Southern Blot操作流程

Southern Blot 操作流程

1、哺乳动物基因组DNA 的提取（或用OMEGA 试剂盒E.Z.N.A.TM Tissue DNA Kit ） 1、 取约30mg 样品，加入600 ul SNET ，再加入12 ul （20.2mg/ml ）的蛋白酶

K ，使蛋白酶K 的终浓度为400ug/ml ； 2、 55℃振荡过夜；

3、 加入0.6 ul RNaseA ，室温下孵育10 min ，后置于65℃ 10 min ；

4、 加入300 ul Tris 饱和酚，288 ul 氯仿和12 ul 异戊醇，室温下振荡30 min ；

5、 17,000 g 离心5min ，转移上层水相（600 ul ）至一新的离心管；

6、 加入等体积（600 ul ）的异丙醇沉淀DNA ，于4℃下13,250 g 离心15 min ；

7、 小心除去异丙醇，加入1 ml 70%的乙醇。离心5 min 后除去乙醇，室温下干

燥15~20 min ；

8、 加入100 ul TE ，使核酸沉淀溶解。

一、 酶切

1、 拷贝数的计算

哺乳动物基因组全长3.0×109个碱基对，按插入基因单拷贝计算如下：

()

g

plasmid

of mass bp

bp DNA of Insertion

μ10100.39

=

?

2、 酶切体系

基因组DNA 10 ug 10*Buffer 10 ul 酶(10U/ul) 10 ul Total

100 ul

3、 混合后置于适宜酶切温度进行酶切反应；

4、 对酶切产物进行纯化，用30 ul TE 洗脱；

5、 制备1%浓度的琼脂糖凝胶（不加EB ）；

6、 将纯化后的酶切产物敞开盖子于70℃放置15 min ，以除尽残留乙醇和消除

酶切后产生的粘性末端；

7、电泳：1v/cm。

二、转膜

1、碱变性：把胶条转移到含碱变性液的器皿中，摇床处理15 min；重复一次；

2、中和：倒出器皿中的碱变性液，加入中和液，摇床处理15 min；重复一次；

3、倒出中和液，加入20×SSC，摇床处理15 min；

4、转膜：

1）在一干净的容器中放入一包吸水纸，倒入20×SSC，浸湿；

2）放上一张与胶条大小相当的sigma 3M滤纸，倒上一层20×SSC，防止产生

气泡；

3）将预先剪裁好的尼龙膜放入ddH2O中充分浸润2分钟；

4）小心把胶条铺在滤纸上面，用玻璃棒擀平，赶走气泡；

5）往胶上倒上一层20×SSC，将尼龙膜铺在胶条上，再向上倒上一层20×SSC；6）再放上一张与胶条大小相当的sigma 3M滤纸；

7）用保鲜膜把胶条四周封上，在上面压上一包吸水纸，再用一个约250mg的物体压在吸水纸上面；

8）转膜过夜；

5、固定

将膜放在用10×SSC浸湿的滤纸上面，使含DNA面朝上，放入紫外交联仪中，以1.5J，254n，2.5min的程序将DNA固定在尼龙膜上。

三、杂交

1、标记探针：可用随机引物法或PCR方法标记探针；

2、将尼龙膜有DNA 的一面朝内，卷成筒状放入杂交管中，加入10 ml 经预热至50℃的DIG Easy Hyb，于50℃预杂交30 min；

3、取10 ul经标记的探针，热水浴5 min变性，然后迅速放入冰水混合物中；

4、将变性后的探针加入4 ml预热的DIG Easy Hyb中，混匀，并防止气泡的产生（气泡会产生背景）；

5、倒出预杂交液，加入含探针的杂交液，杂交4h或过夜。

6、杂交温度的计算

T m=49.82+0.41（%G+C）-（600/I）[I=length of hybrid in base pairs]

T opt= T m-20 to 25℃

四、洗膜

1、室温下用W1洗液洗5min，重复一次；

2、68℃下用W2洗液洗15min，重复一次；

3、将膜用Washing Buffer浸润5min；

4、25~50℃下，用100ml Blocking Solution孵育30min，保持摇动；

5、25~50℃下，用20ml Antibody Solution孵育30min，保持摇动；

6、用100ml Washing Buffer洗15min，重复一次；

7、用20ml Detection Buffer平衡5min；

8、将膜放入杂交袋中，使含DNA面朝上，滴加1ml CSPD ready-to-use，将杂交袋合上，并赶走气泡，于15~25℃孵育5min；

9、挤出多余的液体，将潮湿的膜置于37℃孵育10min，以增强发光反应。

五、显影

直接用成像系统成像。

DNA提取的溶液配制

1.Tris-HCl (1mol/L ；PH 8.0)

用800ml蒸馏水溶解12.1g Tris碱，加浓HCl（约42ml）调PH至8.0，应使溶液冷却至室温后，方可最后调定PH值，加水定容至1L。高压灭菌。

***如果溶液出现黄色，应予以丢弃，并使用质量更好的Tris。

2.EDTA（0.5 mol/L ；PH 8.0）

186.1 g EDTA·Na·2H2O加入800ml水中，用NaOH调节PH至8.0（约需20gNaOH），定容至1L，高压灭菌。

***EDTA·Na需在PH接近8.0时才会溶解。

3.NaCl (5 mol/L)

292g NaCl加入800ml水中，定容至1L，高压灭菌。

4.SDS（20%，m/v）十二烷基磺酸钠

200g SDS加入900ml水中，加热到68℃有助于溶解，定容至1L。

***无须灭菌，不要蒸汽高压。

5.SNET

20 mmol/L Tris-HCl(PH 8.0)

5 mmol/L EDTA(PH 8.0)

400 mmol/L NaCl

1%(m/v) SDS

6.TE(PH 8.0)

100 mmol/L Tris-HCl(PH 8.0)

10 mmol/L EDTA(PH 8.0)

