第13章 PCR基因扩增仪网络版习题

第十三章PCR核酸扩增仪

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习题名词解释选择题简答题

一、名词解释

1．PCR技术

2．TaqDNA聚合酶

3．水浴锅PCR核酸扩增仪

4．压缩机PCR核酸扩增仪

5．Overshooting

6．Undershooting

7．半导体PCR核酸扩增仪

8．离心式空气加热PCR核酸扩增仪

9．梯度PCR仪

10．原位PCR仪

11．原位PCR技术

12．荧光实时定量PCR技术

13．位置的边缘效应

14．模块温控模式

15．反应管温控模式

16. Ct值

二、选择题

【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。

1．以下哪种物质在PCR反应中不需要（）

A．Taq DNA聚合酶

B．dNTPs

C．Mg2+

D．RNA酶

E．合适pH缓冲液

2．以下哪种酶可耐高温（）

A．Taq DNA聚合酶

B．Hind Ⅲ

C．T4连接酶

D．RNA酶

E．Klenow片段

3．PCR反应的正确过程应为（）

A．退火→变性→延伸

B．变性→退火→延伸

C．退火→延伸→变性

D．变性→延伸→退火

E．延伸→变性→退火

4． PCR技术的本质是（）

A．核酸杂交技术

B．核酸重组技术

C．核酸扩增技术

D．核酸变性技术

E．核酸连接技术

5．Taq DNA聚合酶酶促反应最适温度为（）

A．37℃

B．50～55℃

C．70～75℃

D．80～85℃

E．94～95℃

6．温度均一性较好的PCR仪为（）

A．水浴锅PCR核酸扩增仪和压缩机PCR核酸扩增仪

B．半导体PCR核酸扩增仪和离心式空气加热PCR核酸扩增仪

C．压缩机PCR核酸扩增仪和半导体PCR核酸扩增仪

D．压缩机PCR核酸扩增仪和离心式空气加热PCR核酸扩增仪

E．水浴锅PCR核酸扩增仪和离心式空气加热PCR核酸扩增仪

7．一步就可以摸索出最适合反应条件的PCR仪为（）

A．普通PCR仪

B．梯度PCR仪

C．原位PCR仪

D．荧光PCR仪

E．实时PCR仪

8．能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为（）

A．普通PCR仪

B．梯度PCR仪

C．原位PCR仪

D．荧光PCR仪

E．实时PCR仪

9．PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )

