剂与普通制剂相比可减少用药的总剂量，因此可用最小剂量达到最 大药效。( ) 18．药物以分子或微晶、微粒的形式均匀分散在各种载体材料中，形成贮库型缓、 控释制剂。( ) 19．青霉素普鲁卡因盐的溶解度比青霉素钾盐的溶解度小，因此有可能延长药效。( ) 20．药物在胃、小肠和结肠都有吸收时，可以考虑设计24小时服用一次的缓释制剂。( ) 21．华法林不适于制成缓释制剂是由于其半衰期很长。( ) 22．核黄素(维生素B2)通过主动转运吸收，可制成缓释制剂，提高在小肠的吸收。( ) 23．作用剧烈的药物为了安全，减少普通制剂给药的峰谷现象，可制成缓、控释制剂。( ) 24．若药物在胃、小肠、大肠均有一定的吸收，可制成12小时服一次的缓释制剂。( ) 25．最适于制备缓、控释制剂的药物半衰期为小于12小时。( ) 26．控释小丸或膜控型片剂的包衣中加入PEG的目的是成膜剂。( ) 27．渗透泵片控释基本原理是片外渗透压大于片内，将片内药物压出。( ) 28．测定缓、控释制剂释放度时，至少应测定5个取样点。( ) 29．药物的靶向从到达的部位可以分为三级。( )

多肽合成基础知识汇编

多肽合成基础知识汇编 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT

----------------------------------------------------------------------------------------- 多肽合成 基础知识汇编 编制: 合成部 ----------------------------------------------------------------------------------------- 一、多肽合成概论 1．多肽化学合成概述： 1963年，［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖. 今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield所建立的Boc法(Boc:叔丁氧羰基)之外，又发展了Fmoc 固相法(Fmoc:9-芴甲氧羰基).以这两种方法为基础的各种肽自动合成仪也相继出现和发展，并仍在不断得到改造和完善. Merrifield所建立的Boc合成法［2］是采用TFA(三氟乙酸)可脱除的Boc为α-氨基保护基，侧链保护采用苄醇类.合成时将一个Boc－氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用TFA脱除Boc，用三乙胺中和游离的氨基末端，然后通过Dcc活化、耦联下一个氨基酸，最终脱保护多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法.用Boc法已成功地合成了许多生物大分子，如活性酶、生长因子、人工蛋白等. 多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。它是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。到现在，人们已发现和分离出一百多种存在于人体的肽，对于多肽的研究和利用，出现了一个空前的繁荣景象。多肽的全合成不仅具有很重要的理论意义，而且具有重要

生物多肽工艺流程

生物多肽工艺流程 一、固相肽合成 (1) 投料：树脂加入固相合成仪，加入DCM溶胀，抽干后加入DMF洗涤，洗涤结束抽干备用。 (2) 缩合：将氨基酸用一定体积的DMF容解，加入缩合剂活化后投入固相合成仪，补充DMF至反应浓度，搅拌反应。 (3) 脱除保护基：以Kaiser 试剂检测反应程度，反应结束后抽干溶剂， DMF洗涤，加入PIP/DMF溶液脱除保护基，以Kaiser试剂检测反应程度，反应完毕抽干溶剂，DMF洗涤，准备加入下一个氨基酸。 (4) 缩合循环：按照树脂序列依次连接氨基酸，按照“脱保护——洗涤——活化氨基酸——投料缩合——洗涤”步骤进行缩合循环操作，按照氨基酸序列完成剩余n 个氨基酸的缩合。 (5) 出料：合成结束之后用IPA和DCM交叉洗涤树脂，完成树脂收缩收缩，出料至不锈钢托盘。 (6) 树脂干燥：树脂在真空干燥箱中室温干燥，干燥完毕称重，计算收率。 (7) 有机废液回收，集中处理。 (8) 清场：操作结束后操作人员及时清场。 二、树脂裂解 (1) 配液：按照裂解液成分比例配置裂解液，并提前置冰柜中冷藏保存。 (2) 投料：肽树脂加入反应釜中，加入预冷的裂解液，搅拌反应。 (3) 出料：裂解结束后放出反应液，抽滤除去树脂并以TFA洗涤。 (4) 浓缩：裂解液转入旋转蒸发仪室温浓缩至小体积。 (5) 析出：浓缩后的反应液倾入预冷的甲基叔丁基醚(简称醚) 中，搅拌使