Southern 缓冲液配制（修正版）

1.Washing buffer：

分子量1L体系5L体系0.1M 马来酸（116.07）：11.607g 58.035g 0.15M NaCl （58.45）：8.768g 43.838g 用NaOH 调pH至7.5 （20℃）

灭菌

0.3% Tween20：3ml 15ml

2.Maleic acid buffer：

分子量1L体系5L体系0.1M 马来酸（116.07）：11.607g 58.035g 0.15M NaCl （58.45）：8.768g 43.838g 用NaOH 调pH至7.5（20℃）

灭菌

3.Detection buffer:

分子量1L体系5L体系0.1M TRIS Base（121.14）：12.114g 60.57g 0.1M NaCl （58.45）： 5.845g 29.225g 用HCl调pH至9.5（20℃）灭菌

4. 10% SDS

1L 体系

SDS溶液100g SDS

用0.45um滤器进行灭菌（不能进行高温灭菌）

5. 20*SSC

分子量1L体系

3M NaCl （58.45）：175.3g

0.3M 柠檬酸钠（294.10）：88.2g

用HCL调pH至7.0

灭菌

6.碱变性液

分子量1L体系

0.5M NaOH（40.0）20g

1.5M NaCl （58.45）87.68g

不需灭菌

7.中和液

分子量1L体系

0.5M Tris 121.14 60.57g

1.5M Nacl 58.44 87.66g

westernblot详细图解

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。 经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以

检测电泳分离的特异性目的基因表 达的蛋白成分。该技术也广泛应用 于检测蛋白水平的表达。 实验材料蛋白质样品 试剂、试剂盒丙烯酰胺SDS Tris-HCl β-巯基乙醇 ddH2O 甘氨酸Tris 甲醇PBS NaCl KCl Na2HPO4 KH2PO4 ddH2O 考马斯亮兰乙酸脱脂奶粉硫酸镍胺H2O2 DAB试剂盒 仪器、耗材 电泳仪电泳槽离心机离心管硝酸纤维素 膜匀浆器剪刀移液枪刮棒 实验步骤一、试剂准备 1. SDS-PAGE试剂：见聚丙烯酰胺凝胶电泳实验。 2. 匀浆缓冲液：1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml；10%SDS 6.0 ml；β-巯基乙醇0.2 ml；ddH2O 2.8 ml。 3. 转膜缓冲液：甘氨酸2.9 g；Tris 5.8 g；SDS 0.37 g；甲醇200 ml；加ddH2O定容至1000 ml。

企业流程优化的关键成功三大要素

企业流程优化的关键成功三大要素 个企业开展全面的流程管理一般经历流程体系建设、流程实施推广、流程持续评估改进三个阶段,其中第一阶段的流程体系建设是策划和设计阶段,是流程能否落地的基础AMT咨询在为很多企业开展流程体系建设项目时往往会面临以下问题和尴尬: 1、如何形成流程的整体架构,在整个企业范围内建立清晰的流程脉络,而不是各部门独立编写很多零散的相互交叉各自为政的流程。 2、流程和以往的一些文件体系如何融合,很多流程项目最终结果是在ISO体系、企业现有的规章制度之外又多了一套新的文件,但是具体业务执行的人还是不知道具体工作该参考哪个文件 3、流程优化项目结束了,文件柜里产生了一堆流程文件,但在业务部门眼里是流程管理部门的流程,和自己没关系,业务还是按原来的惯性开展… 如何使流程体系建设能够真正落地,为企业带来切实的价值,结合多个咨询项目管理的经验,对项目开展过程中建立流程框架、流程梳理、流程优化三个核心环节的关键成功要素进行分析总结。 一、建立流程框架 构建流程框架本身是一个厘清企业管理结构的过程。通过从企业一级流程框架逐渐往下分类分级细化,形成二级、三级直到完整的企业流程清单。其关键是既能体现流程体系的完整性和逻辑关联性,又清晰的界定流程间的边界。 企业的一级流程框架反映企业的整体业务模式,体现的是从企业最高管理层视角对企业的整体认识。企业的最高管理层的主要职责是制订并传达企业的战略,同时使企业里的各条流程能紧密衔接,通过建立企业各项活动的有机组合,形成整体系统,从而确保战略的实现和整体效益提升。因此这张总体框架图既能反映企业的业务运作特点,又能突出企业的战略或核心竞争力,反映企业各业务领域的定位和相互间的逻辑关系。当流程总图被赋予以上意义,这项工作从专业上升到艺术。 从一级流程总图分解细化形成流程清单,对于进行全面流程体系建设的企业,流程清单的意义重大,如同企业人员管理的“花名册”,是流程管理和持续优化的基础,其分解过程关键是清晰的界定流程范围及流程起点和终点。AMT咨询接触过有的企业在构建流程清单时往往分解到三级、四级流程清单就理不请其中的逻辑关系,或者是以各部门为核心梳理的流程存在很多接口不一致不清晰的地方,其主要问题在于缺乏整体上的策划和流程分类分级的统一视角。 流程的分类分级首先是从管理要求的角度出发对业务的分类,不同分类的业务其管理要求不同,使相应的流程需设置不同的控制点和对应不同的知识经验积累点。如新产品管理,对于全新产品开发管理的重点在于概念评审和过程控制,保证新产品的开发上市成功率;而应对市场竞争的促销及改进类产品,其管理要求是市场响应速度快,因此在流程清单设计时需考虑不同产品的分类而设置不同的流程,即首先是区分管理的差异化,再实现标准化,切忌统一的流程应对所有类型业务。其次流程的分类分级细化需考虑不同细化颗粒度对应的应用对象,使分解的不同层级流程能对应到某一组织或岗位层级。 对于集团管控型企业,可能还会面临一个问题,即流程清单的分层。不同的组织层级对应不同的管理对象,如人力资源管理,集团总部出框架性的流程制度,下属业务单元会再分解细化,但其分解的下层流程制度文件,必须和上一层流程衔接一致形成一体化,同时细化分解的流程清单也可根据流程责任人区分形成下一层组 织的流程清单。 流程清单的表现形式一般类似树状逐级分解,然而现实业务流程整体描绘出来应该是网状结构,即各类不同的业务都有交叉影响作用,从而形成企业的整体系统。因此在流程清单分解时要识别各流程间的相关联系,这些联系包括直接触发关联,即一个流程结束启动下一个流程,或者流程间存在信息交互和时钟协同等。 二、流程梳理 流程框架搭建好后,进入具体流程梳理环节,AMT咨询认为这部分工作有两个关键要素,第一个是建立流程文件描述标准模板;第二个是让流程责任人成为责任中心,保证后续流程梳理优化工作按时按质完成。

