升麻及其炮制品的指纹图谱研究
升麻及其炮制品的HPLC 指纹图谱研究
王冰，张振秋*
，孙艳涛，李力，邓雪男（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600）
收稿日期：2010-06-21作者简介：王
冰（1982—），女，硕士生，研究方向：药物分析。E-
mail ：wb20040312@163．com *通信作者：张振秋，男，博士生导师，教授。Tel ：（0411）87586058，
E-mail ：zhangzhenqiu@sina．com 摘要：目的RP-HPLC 法建立升麻指纹图谱。方法采用Phenomsil BDS C 18（250mm ?4．6mm ，
5μm ）色谱柱；流动相为乙腈（A ）-0．1%磷酸水溶液（B ）梯度洗脱，0 5min （88%A ?12%B ），25min （80%A ?20%B ），45min （70%A ?30%B ），60min （60%A ?40%B ），检测波长316nm ，柱温40?；体积流量1．0mL /min ；进样量10μL 。结果建立了升麻的HPLC
指纹图谱，标定出15个共有指纹峰。结论升麻药材的指纹图谱可用于升麻的定性鉴别，为升麻药材的质量控制提供
参考依据。
关键词：升麻；指纹图谱中图分类号：R284．1
文献标志码：A
文章编号：1001-1528（2011）07-1106-04HPLC fingerprint of Cimicifuga and its processed products
WANG Bing ，ZHANG Zheng-qiu *，SUN Yan-tao ，LI Li ，DENG Xue-nan
（College of Pharmacy ，Liaoning Univesity of Traditional Chinese Medicine ，Dalian 116600，China ）
KEY WORDS ：Cimicifuga ；fingerprint
升麻为毛茛科植物大三叶升麻Cimicifuga hera-cleifolia Kom．、兴安升麻Cimicifuga dahurica （Turcz．）Maxim．或升麻Cimicifuga foetida L．的干燥茎。始载于《神农本草经》，列为上品。其味辛、微
甘，
性微寒。归肺、脾、胃、大肠经。具有发表透疹、清热解毒、升举阳气的功效。用于风热头痛，齿痛，口疮，咽喉肿痛，麻疹不透，阳毒发斑；脱肛，子宫脱垂
［1］
。升麻中含有有机酸、糖苷、色原酮、挥发油、
甾醇等多种类型的化学成分［2］
。当前对中药指纹
图谱的研究较多［3-4］
，主要有GC ［5-6］和HPLC 法
［7-8］
。对升麻的研究主要集中于定量测定［9］
和成分分
析
［10］
方面。本实验采用RP-HPLC 法建立并分析升麻的指纹图谱
［11］
，为升麻药材及其炮制品的质量评
价提供参考。1
仪器与试药
1．1仪器Agilent1100高效液相色谱仪（仪器编号：20041191DE43607375），配置四元梯度泵，在线脱气机，VWD 检测器；Phenomsil BDS C 18（250mm ?4．6mm ，5μm ）色谱柱；METTLER AB135-S 十万分之一电子分析天平（瑞士）；AR2140电子分析天平
（上海奥豪斯公司）。
1．2试药异阿魏酸（中国药品生物制品检定所，
批号111698-200602）。升麻药材经辽宁中医药大学李峰教授鉴定均为正品药材。样品编号依次为1
10；升麻炒炭品由北京商品地生品依药典方法自制，
样品编号为11；蜜炙品购自上海，样品编号为12；来源、种类和收集时间见表1；水为重蒸馏水，甲
醇、
乙腈（天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯），磷酸（天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯）。2方法与结果
2．1
色谱条件Phenomsil BDS C 18（250mm ?4．6mm ，5μm ）色谱柱；流动相：乙腈（A ）-0．1%磷酸水溶液（B ）（13?87）；流动相梯度：0 5min （88%A ?12%B ），25min （80%A ?20%B ），45min （70%A
?30%B ），60min （60%A ?40%B ），检测波长为316nm ；柱温：40?；体积流量：1．0mL /min 。2．2
参照物溶液的制备取异阿魏酸对照品适量，
精密称定，置棕色量瓶中，加10%乙醇制成每1mL 含异阿魏酸202．8μg 的溶液，即得。
6
011
表1不同商品地升麻药材
Tab．1
Cimicifuga from different resources
样品编号
来源地收集年月学名
1
黑龙江2009-10大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia Kom．2北京2009-10大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia Kom．3河北2009-03大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia Kom．4辽宁2009-04大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia Kom．
5上海2009-09升麻Cimicifuga foetida L．6吉林2009-03大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia Kom．7山西2009-04大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia Kom．8山东2009-09大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia Kom．
9江苏2009-09升麻Cimicifuga foetida L．10广东2009-09广东升麻Serratula chinensis S．Moore 11北京（炒炭）2009-10大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia Kom．
12
上海（蜜炙）
2009-09
升麻Cimicifuga foetida L．
2．3
供试品溶液的制备分别称取1 12号药材
粉末（过2号筛）约1g ，
精密称定，置50mL 烧瓶中，加入30%乙醇20mL ，密塞，加热回流1．5h ，放
冷，滤过，滤液置25mL 量瓶中，加30%乙醇稀释至
刻度，摇匀，取续滤液，即得。
2．4测定法在2．1项色谱条件下，分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μL ，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。参照物和样品指纹图谱见图1
。
A
B
图1对照品异阿魏酸（A ）和样品（B ）的HPLC 色谱Fig．1HPLC chromatograms of reference substances ：
iso-ferulate （A ），sample （B ）
2．5
精密度实验取5号样品，按样品制备方法进行制备，
在所建立的测定条件下，连续进样5次，以异阿魏酸峰位参照峰，实验结果得出色谱图中各特
征峰相对保留时间的RSD ＜0．27%；相对峰面积（特征峰所占比例大于1%）的RSD ＜5%，表明精密
度良好。
2．6重复性实验
取5号样品5份，按样品制备方
法进行制备，在所建立的测定条件下测定，以异阿魏酸峰位参照峰，实验结果得出色谱图中各特征峰相对保留时间的RSD ＜0．19%；相对峰面积（特征峰
所占比例大于1%）的RSD ＜5%，表明方法的重复
性良好。2．7
稳定性实验取5号样品，按样品制备方法进
行制备，在所建立的测定条件下，分别在0、
