生化实验整理

1.氨基酸的分离鉴定——纸层析法

一、实验目的

?了解层析技术的一般原理

?掌握纸层析的方法和原理，学会分析未知样品的氨基酸成分

二、实验原理

层析法亦称色谱法，是利用混合物中各组分的物理、化学及生物学特性的差异，使各组分以不同程度分布在两个相中，即固定相和流动相，当流动相流过加有样品的固定相时，各组分所受固定相的阻滞作用和受流动相的推动作用的影响各不相同，从而使各组分以不同速度移动而达到分离的目的

固定相：是由层析基质组成的，可以是固体物质（如吸附剂、凝胶、离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在纤维素或硅胶上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换等作用 流动相：是在层析过程中，推动固定相上待分离的物质向一定方向移动的液体、气体或超临界体。柱层析中一般称为洗脱液，薄层层析时称为展层剂

分配系数：是指在一定的条件下，某一组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比例，常用K来表示，它是层析中分离纯化物质的重要依据 迁移率：是指在一定条件下，某一组分在相同的时间内，在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值，常用R f来表示

分配系数或迁移率的差异程度是决定几种物质采用层析方法能否分离的先决条件，差异越大，分离效果越理想

层析根据不同的标准可以分为多种类型：如按固定相基质的形式不同可分为纸层析、薄层层析和柱层析；按流动相的形式不同可分为液相层析、气相层析和超临界层析；按分离的原理不同可分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析等

纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。有机相流经固定相支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动速度用R f值表示：

在一定条件下，某种物质的R f值是常数。R f值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关

氨基酸显色反应——茚三酮反应原理：

质，除了脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质

一分子水合茚三酮和氨缩合生成有色物质

三、实验器材

大试管及塞子，大头针，三角薄层喷瓶，毛细管，吹风机，层析滤纸（新华一号），分液漏斗

四、实验材料与试剂

扩展剂：4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物

氨基酸混合液：0.5%的赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸的混合液（各组份浓度均为0.5%）显色剂：0.1%水合茚三铜正丁醇溶液

五、实验操作

取层析滤纸（20×2cm）一条，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔划一直线，取其中点作为原点。在大试管中加入适当的扩展剂，使扩展剂的液面处于悬挂在橡皮塞上的层析滤纸的原点到底端的中间

点样：用毛细管将氨基酸混合液点在原点上，用吹风机吹干，干后再点一次。每次在纸上扩散的直径最大不超过3mm

扩展：将点好样的层析滤纸悬挂于橡皮塞的钩子上，点样端的底边浸入扩展剂约1.5cm。保持大试管的垂直，待溶剂上升15～20cm时取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界限，用吹风机热风吹干

显色：用三角薄层喷瓶将0.1％茚三酮正丁醇溶液均匀地喷在风干的层析滤纸条上，用热风吹干即可显出各层析斑点

计算各种氨基酸的R f值

六、注意事项

为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操作时带手套

重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了茚三酮后的显色则要用热风吹干滤纸

2.血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳

一、实验目的

?了解电泳技术的一般原理

?学习醋酸纤维薄膜电泳的操作

二、实验原理

电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此可使它们分离

影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象

影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和形状 按支持介质不同可将电泳分为纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳

另外，还可以按分离原理不同、支持介质形状不同、用途不同以及所用电压不同等将电泳分类

电泳的装置主要包括两个部分：电源和电泳槽。电源提供直流电，在电泳槽中产生电场，驱动带电分子的迁移；电泳槽可以分为水平式和垂直式两类

采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小

醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术，它具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点

本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。

以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。其中清蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白

三、实验器材

醋酸纤维薄膜（2×8 cm），常压电泳仪，点样器（盖玻片），培养皿，粗滤，载玻片，镊子

四、实验材料与试剂

兔血清（实验室制备），巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07），

染色液（氨基黑10B），漂洗液

五、实验操作

浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之置于盛有缓冲液的平皿中，浸泡30 min方可用于点样

点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一载玻片上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可来回移动一次），再将点样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄膜内，形成均匀的直线

电泳槽的准备：根据电泳槽膜支架的宽度，裁剪尺寸合适的滤纸条。在两个电极槽中，各倒入等体积的电泳缓冲液，在电泳槽的两个膜支架上，各放两层滤纸条，使滤纸一端的长边与支架前沿对齐，另一端浸入电泳缓冲液中。当滤纸全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡，使滤纸的一端能紧贴在膜支架上，即为滤纸桥

电泳：将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上。盖上电泳槽盖，使薄膜平衡10 min。通电，调节电压至160 V，电流强度为0.4～0.6 mA/cm膜宽度，电泳时间约25 min 染色：电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡

5 min

漂洗：将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次，直至背景蓝色脱尽，条带清晰为止，可得到色带清晰的电泳图谱

六、注意事项

市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片，薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。若飘浮于液面的薄膜在15～30 s内迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则此膜均匀可用于电泳

醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥－巴比妥钠缓冲液，其浓度为

0.05～0.09 mol/L。选择何种浓度与样品和薄膜的厚薄有关。缓冲液浓度

过低，则区带泳动速度快区带扩散变宽；缓冲液浓度过高，则区带泳动速度慢，区带分布过于集中，不易分辨

点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，以免引起样品扩散。但不宜太干，否则样品不易进入膜内，造成点样起始点参差不起，影响分离效果

点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或印出凹陷影响电泳区带分离效果

电泳时应选择合适的电流强度，一般电流强度为0.4～0.6mA/cm膜宽度。

电流强度高，则热效应高；电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散

操作过程为防止指纹污染，应戴手套

七、实验思考

用醋酸纤维薄膜电泳做电泳支持物有什么优点？

电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？

3.蛋白质的透析

一、实验目的

?了解透析技术的一般原理。

?通过蛋白质透析实验掌握透析操作。

二、实验原理

透析是膜技术的一种，利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子，从而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。

常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。

透析是利用半透膜进行的一种选择性扩散操作，通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。

保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。

把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤去空气的空余部分，以防由于溶剂渗入造成样品体积增加而引起透析袋胀破。

