市场上-86°C超低温保存箱型号

-86°C超低温保存箱DW-86W150型号介绍超低温保存箱，又称超低温冷藏箱、超低温冷柜、超低温冰箱等，温度范围从-60度到-180度不等，超低温保存箱可适用金枪鱼的保存、电子器件、特殊材料的低温试验，也是保存血浆、生物材料、疫苗、试剂、生物制品、化学试剂、生物样本等不可或缺的冷冻设备，我国超低温产品覆盖率极低，市场潜力巨大。

-86℃超低温保存箱采用微电脑控制，数码显示温度，箱内温度-40℃~-86℃可调，高低温报警控制，可根据需要设定报警温度点；采用多种故障报警，三种报警方式，确保使用安全，设置开机延时、停机间隔等保护功能，键盘锁定与密码保护功能，防止随意调整参数。

在制冷系统上，-86℃超低温保存箱采用优化复叠制冷技术，独特的蒸发冷凝换热系统设计，制冷能力更强；采用进口国际名牌压缩机和国际名牌EBM风扇电机，制冷快，噪音低；采用无氟发泡、无氟制冷剂，绿色环保，呵护环境；超厚保温层，内外双层门，四层密封结构设计，锁住冷气，保温效果好，节省电能；在人性化设计方面，采用安全门锁设计，防止随意开启；高低电压自动补偿功能，安装压力平衡阀，开门更省力；专利设计抽屉式除尘过滤网，维护简单方便。测温孔设计，便于进行温度检测；可选配温度记录仪，冻存盒、冻存架，重型脚轮与止动调节螺钉设计，移动轻松，固定更方便，目前，该产品已经被科研院所、疾病防控、大专院校、生物工程、医院、血站、远洋渔业和电子化工等领域所使用，用来保存红细胞、白细胞、皮肤、骨骼、细菌、病毒、精液、生物制品、远洋制品等，电子器件

及特殊材料的低温试验等，由于质量过硬、性能优越、节能环保、制冷能力强，深受用户欢迎。

-86℃超低温保存箱DW-86W150

深冷技术设备属于高度定制化的非标设备，在工艺流程、产品性能参数等方面需具备跨学科的技术研发能力，对生产企业的技术能力要求较高。进军医用冷链设备领域以来，依托国家级企业技术中心的坚强后盾和旗下的专家智囊团，在深冷技术、恒温技术、智能技术、数控技术、节能环保技术等方面不断取得新的突破，尤其是-180℃、-150℃、-86℃超低温保存箱无论是深冷技术、制作工艺还是性能、质量均达到国际领先水平，使得深冷核心技术和竞争力不断得到提升，成为名副其实的深冷技术专家。

作物种质资源保存现状及发展方向

作物种质资源保存现状及发展方向 我国是世界上最古老的农业国之一，，有丰富的栽培和野生植物资源，被认为是栽培植物遗传多样性中心之一。据初步统计，我国重要栽培作物有600 多种，其中粮食作物30 多种，经济作物约90 种，蔬菜120 余种，花卉140 余种，果树约150 种，牧草约50 种，绿肥约20 种。在现有作物中起源于我国或在史前已栽培的有237 种。但由于人口迅速增长等原因，我国农业植物资源遭到严重的人为破坏和侵蚀，如野生稻、野生大豆及小麦近缘野生植物在原生长地已很难找到；外来种侵袭使土生土长的植物物种数减少，加上大量病虫天敌的减少，使作物病虫害加重；农业机械化和良种的大面积推广种植导致了大量地方品种被淘汰。在生产上种植的许多作物的骨干品种种质基础日趋狭窄，存在遗传脆弱性和突发毁灭性病害的隐患。为此，近20 年来，作为拓宽育种遗传基础的源头，种质资源的收集、保存及研究一直受到有关部门的高度重视，并取得令人瞩目的成就。种质资源保存过程中需要使用到的仪器有自动数粒仪。 如今，作物种质资源保存利用体系已初步建立，根据作物繁殖方式等生物学特性，实行种质资源原生境保存与非原生境保存相结合的保存策略。原生境保存是指在植物原来的生态环境中建立保护区或保护地，使重要作物野生种及野

生近缘植物就地进行自我繁殖以保存种质。非原生境保存，即将种质保存于该植物原产地以外的地方，包括在低温种质库中进行的种子体保存、在种质圃中的植株保存、在试管苗种质库中的组织培养物保存等。 种子保存技术有好多种，如低温储存技术。利用低 温种质库保存种子，除贮藏温度较低外，作为种质保存的种子，还须经过生活力检测、干燥脱水、密封包装等一系列入库保存前处理。还有离体种质保存技术，许多植物种质资源无法通过种子贮藏达到资源保存的目的，如椰子、油棕、咖啡等是顽拗型种子，它们或不耐干燥脱水和低温贮藏，或作物不产生种子，这种植物不能采用低温库种子贮藏的方式，只能通过种质圃，以植株或块根、块茎等活体方式在田间保存。它包括试管苗组织培养技术和超低温保存技术。 随着人们对种质资源保护的不断认识，国家对种质 资源的研究也不断深入，从“七五”以来，作物种质资源收集保存一直被列入国家科技攻关项目，在1984 年建成我国自行设计建设的国家种质库1 号库（后改为国家种质分发交换库），又在在1986 年和1992 年建成了国家长期库和青海复份长期库。可见国家对种质资源保存的重视。通过国家的科技攻关，我国种质资保存技术研究已进入一个新的阶段，在国家库已建立一套先进的管理和种子入库前处理技术。通过系统地研究，解决了各种作物的安全有效干燥条件

