大鼠脊髓内水通道蛋白_4_AQP_4_分布规律的研究_王威

作者简介:王威,现在内蒙赤峰附属医院骨科工作,硕士研究生,研究方向:脊髓损伤。Em a i:l W E I W ANGTAOTAO @https://www.wendangku.net/doc/321437411.html, 。

=论 著>

大鼠脊髓内水通道蛋白-4(AQP-4)分布规律的研究

王 威,孙丽君

(内蒙古医学院赤峰附属医院骨科,内蒙古 赤峰 024000)

=摘要> 目的:通过研究大鼠脊髓水通道蛋白-4(AQP-4)的分布规律,探讨脊髓内水转运的分子生物学机制。方法:通过免疫组织

化学方法标记AQP-4在大鼠脊髓内的表达,图象分析系统测定阳性区域的平均吸光度,对不同区域的AQP-4表达作统计学分析。结果:软脊膜、中央管周围、灰质血管周围AQP-4表达较中央灰质、白质有显著增多;中央灰质AQP-4表达较白质显著增多,软脊膜、中央管、灰质血管周围之间比较无统计学差异。结论:大鼠脊髓内AQP-4呈极性分布,主要集中在与水转运关系密切的部位,是脊髓内水转运重要的的分子生物学解剖基础。

=关键词>

脊髓;水转运;水通道蛋白4

[中图分类号] R -332 [文献标识码] A [文章编号] 0369(2007)11-0947-03

Stud of Changi ng of AQP -4Expressi on i n i njured section of Spi nal Cordi n Rats

WANG W e,i S UN L i-j un

(The chifeng affili ated hospital of i nner m orgoli a med i cal coll eage ,i nner mongoli a 024000,Ch i na)

=Abstract > O bjective :T hrough st udy i ng the chang ing of AQ P -4expression of i njured secti on o f sp i nal co rd ,the m echan is m of m olecular b i o logy o f wa ter transportion is t o be probed i nto .M ethods :U si ng the m ethod of i m m unohisto che m i stry to Label the expres -si on of AQP -4i n spi na l co rd of rats and using i m age ana l ysis system to esti m a te ave rage degree o f spectrum absorpti on o fm a l e area ,A nd analysi ng .R esu lts :T he expression o fAQ P-4i s si gn ifi cantm ore i n spina l p i a m ater and a round o f Spi na l cord central cana l and around o f G ray M atte r blood vesse l than centra l of G ray M atter and wh ite m atter .It i s no difference i n sp i nal p i a m ater and around of Spi na l cord centra l cana l and around of G rayM atter b l ood vesse.l Conc l u sion s :It i s o f po l ar ity d i str i bu tion of AQ P -4in sp i nal co rd i n ra ts ,A nd AQ P-4Concentrate i n such spo t o f c l ose re lati on w it h wa ter transporti on .Such is m o lecular bi o logy D issecti on o f w ate r transporti on .

=K ey words >Spi na l Cord Injury ;Spina l Cord O ede m a ;AQP -4

水通道蛋白(aquaporin ,AQP)是Ag re [1]

等人在1994年分离发现的一组与水通透有关的细胞膜转运蛋白,人类AQP 家族现已知的11个成员中有6个分布于中枢神经系统,其中水通道蛋白4(AQP-4)含量最高,它具有选择性转运水的功能,已证实AQP-4在中枢神经组织水的调节代谢中起关键作用

[2]

,并推测AQP-4与中枢神经系统水肿的产生

密切相关,但具体机制尚不清楚。本实验采用大鼠脊髓,用免疫组织化学的方法检测大鼠脊髓内不同区域AQP-4的表达,研究AQP-4在大鼠脊髓内的表达规律,以期探索脊髓内水转运的分子生物学解剖基础。

1 材料与方法

健康雄性SD 大鼠12只,体重250~300g 。3.0%的戊巴比妥钠40m g /kg ,腹腔注射麻醉后仰卧于鼠板上,头及四肢固定。胸前正中纵向切开,打开

胸腔显露心脏。左心室穿刺,先后用生理盐水、4%多聚甲醛作心脏灌注。灌注固定后取俯卧位后正中切口切开,显露胸段脊髓,切取约1c m 长胸段脊髓,置于4%多聚甲醛溶液内浸泡固定。将标本梯度酒精系列脱水、梯度二甲苯系列脱脂、石蜡包埋,连续切片,片厚5L m,裱于载玻片上。切片置于60e 烤箱内烘烤72h ,做免疫组织化学染色。采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)法进行。石蜡切片常规二甲苯脱蜡,3%H 2O 2室温孵育10分钟以消除内源性过氧化物酶的活性,蒸馏水洗3次,每次2分钟,磷酸盐缓冲液(PBS)稍洗后进行免疫组化染色:10%正常山羊血清封闭非特异性结合位点,室温孵育30分钟,倾去血清,水洗,滴加1:400的一抗(兔抗大鼠水通道蛋白4抗体美国S I G MA 公司),室温下孵育过夜,按ABC 试剂盒(北京中山公司)说明书进行操作。PBS 液冲洗3次,每次5分钟,再滴加生物素标记二抗(羊抗兔)室温孵育10~30分钟,PBS 液冲洗3次,每次5分钟,之后滴加辣根标记链霉卵蛋白素室温孵育,PBS 液冲洗3次,每次5分钟,最后加DAB 显色剂显色,自来水充分冲洗,苏木素复