为了获得较快的透析速度，常常采取一些措施保持膜两侧浓度差具有最大差，如经常更换透析外液，连续搅动外液。

透析外液尽量不用纯水，常使用一定pH的低盐缓冲液，这样可以避免袋内样品pH的变化和过分地稀释。

透析袋出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用

前必须除去。

透析袋的处理：一般是将透析袋剪成10～20cm的小段，在2％（W/V）NaHCO3和1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，然后放在1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，冷却后，存放于4℃，从此时起取用透析袋，必须戴手套。

检查透析效果的方法：用1％BaCl2检查(NH4)2SO4，用1％AgNO3检查NaCl、KCl等。

三、仪器、材料和试剂

●磁力搅拌器（配搅拌子）

●试管及试管架

●透析袋（截留分子量10000）

●蛋白质氯化钠溶液

●3个除去卵黄的鸡蛋清与700mL水及300mL饱和氯化钠溶液混合后，用

数层干纱布过滤。

●10%硝酸溶液

●1%硝酸银溶液

●1%硫酸铜溶液

●10%氢氧化钠溶液

四、操作步骤

1.取10～15mL蛋白质氯化钠溶液，装入处理好的透析袋中，夹紧两端，浸

入蒸馏水烧杯中进行1～2h的透析。

2.用硝酸银检测烧杯中透析液是否有氯离子存在？

?1～2mL透析液+数滴10%硝酸溶液至酸性+ 1%硝酸银溶液

3.用双缩脲法检测是否有蛋白质存在？

?蛋白质溶液在碱性环境下与铜离子反应生成紫红色化合物

4.透析完全后，检测透析袋内是否存在蛋白质和氯离子？

?注意：透析完全时，透析袋内会出现球蛋白沉淀，因为球蛋白不溶于纯水。

五、思考题

1.透析的一般原理是什么？

2.蛋白质透析的用途有哪些？

4.蛋白质的性质实验（一）——蛋白质及氨基酸的呈色反应

一、实验目的

?了解蛋白质的基本结构单位及主要连接方式

?了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理

?学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法

二、实验原理

双缩脲反应

两分子尿素加热到180℃左右时，生成双缩脲并放出一分子氮，双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应

蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应，因此该反应可用于蛋白质的定性或定量测定

茚三酮反应

所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质，除了脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质

该反应十分灵敏，是一种常用的氨基酸定量测定方法

该反应分为两步：第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮结合另一分子水合茚三酮和氨缩合生成有色物质

黄色反应（Pauly反应）

含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠

多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应

考马斯亮蓝反应

考马斯亮蓝G-250具有红色和蓝色两种色调，在酸性溶液中其以游离态存在，呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色

考马斯亮蓝G-250染色灵敏度比氨基黑高3倍，反应速度快，约在2min 左右时间内达到平衡，室温1h内保持稳定

在0.01～1.0mg蛋白质范围内，蛋白质浓度与A595nm值成正比，所以常用来测定蛋白质的含量

三、实验器材

试管及试管架，试管夹，酒精灯，滴管，电炉，滤纸

四、实验材料与试剂

尿素，10％NaOH溶液，1％CuSO4溶液，2％卵清蛋白溶液，0.5％甘氨酸溶液，0.1％茚三酮水溶液，0.1％茚三酮乙醇溶液，鸡蛋清溶液，头发，指甲，0.5％苯酚溶液，浓硝酸，0.3％色氨酸溶液，0.3％酪氨酸溶液，考马斯亮蓝G-250溶液

五、实验操作

双缩脲反应

取少量尿素结晶，放入干燥的试管，微火加热使尿素熔化，熔化的尿素开始硬化时停止加热，尿素放出氮，形成双缩脲

冷却后，加入1mL 10％NaOH溶液，振荡混匀，再加入1滴1％CuSO4溶液，振荡，观察实验现象

向另一支试管中加入约1mL 2％卵清蛋白溶液和约2mL 10％NaOH溶液，摇匀，再加入2滴1％CuSO4溶液，随加随摇，观察实验现象

茚三酮反应

取2支试管，分别加入2％卵清蛋白溶液和0.5％甘氨酸溶液各1mL，再各加0.5mL 0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1～2min，观察实验现象

在一块小滤纸上滴一滴0.5％甘氨酸溶液，风干后，在原处滴一滴0.1％茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察实验现象

黄色反应（Pauly反应）

取6支试管，按下表加入各试剂：

观察各管的现象，若反应较慢，可略微放置或用微火加热

待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10％NaOH溶液至碱性，观察颜色变化

考马斯亮蓝反应

取2支试管，按下表加入各试剂：

观察实验现象，并解释

六、实验思考

通过本实验你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法？它们的原理是什么？

5.蛋白质的性质实验（二）——蛋白质的等电点测定和沉淀反应

一、实验目的

?了解蛋白质的两性解离性质

?学习测定蛋白质等电点的一种方法

?加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识

?了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义

?了解蛋白质变性与沉淀的关系

二、实验原理

蛋白质等电点测定

蛋白质是两性电解质，在蛋白质溶液中存在下列平衡：

蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点（PI）。

不同蛋白质各有其特异的等电点，在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。我们测等电点最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值

本实验借观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。

用醋酸与醋酸钠配制成各种不同pH值的缓冲液，向各缓冲液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点

蛋白质的沉淀与变性

在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀

蛋白质的沉淀可分为两类：

（1）可逆的沉淀反应：蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质

（2）不可逆的沉淀反应：蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。如加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应

?注意：蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出，因此变性的蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性

沉淀蛋白质的方法

盐析法：向蛋白质溶液中加入大量的中性盐（如硫酸铵，硫酸钠或氯化钠），使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。

如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中析出。盐析沉淀一般不引起蛋白质变性，当除去盐后，即可溶解

重金属盐沉淀法：当溶液pH大于蛋白质等电点时，蛋白质颗粒带负电荷，容易与重金属离子（Hg2+、Pb2+、Cu2+或Ag+）结合成不溶性盐而沉淀。误服重金属盐的病人可口服大量牛乳或豆浆等蛋白质进行解救就是因为它能和重金属离子形成不溶性盐，然后再用催吐剂排出体外。

某些有机酸沉淀法：某些有机酸指的是三氯乙酸、磺基水杨酸和硝酸等。

当溶液pH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，容易与酸类的酸根负离子发生反应生成不溶性盐而沉淀。