1、2、4、8、12h 进行测定，实验结果表明各特征峰相对保留时间的RSD ＜0．17%，相对峰面积（特征峰所占比例大于1%）的RSD ＜5%，表明样品的稳定性良好。2．8
测定结果
取除10号样品外的11批升麻样
品，
按供试品制备方法，在2．1项色谱条件下，分别精密吸取10μL ，
注入液相色谱仪，测定，11批样品出峰总数及共有峰所占的比例见表2。
表2各样品的出峰总数及其共有峰所占比例Tab．2
Numbers of sample peaks and proportion of
common peaks
样品编号
来源地出峰总数/个
共有峰所占比例/%
1
黑龙江28
53．57
2北京3542．863河北5726．324
辽宁3148．395上海3938．466吉林2853．577山西3148．398山东2951．729江苏3246．8811北京（炒炭）2951．7212
上海（蜜炙）
42
30．95
使用Excel 2003按照相关系数公式和夹角余弦公式
［12］
分析各个商品地及两种炮制品的保留时间
和峰面积，计算相似度，结果见表3、表4。
7
011
表3各峰相对保留时间的夹角余弦和相关系数计算结果
Tab．3The calculation result of cosine of the angle and correlation coefficient for relative retention times 1234567891112对照模板峰10．24830．24760．24730．24460．24170．25010．24570．24630．24750．24130．25030．2464峰20．35790．35740．35680．35650．35500．35810．35520．35700．35880．35620．36320．3574峰30．47660．47520．47380．47360．47160．47810．47330．47560．47910．47500．48200．4758峰40．76450．76430．76400．77550．75980．76800．76790．76570．76660．76140．78680．7677峰50．91030．91040．91020．91020．90980．91030．91020．91070．91130．91040．92250．9115峰61．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．0000峰71．13611．13591．13541．13611．13671．13701．13761．13651．13631．13671．15021．1377峰81．35321．35401．35421．35551．35631．35201．35451．35171．35051．35361．37201．3552峰91．46651．46761．46781．46971．46961．46411．46881．46411．46221．46641．49271．4690峰101．49661．49851．51171．50001．50131．49301．49771．49371．49101．49601．51801．4998峰111．54611．54811．54881．54981．55131．54181．54691．54271．53971．54531．56861．5481峰121．71181．71421．71441．71611．71791．70551．71151．70681．70391．71001．73771．7136峰131．75031．75271．75341．75491．75691．74391．75011．74481．74171．74851．77661．7522峰142．09802．10132．10132．10552．10622．07162．09572．08892．08652．09600．00001．9046峰152．69422．69732．70032．70372．70662．67462．68772．67962．67062．68880．00002．4458夹角余弦0．99890．99890．99890．99890．99880．99910．99890．99900．99900．99890．81331．0000相关系数0．99570．99570．99580．99570．99580．99620．99600．99600．99600．99590．21461．0000注：对照模板一列为根据夹角余弦公式、相关系数公式计算所得的结果。
表4各峰相对峰面积的夹角余弦和相关系数计算结果
Tab．4The calculation result of cosine of the angle and correlation coefficient for relative peak areas 1234567891112对照模板峰10．14230．10430．32480．01350．18770．09210．08900．11680．17360．05170．15560．1320峰20．02090．02430．05880．01200．02870．01850．01870．02180．03420．01690．16030．0377峰30．14000．12400．12700．17130．09490．24660．23070．23750．33190．03762．56440．3914峰40．06830．07600．08130．01800．02210．04390．04640．02540．04000．02910．16870．0563峰50．18800．18190．27810．21180．15250．26820．26580．20280．28340．09581．22540．3049峰61．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．00001．0000峰70．12750．12880．05720．12330．04060．21240．19730．22910．13250．02153．41310．4258峰80．23440．16000．06010．08270．06260．09470．08800．23680．11140．03190．47350．1487峰90．07600．05170．08530．04930．07540．05540．05410．05640．06580．03180．21120．0739峰100．15420．12090．55540．09990．03460．22220．22360．12070．10520．03811．25290．2662峰110．64400．61240．40590．51620．18640．81450．84750．51250．50680．13150．15260．4846峰120．32060．22350．12030．16080．10210．10780．10620．17950．10770．07680．35000．1687峰131．59441．25210．30210．62080．42170．39040．39120．82880．34110．26600．14830．5961峰140．04320．06310．32980．05570．05610．05270．05630．06490．09690．01690．00000．0760峰150．03650．04710．01940．02860．04370．03240．03070．05430．04370．01950．00000．0323夹角余弦0．85360．89220．88040．95410．89910．94600．93820．96390．95920．84660．64021．0000相关系数0．76030．82640．75060．94100．86400．90730．89500．93580．92540．84690．35771．0000注：对照模板一列为根据夹角余弦公式、相关系数公式计算所得的结果。
10号样品的图谱中未出现参照物异阿魏酸峰，而在计算各峰相对保留时间和相对峰面积的夹角余弦和相关系数时，需要将样品中异阿魏酸峰的保留时间和峰面积作为1（作为分母），再将其他峰的保留时间和峰面积与之相比，得出相对保留时间和相对峰面积，利用得到的数据计算出夹角余弦和相关系数。所以10号样品无法根据异阿魏酸峰计算夹角余弦和相关系数。10号样品与其他样品比较（以1号样品为例），样品各峰的保留时间、与15个共有峰符合的峰数见表5。3讨论
