分子生物学专题luciferase核心实验技术：实验原理
分子生物学专题luciferase核心实验技术：实验原理
荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。萤光生成反应通常分为以下两步：萤光素+ atp→萤光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+ PPi萤光素化腺苷酸+ O2→氧萤光素+ AMP +光荧光素酶的基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中，将不同类型的细胞(骨髓干细胞、T细胞等)标记上(即表达)荧光素酶，就可以用高敏感度的CCD相机进行对动物体内进行活体观察而不会伤害到动物本身。在荧光素酶中加入正确的萤光素底物就可以放出荧光，而发出的光子可以被光敏感元件，如萤光探测器或改进后的光学显微镜探测到。这就使得对包括感染在内的多种生命活动进程进行观察成为可能。荧光素酶分析可应用于启动子研究中分析顺式作用元件和反式作用因子、药物筛选、sirna和miRNA筛选、分泌途径及蛋白定位报告基因检测、活细胞的实时动态研究、信号转导通路分析、难转染的细胞(包括干细胞和原代细胞)的研究、RNA剪接研究。萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线，
从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。Dual-Luciferase?双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故而没有交叉干扰。得益于超强的光信号和超高的信噪比，本系统被广泛用于miRNA靶基因验证。转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式因子，转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。萤光素酶报告基因实验(luciferase Assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段，其原理简述如下：(1)用靶启动子的特定片段替换报告基因质粒(如pGL3-basic)的启动子区。(2)将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转。如果该转录因子能够激活靶启动子，则萤光素酶就会表达，且其表达量与转录因子的作用强度成正比。(3)加入特定的底物，萤光素酶与底物反应，产生萤光素，检测荧光的强度可以对萤光素酶的活性定量，进而判断该转录因子能否与靶启动子片段发生作用(及其作用强度)。双荧光素酶报告基因测试，是结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术。在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时，通常采用第二个
报告基因来减少实验的变化因素。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速、灵敏、简便。其应用广泛，可同时分析多个调控元件、同时分析多个信号转导通路、单次筛选一个以上的靶点(包括脱靶效应、分析两个或多个通路之间的相互作用)。Luciferase核心实验技术：实验原理' 图2='' 常用载体'='图2 常用载体喜欢我，关注我拉到最上方标题下，点击“临床科研那些事”关注搜索公众帐号：Bridge_the_gap也请你推荐给你身边的朋友，感谢你~
《数据库原理及应用实验》
《数据库原理与应用实验》 实验报告册 学年第学期 学院： 专业： 年级： 姓名： 学号： 任课教师：
MySQL+Navicat安装步骤与下载地址百度地址： 配置与简单使用百度地址： 本文档所书写的代码，为本人纯手工敲打，并且通过软件测试成功，欢迎大家进行学习，如有错误，可联系本人
实验一创建和维护数据库 一、实验目的 （1）掌握在Windows 平台下安装与配置MySQL 的方法。（2）掌握启动服务并登录MySQL 数据库的方法和步骤。（3）掌握MySQL 数据库的相关概念。 （4）掌握使用Navicat 工具和SQL 语句创建数据库的方法。 （5）掌握使用Navicat 工具和SQL 语句删除数据库的方法。 二、实验要求 （1）学生提前准备好实验报告，预习并熟悉实验步骤；（2）遵守实验室纪律，在规定的时间内完成要求的内容；三、实验内容及步骤 （1）在Windows 平台下安装与配置MySQL 版。 （2）在服务对话框中，手动启动或者关闭MySQL 服务。（3）使用Net 命令启动或关闭MySQL 服务。 （4）分别用Navicat 工具和命令行方式登录MySQL。 （5）在文件中将数据库的存储位置改为D:\MYSQL\DATA。 （6）创建数据库。 ①使用Navicat 创建学生信息管理数据库gradem。 ②使用SQL 语句创建数据库MyDB。 （7）删除数据库。 ①使用Navicat 图形工具删除gradem 数据库。 ②使用SQL 语句删除MyDB 数据库。
常见的数据库产品有哪些 五、实验总结 1、收获 2、存在的问题
分子生物学实验思考题答案
