chip 操作步骤
磁珠吸附法chip操作步骤及试剂配方
1、每盘细胞（8ml培液），加入11×Fixation solution 800ul使得甲醛的终浓度为1%，fixation solution为现配，室温摇床10min。(甲醛能有效的使蛋白质-蛋白质，蛋白质-DNA，蛋白质-RNA交联，形成生物复合体，防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的，便于在后续步骤中对DNA和蛋白质进行分析; 交联时间如果过长，细胞染色质难以用超声波破碎，影响ChIP结果，而且实验材料也容易在离心过程中丢失。交联时间如果过短，则交联不完全，产生假阴性。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。)
2、终止交联：加1M甘氨酸1.26ml，使其终浓度为0.125。室温摇床
5min。
3、用冰冷的PBS 冲洗两次后，加适量pbs+pmsf，用细胞刷刮下细胞，4℃ 1000RPM离心5min。
4、倒去上清，加入1ml Scell Lysis Buffer，冰上放置10min，匀浆器匀浆后转入2ml Ep管中，4℃ 5000RPM离心5min.
5、弃上清，300ul nuclei Lysis buffer，吹散沉淀。
6、socinate破碎：1min on off 30 10次左右，4℃ 13000RPM离心20min，琼脂糖胶电泳，亮带集中在1000bp左右的方可。 (以便暴露目标蛋白，利于抗体识别。)
7、分别收集20ul样品做input -20℃保存。(Input是断裂后的基因组DNA，需要与沉淀后的样品DNA一起经过逆转交联，DNA纯化，以及最后的PCR或其他方法检测。Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果，还可以根据Input中的靶序列的含量以及染色质沉淀中的靶序列的含量，按照取样比例换算出ChIP的效率，所以Input对照是ChIP实验必不可少的步骤。)
8、用 Chip Diluiton Buffer 稀释样品10倍
9、准备beads，用Pre-Blocking buffer for dynabeads 洗beads3次.(Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合)，最好实验前一天准备beads。
10、样品中各加入10ul dynabeads 4℃颠转混匀2h。
11、样品分成三组，A：加入trf2抗体5ul，B:加入Histone3 2ul C：不加任何抗体（A:B:C 3:1:1的体积）4℃过夜。(阳性抗体通常选择与已知
序列相结合的比较保守的蛋白的抗体，常用的包括组蛋白抗体或RNA
Polymerase II抗体等。阴性抗体通常选择目的蛋白抗体宿主的IgG或血清)
12、分别向A、B、C各样品加入10ul dynabeads 4℃颠转混匀2h。
13、洗涤beads（在4℃冷库操作比较方便dynamag
把磁珠洗住，就可以把洗涤液洗掉，最好使用枪头吸不要嫌麻烦）
依次用下列溶液清洗沉淀复合物。清洗的步骤：加入溶液，在4℃颠转
10min，4℃静置10min沉淀，700rpm离心1min，除去上清。
洗涤溶液：a.low salt wash buffer-one wash 10min
b.highsalt wash buffer-one wash 15min
c.LiCl wash buffer-one wash 30min
d.TE buffer 2×5min
14、洗涤完毕后加入150ulTE，加入pk液（10ul 0.5MEDTA，20ul
1MTris.HCl（PH6.5），1ul 20mg/ml蛋白酶K）45℃颠转2h，input也要
进行此步。
15、去除磁珠，收集样品液，DNA试剂盒纯化dnA,检测od值。
16、realtime-pcr分析样品。Histone 4,、Ppp2r2c-its两对引物跑
q-pcr。
17、结果分析。
1.Fixation solution 10mL
11% formaldehyde (from a 37% stock equilibrated with methanol)
5.Chip Diluiton Buffer(100mL)
PBS can be made as a 1X solution or as a 10X stock. To prepare 1 L of either 1X or 10X PBS, dissolve the reagents listed above in 800 mL of H2O. Adjust the pH to 7.4 (or 7.2, if required) with HCl, and then add H2O to 1 L. Dispense the solution into aliquots and sterilize them by autoclaving for 20 min at 15 psi (1.05 kg/cm2) on liquid cycle or by filter sterilization. Store PBS at room temperature.
10.10×TE buffer
Reagent Quantity (for 100 mL) Final concentration
11.Pre-Blocking buffer for dynabeads: 1mL 现配
SDS LB 95ul CHIP DB 855ul
bovine serum albumin(BSA) 40uL (5mg/mL)
Yeast-tRNA 10uL (20mg/mL)
12.20%SDS
Also called sodium dodecyl sulfate or sodium lauryl sulfate. To prepare a 20% (w/v) solution, dissolve 200 g of electrophoresis-grade SDS in 900 mL of H2O. Heat to 68°C and stir with a magnetic stirrer to assist dissolution. If necessary, adjust the pH to 7.2 by adding a few drops of concentrated HCl. Adjust the volume to 1 L with H2O. Store at room temperature. Sterilization is not necessary. Do not autoclave.
13.1M Tris-Cl
Tris base
HCl
To prepare a 1 M solution, dissolve 121.1 g of Tris base in 800 mL of H2O. Adjust the pH to the desired value by adding concentrated HCl.
pH HCl
7.4 70 mL
7.6 60 mL
8.0 42 mL
Allow the solution to cool to room temperature before making final adjustments to the pH. Adjust the volume of the solution to 1 L with H2O. Dispense into aliquots and sterilize by autoclaving.
If the 1 M solution has a yellow color, discard it and obtain Tris of better quality. The pH of Tris solutions is temperature-dependent and decreases ~0.03 pH units for each 1°C increase in temperature. For example, a 0.05 M solution has pH values of 9.5, 8.9, and 8.6 at 5°C, 25°C, and 37°C, respectively.
14.0.5M EDTA(100ml)
EDTA (ethylenediamenetetraacetic acid MW=372.24)
NaOH
To prepare EDTA at 0.5 M (pH 8.0): Add 18.61 g of disodium EDTA?2H2O to 80 mL of H2O. Stir vigorously on a magnetic stirrer. Adjust the pH to 8.0 with NaOH (~20 g of NaOH pellets). Dispense into aliquots and sterilize by autoclaving. The disodium salt of EDTA will not go into solution until the pH of the solution is adjusted to ~8.0 by the addition of NaOH, Adjust total volume to 100 mL with H2O.
15.1M KCl (Potassium chloride)100ml
For a 1 M solution of KCl, dissolve 7.455 g of KCl in 90 mL of H2O. Make up the volume to 1ooml with H2O and autoclave for 20 min on liquid cycle. Store at room temperature.
Ideally, this solution should be divided into small (~100 μL) aliquots in sterile tubes and each aliquot thereafter used only once.