3．1根据中华人民共和国药典中指纹图谱测定方法，在选定的色谱条件下，建立了9个不同商品地升麻HPLC指纹图谱，标定出15个共有指纹峰；2个常用炮制品的HPLC指纹图谱，炒炭升麻具有15个共有特征峰；蜜炙升麻只具有13个共有特征峰。将炮制品与生品的指纹图谱相比较可知，升麻经炮制前后出峰总数和峰面积不完全相同，说明有效成分发生了变化。
8011
表51号样品各峰的保留时间及其与10号样品
共有峰数的比较
Tab．5The relative retention time of sample1and num-bers of common peaks comparison between sam-
ples1and10
峰号
保留时间/min 样品1样品10
15．7055．178 26．403-38．2337．866 410．9510．857 514．087-617．505-720．916-821．73-922．191-1022．976-1123．48-1223．851-1324．173-1426．103-
峰号
保留时间/min
样品1样品10 1531．091-
1632．7-
1733．694-
1834．385-
1935．524-
2037．455-
2137．73337．631
2238．565-
2339．3339．204
2440．21640．159
2547．834-
2648．203-
2756．167-
2861．901-符合指纹
图谱共有
峰数/个
156
注：1号样品中保留时间为22．976min的峰为异阿魏酸峰，是指纹图谱中的参照峰，而10号样品中没有。
3．2实验通过紫外可见分光光度法测定供试品溶液，发现在316nm处有较大吸收，所以选择316nm 为检测波长。
3．3根据建立的指纹谱图，1 9批升麻药材的指纹图谱中15个共有峰相对保留时间符合程度较好，共有峰占总峰面积的90%以上；但各个峰的相对峰面积存在一定差异，说明不同来源的1 9批升麻药材质量是有差别的。
3．4从表2可知，各样品的非共有峰数差异较大，说明不同来源的升麻所含有的成分存在差别，这可能与药材生长的地理位置、环境、气候、采收季节和时间等因素有关。
3．5将北京和上海两地的生、炮制品进行比较：包括共有峰在内，蜜炙升麻中部分化学成分显著增加，异阿魏酸的峰面积有所减小；炒炭升麻中异阿魏酸的峰面积增加，而其他成分的峰面积显著减小甚至消失。说明炮制前后升麻所含的化学成分发生改变，可以从图谱中看出。
3．6由广东商品地购买的升麻药材为菊科植物麻花头的根，主产于广东、福建等地，在当地习惯作升麻使用。其特征峰的数量以及所占的比例均小。本实验建立升麻的指纹图谱，而广东升麻与升麻不属于同种药材，所以在数据统计时未加入有关广东升麻（10号样品）的数据。根据实验建立的指纹图谱中特征峰种类和数目、共有峰相对保留时间差异等可对升麻进行定性鉴别、对同名不同物的药材加以区别。实验建立的指纹图谱可作为控制升麻及其炮制品内在质量的标准之一。
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经方 芍药甘草汤
经方芍药甘草汤 糖尿病的老Z高兴地告诉我，他烦人的夜间小腿抽筋消失了，方子很简单，就是芍药甘草汤：白芍药50克、生甘草5克。他说当天晚上服药后，这么近月来再没有发过。他连连说：这方真是神了！芍药甘草汤治疗脚抽筋是张仲景的经验。《伤寒论》上就说芍药甘草汤治疗“脚挛急”，而且起效快，说服药后“其脚即伸”。后世沿用，屡有验证。所以《朱氏集验方》竟改芍药甘草汤方名为“去杖汤”！ 脚抽筋是俗称，医学术语为腓肠肌痉挛。这不仅仅是局部的病变，往往也是全身性疾病的局部表现。我曾发现一些肝病患者可以出现严重的脚抽筋，用芍药甘草汤及其加味方后，脚抽筋好转，肝病也得到控制。此外，有些糖尿病、支气管哮喘、坐骨神经痛、腰椎间盘突出、肾结石急性发作、肺动脉高压、高粘血症等患者，也有类似情况。患者不仅有脚抽筋，还有下肢发凉、走路疼痛、局部皮肤发暗浮肿、脚底开裂等。临床上也将脚抽筋及其附带下肢的症状作为使用芍药的一个指证。芍药甘草汤治疗脚挛急，其实也不仅是下肢肌肉的拘急痉挛，患者的腹肌也会表现的紧张。用手按压腹部，常常感到肌肉发硬。日本古方家吉益东洞的经验是：“腹皮挛急按之不弛”。即腹直肌挛急，或腹壁虽弛缓，腹
底肌肉却呈拘急之状。如《建殊录》记载：“云州医生祝求马，年可二十，一日，忽苦跟痛如锥刺，如刀刮，不可触近，众医莫能处方者。有一疡医，一位当有脓，刀辟之，亦无效矣。于是迎先生，诊之，腹皮挛急，按之不弛，为芍药甘草汤饮之，一服，痛即已”。腹皮挛急，是指腹肌比较紧张。而腹肌的紧张，也往往提示其他肌肉也容易紧张甚至痉挛。含有芍药甘草汤的小建中汤，就专治腹中痛，《苏沈良方》说此方“治腹痛如神”。这种腹痛有何特点？仲景说的“腹时痛”“急痛”，也就是那种痉挛性的腹痛。所以，许多不明原因的脐腹部的腹痛，就可以用芍药甘草汤或小建中汤。我治疗过敏性紫癜，常常用小建中汤，原因就是患者常有腹痛，而且是痉挛性腹痛。芍药甘草汤原方的用量是芍药甘草各四两，后世医家则常根据临床调整比例，如《朱氏集验方》调整为6:1，《伤寒论方解》调整为5:2至2:1，我常用3:1或6:1，老Z有糖尿病，顾虑甜食，所以甘草仅用5克，居然也有效。芍药甘草汤方小，但效果非常好，当然，前提是方证相应。可惜的是，此方在医院处方中已经很少见到了，原因就是方小。真是当今怪事！ 当她走进诊室的时候，我差点没有认出她来。她脸色红润，丰满的脸庞上洋溢着喜悦，与一年半前相比判若两人。她，71岁，名x小妹，是个典型的农村妇女。2010年4月，因为肝硬化反复呕血、贫血来门诊。我根据她消瘦、大便干
中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)
中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)
关于印发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的通知 国药管注[2000]348号 2 年 8 月 1 5 日 发 布 各省、自治区、直辖市药品监督管理局：为加强中药注射剂质量管理，我局在《关于加强中药注册管理有关事宜的通知》(国药管注［2000］157号) 中要求“中药注射剂应固定药材产地，建立药材和制
剂的指纹图谱标准，具体要求另行发布”。据此，我局在组织专家论证的基础上制定了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，现予发布，并就有关事宜通知如下：一、新的中药注射剂指纹图谱标准复核，临床试验用药品，其药材和制剂的指纹图谱标准由省级药品检验所复核；生产用药品，其制剂的指纹图谱标准由中国药品生物制品检定所进行二次复核。二、已批准生产的中药注射剂，其质量标准若缺乏内在质量控制指标和无严格工艺条件，应提高和完善并起草试行标准，在此基础上制订药材和制剂的指纹图谱标准，试行标准起草管理要求同《中药仿制药品试行标准管理规定》，此项工作由国家药典委员会组织实施。三、已批准多家生产的中药注射剂，各生产厂家可根据实际情况单独或联合起草药材和制剂的指纹图谱。联合起草工作由国家药典委员会牵头组织进行。四、已批准生产的中药注射剂，其药材和制剂的指纹图谱标准复核由省级药品检验所进行，需二次复核的品种由国家药典委员会组织完成。五、制定指纹图谱所需的对照品(单一化合物或提取物)，由生产单位向中国药品生物制品检定所提供对照品原料及有关技术资料，经标