高频电刀的操作流程和注意事项(正式)

编订：__________________ 单位：__________________ 时间：__________________ 高频电刀的操作流程和注意事项(正式) Standardize The Management Mechanism To Make The Personnel In The Organization Operate According To The Established Standards And Reach The Expected Level. Word格式 / 完整 / 可编辑

文件编号：KG-AO-9053-19 高频电刀的操作流程和注意事项(正 式) 使用备注：本文档可用在日常工作场景，通过对管理机制、管理原则、管理方法以及管理机构进行设置固定的规范，从而使得组织内人员按照既定标准、规范的要求进行操作，使日常工作或活动达到预期的水平。下载后就可自由编辑。 一电刀的结构和工作原理。 1.结构与配件由主机、电刀笔、脚控开关和回路电极（负极板）组成。 使用负极板的作用：可构成电流回路，同时降低极板处的电流密度，避免电流离开病人后返回高频电刀时继续对组织加热而灼伤病人。 2.工作原理利用475～480KHz高频电流在电刀的刀尖形成高温和放电，使组织快速脱水、分解蒸发，血液凝固，实现切割组织和凝血作用。 二使用电刀的禁忌症：安装心脏起搏器的病人禁止使用高频单极电刀或咨询心内科医生。三电刀安全使用的操作程序和注意事项 （一）首先评估病人是否适合使用电刀，根据手

术选择合适品牌的电刀，检查电源、电极线路有无断裂和金属线外露。 （二）选择并检查负极板：检查导线和夹头；选择大小形状合适的负极板（15Kg以下的小儿应选用婴幼儿极板），检查导电胶的粘附力。 （三）评估病人皮肤，选择合适的部位安装负极板并将极板插头连接至机器。 合适的安装部位：尽量靠近手术部位（但不少于15cm）的平坦的血管丰富的肌肉区；局部皮肤剔除毛发并保持清洁干燥；与手术部位不可左右交叉；距ECG 电极15cm；环路中不能有金属移植物、起搏器、心电图电极；极板的长边接近高频电流的来向。 不合适的安装部位：皮肤皱褶和骨性隆起、疤痕、脂肪较厚、身体负重部位、液体积聚部位。 安装负极板时要注意：极板和皮肤要紧密连接；保持极板平整，不能切割和折叠；消毒和冲洗时避免浸湿极板。 （四）连接电刀笔与机器，开机自检，显示负极

WB实验步骤

Western blotting实验步骤 1．蛋白质的样品制备： 取心肌组织50mg，待组织块自行溶解，用滤纸吸去其表面水分，将组织块放入玻璃匀浆器球状部位，用组织剪尽量将其剪碎，将剪碎的心肌组织放入玻璃匀浆器的杆状部，按1mlRIPA+10ulPMSF/100mg心肌组织的比例加入RIPA和PMSF（先加RIPA再加PMSF），将玻璃匀浆器插入冰中，匀浆约30分钟。 将心肌组织匀浆转移到离心管中，4℃12000g离心5分钟，收集上清（如有粘稠物进一步用超声处理），样品分装冻存于-20℃备用。 2 .测定蛋白浓度： 2.1 按50：1配置BCA工作液。 2.2 10ulC液（蛋白标准）+90ulPBS液稀释成0.5mg/ml的蛋白标准液。 2.3 分别以0、1、2、4、8、12、16、20ul将蛋白标准液加入96孔板的第1~8标准孔中，在其他样品孔中加入10ul待测样品。 2.4 分别加PBS定容至20ul。 2.5 各孔中加入200ulBCA工作液，室温放置2小时。 2.6 用酶标仪测定蛋白浓度：测定A562，依标准曲线算出蛋白浓度。 3 SDS-PAGE电泳： 3.1 制胶: 按比例配制分离胶，缓缓地摇动溶液，使激活剂混合均匀，将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中，再在液面上小心注入一层水，以阻止氧气进入凝胶溶液中，静置40min。同前按比例配制浓缩胶，但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分，连续

平稳的注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡，静制60min以上以保证完全聚合。 3.2 预电泳：将聚合好的凝胶安置于电泳槽中，小心拔去梳子，加入电泳缓冲液后低电压10-20V的预电泳20-30min。（目的是清除凝胶内的杂质，疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通）。 3.3 样品准备：首先计算上样体积，然后按样品：上样buffer=4：1的比例加入上样bufer混匀，沸水煮10分钟，冰上5分钟。 3.4 加样：预电泳后依次加入标准品（Marker）和待分析样品。（加样时间要尽量短，以免样品扩散，可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。每个泳道加5ul。 3.5 电泳：加样完毕，选择80V恒压进行电泳，电泳直至溴酚蓝染料前沿到达两胶交界处（一般约20分钟），更换至100V恒压电泳，电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳（一般约为1小时20分钟）。 4．转膜： 4.1 切胶：将电泳完毕的胶完整的放在盛有电转液的玻璃皿中，将目的蛋白所在区域切下来，测量其长宽，并记录。 4.2 剪膜和滤纸：按胶的尺寸剪膜和滤纸（滤纸长宽较凝胶小0.5~1mm，PVDF 膜长宽较凝胶大0.5~1mm），滤纸浸入盛有电转液的玻璃皿中10秒钟，膜放入盛有10%甲醇的玻璃皿中10秒钟，然后将两者都放入盛有去离子水的玻璃皿中3分钟，进一步放入盛有电转液的玻璃皿中3分钟。 4.3 向电转槽中倒入部分电转液，将海绵浸入。按如下顺序制作“三明治”（注意避免两边滤纸相互接触，以免发生短路）。从正极到负极按如下顺序排列：