16.5 M NaCl (Sodium chloride)100ml
To prepare a 5 M solution: Dissolve 29.2 g of NaCl in 80 mL of H2O. Adjust the volume to 100 ml with H2O. Dispense into aliquots and sterilize by autoclaving. Store the NaCl solution at room temperature.
17.1M EGTA (Ethylene glycol-bis[β-aminoethyl ether]-N,N,N′,N′-tetraacetic
acid) (100 ml)
EGTA (m.w. = 380.4)
Add 25g of EGTA to 50 mL H2O. Adjust the pH to 7.0 with HCl or Nacl. Adjust total volume to 65.72 mL with H2O. Filter, autoclave, and store at 4°C (lasts ~1 mol).
18.10 M LiCl 250ml
To prepare 4 M lithium chloride: Dissolve 42.4 g of LiCl in a final volume of 200 ml of H2O. Adjust the volume of the solution to 250 ml with H2O. Sterilize the solution by passing it through a 0.22-μm filter, or by autoclaving for 15 minutes at 15 psi (1.05 kg/cm 2) on liquid cycle. Store the solution at 4°C.
19.1 M glycine (FW = 75.07)
3.754 g / 50 mL ddH2O
filtrate and store at RT
20.1M PIPES (10ml)
1. 25g PIPES(MW=30
2.37)
2. Dissolve PIPES in a small volume of H2O.
3. Adjust the final volume to 82.68mL with ddH2O.
4. Filter through a 0.45-μm sterile filter.
5. Store in the dark at 4°C or aliquot and freeze. (The buffer is stable for 2 mo at 4°C). Employ aseptic technique when diluting the PIPES buffer for preparation of 1X working solutions or store as single-use aliquots to avoid contamination.
21. NaCl (Sodium chloride)
To prepare a 5 M solution: Dissolve 73.05g of NaCl in 150 mL of H2O. Adjust the volume to 500 mL with H2O. Dispense into aliquots and sterilize by autoclaving. Store the NaCl solution at room temperature.
ChIP具体操作流程
具体操作流程： 第一天： （一）、细胞的甲醛交联与超声破碎。 1、取出1平皿细胞（10cm平皿），加入243 ul 37%甲醛，使得甲醛的终浓度为1%（培养基共有9ml）。 2、37摄氏度孵育10min。 3、终止交联：加甘氨酸至终浓度为0.125M。450 ul 2.5M甘氨酸于平皿中。混匀后，在室温下放置5min即可。 4、吸尽培养基，用冰冷的PBS清洗细胞2次。 5、细胞刮刀收集细胞于15ml离心管中（PBS依次为5ml，3ml和3ml）。预冷后2000rpm 5min收集细胞。 6、倒去上清。按照细胞量，加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200ul 含2×106个细胞。这样每100ul溶液含1×106个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设MCF7长满板为5×106个细胞。本次细胞长得约为80%。即为4×106个细胞。因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。将2管混在一起，共800ul。 7、超声破碎：VCX750，25%功率，4.5S冲击，9S间隙。共14次。 （二）、除杂及抗体哺育。 8、超声破碎结束后，10，000g 4oC离心10min。去除不溶物质。 留取300ul做实验，其余保存于-80oC。 300ul中，100ul加抗体做为实验组；100ul不加抗体做为对照组；100ul加入 4ul5MNaCl（NaCl终浓度为0.2M），65oC处理3h解交联，跑电泳，检测超声破碎的效果。 9、在100ul的超声破碎产物中，加入900ulChIPDilutionBuffer和20ul的50×PIC。 再各加入60ulProteinAAgarose/SalmonSpermDNA。4oC颠转混匀1h。 10、1h后，在4摄氏度静置10min沉淀，700rpm离心1min。 11、取上清。各留取20ul做为input。一管中加入1ul抗体，另一管中则不加抗体。4oC颠转过夜。 （三）、检验超声破碎的效果。
基于智能数控系统的工业APP平台测试床介绍
工业互联网案例 基于智能数控系统的工业 APP 平台测试床介绍
引言/导读 沈机（上海）智能系统研发设计有限公司（以下称“沈机智能”），由沈阳机床集团于2015 年投资创建，致力于面向机床行业的运动控制技术及云制造技术的产品研发和技术储备。沈机智能前身为沈阳机床（集团）设计研究院有限公司上海分公司（以下称“沈阳机床上海研究院”），历时7 年完成了i5 数控系统的技术研发及产业化，并推出自主品牌伺服驱动器（HSHA 系列产品）和智能工厂管理软件（WIS 系统软件）。 沈机智能在完成i5 运动控制核心技术的研发与i5 数控系统的产业化之后，进一步提出社会化的开发思路，将i5 运动控制核心技术进行模块化封装，以平台形式向数控行业产业链上下游的参与方（包括大中小型制造企业、装备供应商、个体开发者、创客等）开放，为数控技术在各个垂直领域的应用与推广打造通用的工业APP 开发、应用与分享的平台。该平台于2017 年11 月向全世界发布，即被业界所熟知i5OS 工业操作系统（简称为 “i5OS”）。 一、关键词 i5OS、运动控制、工业APP 平台、安全 二、发起公司和主要联系人联系方式 沈机（上海）智能系统研发设计有限公司 — 2 —