定合格后统一发放。附件：《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》国家药品监督管理局二○○○年八月十五日中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）为了加强中药注射剂的质量管理，确保中药注射剂的质量稳定、可控，中药注射剂在固定中药材品种、产地和采收期的前提下，需制定中药材、有效部位或中间体、注射剂的指纹图谱。一、注射剂用中药材指纹图谱研究的技术要求中药材指纹图谱系指中药材经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。如原药材需经过特殊炮制（如醋制、酒制、炒炭等），则应制定原药材和炮制品指纹图谱的检测标准。(一)指纹图谱的检测标准包括名称、汉语拼音、拉丁名、来源、供试品和参照物的制备、检测方法、指纹图谱及技术参数。有关项目的技术要求如下： 1.名称、汉语拼音按中药命名原则制定。 2.来源 包括原植、动物的科名、中文名、拉丁学名、药用部位、产地、采收季节、产地加工、炮制方法等，矿物药包括矿物的类、族、矿石名或岩石名、主要成分、产地、产地加工、炮制方法等。动、植物药材均应固
经方芍药甘草汤有神效
经方芍药甘草汤有神效 13、芍药甘草附子汤方闲品落花13、芍药甘草附子汤方。13、芍药甘草附子汤方方剂组成：芍药三两甘草三两（炙）附子一枚（炮去皮，破八片）右三味，以水五升，煮取一升五合，去滓，分温三服。原文指征：发汗，病不解，反恶寒者，以虚故也。芍药甘草附子汤主之。 芍药甘草汤堪称治痛第一方海洋暖流芍药甘草汤堪称治痛第一方芍药甘草汤堪称治痛第一方芍药甘草汤堪称治痛第一方2010年12月30日星期四 18:10.无论人体上下内外诸般痛症，均可用此方为主，随证加味。头痛加川芎、白芷；项背痛加葛根；上肢痛加羌活、桂枝、桑枝；腰腿痛加桑寄生、杜仲、续断、当归、鸡血藤；气虚合补中益气汤方；血虚合四物汤方；阳虚合附子汤； 芍药甘草汤治愈打嗝一例lc1231芍药甘草汤治愈打嗝一例最近我的一个朋友，男，四十二岁，身体壮实，着凉后得了打嗝症，七八天了，老是不停的打嗝，用了很多的方法不见效，才找我开了两味药，吃了不大一会就好了，就是中药芍药甘草汤，白芍40克。 芍药甘草汤之用往赢芍药甘草汤之用。同学袁某.久患下肢静脉曲张.多方治疗.曾打过一针一千多号称包治的针也毫无作用.后来为减轻其痛苦和恐惧曾给用过芍药.甘草各一百克.加水煮开喝三天.用过 四帖效果显着.邻居张某.骑车路上手臂摔伤未伤骨头.几个月来上 肢一直酸痛难受.睡眠会酸痛得醒过来.芍药.甘草各30克.制附片10克.5帖.愈.邻居陆某.因家务事与嫂子闹矛盾争吵.引起胃部疼痛难
受不堪.芍药.甘草各30克.制附片10克.1帖.第一次喝药后即明显 缓解.第二天再用一帖药减制附片.愈. 芍药甘草附子汤雨后观山静...芍药甘草附子汤芍药甘草附子汤 【来源】《伤寒论》。【组成】芍药甘草(炙)各9克附子3克(炮， 去皮，破八片) 【用法】上三味，用水1升，煮取300毫升，去滓，分温三服。【主治】体虚外感，发汗后病不解，反增恶寒者。【类别】名方。 便秘验方在水一方2便秘验方便秘验方。白芍30 生甘草20 枳实15适用老年、久病体弱在内的老年患者，但孕妇慎用。经用20多例，效优此为芍药甘草汤之加味方，当然有效。芍药甘草汤治疗胃脘痛，甘草与芍药之比：3/2！此量不足为奇。 芍药甘草附子汤传播中医书馆...芍药甘草附子汤芍药甘草附子汤(方组、临证参考用量)芍药9g 炙甘草9g 制附子9g 上3味，以水1000ml，煮取300ml，去滓，分3次温服。(功效)扶阳益阴，阴阳两调。(临证加减) l．本方芍药、附子、甘草、再加桂枝、大枣治汗 后亡阳。6．本方加大黄，治寒腹中拘急，恶寒甚，腰脚挛痛，睾丸胀痛，二便不利者，名芍药甘草附子大黄汤。 芍药甘草汤治疗跌打损伤诗仙之家芍药甘草汤治疗跌打损伤白芍30，赤芍30，炙甘草20，怀牛膝15 木瓜10（单位：克）。 芍药甘草加减治疗shanlieng芍药甘草加减治疗。 芍药甘草汤治肛裂刀客的棍芍药甘草汤治肛裂急性肛裂：表现为大 便干燥，每次便后均感肛门剧痛及有少量鲜血。白芍50克，甘草12克，水煎服。也可加火麻仁24克以增强润便作用。
中药液相色谱指纹图谱实验研究过程中的注意事项
中药液相色谱指纹图谱实验研究过程中的注意事项 （材料整理） 一、供试品收集 供试品收集是研究指纹图谱最初也是最关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有样本进行试验，而且生长环境条件对药材代谢产物有影响，所以要收集有代表性的供试品。收集不少于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。 (一) 原料药材：在药材的化学成分与中医临床疗效的之间的关联尚未能阐明的现阶段，基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况，研究其指纹图谱是以此作为选择原药材投料或混批提取的依据，同时作为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础。由于自然条件的变化，药材个体之间指纹图谱的差异是正常的，在品种鉴定无误的基础上，力争药材有较为固定和稳定的来源，个体之间的指纹图谱主要特征大致相似即可，使成品指纹图谱特征的稳定有起码的保证。 药材名称 供试品来源（真实记录供试品来自何处：传统产地收集或是资源丰富的产地收集，或者来自GAP基地供应；还是产地购买、市场购买或委托购买，等，以便于生产原料的采购选择和测试数据的可追溯）。 收集时间（购买时间）及收集人 货源情况调查（货源是否充足和稳定） 基原鉴定及鉴定人：产地或GAP基地收集的药材结合植物形态鉴定品种。如缺原植物，由熟练的专业人员凭性状或显微特征鉴别。如近缘品种、难以区分的野生品种（如白花蛇舌草、蒲公英），应在指纹图谱研究中仔细比较，如获得的指纹图谱相似度很高，也可应用，但须明确记录。并在今后实施GAP时确定一个品种，如指纹图谱相似度很低，则须确定品种，改为栽培品使用。商品混乱的品种（如陈皮）产区的选择应缩小范围，并结合资源选用药典收载品种中的一种。复方制剂中的君药及处方量大的药材必需重点注意品种的鉴定，以避免今后执行指纹图谱过程中出现难以预料的困难。 质量评估：为了便于对色谱的正确分析，减少试验结果的判断误差，首先药材需符合药典或部颁标准规定，并详细记录。所有药材均须编号，必要时附药材外形照片。 如以中药饮片或炮制品为起始原料，应采用符合中国药典或饮片炮制规范的供试品。
中药注射剂指纹图谱研究的技术要求
中药注射剂指纹图谱研究的技术要求 (草案) 为了加强中药注射剂的质量管理，确保中药注射剂的质量稳定、可控，中药注射剂在固定中药材品种、产地和采收期的前提下。需制定中药材、有效部位或中间体、注射剂的指纹图谱。 一、注射剂用中药材指纹图谱研究的技术要求 中药材指纹图谱系指中药材经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。如原药材需经过特殊炮制(如醋制、酒制、炒炭等)，则应制定原药材和炮制品指纹图谱的检测标准。 (一)指纹图谱的检测标准 包括名称、汉语拼音、拉丁名、来源、供试品和参照物的制备、检测方法、指纹图谱及技术参数。有关项目的技术要求如下： 1.名称、汉语拼音 按中药命名原则制定。 2.来源 包括原植、动物的科名、中文名、拉丁学名、药用部位、产地、采收季节、产地加工、炮制方法等，矿物药包括矿物的类、族、矿石名或岩石名、主要成分、产地、产地加工、炮制方法等。动、植物药材均应固定品种、药用部位、产地、采收期、产地加工和炮制方法，矿物药应固定产地和炮制、加工方法。供试品的取样参照《中国药典》2000年版中规定的中药材的取样方法，以保证供试品的代表性和均一性。 3．供试品的制备 应根据中药材中所令化学成分的理化性质和检测方法的需要，选择适宜的方法进行制备。制备方法必须确保该中药材的主要化学成分在指纹图谱中的体现。对于仅提取其中某类或数类成分的中药材，除按化学成分的性质提取各类成分制定指纹图谱外，还需按注射剂制备工艺制备供试品，制定指纹图谱，用以分析中药材与注射剂指纹图谱的相关性。