947

染细胞核,脱水,透明,树脂胺封片,光镜观察。光镜下胞膜上出现棕黄色颗粒为AQP-4免疫阳性细胞,同时用PBS 液代替一抗作为阴性对照。统计学处理:结果统计采用SPSS 11.0统计软件处理,所有计量资料均采用均数?标准差表示,多样本均数比较采用方差分析,P <0.05为差异有显著性。

2 结果

低倍镜下脊髓灰质呈淡棕黄色,白质染色较灰质浅,灰白质界限清晰。脊髓中央管、软脊膜以及灰质的血管周围有着极性分布。在高倍镜下见阳性细胞的胞膜淡染,胞浆及胞核未着色,呈空泡状。阳性细胞主要为神经胶质细胞、中央管膜细胞和软脊膜细胞,神经元未见着色。中央管周围和后角临近软脊膜部位染色较深,表达呈强阳性,其余灰质表达较弱。白质染色较灰质更浅,呈弱阳性。神经胶质细胞、中央管膜细胞胞膜呈棕黄色或深棕黄色,在血管周围表达强烈,呈深棕色,表达呈强阳性。

选择中央灰质、软脊膜、中央管周围、灰质血管周围、白质5个解剖部位,每个解剖部位选10~20个阳性区域用图象分析系统测定其平均吸光度,将5组数据用SPSS 11.0统计软件作方差分析。统计结果显示:软脊膜、中央管周围、灰质血管周围与中央灰质、白质比较有显著差异;中央灰质与白质比较有显著差异软脊膜、中央管、灰质血管周围之间比较无统计学差异。

表 T ab l e R a te of averag e degree of spectru m abso rpti on

for every g roup (x ?s)

组别平均吸光度白质

0.11?0.02

中央灰质0.15?0.03*血管周围0.17?0.07**中央管周围0.16?0.05**软脊膜

0.17?0.03*

*

*:P <0.01,**:P <0.05

。

图1 低倍镜下AQ P-4在脊髓内的表达.(40*

10)

图2 中央管周围AQ P-4的高表达.(40*

10)

图3 血管周围AQP -4高表达.(40*10)

3 讨论

AQP 家族成员的基本生理功能为特异性水通道,介导自由水分子的跨生物膜转运,与其他离子通

道不同的功能特点是水通道不存在所谓的开放或关闭的功能状态,只要存在渗透压梯度就可以有水分子顺渗透压梯度通过水通道蛋白。按渗透性分类,AQP-4属于A quaponns ,即仅对水可选择性通过,而对尿素、甘油或其他中性小分子溶质不通透。水通道蛋白在脑和脊髓中含量丰富,人的中枢神经系统中有6种AQP 家族成员,而以AQP-4的分布和表达为主

[3]

。AQP-4广泛分布于中枢神经系统介

导细胞膜跨膜水转运,并被认为对水代谢和渗透调节起主要作用[4]

。N i e lesen [5]

等用免疫细胞化学及高分辨率免疫金电镜鉴定出由AQP-4调节水转运的细胞及相应的膜区。AQP-4富含于脑和脊髓表面的软膜,靠近蛛网膜下腔的胶质细胞,脑室和中央管的室管膜细胞及位于血管周围的胶质细胞表面上,在脊髓毛细血管内皮细胞也有着广泛的分布。免疫金分析进一步证实AQP-4局限于胶质细胞膜区及室管膜细胞的亚群,尤其在与毛细血管和软膜直接相接触的胶质细胞膜上表达强烈。它已成为神经胶质细胞另一基因标志物

[6]

。AQP -4高度极化

分布显示这些细胞配有特别的选择性水通道的膜区。此膜区在胶质细胞与充满CSF 的间隙中以及血

948

管之间起调节水运输作用。

Rash[4]等用冻结破裂法研究发现,AQP-4的分布与血-脊髓屏障上星形胶质细胞终足内的方形(正交)阵列的分布相平行,AQP-4与其有着密切关系,并认为AQP-4可能是其组成部分。M an ley 等[7]在急性水中毒脑水肿模型中研究显示,AQP-4在水肿模型的脑组织内高表达,而正常鼠脑AQP-4低表达;应用基因敲除技术使AQP-4在脑组织表达缺乏,结果发现缺乏AQP-4的大鼠生存能力强,且在AQP-4缺乏的鼠脑内水的容量及星形胶质细胞周围毛细血管水肿明显减轻,说明了AQP-4参与脑水肿的形成,并在脑水肿中起重要作用。So-lenov等[8]也证实了AQP-4缺乏大鼠在低血钠和急性缺血性损伤时脊髓水肿明显减轻。此外,在大脑中动脉闭塞所致的缺血性脑水肿模型中,研究显示在动脉闭塞的第3d,位于皮质梗死周围的分子层和外颗粒层可见AQP-4mRNA表达增强,尤以梗死灶周围明显,而且AQP-4表达与脑水肿的程度呈正比关系[9]。以上实验研究充分说明了AQP-4在中枢神经系统水转运机制中扮演着重要角色。

本组研究采用大鼠脊髓作为研究对象,通过免疫组织化学方法标记AQP-4在大鼠脊髓内的表达。观察到AQP-4在脊髓中的分布特点为:灰质内的分布明显较白质内多,中央管、血管周围及脊髓后角边缘贴近软脊膜处呈极性分布;神经元无AQP -4分布,AQP-4主要分布于胶质细胞、中央管膜细胞、软脊膜细胞的细胞膜上,特别是在血管周围的胶质细胞膜上表达强烈,而此处正是血-脊髓屏障所在的位置。这些特点与文献中AQP-4在脑内分布的报道相似。AQP-4的这种分布规律充分反映了其与脊髓内水转运的密切关系,是脊髓内水转运重要的的分子生物学解剖基础。

