自噬监测——LC3双标腺病毒(完整版)
自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南
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自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南
背景：
自噬是细胞内的一种“自食（Self-eating ）”的现象，凋亡是“自 杀（Self-killing ）”的现象，二者共用相同的刺激因素和调节蛋白， 但是诱发阈值和门槛不同，如何转换和协调目前还不清楚. 自噬是指 膜（目前来源还有争议，大部分表现为双层膜，有时多层或单层）包 裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体，最后与 溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，以实现细胞稳 态和细胞器的更新。目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略 和手段有：通过western blot 检测LC3的剪切；通过电镜观测自噬体 的形成；在荧光显微镜下采用GFP （-RFP ）-LC3等融合蛋白来示踪自 噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多，针对于此我们 汉恒生物科技（上海）有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流) 的mRFP-GFP-LC3腺病毒，mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指 示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对 酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检 测到红色荧光。这种串联的荧光蛋白表达载体系统直观清晰的指示了 细胞自噬流的水平，是我们自噬研究尤其是自噬流研究不可或缺的利 器。
mRFP-GFP-LC3腺病毒的操作
收到病毒后的处理
（一）、腺病毒的储存
1、腺病毒采用冰袋运输。
（1）、收到病毒液后如未融化请置于-80℃冰箱，下次使用时再进
行分装；
（2）、如客户收到时腺病毒已融化，请直接分装后置于-80℃冰箱
保存；若短期内用于实验，可分装部分于4℃保存（尽量一周内用完）。
2、尽量避免反复冻融，否则会降低病毒滴度（每次冻融会降低病
毒滴度10%）。建议不要在-20℃下长期保存。如果病毒储存时间
超过6个月，应该重新测定病毒滴度。
3、建议收到病毒产品后根据实验需求自行分装或购买经过分装的小
包装病毒产品（购买时请提出）。
（二）、腺病毒的稀释需要稀释病毒时，将病毒取出后置于冰上融解，使用培养目的细胞
用PBS 或培养基稀释到所需浓度后混匀分装后4℃保存，并尽快用于
实验（尽量一周内用完），动物实验建议使用注射用平衡液来稀释，
并尽快用完。
感染目的细胞
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由于腺病毒是自主复制性基因载体，不能插入基因组稳定遗传，因此实验中细胞感染腺病毒的实验需要具体情况具体对待。一般根据
外界刺激处理的时间来选择感染腺病毒的时间，短时程处理（一周之内）建议先感染腺病毒之后再进行处理，长时程刺激的建议在刺激结
束前2~3 天进行腺病毒感染。另外不同细胞的M OI 不同，所以在将
病毒感染正式感染目的细胞前，需要做一个预实验以确定目的细胞中
加入的病毒数。
（一）细胞准备
将状态良好的目的细胞接种到24孔板，使细胞浓度为1×105/ml 细胞，接种细胞数量因细胞的生长速度而略有不同，一般是保证第二
天进行病毒感染的时候细胞汇合率介于50%至70%直接。
（二）病毒感染
I、贴壁细胞由于该病毒感染后续拍照需要进行自噬小点的计算，
因此需要在
高倍镜下拍照，条件允许最好使用共聚焦显微镜拍照，此时需要把细
胞铺被在玻片上面（部分细胞铁壁能力不是很强，此时需要预先在玻
片上包被g aletin 甚至l aminin）。感染实验在1/2 体积培养液感染
（详见下表格）。加入的病毒量范围在M OI=20～50 内（具体感染的
操作量参见附录表格），每个M OI 值加两个孔 2 小时后换液。
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自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南
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II 、悬浮细胞 上面介绍的是针对贴壁细胞的感染方法，若是悬浮或半悬浮细
胞，则需要通过平角离心转染法，即将适量的病毒液加入细胞培养皿 后，封好口，放入平角离心机后，低速离心 1h ，然后放入培养箱中 正常培养即可。若由于实验条件有限，没有平角离心机，可用离心管 代替，将细胞吹打吸入离心管中，进行低速离心，去掉大部分上清， 然后加入适量的病毒液，室温放置 10min （不能超过半小时），然后 将细胞和病毒液同时吸出转入培养皿中继续病毒感染至 2 小时后换 液即可。
（三）观察感染情况 感染24小时后，可以开始观察到GFP 以及
RFP 表达，36-48小时
可以进行细胞固定、封片（需要使用防淬灭的固定剂）、拍照分析。
（四）结果分析
mRFP-GFP-LC3 串联荧光蛋白腺病毒中表达的G FP 和m RFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体（由 GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后G FP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光，原理如下图所示）。
统计方法
我们在显微镜成像后红绿荧光m erge 后通过m erge 后出现的黄色
斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体,通过不同颜色斑点
的计数可以清晰的看出自噬流的强弱:一般统计采用人为计数的方
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法，也就是统计叠加（overlay ）之后黄色斑点和红色斑点的数目， 然
后做出 b ar 图。
如下图:细胞转染 mRFP-GFP-LC3 病毒后给予氨基酸剥夺处理 2 小 时后出现明显增强的自噬以及自噬流（通过 merge 后的红色小点明显 增多可以判定自噬流水平升高）。
实验操作注意事项
Antioxid Redox Signal 14(11): 2179-2190.