有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入一定量的极性有机溶剂（甲醇、乙醇或丙酮），因引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数，致使蛋白质颗粒容易凝集而沉淀。此法如果控制在低温下操作并且缩短处理时间，则可使变性速度减慢。

加热变性沉淀法：几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固。少量盐类促进蛋白质加热凝固，当蛋白质处于等电点时，加热变性凝固最完全和最迅速。

加热变性引起蛋白质凝固沉淀的原因可能是由于热变性使蛋白质天然结

构解体，疏水基外露，因而破坏了水化层，同时由于蛋白质处于等电点，也破坏了带电状态。古代人将大豆蛋白质的浓溶液加热并点入大量盐卤（含MgCl2）制豆腐，便是此方法的成功应用。

三、实验器材

温度计，锥形瓶，恒温水浴锅，容量瓶，吸管，试管及试管架，乳钵

四、实验材料与试剂

0.4％酪蛋白醋酸钠溶液

1mol/L醋酸溶液

0.1mol/L醋酸溶液

0.01mol/L醋酸溶液

蛋白质溶液：5％卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液

0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液

3％硝酸银溶液

5％三氯乙酸溶液

95％乙醇

饱和硫酸铵溶液

硫酸铵结晶粉末

0.1mol/L盐酸溶液

0.1mol/L氢氧化钠溶液

0.05mol/L碳酸钠溶液

甲基红溶液

五、实验操作

等电点的测定

?取同样规格的4支试管，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀

?振荡摇匀后，观察各管有何变化。放置片刻，向各管内加8mL水，然后在第2、3号管中各加1滴甲基红，再分别用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L 碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成

?每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，观察沉淀是是否再溶解。解释各管发生的全部现象

六、实验思考

何谓蛋白质的等电点和沉淀反应？有何实用意义？

详细记录各实验的结果和现象，并解释这些现象。

基础生物化学实验.

生物化学实验 实验基本原理 1 有效数字计算（结合电子天平的应用等） 加减法： 进行数字加减时，最后结果所保留的小数点后的位数应与参与运算的各数中小数点后位数最少者相同，其尾数“四舍五入”。如：0.124+1.2345+12.34=13.6979，应取13.70。 乘除法： 进行数字乘除时，最后结果的有效数字应与参与运算的各数中有效数字位数最少者为准，而与小数点的位数无关，其尾数“四舍五入”。如：1.23×0.12=0.1476,应取0.15。 2 误差分析 误差为实验分析的测定值与真实值之间的差值。误差越小，测定值越准确，即准确度越高。误差可用绝对误差和相对误差表示。 绝对误差= 测定值- 真实值 相对误差= 绝对误差÷真实值×100% 一般用相对误差表示结果的准确度，但因真实值是并不知道的，因此实际工作中无法求出分析的准确度，只得用精确度来评价分析的结果。 3 偏差分析（结合“可溶性蛋白或赖氨酸实验”要求掌握） 精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。偏差也有绝对偏差和相对偏差两种表示方法。 绝对偏差= 单次测定值- 算术平均值（不计正负号） 相对偏差= 绝对偏差÷算术平均值×100%

例如：分析某一材料糖含量，共重复测定5次，其结果分别为：16.1%，15.8%，16.3%，16.2%，15.6%，用来表示精确度的偏差可计算如下： 分析结果算术平均值个别测定的绝对偏差（不计正负） 16.1% 0.1% 15.8% 0.2% 16.3% 16.0% 0.3% 16.2% 0.2% 15.6% 0.4% 平均绝对偏差=（0.1%+0.2%+0.3%+0.2%+0.4%）÷5 = 0.2% 平均相对偏差= 0.2÷16.0×100% = 1.25% 在实验中，有时只做两次平行测定，这时就应用下式表达结果的精确度： 两次分析结果的差值÷平均值×100% 4 实验结果的表述：实验结果可用列表法（“影响酶作用的因素”常用）和作图法（综合实验用）表示。 第1章分光光度技术 分光光度技术是光学（光谱）分析技术的一种，它是利用物质的特征吸收光谱来对不同物质进行定性和定量分析的一项技术。我们将重点介绍紫外光-可见光分光光度法。 一、紫外光-可见光分光光度法的基本原理 1、讨论的波长范围：200～400nm的紫外光区和400～760nm的可见光区。 人肉眼可见的光线称可见光，波长范围在400～760nm；

生物化学实验报告册

生物化学实验报告册 1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。 2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。 3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。 4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。 5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。 6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。 7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。 8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入

水槽内，并放水冲走。 9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。 实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。 10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。 实验报告通过分析总结实验的结果和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。 1．实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。 2．实验报告的前三部分①实验原理、②实验材料、③实验步骤要求在实验课前预习后撰写，作为实验预习报告的内容。预习时也要考虑并设计好相应实验记录的表格。 3．每项内容的基本要求 实验原理：简明扼要地写出实验的原理，涉及化学反应时用化学反应方程式表示。 实验材料：应包括各种来源的生物样品及试剂和主要仪

基础生化实验-蛋白质纯化

蛋白质纯化

一、目的: 利用金属亲和性管柱(metal affinity column)来大量纯化带有affinity tag的基因重组蛋白。 二、原理: 由于六个Histidine 所组成的His Tag (metal affinity tag)可与Ni2+ bind，所以利用基因重组技术在表现的蛋白质加上His Tag，再以金属亲和性管柱 (Ni-NTA) (此His- tag序列可与带二价正电的阳离子相螯和)及liquid chromatography来大量纯化蛋白质。 三、试剂与器材: 1.loading(binding) buffer (10mM imidazole,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl Ph7) ?细菌回溶成为蛋白质的载体以保持活性 2.wash buffer (20mM imidazole,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl,Ph7) 3.elution buffer (20mM EDTA,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl,Ph7) 上课补充: ?蛋白质很脆弱，需要在特殊的buffer里。