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(收稿日期:2007-05-25)

(上接第946页)

资料观察证实维拉帕米治疗室上性心动过速的总有效率达90%以上。另外,维拉帕米对冠状动脉有舒张作用,可增加冠脉流量,改善心肌供氧,降低心肌耗氧量,但由于维拉帕米有一定的负性肌力作用和降压作用,所以慎用于心功能不全及低血压患者。

我们根据上述药物特性和循证医学证据[3],结合患者的全身情况进行个体化治疗,注意以下几个方面:(1)首先弄清室上性心律失常的病因,如甲亢、感染、心肌缺血、心力衰竭、电解质紊乱、血容量不足、药物影响等,注意病因治疗。(2)对无明显心功能不全同时伴有血压偏高的室上性心律失常选用维拉帕米治疗。(3)老年患者发生快速心律失常时,易产生焦虑、烦躁不安,可适当给予镇静剂,利于病情控制。(4)静脉应用维拉帕米要注意负荷量,继之给予维持量,预防心律失常复发。(5)老年人往往伴有窦房结和房室结功能低下,首剂应用抗心律失常的药物应缓慢推注,以防窦性停搏或房室性传导阻滞发生。(6)对于反复发作的快速室上性心律失常必要时行射频消融介入治疗。

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(收稿日期:2007-06-21)

949

对载体蛋白、通道蛋白和受体的深入认识

对载体蛋白、通道蛋白和受体的深入认识载体蛋白和通道蛋白、受体分别体现了细胞膜的两大功能：控制物质进出与进行细胞识别。 1 细胞膜上的转运蛋白———载体蛋白和通道蛋白在细胞膜上广泛存在着负责无机离子和水溶性小分子跨膜运输的膜转运蛋白。膜转运蛋白分为两类：一类是载体蛋白，它既可以介导被动运输，又可以介导逆浓度或者电化学梯度的的主动运输；另一类为通道蛋白，只能介导顺浓度或化学梯度的被动运输（易化扩散）。 载体蛋白相当于结合在细胞膜上的酶，有特异性结合位点，可与底物（溶质）发生暂时的、可逆性的结合和分离，且一种特异性载体只转运一种类型的分子或离子。物质的转运过程类似于酶与底物作用的饱和动力学曲线，既可以被底物类似物竞争性抑制，又可以被痕量的某种成分（抑制剂）非竞争性抑制以及对pH 有依赖性等。因此有人将载体蛋白称为通透酶，与酶不同的是载体蛋白可以改变过程的平衡点，加快物质沿着自由能减少的方向跨膜运输的速率；此外与酶的不同是载体蛋白对转运的溶质不做任何共价修饰。 通道蛋白是一类跨越细胞膜双分子层的蛋白质,它所介导的被动运输不需要溶质分子与其结合，而是横跨膜形成亲水通道，允许大小适宜的分子和带电离子通过。通道蛋白可以是单体蛋白，也可以是多亚基组成的蛋白，它们都是通过疏水的氨基酸链进行重排，形成水性通道。某些通道蛋白在革兰氏阴性细菌的外膜、线粒体或叶绿体的外膜上形非选择性的通道。绝大多数的通道蛋白形成有选择性开关的多次跨膜通道。这些通道可分为两大类：离子通道和水通道。目前发现的通道蛋白已有100 余种。离子通道有以下两个显著的特征。①具有离子选择性。离子通道对被转运的离子的大小和电荷都有高度的选择性，而且转运速度高，可达106个/s，其速率是已知的任何一种载体蛋白的最快速率的1 000 倍以上。驱动带电荷的离子跨膜转运的净驱动力来自溶质的浓度梯度和跨膜电位差的合力。这种净驱动力构成离子跨膜的电化学梯度，这种梯度决定离子跨膜的被动运输的方向。②离子通道是门控的，即离子通道的活性由通道的开或关两种构象所调节，并通过通道开关应答各种信号。多数情况下，离子通道呈关闭状态，只有在膜电位变化、化学信号或压力刺激后，才开启形成跨膜的离子通道。因此离子通道又区分为电压力通道、配体门通道和压力激活通道（图1）。离子通道在神经元与肌细胞神经冲动传递过程中其重要作用。如含羞草的闭叶反应、草履虫的快速转向运动、内耳听觉的感应等都与离子通道有关。 图1 离子通道示意