1、操作病毒时请尽量使用生物安全柜；
2、操作时需戴上帽子，佩戴双层手套，双层口罩；
3、病毒操作中绝对禁止在安全柜内有任何皮肤直接暴露的情况；
4、剩余的病毒和接种用的注射器等耗材需高压灭菌后才能扔弃；
5、操作完毕要及时用肥皂和水洗手消毒；
6、未尽事宜请咨询汉恒生物技术人员了解详情，汉恒生物全国免费热
线400-092-0065；
7、您可登录汉恒生物官网w https://www.wendangku.net/doc/2d261326.html, 观看腺病毒实验操作视频，并与我们的客服人员互动交流。
参考文献：
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自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南
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附录
注：
1）24板长满了细胞大约有3×105个细胞。 如果一天后要长到70％（2.1×105）， 建议1.2－1.4×105个细胞。因为细胞刚放进去的前几个小时需要粘在生长表面 及适应新的生长条件，不会达到24小时翻一倍的速度。其他规格培养可参照此 确定相应culture 细胞量。
2）MOI 值: MOI 是multiplicity of infection 的缩写，中文译为感染复数,实际的含 义即为每个细胞被多少个有活力病毒所感染。各种细胞的最适MOI 值有差别，请 客户正式实验前先进行预实验摸索最适MOI 。
腺病毒中文操作手册
腺病毒载体操作手册中文版 腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介 1 第二章应用重组腺病毒的优点 2 第三章 AdEasyTM 技术 3 3.1 技术概况 3 3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程 3 第四章主要流程 4 4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1 克隆的一般原则 4 4.1.2 构建重组AdEasyTM转移载体 5 4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生 5 4.2.1 共转化的一般原则 5 4.2.2 共转化方法 5 4.2.3 预期结果 5 4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增6 4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A 细胞 6 4.4.1 细胞铺板 6 4.4.2 磷酸钙转化技术 7 第五章常用技术 8 5.1 QBI-293A细胞培养 8 5.1.1 QBI-293A细胞的初始培养8 5.1.2 QBI-293A细胞的维持培养和增殖 8 5.1.3 QBI-293A细胞的冻存 8 5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生 9 5.2.1 感染QBI-293A细胞 9 5.2.2 病毒空斑形成 9 5.2.3 琼脂糖覆盖被感染细胞 9 5.3 MOI测定 10 5.4 腺病毒感染力测定 10
5.4.1 X-Gal染色 11 5.5 重组腺病毒的筛选和纯化 11 5.5.1 挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送 11 5.5.2 病毒空斑挑选和小量扩增12 5.5.3 Western杂交 13 5.5.4 Southern杂交和点杂交 13 5.5.5 病毒裂解产物PCR 14 5.5.6 免疫测定 14 5.5.7 功能测定 14 5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增 15 5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒 16 5.7.1 不连续密度梯度离心 17 5.7.2 连续密度梯度离心 17 5.7.3 病毒溶液去盐和浓集 17 5.8 病毒滴度测定 18 5.8.1 O.D.260 nm (VP/ml) 19 5.8.2 空斑测定法 20 5.8.3 50%组织培养感染剂量法 20 第六章疑难解答 22 6.1 QBI-293A细胞培养 22 6.2 感染力测定 22 6.3 转移载体克隆 23 6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组24 6.5 转染QBI-293A细胞 25 6.6 筛选和测定 25 6.7 在QBI-293A细胞中表达 26 6.8 重组腺病毒的扩增 26 6.9 纯化 26 6.10 病毒滴度测定 27 缩写英文全称中文全称 Ad Adenovirus 腺病毒 Ad5 Adenovirus serotype 5 血清5型腺病毒 AdV Adenoviral Vector 腺病毒载体Amp Ampicillin 氨苄青霉素 β-Gal β-Galactosidase β-半乳糖苷酶 bp Base Pair 碱基对
应用CRISPR技术制备ATG7基因Knockout的N2a细胞的试验研究宋
应用CRISPR 技术制备ATG7基因Knockout的N2a细胞的实验研究 宋福永1小潘美贵2小松雅明2 1山东大学公共卫生学院卫生毒理学系，山东济南 250012 2 新泻大学医学部第一生化研究室，日本新泻 951-8510 （*通讯作者：宋福永，E-mail: fysong3707@https://www.wendangku.net/doc/2d261326.html,） 摘要：【目的】Clustered regularly interspaced short palindromic repeats /CRISPR-associated 9 (CRISPR/Cas9) 技术是基因定点修饰的最新技术，它通过crRNA 和Cas 蛋白所形成的核蛋白复合物对靶基因的PAM和protospacer序列进行特异性识别，实现基因组的精确修饰。Neuro-2a (N2a) 细胞是小鼠神经瘤细胞，经诱导能分化成神经元样细胞，且对有机磷毒物具有良好的反应性，因此被作为评价有机磷神经毒性的首选细胞株。本研究拟利用CRISPR-cas 9技术制备ATG7基因Knockout 的自噬缺陷型N2a细胞，以便于深入地探讨细胞自噬与有机磷化合物的神经毒性之间的关系。【材料和方法】⑴设计合成1对ATG7 靶向序列（上链：TGTATGAGACCACGAAGTTGAACAGTACCGCC，下链：AAACGGCGGTACTCGTTCAACTTGTGGTCTCA）；⑵ATG7靶向引物变性与Cas9 smart Nuclease Vector的连接；⑶转染E. coli，提取质粒DNA测序验证；⑷将Cas9-ATG7质粒DNA、pBHR-Vector、FuGENE HD按比例混合，转染N2a细胞；⑸荧光显微镜观察N2a细胞GFP表达，利用嘌呤霉素筛选；⑹FACS流式细胞仪单细胞分选培养；⑺提取克隆细胞的DNA，PCR 扩增ATG7 (上游引物为TGTTTTGGTAGGCTGGTAAG；下游引物为CAATATAGAACGGATGCCCT，利用异源双链泳动分析(HMA)技术检测ATG7突变体；⑻将筛选的ATG7突变细胞培养，Western Blot检测ATG7表达，将筛选出的ATG7-/-细胞扩大培养；⑼利用饥饿诱导法验证自噬活性，即EBSS处理细胞4小时，提取细胞蛋白，Western Blot检测LC3的表达。