超低温保存技术的相关机理综述

二甲基亚砜 二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，分子式为（CH3）2SO，常温下为无色无臭的透明液体，是一种吸湿性的可燃液体。具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物，被誉为“万能溶剂”。 同时，氯化铬，氯化锰等过渡金属卤化物与氯化钾，氯化钠等卤化物在DMSO中有一定溶解度，故可以应用在有机电化学中。 二甲基亚砜广泛用作溶剂和反应试剂，特别是丙烯腈聚合反应中作加工溶剂和抽丝溶剂，作聚氨酯合成及抽丝溶剂，作聚酰胺，聚酰亚胺和聚砜树脂的合成溶剂，以及芳烃，丁二烯抽提溶剂和合成氯氟苯胺的溶剂等。除此之外，在医药工业中二甲基亚砜还有直接用作某些药物的原料及载体。二甲基亚砜本身有消炎止痛，利尿，镇静等作用，亦誉为“万灵药”，常作为止痛药物的活性组分添加于药物之中。 DMSO是二甲基亚砜，用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。 DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。 但研究表明，DMSO存在一定的毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。 DMSO存在一定的毒性作用，用的时候要避免其挥发，要准备1%-5%的氨水备用，皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤. 在防冻剂中的应用 纯DMSO 的冰点是18.45℃，含水40%的DMSO在-60℃不冻，而且DMSO与水、雪混合时放热。这种性质使DMSO可作为汽车防冻液、刹车油、液压液组分。乙二醇防冻液在超过-40℃低温时已不适用。而且比DMSO沸点低，有毒，易生产气阻。DMSO 防冻液在北部严寒地区用于除冰剂，涂料、各种乳胶的防冻剂，汽油、航煤的防冰剂，骨髓、血液、低温保存的防冻剂等。 在细胞冻存中的应用 二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂。在深低温（零下200度）保存细胞时冻存过程中，为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤，有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制。复苏时动作要快，尽快洗掉二甲基亚砜，否则会造成对细胞严重的毒性。二甲基亚砜（DMSO）是目前最好的细胞冻存保护剂，但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。研究结果表明，培养液中DMSO 浓度为10%时，细胞生长抑制率近100%；1‰浓度时抑制率为35%，即使是0.04‰的浓度，DMSO对细胞的生长也有不利的影响。

杨树种质资源收集保存与利用项目可行性实施报告

第一章总论 1.1 项目提要 1.1.1 项目名称：中卫市树种质资源收集保存与利用项目 1.1.2 项目主管单位： 1.1.3 项目建设单位： 1.1.4 法人代表： 1.1.5 技术依托单位： 1.1.6 项目性质：新建 1.1.7 建设期限及进度：建设期3年（2010年～2012年） 1.1.8 项目建设地点：中卫市林场 1.1.9 项目建设目标 本项目以多年来我区林业生态建设的主要树种——树为种质资源收集、保存及利用对象，以区外丰富的树种质资源为基础，以我区当前成熟的林木种苗工程建设中积累的先进集成技术为手段，以收集、保存及繁育利用树种质资源为目的，计划利用3年时间，在中卫市沙坡头区为我区建成一处资源丰富、种类齐全、资料完备、管理科学的树种质资源收集保存基地32hm2。 通过项目实施，开展适应我区山川沙不同地类中树种质资源收集、保存及利用研究，着力构建全区树种质资源的保护和利用体系，为我区六个百万亩林业生态建设提供试验研究的苗木繁育基地，为全区树种质资源的保护、开发及利用提供技术支撑；积极开展引进收集、繁育示、试验推广，实行集约化生产、标准化经营，为我区“六个百万亩”生态林业建设和自治区党委、政府确定的黄河金岸绿化工程提

供大量适合我区立地类型的优质树苗木，同时满足中冶美利纸业每年对优质速生树苗木的需求。项目建成后，可收集、保存树种质资源苗木14种（品种），项目建成后每年可提供良种苗木100万株，优质穗条120万根。 1.1.10 项目建设容及规模 1.1.10.1 种质资源调查与收集工程 各种收集与调查仪器共13台（套），收集、保存区外具有优良或特异性状的树种质资源。 1.1.10.2 种质资源繁育与保护工程 种质资源收集区5hm2；试验区4hm2；采穗圃8hm2；良种繁育圃10hm2；示区5hm2；日光温室2000m2；炼苗场2000m2。 1.1.10.3 种质资源研究与开发工程 建筑工程460m2，包括实验室、检验室、插穗处理室、档案室、标本室、办公室、库房等；研究试验设备3套，包括试验设备、检验设备、储藏设备。 1.1.10.4 辅助工程 包括生产用车、办公设备、森林病虫害防治设备、森林防火设备等，及项目区生产道路硬化、标牌等配套设施。 1.1.11 项目投资规模与资金来源 项目工程建设总投资为557.55万元。申请中央财政预算专项投资446.04万元，占总投资的80%，地方财政配套资金111.51万元，占总投资的20%。 1.1.12项目效益 1.1.1 2.1社会效益