①目的基因；②引物；③四种脱氧核苷酸；④DNA聚合酶等；

⑤mRNA ⑥核糖体

A.①②③④

B.②③④⑤

C.①③④⑤

D.①②③⑥

E.③④⑤⑥

10．PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，其特异性决定因素为（）

A.模板

B.引物

C.dNTP

D.镁离子

E.pH缓冲液

11．下述哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（）A．普通PCR仪

B．梯度PCR仪

C．原位PCR仪

D．荧光实时PCR仪

E．定性PCR仪

12．以下是经过PCR扩增后得到的Ct值，哪个样品的DNA原始拷贝数最多（）A．样品A，Ct = 20

B．样品A，Ct = 22

C．样品A，Ct = 24

D．样品A，Ct = 26

E．样品A，Ct = 28

13．以空气为加热介质的PCR仪是（）

A．金属板式实时定量PCR仪

B．96孔板式实时定量PCR仪

C．离心式实时定量PCR仪

D．各孔独立控温的定量PCR仪

E．荧光实时定量PCR仪

14．下述哪个PCR扩增仪可能具有多色多通道检测系统（）

A．普通PCR仪

B．梯度PCR仪

C．原位PCR仪

D．荧光定量PCR仪

E．定性PCR仪

15．下述哪个PCR扩增仪对温度控制要求最高（）

A．普通PCR仪

B．梯度PCR仪

C．原位PCR仪

D．荧光定量PCR仪

E．定性PCR仪

16．控温精度最高的控温方式是（）

A．水浴锅控温

B．压缩机控温

C．半导体控温

D．离心式空气加热控温

E．都一样

17．在PCR扩增过程中，下列那个步骤对温度精度要求最高（）

A．变性

B．退火

C．延伸

D．退火和变性

E．都一样

18．在PCR扩增过程中，用同样的样品，同样的PCR反应程序，同一个PCR仪，最后的结果差异非常明显，其可能的原因是下列那个（）

A．温度的准确性差

B．温度的均一性差

C．升降温的速度低

D．不同模式下的相同温度特性差

E．热盖温度不准

19．PCR核酸扩增仪最关键的部分是（）

A．温度控制系统

B．荧光检测系统

C．软件系统

D．热盖

E．样品基座

20．“位置的边缘效应”是指（）

A．温度的准确性欠佳

B．温度的均一性欠佳

C．边缘升降温速度快

D．边缘升降温速度慢

E．梯度模式和标准模式温度不一致

21．PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，下述哪一项应除外（）

A．缩短反应时间

B．提高工作效率

C．消除位置的边缘效应

D．缩短非特异性反应时间

E．提高反应特异性

22．在梯度模式下得出最佳反应条件，并以此条件在标准模式下单独做，但结果却不如人意，最有可能的原因是（）

A．样品孔温度与设定温度不一致

B．样品孔间的温度有差异

C．样品孔位置的边缘效应较高

D．升降温速度不够快

E．不同模式温度特性有差异

23．定量PCR扩增仪的关机次序一般为（）

A．关软件→关PCR仪→关电脑

B．关软件→关电脑→关PCR仪

C．关PCR仪→关软件→关电脑

D．关PCR仪→关电脑→关软件

E．关电脑→关PCR仪→关软件

【X型题】每题的备选答案中有两个或者两个以上正确答案。

1．PCR技术每一个循环均包含以下哪些环节（）

A．酶切

B．变性

C．退火

D．延伸

E．连接

2．以下哪些酶可用于PCR反应（）

A．Klenow

B．Hind Ⅲ

C．Taq DNA聚合酶

D．RNase

E．DNase

3．目前常用的PCR核酸扩增仪控温方式有（）

A．水浴锅控温

B．压缩机控温

C．半导体控温

D．离心式空气控温

E．金属控温

4．普通PCR核酸扩增仪除通常的定性PCR仪外，还包括（）A．水浴式PCR仪

B．梯度PCR仪

C．原位PCR仪

D．变温金属块式PCR仪

E．变温气流式PCR仪

5．按变温方式不同，PCR核酸扩增仪可分为（）

A．水浴式PCR仪

B．梯度PCR仪

C．原位PCR仪

D．变温金属块式PCR仪

E．变温气流式PCR仪

6．目前市场上实时荧光定量PCR仪一般有哪些类别（）A．金属板式实时定量PCR仪

B．梯度定量PCR仪

C．原位定量PCR仪

D．离心式实时定量PCR仪

E．各孔独立控温的定量PCR仪

7．下述产品哪些属于金属板式实时定量PCR仪（）A．Light Cycle TM荧光定量PCR仪

B．ABI 7500荧光定量PCR仪

C．MJ公司Chromo 4荧光定量PCR仪

D．Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪

E．Rotor-Gene 3000荧光定量PCR仪

8．下述产品哪些属于离心式实时定量PCR仪（）

A．Light Cycle TM荧光定量PCR仪

B．ABI 7500荧光定量PCR仪

C．MJ公司Chromo 4荧光定量PCR仪

D．Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪

E．Rotor-Gene 3000荧光定量PCR仪

9．PCR核酸扩增仪的温度控制主要是指（）

A．温度的准确性控制

B．温度的均一性控制

C．退火温度控制

D．升降温速度控制

E．延伸温度控制

10．荧光定量PCR仪的荧光检测系统主要包括（）

A．发光二极管

B．激发光源

C．检测器

D．光度计

E．光电倍增管

11．荧光定量PCR仪的荧光强度减弱或不稳定，可能的原因有（）A．滤光片发霉

B．光源损耗

C．半导体模块故障

D．荧光染料污染

E．光电倍增管灵敏度下降

三、简答题

1．什么是聚合酶链反应（PCR）技术？

2．PCR核酸扩增仪的工作关键是什么？经历了怎样一个发展过程？

3．PCR核酸扩增仪按照变温方式的不同可分哪几类？分别有什么特点。

4．什么是梯度PCR仪？它有什么优点？

5．何谓荧光实时定量PCR（RQ-PCR）技术？

6．实时荧光定量PCR仪有哪些种类，各有什么特点？

7．PCR核酸扩增仪的温度控制包括哪些方面？

8．为什么反应管温控比模块温控更准确？

9．实时荧光定量PCR扩增仪的荧光检测系统主要由哪两部分组成？

10．PCR扩增仪的热盖有什么作用？使用时应注意什么？

11．简述PCR扩增仪的操作规程。

12．定量PCR扩增仪常见故障有哪些，如何解决？

13．简述PCR核酸扩增仪的实际应用。

14. PCR核酸扩增仪可分哪几类？

15.PCR扩增仪的性能指标有哪些?

全基因组扩增

全基因组扩增——微量DNA分析的金钥匙 来源：青年人(https://www.wendangku.net/doc/2315009308.html,) 更新时间：2010/3/8 19:51:27 【字体：小大】 聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用使得微量甚至单个细胞DNA的分析成为可能，极大地促进了法医学、古生物学、分子诊断学和分子病理学的发展。但即便是对于非常敏感的PCR技术，许多材料所能提供的DNA量也只能用于一次或几次PC R反应。为能从少量细胞中最大限度的获取信息，全基因组扩增技术应运而生。 一、全基因组扩增的概念 全基因组扩增（whole genome amplification, WGA）是一组对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术，其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加DNA的总量。常用的方法有IRS-PCR（interspersed repeat sequence PCR）［1］、LA-PCR（linker ada ptor PCR）［2］、T-PCR（Tagged-PCR）［3］、DOP-PCR（degenerate oligonucleotide pr imed PCR）［4］、PEP-PCR（primer extension preamplification PCR）［5］等。其中最具代表性方法是DOP-PCR和PEP-PCR。 DOP-PCR和PEP-PCR的基本原理都是通过其随机引物与基因组DNA多处退火从而使大部分基因组序列得到扩增。DOP-PCR的引物是由其3′和5′端的特异核苷酸序列和中间的6个核苷酸构成的随机引物组成。其PCR程序是先在低退火温度下进行几个循环的低严谨扩增，然后再提高退火温度，进行几十个循环的严谨扩增。由于DOP-PCR的引物3′端设计的是在基因组中高频出现的序列，因此，在首轮的低严谨扩增条件下能与基因组多处退火，从而将基因组普遍扩增。然后下一轮的严谨扩增中又将低严谨扩增的产物再次放大［4］。与DOP-PCR不同的是，PEP-PCR的引物是由15个随机核苷酸组成的完全随机引物。PCR由50个循环组成，每个循环的退火温度都是由37℃连续升温至55℃，从而确保不同组成的引物与尽可能多的基因组序列退火，使整个基因组得到放大［5］。 二、全基因组扩增的质量控制 全基因组扩增的主要目的是在如实反映基因组原貌的基础上最大限度地增加DNA 量。因此，扩增效率和保真性是衡量全基因组扩增技术优劣的主要标准，此外，扩增片段的大小对于序列较长的基因片段分析来讲也是一个重要因素。 （一）扩增效率 DOP-PCR和PEP-PCR均能较大幅度地扩增模板DNA的量。据Cheung等［6］报道，DOP -PCR可将原模板扩大12至2万倍，而且，模板量越少，扩增倍数越高，这主要是由于