分子生物学实验思考题答案 实验一、基因组DNA的提取 1、为什么构建DNA文库时，一定要用大分子DNA 答、的大小(即数目)取决于基因组的大小和片段的大小，片段大则文库数目小一些也可以包含99%甚至以上的基因组。而文库数目小则方便研究人员操作和文库的保存。所以构建文库要用携带能力大的载体尽量大的DNA片段. 2、如何检测和保证DNA的质量？ 答、用看，有没有质白质和RNA等物质的污染，还可以测OD，用OD260/280来判断，当OD260/OD280< ，表示蛋白质含量较高当OD260/OD280> ，表示RNA含量较高当OD260/OD280=～，表示DNA较纯。 实验二、植物总RNA的提取 1、RNA酶的变性和失活剂有哪些？其中在总RNA的抽提中主要可用哪几种？ 答、有DEPC,Trizol，氧钒核糖核苷复合物，RNA酶的蛋白抑制剂以及SDS，尿素，硅藻土等；在总RNA提取中用PEPC,Trizol 2、怎样从总RNA中进行mRNA的分离和纯化。 答、、利用成熟的mRNA的末端具有polyA尾的特点合成一段oligo(dT)的引物，根据碱基互补配对原则，可将mRNA从总RNA中分离出来 实验四、大肠杆菌感受态细胞的制备 1、感受态细胞制备过程中应该注意什么？ 答、A）细菌的生长状态：不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从-80℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备的菌液。细胞生长密度以刚进入时为宜，可通过监测培养液的OD600 来控制。DH5α菌株的OD600为时，细胞密度在5×107 个/mL左右，这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。 B）所有操作均应在无菌条件和冰上进行；实验操作时要格外小心，悬浮细胞时要轻柔，以免造成菌体破裂，影响转化。 C）经CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加，24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；D）化合物及的影响：在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+或Co2+）、DMSO或等物质处理细菌，可使转化效率大大提高（100-1000倍）； E）所使用的器皿必须干净。少量的或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率； 2、感受态细胞制备可用在哪些研究和应用领域？ 答、在中将导入受体细胞是如果受体细胞是细菌则将它用Ca2+处理变为质粒进入。 实验五、质粒在大肠杆菌中的转化和鉴定 1、在热激以后进行活化培养，这时的培养基中为什么不加入抗生素？ 答、活化培养用的一般是SOC培养基，这种培养基比LB培养基营养，此时进行的活化培养只是为了让迅速复苏，恢复分裂活性，此时的细胞还不具抗性，加入会细胞会死亡。 2、什么是质粒？根据在细菌中的复制，质粒有几种类型？用于基因重组的主要用到哪些质粒？ 答、是细菌体内的环状。
数据库系统原理实验报告-基本操作
计算机学院 数据库系统原理实验报告 课程名称：数据库系统原理 开课学期：2015-2016学年第1学期 班级： 指导老师： 实验题目：SQLServer系统基本操作 学号： 姓名： 提交时间：第n周
一.实验目的 （一）通过实验了解大型数据库管理系统SQL SERVER2000基本架构，并且掌握验证SQL SERVER2000是否正确安装和基本的配置方法。 （二）通过实验，掌握SQL SERVER数据库与ACCESS数据库、EXCEL 表和文本文件的数据之间的导入-导出方法。 二.实验原理 大型数据库管理系统是数据库管理的基本平台。SQL SERVER2000数据存储在数据库中。在数据库中，数据被组织到用户可以看见的逻辑组件中。数据库还可以按物理方式，在磁盘上作为两个或更多的文件实现。使用数据库时使用的主要是逻辑组件，例如表、视图、过程和用户。文件的物理实现在很大程度上是透明的。一般只有数据库管理员需要处理物理实现。每个SQL Server 实例有四个系统数据库（master、model、tempdb 和msdb）以及一个或多个用户数据库。 三.实验内容和方法 (一)基本操作 1.启动和停止SQLServer服务 可以通过以下4种方法停止和启动SQLServer服务 (1)SQLServer服务管理器
(2)SQLServer企业管理器
(3)控制面板中的服务对话框
(4)NT服务器命令行 (二)数据的导入导出 1.奖SQL Server 数据库转移到access的数据库(1)启动office的access,建立一个空的数据库 (2)导出数据库
建立一个分子生物学实验室所需的仪器
分子生物学技术信息 关于筹建一个分子生物学实验室所需的仪器 一、上游分子克隆 分子克隆技术是分子生物学的核心技术，这项技术的主要目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝，从而可以深入分析基因结构与功能，并可达到人为改造细胞及物种个体的遗传性状的目的。 1. 分子克隆的基本技术路线： 1) 分离制备目的基因或DNA片段； 2) 目的DNA与载体在体外进行连接； 3) 重组DNA分子转入宿主细胞； 4) 筛选及鉴定阳性重组体； 5) 重组体的扩增。 2. 分子克隆常用仪器：