【结果】⑴DNA测序：经DNA测序证实ATG7靶向序列插入到Cas9 smart Nuclease Vector，表明 Cas9-ATG7质粒构建成功。⑵ HMA检测：Cas9-ATG7质粒转染的N2a细胞经过嘌呤霉素筛选，流式细胞仪单细胞分选培养96孔板5个，2周内共生长出 126个细胞克隆中，经HMA检测发现57株ATG7突变细胞。⑶Western Blot检测ATG7表达：ATG7突变细胞扩大培养后，Western Blot检测发现有3株细胞不表达ATG7，即为ATG7-/-的N2a细胞。⑷细胞自噬活性鉴定：上述3株细胞经EBSS处理后，WB检测仅观察到LC3-Ⅰ，未观察到LC3-Ⅱ。在此基础上，我们又利用溶酶体抑制剂（E64d 和pepstatin A，EP）阻断自噬降解途径，进一步观察了细胞自噬流的影响，仍未观察到LC3-Ⅱ。实验结果证实上述3株细胞均为自噬缺陷型细
管理体系过程方法的概念和使用指南
最新国际质量管理文件 管理体系过程方法的概念和使用指南 1 引言 本文件为理解“过程方法”的概念、意图及其在ISO9000族质量管理体系标准中的应用提供指南。本指南也可用于其他管理体系采用过程方法，不论组织的类型和规模如何。 本指南的目的是推动描述过程的方法的一致性，并使用与过程有关的术语。 过程方法的目的是提高组织在实现规定的目标方面的有效性和效率。 过程方法的好处有： ?对过程进行排列和整合，使策划的结果得以实现； ?能够在过程的有效性和效率上下功夫； ?向顾客和其他相关方提供组织一致性业绩方面的信任； ?组织内运作的透明性； ?通过有效使用资源，降低费用，缩短周期； ?获得不断改进的、一致的和可预料的结果； ?为受关注的和需优先安排的改进活动提供机会； ?鼓励人员参与，并说明其职责。 2 什么是过程？ “过程”可以定义为“将输入转化为输出的一组相互关联、相互作用的活动”。这些活动需要配置资源，如人员和材料。图1所示为通用的过程。
与其他方法相比，过程方法的主要优点是对这些过程间的相互作用和组织的职能层次间的接口进行管理和控制（在第4章中详细说明）。 输入和预期的输出可以是有形的（如设备、材料和元器件）或无形的（如能量或信息）。输出也可能是非预期的，如废料或污染。 每一个过程都有顾客和受过程影响的其他相关方（他们可以是组织内部的，也可以是外部的），他们根据其需求和期望规定所需要的输出。 应通过系统进行收集数据、分析数据，以提供有关过程业绩的信息，并确定纠正措施或改进的需求。 所有过程都应与组织的目标相一致，要规定所有过程都增值，与组织的规模和复杂程度相适应。 过程的有效性和效率可通过内部和外部评审过程予以评审。 3 过程的类型 可规定以下类型的过程 ——组织的管理过程。包括与战略策划、制定方针、建立目标、提供沟通、确保获得所需的资源和管理评审有关的过程。 ——资源管理过程。包括为组织的管理、实现、测量过程提供所需资源的所有过程。 ——实现过程。包括提供组织预期输出的所有过程。 ——测量、分析和改进过程。包括测量和收集业绩分析及提高有效性和效率的数据的那些过程，如测量、监视和审核过程，纠正和预防措施，它们是管理、资源管理和实现过程不可缺少的一部分。 4 过程方法的理解 过程方法是一种对如何使活动为顾客和其他相关方创造价值进行组织和管理的有力方法。
全肠外营养药物使用指南
**市人民医院 肠外营养药物使用指南 全肠外营养（TPN）药物是经静脉途径供应患者所需的营养要素，包括热量（碳水化合物、脂肪乳）、必需和非必需氨基酸、维生素、电解质及微量元素，以抑制分解代谢、促进合成代谢，并维持细胞、器官结构与功能的需要。 营养支持的适应症、肠外营养剂的选择、营养液的配制及输注方法、途径、护理都会影响患者的恢复治疗，因此，规范化的营养支持模式势在必行，从而避免在营养支持过程中发生不合理现象，最大程度保证为患者提供安全、合理、有效、经济的营养支持。 一、肠外营养的适应证 （一）重度营养风险或蛋白质-能量营养不良，经口或经肠道营养素摄入不足，且短期内（10～14天）无法恢复正常进食者。 （二）胃肠功能障碍。 （三）胃肠道梗阻、消化道瘘、短肠综合征。 （四）重症活动期炎症性肠病，无法耐受肠内营养支持。 （五）重症胰腺炎，肠内营养出现不良反应或热量供应不足时，须联合应用肠外营养。 （六）重症胰腺炎，无法耐受肠内营养时。 （七）放射性肠炎。
二、肠外营养的禁忌证
（一）严重水、电解质紊乱，酸碱平衡失调。 （二）休克、器官功能衰竭终末期。 （三）下列情况慎用肠外营养： 1、无明确治疗目的或已确定为不可治愈而盲目延长治疗者：如广泛转移的晚期恶性肿瘤伴恶病质的患者，生活质量差、任何治疗方法均无明显改善作用，此时肠外营养也无明显益处，反而会增加患者生理和经济负担。 2、胃肠道功能正常或有肠内营养适应证者：对接受肠外营养支持的患者，应注意观察胃肠道功能恢复情况，及时有肠外营养过渡到肠内营养。 3、患者一般情况良好，预计需要肠外营养少于5天者。 4、原发病需立即进行急诊手术者。 5、预计发生肠外营养并发症的危险性大于其可能带来的益处者。 6、心血管功能紊乱或严重代谢紊乱尚未控制或处于纠正期间。 7、脑死亡或临终或不可逆昏迷。 三、TPN合理配方设计原则 （一）静脉营养支持的模式是个体化给药，在配方上应突出个体化的特点。 （二）TPN的配方没有统一的处方，处方设计应全面考虑，包括是否有使用TPN的指证、患者的年龄、性别、体重或体表面积及病情。
正确使用手机的方法
正确使用手机的方法 手机的广泛使用，使我们被罩在“电子雾”中，无处躲避。很多人都会有这种体会，打手机超过几分钟后，耳朵和脸部都会有发热的感觉。长时间使用手机会影响大脑的功能，造成记忆力减退、失眠，甚至会发生情绪的改变。个别人也可能因为神经细胞和神经胶质细胞的畸变形成恶性脑肿瘤。 这样用手机危害大： 年轻人爱煲电话粥 许多年轻人有意无意的成为煲电话粥的一员，从大学生到社会上的白领阶层，煲电话粥可以说成为一种非常常见的事情。然而长时间的手机辐射会对大脑造成伤害。 热心肠电话变细菌中转站 有些人非常的热心肠，手机常常给别人使用，这样造成的后果就是手机变成细菌的中转站，成为各种病菌的乐园。 大忙人接电话 有些个大忙人，分秒中几百万，所以为了省事就侧着头接电话，长此以往必将危害脊椎，危害大脑，形成健康隐患。 躲起来说悄悄话 有些人打电话害羞，就爱躲到楼梯里避开大家打，可这样的往往让手机的辐射翻倍的增长，对自己的辐射更加厉害。 聊到尽兴充电打 有时候聊的尽兴了，会边充电边打，这样固然能很好的保持气氛，但对健康很不利 打电话性急 有些性急的人拨完号就开始把手机放在耳朵上，其实所有电话在接通状态时辐射都是非常厉害的，所以接电话不用性急。
用质量不好的手机 有些人贪图小便宜用一些非常廉价的手机，这样的手机质量不好，接听电话时往往造成很大的辐射。 正确使用手机的方法 1、在手机呼出时最好先将手机远离头部，以避免手机较大功率发射时对头部的辐射。 2、尽量减少每次使用手机的时间，以及每天使用手机的次数。在必须要较长时间通话时，应左右耳交替或者使用耳机更为科学。 3、当手机信号变弱时，手机会自动提高电磁波的发射功率，此时不要把耳朵紧贴手机。 4、不要在墙角处接打手机，建筑物角落的信号覆盖比较差，因此会在一定程度上使手机的辐射功率增大。基于同样道理，身处电梯等小而封闭的环境时，应慎打手机。 5、接打手机时不要随意走动,频繁移动位置会造成接收信号的强弱起伏，从而引发不必要的短时间高功率发射。