高中基因工程_典型例题

关于酶切的几道题： 1. (08江苏生物)将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。 请根据以上图表回答下列问题。 （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是。 （2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。 （3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？。 （4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为。（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。 ①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 1.（1）耐高温2）引物对B （3）否（4）农杆菌（5）①2 ②1 解析：答题需要以准确画出黏性末端序列为前提

2、(08海南) 图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制 性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，amp R为青霉素抗 性基因，tct R为四环素抗性基因，P为启动因子，T为终止 子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括 EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。 （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用 EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中 由两个DNA片段之间连接形成的产物有_________________________________、_________________________________、______________________三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。 （2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是。 （3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是。 （4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶时。 2、（1）目的基因—载体连接物载体--载体连接物目的基因--目的基因连接物分离纯化（每空2分，共8分）（其他合理答案也给分） （2）载体--载体连接物（2分）； （3）启动子mRNA（每空2分，共4分） （4）EcoRI和BamHI（2分）（只答一个酶不给分）

临床基因扩增检验实验室技术验收报告--仅供参考

临床基因扩增检验实验室技术验收报告 一．基因扩增检验实验室基本情况 （一）实验室所属法人单位名称: 地址: 邮编: 法定代表人: 实验室负责人: 联系人： email: 电话: 传真: (二)接受现场技术验收的实验室代表姓名及职务: 二. 验收依据:卫生部下发文《临床基因扩增检验实验室管理 暂行办法》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》 三. 验收时间: 四. 验收评审地点: 五. 技术验收结论: □合格，建议授予验收合格证书；尚存在部份一般缺陷，缺陷为

项。 □基本合格，尚存在部份严重缺陷和一般缺陷，严重缺陷为项, 一般缺陷为项, 限期改进,改进后授予验收合格证书； □不合格，停止验收，实验室改进后需重新申请。 (一) 验收中发现的问题及意见: 附件1:临床基因扩增检验实验室技术验收表; 附件2:临床基因扩增检验实验室技术验收意见汇总表; 附件3:整改要求。 (二) 需要说明的其它问题:□如果有的话见附件4;□无。 (三) 验收评审员姓名及签名: 主评审员姓名: 签名: 评审员姓名: 签名: 签名: 签名: 协调员姓名: 签名: 签字时间: (四) 签字地点: 验收评审组意见:

附件1 临床基因扩增检验实验室技术验收表

(b)高速台式冷冻离心 机(视情况定) (c) 水浴箱和/或加热 模块 (d) 生物安全柜 (e)混匀器； (f)微量加样器； (g)可移动紫外灯；注：请在验收所选项打“ 序号 验收内容 验收意见 符 合 基 但 本 有 符 缺 合 陷 不 符 合 缺 此 项 暂 不 需 考 核 评论与说明 (h)专用工作服和工作 鞋；

基因工程及其应用教学设计

第2节基因工程及其应用 孝义三中高一生物组张文 一、教材内容分析 基因工程是现代四大生物工程之一。《基因工程及其应用》是人教版高中生物必修2第6章第2节内容。本节内容主要包括三个方面，分两课时讲授。第1课时简要介绍“基因工程的原理”，第2课时介绍“基因工程的应用”及“转基因生物和转基因食品安全性”。本节内容是对前面所学育种内容的补充，是即贴近生活又远离生活的微观内容。由于在选修3中还有基因工程的介绍，因此本节的要求相对简单一些。 二、学情分析 对于基因操作的工具和基本步骤，内容抽象和复杂，学生接触少，会出现掌握不好，甚至理解错误的情况。虽然经过必修1的学习，学生的生物基础知识较扎实，思维的目的性、连续性和逻辑性已初步建立。但基因工程一节对学生来说难点较多，如果处理不好，会变成简单的死记硬背。因此在教学过程中，尽量通过生活化打比喻的方式和模型建构活动及采用多媒体动画形象化教学，并在教师引导下适时加强学生解决问题和运用图解等生物学语言归纳结论等方面的能力。切记不可讲的太多。 三、教学目标 1、简述基因工程的基本概念； 2、简述基因工程的基本工具； 3、简述基因工程的基本操作步骤； 4、通过基因工程的简介，鼓励学生积极探索新知和科学创新，树立一分为二的辩证唯物主义思想； 四、教学重点、难点分析 教学重点：基因工程的基本原理（概念、工具、操作步骤） 教学难点：基因工程的基本原理 五、教学思路 本节课主要解决如下几个问题：1）什么是基因工程？2）基因工程的主要原理是什么？3）基因工程的操作过程如何？4）基因工程有哪些方面的应用？如何看待转基因食品？由于本节内容和前面的育种内容联系比较紧密，因此可以让学生回顾前面几种育种方法的成果，再通过情景展现传统育种方法所不能达到的地方，进而引出基因工程，通过列举生活中的转基因成果让学生知道基因工程就在我们身边。而后通过与学生们所熟知的器官移植做对比，让学生理解基因工程的本质和操作过程。通过对转基因食品的讨论让学生树立辩证唯物主义观念。 六．教学策略及教学媒体 根据激趣原则，通过展示色彩绚丽的转基因生物图片入手，引出基因工程的概念，采取“引导—互动—探究”模式，即采用师生互动探究式教学，借助老师生活化打比喻和多媒体动画并安排学生制作模型活动从而使抽象的课程内容具体化，直观化和形象化。 七、教学设计流程图第1课时“基因工程的原理”

通用版2018年高考生物二轮复习三道题经典专练13基因工程(含答案)

