纤维素柱填料的制备及其在超氧化物歧化酶提纯中的应用
纤维素柱填料的制备及其在超氧化物歧化酶提纯中的应用
朱建发肖静左涛易威
（化学与分子科学学院湖北武汉430072）
摘要超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内一种重要的自由基清除剂猪血液里Cu?Zn-SOD
与血红蛋白共存于红血球，用有机溶剂沉淀蛋白质，得到粗酶提取液，用纤维素铜氨溶液制备一种成本较低，具有高分辨性能和良好物理性能的新型尺寸排除色谱，用梯度淋洗的方法纯化Cu?Zn-SOD。
关键词Cu?Zn-SOD尺寸排除色谱梯度淋洗
一、介绍
1、Cu?Zn-SOD及其分离纯化
Cu?Zn-SOD与血红蛋白共存予红血球中，它是一种重要的自由基清除剂，对生物有保护作用。这类酶的发现促进了自由基生物学的发展，并为人类治疗多种炎症，放射病，自身免疫疾病及抗衰老等提供了一个具有广泛应用前景的药物[1]。用CHCl3-C2H5OH处理，使血红蛋白沉淀，Cu?Zn-SOD留在水-乙醇相中，加磷酸氢二钾可使SOD的含水乙醇相分出，钾丙酮使SOD沉淀，极性溶剂使蛋白质脱去水化层，降低介电常数，使蛋白质颗粒凝集沉淀。
2、纤维素柱填料及生物高分子的分级排除色谱
过去的三十年中，由于纤维素膜在膜相对较低的价格，与生物化合物较好的相容性和明显的亲水性，使得其在分离中已有了广泛的商业用途[2，3]。
尺寸排除色谱就是使高分子流过孔径具有一定尺寸分布的色谱柱填料，
分子量大的高分子尺寸较大，进入孔隙的可能性小，流经填料时间校短，反之，分子量小的，流经填料时间长。此法在生物大分子的实验室研究和工业生产中得到了越来越广泛的应用[4，5]。
采用PEG－2000和纤维素铜氨溶液共混，制得了强度很好的再生纤维素改性多孔膜，其孔径是未共混得纤维素膜的4倍。纤维素共混膜在不同凝固条件下可形成多孔膜，且孔径可通过加入的水溶性高分子的种类、分子量、含量控制，在此基础上制备了系列多孔色谱柱填料。
3、梯度洗脱法
梯度洗脱的能力是逐步增加的，克服了直线洗脱中的拖尾现象，混合物中的各个组分逐个进入解吸状态，因此分辨率大大提高，形成梯度应满足：（1）淋洗液总体积足够大，洗脱时间足够长，使各峰不致丢失；（2）梯度的斜度要足够平，使各峰分开，但又要足够陡峭，以免峰形过宽或拖尾；（3）梯度淋洗速度要适当，这样可利用全柱长进行无数次的解吸和再吸附，达到分离目的；（4）最大分辨率的梯度洗脱应在那些对吸附和洗脱有相近亲和力的大分子出现的区域比较平坦，而在毗邻大分子的亲和力差异较大的区域是陡峭的，通常要经过反复实验，摸索出一个合适的梯度淋洗配方来调节梯度，才能达到理想结果。
二、实验部分
1、实验试剂和仪器
试剂: CuSO4?5H2O,20%NaOH,PEG-2000,棉短绒，4％硫酸，异丙醇，浓氨水，95％乙醇，氯仿，K2HPO4?3H2O,K2HPO4,0.9%NaCl，丙酮，10mmol/LHCl，新鲜猪血500ml，甲醛溶液。
仪器：抽滤装置，HL-2型恒流泵，BSZ-160A型部分自动收集器，紫外可见分光光度计，玻璃色谱柱，低温高速离心机等。
1、纤维素柱填料的制备
（1）制备Cu（OH）2取16.5g五水硫酸铜，加蒸馏水加热溶解至沸，停止加热，缓缓加入25％－28％的浓氨水溶液，并搅拌冷至室温后，用水将沉淀洗至中性，
倒出清液，加水于沉淀中冰水浴条件下加l0％NaOH并搅拌，用水洗至中性，
抽滤得天蓝色湿Cu(OH)2。
（2）制备纤维素铜氨溶液8g纤维素置于50g浓氨水中，加入13ml水后密封杯口，置于冰箱中冷至10o C以下，将10.4g新制的Cu(OH)2加入到6.4g10％的NaOH
里，搅拌均匀后倒入冷却的纤维素铜氨溶液里，立即搅拌均匀，置于冰箱中冷
却，冷却后加入少量水，继续搅拌，再冷却再搅拌，变为蓝色清亮粘稠液（Ⅰ），
纤维素浓度约为8％。
（3）柱填料的制备将上步制得的纤维素铜氨溶液装入注射器中，均匀用力，推出丝状溶液，直接在10％NaOH溶液中凝固15min，将丝状物转移到4％的稀
硫酸中，放置30min，得到透明均匀细丝，用水洗去酸，剪成1mm以下圆柱体，
保存在20％异丙醇和2％甲醇水溶液中备用。
2、酶的制备
（1）取新鲜猪血500ml，3000转/min离心20min，收集红细胞后，加入等体积0.9％NaCl溶液，充分搅拌后，再次离心，弃上层清液（反复3次），收集洗涤的红
细胞，加蒸馏水，将烧杯置于冰浴中搅拌溶血40min以上，得血溶液。
（2）往血溶液中缓慢加入在4o C下预冷过的95％C2H5OH（0.25倍体积），然后缓缓加入在4o C下预冷过的CHCl3（0.15倍体积），搅拌，室温下3000转/min离心
20min，弃去沉淀（血红蛋白），收集上层清液约，即粗酶提取液。
（3）往上述溶液中加K2HPO4?3H2O(按43gK2HPO4?3H2O/100ml)，分液，收集上层乙醇－氯仿相，室温下离心（3500转/min）25min弃去沉淀，得上层清液.向上
一步所得清液中加（0.75倍）在4o C下预冷过的丙酮，使Cu?Zn-SOD沉淀下
来，室温下3500转/min离心20min收集灰白沉淀物，将其溶于少量蒸馏水中，
4o C下，在2.5mmol/L(Ph=7.6)的磷酸钾缓冲溶液中透析每30 min换一次透析液，
共换4－5次，透析内液出现沉淀，在室温下3500转/min离心，弃去沉淀，收
集上层清液。
（4）纤维素柱层析：将填料装入色谱柱使填料均匀，无气泡。装好后，填料上步用滤纸片覆盖，填料顶部保持平整。用2.5mmol/L缓冲液作柱层析平衡液，进行
梯度洗脱。
(a)洗脱方法：用滴管将粗酶制剂沿柱内壁加到纤维素柱表面，慢慢放松活塞，使
样品液面降到柱表面，再加少许洗脱液洗涤柱壁，反复两次。
(b)梯度洗脱装置图:
A—储液瓶；B－混合瓶；C－电磁搅拌器；D，E－活塞；F－搅拌磁子；
G－色谱柱；H－BSZ-160型部分自动收集器；I－HL_2型恒流泵
(c)洗脱前，开动搅拌器，打开活塞D、E，B中浓度线性递增；关闭
活塞D、E，在A中加200mmol/L、Ph=7.6的磷酸钾缓冲溶液
100ml,B中加2.5mmol/LpH＝7.6缓冲溶液100ml，打开活塞D、
E，用恒流泵控制流速40ml/h,用自动部分收集器收集流出液，每
管4ml，共30管。
(d)以蒸馏水为参比，在280nm处用紫外吸收法测每管的吸光度，绘
制淋洗曲线。
三、实验结果
绘制出的淋洗曲线如下图所示：
四、讨论
1、关于纤维素柱填料：从纤维素铜氨溶液制备的柱填料强度高、尺寸稳定