析出大量固体 (6) 离心：浊液离心，并用预冷的醚洗涤。 (7) 粗肽干燥：涤完成的粗肽转至真空干燥箱中室温干燥。 (8) 有机废液回收，集中处理。 (9) 清场：操作结束后操作人员及时清场。 三、多肽HPLC屯化 (1) 溶解：操作人员将粗肽溶解，调节PH至工艺规定范围。 (2) 过滤：滤去粗肽溶液中不溶物，过滤ACN和纯化水。 (3) 配制纯化液：根据工艺内容配制A相(乙腈)和B相(水)。 (4) 纯化：在制备型液相上进行纯化，分别接收流份。 (5) 检验及返工：对制备流份进行检查，合并合格流份，其他部分根据需要再次纯化。 (6) 废弃流动相按有机废液回收，集中处理。 四、浓缩过滤冻干 (1) 浓缩：合并滤液旋蒸除去有机溶剂，有机废液回 收，集中处理。 (2) 过滤：浓缩后水相无菌过滤。 (3) 冻干：滤液置冻干机中，设定升温程序冻干。 (4) 出箱：出料、加内包。 五、质量检查、入库 工艺流程图如下所示

大豆小分子肽详细介绍

大豆多肽 大豆多肽(soy peptide) ,即肽基大豆蛋白水解产物( peptide - based soy protein hydroly-sate)的简称。它来源于大豆蛋白质的酶解产物，是大豆蛋白质经蛋白酶作用后，再经特殊处理而得到的蛋白质水解产物。大豆中的蛋白质含量高，质量好，营养价值很高，与牛肉的营养价值大致相当。大豆蛋白质所含必需氨基酸种类全面，数量丰富,必需氨基酸模式(氨基酸比值)与人体需求较接近,消化率也较高。大豆多肽通常是由3~6个氨基酸组成的低肽混合物,相对分子质量分布以低于1000D的为主，主要出峰位置在相对分子量300 -700D范围内。其氨基酸的组成与大豆球蛋白十分相似，必需氨基酸的平衡良好,含量也很丰富,因此营养价值很高。 大豆多肽的特点 (一)黏度较低，溶解度较高 大豆蛋白的黏度随浓度的增加而显著增加。因此，大豆蛋白的浓度不能提得太高,超过13%就会形成凝胶状。若加工成酸性蛋白饮料时，pH值接近4.5左右(大豆蛋白的等电点)时就会产生沉淀。而大豆多肽则没有上述缺点。它的黏度较低而溶解度较高，这是因为水解物的分子量减小了；水解后产生了一些可离解的氨基和羧基基团,增加了水解物的亲水性。与大豆蛋白质相比，大豆多肽具有以下特点:①即使在高浓度时,其黏度较低:②在较宽的pH值范围内仍能保持溶解状态;③吸湿性与保湿性好。大豆多肽的这些性质有利于开发新产品。 (二)渗透压不高 大豆多肽溶液的渗透压的大小处于大豆蛋白与同一组成氨基酸混合物之间。当一种溶液的渗透压比体液高时,易使人体消化道周围组织细胞中的水分向胃肠腔内移动而出现腹泻。氨基酸类食品口服易发生这类问题。大豆多肽的渗透压比氨基酸的低得多。因此，大豆多肽可作为口服营养液使用。 (三)吸湿性，保湿性强 大豆多肽的吸湿性和保湿性比胶原蛋白多肽和丝蛋白多肽更强,这一特性非常适合于日 用化学工业用来配制护发膏及护发霜。 (四)能调节产品质构 大豆多肽具有抑制蛋白质形成凝胶的特性,可用来调整食品的硬度与质构。例如，水产品肉禽蛋白质及大豆蛋白质在加热时会形成凝胶，或面粉在形成面团时都会使质构变硬，如果添加一定量的大豆多肽,就会起到软化凝胶的作用。这一特性，可应用于火腿、香肠、鱼糕等高蛋白食品的软化。 大豆多肽的功能特性 大豆多肽即“多肽基大豆蛋白水解物"的简称,是大豆蛋白质经蛋白酶作用或微生物技术