二、核酸分子杂交 核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最常用的技术之一。其基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下可按碱基互补原则形成双链。由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的高度灵敏性，使其在分子生物学领域中被广泛应用于分子克隆的筛选，基因组中特定基因序列的定量定性检测，基因表达和基因突变分析及疾病的基因诊断等。根据核酸种类分为Southern印迹法和Northern印迹法。 核酸分子杂交中常用的仪器： 三、下游蛋白的表达及分离纯化 目的基因能否发挥其效应,只能通过其表达有功能的蛋白质来实现,因此蛋白质的表达及分析方法成为分子生物学中必不可少的组成部分。 1. 蛋白的表达 大肠杆菌是自然界中最为人知的生物体之一。由于其具有操作简易，产量高和成本低廉等优点，使其成为蛋白质表达的首选宿主。缺点是：表达缺乏翻译后加工，得到的蛋白可能缺乏某些天然蛋白所具有的活性。 酵母作为单细胞低等真核生物，具有易培养，繁殖快，便于基因操作等优点，渐渐被开发作为目的基因的表达系统。其中甲基酵母作为外源基因的表达
数据库原理与技术实验报告
南华大学计算机科学与技术学院 实验报告 （ 2011 ~2012 学年度第二学期） 课程名称数据库原理与技术实验名称数据库实验 姓名谢志兴学号20104030342 专业电气信息类班级1003班 地点8—209教师刘征海
实验 1 认识DBMS
一、利用管理工具创建数据库、表和表间关系 （一）实验目的和注意事项 实验目的：熟悉SQL Server Management Studio的基本操作，进一步理解数据库、表、表间关系的概念。 注意事项：创建数据库和数据表时应认真，如果出现错误，应相应地修改结构或删除。 （二）实验内容 (1) 利用SQL Server Management Studio 创建数据库，名称为【学生选课XXXX】。XXXX为各位同学的学号中的最后四位 (2) 在【学生选课XXXX】中建立数据表，表的定义如下所示。 学生XXXX(学号，姓名，性别，出生日期，院系名称，备注)； 课程XXXX(课程号，课程名，选修课，学分)； 选修XXXX(学号，课程号，分数)。 要求定义每张表的主码，为属性选择合适的数据类型，决定是否允 许为空，为【性别】和【学分】属性定义默认值。 (3) 定义表之间的关系。 (4) 分别为表录入几行数据记录，同时练习数据的修改和删除操作。 （三）实验步骤 (1) SQL Server Management Studio，连接数据库服务器，进入SQL Server Management Studio 主界面。 (2) 右击【对象资源管理器】|【数据库】，选 择快捷菜单中的【新建数据库】命令，弹出【新建数据库】窗口,在各属 性页中设置新建数据库的属性，包括设置数据库逻辑名、所有者、文件 的逻辑名、文件的物理名、文件类型、文件增长方式、文件的路径、文 件组等属性，如图下所示。
《数据库原理与应用》实验报告一
课程名称：数据库原理与应用 实验编号 实验一SQL Server基本操作系别计科系 及实验名称 姓名学号班级 实验地点实验日期2011年4月5日实验时数8 指导教师同组其他成员无成绩 一、实验目的及要求 1、掌握SQL Server2000系统的数据库创建方式。 2、掌握SQL Server2000系统的数据表的创建方式。 3、掌握SQL Server2000系统的数据编辑的基本方式。 二、实验环境及相关情况（包含使用软件、实验设备、主要仪器及材料等） 1、计算机操作系统要求在windows XP以上。 2、并要求SQL Server软件2000以后版本。 三、实验内容及要求 1、数据库创建 使用对象管理器创建一个数据库Student，具体要求如下： （1）数据库文件： a）逻辑名：学生信息；b）操作系统名称：d:\学生数据\Student_data.mdf； c）起始大小：10MB；d）最大文件大小：50MB；e）每次递增大小：5MB （2）日志文件： a）逻辑名：学生信息日志；b）操作系统名称：d:\学生数据\Student_log.ldf；c）起始大小：5MB； d）最大文件大小：20MB；）每次递增大小：2MB 2、表的创建 假设有如下一个教学信息关系模型 stu（SNo,SName,Sex,Age,Nation,Native） course（CNo,CName,Pubcompany,TName,Period） grade（SNo,CNo,Grade） 请根据下面的表中字段类型（即域）的定义，在student数据库中使用对象管理器来创建各个表。 stu表