四、仪器与设备: FPLC(速液相色谱仪) 五、步骤: 1.将管柱架在铁架上，把亲和性胶体悬浮装填于管柱内。 2.以2~3倍CV loading buffer清洗管柱后，注入蛋白质样本。 3.以wash buffer梳洗，2到3倍column体积。 4.用wash buffer和elution buffer进行线性梳洗，并收集流出液体，以 FPLC UV monitor上的OD280数据读取样品流出与否，并观察冲离液之 曲 线图。 上课补充: ?胞内型分泌需要用超音波破菌，因为会放热所以要放在冰中使用。 ?线性梳洗为加入elution buffer会有颜色变化会把镍离子跟imidazole冲 洗掉，剩下胶体溶液。 ?其中imidazole和Histidine类似也会和镍离子结合所以会竞争，可拿来 洗涤蛋白质。(可详见问题一及补充资料2) 六、问题:

生化实验报告模版

生物化学实验报告 姓名：郭玥 学号： 3120100021 专业年级： 2012级护理本科 组别：第8实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心

【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】 实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法 2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法 3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法 4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法 5、了解柱层析技术 实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。 2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别， 可分离纯化各种蛋白质。 3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可 使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后，由 于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃 至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷 大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。

4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆 的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。 5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。 它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中 各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电 泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α 2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱 DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液 醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸 1%BaCl 溶液氨基黑染色液 2 漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液 电泳仪、电泳槽 实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定） 实验步骤： （一）盐析+凝胶柱层析除盐：

生化实验

1．火 （1）酒精及其它可溶于水的液体着火时，可用水灭火 （2）汽油、乙醚、甲苯等有机溶剂着火时，应用石棉布或砂土扑灭，绝对不能用水，否则反而会扩大燃烧面积。 （3）电起火，不能用水和二氧化碳灭火器，应切断电源或用四氯化碳灭火器。 2．烧伤 （1）强碱烧伤：先用大量水冲洗，再用5%的硼酸溶液和2%的乙酸溶液冲洗。 （2）强酸烧伤：先用大量水冲洗，再用5%的碳酸氢钠或5%的氢氧化铵冲洗。 氨基酸的分离鉴定纸层析法 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂和水组成。物质被分离后在纸层 析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的： 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大 小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量 和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨 基酸。 在操作过程中，手不要摸滤纸。 点样直径不超过3mm 。 点样的一端朝下, 扩展剂的液面需低于点样线1cm。 即时取出滤纸, 以免出现氨基酸层析跑到滤纸的外面不能检测。 蛋白质及氨基酸的呈色反应 双缩脲反应 紫红色肽键可用于蛋白质的定性或定量测定一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。 茚三酮反应 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH 条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。 与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。 黄色反应 含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。

生化实验基本原理及技术

生物化學實習 1 緒論 (一) 原理 1. 光依據其波長來分類： (1) 200nm~400nm 短波屬於紫外光 (2) 400nm~700nm 可見光波長 (3) 700nm~900nm 長波屬於近紅外光 2. 光通過溶液時，特定波長的光被吸收，眼睛察覺到的是沒有被吸收的波長。 核黃素會吸收450nm 的光，紅光與黃光會通過溶液而被肉眼所見。

第一單元 生化實驗基本原理及技術 2 圖1-1光譜儀 光譜儀可用來鑑定及定量純或不純的溶液中所含有的特定化合物，主要原理是基於兩個物理定律：1.柏朗定律；2.比爾定律 。 1. 柏朗定律：每單位厚度溶液其吸收入射光的比率為定值，被溶液吸收的入射光量與入射光強度無關。被每單位厚度溶液吸收的入射光比率為定值，每一單位厚度溶液若吸收10%的光，則光經過每一單位厚度溶液時，其強度即減少10%。 I ＝I 0 ? e -αι I ：穿透光強度 I 0：入射光強度 α ：溶液吸光係數 ι：光路徑長度 柏朗定律中以對數為底轉換公式，將吸光係數α轉換成比例常數K → log 10 I 0 / I ＝K ι log 10 I 0 / I ＝ 吸光值(absorbance ；A) 或光密度值(optical density ； OD)

生物化學實習 3 2. 比爾定律：光經過吸光物質所產生的吸光值，與溶液中每單位面積所含的吸光物質數目成比例。 比爾定律描述比例常數K 與待測吸光溶液中溶質的濃度有關。 K ＝εc ε：消光指數 c ：吸光物質濃度 I ＝ I 0? 10-εc ι log 10 I 0 / I ＝ A ＝log 1010εc ι＝ εc ι 當ι（光路徑長度）＝1 cm 時 log 10 I 0 / I ＝ A ＝log 1010εc ＝ εc 特定溶質在特定波長下，消光係數ε為一常數。因此，當吸光物質的濃度變成兩倍，於相同的光路徑下，被吸收的光量也會變成兩倍。 圖1-2 22 μM 溶於0.1M 磷酸鈉，pH 7.06，1公分 光路徑(light path)的條件下測定 波長 吸 光 值

生化大实验实验报告

生化大实验 实验报告 姓名： 学号： 专业： 班级： 实验班级： 单位： 指导老师：

实验1 多酚氧化酶（PPO）的分离提取 一、实验原理： 多酚氧化酶(PPO)能够通过分子氧氧化酚或多酚形成对应的醌，它是植物组织广泛存在的一种含铜氧化酶，位于质体、微体，可参与植物生长、分化、种皮透性及植物抗性的调节，属于末端氧化酶的一种。 植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成为醌，使组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用，所以受伤组织一般这种酶的活性就会提高。另外，多酚氧化酶也可以与细胞其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。 蛋白质在不同浓度的盐溶液中的的溶解度不同，通过向溶液中加入适量的固体硫酸铵来调节粗提液的盐浓度从而可以将PPO蛋白从体系中析出，且大分子蛋白质不能通过透析膜。 二、实验目的： 通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关的仪器设备的正确使用的方法，以及蛋白质的提取分离的系统技术。 三、材料与试剂： 1.材料：马铃薯（两小组共称200g） 2.试剂：0.03M磷酸缓冲液pH 6.0（含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮）配制是配x10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵； 0.03M磷酸缓冲液pH 6.0（含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCl2） 3.设备：试管与试管架；烧杯、玻璃棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆机；pH计和pH试纸；高速冷冻离心机； 四、操作步骤： 1.两小组共称取200g土豆削皮后切成小块，加入300ml缓冲液A，两者按1:1(W/V)比例匀浆1min； 2.用两层纱布将所得的浆液过滤； 3.将匀浆滤液装入200ml的离心管10000rpm离心5min； 4.上清液两组平分，每组150ml，加36.45g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心5min； 5.取上清液定容至150ml，加入30.75g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心8min，倒掉上清液得粗酶沉淀,用并加入10ml 0.03M磷酸缓冲液B复溶沉淀3-5min； 6.将所得溶液倒入透析袋中，用0.02M的KCl溶液透析至无硫酸铵根离子。 五、结果和分析： 实验所得的初酶液颜色为浅黄色，颜色浅，主要是实验过程中特别是匀浆以前速度较快酚类被氧化的少，从而最大程度的保留了PPO的活性；经过一个夜晚的透析，得到了澄清的略带黄色的液体，这样就为进一步的柱层析提供了优良材料。 六、讨论与结论： 1. 本实验在匀浆阶段应尽量快速，防止酚类充分暴露在空气中被氧化； 2．实验材料马铃薯在削皮前一定要清洗干净；