三、合作公司 智能云科信息科技有限公司 四、测试床项目目标和概述 基于i5 智能数控系统的工业APP 平台测试床项目是围绕数控行业各个垂直领域对于智能化数控技术的需求而提出的云端协同解决方案。沈机智能基于自主知识产权的i5 智能数控系统，向数控行业的装备制造商、大中小型制造企业、个体开发者、创客等提供运动控制底层技术支撑，以开放的接口和APP 开发平台，为其提供工业APP 的开发、测试及应用环境，使其能够基于i5 运动控制核心技术，快速开发各自领域内的工业APP；同时，测试床项目为成熟的工业APP 提供软件托管服务和交易商城，通过工业互联网平台为工业 APP 的交易、授权、应用与产权保护提供保障服务，促进工业APP 在行业内分享与复用。本测试床项目的目标是以i5 运动控制技术为基础，打造数控行业各个垂直领域通用 的工业APP 开发与应用平台，帮助行业知识与诀窍以工业APP 的形式沉淀，形成各个细分行业（如激光雕刻、激光打标、锂电池加工、机械手控制等等，见图1：i5OS 相关行业）丰富的工业APP 库，并提供可靠的工业APP 交易服务，使行业知识和诀窍可在其相关的行业领域得到快速复用。 图 1 i5OS 相关行业 — 3 —
CHIP技术
染色质免疫沉淀分析ChIP技术介绍 染色质免疫沉淀分析ChIP 技术介绍 (Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChiP) (Abcam 公司与Upstate 公司都提供ChIP 抗体产品) 染色质免疫沉淀法(Chromatin immunoprecitation,ChIP)就是研究体内DNA 与蛋白质相互作用的重要工具。它可以灵敏地检测目标蛋白与特异DNA 片段的结合情况,还可以用来研究组蛋白与基因表达的关系。核小体组蛋白可以发生多种翻译后的共价修饰,如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等,这些共价修饰与真核基因的表达密切相关。根据“组蛋白密码”假说,组蛋白的各种共价修饰的组合会以协同或拮抗的方式诱导特异的下游生物学功能,因此,ChIP 也为研究组蛋白修饰在基因表达中的作用,全面阐明真核基因的表达调控机制提供了强有力的研究工具。 真核生物细胞状态就是由内源与外源因素共同影响的,所有信号传递途径的终点都就是DNA。DNA 通过核蛋白复合物组成染色质,染色质就是基因调控的一个重要作用位点。转录激活因子与辅助抑制因子的研究显示存在一种新的调节机制--“组蛋白密码”,其信息存在于组蛋白的转录后修饰等过程中。该类修饰包括组蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化、ADP-核糖基化等过程。随着越来越多组蛋白核心结构区域与羧端修饰的确定,组蛋白密码在控制与调节基因功能过程中的作用越来越明确。参与修饰的酶根据其作用的不同而分类:如组氨酸乙酰转移酶(HATs)可以将乙酰基团转到组蛋白上;组蛋白去乙酰酶(HDACs)可以去除氨基酸上的乙酰基团;组蛋白甲基转移酶(HMTs)可以将甲基基团转移到组蛋白上等不同组氨酸修饰标记对应于不同的生物学过程,它可以作为调节因子的作用位点,也可以用来改变染色质结构。 染色质免疫沉淀分析(ChiP)就是基于体内分析发展起来的方法,它的基本原理就是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA 复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA 片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA 相互作用的信息。它能真实、完整地反映结合在DNA 序列上的调控蛋白,就是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的一种很好的方法。CHIP 不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且,CHIP 与其她方法的结合,扩大了其应用范围:CHIP 与基因芯片相结合建立的CHIP-on-chip 方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选;CHIP 与体内足迹法相结合,用于寻找反式因子的体内结合位点;RNA-CHIP 用于研究RNA在基因表达调控中的作用。由此可见,随着CHIP 的进一步完善,它必将会在基因表达调控研究中发挥越来越重要的作用。 凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)就是目前研究转录调控蛋白与相应核苷酸序列
SSB变桨系统试验常见故障
1.SSB变桨系统地面出厂试验时，在调整95°限位开关及挡块位置时操作人员不慎将60947-5-1#95°限位开关直动头冲断。 2.G8-064315变桨控制柜，实验时变桨速度过快，执行速度远大于设定速度。初步判 断电机驱动器损坏，造成无法正常使用。 3. 473399－60#旋编编码器做变桨功能试验时，编码器存在角度无变化故障 4、466631－04#旋编编码器做变桨功能试验时，编码器存在角度跳变故障 5. 叶轮功能试验时，由于操作人不慎误将G8-070588变桨控制柜内的1F1防雷模块的火线与零线接反，导致1F1防雷模块烧坏。 6.变桨控制柜实验时系统报电机过温PTC故障，经更换柜内9A1模块后此故障消除。 7、变桨控制柜实验时系统报电机过温PTC故障，经更换柜内9A1模块后此故障消除。 8、G8-070093#变桨控制柜实验时柜内12A1模块指示灯不亮，经更换此故障消除。 9. 旋编编码器做变桨功能试验时，编码器角度始终保持在0°无变化，无法正常使用。 10、旋编编码器旋转时有卡阻现象，并且内部有异响。无法正常使用 11. 95°限位开关压下直动头不能正常复位，造成该95°限位开关无法正常使用。 12. 变桨系统中有2个限位开关触头有卡阻现象，活动不自如，无法正常使用。 13. 叶轮组在调试时发现，闭合电容开关时，9U1不动作，面板上显示9U1故障，无法正常使用 14. LED显示H.N,面板显示：变流器故障，散热片温度故障，无法正常使用。 15. 变桨柜G8-065677打开电容开关后面板显示电容电压9U1为故障状态，9U1不动作，无法正常使用。 16. SSB控制柜配套带来的旋转编码器形状不同, 一套三个旋编信号线接头位置不同,装后性能不受影响。
CHIP实验操作