性好、分辨率高，但孔径太小，分级范围窄，使用受到限制，用PEG－
2000和纤维素铜氨溶液共混，制得强度好的再生性纤维素改性多孔膜，
其孔径是未共混的4倍，但共混时难混均匀，液体与粘稠物两相分离，
不易制得均匀的丝状物。
2、关于酶的制备：Cu?Zn-SOD与血红蛋白共存与红血球，通过离心，可除
去血清，收集红细胞，用极性有机溶剂使蛋白质脱去水化层并降低介电
常数而增加带电质点间相互作用，致使蛋白质颗粒凝集而沉淀，此法要
求低温操作，并尽量缩短处理时间，避免蛋白质变性。Cu?Zn-SOD的
pI=4.95，在Ph=7.6的条件下带负电，通过纤维素阴离子交换柱可进一步
纯化。
3、关于梯度淋洗：洗脱的梯度在柱层析中是首要因素，可根据实验要求设
计各种方法，常用的梯度混合器由两个容器构成，二者体积相等，放在
同一水平台上，一个盛起始淋洗液，另一个盛上限淋洗液，两者用管连
通，淋洗液从第一个容器流入柱时，第二个容器中的淋洗液自动补足，
使上限淋洗液浓度线性增加，改变梯度容器的相对大小和形状可产生凹
形或凸形梯度，形成梯度应满足：淋洗总体积足够大；梯度的斜度足够
平缓，使各峰分开；又要足够陡峭，以免峰变宽或拖尾；梯度升降速度
要合适；要反复实验，摸索出合适的梯度洗脱配方来调节梯度。
参考文献
[1] 余瑞元等. 北京鸭红细胞超氧化物歧化酶－分离纯化和性质. 北京大学学报（自然科学版），1990，26（4）：475
[2] G Yang, L Zhang. J Membrance Sci, 1996(114):149~155
[3] G Yang, L Zhang, X Xiong, et al. Chinese J Polym Sci,2001(19):415
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[5] S C Dhurms. J Chromatogr A, 1996(720):151~166
[6]武汉大学化学与分子科学学院实验中心编《综合化学实验》 2003年第一
版
超氧化物歧化酶资料
超氧化物歧化酶 超氧化物歧化酶，别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 SOD（超氧化物歧化酶）是国际上公认的具有人体垃圾“清道夫”、“抗衰王”、“美容骄子”之称，是对抗“百病之源”活性氧自由基最有力的物质，是近半个世纪以来社会科学界、医学界、生物界最举世瞩目的价值发现，它的研究与发展代表着生物医药的高科技技术发展的前沿，在科技成果及学术领域占据重要的国际地位。SOD（超氧化物歧化酶）被国家列入生物医药“国家十一五规划”重点项目。2011年是“国家十二五规划”的第一年，SOD行业将再次跻身国家当前优先发展的高科技产业化项目，标志着中国健康产业链SOD新兴行业的崛起, 使全人类迈入健康经济时代。利用超氧化物歧化酶（SOD）产业化建设，一方面可架构生物医药、保健食品、日用美容化妆品、化工化学、农业五大版块经济支柱的绿色产业链循环经济圈发展。另一方面打造SOD科技应用成果转化的孵化器平台引领生化医药美容化妆品食品等行业的新型健康原料的应用，有利于促进再生资源利用，产生巨大的社会效益和经济效益。 一、反应机理 超氧化物岐化酶,它催化如下的反应： 2O2-+2H+→H2O2+O2 O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。 SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 SOD属于金属蛋白酶，按照结合金属离子种类不同，该酶有以下三种：含铜与锌超氧化物歧化酶（Cu-ZnSOD ）、含锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD ）和含铁超氧化物歧化酶（Fe-SOD ）。三种SOD都催化超氧化物阴离子自由基，将之歧化为过氧化氢与氧气。 目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。所谓的自由基就是当机体进行代谢时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推陈出新动一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。如，超氧化物阴离子自由基、羟自由基、氢自由基和甲基自由基，等等。在细胞由于自由基非常活泼，化学反应性极强，参与一系列的连锁反应，能引起细胞生物膜上的脂质过氧化，破坏了膜的结构和功能。它能引起蛋白质变性和交联，使体内的许多酶及激素失去生物活性，机体的免疫能力、神经反射能力、运动能力等系统活力降低，同时还能破坏核酸结构和导致整个机体代谢失常等，最终使机体发生病变。因此，自
醋酸纤维素纳滤膜的制备方法
[54]发明名称 醋酸纤维素纳滤膜的制备方法 [57]摘要 本发明公开了一种醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，包括以下步骤：1）将醋酸纤维素放入溶剂中搅拌，然后再加入非溶剂添加剂搅拌，最后静置，得铸膜液；2）将上述铸膜液刮制成250u m厚度的湿膜，然后静置在空气中；3）将上述步骤处理后的湿膜浸入蒸馏水中进行凝胶浴处理，得到不对称膜；4)将上述不对称膜依次经乙醇水溶液交换和纯环己 烷交换处理后，得醋酸纤维素纳滤膜。利用本发明方法所制得的纳滤膜通量大、分离效果明显。 权利要求书 第1／1页 1、一种醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，其特征是包括以下步骤： 1)、将醋酸纤维素放入溶剂中搅拌22～26小时，然后再加入非溶剂添加剂搅拌2～5小时，最后静置65～75小时，得铸膜液； 2)、于10～30℃温度和50～75%相对湿度条件下，将上述铸膜液刮在洁净玻璃板或无纺布上制成250ltm厚度的湿膜，再使湿膜静置在空气中进行溶剂的挥发，静置时间为1～30分钟； 3)、将上述挥发处理后的湿膜浸入5～25℃蒸馏水中进行凝胶浴处理，直至湿膜充分凝胶；得到不对称膜； 4)、将上述不对称膜依次经体积浓度为30 --70%乙醇水溶液交换和纯环己烷交换处理后，得醋酸纤维素纳滤膜。 2、根据权利要求1所述的醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，其特征是：所述步骤1）中溶剂与醋酸纤维素的用量比为100 ml：8～20g，溶剂与非溶剂添加剂的体积比为4～25:1。 3、根据权利要求2所述的醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，其特征是：所述步骤1）中的溶剂为丙酮、1，4一二氧六环、四氢呋喃或氯仿。 4、根据权利要求3所述的醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，其特征是：所述步骤1）中的非溶剂添加剂为水、甲醇或乙醇。 说明书 醋酸纤维素纳滤膜的制备方法 技术领域 本发明涉及一种醋酸纤维素纳滤膜的制备方法。 背景技术 膜分离技术是一项新兴的物质分离提纯和浓缩工艺，可在常温下连续操作，无相变；大规模生产中有节能、环保的优势；尤其适宜加热易变性的热敏性物质，因而在食品、医药、水处理等领域发展迅猛。膜技术在中药领域的应用主要是从中药中提取活性物质。中药中活