腺病毒详解
腺病毒是一种无包膜的双链DNA病毒，基因组长约25-45kb，理论上可编码22-40个基因。衣壳（capsid）呈规则的20面体结构，直径约80-110nm。衣壳含有240个六联体（hexon）、12个五联体（penton）及12根纤毛（fiber），除此之外还有其他一些小蛋白，如VI、VIII、IX、IIIa和IVa2等。六联体是形成病毒衣壳20个三角形面的主要蛋白，12个顶端是5个五联体亚单位和3个纤毛蛋白构成的复合物，12根纤毛以五联体蛋白为基底由衣壳表面伸出，纤毛顶端形成头节区（knob）。五联体和纤毛的头节区可与细胞表面的病毒受体结合，在病毒感染细胞过程中起着非常重要的作用。 腺病毒含13%DNA和87%的蛋白质，病毒体分子量约为175×106。病毒基因组为线状双链DNA，大约含35kb～36kb，腺病毒12、18 和31型的DNA组成中，G+C mol%最低（48%～49%），属于对动物具有高致癌性基因型。腺病毒1、2、4、5、8等型的G+C mol%较高（61%），致癌性反而低或无。这是一种用于人腺病毒分离株的分组的标准，根据其基因同源性将人腺病毒分为A～F等6组。 腺病毒的基因组以线性的双链DNA形式存在，由蛋白VII和一种称为mu的小蛋白紧密地环绕在其周围，起到类组蛋白样的作用。另一种蛋白V将这种DNA-蛋白复合物连接起来，并通过蛋白VI与病毒衣壳连接在一起。在两条链的5′端各以共价键结合着一个被称为DNA 末端蛋白（pTP）复合物（DNA-TPC）的特化的结构，与腺病毒复制密切相关。腺病毒基因组的两端各有一段100bp的反向末端重复序列（ITR），是复制的起始位点。在左端ITR的3′侧有一段长约300bp的包装信号（ψ）介导腺病毒基因组包装入病毒衣壳。对腺病毒而言，只有包括两端的ITR和包装信号（ψ）的约0.5kb的序列是顺式作用元件，也就是说必须由腺病毒载体自身携带，而其他的30余种蛋白都可以通过辅助病毒（或细胞）反式补足。 病毒蛋白约11种（TP和PⅠ～PⅩ），其中有4种蛋白（病毒多肽PⅤ、PⅦ，末端蛋白TP、酶蛋白PⅩ）与病毒基因构成病毒核心，多肽PⅦ是主要的核心蛋白，如同组蛋白一样包裹病毒基因DNA。构成病毒衣壳的蛋白质约7种。多肽PⅡ是病毒衣壳中最丰富和最主要成分，六邻体是由3个PⅡ分子紧密相连组成。多肽PⅥ、PⅧ在六邻体与病毒核心之间形成连接桥，并与多肽PⅨ一起稳定着六邻体分子的晶格排列。5个分子多肽PⅢ相连构成五邻体的基座蛋白，PⅢa为五邻体的周围蛋白，也参与衣壳的组成，五邻体通过PⅤ与病毒核心相连。多肽PⅣ主要构成病毒三聚体纤突，纤突与病毒血凝活性相关，因血凝素（纤突）具有型特异性，常用血凝抑制试验（HI）对临床分离株进行分型。 分类及自上个世纪50年代发现并成功分离腺病毒以来，已陆续发现了100余个血清型，其中人腺病毒有49种，分为A、B、C、D、E 和F六个亚群（subgroup）。基因治疗常用的人的2型及5型腺病毒在血清学分类上均属C亚群，在DNA序列上有95%的同源性。二者的增殖能力非常强，滴度通常可以达到109pfu (plaque forming unit)/ml，其在单个细胞中的基因组拷贝数可达104（约占细胞总DNA的10%）。病毒颗粒比较稳定，通过CsCl梯度离心可以达到1010~1011pfu/ml，满足动物实验的要求。
全肠外营养药物使用指南
全肠外营养药物使用指 南 LG GROUP system office room 【LGA16H-LGYY-LGUA8Q8-LGA162】
**市人民医院 肠外营养药物使用指南 全肠外营养（TPN）药物是经静脉途径供应患者所需的营养要素，包括热量（碳水化合物、脂肪乳）、必需和非必需氨基酸、维生素、电解质及微量元素，以抑制分解代谢、促进合成代谢，并维持细胞、器官结构与功能的需要。 营养支持的适应症、肠外营养剂的选择、营养液的配制及输注方法、途径、护理都会影响患者的恢复治疗，因此，规范化的营养支持模式势在必行，从而避免在营养支持过程中发生不合理现象，最大程度保证为患者提供安全、合理、有效、经济的营养支持。 一、肠外营养的适应证 （一）重度营养风险或蛋白质-能量营养不良，经口或经肠道营养素摄入不足，且短期内（10～14天）无法恢复正常进食者。 （二）胃肠功能障碍。 （三）胃肠道梗阻、消化道瘘、短肠综合征。 （四）重症活动期炎症性肠病，无法耐受肠内营养支持。 （五）重症胰腺炎，肠内营养出现不良反应或热量供应不足时，须联合应用肠外营养。 （六）重症胰腺炎，无法耐受肠内营养时。
（七）放射性肠炎。 二、肠外营养的禁忌证 （一）严重水、电解质紊乱，酸碱平衡失调。 （二）休克、器官功能衰竭终末期。 （三）下列情况慎用肠外营养： 1、无明确治疗目的或已确定为不可治愈而盲目延长治疗者：如广泛转移的晚期恶性肿瘤伴恶病质的患者，生活质量差、任何治疗方法均无明显改善作用，此时肠外营养也无明显益处，反而会增加患者生理和经济负担。 2、胃肠道功能正常或有肠内营养适应证者：对接受肠外营养支持的患者，应注意观察胃肠道功能恢复情况，及时有肠外营养过渡到肠内营养。 3、患者一般情况良好，预计需要肠外营养少于5天者。 4、原发病需立即进行急诊手术者。 5、预计发生肠外营养并发症的危险性大于其可能带来的益处者。 6、心血管功能紊乱或严重代谢紊乱尚未控制或处于纠正期间。 7、脑死亡或临终或不可逆昏迷。 三、TPN合理配方设计原则 （一）静脉营养支持的模式是个体化给药，在配方上应突出个体化的特点。
正确使用说明的方法
恰当使用说明的方法 一、教学目标 1．掌握几种最常见的说明方法。 2．学会运用恰当的说明方法写说明文。 二、教学重点 教师讲解和学生讨论、训练相结合。 三、教学过程 （一）导入新课 师：同学们，现在假设你们面前有一条河，大家到河对岸去，应该怎么去? 生：从桥上走过去。 趟过去。 乘船…… 师：对，大家的方法都很好!但究竟是趟河、是过桥还是乘船呢?这就要根据情况来选择。比如现在是夏天，河水也很浅，你就可以趟过去。但如果河水很深，而河上又没有桥，那你就只有乘船了。总之，到河的对岸，这是我们的目的。现在，如果我把“过河”比作说明的目的，那么我们过河的各种方法就是说明方法。大家想—想：我们写说明文的目的是什么? 生：是为了把事物特征说清楚，或者把事理阐述明白。 师：对!为了达到这个目的，我们在写说明文时就必须运用恰当的说明方法。(板书) （二）讲授新课 师：现在大家回忆一下，我们学过的说明方法有那些? 生：举例子、打比方、列数据、下定义、作比较、作诠释、分类别、摹状貌、画图表。(教师板书) 师：对!那么我们经常用到的说明方法有那些呢? 生：举例子、打比方、列数据。 师：那么，谁能告诉我，“恰当”是什么意思?(指导学生查字典，回答) 生：恰当，是能够恰如其分的说明事物或事理。 师：对!我们写说明文，就是要根据说明对象和写作目的，选用最佳的方法。比如刚上课时为了让大家明白说明方法的重要，我就采用了打比方的说明方法。好，现在大家打开书，回忆一下我们学过的《中国石拱桥》、《万紫千红的花》这两课，看作者都运用丁那些恰当的说明方法。 (学生分组讨论) 生：《中国石拱桥)说“石拱桥的桥洞成弧形，就像虹”，是打比方；说卢沟桥“桥长265米，由11个半圆形的石拱组成，每个石拱长度不一。自16米到21．6米”，是列数据：说桥上的石狮子“有的母子相抱，有的交头接耳，有的像倾听水声，千态万状，惟妙惟肖”，是摹状貌。 师：《万紫千红的花》举了很多大家熟悉的例子，用图表来说明。如果不用这些说明方法行不行?