检验科生化室工作流程

检验科生化室工作流程 1.标本的接收与处理 1.1标本的接收 ①严格执行患者、化验单及标本收集器皿的核对制度，保证无差错。 ②认真审核检验申请单，申请单上需标明：患者姓名、性别、年龄、科别、病区及床号、临床诊断、标本采集时间和实验室收到时间等。 ③签收人员应逐一检查标本的质量，避免血少或严重污染等，对不合格、但可以接受 的样本，签收人员要记录标本的缺陷，对于不符合要求的样本，签收人员应拒绝接受， 同时注明拒收原因，并通知临床重新采集标本。 1.2 标本的处理 ①生化室收到临床标本后，应尽快低速离心分离血清或血浆(天冷血清尚未析出，可将 标本放置水浴箱15-20 min)，离心速度为3000 r/min左右，时间为5-10 min。不主张用玻璃棒或类似器材去剥离附着于试管壁和管塞上的凝块，因处理不当可导致溶血；如果必须将凝块与试管内壁分开或取下管塞时，一定要小心处理。 2.仪器与试剂 2.1 仪器 ①建立仪器档案：保存每一台仪器的购置论证书、仪器说明书、操作手册。 ②建立仪器操作程序：按照操作手册的要求，建立本室仪器操作程序，并在实际操作中严格按操作程序实施。 ③仪器校准：所有仪器按要求进行校准。校准时，必须选用与仪器配套的校准品，不同系统应选用不同的校准品。所有校准都应有时间、结果、变更和频度的记录和说明。④仪器比对:对具有两台或两台以上同类仪器, 并有相同检测项目，应定期进行仪器间比对实验, 以确保结果的一致性。一般3个月或有以下情况应进行一次比对：质控结果不一致、其中一台仪器经维修保养、更换元器件、试剂更换厂家等。

⑤检测方法选择:原则上在确保质量的前提下，生化室应尽可能选择各项目的推荐方法，如因测定方法和试剂的更换造成临床正常值参考范围发生变动的，应做好对临床的宣传工作。 2.2 试剂 ①试剂选择：参照《卫生部临床检验体外诊断试剂盒质量检定暂行标准》的有关规定，在充分考虑质量的前提下，应尽可能选用和生化检验仪器相配套的试剂，如使用其他商品化试剂应做相应的对照实验并有可行性的报告和记录。 ②试剂的使用和保存：严格按照说明书的要求进行操作和保存，如果是干粉或片剂，一定要注意复溶水的质量。在试剂的使用过程中，应有相应的批号、使用情况及更换记录和说明。 3.室内质控与室间质评 室内质控是为了监测和评价实验室工作质量，以决定常规检验报告能否发出所采取 的一系列检查、控制手段，它代表每天检验结果的准确性；而室间质评既由实验室 以外的某个机构对各实验室常规工作的质量进行监测忽然评定，以评价各实验室工作 质量，逐步提高常规检测的准确性和可比性。以切实做好本室的室内质控为基础，实 验室应积极参加室间质评活动，以增加检验结果的准确度和可比性。各类生化检验项 目应有相应的室内质量控制系统。①质控品选择：选择符合要求的两个浓度质控品。 ②严格按照质控品说明书要求，正确使用和保存。③设定靶值：实验室应对新批号质 控品的各个测定项目确定靶值，靶值必须用本室现行使用的测定方法进行确定；定值 质控品的标定值只能作为确定靶值的参考。④质控方法选择：根据室内质控的要求选 择多规则质控方法。⑤绘制质控图及记录质控结果:根据质控品的靶值和控制限绘制 Levey Jennings控制图(单一浓度水平)，或将不同浓度水平的结果绘制在同一图上 的Youden图，将原始质控结果记录在质控图表上，保留打印的原始质控记录。⑥失 控处理及原因分析：填写失控报告，分析误差原因，并采取相应处理措施；根据分析 所得的失控原因，判断结果是真失控还是假失控，以决定当批结果是否发出或重新测 定。

基础生化实验 第三个实验 双缩脲

基础生化实验--双缩脲法测定蛋白质含量 双缩脲法测定蛋白质含量（考核实验） 一、教学目的与要求： ①加强对蛋白质的有关性质的认识； ②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法； ③对学生所学进行综合的测试。 二、教学实验原理： 蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关，因此利用此进行比色测定蛋白质含量。 在一定条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540—560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度，标准蛋白溶液可以用结晶的牛（或人）血清白蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。 除-CONH-有此反应外，-CONH2-，-CH2-，NH2-，-CS-CS-NH2，等基团亦有此反应。 三、考核主要内容 1、标准曲线的制作 取6支干净的试管，按0→5编号，然后按下表依次加入试剂，充分混匀，在室温下放置半小时，以管为空白，在550nm波长处测定消光值（OD），以各管蛋白质含量（毫克）横坐标，OD值为坐标，画出标线。 编号0 1 2 3 4 5 蛋白质标准液（毫升）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（毫升） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 双缩脲试剂（毫升） 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 2、样品测定：取样品液1.0 ml，同法进行，测其OD值，对照标准曲线求得未知液蛋 白质浓度。 3、分光光度计的使用：规定每组在10min以内全部完成操作（共测6支管）；同时注意 操作是否规范。