四、实验步骤及结果（包含简要的实验步骤流程(分步书写各步的SQL语句)、结论陈述） 1、关系图 2、分步书写各步的SQL语句 数据库的创建： create database student on ( name=student_data, filename='d:\学生数据\Student_data.mdf', size=10mb, maxsize=50mb, filegrowth=5mb) log on ( name=student_log, filename='d:\学生数据\Student_log.ldf', size=5mb, maxsize=20mb, filegrowth=2mb) 表的创建： create table stu ( SNo char(8)not null constraint SNo_key primary key(SNo), SName char(24)not null, Sex char(1)not null, Age int, Nation char(20), Native char(20), ) create table course ( CNo char(3)not null constraint CNo_key primary key(CNo), CName char(20)not null, Pubcompany char(20), TName char(24)not null,
分子生物学综合实验报告
分子生物学综合试验报告
综合实验Ⅰ.Southern杂交 （质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、 地高辛标记的Southern杂交） 一.实验目的 1.学习Southern杂交的原理及操作方法。 2.学习碱裂解法提取质粒的原理。 3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。 4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。 二.实验原理 利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。 聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR 进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP （dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。 PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。
DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。通常采用末端补平、加同聚物尾、加接头等方式是目的片段之间能够匹配。 地高辛随机引物法标记的原理：在随机引物法标记的反应液中，有随机合成的六聚核苷酸作为引物，dATP、dCTP、dGTP、dTTP和D1G-11-dUTP作为合成底物，以单链DNA作为模板，在Klenow酶的作用下，合成插入地高辛的DNA链。以地高辛标记的探针与靶基因DNA链杂交后，再通过免疫反应进行检测。一般通过酶标记地高辛抗体检测，就可以肯定杂交反应的存在。免疫检验一般用碱性磷酸酶系统，BClP/NBT显色，敏感性很高。 三．实验准备 1.实验材料： 含质粒的大肠杆菌DH5α，LB液体培养基， LB平板培养基 2.实验试剂： Taq DNA聚合酶，10×反应缓冲液（含25mmol MgCl2），dNTP，引物（P1、P2），溴乙啶 (EB) ，点样缓冲液Loading buffer（10×）：%溴酚蓝，40%甘油，目的基因及载体， 2×ligation 缓冲液，T4 DNA连接酶， L CaCl2，氨苄青霉素（100mg/mL）， TBE电泳缓冲液（5×）， DIG Random Labeling Mix（高效），Anti-DIG-AP Conjugate， BCIP/NBT Stock Solution，Blocking Reagent。 20×SSC：柠檬酸钠，3M NaCl，2×SSC：柠檬酸钠， NaCl， EDTA，变性液： NaOH， NaCl，中和度： Tris-HCl、、3M NaCl，Standard buffer：5×SSC、%(w/v) N-Lauroylsarcosine, % (w/v) SDS, 1% Blocking Reagent，Standard buffer+50% formamide，Anti-DIG-AP 碱性磷酸酶标记抗地高辛单抗体，BCIP/NBT储备液，冲洗液：0. 1M
分子生物学实验技术考试题库
一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。
11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合
《数据库原理与应用》实验报告书修改版(1)答案
《数据库原理与应用》 实验报告书 （2011—2012学年第二学期） 班级： 学号： 姓名： 教师：郑先容 医药信息工程学院·数据决策 2012年2月
目录 实验一利用ACCESS创建数据库及熟悉SQL Server开发环境 (2) 实验三数据库、表的创建 (6) 实验五连接查询和嵌套查询 (12) 实验七数据的插入、修改、删除 (18) 实验九SQL Server数据库的安全性控制 (21) 实验十一熟悉Power Designer数据库设计软件 (24) 实验十三Transact-SQL编程 (27) 实验十五存储过程的使用 (30) 第十章数据库的恢复技术作业 (33)