高频电刀的操作流程和注意事项正式样本

文件编号：TP-AR-L5496 There Are Certain Management Mechanisms And Methods In The Management Of Organizations, And The Provisions Are Binding On The Personnel Within The Jurisdiction, Which Should Be Observed By Each Party. （示范文本） 编制：_______________ 审核：_______________ 单位：_______________ 高频电刀的操作流程和 注意事项正式样本

高频电刀的操作流程和注意事项正 式样本 使用注意：该管理制度资料可用在组织/机构/单位管理上，形成一定的管理机制和管理原则、管理方法以及管理机构设置的规范，条款对管辖范围内人员具有约束力需各自遵守。材料内容可根据实际情况作相应修改，请在使用时认真阅读。 一电刀的结构和工作原理。 1.结构与配件由主机、电刀笔、脚控开关和 回路电极（负极板）组成。 使用负极板的作用：可构成电流回路，同时降低 极板处的电流密度，避免电流离开病人后返回高频电 刀时继续对组织加热而灼伤病人。 2.工作原理利用475～480KHz高频电流在电 刀的刀尖形成高温和放电，使组织快速脱水、分解蒸 发，血液凝固，实现切割组织和凝血作用。 二使用电刀的禁忌症：安装心脏起搏器的病人

禁止使用高频单极电刀或咨询心内科医生。三电刀安全使用的操作程序和注意事项 （一）首先评估病人是否适合使用电刀，根据手术选择合适品牌的电刀，检查电源、电极线路有无断裂和金属线外露。 （二）选择并检查负极板：检查导线和夹头；选择大小形状合适的负极板（15Kg以下的小儿应选用婴幼儿极板），检查导电胶的粘附力。 （三）评估病人皮肤，选择合适的部位安装负极板并将极板插头连接至机器。 合适的安装部位：尽量靠近手术部位（但不少于15cm）的平坦的血管丰富的肌肉区；局部皮肤剔除毛发并保持清洁干燥；与手术部位不可左右交叉；距ECG电极15cm；环路中不能有金属移植物、起搏器、心电图电极；极板的长边接近高频电流的来向。

westernblot实验详细步骤(1)

Western Blot实验技术一、制胶 SDS-PAGE分离胶配方表 1、检查制胶器是否漏水，吸干玻璃中水分

2、配置分离胶，加入玻璃板中（注意：不能有气泡和杂物），距离玻璃上口1.5mL停止加胶。 3、再加ddH2O或异丁醇水封除去气泡，凝胶后倒掉水，吸干水到浓缩胶插梳。 二、上样 1、先在内槽加满电泳液才可以拔梳子。 2、拔梳子时垂直向上拔出，不可左右摇晃梳子。 3、拔完梳子后观察梳子孔，是否有缺口和歪，用针头拨正。 4、上样时从左到右依次上样。 5、若上样组不多时，左右第一孔不加样。 6、要预留Marker的上样孔。 三、电泳 四、转膜

PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。 （转膜缓冲液：需4度预冷，现配现用，不能放太久。） 1、转印滤纸：全胶长8.5cm，宽5.5cm，需剪裁成7层滤纸，压平后约3mm。需在转膜缓冲液中平衡浸泡备用。 2、海绵垫：在转膜液中平衡浸泡备用。 3、PVDF膜：剪裁8.5cm*5.5cm ，需在甲醇中浸润2min（活化膜上正电基团），然后在转膜缓冲液中平衡浸泡备用。 4、凝胶：凝胶也需要在预冷的转膜转膜缓冲液中平衡浸泡3－5分钟。否则在转膜过程中会出现皱缩，导致出现转移的条带变形。 三明治夹心法：负极（黑）-海绵垫-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-海绵垫-正极（白） 转膜时间：通电恒流，60V，一个槽100mA左右，1h

（注意：在操作过程中用玻棒赶走气泡。 装置转膜仪时注意黑对黑（负对负），白对红（正对正）。 装置运行时需冰浴。） 五、封闭 在进行抗体杂交之前，需要先对转印膜进行封闭，以防止抗体对非转印蛋白区域的非特异性吸附。 封闭一般采用异源性蛋白质或去污剂，本实验室常用的有5%BSA，10%脱脂奶等，至于选择哪一类封闭液，首先应考虑与检测目的相适应（做l酪氨酸磷酸化时不推荐non-fat milk 封闭）。 1、将脱脂奶粉封闭液（1xTBST:脱脂奶粉=20mL：2g一块膜用量。牛血清蛋白、5%BSA 效果更好）倒好。 2、将PVDF膜取出放入封闭液中，盖子改好。 3、封膜一般常温1-2小时即可，也可4℃封闭过夜。 六、一抗 抗体反应主要采用间接法: 即先加入未标记特异性一抗与膜上抗原结合后，再加入标记的二抗进行杂交检测，标记二