4、成绩的计算：此次的实验占30%（包括平时的表现及实验报告的完成情况和完成质 量），平时的五次实验共占70%，每次实验按总分为5分为满分进行打分，总评折合 成百分制。 四、实验注意事项： ①标准样品的浓度为：10μg/ml； ②实验过程中不得过问他人，同组人可以配合进行； ③实验报告在课堂上独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他人数据，一 旦发现以零分处理； ④实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做； ⑤对实验结果进行简单的分析. 一、实验目的： 1.掌握分光光度计的使用方法。 2.掌握标准管法测物质含量的方法。 3.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法。 二、实验原理： 双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物，此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行测定。双缩脲法最常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。 三、试剂和器材 （一）试剂: 1.标准蛋白溶液（5mg/ml）:准确称取已定氮的酪蛋白(干酪素或牛血清白蛋白)用0．05mol/L氢氧化钠溶液配制，冰箱存放备用。 2.双缩脲试剂:溶解1.5g硫酸铜晶体(CuSO4·5H2O)和6.0g酒石酸钾钠晶体 NaKC4H4O6·4H2O)溶于500ml蒸馏水中，在搅拌下加入300ml10％氢氧化钠溶液，用水稀释到1000ml，贮存于内壁涂以石蜡的瓶内。此试剂可长期保存。

生物化学实验报告

实验一糖类的性质实验 （一）糖类的颜色反应 一、实验目的 1、了解糖类某些颜色反应的原理。 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、颜色反应 （一）α-萘酚反应 1、原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后 者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶内。用前配制。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 1％淀粉溶液100 mL ％糠醛溶液100 mL 浓硫酸 500 mL 4、实验操作 取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、％糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。 观察记录各管颜色。 （二）间苯二酚反应 1、原理 在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 塞氏试剂：％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL 浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 4、实验操作

基础生化实验内容2012版

实验一、考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白质含量 【实验目的】 学习、掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法。 【实验原理】 考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合则呈现蓝色。染料的最大吸收从465nm变为595nm，蛋白质－染料复合物在595nm具有很大的光吸收值，蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为1ug蛋白质。本方法操作简便快捷，灵敏度高，测定范围1-1000ug。 【实验材料、仪器及试剂】 1．材料：新鲜的植物材料 2．仪器：722分光光度计，天平，离心机，研钵，容量瓶，试管，移液管，漏斗 （1）标准牛血清蛋白质溶液：0.1mg/ml （2）考马斯亮蓝G-250溶液： 【实验步骤】 1．样品的提取：准确称取鲜样2克，用2ml蒸馏水在冰浴中研成匀浆，转移到25ml容量瓶中并定容。在8000rpm冷冻离心10min，取上清液待测。 2．标准曲线的绘制：取8支具塞试管，按表1加入试剂。 将上面8支试管摇匀，放置5分钟后，用1cm光径比色杯在595nm下比色，记录吸光值，以蛋白质浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。根据样品吸光值在标准曲线查得蛋白质含量。【结果计算】 C × V T 样品中蛋白质含量（ug/g.FW）＝ V S×W F×1000 式中： C为查标准曲线值（ug）； V T为提取液总体积（ml）； V S 为测定时加样量（ml）； W F为样品鲜重（g）。

实验二植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。 植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式，一种是在固相载体上包被抗体（直接法），另一种是包被抗原（间接法）。 直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。 间接法的原理可用下式表示： Ab+H+HP=AbH+AbHP 其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H量的多少。 材料、试剂及设备 1 材料 各种新鲜植物材料 2 仪器设备 研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。 3 试剂 (1) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 ·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。 (2) 样品稀释液：500 ml PBS中加0.5 ml Tween-20，0.5g明胶（稍加热溶解）。 (3) 底物缓冲液：称取5.10g C6H8O7·H2O（柠檬酸）， 18.43g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1 000ml 蒸馏水，再加1 ml Tween-20，pH为5.0。 (4) 洗涤液：1000ml PBS加1mlTween-20。 (5) 终止液：2mol/L H2SO4。 （6）提取液：80％甲醇，内含1 mmol/L BHT(二叔丁基对甲苯酚，为抗氧化剂，先用甲醇溶解BHT，再配成80%的浓度))。 操作步骤 1．样品中激素的提取 （1）称取0.5-1.0g新鲜植物材料（若取样后材料不能马上测定，用液氮速冻半小时后，保存在-20℃的冰箱中），加2ml样品提取液，在冰浴下研磨成匀浆，转入10ml试管，再用2ml提取液分次将研钵冲洗干净，一并转入试管中，摇匀后放置在4℃冰箱中。 （2）4℃下提取4h，3500转/min离心8min, 取上清液。沉淀中加1ml提取液，搅匀，置4℃下再提

生化实验报告资料

生物化学实验报告 姓名：吴瑞 学号： 3120016004 专业年级： 2012级临床医学（妇幼保健) 组别：第四实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心

一、实验室规则 1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。 2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。 3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。 4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。 5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。 6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。 7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。 8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。 9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。 10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。