基因工程 一、（2017年高考新课标全国卷 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。回答下列问题： （1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_______________________________________________________________________________________________。（2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______________作为载体，其原因是__________________________________。 （3）若要高效获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体，因为与家蚕相比，大肠杆菌具有___________________（答出两点即可）等优点。 （4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是___________________（填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗体”）。 （5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是______________________________ ______________________。 【答案】（1）基因A有内含子，在大肠杆菌中，其初始转录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除，无法表达出蛋白A （2）噬菌体噬菌体的宿主是细菌，而不是家蚕 （3）繁殖快、容易培养 （4）蛋白A的抗体 （5）DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体 【解析】本题综合考查了基因工程、真核和原核基因的区别、遗传物质探索等相关内容，本题源于课本中内容，又高于课本，启发学生联想，意在考查学生的理解和应用能力。 （1）基因A的编码区中有内含子和外显子，在真核生物细胞内，内含子转录来的RNA会被切除，而在原核生物细胞内，内含子转录来的RNA不会被切除，转录后直接表达，所以翻译形成的蛋白质不是A蛋白。（2）由于噬菌体是专性寄生在细菌体内的病毒，无法侵染到真核生物家蚕细胞内，所以不能用噬菌体作为载体。而家蚕属于昆虫，故可用昆虫病毒作为载体。（3）大肠杆菌作为受体菌具有繁殖周期短、易培养、遗传物质含量少、产物易分离、不会造成基因污染等优点。（4）检测目的基因是否表达的通常用抗原—抗体杂交技术，即向受体中注入抗体看是否出现杂交带，若杂交带出现则目的基因已表达。（5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，不仅证明了生物的遗传质是DNA，还证明了DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体。

6.2基因工程及其应用学案

课型：新授主备：同备审批: 7/13/2013 第6章从杂交育种到基因工程 第2节基因工程 【学习目标】1.简述基因工程的基本原理 2.举例说出基因工程在农业、医药等领域的应用 3.关注转基因生物和转基因食品的安全性 【学习重点】1. 基因工程的基本原理 【学习难点】基因工程的基本原理 【学习过程】 一、基因工程的基本原理 （一）、基因工程的概念 基因工程又叫做或。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的。 【思考】 为什么不同生物的基因可以相互转移？转基因生物是否产生了新基因和新型蛋白质？ （二）、基因工程的工具 基因的“剪刀”—— 一种限制酶只能识别特定的核苷酸序列，并在的切点上切割DNA分子。【思考】 要获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 【练一练】试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端 基因的“针线”—— “缝合”__________和_________交替连接而构成的DNA骨架上的缺口。 【思考】DNA连接酶连接的是两个脱氧核苷酸分子的什么部位？

基因的运载体目前常用的运载体有________、________和______________等。 质粒存在于中,是拟核或细胞核外能够________的______________分子。 （三）、基因工程的操作步骤 目的基因、目的基因与结合、将目的基因、目的基因的和 【思考】 目的基因和质粒为什么要用同一种限制酶切割？限制酶和DNA连接酶作用的位点相同吗？用DNA连接酶讲目的基因与运载体结合时，有其他不同的结合情况吗（两两结合时）？ 二、基因工程的应用 1、基因工程与作物育种 人们培育出的转基因作物和转基因动物主要有 ___________________________ ___ _____ ____ ____________________________________ __ 2、基因工程与药物研制 转基因药物有：________、________、________、________、________、________、________、________、________。 三、转基因生物和转基因食品的安全性 两种观点：__________________________________和_______________________________ ［课堂小结］ 【自我检测】 1．不属于基因工程方法生产的药物是（） A.干扰素 B.白细胞介素 C.青霉素 D.乙肝疫苗 2．质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是（） ①能自主复制②不能自主复制③结构很小④蛋白质⑤环状RNA分子 ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”

基因工程测试题经典

xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA

4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：

临床基因扩增检验实验室工作规范

为使基因扩增检验技术有效地应用于临床,更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务,保证检验质量,特制 定本规范。 一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其管理 临床基因扩增检验实验室的规范化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002】10号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》。为避免污染,必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置临床基因扩增检验实验室。 临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区域都必须有明确的标记,以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序,即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区,避免发生交叉污染。在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服,以便于鉴别。此外,当工作者离开工作区时,不得将各区特定的工作服带出。 清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因,因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。 (一)试剂贮存和准备区 下述操作在该区进行:贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。 贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区,不能经过产物分析区。在打开含有反应混合液的离心管或试管前,应将其快速离心数秒。试剂

原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查可用后,应将其分装贮存备用,避免由于经常打开反应管吸液而造成污染。 含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。大多数用于扩增 的试剂都应冰冻贮存。为避免因单次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂,应分装冰冻贮存试剂溶液。贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数来决定。 主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查,评价结果必须有书面报告。对于“热启动”技术(在第一个高温变性步骤后加入酶),聚合酶也可不包含在主反应混合液中。 在整个本区的实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 严禁用嘴吸取液体,加样器和吸头等必须经高压处理。 工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本工作区的实验台表面应可耐受诸 如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键,因此可使用可移动紫外灯(254nm 波长),在工作完成后调至实验台上60~90em 内照射。由于扩增产物仅几 百bp,对紫外线损伤不敏感,因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间,最好 是照射过夜。实验室及其设备的使用必须有日常记录。 (二)标本制备区 下述操作在该区进行:临床标本的保存,核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入 至扩增反应管和测定RNA时eDNA的合成。

基因工程及其应用的试题研究(精)