实验一利用ACCESS创建数据库及熟悉SQL Server开发环境 一、实验目的 1、熟知机房用机安全规则和实验报告的书写。 2、掌握SQL Server 2005的安装,卸载以及相关服务的启动、退出。 3、熟悉SQL Server Management Studio环境。 4、掌握创建服务器组合注册服务器。 5、初步了解数据库的概念； 6、初步了解SQL Server联机丛书的使用。 7、用ACCESS创建数据库，体会数据库的功能。 注意：每次实验的指导视频，上课所需要的软件、数据库还有ppt。都可以在ftp://10.81.40.222的“数 据决策”->“数据库”->“2011-2012（2）”文件夹下找到，以后每次实验相关的文件和数据库，老师上课的课 件，sql2005安装环境，都可以在这个ftp上寻找。 二、实验内容 1、上网搜索能够正常安装的SQL Server2005的软件。或者在ftp上下载，有条件的同学，课后可在个人电脑上安装SQL Server2005，建议XP操作系统安装个人版，Server操作系统安装企业版。SQL Server2005的安装说明见《SQL Server 2005精简版的安装》或上网搜索相应电子教程。安装过程请参看实验指导或者相关视频。 2、观看视频“数据库概念.swf”，了解数据库的相关概念。 3、参看实验指导或者视频“使用SQL Server Management Studio.swf”，通过实践初步了解使用SQL Server Management的使用。 4、观看视频“SQL Server联机丛书.swf”，了解如何通过系统本身来学习使用SQL Server。 请根据联机丛书查询如何“创建数据库”，查询内容包括创建数据库前的准备工作，创建数据库的命令，以及数据库文件的组成。请把你的结果写在下面。
分子生物学实验指
DNA分离 核酸包括DNA、RNA两种分子在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子；原核生物的"染色体"、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些噬菌体DNA有时为单链环状分子；RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子；不同类型的RNA分子可具有不同的结构特点，如真核自由RNA分子多数在3'端带有ploy(A)结构。至于病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状和单链线状等。 95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。RNA分子主要存在于细胞质中，约占75%，另有10%在细胞核内，15%在细胞器中。RNA以rRNA 的数量最多(80%~85%),tRNA及核内小分子RNA占10%~15%，而mRNA分子只占1%~5%，mRNA分子大小不一,序列各异。总的来说，DNA分子的总长度一般随着生物的进化程度而增大，而mRNA 的分子量与生物进化无明显关系。 分离纯化核酸总的原则：①应保证核酸一级结构的完整性；②排除其它分子的污染。为了保证核酸结构与功能的研究，完整的一级结构是最基本的要求,因为遗传信息全部贮存在一级结构之内。核
酸的一级结构还决定其高级结构的形式以及和其它生物大分子结合的方式。 核酸的纯化应达到的要求：①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；②其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；③排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时,应去除RNA分子，反之亦然。 实验过程中注意事宜: ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；②减少化学因素对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH4~10条件下进行；③减少物理因素对核酸的降解，物理降解因素主要是机械剪切力，其次是高温。机械剪切力包括强力高速的溶液震荡、搅拌,使溶液快速地通过狭长的孔道；细胞突然置于低渗液中；细胞爆炸式的破裂以及DNA样品的反复冻贮。这些操作细节在实验操作中应备加注意。机械剪切作用的主要危害对象是大分子量的线性DNA分子，如真核细胞的染色体DNA。对分子量小的环状DNA分子，如质粒DNA及RNA分子,威胁相对小一些。高温,如长时间的煮沸，除水沸腾带来的剪切力外，高温本身对核酸分子中的有些化学键也有破坏作用。核酸提取过程中,常规操作温度为0~4℃,此温度环境降低核酸酶的活性与反应速率,减少对核酸的生
福建工程学院《实验指导书(数据库系统原理及应用)》
数据库系统原理 实验指导书 （本科）
目录 实验一数据定义语言 (1) 实验二SQL Sever中的单表查询 (3) 实验三SQL Serve中的连接查询 (4) 实验四SQL Serve的数据更新、视图 (5) 实验五数据控制（完整性与安全性） (7) 实验六语法元素与流程控制 (9) 实验七存储过程与用户自定义函数 (11) 实验八触发器 (12)