农作物种种质资源保护与利用

“农作物种种质资源保护与利用” 项目实施的主要经验、问题和建议 一、项目实施的主要经验 1、对项目进行全面协调和跟踪管理是项目绩效目标全面完成的基本保证。本项目由农业部农业司主持，由中国农科院作科所牵头。项目参加单位包括国家长期库、复份库和10个中期库、32个国家种质资源圃，共38个科研、教学单位。项目涉及粮食作物、经济作物、蔬菜、果树、牧草绿肥等各类作物。项目内容包括资源收集（野外考察、国内征集、国外引种）、整理编目（形态及农艺性状观察、编目）、入库入圃（入中期库、长期库及资源圃）、鉴定评价（品质、抗病虫、抗逆境、精准鉴定或多项鉴定评价）、种质监测及繁殖更新（库圃保存种子或植株的活力监测及繁殖更新）、分发利用（数据库建立与完善、优异种质资源发布、田间展示、分发供种、信息反馈）等六个方面的若干内容，涵盖了种质资源保护和利用主要基础性工作。项目涉及资源、育种、植保、生物、生化、分类等多个学科，是一项重大的系统工程，搞好组织协调与合作，是项目目标完成的重要关键。作科所（原品资所）在以往多年种质资源研究中形成的资源保存和研究工作体系和网络，为本项目目标的完成提供了实施平台和基础，加上牵头单位在已有经验的基础上，加强了组织协调，不定期检查监督和年度会议检查，对项目顺利实施和绩效目标的完成发挥了重要作用。 2、相关技术规范的建立和完善为项目的实施和质量保证提供了技术依据。本项目实施前，各承担单位利用国家科技基础工作平台项目完成了《农作物种质资源技术规范》的制订和编写，出版了110多种作物资源描述规范和数据标准，一些作物还制定了鉴定评价行业标

准。这些规程和标准的制定，为本项目的顺利实施和质量提高提供了技术依据。由于鉴定评价标准统一，方法得当，结果准确，质量较高，获得了一批性状突出且可利用的优异种质；由于收集、保存、监测、更新均有规程和标准作依据，收集及更新入库种质质量大幅度提高。 3、项目重视公益性和服务性，强化了优异种质的示范展示，促进了资源的利用效率。项目强调了参加人员的服务意识，扩大优异资源的分发利用范围，增加了优异资源展示规模，通过展示和交流，吸引了更多利用者索取优异种质利用的积极性，同时也宣传了种质资源多样性保护的重要意义，争取到社会更多方面对种质资源事业的支持。 二、项目存在问题与不足 1、项目经费力度太低，影响到资源保护与利用基础工作的正常开展。本项目涵盖了整个农作物资源保护基础性工作，项目的实施对21世纪我国农业的持续发展和生物多样性的保护具有长远战略意义，对这样一项关系国计民生的重要农业基础性工作，需要国家持续不断地给予强有力的支持，年度1500万的经费远难以维持现有库、圃种质资源保护基础工作的正常开展。由于经费太少，在项目计划时，一些库、圃放弃或减少了属本项目应做的工作内容，一些资源保护与利用上深层次的研究工作无法得到安排，影响到项目长期目标的实现，在作物种质资源领域也失去争取国际领先地位的可能。 2、科技队伍不稳，骨干人才贫乏，人员素质极待提高。稳定队伍，培养人才是当务之急。20世纪在种质资源工作实践中培养的技术骨干绝大部分已经退休，目前已有一批新生力量支撑着我国作物种质资源事业，但大部分未经专业系统培训，有的对种质资源工作还不

我国牧草种质资源保存_利用与保护

我国牧草种质资源保存、利用与保护 严学兵,王成章,郭玉霞 (河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002) 摘要:牧草是自然资源的重要组成部分,也是农业可持续发展的物质基础,在我国草地畜牧业生产、生态环境及人民生活中发挥着巨大的作用。为此,论述了我国牧草种质资源调查、收集、保存、研究和利用的现状,存在问题及对今后发展的建议,提出今后应加强优良和珍稀牧草种质的搜集、生态型及遗传多样性的研究和利用、生物技术在优良牧草种质创新的应用、种质保存的时效性和野生状态下牧草遗传变异与进化的速率、短寿命牧草种子保存技术、优良基因的发掘和功能研究以及利用平台的构建、物种或种群保护的生物学基础研究7个重点领域的研究。 关键词:牧草种质资源;保护;保存;利用 中图分类号:S540 24 文献标识码:A 文章编号:1001 0629(2008)12 0085 08 牧草种质资源是指所有牧草物种及其可遗传物质的总和。它是牧草及农作物改良所用的原始材料,是农业自然资源的重要组成部分,在草地畜牧业生产及人民生活中发挥着巨大的、不可忽视的作用[1]。全世界草地面积占全球陆地总面积的52.17%,我国的草地面积约4亿hm2,占我国陆地总面积的41.7%,是农田面积的近4倍[2]。我国是世界上牧草种质资源最丰富的国家之一,不仅盛产温带、亚热带和热带草种,而且还具有特殊生态价值和经济价值的旱生、超旱生及耐寒、耐盐碱草种,如沙打旺A stragalus adsurg ens、骆驼刺Alhagi sp arsif olia、碱茅P uccinellia distans 等[3]。然而,随着人类活动对环境影响的增强,一些优良牧草种和种群的生存环境受到威胁,遗传多样性正在消失。随着牧草种质资源在世界上越来越受到关注和重视,正在发展成为草地科学中的新兴研究领域。 1 进展与成就 我国牧草种质资源收集和研究工作始于20世纪50年代初,开始发展缓慢。从 七五 开始,才列入国家科技攻关研究行列,使其得到空前、高速的发展,并在以下几个方面取得了一定的成就。 1.1牧草种质调查、收集与保存 在过去的50余年中,在我国温带、亚热带、热带及高寒地带的部分地区,开展了以摸清家底和采集标本为主的牧草种质资源的考察和收集。在以往工作基础上已初步查清了我国牧草种质资源的种类、分布及潜力。初步查清了国内的野生牧草资源有127科879属和4215种,其中种类多、栽培和育种潜力大的禾本科有173属972种,豆科有81属646种[4]。目前收集的饲用作物种质资源有29科204属771种8981份,包括从国外引进并经栽培驯化的饲用作物种类13科91属162种。其中,禾本科35属58种,豆科30属59种,其它11科12属19种[5]。据2006年9月 全国牧草种质资源保护项目座谈会 统计,截至2005年底,中心库保存已鉴定的牧草种质材料9593份,其它各协作组还保存有15000余份种质材料[6]。 同时,在多个省份和地区也开展了牧草资源调查和收集工作。内蒙古有维管束植物类牧草899种,其中禾本科牧草194种(占21.6%),豆科牧草83种(占9.2%),莎草科牧草54种(占6.0%),菊科牧草134种(占14.9%),藜科牧草58种(占6.5%),栽培牧草有35种,占牧草总种数的3.9%[7]。青海维管束植物有113科636属2420种,种子植物有99科617属2380种[8]。 25卷12期 V ol.25.No.12 草 业 科 学 P RA T A CU LT U RA L SCIEN CE 85 12/2008 *收稿日期:2008 02 18 基金项目:河南农业大学科研启动基金 不同地区披碱草分 化的分子机制 资助 作者简介:严学兵(1974 ),男,河南扶沟人,副教授,博士。 E mail:yxbbjz z@https://www.wendangku.net/doc/3018039916.html, 通讯作者:郭玉霞