腺病毒常见问题与解答
腺病毒常见问题与解答 1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求？ 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体，比如AdMax的Kit C、Kit D等，其总包装的 外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体，比如Kit A、Kit B等，外源片断要求小于5 kb。注意，外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、我的试验需要多少总量的腺病毒载体？ 腺病毒介导外源基因的基因治疗研究一般分为体外培养细胞试验(体外试验)和动物试验(体内试验)两部分，不同的实验设计所需要的病毒量也不尽相同。根据经验，完成一个完 整的肿瘤治疗实验需要腺病毒的病毒量总量约为3×1012 VP左右. 3、如何提高腺病毒的活性？ 提高腺病毒的活性，关键应该是在病毒包装过程和扩增过程。纯化过程只是去掉有缺陷的病毒和细胞碎片等容易引起机体免疫反应的过程，如果扩增的病毒滴度高，那么纯化后就会更高的。 4、克隆到转移载体的基因中的5’和3’UTR（未翻译区）的额外的碱基会影响蛋白表达吗？ UTR尽可能短一些，特别是在5’要避免在mRNA里形成二级结构。在起始密码子ATG 前面可以加一小段（6-9bp）的碱基序列可以增强目的基因的表达，比如Kozak序列(GCCGCCACCATG)。 5、如何判断腺病毒载体是否能高效感染某种细胞？ 参照文献报道是很简单的办法，也可以用带报告基因的腺病毒先行预实验。 Ad5能高效感染绝大多数人类、小鼠等的体细胞（包括分裂和非分裂细胞），比如肝、肌肉、神经组织等。但对血液系统来源细胞和某些肿瘤细胞，比如乳腺癌、白血病细胞等，感染效率较低。 6、腺病毒载体在体外实验（in vitro）中应注意哪些问题？ 1）由于细胞表面受体的差异，腺病毒载体在不同的细胞中转导效率不同。可根据文献报道或用带报告基因的腺病毒载体判断病毒用量。 2）在细胞处于对数生长期时感染病毒效果较好。避免在消化细胞后立刻感染病毒，因为此时细胞膜上的病毒受体往往受到了暂时的破坏。培养过夜后再感染病毒，效果较好。 3）选择适当的转导MOI（病毒感染单位数/细胞数），可以在MOI为0.1~1000范围内进行试验( 10倍比稀释)。 4）感染病毒时细胞培养液的体积尽量小一些，以完全覆盖细胞为准。如24孔板可用200ul，6孔板1ml。 5）感染时间为90分钟，每15分钟轻轻晃动培养液一次，以混匀。 6）选择适当表达检测时间，一般感染病毒24h后就能检测到目的基因的表达，48小时表达达到较高水平。 7、用于体内试验的腺病毒，是否要求纯化？ 是的，病毒纯化是很必要的。因为细胞裂解液包含有缺损颗粒、大量的腺病毒fiber和penton蛋白（细胞毒素）、培养基、血清以及细胞碎片。这些杂质如果被注入动物体内，会
自噬监测——LC3双标腺病毒(完整版)
自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南 1 自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南 背景： 自噬是细胞内的一种“自食（Self-eating ）”的现象，凋亡是“自 杀（Self-killing ）”的现象，二者共用相同的刺激因素和调节蛋白， 但是诱发阈值和门槛不同，如何转换和协调目前还不清楚. 自噬是指 膜（目前来源还有争议，大部分表现为双层膜，有时多层或单层）包 裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体，最后与 溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，以实现细胞稳 态和细胞器的更新。目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略 和手段有：通过western blot 检测LC3的剪切；通过电镜观测自噬体 的形成；在荧光显微镜下采用GFP （-RFP ）-LC3等融合蛋白来示踪自 噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多，针对于此我们 汉恒生物科技（上海）有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流) 的mRFP-GFP-LC3腺病毒，mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指 示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对 酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检 测到红色荧光。这种串联的荧光蛋白表达载体系统直观清晰的指示了 细胞自噬流的水平，是我们自噬研究尤其是自噬流研究不可或缺的利 器。
mRFP-GFP-LC3腺病毒的操作 收到病毒后的处理 （一）、腺病毒的储存 1、腺病毒采用冰袋运输。 （1）、收到病毒液后如未融化请置于-80℃冰箱，下次使用时再进 行分装； （2）、如客户收到时腺病毒已融化，请直接分装后置于-80℃冰箱 保存；若短期内用于实验，可分装部分于4℃保存（尽量一周内用完）。 2、尽量避免反复冻融，否则会降低病毒滴度（每次冻融会降低病 毒滴度10%）。建议不要在-20℃下长期保存。如果病毒储存时间 超过6个月，应该重新测定病毒滴度。 3、建议收到病毒产品后根据实验需求自行分装或购买经过分装的小 包装病毒产品（购买时请提出）。 （二）、腺病毒的稀释需要稀释病毒时，将病毒取出后置于冰上融解，使用培养目的细胞 用PBS 或培养基稀释到所需浓度后混匀分装后4℃保存，并尽快用于 实验（尽量一周内用完），动物实验建议使用注射用平衡液来稀释， 并尽快用完。 感染目的细胞 2
国家基本药物临床应用指南