ChIP实验操作指南 国家瓜果改良中心荔枝分中心 采用Bowler等（2005）的方法，具体如下： 1收获2.0g花生根、茎、也、种子于一个50ml离心管中。 2加40 ml超纯水于离心管中，轻柔颠倒离心管洗材料2次。 3去掉尽可能多的水，再加入37ml 1% 甲醛，与15-25 ℃，真空放置15 min。 4 加入2. 5 ml 2 M甘氨酸是离心管中的甘氨酸的终浓度为0.125 M，再真空放置5 min。 5 加40ml超纯水与离心管中，轻柔颠倒离心管洗材料2-3次。 6去掉尽可能多的水，液氮速冻后-80℃保存或直接利用。 第一天 1 准备核酸提取液Extraction buffer 1、2、3，并4 ℃预冷。 2 液氮淹没样品，样品尽量磨碎，注意不用潮解样品。 3 预冷的50 ml离心管中加入预冷的30 ml核酸提取液1 ，再将样品粉末加入离心管中，轻柔颠倒混匀后放在冰上5 min. 4 再拿一个50 ml离心管于冰上预冷，用两层滤膜将样品过滤入该离心管，如果滤液中仍有残渣，重复步骤4。 5 4 ℃， 3000g 离心10min。 6 小心弃上清，加入1 ml 4 ℃预冷核酸提取液2重悬浮沉淀，移入进口（或严格灭菌）的1.5ml 离心管，4 ℃，12000g离心溶液10Min. 7 小心弃上清，加入300μl 4 ℃预冷核酸提取液3重悬浮沉淀,可以轻柔颠倒助匀，但要避免起泡。（核酸提取液3很粘稠，但还是要尽量重悬浮好沉淀）。 8 在一新4 ℃预冷离心管中加300μl 4 ℃预冷核酸提取液3，再将步骤7的溶液小心加入上层，4 ℃，16000g离心溶液1h（准备步骤9，制一块1%琼脂糖凝胶，用80μl CHIP 洗液洗磁珠）。 9 准备核酸裂解液 Nuclei lysis Buffer。 10 小心弃上清，加入300μl预冷核酸裂解液，于冰上用（剪过尖端）枪头吹打溶液混匀或轻柔颠倒助匀，但要注意避免起泡。并取出1-2μl混匀也来作为对照看超声波破碎后的对照。 11 超声波破损染色质5次，每次15s，中间间隔1 min 避免溶液过热，避免损失过多及起泡。跑电泳（1%琼脂糖凝胶）检测超生效果（应该在200-1000bp之间）。可以把破碎后的染色质-80 ℃保存或直接进入下一步。 12 超声波破碎后溶液4 ℃，12000g离心5 min，上清液移至1个5ml离心管中，并移出10μl来，于-20℃保存作为“Input DNA对照”。 13 先验证这时候的超声波破碎后溶液体积少于300μl，再补加CHIP洗液至总体积3 ml。
智能检测系统
1.智能检测装置：主要形式：智能传感器、智能仪器、虚拟仪器和智能检测系统； 2.非电量检测：温度检测（热电式传感器，光纤温度传感器，红外测温仪，微波测温仪）压力检测（应变式压力计，压电式压力计，电容式压力计，霍尔式压力计）流量检测（电磁流量计，超声波流量传感器，光纤漩涡流量传感器）物位检测（电容式液位传感器，超声波物位传感器，微波界位计）成分检测（红外线气体分析仪，半导体式气敏传感器） 3.流量检测：流量的定义为单位时间内流过管道某一截面的体积或质量，因此，流量分为体积流量和质量流量；分为：电磁流量计，超声波流量传感器，光纤漩涡流量传感器；流量检测包括：○1.电磁流量计：电磁流量计是以电磁感应原理为基础的。它能检测具有一定电导率的酸碱盐溶液，腐蚀性液体以及含有固体颗粒（泥浆，矿浆）的液体流量。○2.超声波流量传感器:超声波流量传感器是利用超声波在流体中传输时，在静止流体和流动流体中的传播速度不同的特点，从而求得流体的流速和流量。○3.光纤漩涡流量传感器:光纤漩涡流量传感器是将一根多模光纤垂直的装入管道，当液体或气体流与其垂直的光纤时，光纤受到流体涡流的作用而振动，振动的频率域流速有关，测出该频率就可确定液体的流速。 4.智能仪器：就是一种以微处理器为核心单元，兼有检测、判断和信息处理功能的智能化测量仪器；按实现方式划分，智能仪器有非集成智能仪器和集成智能仪器两种形式；构成：（1）.硬件：传感器、主机电路、模拟量输入/输出通道、人机接口电路、标准通信接口；（2）.软件：监控程序、接口管理程序、数据处理程序；功能：具有逻辑判断、决策和统计处理功能；具有自诊断、自校正功能；具有自适应、自调整功能；具有组态功能；具有记忆、存储功能；具有数据通信功能；特点：高精度、多功能、高可靠性和高稳定性、高分辨率、高信噪比、友好的人机对话能力、良好的网络通信能力、自适应性强、高性价比；发展趋势:多功能化、智能化、微型化、网络化； 5. 非集成智能仪器：也称为微机嵌入式智能仪器，即将传统的传感器、单片机或微型计算机、模拟量输入输出通道、标准数据通信接口、人机界面和外设接口等分离部件封装在一起，组合为一个整体而构成；特点：一般为专用或多功能产品，具有小型化、便携式、低功耗、易于密封、适应恶劣环境、低成本； 6.虚拟仪器：以通用的计算机硬件和操作系统为依托，增加必要的硬件设备，通过计算机软件使其具备各种仪器的功能；由信号采集与控制单元、数据分析与处理单元、数据表达与输出单元等三大部分组成。特点：增强了传统仪器的功能、软件就是仪器、自由定义仪器，仪器开放灵活、开发费用更低，技术更新更快； 7.虚拟仪器总线：VXI总线将传统的消息基仪器和寄存器基仪器统一在同一环境下，不仅为各个仪器模块提供了定时和同步的能力，而且还提供了开放的，标准化的高速处理器总线。使用户开发虚拟仪器更为灵活，效率更高，保证了系统的稳定性和高性能。 8.现场总线：一种安装在制造和过程区域的现场设备/仪器与控制室内的自动控制装置/系统之间的一种串行、数字式、双向传输和多种分支结构的通信网络；是计算机技术、通信技术和控制技术的综合与集成。含义表现在六个方面：（1）现场通信网络与信息传输的数字化（2）现场设备的智能化与互连（3）互操作性（4）分散功能块（5）通信线供电（6）开放式互连环境；现场控制总线的特点和优势：特点：（1）1对N结构减少传输电缆、节约硬件设备（2）可靠性高（3）可控性好（4）互换性好（5）互操作性好（6）分散控制（7）统一组态；优势：（1）增强了现场级信息集成能力（2）开放式、互操作性、互换性、可集成性（3）系统可靠性高、可维护性好（4）降低了系统及工程成本；现场总线通信协议一般由底层到上层可分为现场设备层、过程监控层和企业管理层三个层次。现场总线的网络拓扑结构主要有三种：（1）星状结构（2）树状结构（3）环状结构；现场总线的数据通信模式有三种:对等式、主从式、客户/服务器式。典型的现场总线:（1）CAN（控制局域网）（2）Lon Works（局域操作网）（3）Profibus（过程现场总线）（4）HART（5）FF（6）Ethernet（工业以太网）
Lust变桨系统调试相关事项说明_更新
Lust变桨系统调试说明 1、操作说明： 为确保系统调试安全，必须预先进行以下措施： ①现场调试人员必须佩戴好安全帽； ②400V电源的三相线、零线和地线必须可靠连接，避免缺相或漏接； ③上电前确认主控箱和轴控箱的开关处于断开状态； ④所有连接电缆连接正确（电机后面的编码器电缆号是S1、S2和S3；冗 余编码器的电缆号是T1、T2和T3，若反接，会出现飞车故障）； ⑤上电前将电机的轴键拆除或利用扎带将其捆扎牢固； ⑥上电前确认电机与底座是否可靠固定； ⑦电池箱箱盖闭合（完成检查）； 2、系统紧急顺桨： ①Profibus通信故障（或者不正常）； ②Pitch Master故障； ③电机侧编码器故障； ④安全链信号输入无＋24V（硬输入点）； ⑤未提供＋24COM(硬输入点)； ⑥Emergency mode位为1； 3、手动模式 手动模式用于机械调零和现场安装调整用，转动速度为2.5度/秒。 手动模式前提条件： ①手动模式信号为1（硬输入点），并观察主控箱的9A1的第8通道的灯是 否点亮； ②Profibus通信正常，或者短接17K7的13、14引脚； ③Normal Operation Mode设置为0； ④Emergency Mode位为0； ⑤转动任一个桨叶时，另外两个桨叶为91度位置（或者通过关闭轴箱的电 源模拟）； ⑥轴箱电池开关处于断开状态； ⑦手动旋钮的通道选择的0、1、2和3分别对应空档、轴控箱1、轴控箱2 和轴控箱3；转动方向旋钮控制的是电机的正传和反转； 4、自动模式