实验一数据定义语言 一、实验目的 1.熟悉SQL Server2000/2005查询分析器。 2.掌握SQL语言的DDL语言，在SQL Server2000/2005环境下采用Transact-SQL实现表 的定义、删除与修改，掌握索引的建立与删除方法。 3.掌握SQL Server2000/2005实现完整性的六种约束。 二、实验内容 1.启动SQL Server2000/2005查询分析器，并连接服务器。 2.创建数据库: （请先在D盘下创建DB文件夹） 1）在SQL Server2000中建立一个StuDB数据库： 有一个数据文件：逻辑名为StuData，文件名为“d:\db\S tuDat.mdf”，文件初始大小为5MB，文件的最大大小不受限制，文件的增长率为2MB； 有一个日志文件，逻辑名为StuLog，文件名为“d:\db\StuLog.ldf”，文件初始大小为5MB，文件的最大大小为10MB，文件的增长率为10% 2）刷新管理器查看是否创建成功，右击StuDB查看它的属性。 3.设置StuDB为当前数据库。 4.在StuDB数据库中作如下操作： 设有如下关系表S：S(CLASS,SNO, NAME, SEX, AGE)， 其中：CLASS为班号，char(5) ；SNO为座号，char(2)；NAME为姓名，char(10)，设姓名的取值唯一；SEX为性别，char(2) ；AGE为年龄，int，表中主码为班号+座号。 写出实现下列功能的SQL语句。 (1)创建表S； (2)刷新管理器查看表是否创建成功； (3)右击表S插入3个记录：95031班25号李明，男性，21岁； 95101班10号王丽，女性，20岁； 95031班座号为30，名为郑和的学生记录； (4)将年龄的数据类型改为smallint； (5)向S表添加“入学时间（comedate）”列，其数据类型为日期型（datetime）； (6)对表S，按年龄降序建索引（索引名为inxage）； (7)删除S表的inxage索引； (8)删除S表； 5.在StuDB数据库中， （1）按照《数据库系统概论》(第四版)P82页的学生－课程数据库创建STUDENT、COURSE 和SC三张表，每一张表都必须有主码约束，合理使用列级完整性约束和表级完整性。 并输入相关数据。 （2）将StuDB数据库分离，在D盘下创建DB文件夹下找到StuDB数据库的两个文件，进行备份，后面的实验要用到这个数据库。 6.（课外）按照《数据库系统概论》(第四版)P74页习题5的SPJ数据库。创建SPJ数据 库，并在其中创建S、P、J和SPJ四张表。每一张表都必须有主码约束，合理使用列级完整性约束和表级完整性。要作好备份以便后面的实验使用该数据库数据。 三、实验要求：
数据库原理及应用A实验1报告
数据库原理及应用A实验报告 实验名称：查询 实验类型：设计实验 指导教师： 专业班级： 姓名： 学号： 实验地点： 实验日期：2019 年9 月26 日 实验报告日期：2019 年10 月30 日 成绩：__________________________
一、实验目的 1.熟悉oracle环境； 2.熟练掌握和使用PL-SQL建立数据库基本表。 3.使用PL/SQL developer操作数据库。 4.熟练掌握SQL 建立关系，及增删改数据 二、实验环境 Oracle 11g 三、实验内容 1.了解SQL PLUS的使用 2.使用PL/SQL developer的图形界面，建立图书管理数据库orcl中的各个关 系 3.在建立的关系中输入有效数据 4.删除以上各关系 5.在PL/SQL developer用SQL代码建立orcl数据库中各关系 6.用SQL 代码完成数据增、删、改 四、实验步骤 1.以SYSTEM登录数据库 2.注册用户 3.重新以新用户登录数据库
4.立数据库表 打开tables文件夹。建立以下各关系： 图书分类（图书分类号，类名） 书目（ISBN, 书名，作者，出版单位，单价，图书分类号） 图书（图书编号，ISBN，是否借出，备注） 读者（借书证号，姓名，单位，性别，地址，联系电话，身份证编号） 借阅（借阅流水号，借书证号，图书编号，借书日期，归还日期，罚款分类号，备注） 罚款分类（罚款分类号，罚款名称，罚金） 预约（预约流水号，借书证号，ISBN，预约时间） 5.使用SQL语句练习表的创建、删除、修改操作。 6.使用SQL语句练习表中数据的增加、删除、修改操作。 7.试根据下面的完整性约束要求，用SQL对上面已经建立好的数据库表进行 完整性约束定义。 读者关系中属性联系电话取值为11位数字 身份证编号取值为18位，并且满足身份证编号规则图书关系中属性是否借出取值为：‘是’或‘否’ 借阅关系中属性借书日期取值不为空
分子生物学实验报告
分子生物学实验 院系：生命科学与技术学院 专业：生物科学（基地） 班级： 201101班 学号： 姓名： 分子生物学基础实验 分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。它的内容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR基因扩增等等。 实验一质粒DNA的小量制备 一、实验原理 要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。 质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具