超氧化物歧化酶的生产
项目二超氧化物歧化酶的生产 超氧化物歧化酶（英语：Superoxide dismutase，简称SOD）是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的酶。它广泛存在于各类动物、植物、微生物中，是一种重要的抗氧化剂，保护暴露于氧气中的细胞。 SOD的概况： 1.超氧化物歧化酶（SOD）的概念： 超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。 2.SOD的分类 按其结合的金属离子（即金属辅基的成分）可分为： （1）Fe-SOD（2）Mn-SOD（是SOD酶分子内所含金属离子Mn2+） （3）Cu-Zn-SOD（铜．锌超氧化物） 3.SOD的生产： 仪器、试剂和材料： -研钵，石英砂，烧杯（50mL），玻璃棒，pH计，冷冻离心机，离心管 -新鲜蒜瓣 -0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH7.8），氯仿-乙醇混合液（氯仿-无水乙醇3：5），丙酮（用前预冷至-10℃）。 操作步骤： 整个操作过程在0到5℃条件下进行。 （1）SOD酶的提取称取5g大蒜蒜瓣，加入石英研磨破碎细胞后，加入0.05mol/L的磷酸缓冲液（Ph7.8）15ml，继续研磨20min，使SOD酶充分溶解到缓冲液中，然后6000r/min冷冻离心15min，弃沉淀，取上清液。 （2）去除杂蛋白上清液中加入0.25倍体积的氯仿-乙醇混合液搅拌15min，6000r/min离心15min，弃去沉淀，得到的上清液即为粗酶液。 （3）SOD酶的沉淀分离粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000/min离心15min，得到SOD酶沉淀。 （4）将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸缓冲液5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯化，然后超滤浓缩。 （5）用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量 （6）将浓缩冷冻干燥后即得成品。 4.SOD酶的检验： 原理：连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出氧气，生成带色的中间产物。在自氧化过程的初始阶段，黄色中间产物的积累在滞后30~45s后就与时间成线性关系。中间产物在420nm处有强烈的光吸收，在有SOD存在时由于它能催化生成氧气与过氧化氢，从而阻止了中间物的积累，通过计算就可以求出SOD的活力。 所需溶液的配制： （1）pH值为8.30的50mol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液：25℃下96.5mL 1mol/L的LK2HPO4与3.5mL 1mol/L的KH2PO4混合后，用水稀释至2000mL。 （2）0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连苯三酚用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至500mL。酶活性的测定： （1）连苯三酚自氧化速率的测定
超氧化物歧化酶的现状研究进展(一)
超氧化物歧化酶的现状研究进展(一) 关键词：超氧化物歧化酶;生理功能;特性;应用摘要:超氧化物歧化酶是生物体内清除超氧阴离子自由基的一种重要酶，具有重要的生理功能，在医药、食品、化妆品中有广泛的应用前景。现从分类、分布、结构、性质、催化机理、制备、应用等方面探讨了超氧化物歧化酶的基础研究进展。 关键词:超氧化物歧化酶;生理功能;特性;应用Advanceincurrentresearchofsuperoxidedismutase. Abstract:SuperoxideDismutase（SOD）isanimportantenzymeinorganism，whichcanremovesuperoxidefreeradical.Itiswide-lyusedinclinicaltreatment，food，andcosmeticindustryforitsimportantphysiologicfunction.Thisreviewpresentsabasicreseachoutline ofSOD，includingclassification，distribution，structure，property，thecatalysemechanism，preparationandapplication. Keywords:Superoxidedismutase;Physiologicfunction;Property;Application 1938年Mann和Keilin〔1〕首次从牛红细胞中分离出一种蓝色的含铜蛋白质（Hemocuprein），1969年Mccord及Fridovich〔2〕发现该蛋白有催化O2，发生歧化反应的功能，故将此酶命名为超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD，EC1.15.1.1）。该酶是体内一种重要的氧自由基清除剂，能够平衡机体的氧自由基，从而避免当体内超氧阴离子自由基浓度过高时引起的不良反应，同时SOD是一种很有用途的药用酶。