Southern blot实验方法和操作步骤

Southern Blot原理及实验方法 Southern Blot原理及实验方法原理： 将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。 用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。 试剂和器材 一、试剂 变性液：1.5mol/L NaCl，0.5mol/L NaOH。 中和液：0.5mol/L Tris-HCl (pH=7.5)，1.5mol/L NaCl。 20×SSC：3mol/L NaCl，0.3mol/L 柠檬酸钠。 以上溶液均在100Kpa灭菌20分钟。 2×SSC：用无菌移液管吸取20×SSC溶液5mL，加无菌水45mL。 6×SSC：用无菌移液管吸取20×SSC溶液15mL，加无菌水75mL。 二、器材 22cm×15cm瓷盘 操作方法 1. 在琼脂糖凝胶上电泳分离DNA。取出凝胶，切去边缘多于部分，EB染色，在紫外灯下照相（放一标尺，可从像片中读出DNA迁移的距离）。 2. 将凝胶置于200mL变性液中，浸泡45分钟，并温和地不断振荡，使凝胶上的ds-DNA转变为ss-DNA，然后用重蒸水冲洗凝胶几次。 3. 用中和液浸泡凝胶并不断地振荡45分钟，将凝胶中和至中性。防止凝胶的碱性破坏硝酸纤维膜。 4. 取一个瓷盘，在底部放一块玻璃板（或一块海绵）使盛器内的20倍SSC转移滤液低于玻板表面，在玻板表面盖一张3mm的二号滤纸，滤纸两边浸没于20倍SSC溶液中，在玻璃和滤纸之间，赶掉所有的气泡。

高频电刀使用技术规范与操作流程

高频电刀使用技术规范与操作流程 高频电刀是利用高频电流对人体组织进行切割、止血的一种高频大功率的电气设备。它具有止血快、出血少、术后恢复快等优点，广泛应用于临床，同时使用中也增加了安全隐患。近年来随着高频电刀及附件的发展，安全隐患已明显减少或避免，但如果未按规程进行操作，容易造成意外伤害。 一、基本构造 1. 单极电刀：主机，电刀笔，负极板，脚踏控制开关。 2. 双极电刀：主机，双极镊，脚踏控制开关。 二、工作原理 1. 单极电刀: 利用RF（Radio Frequency）射频原理，将高频和高压的电流，通过刀笔，作用到病患部位，利用刀笔尖端部位对所接触的组织产生的瞬间烧灼现象，以达到切割或凝血的效果。而作用到人体的电流，则必须经过回路负极板流回高频电刀内部，以形成完整的回路。 2. 双极电刀:通过双极镊子的两个尖端向机体组织提供高频电能，使双极镊子两端之间的血管脱水而凝固，达到止血的目的。 三、优点 1. 切割速度快、止血效果好、操作简单、安全方便。 2. 与传统采用机械手术刀相比，在临床上采用高频电刀可大大缩短手术时间，减少患者失血量及输血量，从而降低并发症及手术费用。

3. 与其他电外科手术器（如激光刀、超声刀、水刀、半导体热凝刀等）相比高频电刀适应手术范围广，容易进入手术部位，操作简便，性能价格比合理等优越性。 四、应用范围 1. 单极电刀:可同时进行切割和凝血,目前不仅广泛应用在直视手术中,如普通外科、心胸外科、五官科、妇产科、泌尿外科等临床外科,还可应用于各种内窥镜手术中,如腹腔镜、前列腺切镜、膀胱镜、宫腔镜等手术中;安装心脏起搏器的病人禁止或慎用单极电刀。 2. 双极电刀:主要是凝血功能,切割功能基本没有,适用于精细组织和部位的手术,如神经外科的各类手术及整形外科、耳鼻喉科和骨科的颈椎、腰椎、脊髓手术,并适用于安装心脏起搏器的病人。 五、操作流程 1、单极电刀： （1）连接电源线，负极板线路。 （2）负极板粘贴于患者肌肉丰富的合适部位。 （3）开机自检，根据手术选择合适的输出功率。 （4）连接电刀笔线路，使用手控或脚控开关。 （5）选择切割方式，根据手术需要调节切割功率和凝血功率. 。 第2 / 5页（6）使用完毕，将数字键值调到最低值，先关主机电源开关,再拔电源插头。.

Westernblot基本操作步骤

W e s t e r n b l o t基本操作步骤 一、细胞蛋白的提取 弃去培养基，加入预冷的PBS洗一遍，加入的RIPA裂解液（含1mM PMSF(100×)，每10ml加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂各一片，六孔板每孔150-250μl，60mm×15mm 培养皿300-400μl，），于冰上裂解约5分钟，裂解总液12000rpm离心10 min。取上清，用BCA法测定蛋白浓度。用于western blot的蛋白样品取一定量加4×loading buffer，10×reducing，再用裂解液补齐到所需上样体积。离心，使蛋白沉底。将EP管于沸水中煮5min，变性，之后再离心后准备上样。 二、BCA法测蛋白浓度操作步骤 将蛋白标准配制溶液溶解蛋白标准（BSA），配制成5mg/ml的蛋白标准溶液，10μl 分装，-20℃冷冻保存。 完全溶解蛋白标准品，取10μl用PBS稀释至100μl，使终浓度为0.5mg/ml。 据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的标准品孔中，加稀释标准品的溶液补足到20μl。 加适当体积样品到96孔板的样品孔中（可以通过预实验摸索稀释倍数），加PBS 到20μl。 各孔加入100μl BCA工作液，37℃放置30分钟。 测定580nm条件下吸光度。根据标准曲线计算出蛋白浓度。 三、Western blot基本操作步骤 1、溶液配制： ①Runnig Buffer(1×)：SDS Runnig Buffer（20×）50mL，加MiliQ水至1L； ②Transfer Buffer(1×): Transfer Buffer(10×)100mL,甲醇200mL（20%，v/v），加MiliQ水至1L； ③TBST缓冲液 1M Tris·HCl（pH7.6）：60.5g Tris-base，加入约30ml浓盐酸，调PH至7.6，加MiliQ 水至500ml。 TBS缓冲液（10×）：1M Tris·HCl 100ml+80g NaCl加MiliQ水1L TBST缓冲液（1×）：TBS缓冲液（10×）100ml+0.5ml Tween-20（0.05%，v/v），加MiliQ水至1L。 ④封闭液：5% BSA（5g/100ml，称取1g BSA至20ml TBST，充分混匀溶解） 2、样品准备与加样 ①用4×SDS loading buffer, 10×reducing与蛋白质样品混合，并将此EP 管放在水浴锅中沸水煮5min，使蛋白质变性。 ②将预制胶固定到电泳装置中，并在装置中加满Runnig Buffer(1×)，内槽加入0.5mL 抗氧化剂，小心拔下梳子； ③向上样孔中加入一定体积的蛋白样品（总蛋白量20μg以上）。向marker孔中加入2.5μl marker（按照实验要求设定marker量），向空白孔中加入一定体积的加样缓冲液(loading buffer)。注意采用相同（或相近）的上样体积，以保证蛋白的各带宽度相同。防止体积较大的上样孔中的蛋白质将向相邻的泳道扩散。 3、电泳