4．参照物的制备 制定指纹图谱必须设立参照物，应根据供试品中所合成分的性质，选择适宜的对照品作为参照物，如果没有适宜的对照品，可选择适宜的内标物作为参照物。参照物的制备应根据检测方法的需要，选择适宜的方法进行。 5．测定方法 包括测定方法、仪器、试剂、测定条件等。应根据中药材所合化学成分的理化性质，选择适宜的测定方法。建议优先考虑色谱方法。对于成分复杂的中药材，必要时可以考虑采用多种测定方法，建立多张指纹图谱。以色谱方法制定指纹图谱所采用的色谱柱、薄层板、试剂、测定条件等必须固定；以光谱方法制定指纹图谱，相应的测定条件也必须固定。 6．指纹图谱及技术参数 (1)指纹图谱 根据供试品的检测结果，建立指纹图谱。采用高效液相色谱法和气相色谱法制定指纹图谱，其指纹图谱的记录时间一般为l小时；采用薄层扫描法制定指纹图谱，必须提供从原点至溶剂前沿的图谱；采用光谱方法制定指纹图谱，必须按各种光谱的相应规定提供全谱。对于化学成分类型复杂品种，必要时可建立多张指纹图谱。 指纹图谱的建立：根据10批次以上供试品的检测结果所给出的相关参数，制定指纹图谱。 (2)共有指纹峰的标定 采用色谱方法制定指纹图谱，必须根据参照物的保留时间，计算指纹峰的相对保留时间。根据10批次以上供试品的检测结果，标定中药材的共有指纹峰。色谱法采用相对保留时间标定指纹峰，光谱法采用波长或波数标定指纹峰。 (3)共有指纹峰面积的比值 以对照品作为参照物的指纹图谱，以参照物峰面积作为1，计算各共有指纹峰面积与参照物峰面积的比值；以内标物作为参照物的指纹图谱，则以共有指纹峰中其中一个峰(要求峰面积相对较大、较稳定的共有峰)的峰面积作为1，计算其它各共有指纹峰面积的比值。各共有指纹峰的面积比值必须相对固定。中药材的供试品图谱中各共有峰面积的比值与指纹图谱各共有峰面积的比值比较，单峰面积占总峰面积大于或等于20％的共有峰，其差值不得大于土20％；单峰面积占总峰面积大于或等于10％，而小于20％的共有峰，其差值不得大于土25％；单峰
专题10 中药指纹图谱的研究现状与进展
中药指纹图谱的研究现状与进展 一、中药指纹图谱的含意 中药指纹图谱借用了法医学中的指纹鉴定的概念，通常是指借助于现代分析及检测技术来表达中药（主要是次生代谢产物）化学信息特征的指纹图谱，包括含中药材（原料药材）指纹图谱；中药原料药（包括饮片、配伍颗粒）指纹图谱和中药制剂指纹图谱。中药指纹图谱是组分群体的特征图谱，能全面反映中药所含化学成份的种类与数量，进而反映中药材及产品的质量。它是一种十分可行的质量控制模式，运用整体性与模糊性的基本属性，即物种特征的唯一性和同种个体间的相似性，为中药材和中成药提供综合的、宏观的和可量化的质量评价，可使中药质量评价过程更加科学化、标准化。 二、中药指纹图谱的属性 中药指纹图谱是以各种分析技术为依托的质量控制模式，通过特定条件下完整图谱的整体信息来鉴别真伪，同时，在定量操作的前提下，用所得到的量的信息来估量被测样品的量的差别。 中药指纹图谱有两个基木属性：整体性和模糊性。所谓整体性，是指要把所得指纹图谱作为一个整体进行评价，而不是孤立地看其中单一峰的有无、高低来判断药材或成药质量；而模糊性是指个体样品本身就存在着差异，难以精确地进行测量，绝大多数的指纹图谱本身就存在模糊性，不能保证所得的指纹图谱中每个峰都没有重叠，而且也不能保证所得的图谱包含了样品的所有特征，只要能固定图谱中关键部分就可对样品进行质量控制。 三、中药指纹图谱的起源、发展与构建 中药指纹图谱按测定手段可分为中药化学(成分)指纹图谱和中药生物指纹图谱。最先发展起来的，目前最主要和常用的是中药化学指纹图谱。中药化学指纹图谱首推色谱方法和联用技术。光谱最常用的是红外光谱(IR)，色谱最常用的是薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)和毛细管电泳(CE)，近来又出现了X-射线粉末衍射指纹图谱。现代指纹鉴定始于19世纪末的犯罪学和法医学。每个人的指纹在微小的细节构造上各有不同，可以以此鉴别每个人的特征。指纹图谱技术应用于植物药质量控制，是从20世纪70年代色谱技术的发展开始的。人们大量采用薄层色谱(TLC)方法，将植物中化学成分展载于由各种担体铺成的薄层板上，根据薄层板上的斑点的位置、大小、颜色、数目进行定性鉴别，这种薄层鉴别方法具备了指纹图谱的特征。20世纪70年代及80年代，出现了薄层扫描仪，日本和我国部分学者用薄层扫描仪得到复方成药扫描图作为色谱指纹图谱，尝试应用于药材及成药的分析。20世纪80年代及90年代，高效液相色谱技术得到发展，同时植物药中化学成分的分离鉴定，活性成分的不断阐明，高效液相色谱广泛应用于中药的定性、定量分析。随着HPLC—MS和GC—MS等联用技术的应用，中药指纹图谱技术更趋完善。中药指纹图谱的发展概要见图1。 构建指纹图谱的步骤通常包括:样品采集、方法建立、数据分析、样品评价和方法检验。样品采集是指采集足够多反映样品质量的标本；方法建立是指选取适当的方法建立指纹图谱并进行考察；数据分析是对所得数据进行处理找出共性与异点，确定评价指标；样品评价是指按所确定指标对样品进行质量评价找出孰优孰劣；方法检验是指在方法确立后的一段长时间内对更多未知样品进行检测，进一步考察方法的可行性。指纹图谱的构建与评价流程见图2。
DNA指纹图谱分析
DNA指纹图谱法的基本操作：从生物样品中提取DNA（DNA一般都有部分的降解），可运用PCR 技术扩增出高可变位点（如VNTR系统，串联重复的小卫星DNA等）或者完整的基因组DNA，然后将扩增出的DNA酶切成DNA片断，经琼脂糖凝胶电泳，按分子量大小分离后，转移至尼龙滤膜上，然后将已标记的小卫星DNA探针与膜上具有互补碱基序列的DNA片段杂交，用放射自显影便可获得DNA指纹图谱。 琼脂糖凝胶电泳是分离，鉴定和纯化DNA片段的常规方法。利用低浓度的荧光嵌入染料-溴化乙锭进行染色，可确定DNA在凝胶中的位置。如有必要，还可以从凝胶中回收DNA条带，用于各种克隆操作。琼脂糖凝胶的分辨能力要比聚丙烯酰胺凝胶低，但其分离范围较广。用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为200bp至近50kbp的DNA。长度100kb或更大的DNA，可以通过电场方向呈周期性变化的脉冲电场凝胶电泳进行分离。在基因工程的常规操作中，琼脂糖凝胶电泳应用最为广泛。它通常采用水平电泳装置，在强度和方向恒定的电场下进行电泳。DNA分子在凝胶缓冲液（一般为碱性）中带负电荷，在电场中由负极向正极迁移。DNA分子迁移的速率受分子大小，构象。电场强度和方向，碱基组成，温度和嵌入染料等因素的影响。 三. 实验材料和试剂 1. DNA样品 2.化学试剂和溶液 （1）DNA样品反应缓冲液：100mM Tris，200mM NaCl，20mM MgCl2，2mM DTT，pH 8.0 （2）EcoRⅠ限制性内切酶 （3）PstⅠ限制性内切酶
（4）电泳缓冲液（50×TAE） Tris 242g 冰醋酸57.1ml EDTA（0.5mol/L pH 8.0）100ml 使用时用蒸馏水稀释50倍。 （5）样品缓冲液（DNA sample loading dye） 0.25%溴酚蓝 0.25%二甲苯青 40%（W/V）蔗糖 （6）溴化乙锭（EB）10mg/ml （7）琼脂糖agarose（电泳级） （8）DNA分子量标记物：Lambda HindⅢDNA markers 3. 仪器设备和消耗品 电泳仪、电泳槽、样品梳、微波炉、水浴锅、移液器（10μl，200μl，1000μl）、离心管、一次性枪头（200μl，1000μl）。 四. 实验步骤 1. DNA样品的制备 采集生物检测样本，在弱碱和螯合剂存在条件下进行组织匀浆，溶解细胞或细胞核膜；利用阴离子去垢剂和蛋白酶，在37孵化数小时，消化蛋白质分离DNA；使用有机溶剂如苯酚、氯仿等除去残余蛋白质，萃取DNA；用乙醇或某些盐类从溶液中沉淀DNA。
中药注射剂指纹图谱实验研究技术指南