视神经脊髓炎与其特异性抗体_抗水通道蛋白4抗体_综述_

收稿日期:2007 09 03;修订日期:2007 10 30 作者简介:梁松岚(1975 ),女(汉族),黑龙江省人,主治医师,在读博士。 王维治(1946 ),男,山东省人,教授(主任医师),博士生导师,主要从事神经内科临床及神经免疫学研究。通讯地址:哈尔滨医科大学附属第二医院神经科,哈尔滨150086。联系电话:(0451)89661609。E mail:lun ar0941@https://www.wendangku.net/doc/321437411.html, 。(通讯作者) 视神经脊髓炎与其特异性抗体 抗水通道蛋白4抗体(综述) 梁松岚,王维治,梁庆成 (哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科,黑龙江哈尔滨150086) 摘要: 视神经脊髓炎(NM O)是累及视神经和脊髓的脱髓鞘疾病。最近,它的特异性抗体 抗水通道蛋白4(A Q P4)抗体被发现。A Q P4主要分布于中枢神经系统(CN S),参与胶质细胞与脑脊液(CSF)以及血液之间水的调节和运输。NM O 患者的A Q P4蛋白显著减少甚至丧失,血液及CSF 中存在抗 A Q P4抗体。实验证实,抗 AQ P4抗体对NM O 的诊断具高度敏感性和特异性,其抗体滴度水平有助于判断疗效和预后。关键词:视神经脊髓炎;抗水通道蛋白4抗体 中图分类号:R744 5+2 文献标识码:A 文章编号:1006 2963(2008)02 0109 03 视神经脊髓炎(neur omyelitis optica,NMO )是一种严重的神经系统疾病,以视神经炎和横贯性脊髓炎为特征,可导致失明和截瘫。50%的患者患病5年内失去视觉功能,不能独立行走。以前曾认为NMO 是多发性硬化(MS )的一个亚型,其实两者在遗传背景、发病机制、病理改变等方面都存在不同。在治疗方面,NM O 主要应用免疫抑制剂治疗,免疫调节剂[干扰素、醋酸格拉太咪尔(g lati r am er acetate)]则推荐用于治疗M S [1] 。当严重进展性脊髓炎应用皮质醇治疗无效时,血浆交换对NMO 患者比对MS 患者更有益。但目前临床尚无特异性诊断标志物用于区分这两种疾病,许多以NMO 症状为早期表现的患者最终被诊断为M S,如能早期明确诊断则对改善NMO 和M S 预后非常有益。 最近,NMO 的疾病特异性血清抗体已被发现。Lenno n [2]等在NM O 患者血清中发现了一种称为NM O IgG 的自身抗体,可作为NMO 特异性的标志。它主要结合在病变的微血管、软脑脊膜、软脑脊膜下以及Virchow Ro bin 间隙(VRS)。NMO Ig G 作为NMO 的特异性自身抗体,它的靶抗原为水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4),这提示NMO 也是一种自身免疫性通道病。 1 水通道蛋白(AQP)基因的克隆和AQP4 蛋白的表达分布 AQP 广泛存在于动植物和微生物中。1991 年Ag re 完成了CH IP28的cDNA 克隆,并于次年成功地转染非洲蟾卵母细胞,显示了其选择性水通透的功能,即第一个水通道蛋白(AQP1)被克隆。迄今已发现11种水通道蛋白(AQP0 AQ P10)[3]。 AQP4是脑中重要的水通道蛋白,参与脑组织与血液、脑组织与CSF 间的水转运和渗透压调节。在CNS,AQP4主要存在于构成血 脑脊液屏障(BCB)的星形胶质细胞终足上,是星形胶质细胞质膜内在蛋白质。AQP4大量存在于视神经和脊髓,同时也遍及脑的各个部分。经免疫组化检测显示,在脑和脊髓接触毛细血管和软脑膜的星形胶质细胞终足上、下丘脑视上核胶质板、室管膜细胞的基底外侧膜均有AQP4的明显表达[4] 。血管周围的胶质细胞突起是水分子流动的主要部位。AQ P4通道可使水分子跨细胞膜移动,生理条件下AQ P4参与CSF 的形成和吸收,参与BCB 对水分子的转运调节,并调节细胞外间隙钾离子浓度;病理条件下,A QP4的表达发生变化,参与各种原因引起的脑水肿。 2 AQP4蛋白是NMO IgG 的特异性靶抗原 现已证实NM O Ig G 是NM O 相关疾病,包括复发型脊髓炎和复发性视神经炎的敏感和特异性标记。Lennon 等[1]运用间接免疫荧光法检测发现,NM O IgG 能与脑内软脑膜和微血管成分、肾髓质的集合管和胃黏膜壁细胞特异性结合,而且

全骨髓法分离培养大鼠MSCs实验指导

大鼠骨髓间充质干细胞培养 干细胞是一类具有自我更新能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，医学界称其为“万用细胞”，干细胞的增殖保证了机体内的动态平衡。 骨髓间充质干细胞是存在于骨髓基质中的非造血干细胞，能在体外或体内分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。 源于自体骨髓的间质干细胞能够很好地避免异体间移植的免疫排斥反应，在临床上，已经成功地将骨髓间充质干细胞移植到患者体内，用于治疗骨组织缺损和心肌梗塞等疾病。 本实验根据骨髓中间充质干细胞的贴壁生长，而血细胞和造血干细胞悬浮生长的特性用贴壁法将其分离开来，此方法得率高、操作简单、无需特殊试剂，已广泛应用于科研工作中。 一、实验前准备 实验开始前，将眼科剪刀、眼科镊子、培养皿，15ml离心管、移液管、移液枪、枪头等放入无菌超净工作台，以紫外线照射30min。 选取SPF级，体重100~150g左右的SD大鼠，断颈处死。将大鼠置于体积分数为75%的乙醇中浸泡5 min。 工作台紫外消毒后，采用通风机通风3min。以75%酒精擦拭操作台和双手。 无菌条件下，准备好大剪刀、止血钳、眼科剪刀、眼科镊子、干净培养皿。将大鼠仰卧在超净台内的干净培养皿上。 二、全骨髓提取 眼科镊沿腹股沟处提拉大鼠皮肤，眼科剪刀剪开腹股沟皮肤，暴露腿部肌肉，从关节处将大鼠大腿剪下。除去骨表面附着的软组织，置于另一无菌培养皿中。 假如在平时操作中，剪刀不易将骨表面肌肉组织剔除干净，可采用无菌纱布擦拭，可方便的将肌肉组织剔除干净，提高所分离细胞的纯度。 用无菌PBS浸泡清洗。眼科剪剪断两端骨骺，显露骨髓腔，放置于10ml含体积分数为10%胎牛血清的新鲜DMEM完全培养液的无菌培养皿中，取出1mL注射器，用镊子钳起骨头的一端，并用注射器吸取完全培养液冲洗骨髓腔至另一培养皿中，由一段骨髓腔冲出骨髓，重复3次，再反方向冲出骨髓，重复3次。直至骨髓腔冲洗液变清亮后停止。