《国家基本药物临床应用指南》和《国家 基本药物处方集》培训大纲 一、2012年版《国家基本药物临床应用指南》（化学药品和生物制品） （一）培训目标。掌握各系统、章节疾病概述、诊断要点、药物治疗和注意事项等内容，以及基层常见病、多发病和需要现场及时抢救的急诊与危重症应用基本药物的处理。熟悉较为复杂疾病应用基本药物的初步处理。了解复杂或疑难疾病应用基本药物的有关处理。 （二）授课学时及重点内容。 1．第一章急诊及危重症和第十一章急性中毒 掌握：猝死和心肺复苏、高血压危象、急性左心衰、动物咬蜇伤、中暑、淹溺、电击伤、鼠药中毒、有机磷杀虫剂中毒、急性酒精中毒。 熟悉：休克、破伤风、亚硝酸盐中毒、苯二氮卓类中毒。 了解：糖尿病急性病发症、氰化物中毒、阿片类药物中毒、瘦肉精中毒。 2．第二章感染性疾病 掌握：上呼吸道病毒感染、流行性感冒、急性化脓性扁桃体炎、急性气管支气管炎、慢性支气管炎急性加重、社区获得性肺炎、急性膀胱炎、肾盂肾炎、细菌性食物中毒、细菌性痢疾、猩红热、肠道寄生虫病。 熟悉：化脓性脑膜炎、流行性脑脊髓膜炎、病毒性肝炎、伤寒和副伤寒、霍乱、阿米巴病、败血症、百日咳、钩端螺旋体病、血吸虫病、华支
睾吸虫病、肺吸虫病。 了解：急性脓胸、肺脓肿、感染性心内膜炎、新型隐球菌脑膜炎、结核性脑膜炎、流行性乙型脑炎、流行性出血热、布鲁菌病、炭疽、黑热病、绦虫病、囊虫病、包虫病。 3．第三章呼吸系统疾病 掌握：支气管哮喘、慢性阻塞性肺病、支气管扩张症、咯血。 熟悉：慢性肺源性心脏病、急性呼吸衰竭。 了解：肺血栓栓塞症。 4．第四章消化系统疾病 掌握：急性胃炎、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胆汁返流性胃炎、胃食管返流病、消化性溃疡、便秘、肠易激综合征、功能性消化不良、急性胰腺炎、消化道出血。 熟悉：药物性肝病、肝硬化、酒精性肝病、溃疡性结肠炎、慢性腹泻。 了解：食道喷门粘膜撕裂综合征、应激性溃疡、幽门梗阻、非酒精性脂肪性肝病、慢性胰腺炎。 5．第五章心血管系统疾病 掌握：高血压病、冠心病、风湿性心脏病。 熟悉：高血压心脏损害、高血压肾脏损害、心脏神经症、心力衰竭。 了解：心肌病、心包炎、心肌炎。 6．第六章血液系统疾病 掌握：缺铁性贫血、过敏性紫癜、血友病。
自噬研究方法
MDC:取12 mg粉末溶于720 nl DMSO使其浓度为50 mmol/L,分装后-20冰箱保存。 临用前用MEM稀释到终浓度50 umol/L; Rapamycin:用MEM培养基配成终浓度为1 umol/L,现用现配; 400ng/ml喹乙醇:称取4 mg喹乙醇,DMSO预溶(体积<0.1%)后加入10 ml MEM培养液至完全溶解,现用现配,避光保存; 3-MA:首先用PBS溶解粉末,临用前加热至完全溶解后再加入MEM培养基至终浓度10mmol/L; PI3K抑制剂（3-MA，Wortmannin）可干扰或阻断自噬体的形成 用RAPAMYCIN诱导自噬我也查过一部分文献，有用无血清的，也有用，一般培养基的，浓度从25nM到100nM都有，用的是50nM的雷帕霉素，加入一般的培养基中，目的是排除无血清所诱导出来的自噬。 文献说饥饿初期激活的是大分子自噬，在4-6小时活力达到最大，24h后以CMA途径为主Earle's balanced salts solution (EBSS) for 48 h sigma的EBSS，货号E2888，有碳酸氢钠，有酚红的，酚红到不是很必须，只是一个PH指示作用，好看些 无血清诱导自噬：EBSS 诱导6个小时就可以了。 EBSS一定可以诱导出来，只是需要说明的是时间点的设置，因为从饥饿诱导开始半个小时就可能开始自噬了，一直到24小时都持续，所以应该设置不同的时间点观察这个作用。另外一个很大的问题是，饥饿诱导的一个很大的弊端是细胞死亡，这也是我面临的问题，就是在细胞收养的时候蛋白浓度太小了。24小时就很少了，更不要说48小时和72小时了 Hank's诱导，也就是通常所说的饥饿诱导，细胞培养到对数生长期后以Hank's替代常规完全培养基，3h后就可诱导出自噬。我用Hank's诱导了3h后电镜观察有30%细胞都有自噬这种现象，但不如国外报道的高。 sigma的氯喹的货号C6628。用氯喹做自噬抑制剂，293T细胞50uM就可以。1. 可以用双蒸水配制2. 配制后4度保存 不同的自噬抑制剂机制不同。抑制的步骤也不同。有的不能抑制lc3的剪切，但能抑制后续的步骤，Chloroquine抑制自噬体与溶酶体的融合过程，autophgy不能完成，所以lc3才会累积。因此加了抑制剂lc3之后会比不加的要高。氯喹能提高溶酶体中的pH值，使溶酶体中的酸性水解酶丧失活性，从而导致“自噬溶酶体”不能降解，因此，位于自噬体和自噬溶酶体膜上的LC3不能按时降解，表现为LC3荧光长时间的保留或WB中LC3条带变粗。 Z-VAD-FMK（caspase-3 抑制剂）抑制EV71感染所引起的细胞凋亡，观察细胞的自噬情况。研究发现，抑制细胞凋亡能增加LC3-I转化为LC3-II以及p62的降解。 1. 雷帕霉素：作为以mTOR 为靶点最经典的诱导剂已经被广为应用，推荐工作浓度为1μmol-10μmol； 2. 氯喹：氯喹（Chloroquine）作为溶酶体的抑制剂，可以抑制自噬体与溶酶体的融合从而可以用来作为自噬以及自噬流的抑制剂用于实验研究，推荐使用浓度：10umol-50umol。 正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的
半天工程序操作指南
一．实名登记完整流程 二．半天工程序操作指南 （一）主页（功能简介） 半天工程序了实现工地现场的务工人员实名登记管理、实名考勤管理、工资发放信息公示和其他系统管理功能。 （二）专户信息登记 1.管理工程 左键单击【专户信息登记】→【管理工程】，点击项目名称左边的图标，可查看项目专户信息，该信息不可更改，如需更改请联系半天工客服人员。
2.基本信息 左键单击【专户信息登记】→【基本信息】，可填写项目的基本信息。 注意：请程序操作人员（劳资专管员）正确填写本人身份证号，同时关注半天工微信公众号，在微信号内绑定个人身份证号码即可接收工人登记信息提醒。 3.微信用户管理 左键单击【专户信息登记】→【微信用户管理】，填写人员身份证信息，添加多个微信用户，关注微信公众号并绑定后即可接收工人登记信息提醒。 （三）实名登记管理 注意：务工人员实名制登记时，请严格按照【用工单位登记】→【务工班组登记】→【务工人员实名制进场登记】的顺序来操作。 1. 用工单位管理