说明：本实验研究规程指南为在原技术要求的基础上规范中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制订。本指南未能概括的内容，通过实践可自行补充调整，但申报资料或复核资料中须有相应的说明和申述。指南中的"色谱指纹图谱"指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱。光谱指纹图谱将另行规定。 一、供试品收集 供试品收集是研究指纹图谱最初也是最关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有样本进行试验，而且生长环境条件对药材代谢产物有影响，所以要收集有代表性的供试品。收集不少于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。 (一) 原料药材：在药材的化学成分与中医临床疗效的之间的关联尚未能阐明的现阶段，基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况，研究其指纹图谱是以此作为选择原药材投料或混批提取的依据，同时作为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础。由于自然条件的变化，药材个体之间指纹图谱的差异是正常的，在品种鉴定无误的基础上，力争药材有较为固定和稳定的来源，个体之间的指纹图谱主要特征大致相似即可，使成品指纹图谱特征的稳定有起码的保证。 药材的"批" 不是工业生产的"批"，是指相互独立的供试品，即不能将同一地点或同一渠道同一时间获得的供试品分成若干份供试品，以保证试验结果的代表性。由于收集药材供试品受主观和客观的条件限制，供试验的供试品严格讲均没有统计学的意义，所以供试品数越多越好，10批是最低的要求。供试品应保证其真实性，应有完整采样原始记录，内容包括： ?药材名称 ?供试品来源（真实记录供试品来自何处：传统产地收集或是资源丰富的产地收集，或者来自GAP基地供应；还是产地购买、市场购买或委托购买，等，以便于生产原料的采购选择和测试数据的可追溯）。 ?收集时间（购买时间）及收集人 ?货源情况调查（货源是否充足和稳定） ?基原鉴定及鉴定人：产地或GAP基地收集的药材结合植物形态鉴定品种。 如缺原植物，由熟练的专业人员凭性状或显微特征鉴别。如近缘品种、难以区分的野生品种（如白花蛇舌草、蒲公英），应在指纹图谱研究中仔细比较，如获得的指纹图谱相似度很高，也可应用，但须明确记录。并在今后实施GAP时确定一个品种，如指纹图谱相似度很低，则须确定品种，改为栽培品使用。商品混乱的品种（如陈皮）产区的选择应缩小范围，并结合资源选用药典收载品种中的一种。复方制剂中的君药及处方量大的药材必需重点注意品种的鉴定，以避免今后执行指纹图谱过程中出现难以预料的困难。
芍药甘草汤
芍药甘草汤 作者：王付发布时间：2012-02-20 新闻来源：浏览次数：3894 【方药歌诀】芍药甘草能舒筋，筋脉疼痛或挛急， 酸甘养阴能益肝，胃阴不足更相宜。 【学用导读】运用芍药甘草汤，一要重视因病证变化而调整方药用量，二 要重视随证加味用药。 【中医辨证】气血不足筋急证：筋脉拘急，肌肉疼痛或跳动，筋脉或关节屈伸不利，或关节活动疼痛，两目干涩，手足心热，或倦怠乏力，舌红，脉细弱。 用方思路：正确使用芍药甘草汤，以主治气血不足筋急证为基础方，以主治胃气阴虚证（胃脘隐痛，或挛急疼痛，口干舌燥，大便干结，小便短少，饮食不佳，纳谷无味，舌红，少苔，脉细或弦细）为临床扩大应用。 病变证机：气血亏虚，经筋脉络挛急，以此而演变为气血不足筋急病理病证。 审证要点：根据筋脉拘急，或肌肉疼痛，或胃脘隐痛，舌质红，苔薄，脉细 为用方审证要点。 【西医辨病】萎缩性胃炎，胃及十二指肠溃疡，胃扭转，胃痉挛，慢性肝炎，过敏性肠炎，肠粘连，急性水肿性胰腺炎，胆石症等。 【衷中参西】合理运用芍药甘草汤指导中医辨证与西医辨病，无论是治疗消化疾病，还是治疗血管及神经疾病等，都必须符合芍药甘草汤主治病变证机与审证要点，以此才能取得治疗效果。临证选用芍药甘草汤治疗西医疾病还可用于： 1、运动、神经疾病：不宁腿综合征，腓肠肌痉挛，颜面抽搐痉挛，脑中风 后肢体痉挛，先天性或萎缩性肌强直等。 2、血管及血液疾病：血栓闭塞性脉管炎，血管平滑肌痉挛，血小板减少性 或过敏性紫癜等。 3、呼吸疾病：支气管炎，支气管哮喘等。 4、泌尿疾病：特发性肾出血，慢性肾盂肾炎等。 5、骨伤疾病：关节损伤，骨质增生，骨头炎，腰扭伤等。 6、妇科疾病：急性乳腺炎，慢性盆腔炎，急性附件炎等。 7、其他疾病：荨麻疹，类风湿性关节炎，高睾酮血症，高泌乳素血症性阳 痿等。 【中医治法】益气养血舒筋。 【方药西用】具有对胃酸分泌呈双向调节、抑制胃排空、抑制肠管收缩、解痉、镇痛、降低血中睾酮浓度、改善排卵状态、抗炎、保护肠胃黏膜组胺水平、 抑制子宫平滑肌细胞中PGE 2、PGF 2a 及6-ketoPGF 1a 的生成释放、抗肿瘤等作用。 【处方用药】芍药四两（12ｇ）甘草炙，四两（12ｇ）随证加减用药：若阴虚者，加麦冬、石斛，以滋补阴津；若脘腹疼痛者，加石斛、延胡索、川楝子，以益阴行气活血；若大便干者，加生地、玄参，以滋阴 通便等。 【煎服方法】上二味，以水三升，煮取一升五合，去滓，分温再服。 【方证研究】气血虚不能滋养筋脉，则筋脉拘急，或肌肉疼痛，或跳动，筋脉或关节屈伸不利，或关节活动疼痛；气血虚不能上荣，则两目干涩；阴虚生热，则手足心热；舌红，脉细均为气血虚之征。其治当益气养血舒筋。 方中芍药补血益营，养阴柔筋。甘草益气和中，缓急舒筋。方药酸甘化阴而养血，柔筋缓急而舒筋，善治筋脉拘急挛紧。 【使用禁忌】湿热肆虐证，慎用本方。
中药指纹图谱建立的原则和步骤
（一）建立指纹图谱的一般原则 中药指纹图谱的建立，应以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体现系统性、特征性和稳定性三个基本原则。唯此，才能保证指纹图谱的标准化、规范化、客观化，从而便于推广和应用。 1.系统性是指指纹图谱中反映的化学成分应包括该中药有效部位所含大部分成分，或指标性成分的全部，如中药两头尖中抗肿瘤的有效成分为皂苷类化合物，则其指纹图谱应尽可能地反映其中的皂苷类成分；银杏叶的有效成分是黄酮类和银杏内酯类，则其指纹图谱可采用两种方法，针对这两类成分分别分析，达到系统全面的目的。 2.特征性是指指纹图谱中反映的化学信息（如保留时间）应具有较强的选择性，这些信息的综合结果，将能特征性地区分中药的真伪与优劣，成为中药自身的“化学条码”。如北五味子的HPLC指纹图谱和TLC指纹图谱，不仅包括多种的五味子木脂素类成分，而且具有许多未知类成分，这些成分的峰位顺序、比值在一定范围内是固定的，并且随药材品种不同而产生差异，依此可以很好地区别其来源、产地，判别药材的真伪优劣。 3.稳定性是指所建立的指纹图谱在规定的方法、条件下的耐用程度，即不同操作者、不同实验室所重复做出的指纹图谱应在所允许的误差范围内，以体现其通用性和实用性。因而要求包括样品制备、分析方法、实验过程、数据采集、处理、分析等全过程都要规范化操
作，同时，还应建立相应的评价机构，对其进行客观评价。 （二）建立指纹图谱的一般步骤 1.方案设计与思路 （1）研究对象的确定 在调研有关文献、新药申报资料(质量部分和工艺部分)及其它研究结果的基础上，尽可能的详尽地了解药材、中间体及成品中所含成分的种类及其理化性质，综合分析后找出成品中的药效成分或有效成分，作为成品和中间体指纹图谱的研究对象，即分析检测目标。 例如，黄芪含黄酮、皂苷及多糖三类有效组分，黄芪多糖注射液及其中间体的指纹图谱则以多糖为研究对象，黄芪原药材的指纹图谱应把黄酮、皂苷及多糖作为研究对象。 复方注射剂应根据君臣佐使的原则，以君药、臣药中的有效成分作为指纹图谱的研究对象，佐使药中的成分可采用其它指纹图谱方法进行辅助、补充研究。 （2）研究方法的选择 研究方法应根据研究对象的物理化学性质来选择。大多数化合物可采用HPLC。例如黄芪中黄酮、皂苷、多糖等。挥发性成分应采用GC。例如鱼腥草中的鱼腥草素、土木香中的土木香内酯、异土木香内酯和二氢土木香内酯等。某些有机酸经甲酯化后亦可用GC分析。采用上述方法难以分离检测的成分，可考虑使用TLC和CE。
中药指纹图谱和特征图谱的区别以及各自的意义