甘油冷冻保藏法

甘油冷冻保藏法 本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。 （1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。 （2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。 （3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。 （4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。 （5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。 冷冻干燥保藏法 （1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。也可用没有球部的管状安瓿管。塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。 （2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。 （3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。 （4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。 将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。 （5）真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态，需准备冷冻槽，槽内放碎冰块与食盐，混合均匀，可冷至-15℃。装置仪器，安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内。 抽气一般若在30分钟内能达到93.3Pa（0.7mmHg）真空度时，则干燥物不致熔化，以后再继续抽气，几小时内，肉眼可观察到被干燥物已趋干燥，一般抽到真空度26.7Pa（0.2mmHg），保持压力6-8小时即可。 （6）封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管继续抽气，约10分钟即可达到26.7Pa（0.2mmHg）。于真空状态下，以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈中央进行封口。封口以后，保存于冰箱或室温暗处。 此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年，但设备和操作都比较复杂。 滤纸保藏法 （1）将滤纸剪成0.5×1.2cm的小条，装入0．6×8cm的安瓿管中，每管1-2张，塞以棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟。 （2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。 （3）取灭菌脱脂牛乳1-2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。 （4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 （5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。

作物种质资源保存技术

作物种质资源保存技术 愁藻术.Technique Applicable 作物种质资源，又称作物品种 资源、遗传资源和基因资源，它在 作物各类品种、品系、类型、野生 种或近缘植物中，是改良农作物的 基因来源。 种质资源保存主要通过原境保 存、异境保存和离体保存3种途径。 原境保存要建立自然保护区或天然 公园，需大量土地，易受自然灾害 侵袭;异境保存要建立各类基因库 如种质保存栽培园等田间基因库、 种子库和花粉库等;离体保存是将 植物外植体在无菌环境中进行低温 或超低温的组织培养。原境保存适 合于珍稀的野生植物资源的保存， 这里不再介绍。对于自然界中一般 作物种质资源的保存，多应用异境 保存和离体保存。目前，我国建有 国家种质资源库，隶属农业部管 理。现将种质保存的类型和方法介 绍如下，以便根据种质资源不同类 别、不同保存目的，采取相应的方 法去操作、实施。 作物种质资源保存技术 悦祥营魏振杰李春娇毛英魁 (河南省滑丰种业滑县456450) 摘要种质资源保存有三种途径:原境保存、异境保存、离体 保存。原境保存技术不再叙述，异境保存必须用当季新种子，入库前要登记作物种质相关资料，数量不少于1500粒，并在每个包装袋外加上标签;保存时，不同储藏库控住不同温、湿度，可储藏不同时间。

离体保存中低温保存时，可采用降低培养温度方法，也可用“饥饿法”，还可使用生长缓解剂方法;超低温保存，不适用于所有植物。 关键词保存作物种质资源异境保存离体保存温度 1异境保存 在异境保存中，应用最多最广 泛的是建立低温种子库，即种质资 源库。目前，低温储藏是种子体种 质保存的最佳途径，其保存对象是 农作物及其近缘野生植物，这些种 质资源大多以种子作为载体。可以 说，凡能通过种子繁殖维持物种遗 传完整性的各类植物种质资源，都 可存人种子库，但其种子必须是具 有耐低温、耐干燥脱水性能的正常 型种子。 1.1种子库的类型 1.1.1长期储藏库 温度常年控制在一20一16-C, 相对湿度控制在50%以下，用于长 期保存收集到的作物品种资源，包 括农家种、野生种和淘汰的育成品 种等。据理论推算，种子含水量5件、种植收获时间等。 %一8%，在此环境中寿命可延长二是种子数量最低不少于1500 至50年以上。发芽率监测结果，库粒，一般3000-5000粒或更多。存的大部分种子经过巧年储藏，发三是人库种子必须是当季新种 芽率无明显下降。子，并对种子进行精选、生活力检 1.1.2中期贮藏库测、于燥脱水处理等，确保种子无 温度长期控制在一6--20C， 相明显病虫损害、无损伤，并去除破 对湿度小于50%，其种子储藏寿命损粒、虫蚀粒、无胚粒、批粒、瘦 在10-20年，所有种子可随时用于小粒和杂粒等，杂质不能超过2%, 科研、教学、育种研究及品种交换。不得用药剂处理或包衣处理。初始1.1.3临时储藏库发芽率一般要求高于90%，稀有种 温度控制在4℃左右，主要用子芽率最低不低于85%，种子含水 于人长期库前临时存放或科研育种量在原始水分不高于13%的基础 单位储藏育种家种子、亲本种子或上，经干燥脱水处理，禾谷类5%- 育种材料的保存。其种子储藏寿命7%，大豆8%0 在3一5年。四是每份材料包装袋的内、外 科研育种单位在申报国审品种都要有标签，标明品种名称、统一 时，必须向国家种质资源库提供一编号、保存单位等，包装袋要结实 定量的种子作为资源储备。同时国牢固，防漏、防潮、防混杂、防散