第十二章 缓释、控释制剂

第十二章缓释、控释制剂 【大纲解读】 【考题预测】2分左右 第一节概述 一、基本概念 1.缓释制剂：系指用药后能在较长时间内持续释放药物以达到延长药效目的的制剂。一般应在规定的释放介质中，按要求缓慢地非恒速释放药物，与相应的普通制剂比较，给药次数减少一半或有所减少。 2.控释制剂：系指药物能在设定的时间内自动以设定速度释放药物的制剂。一般在规定的介质中，按要求恒速或接近恒速释放药物，与相应的普通制剂比较，给药次数减少一半或有所减少，使血药浓度长时间恒定地维持在有效浓度范围内的制剂。

3.缓释、控释制剂的特点 （1）减少服药次数，使用方便，提高患者服药的顺应性 （2）使血药浓度平稳，避免或减少峰谷现象，降低毒副作用。（3）减少用药总剂量，可用最小剂量达到最大药效。 【经典真题】 （A型题） 缓、控释制剂不包括下列哪种 A.分散片 B.胃内漂浮片 C.渗透泵片 D.骨架片 E.植入剂 [答疑编号911120101] 答案：A （X型题） 下列哪些属缓、控释制剂 A.胃内滞留片 B.植入剂 C.分散片 D.骨架片

E.渗透泵片 [答疑编号911120102] 答案：ABDE 二、缓释、控释制剂的处方设计 （一）影响口服缓释、控释制剂设计的因素 1.药物的理化因素 （1）剂量大小：口服单剂量在0.5～1.0g对缓释制剂仍适用，治疗指数窄的药物设计成缓释制剂应注意剂量与毒副作用。 （2）pKa、解离度和水溶性：非解离型、脂溶性大的药物易通过脂质生物膜，应注意消化道pH对药物释放的影响。溶解度＜0.01mg/ml，本身具有缓释作用。设计缓释制剂时药物溶解度＜0.1mg/ml不适宜。 （3）药物的油、水分配系数：药物的油、水分配系数大的，在机体内滞留时间长。油、水分配系数小时，不易透过脂质膜，故油、水分配系数应适中。 【精要素记】亲水亲油平衡值，油水分配系数 （4）稳定性：不稳定药物制成固体制剂较好 2.生物因素 （1）生物半衰期：24h＜t1/2＜1h不宜制成缓释制剂，t1/2＞24h的药物本身就具有缓释作用。 （2）吸收：吸收的半衰期应控制3～4h的药物，否则不利于吸收。 （3）代谢：吸收前有代谢的药物，不适宜制成缓释制剂，如要制成缓释制剂，需加入代谢的抑制剂。 （二）缓释、控释制剂的设计 1.药物选择 （1）t1/2=2～8h适宜；12h＜t1/2＜1h，不适宜制成该类制剂 （2）剂量很大、药效很激烈、溶解吸收很差、剂量需精密调节的药物不宜制成缓释、控释制剂。 【经典真题】 （X型题） 适合制成缓释或控释制剂的药物有 A.硝酸甘油 B.苯妥英钠 C.地高辛 D.茶碱 E.盐酸地尔硫 [答疑编号911120103] 答案：DE 2.设计要求 （1）生物利用度：缓控制剂的相对生物利用度应为普通制剂的80～120% （2）峰谷浓度比：稳定时，峰、谷浓度应小于或等于普通制剂。 （3）缓释、控释制剂的剂量计算 一般可根据经验，参考该药物普通制剂的剂量换算。如：某普通制剂每日三次，每次100， 若制成每日一次的缓控释制剂，一次剂量可为300。也可采用药物动力学的方法计算。 （4）缓（控）释制剂的辅料 1）阻滞剂 ①疏水物质：脂肪、蜂蜡、巴西棕榈蜡、氢化植物油、硬脂醇等可延滞水溶性药物的溶解，释放，主

冷冻干燥工艺处理步骤及其应用

冻干燥工艺流程及其应

目录冷冻干燥工艺的原理及特点…………………真空冷冻干燥机组成…………………………冷冻干燥工艺……………………………………食品冷冻干燥技术的运用……………………冻干食品的特点…………………………………我国食品冻干技术面临的问题………………冷冻干燥工艺的应用前景……………………结论…………………………………………………参考文献……………………………………………

冷冻干燥工艺流程及其应用 1冷冻干燥工艺的原理及特点 1.1冷冻干燥工艺原理 冷冻干燥就是把含有大量水分的物质，预先进行降温冻结成固体。然后在真空的条件下使水蒸汽直接从固体中升华出来，而物质本身留在冻结的冰架子中，从而使得干燥制品不失原有的固体骨架结构，保持