有关SOD的研究受到国内外学者的广泛关注，涉及到化学、生物、医药、日用化工、食品诸领域，是一个热门研究课题。通过多年努力，在SOD的基础研究方面取得了巨大成果。目前，SOD临床应用主要集中在抗炎症方面（以类风湿以及放射治疗后引起的炎症病人为主），此外对某些自身免疫性疾病（如红斑狼疮、皮肌炎）、肺气肿、抗癌和氧中毒等都有一定疗效;在食品工业主要用作食品添加剂和重要的功能性基料;在其它方面也有相关应用。现就有关SOD的基础研究进展及应用方面作以简述。 1SOD的种类与分布 SOD是一类清除自由基的蛋白酶，对需氧生物的生存起着重要的作用，是生物体防御氧毒性的关键。迄今为止，科学家已从细菌、真菌、原生动物、藻类、昆虫、鱼类、植物和哺乳动物等生物体内都分离得到了SOD。基于金属辅基不同，这些SOD至少可以分为Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD三种类型〔3〕。 表1不同种类型的SOD分布（略） 一般来说，Fe-SOD是被认为存在于较原始的生物类群中的一种SOD类型;Mn-SOD是在Fe-SOD 基础上进化而来的一种蛋白类型，由于任何来源的Mn-SOD和Fe-SOD的一级结构同源性都很高，均不同于Cu/Zn-SOD的序列，可见它们来自同一个祖先;Cu/Zn-SOD分布最广，是一种真核生物酶，广泛存在于动物的血、肝和菠菜叶、刺梨等生物体中。 除以上三种SOD外，Sa-OukKang等人最近又从链霉菌Streptomycesspp.和S.coelicotor中发现了两种新的SOD，一种是含镍酶即Ni-SOD，另一种是含铁和锌的酶即Fe/ZnSOD，它们均为四聚体，表观分子量分别是13KD和22KD，它们之间没有免疫交叉反应〔4～6〕。 2SOD的催化机理 超氧化物歧化酶作用的底物是超氧阴离子自由基（O·-2），它既带一个负电荷，又只有一个未成对的电子。在不同条件下，O·-2既可作还原剂变成O2，又可作氧化剂变成H2O2，H2O2又在过氧氢酶（Catalase，CAT）的作用下，生成H2O和O2，由此可见，有毒性的O·-2在H2O2又在过氧氢酶（Catalase，CAT）的作用下，生成H2O和O2，由此可见，有毒性的O·-2在SOD和CAT共同作用下，变成了无毒的H2O和O2。其作用机理如下:SOD+O·-2SOD-+O2SOD-+O·-2+2H+SOD+H2O22O·-2+2H+SODO2+H2O2H2O2CATH2O+O2
超氧化物歧化酶
超氧化物歧化酶，分子结构：NH2;SCH2 CHCOOHSCH2 CHCOOHNH2 ，别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD 的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 超氧化物岐化酶的催化如下的反应：2O2-+2H+→H2O2+O2 O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 过氧化物游离基可造成机体的损害，本品由哺乳动物的红细胞、肝和组织中分离提取的一种肽链大分子的金属酶，能促使过氧化物游离基转化成过氧化氢和氧，从而清除炎症过程中伴随产生的过氧化物游离基，而有强大的抗炎作用。临床用于类风湿关节炎、骨关节病、放射性膀胱炎。可以清除体内过量的自由基，提高人体免疫力，延缓衰老；抗疲劳，调节女性生理周期，推迟更年期。 应用 ( 1) 治疗自身免疫性疾病。各种自身免疫性疾病的发病机制虽有不同, 但O2- 前列腺素及由巨噬细胞、单核细胞、中性白细胞产生出来的水解酶类在引起病变上都起了重要作用。动物实验已证实SOD 和其他氧自由基清除剂能抑制自身免疫性疾病的慢性发病过程。应用SOD 治疗红斑狼疮和类风湿性关节炎均有很好的效果。 ( 2) 治疗某些心血管疾病。心血管疾病是人类第一大疾病, 心血管药物研究已成为生物技术革命的尖端领域。美国每年用于这方面的开发费用占到其全国医药工业总研究费用的25% 以上, 我国也把心血管药物研究列为国家医药攻关的重点, 美国和日本正在全力开发SOD。 ( 3) 抗衰老。虽然SOD 与衰老的关系以及SOD 能否作为抗衰老的有效药物, 国内外尚有争议, 但SOD 可减缓衰老的病理过程是无可非议的。衰老机制十分复杂, 按衰老的自由基学说, 氧化是导致衰老、细胞破裂和进行性病变的主要原因。SOD 能阻止、清除自由基的连锁反应, 能有效防止脂质过氧化, 也就抑制了脂褐素的形成。常见的高血压冠心病、动脉硬化和老年性痴呆症, 无不与O2- 堆积有关。如果补充一些SOD, 无疑能起到“雪中送炭” 的作用。 SOD 的开发 随着对SOD 研究的广泛进行, 人们开始对SOD 基因进行分离、序列分析、基因克隆与表达研究。美国Chiron 公司已将重组SOD 用于肾移植。Bio- Technology General 公司将基因工程方法生产的SOD 用于治疗新生儿的氧障碍。德国、日本相继开展了这方面的研究和开发工作。中国医学科学院基础医学研究所和海军总医院分子生物学研究室于1989 年底成功地在F.Coli 中构建的Cu/Zn- SOD 高效表达载体, 其表达量占菌体蛋白
超氧化物歧化酶(SOD)的生产
超氧化物酶（SOD）的生产 SOD（超氧化物歧化酶）是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）是1938 年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD 的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 它催化如下的反应：202+2H+→H2O2+O2 O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内6性极强的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害 的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧链条。 一、实验目的 a．掌握有机溶剂沉淀法的原理和基本操作。 b．掌握SOD酶提取分离的一般步骤。 二、实验原理 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子(O2-)进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲溶液提取出来。