生化室实习自我鉴定

生化检验科实习鉴定 在生化室实习的时间即将结束，在这一个月实习期间，我认真遵守科室的制度，团结同学，尊敬老师。 生化中的肝肾、血脂功能检查，是每个医院都是必不可少的基本检查。 虽然每天我需要处理大量的标本，先编号、再离心、最后上机，对每一项操作检验员都得仔细把好关。因为影响生化检查结果的因素有很多很多。 每天必做的生化质控，是一项最重要的指标，可以衡量今天仪器状态、试剂稳定、结果的可靠与否。 老师也会积极地给我们演示操作、讲解原理，帮助我们清晰认知质控的重要性、必要性。 很多人认为生化室的工作时轻松的，但我不这么认为，尽管现在全自动生化仪普及，不需要花费太多人力，但生化质控偏离、生化结果起伏是要检验人员作出精准的分析判断。 生化科室的实习，更近一步地丰富了自己的操作经验，也为自己熟练生化操作垫定基础。相信自己以后一定可以做好生化检验员！篇二：2012临床生化组实习小结光阴似箭，时间如梭，三周的时间确实太过短暂，刚熟悉了生化组的工作，就面临轮转其他专业组，心里全是不舍，这两天真希望时间的脚步能停留下来，能让我对生化组多留下一些记忆。很喜欢生化组融洽的气氛，很留恋老师们爽朗的笑声，很珍惜在生化组难忘的日子，因为珍惜，祈求时间停留；因为珍惜，只想再多争取做些工作。在生化组实习的这段日子里，每一位老师都教会了我很多，我也领悟了很多，现在唯一遗憾就是时间太短，很多东西都只能浅尝辄止，缺乏更深入的体会。 生化组的实习的工作在其他同学看来既简单又无趣，而对我来说则是既熟悉而又陌生，以前最喜欢的课程就是临床生化，因为兴趣加上自己的努力，临床生化的理论知识我还是学的比较扎实，所以一直认为生化组的实习应该会比较得心应手，但在实习的过程中我还是发现纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行，深深的感觉到所学知识的肤浅和在实际运用中的专业知识的匮乏，自己的实际动手能力与工作的要求的还有一定的差距，健康所系，性命所托，生化组的工作作远比想象中的要细致严谨得多，这时才真正领悟到“活到老学到老”的含义，以下是我的实习总结： 实习目的 通过生化组的实习，将所学临床生化相关基础理论密切联系临床实际，巩固和提高所学的专业知识，熟练掌握常用临床检验生物化学基本操作技能，培养正确的思维方法与独立处理标本的能力，达到能分析、解决临床实际问题的目的。形成谦虚谨慎、多做、多学、多思考的习惯，树立全心全意为伤病员服务的思想，发扬救死扶伤的革命人道主义精神，培养高尚的职业道德、严肃的科学态度和一丝不苟的工作作风，毕业后能胜任临床检验相关医（技）师工作。 实习内容及要求 1.熟悉临床生化实验室的各项规章制度，严格遵守生化室的各项操作规程，熟悉sop文件操作规程，严格按照sop文件操作。 2.熟练掌握常用肝功、肾功、电解质、血糖、血脂等检验项目原理、方法、临床意义； 3.掌握脑脊液生化、浆膜腔液生化检查项目原理、方法、临床意义； 4.掌握尿液标本的尿蛋白定量、尿肌酐、尿糖等检查项目原理、方法、临床意义； 5.掌握生化分析仪、血气分析仪等仪器设备的原理、使用，以及定标、质控、保养措施及注意事项。了解自动生化分析仪的工作原理、主要性能指标及主要参数设置。 6.掌握全程质控原则：进行标本签收、排序、离心和分离，试剂准备，仪器定标、质控和标本测定，结果分析等，每一个环节每一个步骤的操作都要注意规范化标准化。 7.培养与应用沟通技巧、建立良好的医患关系，培养自学能力和在专业上继续探索与发

生化试验基本技术

第二章生化实验基本技术 第一节离心分离技术 离心是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的最常用的方法之一，也是生化实验室中常用的分离、纯化的方法。尤其是超速冷冻离心已经成为研究生物大分子实验室中的常用技术方法。离心机(centrifuge)是实施离心技术的装置。离心机的种类很多，按照使用目的，可分为两类，即制备型离心机和分析型离心机。前者主要用于分离生物材料，每次分离样品的容量比较大，后者则主要用于研究纯品大分子物质，包括某些颗粒体如核蛋白体等物质的性质，每次分析的样品容量很小，根据待测物质在离心场中的行为(可用离心机中的光学系统连续地监测)，能推断其纯度、形状和相对分子质量等性质。这两类离心机由于用途不同，故其主要结构也有差异。 一、离心原理 离心技术的主要原理就是将样品放入离心机转头的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一个向外的离心力。由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同，在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同，由此便可以得到相互间的分离。 (一)离心力和相对离心力 离心力的单位为g，即重力加速度(980.6cm/S2)，离心力的大小可根据离心时的旋转速度V(r/min 每分钟转数，revolution per minute)和物体离旋转轴中心的距离r(cm)按下式计算：g=r×V2×1.118×10或按下式计算所需的转速：()r 89445 =。 ? V／ g 离心技术是根据微小颗粒物质在离心场中的行为建立并发展起来的。离心机的转头能够以稳定的角速度做圆周运动，从而产生一个强大的辐射向外的离心力场，它赋予处于其中的任何物体一个离心加速度，使之受到一个外向的离心力，其定义为： F = mω2r 式中：F为离心力的强度；m为沉降颗粒的有效质量；ω为离心转子转动的角速度，其单位为rad/s；r为离心半径(cm)，即转子中心轴到沉降颗粒之间的

2013至2014学年第二学期生化实验室仪器室管理工作总结

马家湾九年制学校2013至2014学年第二学期 生化实验室仪器室管理工作总结 本学期，我兼任学校生化实验室和仪器室的管理工作，现就一年以来的工作作如下总结： 一、实验室的管理 实验教学是生物、化学教学的一个重要组成部分，做好生物、化学实验，让学生巩固即得知识，培养学生实验技能，是中学生物、化学教学目标之一。 在实验室看似简单的准备试验，看似清闲的仪器管理，其实还有许多意想不到的不易。尤其是要迎接省上“双高双普”督导组的督导检查，更是让人千头万绪。为了规范管理好实验室，我主要从以下几个方面努力： 首先，面对实验室里众多的试剂瓶和几万元成堆的新进仪器，我为了尽快熟悉他们，整理、清洗了所有的橱柜里的仪器、药品，对照账目，一一排查，很快对实验室里的仪器药品都做到了心中有数。对仪器的摆放重新科学规划，把仪器与药品在有限的空间里巧妙地用柜子隔开，仪器室药品室看起来井井有条、干净整洁。 其次，为了配合教学，我有时亲自及时把仪器药品送到任课教师手中，我还参照教学进度计划，仔细认真钻研教材，明确教材中的每一个实验所用仪器、药品，主动提醒课任老师，不仅可以提早查漏补缺，免去了任课教师填写实验通知单的程序，减轻了负担。 再次，生物分组实验，利用我担任七、八年级生物教学的优势，仪器的准备、摆放、回收、清洗全由我一人动手。但生物化学分组实验仪器准备和清洗回收工作相当繁重，几乎每一件用过的玻璃仪器、水槽、污物桶等都得认真清洗，这些工作都需要消耗很多气力和时间，经常被这些琐碎的工作累得腰酸背痛是常有的事，但是干一行爱一行是咱老实人的本分。 实验室是为教学服务的，我在准备好化学、生物实验，管理各个实验室、仪器室、药品室的同时，其他科任老师需要时，我也会全心全意地为他们服务。二、仪器室的管理