基因工程及其应用的试题研究 周小建（苏州市第三中学 215001） 摘要基因工程及其应用是高中生物新教材选修3的重要内容，也是高考中常考的内容。因此，对该部分试题进行研究，探寻命题的方向和特点，是提高该类试题得分率的关键，也是提高整卷成绩、拉开差距的关键。 关键词基因工程及其应用江苏高考命题特点 基因工程及其应用是选修3<现代生物科技专题>的核心内容，其地位更是由《课程标准》上的Ⅰ级（了解层次）上升为《考试说明》上的B级（理解层次），是《考试说明》上对选修3要求的3个B级中的一个，其重要性显而易见。在近几年江苏生物高考试卷中，对该部分内容都给予了高度的重视，每年都会考到，尤其是大题，而且一般会与遗传变异或其他工程的有关内容联系起来考，考查更全面，更细致。所以，有必要针对近几年江苏生物高考卷中此类试题进行剖析和研究，探寻命题的方向和规律，把握命题的指导思想，切实提高学生的得分率。 1 近4年江苏高考该部分试题分析 项目 题号38 15、38（2）、41 38（1）（2）、42B 32、34B（4） 题型非选择题选择题、非选择题非选择题非选择题 合计分值9分11分8分9分 具体考点基因工程的工具、步骤、应用及安全性问题 从上表所列内容可以看出，这部分内容主要以非选择题的形式考查，题量在2 题左右，所占的分值大致在10分左右，涉及的知识点是相对集中、有侧重的，如基因工程的工具、步骤、应用及安全性问题等内容，显然是考查的重点。而对照08年的《考试说明》发现，这些知识点都是要求的，而且还有要求比较高的B级水平（基因工程的应用），符合重点知识重点考查的命题指导思想，体现了能综合运用知识进行分析、推理、解决实际问题的要求。 2 高考生物该部分试题的命题特点 从近几年江苏高考生物卷来看，该部分试题的命题是相对比较稳定的。分析具体考题，笔者认为大致体现了以下3个方面的命题特点。 2.1 重视基础，紧扣课本 高考对基础知识的考查力度一直是很大的。要重视生物学基础知识的教学与复习。分析这几年该部分的高考试题发现，贴近教材，强化对课本基本知识点的考查。但是许多学生在平时复习中轻基础、重难题，考到相关试题，不能及时领悟题目所考查的知识点，缺乏产生相关联想、提取出相关知识点来解决实际问题的能力，导致失分增多。事实上，没有扎实的基础知识就不会形成过硬的能力，能力的培养要建立在掌握厚实的生物学知识的基础上。解题时，思维的启动往往产生于对基本概念和基本原理等基础知识有正确深刻的理解。因此在今后的教学和复习中要引起足够的重视。 例1：（2007年江苏卷第42题B题）很久以前科学家在土壤中发现了某种细菌能制造对昆虫有毒的蛋白质，当时许多人就

临床基因扩增检验实验室技术验收表

序 号验收内容 验收意见 符 合 基但 本有 符缺 合陷 不 符 合 缺 此 项 暂 不 需 考 核 评论与说明 1实验室设置和设备 1.1实验室原则上应分为四个区, 如使用全自动扩增检测仪,区 域可适当合并 1.2各工作区须有明确标记 1.3实验室设置应能有效地防止 PCR后区产物的污染。 1.4试剂贮存和准备区 （a）冰箱； （b）混匀器； （c）微量加样器； （d）可移动紫外灯； （e）专用工作服和工作 鞋； （f）消耗品（吸头、 一次性手套等）； （g）专用实验记录本、 记号笔等。 1.5标本制备区 (a) 冰箱(2~8℃和-20℃或-80℃)； (b) 高速台式冷冻离心机 (视情况定) (c) 水浴箱和/或加热模块 (d) 生物安全柜 (e) 混匀器； (f) 微量加样器； (g) 可移动紫外灯； 注：请在验收所选项打“

序号 验收内容 验收意见 符 合 基但 本有 符缺 合陷 不 符 合 缺 此 项 暂 不 需 考 核 评论与说明 (h) 专用工作服和工作鞋； (i) 消耗品（带滤心吸 头、一次性手套等）； (j) 专用实验记录本、记 号笔等。 1.6扩增区 (a) 核酸扩增仪; (b) 微量加样器(视情况 定)； (c) 可移动紫外灯； (d) 专用工作服和工作鞋； (e) 消耗品（带滤心吸头、 一次性手套等）； (f) 专用实验记录本、记 号笔等。 1.7扩增产物分析区 (a) 微量加样器； (b) 可移动紫外灯； (c) 专用工作服和工作鞋； (d) 消耗品（带滤心吸头、 一次性手套等）； (e) 专用实验记录本、记号 笔等。 2.设施和环境 2.1实验室的设施、工作区域、能 源、照明、温控、通风等 应便于检测工作的正常进行。 2.2实验室应配备温度湿度计、稳 压电源等。 2.3进入和使用实验室各区域应 有明确的限制和控制。 2.4应有实验室清洁、消毒制度及 相应用具； 注：请在验收所选项打“ ”。