Southern杂交实验

Southern 杂交实验 Southern 杂交的原理是将待检测的DNA分子用限制性内切酶消化，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按照其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其他标记物标记的DNA探针进行反应。如果待测物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补原理进行结合，游离的探针洗涤后用显影或其他合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。 一、溶液配制 (1)20 X SSC(1000 mL) : 组分浓度 3.0M的Nacl，0.3M的柠檬酸钠 NaCl 175.32g 柠檬酸钠88.26g NaOH调PH值到7.0，高温高压灭 (2)洗涤缓冲液Washing buffer 200ml 组分浓度：0.1M Maleic acid, 0.15M Nacl; pH 7.5(20℃); 0.3%(v/v) Tween20. Maleic acid：2.32g Nacl： 1.75g Tween20 0.6ml NaOH固体约1.7g调Ph值7.5 (3)马来酸缓冲液Maleic acid buffer 200ml 组分浓度：0.1M Maleic acid, 0.15M Nacl; pH 7.5 (20oC) Maleic acid：2.32g Nacl： 1.75g Tween20 0.6ml NaOH固体约1.7g调Ph值7.5 (4)检测缓冲液Detection buffer 100ml 组分浓度：0.1M Tris-HCl, 0.1M Nacl, pH 9.5(20oC) Tris 1.21g, NaCl 0.584g

最详细的WesternBlot过程步骤详解

最详细的W e s t e r n B l o t 过程步骤详解

最详细的W e s t e r n B l o t 过程步骤详解 Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】

Western Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答) Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类 i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL ECF iv.底物DAB呈色 三、主要试剂 四、主要步骤 五、实验常见的问题指南 1.参考书推荐 2.针对样品的常见问题 3.抗体 4.滤纸、胶和膜的问题 的相关疑问 6.染色的选择 7.参照的疑问

8.缓冲液配方的常见问题 9.条件的摸索 10.方法的介绍 11.结果分析 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 二、分类 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。

Southern Blot操作流程

Southern Blot 操作流程 1、哺乳动物基因组DNA 的提取（或用OMEGA 试剂盒E.Z.N.A.TM Tissue DNA Kit ） 1、 取约30mg 样品，加入600 ul SNET ，再加入12 ul （20.2mg/ml ）的蛋白酶 K ，使蛋白酶K 的终浓度为400ug/ml ； 2、 55℃振荡过夜； 3、 加入0.6 ul RNaseA ，室温下孵育10 min ，后置于65℃ 10 min ； 4、 加入300 ul Tris 饱和酚，288 ul 氯仿和12 ul 异戊醇，室温下振荡30 min ； 5、 17,000 g 离心5min ，转移上层水相（600 ul ）至一新的离心管； 6、 加入等体积（600 ul ）的异丙醇沉淀DNA ，于4℃下13,250 g 离心15 min ； 7、 小心除去异丙醇，加入1 ml 70%的乙醇。离心5 min 后除去乙醇，室温下干 燥15~20 min ； 8、 加入100 ul TE ，使核酸沉淀溶解。 一、 酶切 1、 拷贝数的计算 哺乳动物基因组全长3.0×109个碱基对，按插入基因单拷贝计算如下： () g plasmid of mass bp bp DNA of Insertion μ10100.39 = ? 2、 酶切体系 基因组DNA 10 ug 10*Buffer 10 ul 酶(10U/ul) 10 ul Total 100 ul 3、 混合后置于适宜酶切温度进行酶切反应； 4、 对酶切产物进行纯化，用30 ul TE 洗脱； 5、 制备1%浓度的琼脂糖凝胶（不加EB ）； 6、 将纯化后的酶切产物敞开盖子于70℃放置15 min ，以除尽残留乙醇和消除

电子生产企业关键业务流程

杭州××网络技术有限公司 组织绩效提升工程 咨询项目报告 （02－组织管理体系） 博脉国际咨询有限公司 二○○七年五月二十八日

目录 业务管理流程 (8) 一、...................................................................... 常规产品实现流程8二、...................................................................... 新品订单受理流程11三、...................................................................... 研发项目管理流程14四、.......................................................................... 发货管理流程18

五、...................................................................... 顾客投诉处理流程22六、...................................................................... 客户信用评价流程25七、...................................................................... 客户索赔处理流程28八、.................................................................... 客户满意度调查流程31九、........................................................................ 供应商评审流程34十、.......................................................................... 采购实施流程

WB操作步骤-自己整理

Western Blot 相关实验方法与试剂（湿转法） 人工肝实验室学习姚瑶 （一）目的蛋白提取： （1）单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1、倒掉细胞培养液，加入Hanks液洗涤一次后倒掉，根据所用细胞决定是否用胰酶消化，加入适量（约5ml）新鲜细胞培养液后，将贴壁细胞吹起，并转移至4支离心管内，配平后，1500转离心10min。 2、倒掉上清，用4度预冷PBS溶液洗涤沉淀，1500转离心10min。 共洗三次，每次十分钟。 3、倒掉上清，吸净，每管加入50ul 细胞裂解液RIPA，吹散，加入后由于DNA的释放可迅速变粘稠，故应尽快转移至1.5ml EP 管内，-20℃裂解30min。 4、超声波细胞裂解仪上将各管裂解15s。（可不做） 5、4℃，12000转离心10min。 6、将上清转移至0.5ml EP管中，每管100ul，冰浴待用。 （2）组织中总蛋白的提取： 1、取约100mg肝组织于研磨器内，加入500ul 细胞裂解液RIPA，研磨后吸出于1.5ml EP管内，再加入500ul RIPA，研磨后吸出于上EP管内。冰上裂解30min。