海尔超低温你保存箱(试题学习)

海尔超低温冰箱操作规程 1.目的：规范海尔超低温冰箱的相关使用操作、以及维护操作，保证实验及储存样本安全。 2.适用范围：此SOP适用于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所无形体室使用海尔超低温冰箱人员。 3.操作方法 3.1要进行设定值的调整操作，首先必须进行解锁。先按“△”或“▽”，温度设定值闪烁，按“△”或“▽”，输入数字“06”，然后一直按下“功能选择”键5秒，“锁定”灯灭，进入解锁状态，可进行以下各项设定，按“功能选择”键可循环选择箱内温度设定、高温报警设定、低温报警设定，相应指示灯亮。 3.2“温度设定”时设定温度显示区闪烁。此时按“△”或“▽”键可改变温度设定值。调定后10s不进行操作自动锁定。温度停止闪烁表示数值已经输入电脑，否则无效。温度设定范围为：-10~-86℃. 3.3在“高温报警”设定时，设定温度显示区闪烁显示温度设定值。此时按移位及调节键可调整报警设定值。调定后不操作10s 自动锁定，温度停止闪烁表示数值已经输入电脑，否则无效。设定高温报警时设置温度不得高于最高限制温度，不得低于设定温度+5℃。 3.4在“低温报警”设定时，设定温度显示区闪烁显示温度设定值。此时按“△”或“▽”可调整报警设定值。调定后不操作

10s自动锁定，温度停止闪烁表示数值已经输入电脑，否则无效。设定低温报警时设置温度不得低于最低限制温度，不得高于设定温度-5℃。否则无法设置。 3.5密码设定：初次使用密码为“06”，解锁后同时按“功能选择”与“蜂鸣取消”键5s，显示”06”,然后通过按“△”或“▽”键来调节密码值，密码值可在05、06、07……29、30之间选择。5s 内不操作自动锁定，密码值有效。 3.6开机延时设定 3.6.1为降低断电后恢复电力是的电源负载，本设备能更改压缩机的延时启动时间。在解锁状态下，同时按下“功能选择”和“▽”键，设定延时时间01、02、03——09、10（1—10分钟可选）。 3.6.2如果延时5min以上，设备再冷却下来可能会花比较长的时间。当电源足够时，没必要更改。 3.7开机报警测试以及电池电量测试：通电后同时按下“△”“蜂鸣取消”键5s，蜂鸣器报警、报警指示灯闪烁，这是首先进行6s 电池电量测试，电量低指示灯闪烁6下，电量正常，则电池电量指示灯不点亮。6s后为开机报警测试，这时所有的指示灯将不闪烁点亮6s，所有数码显示管显示“8”6s，这说明所有显示部件正常。 4.超低温冰箱的维护和保养 4.1每天检查运行状况并记录。每月除一次内壁上的霜以及清洗一次冷凝器的过滤网。用干布清除冰箱内外部和配件上的少量尘

种质资源

§3 种质资源 重点：种质资源的概念，种质资源的重要性、保存、研究、创新与利用。 难点：各类种质资源的特点。 要求：了解作物起源学说的形成、发展和主要内容，明确种质资源的工作内容，掌握种质资源的概念、类别和利用。 §3.1 种质资源的重要性 §3.2 作物起源中心学说及其发展 §3.3 作物种质资源的类别及利用价值 §3.4 种质资源工作的内容 §3.1 种质资源的重要性 3.1.1 种质资源的概念 用以培育新品种的原材料，过去称为育种的原始材料。在中国20 世纪60 年代初改称为品种资源。现代育种所利用的现有品种材料和近缘野生植物，主要是利用其内部的遗传物质或种质，所以现在国际上大都采用种质资源这一名词。在遗传育种领域内，把一切具有一定种质或基因的生物类型总称为资源(germplasm rmuce)。包括品种、类型、近缘种和野生种的植株、种子、无性繁殖器宫、花粉甚至单个细胞，只要具有种质并能繁殖的生物体，都能归入种质资源之内。又因为现代的遗传育种研究不但利用现有的种质资源,而且要进行染色体工程、基因工程，所以，遗传学上也常称种质资源为遗传资源(genetic remurees)。说到底，遗传、育种研究上主要利用的是生物体中的部分基因，甚至是个别基因，所以又称为基因资源(gene resources)。把蕴藏有形形色色基因资源等各种材料, 概称为基因库或基因银行。 种质资源是在漫长的历史过程中, 由自然演化和人工创造而形成

的一种重要的自然资源, 它积累了由于自然和人工引起的极其丰富的遗传变异,即蕴藏着各种性状的遗传基因。是人类用以选育新品种和发展农业生产的物质基础, 也是进行生物学研究的重要材料, 是极其宝贵的自然财富。 3.1.2 品种资源在作物育种工作中的重要性 1. 品种资源是作物育种工作的物质基础 作物育种成效的大小, 很大程度上决定于掌握种质资源的数量多少和对其性状表现及遗传规律的研究深度。 品种资源是在长期自然选择和人工选择过程中形成的, 它们携带着各种各样的基因, 是品种选育和生物学理论研究不可缺少的基本材料来源。如果没有品种资源, 作物育种工作就成为“无米之炊”。 筛选和确定作物育种的原始材料, 也是作物育种的基础工作。能否灵活地、恰当地选择育种的原始材料, 受作物品种资源工作的广度和深度的制约。 2. 作物育种工作的突破性进展取决于关键性基因资源的发现和利用 国内外作物育种工作实践表明, 一个特殊种质资源的发现和利用, 往往能推动作物育种工作取得举世瞩目的成就，品种培育的突破性进展, 往往都是由于找到了具有关键性基因的种质资源。 20 世纪50 年代, 中国由于发现和利用了广东省的矮脚南特和广西省的矮仔占等水稻矮源, 从而育成了广场矮、珍珠矮等一批高产、抗倒的矮秆水稻良种，实现了品种矮秆化,使水稻亩产由200-250 公斤提高到300-350 公斤以至500 公斤。 同时, 由于低脚乌尖这一水稻矮源的发现与利用, 进一步推动了世界范围的“绿色革命”浪潮。低脚乌尖原产于中国台湾及福建, 它现在几乎是世界所有国家矮秆水稻品种的祖先。台湾省以低脚乌尖为亲本,