动物转基因技术及其应用

动物转基因技术及其应用 摘自（作者：幸宇云任军江西农业大学来源：《百名专家谈转基因》） 转基因是指利用现代分子生物学技术，将某些生物的基因导入到其他物种中，由于导入基 因的表达，引起这些物种性状发生可遗传的变化。转基因动物就是利用转基因技术获得的、具 有正常表达和可稳定遗传外源基因的动物。自1982年第一只转基因动物——一只因导入大鼠 生长激素基因而使生长速度倍增的转基因鼠诞生以来，各种转基因动物，如鱼、兔、猪、牛、 羊等先后问世，1997年，举世轰动的“多莉”克隆羊的诞生使转基因克隆动物成为现实，转 基因动物研究得到了进一步发展。 生产转基因动物的方法有很多，如：显微注射法、精子载体法、逆转录病毒载体法、胚胎 干细胞介导法、体细胞克隆介导法、人工染色体介导的基因转移法等，这些方法各有其优缺点，在转基因动物生产中有着不同程度的应用。 显微注射法是动物转基因技术中最早使用的方法。1982年，美国人Gordon就是利用这种 方法获得了名噪一时的转基因鼠。其基本原理是在显微镜下直接将目的基因注射到受精卵细胞 的原核内，在目的基因与胚胎基因组融合后进行体外培养，最后移植给受体母畜“借腹怀胎”。这种方法的优点是：可靠性高，重复性好，目的基因的整合效率相对较高，导入基因片段的大 小和类型不受限制，转基因在世代之间可以稳定遗传。该方法也有其缺点，主要体现在导入基 因整合的随机性和不可见性，这样会导致基因表达不稳定及可能出现不希望的插入突变。该方 法成功的范例很多，如：美国科学家Hammer等在1985年获得一批转基因兔、绵羊和猪；荷兰 科学家KrimPenfort等于1991年获得了转基因牛；1985年，我国朱作言院士等成功获得了世 界上首例转基因鱼；由中国农业大学李宁院士领导的课题组于2008年获得了一头导入人CD20 抗体基因的转基因奶牛——贝贝。 有的学者另辟蹊径，创立了精子载体转基因法。该方法是将精子与目的DNA进行预培养后，使精子具有携带目的基因进入卵子的能力，精子与卵子结合后，该基因被整合到受精卵的DNA 中。同显微注射法相比，该方法有几个明显的优点：无需显微注射操作，不会对胚胎造成损伤，整合率高，成本很低，不需要对动物进行胚胎移植手术处理等。但该方法成功率不高、效果不 稳定，有待科研人员进一步探索和改进。与显微注射法相比，该方法成功的例子不多。1989 年意大利Lavitrano等首次报道利用精子载体法获得转基因鼠；1996年意大利Sperandio科 研小组报道了采用该方法生产转基因牛和猪。 谈到病毒，人们往往面容失色，殊不知病毒在科学上有很多妙用。逆转录病毒是一种RNA 病毒，在转基因技术中有着独特的应用。人们将目的基因结合到逆转录病毒上，通过病毒感染 可将目的基因插入到宿主基因组中去。该方法具有可同时感染大量胚胎、不需要昂贵的显微注 射设备等优点，但也存在插入外源DNA大小有限、外源基因易发生重排和丢失、逆转录病毒的 序列可能干扰转基因表达等缺点。应用该方法，美国人Salter等（1987）生产出转基因鸡； 德国学者Hofmann等获得绿色荧光蛋白转基因猪（2003），随后又生产出转基因牛（2005）； 来自冷泉港实验室的Michael获得能够发荧光的山羊（2006）。 胚胎干细胞是生命体中保留的未成熟细胞，具有再分化形成其他细胞和组织器官的潜力， 被称为“万能细胞”。利用胚胎干细胞生产转基因动物的原理是将外源基因导入分离好的胚胎 干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞注射于受体动物胚胎后，参与宿主的胚胎融合形成嵌合体，从而得到转基因动物。这一方法的优点是可以对胚胎干细胞进行特定选择。缺点是目前只有小 鼠干细胞系比较成熟，而家畜干细胞系还未完全建立，有不少问题尚待解决。 体细胞克隆介导的转基因是动物转基因技术中的“高级版本”。说到体细胞克隆，很多人都会想到一位“动物明星”——多莉羊，它是于1997年由英国Wilmut等获得的杰作。转基因 克隆技术是转基因技术和动物克隆技术的有机结合，其基本原理是将目的基因导入动物体细胞

转基因技术及其应用

转基因技术及其应用 转基因动物 转基因动物是指用实验导入的方法将外源基因在染色体基因内稳定整合并能稳定表达的一类动物。1974年，Jaenisch应用显微注射法，在世界上首次成功地获得了SV40DNA转基因小鼠。到目前为止，人们已经成功地获得了转基因鼠、鸡、山羊、猪、绵羊、牛、蛙以及多种转基因鱼。 转基因动物技术 原核显微注射法 逆转录病毒载体法 胚胎干细胞介导法 精子介导法 转基因技术的应用 在基础理论方面的应用由于外源动物基因可在转基因动物细胞中整合、表达，并制约于受体基因背景的调控，因此，可把转基因本身当作一个理想的功能标记，进而在理论实践方面得到应用： 可以对基因的结构和功能进行研究，Jacob和Kollaid等用两种不同的基因的局部片段组合成融合基因，做转基因工作，观察了这些异常的外源基因在宿主动物中的表达情况，并进行了有意义的探讨。 可以进行组织表达特异性研究，Fukamizu等用含有转录起点上游3Kb，下游1.2Kb的人肾素基因构建转基因小鼠。 还可以研究发育过程的特异性表达。将不同的外源基因转入宿主动物受精卵或早期胚胎干细胞，可观察研究目的基因在胚胎不同发育阶段的特异性表达、闭关及调控机理。应用于动物生产 在医学领域中的应用 建立诊断和治疗人类疾病的动物模型 生产可用于人体器官移植的动物器官异源器官移植可能是解决世界范围内普遍存在. 器官短缺的有效途径，目前对器官供体动物研究较多的是猪。猪作为人类器官移植的供体动物有以下一些优势：妊娠期短，产仔数多，后代生长快，而且不存在伦理方面的问题。更重要的是猪的不同发育时期的器官，诸如心脏、肾等与不同年龄的人的器官在大小上比较接近，极有可能代替病人的某些器官。 美:能发红光的转基因鱼 在美国得克萨斯州，一种能发红色荧光的