有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。 质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。每个细胞内只含有1个或几个质粒分子。后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。本实验分离提纯化的质粒pBR322、pUC19就是由ColE Ⅰ衍生的质粒。 所有分离质粒DNA的方法都包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基硫酸钠（SDS）可使细胞壁解，经溶菌酶和阴离子去污剂（SDS）处理后，细菌染色体DNA 缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA则留在清液中。用乙醇沉淀、洗涤，可得到质粒DNA。 质粒DNA的相对分子量一般在106－107范围内，如质粒pBR322的相对分子质量为2.8×106，质粒pUC19的相对分子质量为1.7×106。在细胞内，共价闭环DNA（covalently closed circular DNA，简称cccDNA）常以超螺旋形式存在。如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫做开环DNA（open circular DNA，简称ocDNA）。在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本实验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。 二、实验目的 1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。 2．了解制备原理及各种试剂的作用。 三、实验材料和试剂
《数据库系统原理》实验报告
《数据库系统原理》实验 实验1 表和表数据的操作 一、实验目的 掌握在SQL Server 2000环境下，利用SQL语言创建和管理表的方法。 二、实验要求 1、学会利用SQL语句建立自定义数据类型； 2、掌握使用SQL语句建立数据表的方法； 3、掌握数据表的修改及删除方法（界面方式及语句方式）； 4、掌握T－SQL中的INSERT、UPDATE及DELETE语句的使用方法； 三、实验内容 1、创建数据库 利用“查询分析器”创建“stuscore”数据库。 CREATE DATABASE stuscore 2、创建数据表 （1）用“查询分析器”建立stuscore数据库中的学生表（Student）、班级表（Class）、课程表（Course）及成绩表（Grade），结构如下： create table student (sno char(8) primary key, sname varchar(10), sex char(2), clsno char(6), stuaddr varchar(20), birthday char(20), height DEC(4,2), foreign key(clsno) references class(clsno) );
create table class (clsno char(6) primary key, clsname varchar(16), dorector varchar(10), specialty varchar(30) ); create table course (cno char(4) primary key, cname varchar(16), pcno char(4), credit tinyint ); create table grade (sno char(8), cno char(4), scorce int, primary key(sno,cno) );
数据库原理及应用实验指导★---实验4_SQL语言——SELECT查询操作[1]
实验4 SQL 语言——SELECT 查询操作 1 实实验验44 S S Q Q L L 语语言言————S S E E L L E E C C T T 查查询询操操作作 实验示例 实验示例中要使用包括如下三个表的“教学管理”数据库JXGL ： (1)学生表Student ，由学号(Sno)、姓名(Sname)、性别(Ssex)、年龄(Sage)、所在系(Sdept)五个属性组成，记作：Student(Sno,Sname,Ssex,Sage,Sdept)，其中主码为Sno 。 (2)课程表Course ，由课程号(Cno)、课程名(Cname)、先修课号(Cpno)、学分(Ccredit)四个属性组成，记作：Course(Cno,Cname,Cpno,Ccredit)，其中主码为Cno 。 (3)学生选课SC ，由学号(Sno)、课程号(Cno)、成绩(Grade)三个属性组成，记作：SC(Sno,Cno,Grade)，其中主码为(SNO,CNO)。 1、在SQL SERVER 查询分析器或企业管理器(以具有相应操作权限的某用户登录)的SQL 操作窗口中执行如下命令创建数据库。需要说明的是不同数据库系统其创建数据库的命令或方式有所不同。 