左键单击【实名登记管理】→【用工单位管理】，填写用工单位信息。 2. 务工班组登记 左键单击【实名登记管理】→【务工班组登记】，添加务工班组信息（请准确选择务工班组所属企业）。如需删除或修改务工班组信息，请点击班组名称左边图标进行编辑操作。 3. 务工人员实名制进场登记 注意：务工人员实名制登记进场有两种操作方法，一是在【实名登记管理】→【务工人员实名制进场登记】界面进行人员进场登记，二是在【实名登记管理】→【工人花名册】界面进行人员进场登记。这里先介绍第一种方法，第二种方法在下面会介绍。 （1）左键单击【实名登记管理】→【务工人员实名制进场登记】，点击左侧的[全部班组] →[xxx单位] →[xxx班组]，然后点击右侧的[进场登记]，开始进场登记操作。
临床诊疗指南及药物临床应用指南.doc
临床诊疗指南及药物临床应用指南 1、社区获得性肺炎的诊断及治疗 2、扁桃体炎治疗指南 3、成人水痘的症状和治疗 4、急性阑尾炎诊疗规范 5、流行性腮腺炎诊断标准 6、带状疱疹治疗指南 7、丹毒诊治指南 8、皮肤感染指南 9、上消化道出血 10、抗菌药物的合理应用 11、激素的使用
社区获得性肺炎诊断和治疗指南 中华医学会呼吸病学分会 社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)是指在医院外罹患的感染性肺实质(含肺泡壁，即广义上的肺间质)炎症，包括具有明确潜伏期的病原体感染而在入院后潜伏期内发病的肺炎。CAP是威胁人类健康的常见感染性疾病之一，其致病原的组成和耐药特性在不同国家、不同地区之间存在着明显差异，而且随着时间的推移而不断变迁。近年来，由于社会人口的老龄化、免疫损害宿主增加、病原体变迁和抗生素耐药率上升等原因，CAP的诊治面临许多新问题。最近，中华医学会呼吸病学分会完成了两项较大样本的全国性CAP流行病学调查，在此基础上，结合国外CAP诊治方面的最新研究进展，对1999年制定的《社区获得性肺炎诊断和治疗指南(草案))进行了适当修改，旨在指导临床建立可靠的诊断，全面评估病情，确定处理方针，改善预后，尽量避免不恰当的经验性治疗，减少抗生素选择的压力，延缓耐药，节约医药卫生资源。 一、CAP的临床诊断依据 1.新近出现的咳嗽、咳痰或原有呼吸道疾病症状加重，并出现脓性痰，伴或不伴胸痛。 2.发热。 3.肺实变体征和(或)闻及湿性啰音。 4.WBC>10×109/L或<4×109/L，伴或不伴细胞核左移。 5.胸部X线检查显示片状、斑片状浸润性阴影或间质性改变，伴或不伴胸腔积液。 以上1～4项中任何1项加第5项，并除外肺结核、肺部肿瘤、非感染性肺间质性疾病、肺水肿、肺不张、肺栓塞、肺嗜酸性粒细胞浸润症及肺血管炎等后，可建立临床诊断。 二、CAP的病原学诊断 1.病原体检测标本和方法：见表1。 2.痰细菌学检查标本的采集、送检和实验室处理：痰是最方便且无创伤性的病原学诊断标本，但痰易被口咽部细菌污染。因此痰标本质量的好坏、送检及时与否、实验室质控如何将直接影响细菌的分离率和结果解释，必须加以规范：(1)采集：尽量在抗生素治疗前采集标本。嘱患者先行漱口，并指导或辅助其深咳嗽，留取脓性痰送检。无痰患者检查分枝杆菌和肺孢子菌可用高渗盐水雾化吸人导痰。真菌和分枝杆菌检查应收集3次清晨痰标本；对于通常细菌，要先将标本进行细胞学筛选。对于厌氧菌、肺孢子菌，采用支气管肺泡灌洗液(BALF)标本进行检查的
引导孩子合理使用电子产品的正确方法
引导孩子合理使用电子产品的正确方法 家长朋友们： 大家好，今天和大家交流的话题是：如何引导孩子合理使用电子产品。这是家长很头痛的问题，也是教育部门高度关注的问题。随着信息时代的发展，电子产品已经走进了千家万户。高科技的生活方式，为我们带来便利的同时，也出现了一些难以应对的问题，尤其是电子产品对青少年学生的冲击较大。今天我主要围绕孩子在使用网络及电子产品时产生的问题与大家做个交流。 一、学生使用手机、电脑等电子产品的现状及危害 （一）学生使用电子产品的现状 生活中常见的电子产品，主要包括：电脑、平板电脑、智能手机、智能手表、电视机、摄像机等等。今后随着数字产业的发展和人们生活需求的提高，还会有更多的电子产品融入我们的生活。电子产品的普及，给我们的生活带来便利的同时，也带来了一些不利的影响。虽然说，很多电子产品的利大于弊，但从不利影响来看，主要是网络、手机等电子产品对自制力差的人群，尤其是青少年学生，产生了较大的危害。 目前中小学生使用频率最高的电子产品就是手机了，其次是电脑。作为家长，我们对这些现象并不陌生：孩子放学一回到家就千方百计的想玩手机，好多孩子周末、假期不喜欢到户外活动，宅在家里玩手机、电脑；一群孩子即使聚集在一起，多数也是在组团打网络游戏；亲子相处，即使同处
一室，多数是拿着手机在各自的虚幻世界里遨游。手机更成为我们教育孩子的重要难题：孩子小的时候，为了哄孩子开心，手机无形中成为电子保姆；稍大一点的孩子，可以把玩电脑、玩手机作为和父母谈判的交换条件，甚至会用生闷气、哭闹、威胁的方式对抗父母。父母明知长时间玩电子产品对孩子的健康和心理发展有害，却束手无策。我就亲眼见到一个孩子因为家住深沟无信号，他周末每天起床很早，坐在沟口桥上玩一天手机，不吃不喝，十分投入。 学校对手机也是屡禁不止。学生偷偷把手机带到学校，上课下课钻空子玩，晚上在宿舍偷着玩；甚至有学生半夜从窗户翻进教师办公室玩通宵；有的三五成群蹲坐在教师办公室窗下蹭wifi；有的在课间打开教室里的多媒体设备玩游戏；有的甚至因为老师的批评而顶撞老师，厌学，逃学……这些现象严重影响了学生的成长和师生关系，成为学校教育的难题之一。 在玩电子产品的时间上，专家则建议：4-6 岁，每天大约20-30分钟，7-10 岁每天大约30-45分钟，11-13 岁每天大约60分钟。而据统计，中小学生手机持有率逐年攀升，目前已达到71.1%，用手机上网比较普遍，且年级越高上网的人数越多。有41.07%学生放学回家后，不是先写作业，而是去用电子产品娱乐放松，有46.43%的学生偶尔会这么做；课堂上使用电子产品的占8.93%，在家庭中使用的占83.93%； 16.07%的玩游戏，25%的是聊天，50%看视频听音乐，学习的只有8.93%，使用时间在一小时内占28.57%，1—2小时的占
人腺病毒分子生物学常用检测技术