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。 有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数，使蛋白质分子之间的静电引力增大。同时，有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强，它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水，破坏其表面的水化膜，导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集，从而沉淀析出。 三、实验器材 研钵，石英纱，烧杯(50ml)，玻璃棒，pH计，冷冻离心机，离心管。 四、试剂和材料 新鲜蒜瓣，0.05mol/L磷酸缓冲溶液(pH7.8)，氯仿－乙醇混合液(氯仿：无水乙醇＝3:5)，丙酮(用前预冷至－10℃)。
超氧化物歧化酶
超氧化物歧化酶的功能与应用 安徽工程大学生化院食品101 张云学号：3100401114 摘要：超氧化物歧化酶Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD)，别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。它是一种新型酶制剂。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。耐高温SOD是国家“十五”、“十一五”863计划重大课题项目。 关键字：SOD 原理人体作用耐高温SOD 应用 SOD是Super Oxide Dismutase 缩写，中文名称超氧化物歧化酶，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD 的地位越来越重要！ SOD类型：超氧化物歧化酶按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 1.1催化反应原理 超氧化物岐化酶（SuperoxideDismutase），简称SOD，ECl.15.1.1，它催化如下的反应：2O2-+2H+→H2O2+O2 O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。 SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶（CA T）和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 功效认定超氧物歧化酶(Superoxide Dismutase简称SOD)是一种新型酶制剂,它在生物界的分布极广,几乎从人到细胞,从动物到植物,都有它的存在。原多从牛血中提取，1997年欧盟禁止使用动物中提取的SOD。 1.2功效认定 SOD是超氧化物歧化酶(superoxidedismutase)的英文缩写,是一种含有金属元素的活性蛋白酶,是目前生物学、医学和生命科学领域中世界级的高、尖、精课题。超氧化物歧化酶（SOD）目前世界范围内的开发，大都从动物血里提取，不但代价昂贵，而且动物性SOD 的排他性、不易常温保存、艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险，所以国际卫生组织呼吁：立刻停止动物性SOD的使用。SOD是中国卫生部批准的具有抗衰老、免疫调节、调节血脂、抗辐射、美容功能的物质之一，法定编号为ECl.15.1.1；CAS[905489]1。 世界各国对“超氧化物歧化酶”的作用认定：
《超氧化物歧化酶的研究》论文
超氧化物歧化酶的研究 年级：大三 专业：化学 学号：189940012 姓名：邢敏
超氧化物歧化酶的研究 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，简称SOD)是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的酶。它广泛存在于各类动物、植物、微生物中，是一种重要的抗氧化剂，保护暴露于氧气中的细胞，可清除生物体内超氧阴离子自由基,有效地抗御氧自由基对有机体的伤害。 氧化还原反应是生命体最重要的代谢途径，它不仅为生物提供能量，同时还决定着生命体的衰老和死亡。氧对于生命活动极其重要，但氧参与的代谢经常产生一些对细胞有毒害作用的副产物———氧自由基，即通常所说的活性氧(reactiveoxygen species，ROS)。细胞产生的活性氧包括:超氧根阴离子(O·－2)、氢氧根离子(OH－)、羟自由基(·OH)、过氧化氢(H2O2)、单线态氧(·2)和过氧化物自由基(ROO·)。它们都能通过氧化应激损伤细胞大分子，引起一系列有害的生化反应，造成蛋白质损伤、脂质过氧化、DNA突变和酶失活等。为了防止氧自由基对细胞体的破坏，几乎所有细胞都有一套完整的保护体，来清除细胞新陈代谢产生的各种活性氧。其中，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)在保护细胞免受氧自由基的毒害中发挥着重要作用。早在1969年，Mc Cord和Fridovich发现了一种血球铜蛋白能清除自由基(O·－2)，并且将这种血球铜蛋白命名为超氧化物歧化酶(SOD)。SOD几乎存在于所有生物细胞中，通过把O·－2转化为 H2O2，H2O2再被过氧化氢酶和氧化物酶转化为无害的水(H2O)，从而达到清除细胞内氧自由基，保护细胞的目的。
超氧化物歧化酶(SOD)的发现及其应用