微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏

国家自然科技资源平台 微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏 技术规程（试行） 《自然科技资源收集整理保存技术规程研究制定》 项目组 二〇〇四年十二月十日

目次 前言 (2) 引言 (3) 1范围 (4) 2规范性引用文件 (4) 3术语和定义 (4) 4内容 (5) 参考文献 (10)

前言 本规程由微生物菌种资源平台建设项目提出。 本规程起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所、中国食品发酵工业研究院。 本规程主要起草人：张月琴、刘红宇、黄明玉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、陈敏、程池等。

引言 微生物菌种资源的长期有效保藏是微生物菌种资源有效实施共享的前提，采用操作性简便、保藏周期长、遗传变异率低是菌种资源保藏方法的首要选择。

微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程 1 范围 本规程规定了冷冻干燥和低温冷冻保藏技术的定义、原理、技术要求、方法与步骤。 本规程适用于普通病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及担子菌等微生物菌种的保藏。 对于病原微生物及其他需要特殊操作技术的微生物的参见相应的技术规程。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。 国务院令第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》 GB 19489 实验室生物安全通用要求 科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件自然科技资源共性描述规范（试行） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本规范。 3.1 冷冻干燥 freeze-drying 将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。 3.2 液氮超低温保藏 preservation in liquid nitrogen 液氮超低温保藏技术是将菌种保藏在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。 3.3 -80℃低温冷冻保藏 preservation in -80℃

种质资源库建设方案

***国家级中草药种质资源库配套设施建设 工作方案 ***国家级中草药种质资源保护和研究基地建设项目，于2014年开工建设，2016年建成。项目总共投资约8655万元。"***国家级中草药种质资源库"主要包括种子库、植物离体种质库、信息中心。位于***，正式启用后将使*** 乃至西北的药用植物种质资源得以保存。 ***中草药种质资源库从概念形成到竣工历时3年，建筑面积约560㎡。如运行后具体目标是在第一个5年内达到300种3000份（株），15年内达到1600种1.6万份（株）野生中草药种质资源。 种质资源库因资金等原因缺少配套设备并未投入运行，只在田间进行中草药种质资源的繁殖工作，为保存现有的种质资源特制定此工作方案。 1、总体科学目标 其总体科学目标是：建成一个依托***、立足西北、面向全国一流的野生中草药种质资源保护设施和科学体系，实现自动化管理的中药材种质资源库。使中国的药用植物种质资源安全得到可靠的保障，将对抢救、保存珍稀濒危药用植物种质资源，促进中药材新品种选育和中药材规范化栽培，填补生物资源种质保存系统的缺陷等具有重要意义。可有效保存中药材遗传资源，为中药产业可持续发展提供有力保障。

二、建立背景 ***是全国中草药主要产区之一，中药材产业在全国具 有发展潜力和比较优势。全省14个市州的70多个县区均有 中药材生产，中草药种类多，产量大，品质好，有特色，全 省中草药品种9500多种，位居全国第二，是名副其实的中 药材资源宝库。主要的中草药资源有1600多种，野生植物 类1270种，其中动物类214种，矿物类43种，目前人工种 植中草药350余种，分布较大的野生药用植物资源200余种。随着物种消失的速度不断加快，人们越来越意识到植物种子 保护的重要性，而中药材种质资源是其中重要的一类。种质 资源库作为***中草药种质资源保护领域的一个重点建设工程。将进一步促进校地科技合作，对***乃至西北的生物多 样性保护和生物资源的可持续利用、对***的中医药产业科 学发展和教育等都有非常重要的意义。 种质资源库是具有重要影响的野生药用植物种质资源 保藏设施，保藏能力将达到西北领先水平，并具有不可替 代性。目前在临时仓库已收集保存约100种300份野生植 物种子。 ***的自然、气候条件和生态环境,非常适宜多种中药材 生长,中药材野生资源丰富,种植历史悠久。黄芪、党参、当 归等道地药材的栽培已有上千年的历史,素有“千年药乡” 和“西北药都”之美称；早在南北朝时期,陶弘景所著《本 草经集注》中就有“黄芪第一出***,色黄白,甜美,今亦难得”的记载；北宋《太平御览》所引的南北朝《秦州记》