成年大鼠4种脊髓全横断方法的比较

成年大鼠4种脊髓全横断方法的比较 作者：王春婷，游思维，刘惠玲，陈秉耀，焦西英，孟晓梅，吴宗亮，鞠躬 【关键词】脊髓切断术 关键词: 脊髓切断术;神经纤维;空洞;轴突再生;大鼠 摘要:目的比较成年大鼠4种脊髓全横断方法对后肢运动功能及脊髓组织学的影响. 方法 32只成年SD大鼠分为A，B，C和D4组，每组8只，分别以4种不同方法全横切T9脊髓.A组以尖刀片自左向右横行一次性切断脊髓;B组将尖刀片自脊髓背部中线处垂直插入并分别向两侧缓慢细心切断脊髓;C组将一丝线穿过脊髓腹侧硬膜外腔，以长刃显微剪一次性完全横断脊髓，并将丝线由断端间隙中拉出;D组以尖刀片自脊髓背侧至腹侧分层快速划断脊髓，再抬起脊髓两断端以验证横断的完全性.术后1h肉眼观察脊髓形态变化，8wk时评估截瘫后肢自发性运动功能恢复后，处死动物，取脊髓损伤节段，行连续矢状冰冻切片，小鼠抗神经丝抗体免疫组化染色，光镜下观察有无神经纤维的残留或再生，以及空洞及瘢痕的形成. 结果 A，B两组术后脊髓肿胀、外翻，8wk时分别有50%，38%的动物出现程度不等的功能恢复，镜下可见成束残留纤维和大量空洞.C，D两组术后脊髓外观良好，8wk时无功能恢复和残留纤维，但有少量神经丝免疫反应再生纤维.与D组相比，C组断端间隙较大且空洞较多. 结论经作者创新的D组方法，横断完全、损伤较小，为简便易行、效果可靠的脊髓全横断手术

方法. Keywords:cordotomy;nerve fibers;cavities;axonal regen-eration;rat Abstract:AIM To compare the effects of four spinal cord transecting methods on spontaneous motor recovery in para-plegic hindlimbs and histological changes within the spinal cord in adult rats.METHODS Thirty-two adult male SD rats were divided into Groups A，B，C and D（n=8for each group，which received one of the four methods of spinal cord transection at T9）.In Group A，the spinal cord was tran-sected with a sharp blade along the inner wall of the vertebral channel.The blade in Group B，however，was vertically in-serted through the cord at midline and guided to slowly and carefully cut the bilateral halves of the cord separately.In Group C，the cord was cut with a pair of long-edge microscis-sors，and the completeness of the transection was verified by guiding a surgical suture through the ventral extradural space before and pulling the suture out through the gap between the2stumps of the transected cord.The cord of Group D an-imals was dissected with a sharp blade in quick gashes，and complete transection was checked by uplifting one

第十五章：蛋白质的生物合成.doc

第十五章蛋白质的生物合成 一：填空题 1.蛋白质的生物合成是以________________作为模板，________________作为运输氨基酸的工具， ________________作为合成的场所。 2.细胞内多肽链合成的方向是从________________端到________________端，而阅读mRNA的方向是从________________端到________________端。 3.核糖体上能够结合tRNA的部位有________________部位、________________部位和 ________________部位。 4.ORF是指________________，已发现最小的ORF只编码________________个氨基酸。 5.蛋白质的生物合成通常以________________作为起始密码子，有时也以________________作为起始密码子，以________________、________________和________________作为终止密码子。 6.SD序列是指原核细胞mRNA的5′-端富含________________碱基的序列，它可以和16SrRNA的3′-端的________________序列互补配对，而帮助起始密码子的识别。 7.含硒半胱氨酸的密码子是________________。 8.原核生物蛋白质合成的起始因子(IF)有________________种，延伸因子(EF)有________________种，终止释放因子(RF)有________________种；而真核生物细胞质蛋白质合成的延伸因子通常有 ________________种，真菌有________________种，终止释放因子有________________种。 9.密码子的第2个核苷酸如果是嘧啶核苷酸，那么该密码子所决定氨基酸通常是________________。 10.原核生物蛋白质合成中第一个被参入的氨基酸是________________。 11.真核生物细胞质蛋白质合成对起始密码子的识别主要通过________________机制进行。 12.无细胞翻译系统翻译出来的多肽链通常比在完整的细胞中翻译的产物要长，这是因为 ________________。 13.蛋白质的半寿期通常与________________端的氨基酸性质有关。 14.tmRNA是指________________。 15.同工受体tRNA是指________________。 16.疯牛病的致病因子是一种________________。 17.已发现体内大多数蛋白质正确的构象的形成需要________________的帮助，某些蛋白质的折叠还需要________________和________________酶的催化。 18.SRP是指________________，它是一种由________________和________________组成的超分子体系，它的功能是________________。 19.蛋白质定位于溶酶体的信号是________________。 20.分子伴侣通常具有________________酶的活性。 答案：1. 2 3 4