自动模式必须满足以下条件： ①先闭合主控箱的400V电源； ②Profibus通信正常； ③将Fault Reset置位1，然后置0； ④闭合轴箱的电池开关和电源开关前确保通信的Emerge Mode（读）为0 和Normal Operation Mode（写）为0；硬接点的Safety Signal（为高电平）、+24V和0V有正常连接，Manual Operation为0。否则会出现飞车现象； ⑤轴控箱上电顺序：先闭合电池开关（5Q1），然后闭合电源开关（6S1）。 正常状态下电机会由于内部的电路的控制不会出现转动； ⑥自动控制是通过通信软件控制，先设置好控制桨叶的目标角度、转速（建 议为3度/秒以下）和加速度（建议0.5～2度/秒2），然后将Normal Operation Mode置1，启动自动模式；若要中途停止，只能通过以下任一方式：将Normal Operation Mode置0、将对应的91度限位开关触发和关闭轴控箱电源（6S1）； 5、限位开关 91度限位开关用于控制Pitch Master（主控变频器）的输出控制，当触发了该限位开关后，7K6复位，然后电机会停止，相对而言动作比较缓慢； 96度限位开关用于控制电机和Ptich Master的ENPO信号，当触发了该限位开关后，6K2和6K3复位，然后电机立即停止，相对而言动作比较迅速。 6、Bypass Bypass信号是用于旁通2个限位开关触发了以后继续启动电机转动，有硬信号和软信号之分。 Bypass软信号是对应91度限位开关。当91度触发了以后，利用通信将对应桨叶的Bypass信号置1，然后电机才可以往96度方向转动；而需要往0度方向转动不需要将对应桨叶的Bypass信号置1（实际上该Bypass信号用途不大）； Bypass硬信号是对应96度限位开关，当96度触发了以后，利用硬结点的Bypass信号置1，然后电机只可以往0度方向转动； 7、温度预处理说明 根据通信中的所有温度值，需要在控制当中进行预处理，其温度的预处理值建议如下（根据Lust技术人员的建议）： ①Pitch Master停机温度值为80度；
ChIP操作步骤
ChIP实验步骤 第一部分、细胞的甲醛交联与超声破碎 1. 交联前的准备工作 （1）细胞准备：对细胞进行一定条件的处理，以确保目的基因的转录激活。细胞密度应达到1×106细胞/10 cm培养皿。 （2）配制1％甲醛溶液：270 μl 37%甲醛加入10 ml无血清细胞培养液中即可，应使用高质量的甲醛。 2. 交联与超声破碎 优化超声条件，以保证目的细胞的染色质DNA能被剪切为200 bp～1000 bp的片段，具体操作如下（以HepG2细胞为例）： （1）小心吸出细胞培养液，加入1％甲醛溶液10 ml，37℃孵育10 min，然后置冰上5 min终止固定。 （2）小心尽量吸净培养液，用预冷的PBS 3 ml洗细胞两次。 （3）加入预冷的内含PMSF（10ul）的PBS 1 ml。刮取细胞并移至离心管中，于4℃以1200 rpm（约3000 g）离心5 min，小心移走上清液，得到细胞沉淀（细胞沉淀可于-80℃保存数月） （4）以200μl SDS裂解缓冲液重悬细胞（含PMSF：2ul），冰上放置10 min （5）冰上超声剪切染色质DNA，使其成为200 bp～1000 bp的片段（10个脉冲，每个20 s，脉冲间隔20 s） （6）加入5M Nacl 8 μl，65℃，4h至过夜，以解交联 （7）琼脂糖凝胶电泳观察剪切效果（所获超声剪切物可于-80℃保存数月）。 第二部分、免疫共沉淀 如果超声条件优化已经优化好，在步骤“（一）.2(5)”后，进行下列步骤。对于阴性对照，采用下述步骤“5”所述。 接上述2(6) 1. 4 ℃，13,000rpm离心10min，转移上清至2ml离心管中。 2.以含蛋白酶抑制剂的CHiP稀释缓冲液1800μl，稀释200μl的上清至2ml。 3.为了去除与蛋白A-琼脂糖非特异结合的分子，加入75 μl蛋白A/鲑鱼精DNA 琼脂, 4℃旋转孵育30 min。 4.4℃,以1000 rpm离心1 min以沉淀琼脂，将上清转移至新的离心管中。并从 这2ml中取出20μl作为“input DNA”对照。 5.将上清分为两份，一份加入针对DNA结合蛋白的特异性抗体2μg，另一份加 强如抗体阴性对照（IgG）2μg，4℃旋转孵育过夜（孵育时间可视情况而调整）。 6.加入60μl蛋白A/鲑鱼精DNA琼脂, 4℃旋转孵育60 min以收集抗体/转录因子 复合体。 7.4℃,以1000 rpm离心1 min，小心移除上清（内含未结合及非特异DNA）。 8.按以下顺序洗涤蛋白A/抗体/转录因子/DNA复合物，每种缓冲液加0.5ml，旋
自动化测试平台解决方案V0
Smart Robot自动化测试解决方案
目录
1.面临的问题 1.1.智能移动设备的软件系统和硬件方案的复杂组合，导致APP 实现多机型兼容难度大，投入大。 1.2.敏捷开发、迭代开发，产品追求快速上线，导致回归测 试、可靠性测试等任务重，无法有效应对测试工作量波 峰。 1.3.A PP开发框架多、开发人员能力不足导致安全漏洞突出 1.4.软件硬件设计交叉影响，性能优化难度加大。 2.自动化测试平台整体解决方案 为解决移动应用开发商面临的以问题，结局方案设计如下。可全面解决移动应用开发面临的兼容性问题、安全性问题、测试工作量波峰、用户体验问题，并全程为移动应用的开发保驾护航。 整体解决方案 兼容性测试系统：智能源码扫描，即通过解析APK文件，将源码与问题特征库自动比对，查找兼容性问题，并自动生成测试报告。 SMART平台，实现被测设备管理+测试用例制作、管理、自动化执行、并生成测试报告。可实现APP的定制用例的多机自动化运行、适配性测试、功能及UI测试； 安全监控系统：监测系统文件变化、监测数据流量、耗电情况、监控非法用户行为等。
性能测试系统：通过专业的自动化测试设备（硬件工具），测量流畅度卡顿数据、量化响应时间指标，为研发人员提供毫秒级数据，助力改善用户体验。 3.解决方案的实现 3.1.兼容性测试系统 3.1.1.SMART 平台 SMART兼容性测试平台，提供自动化测试的解决方案，提供用例制作、管理、自动化运行、测试结果自动校验。无需人员干预即可实现各类APP自动化用例的运行，并自动生成测试报告。 3.1.1.1.测试步骤 测试步骤 a)自动化测试脚本开发 b)真机运行脚本 c)输出测试报告 3.1.1.2.测试框架 测试框架 通过手机usb接口实现对手机的控制，完成测试工具及app的下发，运行及测试结果的拉取和展示。测试工具采用lua脚本编写测试case，通过进程注入技术获取屏幕显示信息，结合Touch事件模拟，可以实现基于控件级别的复杂测试case，测试结果以Log、屏幕截图等形式输出。 3.1.1.3.SMART平台可实现的功能
变桨系统带载测试平台要求