超氧化物歧化酶（SOD）的发现及其应用 早在1930年，Keilin和Mann就发现了SOD，不过，当时他们仅认为是一种蛋白质，并命名为血铜蛋白。直到1969年，McCord和Fridovich在研究对黄嘌呤氧化酶时，发现SOD具有酶的活性，并正式把它命名为superoxidedismutse，中文名即为超氧化物歧化酶。 超氧化物歧化酶 一、超氧化物歧化酶（SOD）分类及作用 根据分子中所含的金属辅基不同，SOD可分为Cu，Zn-SOD，Fe-SOD，Mn-SOD 和Ni-SOD四类。其中Cu，Zn-SOD主要存在于真核细胞的细胞浆中，如猪血、鸭血、猪肝等动物血液和内脏器官等组织中；Mn-SOD存在于真核细胞的线粒体、细菌中；Fe-SOD只存在于原核细胞中，如海藻中的螺旋藻、铁钉叶等；Ni-SOD 是最近发现只存在于某些极少数原核细菌中。 SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢和氧气，生成的过氧化氢会被过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)分解为完全无害的水。因而SOD是机体内防止自由基损伤的第一道防线，，是生物体内最重要的抗氧化酶。SOD作为机体内最有效、最重要的抗氧化酶之一，能有效清除老年机体代谢过程中所产生的超氧自由基，延缓衰老。 二、自由基 自由基是一类非常活跃的化学物质，是个有不成对（奇数）电子的原子或原子团。其中最重要的是超氧自由基，它可聚集体表、心脏、血管、肝脏和脑细胞中。如果沉积在血管壁上，会使血管发生纤维性病变，导致动脉管硬化，高血压，心肌梗塞；沉积在脑细胞时，会引起老年人神经官能不全，导致记忆、智力障碍以及抑郁症，甚至老年性痴呆等，是造成人类衰老和疾病的元凶。而在衰老的皮肤和脑中存在的脂褐素和蜡样质,可使皮肤变黑和粗糙，这两种物质也是由自由
超氧化物歧化酶的研究
超氧化物歧化酶的研究 班级：生物班姓名：胡金金学号：11 摘要:超氧化物歧化酶是生物体内清除超氧阴离子自由基的一种重要酶,具有重要的生理功能,在医药、食品、化妆品中有广泛的应用前景。现从分类、分布、结构、理化性质、催化机理、分离提取工艺、应用前景等方面探讨了超氧化物歧化酶的基础研究进展。 关键词：超氧化物歧化酶、理化性质、生物学功能、提取工艺、应用前景 到现在为止,人们已从细菌、原生动物、藻类、霉菌、植物、昆虫、鸟、鱼类和哺乳动物等生物体内分离得到SOD。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,简称SOD),是一类广泛存在于生物体内的金属酶,能够催化超氧阴离子自由基发生歧化反应,平衡机体内的氧自由基,己成为化学及生物化学热 门的研究课题。作为生物体内超氧阴离子自由基的清洁剂,SOD在防辐射、抗衰老、消炎、抑制肿瘤和癌症、自身免疫治疗等方面显示出独特的功能,在医学、食品、化妆品等领域得到越来越多的应用。目前,世界各地学者对SOD的研究方兴未艾,深入研究SOD不仅有着大的理论意义,也有着重大的实际应用价值。 1超氧化物歧化酶的结构和理化性质 1.1超氧化物歧化酶的结构 超氧化物歧化酶(SOD)从结构上可分为两族:CuZn-SOD为第一族,Mn-SOD和Fe-SOD为第二族。天然存在的SOD,虽然活性中心离子不同,但催化活性部位却具有高度的结构同一性和进化的保守性,即活性中心金属离子都是与3或4个组氨酸(His)、咪唑基(Mn-SOD含1个天门冬氨酸羧基配位)和1个H2O分子呈畸变的四方锥或扭曲的四面体配位。CuZn-SOD作为SOD结构上的第一族,是人们对于SOD结构研究的突破口,也是人们了解最多的一种SOD。比较不同来源的CuZn-SOD的氨基酸序列可以发现,它们的同源性都很高。有些氨基酸还很保守,在所有序列中都不变,这暗示着这些氨基酸与活性中心有关。如图1牛红细胞CuZn-SOD的结构所示:每个铜原子除分别与4个组氨基酸残基(His1118)的咪唑氮配位外,还与一轴向水分子形成远距离的第五配位,Zn则与3个组氨酸残基(His)和1个天冬氨酸(D81)配位。Cu、Zn共同连接组氨酸61组成/咪唑桥0结构。图1 牛红细胞CuZn-SOD 的结构示意图 图1 牛红细胞CuZn-SOD的结构示意图[1] ] Mn-SOD和Fe-SOD同属于SOD结构上的第二族,Mn-SOD是由203个氨基酸残基构成的四聚体,Mn(ó)是处于三角双锥配位环境中,其中一轴向配位为水分子,另一轴向被蛋白质辅基的配位His-28占据,另3个配基His-83、His-170和Asp-166位于赤道平面。Fe-SOD的活性中心是由3个His,1个Asp 和1个H2O扭曲四面体配位而成。 1.2超氧化物歧化酶的理化性质 SOD 的等电点偏酸性, 为酸性蛋白SOD 对热、pH 值和蛋白水解酶的稳定性比一般酶要高。三种 SOD 的主要理化性质见下表[2]。 2超氧化物歧化酶生物学功能 2.1 超氧化物歧化酶与胁迫 生存环境的变化是不可避免的,任何生物必须去适应各种变化.以植物为例,经研究发现,不同条件、不同物种、不同的发育时期及不同器官发生胁迫后,SOD活性表现有升有降。然而SOD活性不论是升高还是降低,都表现出抗性强的品种比抗性弱的品种活性高.即当SOD活性降低时,抗性强的品种下降幅度小;而当SOD活性升高时,抗性强的品种升高幅度大;或者抗逆性强的品种活性升高而抗逆性弱的品种降低。这说明在逆境条件下植物的抗性强弱与植物体内能否维持较高的SOD活性水平有关。SOD的作用底物是生物体内产生的超氧阴离子自由基O厂,作用机理是: 之后H2O2:被抗坏血酸和过氧化氮酶(前者是主要的)分解为H2O和O2,从而解除O2-所造成的氧化胁迫
几种抗氧化酶的作用
一.超氧化物歧化酶(SOD): 超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体清除自由基的首要物质。SOD在生物体的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD 的地位越来越重要！ 超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。超氧化物岐化酶（SOD）能催化如下的反应：O2-+H+→H2O2+O2，O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。SOD 是机体天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶（POD）会立即将其分解
为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。所谓的自由基就是当机体进行代时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推出新一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。如，超氧化物阴离子自由基、羟自由基、氢自由基和甲基自由基，等等。在细胞由于自由基非常活泼，化学反应性极强，参与一系列的连锁反应，能引起细胞生物膜上的脂质过氧化，破坏了膜的结构和功能。它能引起蛋白质变性和交联，使体的许多酶及激素失去生物活性，机体的免疫能力、神经反射能力、运动能力等系统活力降低，同时还能破坏核酸结构和导致整个机体代失常等，最终使机体发生病变。因此，自由基作为人体垃圾，能够促使某些疾病的发生和机体的衰老。虽然自由基会对机体产生诸多危害，但是在一般的条件下人体细胞也存在着清除自由基、抑制自由基反应的体系，它们有的属于抗氧化酶类，有的属于抗氧化剂。像SOD就是一种主要的抗氧化酶，能清除超氧化物自由基，在防御氧的毒性、抑制老年疾病以及预防衰老等方面起着重要作用。 SOD能专一地清除体有害的自由基，以解除自由基氧化体的某些组成成分而造成的机体损害。如氧中毒、急性炎症、水肿、自身免疫性疾病、辐射病等疾病都与活性氧的毒性有关。实验证明，SOD 能够清除自由基，因此可消除上述疾病的病因。此解毒反应过程是两