物料原有的形态,且制品复水性极好。然后在适当的温度和真空度下进行冰晶升华干燥，等升华结束后再进行解吸干燥，除去部分结合水，从而获得干燥的产品的技术。冷冻干燥过程可分为制品准备、预冻、一次干燥（升华干燥）、二次干燥（解吸干燥）、和密封保存五个步骤。利用冷冻干燥目的是为了贮存潮湿的物质，通常是含有微生物组织的水溶液，或不含微生物组织的水溶液。产品在冻结之后置于一个低水气压下,这时包含冰的升华,直接由固态在不发生熔化的情况下变成汽态。与其他干燥方式相比避免了化学、物理和酶的变化，从而确保了制品物性在保存时不易改变。实际需要的低水汽压是靠真空的状况下达到的。 图1：水的平衡相图 1.2冷冻干燥工艺存在的优缺点

1.2.1冷冻干燥工艺的优点 （1）冷冻干燥的过程中样品的结构不会被破坏,因为固体成分被在其位置上的坚冰支持着,在冰升华时会留下孔隙在干燥的剩余物质里。这样就保留了产品的生物和化学结构及其活性的完整性; （2）蛋白多肽类药物在高温下容易变性,造成干燥后生物活性的降低;冷冻干燥的过程是在低温状态下进行的,工艺过程对组分的破坏程度小,热畸变极其微弱,对不耐热药物特别是蛋白质多肽类药品非常适合[1]; （3）冷冻干燥的药剂为液体,定量分装比粉剂或片剂精度高;用无菌水溶液调配且通过除菌过滤、灌装,杂质微粒小、无污染。制品为多孔结构,质地疏松,较脆,复水性能好,重复再溶解迅速完全,便于临床使用; （4）冻结物干燥前后形状及体积不变化;干燥后真空密封或充氮密封,消除了氧化组分的氧化作用。 1.2.2冷冻干燥工艺的缺点 （1）设备造价高,干燥速率低,能耗高。 （2）工艺时间长（典型的干燥过程周期需要20小时左右）。 （3）生产成本高，能耗大。 （4）生物活性物质采用冻干制剂主要是为了保持活性,但配料选择不合理，工艺操作不合理，冻干设备选择不适当都可能在冻干制剂制备过程中失活,导致产品前功尽弃,这是生产冻干制剂的关键,需进行基础研究和针对特定产品反复试验。

设计一个制作抗小分子多肽单克隆抗体的流程

实验生物学考试 部门：研发姓名：王晓婧8．叶敏设计一个制作抗小分子多肽单克隆抗体的流程 用杂交瘤技术制备抗小分子多肽单克隆抗体的主要步骤如下（示意图见下图）： 1、获得免疫的B淋巴细胞 用此小分子多肽作为抗原注射进小鼠体内，使其淋巴细胞产生相应的抗体。对小鼠做三次免疫，并在取其脾脏的前三天做一次加强免疫，可使得到的抗体亲和力较好，此过程中不用分离脾脏中的B细胞和T细胞，因为与骨髓瘤融合的过程本身就是一个选择B细胞的过程。 取与免疫小鼠同系的小鼠的骨髓瘤细胞，可用不分泌型和酶缺陷型，现多用酶缺陷型，缺乏TK（胸腺嘧啶核苷激酶）和HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）。 2、融合 可用化学融合法和电融合法等。常用的化学融合剂为PEG（聚乙二醇），其分子量越大，融合率越高，但同时毒性也越强，故用作细胞融合剂的PEG一般选用分子量为4000及以下的，在pH8.0～pH8.8左右的碱性环境中。电融合用电脉冲，无毒且融合率也高。 3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基（培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine H，氨基喋呤Aminoopterin A及胸腺嘧啶Thymidine T）。在HAT 培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏TK和HGPRT，不能利用补救途径合成DNA，而只能利用谷酰胺与尿核苷酸单磷酸合成DNA，这一途径又被氨基喋呤所阻断，故不可避免的要死亡。 停用HAT培养基后，用HT培养基。未融合的B细胞和T细胞在正常培养的情况下都会自然消亡。 这样，只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了TK和HGPRT，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能增殖。 4、筛选 在HA T培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此必须进行筛选。常用酶联免疫吸附测定（ELISA），筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞。 5、克隆化 对于检测抗体阳性的杂交克隆应尽早进行克隆化，否则抗体分泌的细胞会被抗体非分泌