变桨系统带载测试平台试验大纲 1 前言 本部分规定了各种型号的电动变桨驱动系统工作性能的测试要求和测试方法。适用于各种电动 变桨驱动系统出厂性能验收和新产品性能测试。 2 测试内容 电机负载测试内容主要分成三个部分： 1）变桨系统带载功能性测试 2）变桨系统带载故障模拟测试 3）变桨系统带载连续运行测试 测试的主要部件为：变桨电机、刹车系统、伺服驱动器、蓄电池、编码器。 3 测试依据 2MW 风机根据《变桨驱动系统采购规范》SB-030.02.05-A 3.6MW 风机根据《变桨驱动系统采购规范》V-69.2-BV.MR.00.00-A-D GB/T 1311-2008《直流电机试验方法》 GB/T 1029-2005《三相同步电机试验方法》 4 变桨系统带载功能测试 4.1 变桨电机额定负载测试 需测试电机在额定负载下的变桨位置、电机转速、转矩响应特性。位置给定范围为（0°～30°）， 测试变桨速度为2°/S。 测试需要得到如下响应曲线图：电机运动位置给定曲线、电机位置响应曲线、电机速度响应曲 线、电机转矩响应曲线、电机电流变化曲线、电机温升曲线。 Y520000064-2 变桨系统带载测试平台试验大纲共3 页第 2 页 FDJL-JS-027 4.2 变桨电机变化负载测试 需测试电机在变化负载下的变桨位置、电机转速、转矩响应特性。位置给定范围为（0°～30°）， 变化负载范围为额定负载的±50%，测试变桨速度为2°/S。 测试需要得到如下响应曲线图：电机运动位置给定曲线、电机位置响应曲线、电机速度响应曲 线、电机转矩响应曲线、电机电流变化曲线、电机温升曲线。 4.3 变桨电机最大负载测试 需测试电机在最大负载下（3s 内）的变桨位置、电机转速、转矩响应特性。位置给定范围为（0°～ 30°），测试变桨速度为2°/S。 测试需要得到如下响应曲线图：电机运动位置给定曲线、电机位置响应曲线、电机速度响应曲
ChIP 原理及实验方法
染色质免疫沉淀技术（ChIP）实验方法 实验原理 染色质免疫沉淀技术（ChIP）通过与染色质片段共沉淀和PCR技术，在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。ChIP技术最大的优点就是在活体细胞状态下研究了蛋白质和目的基因结合状况，减少了体外实验的误差。在活体细胞中，先对与调节蛋白结合的染色质进行分离，然后通过一定的方法（例如：超声波）随机剪切染色质，用调节蛋白的抗体沉淀目的染色质，再通过一定手段把目的染色质上的蛋白质去除掉，最后用PCR等方法检测鉴定共沉淀的DNA片段的特性。 仪器和试剂
真空设备、涡旋器、液氮、冷冻离心管、离心机、超声波粉碎仪、miracloth 37%甲醛，2M甘氨酸，ddH O，剪切的鲑精DNA/protein A琼脂糖珠(Sant cruz)， 2 蛋白酶K（14mg/ml）,RNaseA,酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）,氯仿,无水乙醇, 提取缓冲液1（EB1）:0.4M蔗糖；10mM Tris-HCl，pH8.0；5mM β-ME； 0.1mM PMSF；蛋白酶抑制剂混合物（aprotinin、pepstain A、Leupeptin、 Antipain、TPCK、Benzamidine） 提取缓冲液2（EB2）:0.25M 蔗糖；10mM Tris-HCl，pH8.0；10mM MgCl2； 1%Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) ；5mM β-ME；0.1mM PMSF；蛋白酶抑制剂混合物（同上） 提取缓冲液3（EB3）：1.7M蔗糖；10mM Tris-HCl，pH8.0；0.15%Triton X-100；2mM MgCl ；5mMβ-ME；0.1mM PMSF；蛋白酶抑制剂混合物（同上） 2 核裂解缓冲液（NLB）：50mM Tris-HCl，pH8.0；10mM EDTA；1%SDS；PMSF和蛋白酶抑制剂混合物（同上） ChIP稀释缓冲液（ChIP DB）：1.1%Triton X-100；1.2mM EDTA；16.7 mM Tris-HCl，pH8.0；167mM NaCl；PMSF和蛋白酶抑制剂混合物（同上） 洗脱缓冲液（EB）：1%SDS；0.1M NaHCO3（现配） 低盐洗脱液：150mM NaCl；0.1%SDS；1%Triton X-100；2mM EDTA；20mM Tris-HCl，pH8.0
ChIP实验的原理与实践
一、原理 转录从基因的启动子区开始，由一系列的转录因子结合到基因的启动子区，通用转录因子结合在 基本启动子区起始转录，而这个过程对基因的转录是必需的，但不是充分的，通常需要一些特异的转 录因子结合在上游调节序列，使基因特异表达并维持的合适水平，ChIP主要用于研究转录因子（个人 认为主要是特异转录因子的作用，因为这些因子的表达才有时空特异性）与下游基因的结合，如果 ChIP发现转录因子能与目的基因结合，那么这说明该基因可能是其下游基因，要想进一步证明，还要 做高低表达和荧光素酶等实验。 二、目的基因的筛选 1，如果做ChIP-seq那就不需要在实验前筛选目的基因了，理论上芯片会分析出样本中该转录因 子所有的下游基因，我们根据这个分析结果进行筛选就可以了。 2、如果是做普通的ChIP，那么在实验前要进行初步的筛选，选择自己感兴趣的目的基因，设计 PCR引物，进行验证，所以，这样考虑的话，ChIP实验是对你的早期数据的验证。个人认为，筛选目 的基因的方法有一下几种：a，查文献，看转录因子和哪些基因在表达时间，空间，及功能
相关。b， 你的课题设计中涉及到的基因，比如说你课题中设计到c-myb基因，你就想看一下转录因子和c-myb的 关系（这个纯属碰运气）。c，根据自己早期的实验结果，比如，你做高、低表达后，发现你的转录 因子表大变化后，一些基因的表达也发生了变化，那么这些基因可以作为候选基因。 3、另外筛选完自己感兴趣的基因后，可以用一些分析工具进行初步的预测，这个网上也可以搜 到，就不罗嗦了，如果有战友需要，可以再讨论。 三、实验设计 这里只说说实验各组的作用 1.input：样本经过超声，但是没有进行ChIP，包含样本超声后总DNA，可以进行电泳，检测超声 效果，同时，可以与最后ChIP样本进行比较，看ChIP的效率（如果用同一引物进行PCR，ChIP组和 input组亮度差不多，说明ChIP效率高，基本上，样本中所有的目的基因片段都被ChIP下来了，反之 ，说明效率低，实验条件有待改进） 2、阳性对照：一般用anti-RNA Polymerase II抗体，因为RNA Polymerase II是通用转录
CHIP全解析