市场上-86°C超低温保存箱型号

-86°C超低温保存箱DW-86W150型号介绍超低温保存箱，又称超低温冷藏箱、超低温冷柜、超低温冰箱等，温度范围从-60度到-180度不等，超低温保存箱可适用金枪鱼的保存、电子器件、特殊材料的低温试验，也是保存血浆、生物材料、疫苗、试剂、生物制品、化学试剂、生物样本等不可或缺的冷冻设备，我国超低温产品覆盖率极低，市场潜力巨大。 -86℃超低温保存箱采用微电脑控制，数码显示温度，箱内温度-40℃~-86℃可调，高低温报警控制，可根据需要设定报警温度点；采用多种故障报警，三种报警方式，确保使用安全，设置开机延时、停机间隔等保护功能，键盘锁定与密码保护功能，防止随意调整参数。 在制冷系统上，-86℃超低温保存箱采用优化复叠制冷技术，独特的蒸发冷凝换热系统设计，制冷能力更强；采用进口国际名牌压缩机和国际名牌EBM风扇电机，制冷快，噪音低；采用无氟发泡、无氟制冷剂，绿色环保，呵护环境；超厚保温层，内外双层门，四层密封结构设计，锁住冷气，保温效果好，节省电能；在人性化设计方面，采用安全门锁设计，防止随意开启；高低电压自动补偿功能，安装压力平衡阀，开门更省力；专利设计抽屉式除尘过滤网，维护简单方便。测温孔设计，便于进行温度检测；可选配温度记录仪，冻存盒、冻存架，重型脚轮与止动调节螺钉设计，移动轻松，固定更方便，目前，该产品已经被科研院所、疾病防控、大专院校、生物工程、医院、血站、远洋渔业和电子化工等领域所使用，用来保存红细胞、白细胞、皮肤、骨骼、细菌、病毒、精液、生物制品、远洋制品等，电子器件

及特殊材料的低温试验等，由于质量过硬、性能优越、节能环保、制冷能力强，深受用户欢迎。 -86℃超低温保存箱DW-86W150 深冷技术设备属于高度定制化的非标设备，在工艺流程、产品性能参数等方面需具备跨学科的技术研发能力，对生产企业的技术能力要求较高。进军医用冷链设备领域以来，依托国家级企业技术中心的坚强后盾和旗下的专家智囊团，在深冷技术、恒温技术、智能技术、数控技术、节能环保技术等方面不断取得新的突破，尤其是-180℃、-150℃、-86℃超低温保存箱无论是深冷技术、制作工艺还是性能、质量均达到国际领先水平，使得深冷核心技术和竞争力不断得到提升，成为名副其实的深冷技术专家。

种质保存

第11章种质保存 目的要求： 1、了解种质资源保存的一般概念 2、低温保存和超低温保存技术 第一节种质资源保存的一般概念 种质资源又称遗传资源，习惯上也叫品种资源。它包括栽培、野生及人工创造的粮食作物、经济作物、园艺作物的品种或品系。但现代农业生产中，一般只种植少数几种高产品种，而其它的品种或农家种则因为不适应目前的农业需要，以及科学水平所限或人们还未发现它们的用途而极少种植。但这些资源一旦丢失就永远无法找回。 种质保存，是利用天然或人工创造的适宜环境，保存种质资源，使个体中所含有的遗传物质保持其完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。要保存足够的群体，减少繁殖过程中遗传漂移，使繁殖前后保持有最大的遗传相似性。在贮藏过程中，要求表现最低程度的遗传变异。 种质保存分为原地保存和异地保存两种方式。原地保存，指在自然生态环境下，就地保存，自我繁殖种质。这种方式不仅可以保存种质还可以保护不同的生态系统。如各类保护区的建立。世界第一个保护区是1872年美国建立的黄石公园。 异地保存是将种子、植物体保存于该植物原产地以外的地方，主要形式有植物园、种质圃、种子库、组织培养物的试管保存（离体保存）等。其中种子保存所占空间小并能保存多年，且易于干燥和包装便于运输。但处子易受病虫害侵害；遗传性状不稳定有些种子含水量高难于脱水保存。离体保存是将单细胞、原生质体、愈伤组织、悬浮细胞、体细胞胚、试管苗等植物组织培养物储存在使其抑制生长或无生长条件下，达到保存目的的方法。该法具有省时省力，不受自然生态因素影响，便于交流运输等优点。主要有低温保存和超低温保存两种方式 第二节低温保存

低温保存是在低于正常培养温度下保存植物组织培养物的技术，该方法常结合改变培养基成分、控制光照等措施，以减缓保存材料的生长速度，延长继代时间，故又称小生长法。该法简单易行，需要设备少，投资小，技术成熟，可以作为植物种质资源的中长期保存方法。 低温保存的基本特征是保存材料的定期继代培养，不断繁殖更新。保存过程中要选用遗传上稳定的外植体作为起始培养材料，以尽可能地减少遗传变异的机会。所以具有器官分化能力的体细胞胚和植物茎尖分生组织，能够保持发育的完整性，在遗传上也较稳定，适于用做低温保存的起始材料。 低温保存的基本措施是控制保存材料所处的温度和光照。在一定温度范围内材料的寿命随保存温度的降低而延长，一般5～10℃适宜保存温带起源植物的试管苗，15～18℃可用于热带植物试管苗的保存。适当缩短光照时间，降低光照强度，也能减缓材料的生长速度，延长保存时间。但也要防止光照过弱使材料生长纤细，形成弱苗。导致生长不维持。 改变培养基成分，在其中添加脱落酸、矮壮素和甘露醇等生长延缓剂和渗透剂。其中以对材料遗传稳定性影响小的甘露醇为最好，培养基中加入较低含量的甘露醇可以明显提高材料的存活率。 低温保存的技术操作简单。以魔芋为例，选取茎尖分生组织为外植体，建立试管苗无性系；选取生长健壮的、芽大小为1.5cm的材料移入保存培养基，于25℃，光照度1000lx，12h条件下培养一周；转入4℃黑暗中保存。材料每6个月继代培养一次，继代培养时，从形态、经济性状、生理生化等方面进行遗传稳定性鉴定。 第三节超低温保存 超低保存也叫冷冻保存，一般以液态氮（-196℃）为冷源，使温度维持在-196℃。在如此低温下，新陈代谢活动基本停止，处于“生机停顿”（suspended animation）状态。在此状态下材料不可能产生遗传变异。可对材料进行长期保存。 超低温保存1949年成功的应用于动物细胞的保存。20世纪70年代以来，应用于植物材料保存，目前已经有不少成功的例子。在超低温保存中茎尖和幼胚等较为合适。这些材料遗传稳定，再生能力强，解冻后易于成活和种植，对于冷冻和解冻过程中所产生的胁迫忍受能力也强。 一、冷冻的方法 （一）快速冷冻法 本法是将植物从0℃或其他预处理温度直接投入液氮。其降温速度在每分钟1000℃以上。在降温冷冻过程中，从-10℃到-140℃是植物体内冰晶形成和增长的危险温度区，在此以下冰晶不再增生。因此，快速冷冻成功的关键在于利用超速冷冻，使细胞内的水迅速越过冰晶生长的危险温度区。细胞内的水形成“玻璃化”状态。采用快速冷冻方法，要求细胞体