中药指纹图谱和特征图谱的区别是什么?各有什么意义? 区别:中药材或中成药经过适当处理后 , 利用现代信息采集技术和质量分析手段得到的能够显现中药材或中成药性质的图像、图形、光谱的图谱及其数据 , 称为中药指纹图谱。它可以较全面地反映中药所含化学成分的种类与数量 , 进而反映中药的质量和中医用药所体现的整体疗效 ; 现阶段中药的有效成分大多尚未明确 , 中药指纹图谱的整体性和模糊性正好符合中药质控的要求 , 较之单一成分或指标成分的质控方法 , 更具有科学性和全面性;中药特征图谱是指中药材经过适当的处理后 , 采用一定的分析手段和仪器检测得到 , 能够标识其中各种组分群体特征的共有峰的图谱。它是一种综合的、可量化的鉴别手段 , 可用于鉴别中药材的真伪 , 评价中药材质量的均一性和稳定性。中药特征图谱可分为化学 (成分特征图谱和生物特征图谱。 意义:中药材多为植物的干燥器官 , 由于复杂的自然环境、社会状况以及我国历史上科技发展不平衡等多种原因 , 造成了中药材在应用方面的复杂性。同一名称的中药材可能来自不同基源的植物。同一基源的中药材由于产地不同、采收季节和生长年限不同而存在差别。一些中药材 , 特别是名贵药材 , 常可见到伪品与正品相混淆。由于以上因素的存在 , 使得不同来源的同种中药材其化学组成有可能相同 , 也有可能不同 , 这就必然影响到中医的临床疗效和中药的实验研究 , 并影响以其为原料生产出的中成药的化学组成 , 从而影响其质量和疗效。此外 , 我国中成药品种繁多 , 中成药生产过程中各工艺环节的稳定性等多种因素对产品的化学组成也具有重要的影响。从现有的中药内在质量控制现状来看 , 还存在很多问题需逐步解决。其中 , 最突出的问题之一就是中药整体化学特征的表征。因此建立中药指纹图谱对于更加客观地从整体上评价中药的内在质量具有重要意义。同样,建立准确有效的鉴别中药材方法——中药特征图谱,对于我国中药资源丰富 , 但长期以来 , 缺乏系统的整理和归类 , 导致中药商品混乱 , 中药材同名异物、同物异名的现象屡有发生 , 甚至出现有以假充真 , 以次充好的情况具有重要意义。
黄连中生物碱成分及药理作用研究进展
黄连中生物碱成分及药理作用研究进展 发表时间：2016-05-25T09:19:25.937Z 来源：《医师在线》2016年1月第2期作者：王双燕石宝堂[导读] 生物碱是含负氧化态氮原子，存在生物有机体中的环状化合物，常表现出较强的生物活性[1]。 （ 1云南经济管理学院云南 650106 2昆明医科大学海源学院云南 650106） 【摘要】黄连中生物碱主要包括黄连碱、巴马汀、表小檗碱、药根碱，具有抗菌、抗炎、降血脂、降血糖、减肥、抗焦虑、抗肿瘤、保护胃黏膜等多种药理学作用，在心脑血管病、痴呆、糖尿病、感染性疾病的治疗，具有广阔的发展潜力。【关键词】黄连；生物碱；药理作用；研究进展 生物碱是含负氧化态氮原子，存在生物有机体中的环状化合物，常表现出较强的生物活性[1]。黄连是常用中药材，属毛莨科黄连属，始载于《神农百草经》，其根茎呈连珠状且色黄而被称为“黄连”，有清热燥湿、泻火解毒功效[2]。中药药理学研究是当前药学研究的热点领域，本文对黄连中生物碱成分及药理作用研究进行概述。 1 黄连中生物碱成分研究进展 小檗碱又称黄连素，被广泛应用于中药制剂，黄连是提取小檗碱的主要药材，目前已开发出多种制剂。黄连素是一种氮杂环化合物，在生物系统中可经氨基酸合成，熔点145℃，小檗碱以季铵型、醛型、醇型三种不同形成存在，其中前者最多。黄连碱主要来源于黄连根茎，是一种常见的异喹啉生物碱，在乙醇溶液中可以浅黄色针状结晶形式存在，其硫酸盐为黄色晶体，不溶于水和乙醇。巴马汀又被称为黄藤素，是黄连中特殊的生物碱，主要存在于黄连根茎部位，熔点198-201℃，易溶于热水，但在有机溶液中不易溶解，经氢化可生产延胡索乙素。药根碱属四氢异喹啉生物碱，组成与黄连素基本相同，熔点208～210℃，碘化物呈红黄色，易溶于水、乙醇，硝酸盐为黄棕色针状晶体，分解温度228～229℃。 2 黄连中生物碱药理作用研究进展 黄连中生物碱含量丰富，具有较好的抗菌作用，为天然的抗菌药物，长期以来被用于感染性疾病治疗；近年来还被用于防治老年痴呆性疾病[3]。随着现代医学的发展，黄连素的药理作用研究越来越深入，为黄连价值开发奠定了基础。 2.1 抗菌作用 黄连中的四种生物碱均有一定的抗菌作用，为一种广谱抗菌药物，研究证实对革兰氏阳性和阴性菌，如伤寒杆菌、肠炎沙门氏杆菌、金葡萄球菌、大肠杆菌、等都有一定的抑制作用。小檗碱最早被用于临床抗感染，其对大肠杆菌、霍乱弧菌具有较强的抑菌活性。体外研究证实其对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、哈氏弧菌也有较高的抑菌活性，但对停乳链球菌几乎无抑制作用[4]。小檗碱对许多致病菌都有不同程度抑制作用，但大多数研究也局限于体外实验阶段，其抑菌作用主要可能通过抑制拓扑异构酶I以及拓扑异构酶Ⅱ活性影响细菌DNA 合成发挥作用。黄连碱具有抑制A型单胺氧化酶作用，对白色念珠菌具有较强的抑菌活性，对白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌有一定的抑菌作用，其与真菌具有很高的亲和力，使其较易进入菌体细胞内，破坏细菌正常生理功能。巴马汀其对金黄色葡萄糖球菌、肺炎克雷伯菌、痢疾杆菌都有一定的抑制作用，已被用于妇科炎症、呼吸道感染、结膜炎的治疗。表小檗碱抑菌作用尚不清楚，可能存在潜在的抗菌作用。药根碱抑菌活性最小，但其抗菌方面研究空间仍较广阔。小檗碱药理研究较多，部分学者试图通过对小檗碱进行结构修饰以提高其抗菌活性，并取得一定成效，研究证实在小檗碱9位去甲基引入酰氧基或苯氧丁基，可增强其抗菌活性。但基团的引入对小檗碱抗菌活性提高不具有普遍性。 2.2 抗糖尿病作用 糖尿病是胰岛β细胞受损或完全破坏而不能正常代谢引起的疾病，血糖升高是糖尿病的主要症状。Hep G2细胞属于肝胚胎瘤细胞株，和人体肝细胞表型十分相似，βTC3细胞属于胰岛素瘤细胞株，具有分泌胰岛素功能。实验发现，小檗碱可促进Hep G2中葡萄糖消耗，且呈现明显的剂量依赖，在5～100μmol/l范围内，小檗碱作用量与细胞葡萄糖消耗量呈正相关，但不会影响细胞功能[5]。小檗碱还可通过降低醛糖还原酶活性改善糖尿病。实验研究证实黄连复合生物碱由于黄连生物碱的相互协同作用，可增进降糖效果，小檗碱降糖活性次之，黄连碱再次之，巴马汀最差。药物可能通过蛋白质磷酸化及其级联信号传导等多个靶位点，调控信号传导，触发胰岛素抵抗，进而降低血糖。 2.3 抗肿瘤作用 恶性肿瘤已成为死亡三大因素之一。研究发现，药根碱对黑色素瘤新生血管具有明显的抑制作用[6]。此外，含有小檗碱的黄连药材可作为食道癌治疗的药物之一。一项体外研究证实，小檗碱非毒性剂量可降低人肺癌细胞A549中的MMP-2、uPA水平，调节金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-2）和尿激酶型纤溶酶原激活抑制剂（PAI）抑制肺癌细胞转移。在卷烟中添加黄连生物碱可使患者获益[7]。黄连中生物碱具有抗炎作用，可预防细胞突变。 2.4 抗心血管疾病 药用黄连用于治疗心脑血管病，对抗心力衰竭、抑制心肌炎、改善急性脑供血与供氧不足等疾病。小檗碱可调节心肌缺血、修正心衰，这可能与其作用于心肌周围阻碍血管，减少血液阻力，减轻心脏负荷有关。黄连解毒汤可改善脑部循环。药根碱具有明显的调脂作用，可上调LDLR蛋白表达，促进胆固醇转化为胆汁酸，提高胆汁酸排泄率，降低血胆汁酸含量。巴马汀可明显诱导巨噬细胞释放炎性因子NO，发挥抗炎作用。 3 小结 新药的研发并非一朝一夕之事，黄连中生物碱种类不多，但其药理学作用较复杂，体外研究、动物实验证实具有抗菌、抗炎、降血脂、降血糖、减肥、抗焦虑、抗肿瘤、保护胃黏膜等多种药理学作用，但对于临床研究仍较为肤浅。今后，应积极开展临床研究，结合临床实践研制相关衍生物，寻找更具有开创性、制剂意义的药理作用。 【参考文献】 [1] Manske R H F. The Alkaloids: Chemistry and Physiology, Vols. 1-20, New York, Academic Press, 1950-1979. [2]中华人民共和国卫生部药典委员会中华人民共和国药典[M]，化京:人民卫生出版化化学工业出版化2010, 285. [3]李亚娜，陶庆春.中药抑菌的研究现状及思考[J].国际检验医学杂志，2014， 35(2): 198-200.