细胞生物学第五至第八章作业答案

第五章物质的跨膜运输 1 物质跨膜运输有哪三种途径？ATP驱动泵可分哪些类型？ 答：物质跨膜运输有简单扩散、被动运输和主动运输三种途径。ATP驱动泵可分P型泵、V型质子泵和F型质子泵以及ABC 超家族，其中P型泵包括Na+—K+泵、Ca+泵和P型H+泵。 各种ATP驱动泵的比较： 2.简述钠钾泵的结构特点及其转运机制。 答：Na+—K+泵位于动物细胞的质膜上，由2个α和2个β亚基组成四聚体。Na+—K+泵的转运机制总结如下：在细胞内侧α亚基与Na+相结合促进ATP水解，α亚基上的一个天冬氨酸残基磷酸化引起α亚基构象发生变化，将Na+泵出细胞，同时细胞外的K+与α亚基的另一位点结合，使其失去磷酸化，α亚基的构象再次发生变化，将K+泵入细

胞，完成整个循环。 3、简述葡萄糖载体蛋白的结构特点及其转运机制。 答：葡萄糖载体蛋白，简称为GLUT，是一个蛋白质家族，包括十多种葡糖糖转运蛋白，他们具有高度同源的氨基酸序列，都含有12次跨膜的α螺旋。GLUT中多肽跨膜部分主要由疏水性氨基酸残基组成，但有些α螺旋带有Ser、Thr、Asp和Glu残基，他们的侧链可以同葡萄糖羟基形成氢键。葡萄糖载体蛋白的转运机制为：氨基酸残基为形成载体蛋白内部朝内和朝外的葡萄糖结合位点，从而通过构象改变完成葡萄糖的协助扩散。转运方向取决于葡萄糖的浓度梯度，从高浓度向低浓度顺梯度转运。 4、举例说明协同运输的机制。 答：协同运输是一类靠间接提供能量完成的主动运输方式。物质跨膜运动所需要的能量来自膜两侧离子的电化学浓度梯度，而维持这种电化学势的是钠钾泵或质子泵。根据物质运输方向与离子沿浓度梯度的转移方向，协同运输又可分为：同向协同与反向协同。 ①同向协同指物质运输方向与离子转移方向相同。如人体及动物体小肠细胞对葡萄糖的吸收就是伴随着Na+的进入，细胞内的Na+离子又被钠钾泵泵出细胞外，细胞内始终保持较低的钠离子浓度，形成电化学梯度。 ②反向协同物质跨膜运动的方向与离子转移的方向相反，如动物细胞常通过Na+/H+反向协同运输的方式来转运H+以调节细胞内的PH值，即Na+的进入胞内伴随者H+的排出。选做：5、举例说明受体介导的内吞作用。 答：受体介导内吞作用大致分为四个基本过程∶①配体与膜受体结合形成一个小窝；②小窝逐渐向内凹陷，然后同质膜脱离形成一个被膜小泡；③被膜小泡的外被很快解聚，形成无被小泡，即初级内体；④初级内体与溶酶体融合，吞噬的物质被溶酶体的酶水解。具有两个特点，即：①配体与受体的结合是特异的，具有选择性；②要形成特殊包被的内吞泡。 例如LDL受体蛋白是一个单链的糖蛋白，为单次跨膜蛋白。LDL受体蛋白合成后被运输到细胞质膜，即使没有相应配体的存在，LDL受体蛋白也会在细胞质膜集中浓缩并形成被膜小窝，当血液中有LDL颗粒，可立即与LDL的apoB-100结合形成LDL-受体复合物。一旦LDL与受体结合，就会形成被膜小泡被细胞吞入，接着是网格蛋白解聚，受体回到质膜再利用，而LDL被传送给溶酶体，在溶酶体中蛋白质被降解，胆固醇被释放出来用于质膜的装配，或进入其他代谢途径。 名词：

水通道蛋白4抗体在视神经脊髓炎发病机制中的作用

水通道蛋白４抗体在视神经脊髓炎 发病机制中的作用 武雷黄德晖吴卫平 摘要：视神经脊髓炎（ＮＭＯ）是主要累及视神经和脊髓的中枢神经系统自身免疫性脱髓鞘疾病，既往在其与多发性硬化的关系上一直存有争议，水通道蛋白４（　ＡＱＰ４）抗体的发现，不但为ＮＭＯ是独立于ＭＳ的疾病实体提供了新的证据支持，而且把ＮＭＯ的研究推上了一个新的水平。该文就ＡＱＰ４抗体在ＮＭＯ发病机制中的作用，包括介导星形胶质细胞损伤、血－脑脊液屏障破坏、炎性反应细胞浸润、少突胶质细胞损伤和髓鞘破坏等方面进行综述。 视神经脊髓炎；水通道蛋白４抗体；星形胶质细胞 Ｒ７４４．５＋２Ａ１００６－２９６３ （２０１１） ０６－０４３１－０４ １０．３９６９／ｊ．　ｉｓｓｎ．　１００６－２９６３．　２０１１．０６．　０１４ １００８５３　解放军总医院神经内科 万方数据

