大鼠皮质脊髓束Luxol Fast Blue染色
[文章编号]1000-2057(2008)01-0005-03
南通大学学报(医学版)
Journal of Nantong University (Medical S ciences)2008∶28(1)
长期以来,脊髓损伤后皮质脊髓束的再生修复研究一直是神经科学研究的热点。最近有人尝试运用微电子芯片技术重建皮质脊髓束功能[1]。此项研究中一个关键指标就是皮质脊髓束在脊髓内定位和走行情况。常用的组织学染色方法不能显示皮质脊髓束,本实验采用Luxo l Fast Blue 染色法对大鼠皮质脊髓束进行形态学研究,取得良好效果。
1材料和方法1.1
材料
选用健康成年SD 大鼠6只,清洁级,体
重250~300g,雌雄不拘,由南通大学实验动物中心提供。0.1%L ux ol Fast Blue 液(Sigma 公司),L eica
CM 1900冰冻切片机,显微镜为Leica DM R 显微镜
(L 公司,德国)。
1.2方法切片制备:给予大鼠复合麻醉剂(0.2ml/
100g 体重),腹腔注射麻醉后开胸,穿心脏经升主动
脉灌注,先用温(37℃)生理盐水200ml 冲净血液,再用预冷(4℃)的含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液
500ml 快速灌注固定,1h 后取脑和脊髓放入含4%
多聚甲醛的PB 溶液中后固定4~6h,再移入30%蔗
糖的PB 溶液中4℃过夜,待组织沉底后取脑(延髓)和脊髓颈、胸、腰、荐段行连续横切面冰冻切片,切片厚度为30μm ,直接贴于预先涂有明胶的载玻片上,置室温下晾干待用。
L ux ol Fast Blue 染色:(1)将切片放入乙醇∶氯仿溶液(无水乙醇和氯仿的体积比为1∶1)中5min ;(2)将切片置入95%乙醇溶液中5min ;(3)0.1%L ux ol
F B 液中56℃过夜;()5%乙醇溶液5;
大鼠皮质脊髓束Luxol Fast Blue 染色*
1
吕广明
**
,1吴辉群,2栗卓,3刘
苏,1韩笑,1季达峰
(1南通大学人体解剖学教研室,神经生物学研究所,江苏省神经再生重点实验室南通226001;
2
北京朝阳区第二医院耳鼻喉科;
3
南通大学附属医院康复医学科)
[摘要]目的:探讨显示大鼠皮质脊髓束的特殊染色方法。方法:选用正常成年SD 大鼠延髓和脊髓冰冻切片,应
用Luxol Fast Blue 染色法进行染色。结果:Luxol Fast Blue 染色后,在延髓和脊髓切片中可见灰质呈淡红色,白质呈蓝色,延髓锥体染成深蓝色。锥体中Luxol Fast Blue 标记的深蓝色阳性纤维,经锥体交叉后至脊髓灰质后连合背侧,沿脊髓后索腹侧深层下行,至荐段后逐渐消失。在延髓锥体和脊髓颈、胸、腰段后索中,深蓝色的Luxol Fast Blue 阳性纤维边界清晰,与周围结构区分明显。结论:运用Luxol F ast Blue 染色可清楚显示大鼠皮质脊髓束在脊髓内的定位,是一种简便可靠的皮质脊髓束形态学研究方法。
[关键词]
皮质脊髓束;Luxol Fast Blue;髓鞘染色;大鼠
[中图分类号]
R322.8-33
[文献标识码]
A
Luxol Fast Blue staining in cor ticospinal tr act of ra ts
1
L üGuangming,1WU Huiqun,2LI Zhuo,et al (1Department of Anatomy,Institute of Neur obiology,Jiangsu Province Ke y Lab-
orator y of Neuroregeneration,M edical S chool of Nantong University,Nantong 226001)[Abstr act]
Objective:To explore the special staining method for revealing the localiz ation of corticospinal tract in rats.
Methods:Luxol Fast Blue staining method w as utiliz ed to stain the sections of medulla oblongta and spinal cord of the normal adult Sprague-Daw ley r ats.Results:In Luxol Fast Blue staining sections,the gray matter of medulla oblongta and spinal cord w as stained in light red,w hile the white matter around the gray matter w as dyed in blue.The dark blue stained Luxol Fast Blue labeled fibers in the pyramid passed through the pyramidal decussation to the contralateral side,descended at the ven-tral part of posterior f uniculus just dorsal to the gray commissure throughout most of the length of the spinal cord and progres-sively diminished to end at the sacral spinal segments.The Luxol Fast Blue positive f ibers in the pyramid and the ventr al part of posterior f uniculus at cervical,thoracic,lumbar spinal segments wer e easily discriminated f rom the surrounding structures.Conclusion:Using Lux ol Fast Blue staining method may demonstr ate the localiz ation and distribution of cor ticospinal tract in the spinal cord of rats,w hich is an easy and eff ective method in morphological study of cor ticospinal tract.[Key Wor ds]
Corticospinal tract ;Luxol F ast Blue ;Myelin stain ;Rat
*[基金项目]
江苏省高校自然科学基金项目(5K B 5);南通市社会发展基金项目(S 5);南通市6高层次人才培养计划资助项目(通委人才办[6]5号)
**[作者简介]吕广明,男,汉族,生于6年月,江苏省海安县人,医学博士,副教授,研究方向神经损伤与修复。
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