芍药甘草汤
芍药甘草汤 要想充分了解芍药甘草汤，就必须先了解下芍药和甘草。从宏观方面讲，芍药和甘草都是植物的一种，而且各自都不一样;不仅外形不一样，所属科种也是不同的。芍药通常说的是一种花，开放的时候异常美丽，但是从另一方面来说芍药还具有一定的药用价值;而甘草则是草本植物的一种，同样也有一定的药用价值。 就是因为芍药和甘草有一定的药用价值，才会把这两种不同的植物放在一起做成了芍药甘草汤，来供一些病患的服用。芍药和甘草单独成药的话能够治疗的病情也是很多的。那么，下面就来详细介绍下芍药甘草汤这种汤药。 芍药的根鲜脆多汁，可供药用。根据分析，芍药根含有芍药甙和安息香酸，用途因种而异。中医认为：中药里的白芍主要是指芍药的根，它具有镇痉、镇痛、通经作用。对妇女的腹痛、胃痉挛、眩晕、痛风、利尿等病症有效。 甘草是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～l00cm，直径0.6～3.5cm。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒，祛痰止咳、脘腹等。 本方主治津液受损，阴血不足，筋脉失濡所致诸证。方中芍药酸寒，养血敛阴，柔肝止痛;甘草甘温，健脾益气，缓急止痛。二药相伍，酸甘化阴，调和肝脾，有柔筋止痛之效。
【组成】芍药12克甘草12克 【用法】上二味，用水600毫升，煮取300毫升，去滓，分温再服。 【功用】调和肝脾，缓急止痛。 【主治】伤寒伤阴，筋脉失濡，腿脚挛急，心烦，微恶寒，肝脾不和，脘腹疼痛。现用于血虚津伤所致的腓肠肌痉挛、肋间神经痛、胃痉挛、胃痛、腹痛、坐骨神经痛、妇科炎性腹痛、痛经;以及十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃肠神经官能症、急性乳腺炎、颈椎综合征等属阴血亏虚，肝脾失调者。 实验研究 解痉、止痛、抗炎作用安徽医学院《急腹症资料》1977：74，本方对病变异常兴奋状态有强力的抑制、镇静作用。其中芍药对疼痛中枢和脊髓性反射弓的兴奋有镇静作用，故能治疗中枢性或末梢性的筋系挛急，以及因挛急而引起的疼痛。芍药、甘草中的成分有镇静、镇痛、解热、抗炎、松弛平滑肌的作用，二药合用后，这些作用确能显着增强。 芍药甘草汤的棘突做法步骤如下： 配方：芍药30克、甘草10克、白糖30克 制作： 1.将甘草、芍药润透切片;放入锅内，加水1000毫升。 2.将锅置中火上，煎煮20分钟，滤去渣，在药汁内加入白糖拌匀即成。 食法：代茶饮用。 功效：温补中阳。
DNA指纹图谱分析实验
DNA指纹图谱分析实验 一. 实验目的 1. 掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程 2. 学习DNA的限制性酶切的基本技术 3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度，并能对实验结果进行分析。 二. 实验原理 1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的人源小卫星DNA 用作基因探针，同人体核DNA的酶切片段杂交，获得了由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹，这种图纹极少有两个人完全相同，故称为"DNA指纹"，意思是它同人的指纹一样是每个人所特有的。DNA指纹的图像在X光胶片中呈一系列条纹，很像商品上的条形码。DNA指纹图谱，开创了检测DNA多态性（生物的不同个体或不同种群在DNA结构上存在着差异）的多种多样的手段，如RFLP（限制性内切酶酶切片段长度多态性）分析、串联重复序列分析、RAPD（随机扩增多态性DNA）分析等等。各种分析方法均以DNA的多态性为基础，产生具有高度个体特异性的DNA指纹图谱，由于DNA指纹图谱具有高度的变异性和稳定的遗传性，且仍按简单的孟德尔方式遗传，成为目前最具吸引力的遗传标记。 DNA指纹具有下述特点：1．高度的特异性：研究表明，两个随机个体具有相同DNA图形的概率仅3×10－11；如果同时用两种探针进行比较，两个个体完全相同的概率小于5×10－19。全世界人口约50亿，即5×109。因此，除非是同卵双生子女，否则几乎不可能有两个人的DNA指纹的图形完全相同。2．稳定的遗传性：DNA是人的遗传物质，其特征是由父母遗传的。分析发现，DNA?指纹图谱中几乎每一条带纹都能在其双亲之一的图谱中找到，这种带纹符合经典的孟德尔遗传规律，即双方的特征平均传递50％给子代。3．体细胞稳定性：即同一个人的不同组织如血液、?肌肉、毛发、精液等产生的DNA指纹图形完全一致。 1985年Jefferys博士首先将DNA指纹技术应用于法医鉴定。1989年该技术获美国国会批准作为正式法庭物证手段。我国警方利用DNA?指纹技术已侦破了数千例疑难案件。DNA 指纹技术具有许多传统法医检查方法不具备的优点，?如它从四年前的精斑、血迹样品中，仍能提取出DNA来作分析；如果用线粒体DNA检查，时间还将延长。此外千年古尸的鉴定，在俄国革命时期被处决沙皇尼古拉的遗骸，以及最近在前南地区的一次意外事故中机毁人亡的已故美国商务部长布朗及其随行人员的遗骸鉴定，都采用了DNA指纹技术。
经方十首3、芍药甘草汤
经方十首3、芍药甘草汤 [组成用法] 白芍20～60g、炙甘草10～30g。水煎服，分二次服。 [方证] 1．四肢骨骼肌表现为“抽筋感”的拘急、痉挛。 2．脏平滑肌紧导致的阵发性、痉挛性疼痛。 [现代应用] 1．以骨骼肌、韧带的痉挛、抽掣样疼痛为特征的疾病。如腓肠肌痉挛，肌肉痛性痉挛综合征、阴道痉挛、强中（阴茎持续勃起不软）、喉痉挛、缩阴症、全身抽搐、中风后遗症的肌肉僵硬、疼痛、麻木、肩周炎、肌强直症，急性腰扭伤，脊椎骨质增生症、外伤性头痛眩晕症、阴茎抽痛。 2．以脏平滑肌绞痛、剧烈痉挛等为特征的疾病。如胆绞痛、肾绞痛、胃痉挛、胃扭转、肠粘连、胃及十二指肠溃疡、
萎缩性胃炎、支气管哮喘、百日咳及顽固性咳嗽、溃疡性结肠炎、晚期肝癌疼痛、痛经。对于子宫收缩导致的先兆流产，本方可缓解子宫痉挛，对避免流产有显效。 3．骨与关节疼痛性疾病。如风湿性关节炎、足跟痛、颈椎综合征、股骨头缺血性坏死、骨质增生症、椎间盘突出症。 4．神经性疼痛。如三叉神经痛、带状疱疹引起的肋间神经痛、糖尿病神经病变所致的疼痛与麻木、坐骨神经痛、牙痛。 5．不自主性、异常兴奋性疾病。如顽固性呃逆、不安腿综合征、小儿睡中磨牙症、颜面肌抽搐、眼睑痉挛、帕金森病、书写震颤症、小舞蹈病、心房颤动、小肠咳（咳而矢气）、小儿夜啼、小儿遗尿症、马钱子中毒。 6．血证。如血小板减少性紫癜、过敏性紫癜、上消化道出血、支气管扩咯血、鼻衄。 7．一些功能衰弱性疾病。如血睾丸酮血症之不育症、不孕症、下肢软弱无力及步行艰难、高泌乳素血症性阳痿、重症肌无力。
8．其他方面。如病毒性肝炎、糖尿病、急性乳腺炎、细菌性痢疾、习惯性便秘、肛裂，乳溢症、冠心病；老人便秘、梅核气、多毛症、激素停用后综合征（如关节疼痛不适）。 [经验参考] 芍药甘草汤治疗疼痛性、痉挛性疾病。骨骼肌的痉挛主要表现在四肢肌肉的抽筋疼痛，且以阵发性、痉挛性、历时短为特征，尤其在负重的下肢更为明显，此即仲景所谓“脚挛急”。下肢疼痛多有行走障碍，比如经方家曹颖甫以此方治疗数例足病不能行走者（《经方实验录》）。尿失禁与膀胱括约肌痉挛有关者，也可用本方治疗。如亦人教授治一少女小便频数失禁，西医诊断为神经性尿频，历用各种固涩方药均无效。氏断为膀胱急迫，用本方舒筋缓急，服药一周即效，二周痊愈（中医药大学学报，1996；1：3）。芍药甘草汤对于血管痉挛性头痛（即血管收缩性头痛）也有使用的机会，但对血管扩性头痛则无效。前者因血管收缩而面色苍白，后者则四血管扩而面色多泛红。 有报道本方对咳喘有较好疗效，如王兆奎治一55岁男性，咳嗽少痰，郁郁微烦一年余，舌尖边红赤少苔，多方治之不