2、配平后，4℃，14000转离心10min。 3、将上清分装于0.5ml EP管内，每管100ul，冰浴待用（二）蛋白含量的测定： 1、稀释标准品：10ul标准品C液+90ul PBS溶液，混匀。 2、按0、1、2、4、8、12、16、20ul将稀释后的标准品加入于96孔板内，并用PBS将各孔补足20ul。 3、将第2、3排96孔板分别加入样品1ul、0.5ul，（可采用倍比稀释法），并用PBS将各孔补足20ul。 4、配制工作液：按A液：B液=50：1配制适量工作液，每孔加入200ul。 5、37℃水浴30min。 6、酶标仪测定各孔OD值（A570，Mode1）。 7、绘制标准曲线，计算样品蛋白浓度。 （三）SDS-PAGE电泳： （1）清洗玻璃板 （2）灌胶与上样： 1、配胶：根据目的蛋白的大小，决定分离胶的浓度。

高频电刀的操作流程和注意事项

行业资料：________ 高频电刀的操作流程和注意事项 单位：______________________ 部门：______________________ 日期：______年_____月_____日 第1 页共8 页

高频电刀的操作流程和注意事项 一电刀的结构和工作原理。 1.结构与配件由主机、电刀笔、脚控开关和回路电极（负极板）组成。 使用负极板的作用：可构成电流回路，同时降低极板处的电流密度，避免电流离开病人后返回高频电刀时继续对组织加热而灼伤病人。 2.工作原理利用475～480KHz高频电流在电刀的刀尖形成高温 和放电，使组织快速脱水、分解蒸发，血液凝固，实现切割组织和凝血作用。 二使用电刀的禁忌症：安装心脏起搏器的病人禁止使用高频单极电刀或咨询心内科医生。三电刀安全使用的操作程序和注意事项（一）首先评估病人是否适合使用电刀，根据手术选择合适品牌的电刀，检查电源、电极线路有无断裂和金属线外露。 （二）选择并检查负极板：检查导线和夹头；选择大小形状合适的负极板（15Kg以下的小儿应选用婴幼儿极板），检查导电胶的粘附 力。 （三）评估病人皮肤，选择合适的部位安装负极板并将极板插头连接至机器。 合适的安装部位：尽量靠近手术部位（但不少于15cm）的平坦的血管丰富的肌肉区；局部皮肤剔除毛发并保持清洁干燥；与手术部位不可左右交叉；距ECG电极15cm；环路中不能有金属移植物、起搏器、心电图电极；极板的长边接近高频电流的来向。 不合适的安装部位：皮肤皱褶和骨性隆起、疤痕、脂肪较厚、身体 第 2 页共 8 页

负重部位、液体积聚部位。 安装负极板时要注意：极板和皮肤要紧密连接；保持极板平整，不能切割和折叠；消毒和冲洗时避免浸湿极板。 （四）连接电刀笔与机器，开机自检，显示负极板安装正确无报警指示后，调节输出功率。 （五）使用过程中的注意事项和故障排除方法。 1.避免旁路灼伤：病人的肢体用布类包裹后妥善固定，避免皮肤对皮肤的接触（如患者手臂与身体间），不可与接地的金属接触，与金属床之间至少保持4cm厚度的干燥的绝缘层。 2.避免设备漏电或短路：勿将电线缠绕在金属物品上；有地线装置者要连接，如威力电刀。 2.输出功率尽可能小，使用小儿负极板输出功率要控制在常规输出功率的1/3以内。每次激励时间小于10秒，间隔应大于30秒。 3.病人发生移动后再次检查负极板接触面积或有无移位。 4.预防环境火警：避免在有易燃易爆和挥发性气体、高氧环境环境中使用电刀（尤其是胸部或头部手术），在气道部位使用时应暂时移开氧气。 5.预防意外烧伤：尤其在使用碘酊、酒精消毒皮肤时；肠道手术禁忌使用甘露醇灌肠，肠梗阻的病人慎用电刀，以免爆炸。 6.避免操作不当导致意外伤害 注意事项：①保持手术巾的干燥。 ②不接触目标组织时避免使用电刀。电刀笔应放于绝缘容器内。 ③尽量使用直接电凝止血法。如使用间接凝血法，应用美国威力电刀只能选CUT键， 第 3 页共 8 页

SouthernBlot印记杂交常见问题解析

Southern Blot印记杂交常见问题解析 1、针对不同的实验材料，southern杂交实验难度有差异么？答：不同的实验材料，在进行试验过程中难度差异很大，例如玉米、 小麦、葡萄的Southern杂交检测难度要比普通的材料要大。 (1)、物种本身的基因组较大（例如小麦），检测操作难度大 (2)、材料本身含有高糖多酚（例如葡萄）严重影响酶切操作 (3)、物种品系复杂（例如玉米），在基因组信息研究层面还不透彻。 2、核酸质量对southern杂交实验的影响 答：核酸质量对实验的影响是直接的，既要求客户提供的总量足够——实验消耗（上样量），又要求保证质量——按要求准备材料。 上样量指的是基因组DNA酶切消化后，回收后的DNA片段的量。根据 不同物种的基因组大小不同，上样量也有所区别。基因组越大，上样 量越多。例如，拟南芥大概需要3ug ，酵母3ug，人8ug，小麦15ug。酶切消化之后不能直接上样，需要回收纯化。回收会有损失，最多能 损失一半，所以需要客户提供足够量的样品，一般要求至少20 ug的 基因组DNA。（以上上样量均为一个泳道） DNA 样品一般对 OD 值和浓度有如下要求：OD260/280=1.8～2.0， OD260/230＞2.0，浓度≥100 ng/ul 。同时，需要对 DNA 样品进行琼 脂糖凝胶电泳，电泳结果显示该 DNA 样品无蛋白质和 RNA 等物质污染，无降解弥散，条带清晰。（如图所示）