CREATE DATABASE JXGL 2、刷新数据库目录后，选择新出现的JXGL 数据库，在SQL 操作窗口中，创建Student 、SC 、Course 三表及表记录插入命令如下： Create Table Student ( Sno CHAR(5) NOT NULL PRIMARY KEY(Sno), Sname VARCHAR(20), Sage SMALLINT CHECK(Sage>=15 AND Sage<=45), Ssex CHAR(2) DEFAULT '男' CHECK (Ssex='男' OR Ssex='女'), Sdept CHAR(2)); Create Table Course ( Cno CHAR(2) NOT NULL PRIMARY KEY(Cno), Cname VARCHAR(20), Cpno CHAR(2), Ccredit SMALLINT); Create Table SC ( Sno CHAR(5) NOT NULL CONSTRAINT S_F FOREIGN KEY REFERENCES Student(Sno), Cno CHAR(2) NOT NULL, Grade SMALLINT CHECK ((Grade IS NULL) OR (Grade BETWEEN 0 AND 100)), PRIMARY KEY(Sno,Cno),
数据库系统原理与设计(第二版)实验一至实验三
实验一 1-1.查询员工的姓名、职务和薪水 select employeeName,headShip,salary from employee 图1-1 2.查询名字中含有“有限”的客户姓名和所在地 select CustomerName,address from Customer where CustomerName like '%有限%'
3. 查询出姓“张”并且姓名的最后一个字为“梅”的员工。 select * from employee where employeeName like '张%梅' 图1-3 4. 查询住址中含有上海或南昌的女员工，并显示其姓名、所属部门、职称、住址，其中性别用“男”和“女”显示 SELECT employeeName,department,address, isnull (convert(char(10),birthday,120),'不详')出生日期, case sex when 'M'then '男' when 'F'then'女' end as 性别 from employee where （address like '%上海%'or address like '%南昌%'）and sex='F'
5. 查询出职务为“职员”或职务为“科长”的女员工的信息 select * from employee where (headship='职员' or headship='科长') and sex='F' 图1-5 6. 选取编号不在“C20050001”和“C20050004”的客户编号、客户名称、客户地址。 Select * from Customer where CustomerNo not in ( 'C20050001' ,'C20050004')
分子生物学实验技术全攻略
分子生物学实验技术 目录 实验一细菌的培养 2 实验二质粒DNA的提取 3 实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 4 实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 5 实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 7 实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 8 实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA 9 实验八 RNA提取与纯化 11 实验九 RT-PCR扩增目的基因cDNA 13 实验十质粒载体和外源DNA的连接反应 15 实验十一感受态细胞的制备及转化 16 实验十二克隆的筛选和快速鉴定 18 实验十三 DNA分析——Southern杂交 19 一基本操作 实验一、细菌培养 实验二、质粒DNA提取 实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 实验四、水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化 二、目的基因获取
实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA 实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA 三、目的基因的克隆和表达 实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应 实验十一、感受态细胞的制备及转化 实验十二、克隆的筛选和快速鉴定 实验十三、DNA分析——Southern杂交 实验一细菌的培养 一、目的 学习细菌的培养方法及培养基的配置。 二、原理 在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。特别是常用的大肠杆菌。 大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。此时菌体密度可达到 1×109~2×109/mL。 培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。实验室中最常用的是LB培养 基。 三、实验材料、试剂与主要仪器 （一）实验材料 大肠杆菌 （二）试剂 1、胰蛋白胨 2、酵母提取物