ChIP实验步骤 第一天： （一）、细胞的甲醛交联与超声破碎。 1、取出1平皿细胞（10cm平皿），加入243ul 37％甲醛，使得甲醛的终浓度为1％。（培养基共有9ml） 2、37摄氏度孵育10min。 3、终止交联：加甘氨酸至终浓度为0.125M。 450ul 2.5M甘氨酸于平皿中。混匀后，在室温下放置5min即可。 4、吸尽培养基，用冰冷的PBS清洗细胞2次。 5、细胞刮刀收集细胞于15ml离心管中（PBS依次为5ml，3ml和3ml）。预冷后2000rpm 5min 收集细胞。 6、倒去上清。按照细胞量，加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200ul含2×106个细胞。这样每100ul溶液含1×106个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。 假设MCF7长满板为5×106个细胞。本次细胞长得约为80％。即为4×106个细胞。因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。 将2管混在一起，共800ul。 7、超声破碎：VCX750，25％功率，4.5S冲击，9S间隙。共14次。 （二）、除杂及抗体哺育。 8、超声破碎结束后，10，000g 4度离心10min。去除不溶物质。 留取300ul做实验，其余保存于－80度。 300ul中，100ul加抗体做为实验组；100ul不加抗体做为对照组；100ul加入4ul 5M NaCl （NaCl 终浓度为0.2M），65度处理3h解交联，跑电泳，检测超声破碎的效果。 9、在100ul的超声破碎产物中，加入900ul ChIP Dilution Buffer和20ul的50×PIC。 再各加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。4度颠转混匀1h。 10、1h后，在4度静置10min沉淀，700rpm离心1min。 11、取上清。各留取20ul做为input。一管中加入1ul 抗体，另一管中则不加抗体。4度颠转过夜。 （三）、检验超声破碎的效果。 取100ul超声破碎后产物，加入4ul 5M NaCl，65度处理2h解交联。分出一半用酚/氯仿抽提。电泳检测超声效果。 第二天： （一）、免疫复合物的沉淀及清洗。 12、孵育过夜后，每管中加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。 4度颠转2h。 13、4度静置10min后，700rpm离心1min。除去上清。 14、依次用下列溶液清洗沉淀复合物。清洗的步骤：加入溶液，在4度颠转10min，4度静置10min沉淀，700rpm离心1min，除去上清。 洗涤溶液：a. low salt wash buffer----one wash b. high salt wash buffer-----one wash c. LiCl wash buffer------one wash
ChIP实验步骤-英文原版chip技术
一、ChIP实验步骤 第一天：（一）、细胞的甲醛交联与超声破碎。 1、取出1平皿细胞（10cm平皿），加入243ul 37％甲醛，使得甲醛的终浓度为1％。（培养基共有9ml） 2、37摄氏度孵育10min。 3、终止交联：加甘氨酸至终浓度为0.125M。 450ul 2.5M甘氨酸于平皿中。混匀后，在室温下放置5min即可。 4、吸尽培养基，用冰冷的PBS清洗细胞2次。 5、细胞刮刀收集细胞于15ml离心管中（PBS依次为5ml，3ml和3ml）。预冷后2000rpm 5min 收集细胞。 6、倒去上清。按照细胞量，加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200ul 含2×106个细胞。这样每100ul溶液含1×106个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设MCF7长满板为5×106个细胞。本次细胞长得约为80％。即为4×106个细胞。因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。将2管混在一起，共800ul。 7、超声破碎：VCX750，25％功率，4.5S冲击，9S间隙。共14次。 （二）、除杂及抗体哺育。 8、超声破碎结束后，10，000g 4度离心10min。去除不溶物质。留取300ul做实验，其余保存于－80度。 300ul中，100ul加抗体做为实验组；100ul不加抗体做为对照组；100ul加入4ul 5M NaCl （NaCl 终浓度为0.2M），65度处理3h解交联，跑电泳，检测超声破碎的效果。 9、在100ul的超声破碎产物中，加入900ul ChIP Dilution Buffer和20ul的50×PIC。再各加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。4度颠转混匀1h。 10、1h后，在4度静置10min 沉淀，700rpm离心1min。 11、取上清。各留取20ul做为input。一管中加入1ul 抗体，另一管中则不加抗体。4度颠转过夜。 （三）、检验超声破碎的效果。 取100ul超声破碎后产物，加入4ul 5M NaCl，65度处理2h解交联。分出一半用酚/氯仿抽提。电泳检测超声效果。 第二天：（一）、免疫复合物的沉淀及清洗。 12、孵育过夜后，每管中加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。 4度颠转2h。 13、4度静置10min后，700rpm离心1min。除去上清。 14、依次用下列溶液清洗沉淀复合物。清洗的步骤：加入溶液，在4度颠转10min，4度静置10min沉淀，700rpm离心1min，除去上清。洗涤溶液：a. low salt wash buffer----one wash b. high salt wash buffer-----one wash c. LiCl wash buffer------one wash d. TE buffer------two wash 15、清洗完毕后，开始洗脱。洗脱液的配方：100ul 10％SDS， 100ul 1M NaHCO3， 800ul ddH2O，共1ml。 每管加入250ul洗脱buffer，室温下颠转15min，静置离心后，收集上清。重复洗涤一次。最终的洗脱液为每管500ul。 16、解交联：每管中加入20ul 5M NaCl（NaCl终浓度为0.2M）。混匀，65度解交联过夜。第三天：（一）、DNA样品的回收 17、解交联结束后，每管加入1ul RNaseA（MBI），37度孵育1h。 18、每管加入10ul 0.5M EDTA， 20ul 1M Tris.HCl（PH 6.5），2ul 10mg/ml 蛋白酶K。 45度处理2h。 19、DNA片段的回收―――omega胶回收试剂盒。最终的样品溶于100ul ddH2O。（二）、PCR分析二、技术总结（一）、关于细胞细胞的生长状态要好。因为细胞的生长状
国家普通话水平智能测试系统
国家普通话水平智能测试系统 操作手册（简易版） 安徽科大讯飞信息科技股份有限公司 目录 一系统简介 (2) 1.系统构成 (2) 2.系统构架 (2) 二测试流程 (3) 1.业务总体流程介绍 (3) 2.基层测试站测试操作流程 (4) 2.1测试报名 (4) 2.2考前准备 (9) 2.3现场测试 (15) 2.4信息上传 (19) 三系统维护 (20) 四常见问题 (20) 计算机辅助普通话水平测试系统 操作手册