3、探针设计是怎么回事，有哪些原则？ 答：探针就是与待测目的基因序列同源的一段地高辛标记的DNA序列，可以和酶切后的基因组片段特异性的结合。探针设计有如下几个原则: (1)、长度适中。探针的片段长度一般控制在300-1000bp，探针太长时会导致非特异性结合的概率增加，探针太短时，探针结合的地高辛标 记物太少，会导致发光信号减弱。 (2)、特异性强。最佳的探针序列是仅与目的基因同源，与整个基因组 序列的同源片段低于30%。 (3)、ATGC含量均匀，无发卡结构和高度重复序列。

成功企业业务流程管理

第1章 业务流程管理 对于21世纪的企业来说，流程将非常关键。优秀的流程将使 成功的企业与其他竞争者区分开来。 --- M ichael Hammer 教授 环顾世界范围内的成功企业，它们共同的特点是不断地审视和改进自身的业务流程，不断发展员工的技能和能力，不断将新技术应用到服务

或（和）生产的实践中，以便不断提高企业的运营

效率，并最终获取持续的竞争优势。 业务流程管理被认为是这些企业的关键成功因素，那么什么 是流程管理？为什么要流程管理？我们的企业需要流程管理 吗？等等，这些问题将在本章为您解答。 1.1 流程管理是什么 1.1.1 关于流程 流程是一组为客户创造价值的相关活动。企业的流程是对业 务运作的规范，可以不断地总结和固化优秀的经验。 图1-2 个人难4：独自提供值增值勺是增起柞用的是增值的流程 1. 流程的特点 “流程”的六个要素: 输入资源、活动、活动的相互作用 结构）、输出结果、顾客、 价值 若干活动 输入资源 图1-1 “流程”的六个要素素 按照流程的定义，企业的活动几乎都能看做是大大小小的流 程。也就是说，个人难以独自提供增值，起作用的是增值的流程, 如图 1-2所示。 输岀结果 顾客 ■ --- 相互作用 如图 1-1所示。 我满意， 是因为流程为 我创造了价值 _ — —

目标性有明确的输出（目标或任务）。这个目的可以是一次满意的客户服务；也可以是一次及时的产品送达，等等。 内在性包含于任何事物或行为中。所有事物与行为，我们都可以用这样的语式来描述：“输入的是什么资源，输出了什么结果，中间的一系列活动是怎样的，输出为谁创造了怎样的价值。” 整体性至少由两个活动组成。流程，顾名思义，有一个“流转”的意思隐含在里面。至少两个活动才能建立结构或者关系，才能进行流转。 动态性由一个活动到另一个活动。流程不是一个静态的概念，它按照一定的时序关系徐徐展开。 层次性组成流程的活动本身也可以是一个流程。流程是一个嵌套的概念，流程中的若干活动也可以看做是“子流程”，可以继续分解为若干活动。 结构性流程的结构可以有多种表现形式，如串联、并联、 反馈等。往往，这些表现形式的不同，给流程的输出效果带来很大的影响。 2. 流程的作用 优秀的流程能够提升企业的核心竞争力。流程是对业务运作的规范，可以不断地总结和固化优秀的经验。 1.1.2 流程管理是什么 1. 流程管理的定义 业务流程管理（BPM简称流程管理），是一种以规范化地构造端到端的卓越业务流程为中心，以持续地提高组织业务绩效为目的的系统化管

高频电刀的操作流程

高频电刀的操作流程 1. 首先评估病人是否适合使用电刀，根据手术选择合适的电刀，检查电源、电极线路有无断裂和金属线外露。 2. 选择并检查负极板：检查导线和夹头；选择大小形状合适的负极板（15Kg以下的小儿应选用婴幼儿极板），检查导电胶的粘附力。 3. 评估病人皮肤，选择合适的部位安装负极板并将极板插头连接至机器。 合适的安装部位：尽量靠近手术部位（但不少于15cm）的平坦的血管丰富的肌肉区；局部皮肤剔除毛发并保持清洁干燥；与手术部位不可左右交叉；距ECG电极15cm；环路中不能有金属移植物、起搏器、心电图电极；极板的长边接近高频电流的来向。 不合适的安装部位：皮肤皱褶和骨性隆起、疤痕、脂肪较厚、身体负重部位、液体积聚部位。 安装负极板时要注意：极板和皮肤要紧密连接；保持极板平整，不能切割和折叠；消毒和冲洗时避免浸湿极板。 4. 连接电刀笔与机器，开机自检，显示负极板安装正确无报警指示后，调节输出功率。 5. 使用完毕，正确关机和揭除负极板，检查极板下方的皮肤，

注意事项 1. 避免旁路灼伤：病人的肢体用布类包裹后妥善固定，不可与接地的金属接触，与金属床之间至少保持4cm厚度的干燥的绝缘层。 2. 避免设备漏电或短路：勿将电线缠绕在金属物品上。 3. 输出功率尽可能小，使用小儿负极板输出功率要控制在常规输出功率的1/3以内。每次激励时间小于10秒，间隔应大于30秒。 4. 病人发生移动后再次检查负极板接触面积或有无移位。 5.预防环境火警：避免在有易燃易爆和挥发性气体、高氧环境环境中使用电刀（尤其是胸部或头部手术），在气道部位使用时应暂时移开氧气。 6.预防意外烧伤：尤其在使用碘酊、酒精消毒皮肤时；肠道手术禁忌使用甘露醇灌肠，肠梗阻的病人慎用电刀，以免爆炸。 7.避免操作不当导致意外伤害 ①保持手术巾的干燥。 ②在常规功率下，使用效果差时，不可盲目加大功率，而 应首先检查负极板与病人的接触及连情况；功率应由小 到大逐渐调试。 ③禁止将报警系统消声，有异常声音发出时，应立即停止 使用并检查原因。