超氧化物歧化酶
超氧化物歧化酶(SOD)简述 YB 2012级生物技术 摘要：超氧化物歧化酶首先由Mann和Keilin从牛红细胞中分离提取出,是生物体内一种重要的抗氧化酶,由于其具有清除生物体内超氧阴离子自由基的作用,而引起广大学者的关注。本文概述了SOD的分类、结构、理化性质及研究进展,并对其应用前景进行了展望。 关键词：超氧化物歧化酶;SOD;理化性质 生物体内低浓度超氧阴离子自由基(O-2)是维持生命活动所必需的,其浓度过高时,可引起机体组织细胞氧化损伤,导致机体发生疾病,甚至死亡。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,简称SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶,具有抗衰老、抗癌、防白内障等作用[1],因而受到全世界学术界广泛关注,使之成为涉及分子生物学、微生物学、医学等学科领域及医药、化工、食品等生产行业的一个热门研究课题[2]。 1.SOD的分类 SOD广泛存在于动、植物及微生物中[1]。根据其结合金属种类不同,可分为三类:第一类为Cu·Zn-SOD,呈蓝绿色,相对分子量约为32kDa,主要存在于真核细胞细胞浆、叶绿体和过氧化物酶体内;第二类为Mn- SOD,呈紫红色,相对分子量约为40kDa,主要存在于真核细胞线粒体和原核细胞中;第三类为Fe-SOD,呈黄褐色,相对分子量约为38.7kDa,主要存在于原核细胞及一些植物中[2]。 2.SOD的结构 1975年Richardson得到了Cu?Zn-SOD的三维结构[5],发现它是由2个基本相似的亚基组 成的二聚体,且每个亚基含有1个铜原子 和1个锌原子。2个相同亚基之间通过非 共价键的疏水相互作用而缔合,类似于圆 筒的端面。Cu?Zn-SOD的单个亚基活性中 心结构见图1。 从图中可知Cu与4个来自组氨酸残基
超氧化物歧化酶
超氧化物歧化酶(SOD)的生产工艺研究
摘要 本文主要介绍SOD的作用和两种不同的生产工艺。通过一种传统的SOD生产工艺和一种利用选择性热变性的方法的牛血SOD提取生产工艺的对比研究从而反应出，由如今对SOD的需求而需要一种较新的生产工艺来取代传统工艺。讨论如何保证质量，提高酶的回收率和降低成本。 前言 在人体的正常新陈代谢就会产生自由基、是人体活动所需要的，但在某些特殊的情况下，体内会产生过量的自由基。如辐射、电磁波、汽车尾气、工业废气、废水的污染均会让体内产生过量的自由基。而自由基不到会引起人体衰老，还会让人体产生各种疾病如风湿性关节炎、癌症、高血压、肾脏病、白内障等等。SOD 是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！ 关键字: SOD 猪血分离纯化鉴定 材料：牛血、猪血、0.9%NaCl、95%乙醇、氯仿、丙酮、去离子
方法一: 工艺流程图 工艺要点:⑴收集、浮洗新鲜猪血经离心去除黄色血浆,红细胞用0.9%NaCl溶液离心浮洗3次，收集红细胞。 ⑵溶血、去血红蛋白收集洗净的红细胞，加去离子水，在5℃下搅拌30min,然后加入0.25倍体积的95%乙醇和0.15倍体积的氯仿,搅拌15min;离心去血红蛋白,收集上清液。 ⑶沉淀、热处理将上清液加入1.2~1.5倍体积的丙酮，产生絮状沉淀；离心去上清液，得沉淀物，操作要在0℃左右进行；沉淀物加适量蒸馏水使其溶解，离心除去不溶性蛋白;上清液于55~65℃热处理10~15min,离心除去热变性蛋白,收集黄绿色澄清液。⑷沉淀、去不溶蛋白0℃条件下，在澄清液中加入适量丙酮，使其产生大量絮状沉淀；离心弃去上清液，沉淀用去离子水溶解；离心除不溶性蛋白；上清液置透析袋中，得透析液。
超氧化物歧化酶的研究与应用-论文
超氧化物歧化酶的研究与应用 霍荣辉 运城学院，运城，2006142121 摘要：超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，简称SOD)，是一类广泛存在于生物体内的金属酶，能够催化超氧阴离子自由基(O2-)发生歧化反应，平衡机体内的氧自由基，己成为化学及生物化学研究领域中热门的研究课题。作为生物体内超氧阴离子自由基的清洁剂，SOD 在防辐射、抗衰老、消炎、抑制肿瘤和癌症、自身免疫治疗等方面显示出独特的功能，在医学、食品、化妆品等领域得到越来越多的应用。目前，世界各地学者对SOD的研究方兴未艾，深入研究SOD不仅有着重大的理论意义，也有着重大的实际应用价值。现从分类、分布、结构、性质、催化机理、制备、应用等方面探讨了超氧化物歧化酶的基础研究进展。 关键字：超氧化物歧化酶；SOD；自由基；应用；研究 1SOD概述： 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)是一种广泛存在于生物体内，能清除生物体内的超氧阴离子自由基(O2-)维持机体中自由基产生和清除动态平衡的一种金属酶。具有保护生物体，防止衰老和治疗疾病等作用。 1938年Mann和Keilin[1]首次从牛红细胞中分离出一种蓝色的含铜蛋白质(Hemocuprein)，1969年Mccord及Fridovich[2]发现该蛋白有催化O2，发生歧化反应的功能，故将此酶命名为超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD，EC1.15.1.1)。现已发现了3种类型的SOD：Cu/Zn SOD、Mn-SOD、Fe-SOD[3]。 2SOD的分布、分类及理化性质 2.1SOD的分布与分类 SOD是一类清除自由基的蛋白酶，对需氧生物的生存起着重要的作用，是生物体防御氧毒性的关键。迄今为止，科学家已从细菌、真菌、原生动物、藻类、昆虫、鱼类、植物和哺乳动物等生物体内都分离得到了SOD。基于金属辅基不同，这些SOD至少可以分为Cu/ Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD三种类型。 表1 SOD的分类及分布