全基因组扩增技术

全基因组扩增(whole gemome amplification，WGA)是一组对全部基因组序列进行非选择性扩增 的技术，其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加DNA的总量。其基本原理为：采用 的多重置换扩增（MDA）技术，能对基因组DNA进行稳定的扩增。利用随机六碱基引物在多 个位点与模板DNA退火，接下来在高扩增效率和保真性的Phi29 DNA聚合酶在DNA的多个位 点同时起始复制，它沿着DNA模板合成DNA,同时取代模板的互补链。被置换的互补链又成为 新的模板来进行扩增，因此最终我们可以获得大量高分子量的DNA。 全基因扩增中使用独特的Phi 29 DNA聚合酶，该酶对于模板有很强的模板结合能力，能连续扩增100Kb的DNA模板而不从模板上解离。同时这种酶具有3’—5’外切酶活性，可以保证扩增的高保真性。目前市场上普遍采用Qiagen公司的Repli-g Mini Kit 系列全基因组试剂盒。本试剂盒的开发对国内用于全基因扩增领域有着广泛的应用前景。 可以从少量样本中稳定扩增全基因组DNA。该试剂盒的开发过程包括分离和扩增DNA的试剂，适用的样本广泛，包括已纯化的基因组DNA、全血、组织培养细胞、显微切割得到的细胞、速冻的组织切片、血浆血清中的细胞、口腔细胞、血斑。具有以下特点： 1.产物应用途径广阔 PCR（包括多重PCR、长片段PCR以及定量PCR）、克隆、文库构建、单倍型确定、测序、基 因芯片、遗传分析（片段差异、微卫星差异、单碱基差异、SNP、STR等）。 2、高产量 10ng基因组DNA经扩增后可产生〉15ug（20ul反应体系）的DNA反应产物，扩增倍数可达上 万倍。 3、扩增产物长度以及覆盖率有保证 这是我们公司全基因组扩增技术（多重置换扩增技术），这不是一个PCR过程。目前这个 技术比较流行，之前的技术已经有些过时。我们试剂盒里的BUFFER已经包含了引物，客 户无需另外购买。

基因工程习题

第二章基因工程习题 一、选择题 1. 基因工程的单元操作顺序是【】 Ａ增，转，检，切，接 Ｂ切，接，转，增，检 Ｃ接，转，增，检，切 Ｄ检，切，接，增，转 Ｅ切，接，增，转，检 2. 根据当今生命科学理论，基因工程的用途是【】 I 分离纯化基因II 大量生产生物分子III 构建新型物种IV 提高基因重组效率ＡI + II + III ＢI + II + IV ＣI + III + IV ＤII + III + IV ＥI + II + III + IV 3. 根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【】 Ａ基因诱变 Ｂ分子克隆 ＣDNA重组 Ｄ遗传工程 Ｅ基因无性繁殖 4. 下列有关基因的叙述，错误的是【】 Ａ蛋白质是基因表达的唯一产物 Ｂ基因是DNA 链上具有编码功能的片段 Ｃ基因也可以是RNA Ｄ基因突变不一定导致其表达产物改变结构 Ｅ基因具有方向性 5. 天然Pst I 限制性内切酶的来源是【】 ＡBacillus amyloliquefaciens

ＢEscherichia coli ＣHaemophilus influenzae ＤProvidencia stuartii ＥStreptomyces lividans 6. 下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的是【】 A ①② B ①③ C ①④ D ②③ 7. 若载体DNA 用M 酶切开，则下列五种带有N 酶粘性末端的外源DNA 片段中，能直接与载体拼接的是【】 M N ＡA/AGCTT T/TCGAA ＢC/CATGG ACATG/T ＣCCC/GGG G/GGCCC ＤG/GATCC A/GATCT ＥGAGCT/C G/AGCTC 8. T4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是【】 Ａ2' -OH 和5' -P Ｂ2' -OH 和3' -P Ｃ3' -OH 和2' -P Ｄ3' -OH 和5' -P Ｅ5' -OH 和3' -P 9.下列哪一种酶作用时需要引物？

基因扩增检验实验室技术审核申请书

附件1： 山东省临床基因扩增检验实验室 技术审核申请书 申报单位（盖章）： 申报日期： 希望审核时间： 山东省卫生厅印制 二〇一一年三月十一日

山东省临床基因扩增检验实验室技术审核 申报材料目录 1.医疗机构设置临床基因扩增检验实验室正式申请； 2.《医疗机构执业许可证》复印件； 3.拟设基因扩增检验实验室的设置平面图； 4.拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况、对临床基因扩增检验实验室的需求情况以及实验室运行的预测分析； 5.检验报告样单（2份）； 6.实验室技术审核相关表格； 7.实验室相关程序文件和标准操作程序（SOP）； 8.其它有关质量文件名称或证明材料。

实验室技术审核相关表格 一、医院基本情况 医院名称 医院类别医院等次 地址邮政编码 联系电话传真电话 医院实际开放床位数医院业务用房建筑面积 m2医院在编人数人，其中卫生技术人员数人，管理人员数人； 法定代表人联系电话（办）：（手机）： 二、实验室情况 实验室负责人电子邮箱 联系电话办：手机：传真 实验室总人数人高级职称人数人，占 % 副高级职称人，占 % 中级职称人，占 % 初级职称人，占 % （一）技术队伍情况 1．实验室主要负责人 姓名性别出生 年月 年龄 学历学位职务职称所学专业毕业院校毕业年月工作简历：

主要著作及成果：

2．实验室工作人员一览表 序号姓名性别年龄 学历 (学位) 职务职称 所学 专业 毕业 时间 从事本专业时间 培训合格 证书号 备注 5

（二）主要仪器设备 序号仪器设备名称及编号型号规格数量生产厂家购买日期备注 6

动物转基因技术的研究现状与应用

动物转基因技术的研究现状与应用 课程：基因工程姓名：迪丽努尔·尼扎木墩学号：2013081605 摘要转基因动物就是指通过人工的方法将外源基因导人动物染色体基 因组，使之稳定表达并能遗传给后代的一类动物。转基因技术的一般方法有原核期胚胎的显微注射法（Microjection）、逆转录病毒载体法、精子载体法、体细胞核移植技术、胚胎干细胞介导的基因转移，这几种方法各有其公优缺点，在动物转基因上均有不同的应用，目前在动物抗病育种、建立诊断和治疗人类疾病的动物模型、利用转基因动物生产药用蛋白质等方面应用越来越广泛。 关键词转基因技术方法研究现状 转基因动物（transgenicanimal）指通过基因工程技术将目的基因导入生殖细胞、早期胚胎干细胞和早期胚胎，并整合到受体细胞的基因组中，它们经过各种发育途径形成所有细胞都包含目的基因的个体，称转基因动物（也称个体表达系统）。导入的基因称为转入基因（transgene），而整个技术则称为转基因技术（transgenictechnology或transgenesis）[1]。现代转基因动物（tx-ansgenicanimal）研究始于20世纪80年代以后,1980年，Gordon等首次获得转基因小鼠目前除转基因小鼠外，转基因兔、绵羊、猪、牛及转基因山羊、转基因鸡、转基因大鼠、转基因猴等陆续育成[2，3]。本文将从转基因动物的原理、主要方法和应用等方面作一综述。 1转基因技术的一般方法