Advances in Microbiology 微生物前沿, 2017, 6(2), 11-16 Published Online June 2017 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/2d261326.html,/journal/amb https://https://www.wendangku.net/doc/2d261326.html,/10.12677/amb.2017.62002 The Molecular Biological Techniques for Human Adenovirus Detection Ye Li1,2, Tuo Dong1,2, Vladimir I. Zlobin3, Oleg Reva4, Zhangyi Qu1,2* 1Department of Microbiology, School of Public Health, Harbin Medical University, Harbin Heilongjiang 2Department of Natural-Foci Diseases, Institute of Environment-Associated Diseases, Sino-Russia Joint Medical Research Centre, Harbin Heilongjiang 3Research Institute for Biomedical Technologies, Irkutsk State Medical University, Irkutsk, Russia 4Department of Biochemistry, Bioinformatics and Computational Biology Unit, University of Pretoria, Pretoria, South Africa Received: May 12th, 2017; accepted: May 30th, 2017; published: Jun. 2nd, 2017 Abstract Adenovirus is one of the major viruses causing human respiratory diseases. The effective and rapid method in adenovirus detection is helpful to strengthen the surveillance of adenovirus in-fection, to investigate the epidemic trends timely, and to control the virus infection. The current molecular biological methods for adenovirus detection both used in laboratory and clinical are reviewed in this paper. The principle, characteristics and application of these techniques are commented. Keywords Adenovirus, PCR, Molecular Biological Detection 人腺病毒分子生物学常用检测技术 李烨1,2，董妥1,2，Vladimir I. Zlobin3，Oleg Reva4，曲章义1,2* 1哈尔滨医科大学，公共卫生学院，卫生微生物学教研室，黑龙江哈尔滨 2中俄医学研究中心，环境相关疾病研究所，自然疫源性疾病研究室，黑龙江哈尔滨 3俄罗斯伊尔库茨克国立医科大学，生物医学技术研究所，伊尔库茨克，俄罗斯 4南非比勒陀利亚大学，生物信息学与计算生物学部，生物化学系，比勒陀利亚，南非 收稿日期：2017年5月12日；录用日期：2017年5月30日；发布日期：2017年6月2日 *通讯作者。 文章引用: 李烨, 董妥, Vladimir I. Zlobin, Oleg Reva, 曲章义. 人腺病毒分子生物学常用检测技术[J]. 微生物前沿,2017,
化疗药物使用指南
化疗药物使用指南集团公司文件内部编码：（TTT-UUTT-MMYB-URTTY-ITTLTY-
抗肿瘤药物的规范化使用 一、规范化用药要求： 1、对疾病发病情况、肿瘤生物学行为、病理与分期等，要有深入的了解与掌握。 2、对药物及治疗方案的熟悉，要掌握本学科的最新发展动态。 3、要有深厚而广博的基础知识临床药动学、药效学、时间药理学、药物流行病学的知识。 二、抗肿瘤药及相关药 （一）抗肿瘤药 1、分类： （1）细胞毒类药 A、作用于DNA化学结构的药物：如烷化剂，铂类化合物。 B、影响核酸合成的药物：如MTX、5FU、Ara- C、GEM。 C、作用于核酸转录的药物：抗生素类。 D、作用于微管蛋白合成的药物：Taxol、NVB。 E、其它细胞毒药物：L-ASP。 （2）激素类：抗雌激：三苯氧胺、托瑞半芬?芳香化酶抑制剂：来曲唑、依西美坦。 （3）生物反应调节剂：干扰素、白介素-2、胸腺肽。 （4）单克隆抗体：美罗华、赫塞汀。 （5）其它：细胞分化诱导剂，如维甲酸及衍生物；细胞凋亡诱导剂；抗新生血管生成剂。 2、毒副作用 （1）骨髓功能抑制（7）肺毒性
（2）消化道不良反应（8）生殖系毒性 （3）肝脏毒性（9）皮肤反应 （4）泌尿系毒性（10）过敏反应 （5）心脏毒性（11）局部毒性 （6）神经毒性 （二）抗肿瘤相关药物 1、骨髓功能恢复药：如GM-CSF、TPO、EPO。 2、抗肠道不良反应药：如5-HT3受体拮抗剂。 3、化疗解毒剂及增敏剂：如CF。 4、化疗保护剂：如Mesna。 5、镇痛药。 6、中药：却邪扶正，内容丰富。 7、其它：如控制骨破坏的双膦酸盐类药。 三、规范化使用抗肿瘤药的基本原则与方略 （一）治疗肿瘤前必须要有明确的病理学诊断和临床分期。 （二）要有明确的治疗方针与目标。 凡未列入临床试验的病例，均应选用标准的化疗方案。根据治疗效果所达到的不同水平来确定以下治疗方针与目标： 1、根治性治疗 2、姑息性治疗 3、辅助性治疗 4、研究性治疗 （三）全面了解患者对化疗的耐受性。