超氧化物歧化酶在生活中的应用
龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/2016763240.html, 超氧化物歧化酶在生活中的应用 作者：王兆才 来源：《文理导航》2017年第23期 【摘要】本文综述了国内外对于超氧化物歧化酶的应用，并就应用中出现的问题给出了自己的想法。文章还提出并分析了超氧化物歧化酶在生活中的应用价值，对食品、医疗、化妆品等方面进行了系统化的论述，望有助于日后对于超氧化物歧化酶在生活中的应用研究。 【关键词】超氧化物歧化酶；氧自由基；应用 1.超氧化物歧化酶分布、分类及生理功能 SOD是Super Oxide Dismutase缩写，中文名称超氧化物歧化酶，迄今为止的研究表明， 超氧化物歧化酶广泛存在于多种生物体内，目前已经从细菌、原生动物、霉菌、植物、昆虫、鸟类、鱼类和哺乳动物等生物体内分离并得到了超氧化物歧化酶.根据它活性中心结合的微量元素离子不同，超氧化物歧化酶主要分为3种类型，Fe-SOD，Mn-SOD，Cu/Zn-SOD三种。超氧化物歧化酶具有特殊的生理活性，它是生物体内清除自由基的首要物质。 2.目前对于超氧化物歧化酶的应用 机体在正常情况下产生的超氧阴离子自由基是维持生命活动所必须的，但是其含量过高就会对机体产生影响。不但机体会产生氧自由基，外界环境的多种物理或化学的刺激都能产生氧自由基。如电离辐射，紫外线等。而超氧化物歧化酶却能够清除并维持氧自由基的这种平衡，防止生物体机体的损伤，因而使他具有多方面的应用前景。以下是目前超氧化物歧化酶在应用方面的研究进展。 2.1超氧化物歧化酶在医药临床方面的应用 超氧化物歧化酶（SOD）是一种新型的抗炎症类药物，尤其是针对关节炎和类风湿关节炎有很明显的疗效，根据超氧化物歧化酶的作用机制和毒性的试验，证实了它对治疗因O2-引起的各种疾病都有一定的疗效。为此，超氧化物歧化酶可作为抗衰老、抗炎症、治疗自身免疫疾病患者广泛应用的医药品。此外，超氧化物歧化酶对治疗贝切特氏症、心肌梗塞等血虚性心脏病、胶原病、新生儿呼吸困难综合症、防御放射性伤害等病症也可望有效，目前人们正在积极开发研究中。 2.1.1治疗心肌缺血与缺血再灌注综合症
超氧化物歧化酶
嘉兴市康慈医院开展医疗新技术新项目审批表 科室检验科申请日期实施日期 项目名称超氧化物歧化酶 (SOD)检测 项目承担者查显友项目指导者查显友 性质为老年衰老新陈代谢诊断提供参考意义 项目基本情况： 1、仪器：AU5800 2、试剂：配套 3、方法：分光光度测定法 4、标本要求：随机，血清、血浆 特性及临床意义： 别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。 生理性降低：一般老年人清除酶活力降低，老年人新陈代谢功能下降，酶诱导生成减少，不能维持自由基的低浓度动态平衡 病理性降低：脑部神经疾病脑血管病—急性脑梗死、脑出血、蛛网膜下腔出血、HIE(Hypoxic-Ischemic Encephalopathy, 缺氧缺血性脑病) 缺血性心脏病心肌缺血（冠状动脉粥样硬化性心脏病）、急性心肌梗塞医学手术救治治疗后继发损伤
血标本采集注意事项★ 空腹静脉血，不加抗凝剂，血清管（黄盖） 可行性分析及效果预测： 按照浙江省医疗服务价格手册此项目收费为8元/次，为医保项目，每一个人次的成本为0.704元左右，预收益为7.296元/次。 技术操作规范： 1、标本：血清、血浆。 2、操作简单：立即上机检测。检验人员经培训指导即可操作。 3、检测速度快：20分钟左右报告结果。 存在风险及处理预案： 1、无论病人是否已被诊断有传染病，都应视为传染病人。所有标本、试剂、使用中能造成伤害的所有锐器、接触过标本的仪器设备，都应视为传染源，在实验时或是在维护时都要十分小心，应彻底消毒处理，避免对人造成感染。 2、严格物品分类，检验后的废弃物分别装入不同污染袋中。检验人员接触污物时，必须戴手套、戴口罩和洗手，减少皮肤黏膜接触，严格消毒隔离程序，避免意外损伤，必要时戴防护眼镜。 3、洗手是控制感染的重要步骤，也是预防感染最简单、最有效、最重要的措施，检验人员应特别重视，并认真坚持。 4、如不慎皮肤损伤，应让血尽量流出，再用肥皂清洗、流水冲洗，3%碘酒及75%酒精消毒，并尽快注射疫苗。对一些经免疫注射可减低传染的疾病，应推行预防接种。检验人员被带有艾滋病病毒的针头刺伤后，应由专门医生进行检查，尽量在接触后几小时内开始预防工作，并注意监测受伤人员的血清学变化和应用抗病
超氧化物歧化酶SOD1
一、超氧化歧化酶(SOD)简介 超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 超氧化物歧化酶Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD)，别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。SOD是一种源于生命体的活性物质，是一种新型酶制剂。能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。全球118位科学家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。体内的SOD活性越高，寿命就越长。 二、超氧化物歧化酶（SOD）的化学修饰 1、SOD修饰的原因 超氧化物歧化酶（SOD）广泛存在于自然界一切生物体内，通过催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，减轻或消除?O-2对机体的氧化或过氧化损害。研究表明，机体的衰老、病变及辐射伤害都与自由基的形成和损伤有关，故SOD的应用有抗衰老、抗辐射、抗炎症、抗自身免疫性疾病、抑制肿瘤和癌症的功能。研究还表明，SOD与胃病、帕金森综合症、老年痴呆症、心血管疾病等有着密切关系。目前，在医药、食品、保健品、化妆品、美容等行业也已开始使用SOD。SOD 具有许多独特的生物学特性和生理学功能，但天然的SOD稳定性较差，分子量较大，半衰期短，细胞膜通透性差，且多来源于异源性，具免疫原性，而限制了其在相关领域的应用。 2、SOD修饰改造的方法 目前国内外已有很多的研究，化学修饰、基因重组、SOD模拟化合物,而以下则重点介绍的为化学修饰法.