能否将在细胞中进行的遗传修饰过渡到整体以及实现向后代的传递，主要取决于所进行修饰的细胞类型和与其相应的育种技术。迄今为止，能够被有效地用来进行转基因动物研究的途径主要有以下几种[4]： 1.1原核期胚胎的显微注射法（Mi-crojection） 该法由美国人Gordon发明，其主要步骤包括：（1）分离、克隆和重组外源基因，构建载体；（2）将融合基因注入受精卵的原核（一般是雄原核）；（3）将微注射后的受精卵移入假孕母畜的输卵管继续发育。Palmiter等（1982）将带有小鼠金属硫蛋白I基因启动子的大鼠生长激素基因导入小鼠的受精卵，获得“巨型小鼠”，在生命科学领域引起了不小的轰动。按照转基因小鼠的思路，转基因兔、转基因绵羊、转基因猪、转基因山羊都相继成功。显微注射方法相对简单，整合率高，是目前应用比较广泛，效果比较稳定的制作转基因动物的方法之一。但该方法的整合位点随机，整合一般是多拷贝首尾串联相接，不利于研究基因的结构、功能及表达调控。 1.2逆转录病毒载体法 1.2.1逆转录病毒载体感染发育早期的动物胚胎：该方法主要利用逆转录病毒的长末端重复序列（longtermi-nalrepeats，LTRs）区域具有转录启动子活性以及逆转录病毒可以直接整合到宿主染色体上的特点，将外源基因连接到LTRs下部，构建重组载体，直接感染受精卵或微注入囊胚腔中。达到外源基因在宿主染色体上的整合、表达。Salter和Haskell等分别用此方法作出了转基因鸡和牛[5]。 1.2.2逆转录病毒载体注射MⅡ期的卵母细胞：Anthony等[6]（1998）对逆转录病毒载体感染发育早期的动物胚胎的方法进行了改进。他认为逆转录病毒载体介导的基因整合的关键在于细胞分裂时出现核膜分解。有丝分裂时核膜降解的时间很短。细胞分裂完成后，核膜很快重新形成。而处于减数分裂中期（MⅡ）的卵母

全基因组关联分析的原理和方法

全基因组关联分析(Genome-wide association study;GWAS)是应用基因组中数以百万计的单核苷酸多态性(single nucleotide ploymorphism，SNP)为分子遗传标记，进行全基因组水平上的对照分析或相关性分析，通过比较发现影响复杂性状的基因变异的一种新策略。 随着基因组学研究以及基因芯片技术的发展，人们已通过GWAS方法发现并鉴定了大量与复杂性状相关联的遗传变异。近年来，这种方法在农业动物重要经济性状主效基因的筛查和鉴定中得到了应用。 全基因组关联方法首先在人类医学领域的研究中得到了极大的重视和应用，尤其是其在复杂疾病研究领域中的应用，使许多重要的复杂疾病的研究取得了突破性进展，因而，全基因组关联分析研究方法的设计原理得到重视。 人类的疾病分为单基因疾病和复杂性疾病。单基因疾病是指由于单个基因的突变导致的疾病，通过家系连锁分析的定位克隆方法，人们已发现了囊性纤维化、亨廷顿病等大量单基因疾病的致病基因，这些单基因的突变改变了相应的编码蛋白氨基酸序列或者产量，从而产生了符合孟德尔遗传方式的疾病表型。复杂性疾病是指由于遗传和环境因素的共同作用引起的疾病。目前已经鉴定出的与人类复杂性疾病相关联的SNP位点有439个。全基因组关联分析技术的重大革新及其应用，极大地推动了基因组医学的发展。（2005年, Science杂志首次报道了年龄相关性视网膜黄斑变性 GWAS结果,在医学界和遗传学界引起了极大的轰动,此后一系列GWAS陆续展开。2006年, 波士顿大学医学院联合哈佛大学等多个研究机构报道了基于佛明翰心脏研究样本关于肥胖的 GWAS结果 (Herbert等. 2006);2007年, Saxena等多个研究组联合报道了与 2型糖尿病( T2D )关联的多个位点, Samani等则发表了冠心病 GWAS结果( Samani 等. 2007); 2008年, Barrett等通过 GWAS发现了 30个与克罗恩病( Crohns ' disrease)相关的易感位点; 2009年, W e is s等通过 GWAS发现了与具有高度遗传性的神经发育疾病——自闭症关联的染色体区域。我国学者则通过对 12 000多名汉族系统性红斑狼疮患者以及健康对照者的GWAS发现了 5个红斑狼疮易感基因, 并确定了 4个新的易感位点( Han 等. 2009)。截至 2009年 10月,已经陆续报道了关于人类身高、体重、血压等主要性状, 以及视网膜黄斑、乳腺癌、前列腺癌、白血病、冠心病、肥胖症、糖尿病、精神分裂症、风湿性关节炎等几十种威胁人类健康的常见疾病的 GWAS结果, 累计发表了近万篇论文, 确定了一系列疾病发病的致病基因、相关基因、易感区域和 SNP变异。）标记基因的选择：