关于多肽合成

关于多肽合成 1．多肽化学合成概述： 1963年，R.B.Merrifield［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖. 今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield所建立的Boc法(Boc:叔丁氧羰基)之外，又发展了Fmoc 固相法(Fmoc:9-芴甲氧羰基).以这两种方法为基础的各种肽自动合成仪也相继出现和发展，并仍在不断得到改造和完善. Merrifield所建立的Boc合成法［2］是采用TFA(三氟乙酸)可脱除的Boc为α-氨基保护基，侧链保护采用苄醇类.合成时将一个Boc－氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用TFA脱除Boc，用三乙胺中和游离的氨基末端，然后通过Dcc活化、耦联下一个氨基酸，最终脱保护多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法.用Boc 法已成功地合成了许多生物大分子，如活性酶、生长因子、人工蛋白等. 多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。它是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。到现在，人们已发现和分离出一百多种存在于人体的肽，对于多肽的研究和利用，出现了一个空前的繁荣景象。多肽的全合成不仅具有很重要的理论意义，而且具有重要的应用价值。通过多肽全合成可以验证一个新的多肽的结构；设计新的多肽，用于研究结构与功能的关系；为多肽生物合成反应机制提供重要信息；建立模型酶以及合成新的多肽药物等。 多肽的化学合成技术无论是液相法还是固相法都已成熟。近几十年来，固相法合成多肽更以其省时、省力、省料、便于计算机控制、便于普及推广的突出优势而成为肽合成的常规方法并扩展到核苷酸合成等其它有机物领域。本文概述了固相合成的基本原理、实验过程，对其现状进行分析并展望了今后的发展趋势。 从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点。其基本原理是：先将所要合成肽链的羟末端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组分反应，接长肽链。重复（缩合→洗涤→去保护→中和及洗涤→下一轮缩合）操作，达到所要合成的肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，经过纯化等处理，即得所要的多肽。其中α-氨基用BOC（叔丁氧羰基）保护的称为BOC固相合成法，α-氨基用FMOC（9-芴甲氧羰基）保护的称为FMOC固相合成法， 2．固相合成的基本原理 多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。现在多采用固相合成法，从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。化学合成方法有两种，即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多优势，现在大多采用Fmoc 法合成，如图： 具体合成由下列几个循环组成：

缓释、控释制剂制剂习题及参考答案

缓释、控释制剂和口服定时、定位给药系统 练习题： 1．缓释制剂 2．控释制剂 3．迟释制剂 4．脉冲制剂 5．结肠定位制剂6．肠溶制剂 7．释放度 8．生物粘附 二、选择题 （一）单项选择题 1．渗透泵片控释的基本原理是 A.片剂膜内渗透压大于膜外，将药物从小孔压出 B.药物由控释膜的微孔恒速释放 2 3 4 5 6 7 8 9 A．15h B．24h C．48h D．＜1h E．2～8h 10．可作为不溶性骨架片的骨架材料是 A.聚乙烯醇 B.壳多糖 C.果胶 D.海藻酸钠 E.聚氯乙烯 （二）配伍选择题（备选答案在前，试题在后；每组均对应同一组备选答案，每题可能有一个或多个正确答案；每个备选答案可重复选用，也可不选用。） 【1-5】 A.聚乙二醇 B.乙基纤维素 C.羟丙甲纤维素 D.单硬脂酸甘油酯 E.硅橡胶 1．可作为不溶性骨架材料的是 2．可作为控释膜材料的是 3．可作为渗透泵片的推动剂的是

4．可作为生物溶蚀性骨架材料的是 5．可作为亲水凝胶型骨架材料的是 【6-10】 A.甘露醇 B.大豆磷脂 C.羟丙甲纤维素 D. 离子交换树脂 E.硅橡胶 6．可作为渗透泵片的渗透压促进剂的是 7．可在缓控释制剂中作为水溶性致孔剂的是 8．可作为片剂薄膜包衣材料的是 9．可作为制备脂质体的材料的是 10．可作为制备药物树脂的材料的是 【11-15】 11 12 13 14 15 1 2 3 4 5 6 E.缓释制剂要求药物缓慢恒速地释放 7．缓(控)释制剂的辅料包括 A.增粘剂 B.助溶剂 C.乳化剂 D.阻滞剂 E.骨架材料 8．以下属于膜控释制剂的是 A.微孔膜包衣制剂 B.膜-储库型经皮给药系统 C.骨架控释片 D.胃内漂浮片 E.眼用控释膜9．下列关于渗透泵型控释制剂的叙述中，正确的为 A.渗透泵片中药物以零级速率释放，属于控释制剂 B.渗透泵片与普通包衣片相似，只是在普通包衣片的一端用激光开一细孔，药物由细孔流出 C.半渗透膜的厚度、孔径、空隙率，片芯的处方是制备渗透泵片的关键 D.渗透泵片的释药速率与pH无关，在胃内与肠内的释药速率相等