生物化学实验指导

生物化学实验须知 一、实验目的 1．培养学生严谨的科学作风，独立工作能力及科学的思维方法。 2．学习基础的生物化学实验方法，为今后的学习与研究准备更好的条件。 3．培养学生爱护国家财物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。 4．培养学生的书面及口头表达能力。 二、实验的总要求 1．按教研室予先公布的实验进度表，了解各次实验的具体内容，并认真做好预习。弄清各步骤的意义，避免教条或机械式做实验。 2．进行实验不仅要求结果良好，而且要求敏捷高效。为达到此目的，实验者应注意：①一切步骤都按正规操作法进行；②样品与试剂勿过量取用；③宜粗者勿细（例如粗天平称量物品即足够准确时，不用分析天平，用量筒取液足够准确时，不用吸量管）；④试剂、仪器防止污染及破损，保持实验环境的整洁。⑤注意力集中，避免差错。 3．实验中观察要仔细，记录要详尽、及时与客观，不得于实验后追记，应直接记在实验报告本中，而且无论实验成功与失败，都应记下。对于失败的实验，要分析其原因。 4．实验室是集体学习与工作的场所，实验时应保持肃静，不得大声喧哗，以免影响他人的工作与思考。对师长尊敬，对同学要团结友爱。实验后应清洗整理用过的仪器及清理自己的实验场所。 三、实验报告 实验报告的书写是培养学生书面表达能力和科学作风的重要手段之一，实验者应该重视。实验报告的内容包括下列各项：实验名称、实验日期、实验目的、实验原理、实验步骤、实验记录、计算（定量测定、解释）、讨论或小结。实验记录除应包括“实验总要求”的第3项要求外，还应包括原始记录。原始记录是随做随记的第一手记录，应由指导教师签字认可。书写实验报告要字迹工整，语句通顺。书写工整的实验报告，是尊师的重要表现之一。 四、组织与分组 1．每一个班学习委员负责①实验报告的收集与分发；②安排清扫值日名单； ③反映同学学习情况及对教学工作的意见；④其它临时性的工作。 2．一般实验都为两个学生单独进行。有的实验要4人一组，由相邻两学生组成固定小组。小组的成员在指导教师的同意下，可作适当的调整。

【精品】实验室工作总结3篇

【精华】实验室工作总结3篇 总结就是对一个时期的学习、工作或其完成情况进行一次全面系统的回顾和分析的书面材料，它能够使头脑更加清醒，目标更加明确，因此十分有必须要写一份总结哦。你所见过的总结应该是什么样的？下面是整理的实验室工作总结3篇，希望能够帮助到大家。 20xx年化验室全体人员积极参加服务中心的各项政治活动和业务学习，提高自身思想认识和服务技能，围绕我中心发展大局，积极开展各项工作，认真完成了服务中心的各项工作任务。 一、工作完成情况 1、截止到11月28日，化验室共计完成优生四项检测6794例(阳性119例)、血常规检查6058例、尿八联检查65例、*常规检查48例、肝功检查28例、唐氏综合症筛查361例、尿妊娠检查4907例、乙肝表面抗原筛查6836例、梅毒筛查4062例(检查出阳性2例)、乙肝五项117例、血糖血脂检查142例。 2、作好各实验仪器的维护和保养工作，对出现各类故障，认真研究积极应对及时解决，自行无法解决及时联系厂家工程师，保证了我科各类仪器的正常运行，又为单位节省了维修成本。 3、对育龄群众服务态度明显改善，我科每天平均接待育龄群众五六十人次，工作较为繁琐，大家都严格执行查对制度，包括育龄群众的信息、抽血注意事项等，耐心解释育龄群众的各类报告单，严把分析前质量控制关，保证检验结果的准确性。 4、科室服务水平不断提高，一切工作以检验质量为核心，避免差错事故的发生,坚持要求我科人员具有高度的服务意识，全力搞好以育龄群众为中心的服务工作。针对群众提出的热点难点问题，结合科室实际情况认真加以研究和解决，赢得了育龄群众的信赖，20xx年内无技术服务事故发生。 二、存在的问题 1、科室人员结构不尽合理，科学分工难以实现。 2、个别仪器设备落后，影响实验结果的准确性和及时性。 3、成员进修机会较少，业务素质有待提高。 20xx年我们将努力改进，取长补短，始终将“一切群众为中心”作为我们工作的核心和动力，以更加旺盛的精力和饱满的热情去完成明年的各项任务。 20xx年工作计划 1、继续完善各项规章制度，按照服务中心要求，做好各项工作。

生 化 实 验

生化实验 实验一总糖和还原糖的测定 ──3,5－二硝基水杨酸法 目的要求： 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 实验原理: 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 黄色桔红色 试剂和器材 一、试剂 3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。 6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。 碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 0.1% 酚酞指示剂。 二、材料 藕粉，小麦淀粉或玉米淀粉。 三、器材 723PC、S22型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。 一、葡萄糖标准曲线制作 取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。 管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg 1 0 0.2 1 0.8 0

0.4 2 0.4 0.6 0.8 3 0.6 0. 4 1.2 4 0.8 0.2 1.6 5 1 0 2 操作方法 在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 二、样品中还原糖的提取 准确称取0.5g小麦（）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 三、样品总糖的水解及提取 准确称取0.5g小麦(玉米)淀粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。 四、样品中含糖量的测定 取7支15mm×180mm试管，分别按下表加入试剂： 项目空白还原糖总糖 H2O/ml 1 0 0 0 0 样品溶液/ml 0 1 1 1 1 3,5-二硝基水杨酸试剂/ml 2 2 2 2 2 OD值/540nm 加完试剂后，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖量。 五、结果处理 按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量： 式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/ml； V──还原糖或总糖提取液的总体积，ml；