病毒的超低温保存法

中华试剂网 试剂·原料·仪器 https://www.wendangku.net/doc/3018039916.html, TEL: +86-21-34053660 Add: old humin Road, Shanghai 200237, P.R.C 病毒的超低温保存法 大多数微生物可用超低温保存，超低温保存法是适用范围最广的微生物保存法。需要复杂营养的微生物种，如用其他的贮存方法不能保持其活力（如植物的病原性真菌），通常可用超低温的方法保存（ATCC 1983；Halliday，Baker 1985）。此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管贮存在—150～－196℃的液氮中。 超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。ATCC 常用一种由甘油（10％）、二甲基亚砜（5％）和培养液制成的混合剂保存多数的细胞株。这些化学试剂进入细胞内可避免内 膜的冷冻损伤。 贮存在低温容器内的细胞复苏时必须小心操作。当小管被加热时，所形成的冰晶会将细 胞杀死，正确操作就可避免这种事故。只要迅速将样品解冻就能减少活力的丢失，做法是：将封口的小管迅速放入37℃的水中，直至所有的冰融化，然后打开管口，将内容物移入培养基。 超低温保藏的微生物必须始终贮存在温度非常低的环境中，因此需要液氮罐。在长期贮存的过程中必须经常注意补充液氮。这种贮存方式比冻干法需要更多的经费，包括为了维持贮存温度所必要的劳动力和液氮等。 2.2 材料 病毒超低温保存所需材料有：热收缩塑料管（Nunc Cryoflex），液氮罐，防护手套和面罩，永久性记号笔，气体喷灯，装液氮的保温瓶。 2.3 方法 （1）剪一段两端各超出冷冻管长度2cm 的热收缩塑料管。 （2）将含有澄清病毒悬液（组织培养的上清培养基，或组织培养基内的细胞溶解产物均可）冰浴几分钟，用灭菌移液管将0.2ml 冰浴过的上清悬液分装到冷冻管内，并将盖子拧紧。 （3）将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部，插入正确的标签。 （4）用喷灯小心加热热收缩塑料管，并使之包住冷冻管。注意不要用太高的温度加热热收缩塑料管。 （5）再小心加热热收缩塑料管的两端，用大号镊子夹紧管的端口至完全密封。 （6）将密封好的冷冻管快速在装有液氮的保温瓶中冷冻（操作时要求戴面罩和手套）。（7）将冷冻过的冷冻管放入液氮罐中的格子内，同时记录样品的详细的存放位置、实验编号和存放日期等。 （8）需要用时，迅速从液氮罐内取出所需样品，并投入37℃水浴箱中解冻后，用解剖刀片在冷冻管的硅化垫圈处切开热收缩塑料管。拧开冷冻管的盖子时不需要除去热收缩塑料管。

关于病毒的液氮罐超低温保存法介绍

关于病毒的液氮罐超低温保存法介绍 大多数微生物都可以用超低温来保存，超低温保存法是适用范围最广泛的微生物保存法。需要复杂营养的微生物种，如用其他的贮存方法不能保持其活力（如植物的病原性真菌），通常可用超低温的方法保存（ATCC1983；Halliday，Baker1985）。此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管贮存在—150～－196℃的液氮中。 超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。ATCC常用一种由甘油（10％）、二甲亚砜（5％）和培养液制成的混合剂保存多数的细胞株。这些化学试剂进入细胞内可避免内膜的冷冻损伤。 贮存在低温容器内的细胞复苏时必须小心操作。当小管被加热时，所形成的冰晶会将细胞杀死，正确操作就可避免这种事故。只要迅速将样品解冻就能减少活力的丢失，做法是：将封口的小管迅速放入37℃的水中，直至所有的冰融化，然后打开管口，将内容物移入培养基。 超低温保藏的微生物必须始终贮存在温度非常低的环境中，因此需要液氮罐。在长期贮存的过程中必须经常注意补充液氮。这种贮存方式比冻干法需要更多的经费，包括为了维持贮存温度所必要的劳动力和液氮等。 1材料 病毒超低温保存所需材料有：热收缩塑料管（NuncCryoflex），液氮罐，防护手套和面罩，永久性记号笔，气体喷灯，装液氮的保温瓶。 2方法 （1）剪一段两端各超出冷冻管长度2cm的热收缩塑料管。 （2）将含有澄清病毒悬液（组织培养的上清培养基，或组织培养基内的细胞溶解产物均可）冰浴几分钟，用灭菌移液管将0.2ml冰浴过的上清悬液分装到冷冻管内，并将盖子拧紧。 （3）将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部，插入正确的标签。 （4）用喷灯小心加热热收缩塑料管，并使之包住冷冻管。注意不要用太高的温度加热热收缩塑料管。 （5）再小心加热热收缩塑料管的两端，用大号镊子夹紧管的端口至完全密封。 （6）将密封好的冷冻管快速在装有液氮的保温瓶中冷冻（操作时要求戴面罩和手套）。