小分子肽电泳

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽 [日期：2007-02-13] 来源：[字体：大中小] SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽 第四军医大学学报2000年第21卷第6期 石继红赵永同王俊楼韩苇颜真张英起 摘要：目的 研究SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示小分子多肽的方法.方法观察不同方法处理的样品，上样量对电泳结果的影响及对分子量标准（M r2512～16949）进行直线回归分析.结果样品的不同处理条件未见有差异；在该实验系统条件下上样样品为每孔5～10μg较佳；分子量标准直线回归系数r=-0.962.结论样品处理方便；上样量少；在160 g·L-1 T，60 g·kg-1 C较低的丙烯酰胺含6 mol·L-1脲的分离胶中能够显示M r为2512的多肽，是 一种显示小分子多肽的较好方法. 关键词：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；肽；蛋白质 0引言

20世纪60年代Shapiro建立了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法之后，Weber，Glossmann和Douglas等人进行了多次改进，已显示出了在分离、鉴定和纯化蛋白质方面的优越性，但对于M r小于10000的蛋白质来说是无能为力的［1］. 20世纪80年代初Sch?gger等［2］应用脲分离蛋白质复合体亚单位的11种蛋白质，但分离效果不甚理想且重复性较差.之后他们又进行了系统地研究和摸索，能够分离较大M r范围内的蛋白质.随着生物技术的飞速发展和基因工程药物的大量涌现，具有高生物活性的小分子多肽的分离、纯化和鉴定已显得尤为突出.我们在进行基因工程药物的开发研制中，对SDS-PAGE方法进行了多次改进，在较低的丙烯酰胺浓度下取得了理想的结果.此法所需仪器简单，操作方便，重现性好，时间短，只需微克量的多肽便可显带且能迅速估计出其M r，值得进一步推广和利 用. 1材料和方法 1．1试剂和仪器SDS、脲、甘油、过硫酸铵均为分析纯，西安化学试剂厂出品；丙烯酰胺（分析纯）为汕头市光华化学厂产品；N，N′-甲叉双丙烯酰胺（分析纯）为浙江黄岩人民化工厂生产；tris（分析纯）为成都试剂厂出品；TEMED为BIO-RAD产品；Tricine(Ultra pure Grade)为Solon Ind产品. BIO-RAD小型垂直式电泳附件模具；FD-201 稳压稳流电泳仪（上海医用分析仪器厂）. 1．2肽分子质量标准肽分子质量标准的M r范围2512～16949为Pharmacia lKB 公司产品. 胸腺肽α1是美国加州圣马刁市赛生药品公司产品（商品名“ZADAXIN”），是一乙酰化的多肽，M r为3108，pI 3.8. 经Sephadex G-25柱去除所含的甘露醇，然后冷冻干 燥，用样品缓冲液配成所需样品. 1．3方法 1．3．1电泳贮存液的配制阳极缓冲液中Tris为0.2 mol·L-1用HCl调pH值至8.9.阴极缓冲液为0.1 mol·L-1的Tris，0.1 mol·L-1的Tricine和0.01 g·L-1的SDS溶液，其pH 值约为8.25. 胶缓冲液为3.0 mol·L-1的Tris和0.03 g·L-1的SDS，用HCl调pH值至8.4. 称取48 g丙烯酰胺和1.5 g N，N′-甲叉双丙烯酰胺溶于100 mL纯水中，溶解混匀后经4号滤纸过滤即得到495 g·L-1 T，30 g·kg-1 C的贮存液；称取46.5 g丙烯酰胺和3.0 g N，N′-甲叉双丙烯酰胺溶于100 mL纯水中，同样得到495 g·L-1 T，60 g·kg-1 C的贮存液（T 代表丙烯酰胺的总浓度，C代表交联度）.