一系统简介 1.系统构成 科大讯飞提供的普通话测试系统不仅能够对考生的普通话进行智能评测，还能够对考试现场和测试流程以信息化的方式管理，实现了国家普通话水平测试的测试、组织和管理的信息化，该系统主要包括两个部分： ●国家普通话水平智能测试系统 国家普通话水平智能测试系统（PSCP）是安徽科大讯飞信息科技股份有限公司在国家语委“十五”重点科研项目支持下研发完成。系统基于国家普通话水平测试大纲，可准确地对命题说话之外的所有测试题型实现自动评测，同时自动检测发音者存在的语音错误和缺陷；而且系统提供的测试管理功能，也能够帮助基层测试站组织测试，提高测试的效率。该系统部署在基层测试站，主要使用者为考生和基层测试站的管理人员。 ●国家普通话水平测试信息管理系统 国家普通话水平测试信息管理系统（PSCW）实现的是普通话水平测试全过程的计算机管理，为计算机辅助测试全面解决方案提供支撑平台。在该系统中，可以进行考生报名、测试员打分、成绩管理、数据管理等一系列操作。该系统部署在远程ＷＥＢ服务器上，相关人员通过登录网页完成相应的操作，主要使用者为省级测试管理人员、基层测试站的管理人员和测试员。 2.系统构架 普通话测试系统解决方案的构架图如下：
关于染色质免疫共沉淀ChIP实验原理及实验总结
关于染色质免疫共沉淀ChIP实验原理及实验总结 ChIP实验原理 在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。 可以利用ChIP研究转录因子（transcription factor, TF）与启动子（promoter）的关联性。由于ChIP采用甲醛固定活细胞或者组织的方法，所以能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况。这个优势是EMSA这个体外研究核酸与蛋白相互结合的实验方法所不能比拟的。当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白，蛋白与核酸（DNA或RNA）之间会产生共价键。细胞内，当TF与Promoter相互结合（生物意义上的结合）时，它们必然靠的比较近，或者契合在一起，这个时候用甲醛处理，能使它们之间产生共价键。 一般ChIP的流程是：甲醛处理细胞——收集细胞，超声破碎——加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合——加入Protein A，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀——对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合——洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物——解交联，纯化富集的DNA-片断——PCR分析。 ChIP实验步骤 第一天：
（一）、细胞的甲醛交联与超声破碎。 1、取出1平皿细胞（10cm平皿），加入243ul 37％甲醛，使得甲醛的终浓度为1％。（培养基共有9ml） 2、37摄氏度孵育10min。 3、终止交联：加甘氨酸至终浓度为0.125M。 450ul 2.5M甘氨酸于平皿中。混匀后，在室温下放置5min即可。 4、吸尽培养基，用冰冷的PBS清洗细胞2次。 5、细胞刮刀收集细胞于15ml离心管中（PBS依次为5ml，3ml和3ml）。预冷后2000rpm 5min收集细胞。 6、倒去上清。按照细胞量，加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200ul含2×106个细胞。这样每100ul溶液含1×106个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。 假设MCF7长满板为5×106个细胞。本次细胞长得约为80％。即为4×106个细胞。因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。 将2管混在一起，共800ul。 7、超声破碎：VCX750，25％功率，4.5S冲击，9S间隙。共14次。当然，如果实验室有Bioruptor这种神器的话那就轻松了。 （二）、除杂及抗体哺育。 8、超声破碎结束后，10，000g 4度离心10min。去除不溶物质。 留取300ul做实验，其余保存于－80度。 300ul中，100ul加抗体做为实验组；100ul不加抗体做为对照组；100ul 加入4ul 5M NaCl （NaCl终浓度为0.2M），65度处理3h解交联，跑电泳，
国电 变桨 调试
PROJECT GUP CCV风场变桨调试TO GUP Customer ENGINEER MOOG Service Remark GUP CCV风场变桨调试 1、变桨柜内无电检查 1.1 查验系统元器件包括电缆有无缺陷。 a、检查柜体在运输过程中是否存在由于震动造成的一些元器件损伤，主要是看元器件有无硬件损伤。 b、检查所要连接的重载电缆有无绝缘破损情况，Harting有无损坏。 c、查看柜内有无铁屑、铜丝等金属危险品 确保上电后设备及人身的安全。 1.2 校线检查 1.2.1 24V控制滑环线缆检查 使用万用表对从滑环进轮毂的线缆进行校线检查，确保接线没有错误。 注意：防雷模块的区别 6R1：接Profibus通讯线为5V防雷模块 16R1、17R1为24V防雷模块 注：此项接线必须校线检查，不然24V如果接线短路，就会造成防雷模块的损坏。 1.2.2 400V线缆检查 使用万用表对从机舱进轮毂的线缆进行校线检查。 注：400V的线缆校线检查必须提高警惕，严禁出现零线与火线或者地线与火线接反的情况！！！ 目前在已经调试的风场中 1）尚义风场发现400V的防雷模块损坏较多，查出原因为机舱出火线与地/零线接反导致防雷模块的损坏2）在武川风场出现有，机舱零线未接紧，上电之后，系统缺零导致烧坏AC400充电器以及24V开关电源。 1.2.3 测量Canbus终端电阻60±5? 可测量BVL E线harting上，白棕两线间阻值 1.2.4 激活profibus终端电阻 DP插头上拨动开关处于ON状态 1）未接主控通讯线时，可测得6R1：1-2间阻值为220±10? 2）若连接主控通讯线之后阻值在110±5? 注：此阻值测量是在主控与变桨均未上电情况下测量的 1.2.5 线路测量 连接外部电源线之后（外部给变桨供电400V电源开关必须保持断开），闭合变桨柜体内所有开关（电池柜5Q1,axis1,axis2,axis3开关保持断开），做上电之前的线路测量 1）检测L1、L2、L3、N、PE线间的短路测量。 2）24+与L1、L2、L3、N、PE线间的短路测量。 3）24-与L1、L2、L3、N、PE线间的短路测量。 4）测量柜内各个端子排N线与N线以及PE线间的导通性。 注意：各个电压等级之间不能有回路电压串入 5）检测PITCHmaster进线进出线的对地的短路测量 确保上电之前线路无短路情况，保护设备及人身安全 1.2.6 电池电压测量 查看连接电池的短接线，保证电池短接线完全连接好，不能有虚接现象。 依次测量每个电池柜的电压，查看电池柜电压是否平衡，一般在230V左右，若出现电池柜电压偏低情况，上电后优先闭合这个电池柜开关，优先充电。