?４３２?万方数据

?４３３?万方数据

＠＠［１］　ｄｅ　Ｓｅｚｅ　Ｊ，　Ｌｅｂｒｕｎ　Ｃ，　Ｓｔｏｊｋｏｖｉｃ　Ｔ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｉｓ　Ｄｅｖｉｃ＇ｓ　ｎｅｕｒｏｍｙ ｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ　ａ　ｓｅｐａｒａｔｅ　ｄｉｓｅａｓｅ？　Ａ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｗｉｔｈ　ｍｕｌ ｔｉｐｌｅ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．　Ｍｕｌｔ　Ｓｃｌｅｒ，２００３，９：５２１－５２５． ＠＠［２　］　Ｇａｌｅｔｔａ　ＳＬ，　Ｂｅｎｎｅｔｔ　Ｊ．　Ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ　ｉｓ　ａ　ｖａｒｉａｎｔ　ｏｆ　 ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．　Ａｒｃｈ　Ｎｅｕｒｏｌ，　２００７，　６４（６）：９０１－９０３．＠＠［３　］　Ｍｉｓｕ　Ｔ，　Ｆｕｊｉｈａｒａ　Ｋ，　Ｋａｋｉｔａ　Ａ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｌｏｓｓ　ｏｆ　ａｑｕａｐｏｒｉｎ　４　ｉｎ　 ｌｅｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ：　ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｃｌｅ ｒｏｓｉｓ［Ｊ］．　Ｂｒａｉｎ，　２００７，１３０　：　１２２４－１２３４． ＠＠［４　］　Ｌｅｎｎｏｎ　ＶＡ，　Ｗｉｎｇｅｒｃｈｕｋ　ＤＭ，　Ｋｒｙｚｅｒ　ＴＪ　，　ｅｔ　ａｌ．　Ａ　ｓｅｒｕｍ　ａｕ ｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ：　ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．　Ｌａｎｃｅｔ，　２００４，３６４　：　２１０６－２１１２．＠＠［５］　Ｌｅｎｎｏｎ　ＶＡ，Ｋｒｙｚｅｒ　ＴＪ　，Ｐｉｔｔｏｃｋ　ＳＪ　，　ｅｔ　ａｌ．　ｌｇＧ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｏｐｔｉｃ ｓｐｉｎａｌ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｂｉｎｄｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４　ｗａｔｅｒ　ｃｈａｎ ｎｅｌ［Ｊ］．　Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，２００５，２０２：４７３－４７７． ＠＠［６］　Ａｍｉｒｙ－Ｍｏｇｈａｄｄａｍ　Ｍ，　Ｆｒｙｄｅｎｌｕｎｄ　ＤＳ，　Ｏｔｔｅｒｓｅｎ　ＯＰ．　Ａｎｃｈｏ ｒｉｎｇ　ｏｆ　ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４　ｉｎ　ｂｒａｉｎ：　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　ｉｍｐｌｉ ｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｔｒａｎｓ ｐｏｒｔ［Ｊ］．　Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，１２９　：９９９－１０１０． ＠＠［７　］　Ｓａｉｎｉ　Ｈ，　Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ　Ｇ，　Ｋｅｒｒ　Ｄ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ　ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４　ｉｓｏｆｏｒｍｓ　ｌｏｃａｌｉｚｅｓ　ｗｉｔｈ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ　ｄｉｓ ｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，２０１０，２２１．．６８－７２．＠＠［８］　Ｒｏｓｓｉ　Ａ，　Ｐｉｓａｎｉ　Ｆ，　Ｎｉｃｃｈｉａ　ＧＰ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｅｖｉｄｅｎｃｅｓ　ｆｏｒ　ａ　ｌｅａｋｙ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｈｏｒｔｅｒ　Ｍ２３　ｐｒｏ ｔｅｉｎ　ｉｓｏｆｏｒｍｏｆ　ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４　：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ａｒｒａｙ　ｆｏｒ ｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　［Ｊ　］．　Ｊ Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，　２０１０，２８５：４５６２－４５６９． ＠＠［９］　Ｎｉｃｃｈｉａ　ＧＰ，　Ｍａｓｔｒｏｔｏｔａｒｏ　Ｍ，　Ｒｏｓｓｉ　Ａ，　ｅｔ　ａｌ．　Ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ａｒｒａｙｓ　ｏｆ　ｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ａｒｅ　ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔ　ｆｏｒ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃａ　ａｕｔｏａｎｔｉｈｏｄｉｅｓ［Ｊ］．　Ｇｌｉａ，　２００９，５７　：　１３６３－１３７３．＠＠［１０］　Ｌｕｃｃｈｉｎｅｔｔｉ　ＣＦ，　Ｍａｎｄｌｅｒ　ＲＮ，　ＭｃＧａｖｅｒｎ　Ｄ，　ｅｔ　ａｌ．　Ａ　ｒｏｌｅ　ｆｏｒ ｈｕｍｏｒａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｄｅｖｉｃ＇ｓ　ｎｅｕｒｏｍｙ ｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ［Ｊ］．　Ｂｒａｉｎ，２００２，１２５　：１４５０－１４６１．＠＠［１１］　Ｍｉｓｕ　Ｔ，　Ｆｕｊｉｈａｒａ　Ｋ，　ＮａｋａｍｕｒａＭ，ｅｔ　ａｌ．　Ｌｏｓｓ　ｏｆ　ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４ ｉｎ　ａｃｔｉｖｅ　ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒ　ｌｅｓｉｏｎｓ　ｉｎ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ：　ａ　ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ［Ｊ］．　Ｔｏｈｏｋｕ　Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，２００６，２０９：２６９－２７５．＠＠［１２］　Ｔａｋａｎｏ　Ｒ，　Ｍｉｓｕ　Ｔ，　Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｔ，　ｅｔ　ａｌ．　Ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ　ｄａｍａｇｅ　ｉｓ ｆａｒ　ｍｏｒｅ　ｓｅｖｅｒｅ　ｔｈａｎ　ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎ　ＮＭＯ：　ａ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ＣＳＦ　 ｂｉｏｍａｒｋｅｒ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２０１０，７５：２０８－２１６． ＠＠［１３］　Ｈｉｎｓｏｎ　ＳＲ，　Ｒｏｅｍｅｒ　ＳＦ，　Ｌｕｃｃｈｉｎｅｔｔｉ　ＣＦ，　ｅｔ　ａｌ．　Ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４－ ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ ｉｍｐａｉｒ　ｇｌｕｔａｍａｔｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｂｙ　ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ＥＡＡＴ２［Ｊ］．　Ｊ　 Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，２００８，２０５：　２４７３－２４８１． ＠＠［１４］　Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ　Ｍ，　Ｎａｋａｔｓｕｊｉ　Ｙ，　Ｍｏｒｉｙａ　Ｍ，　ｅｔ　ａｌ．　Ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ　ｎｅｃ ｒｏｓｉｓ　ｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａｎｔｉ－ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４　ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｓｅｒｕｍ ［Ｊ］．　Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ，　２００９，２０．：５０８－５１２． ＠＠［１５］　Ｓａｂａｔｅｒ　Ｌ，　Ｇｉｒａｌｔ　Ａ，　Ｂｏｒｏｎａｔ　Ａ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　（ＮＭＯ－ＩｇＧ）　ｔｏ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ：　ａｎ　 ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，２００９，２１５：３１－３５．＠＠［１６］　Ｖｉｎｃｅｎｔ　Ｔ，　Ｓａｉｋａｌｉ　Ｐ，　Ｃａｙｒｏｌ　Ｒ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｃｏｎｓｅ ｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ－ＩｇＧ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｎ　 ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ　ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ　 ［Ｊ］．　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００８，１８１：５７３０－５７３７． ＠＠［１７］　Ｚｈｏｕ　Ｊ，　Ｋｏｎｇ　Ｈ，　Ｈｕａ　Ｘ，　ｅｔ　ａｌ．　Ａｌｔｅｒｅｄ　ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｉｎ　ａｄｕｌｔ　ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４　ｋｎｏｃｋｏｕｔ　ｍｉｃｅ　［　Ｊ］．　Ｎｅｕｒｏｒｅ ｐｏｒｔ，　２００８，１９：　１－５． ＠＠［１８］　Ｓａｉｋａｌｉ　Ｐ，　Ｃａｙｒｏｌ　Ｒ，　Ｖｉｎｃｅｎｔ　Ｔ．　Ａｎｔｉ－ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４　ａｕｔｏ－ａｎｔｉ ｂｏｄｉｅｓ　ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ ［Ｊ］．　Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ　Ｒｅｖ，２００９，９：１３２－１３５． ＠＠［１９］　Ｐｉｔｔ　Ｄ，　Ｗｅｒｎｅｒ　Ｐ，　Ｒａｉｎｅ　ＣＳ．　Ｇｌｕｔａｍａｔｅ　ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｉｎ　ａ ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．　Ｎａｔ　Ｍｅｄ，　２０００，　６：　６７－７０．＠＠［２０］　Ｍａｔｕｔｅ　Ｃ，　Ｄｏｍｅｒｃｑ　Ｍ，　Ｓáｎｃｈｅｚ－Ｇóｍｅｚ　ＭＶ．　Ｇｌｕｔａｍａｔｅ－ｍｅ ｄｉａｔｅｄ　ｇｌｉａｌ　ｉｎｊｕｒｙ：　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ［Ｊ］． Ｇｌｉａ，２００６，５３　：　２１２－２２４． ＠＠［２１］　Ｍａｒｉｇｎｉｅｒ　Ｒ，　Ｎｉｃｏｌｌｅ　Ａ，　Ｗａｔｒｉｎ　Ｃ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｓ ａｒｅ　ｄａｍａｇｅｄ　ｂｙ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｇ　ｖｉａ ａｓｔｒｏｃｙｔｅ　ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．　Ｂｒａｉｎ，　２０１０，１３３　：　２５７８－２５９１．＠＠［２２］　Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ　Ｍ，　Ｎａｋａｔｓｕｊｉ　Ｙ，　Ｋｉｍｕｒａ　Ｔ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　 ｏｐｔｉｃａ：　Ｐａｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｔｏ　ｒａｔｓ　ｂｙ　ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ［Ｊ］．　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ，２００９，３８６：６２３－６２７．＠＠［２３］　Ｂｒａｄｌ　Ｍ，　Ｍｉｓｕ　Ｔ，　Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｔ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ： ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　［Ｊ］．　Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ，　２００９，６６　：　６３０－６４３． ＠＠［２４］　Ｂｅｎｎｅｔｔ　ＪＬ，　Ｌａｍ　Ｃ，　Ｋａｌｌｕｒｉ　ＳＲ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　 ａｎｔｉ－ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｅａｒｌｙ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ［Ｊ］． Ａｎｎ　Ｎｅｕｒｏｌ，　２００９，６６　：　６１７－６２９． ＠＠［２５］　Ｓａａｄｏｕｎ　Ｓ，　Ｗａｔｅｒｓ　Ｐ，　Ｂｅｌｌ　ＢＡ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｉｎｔｒａ－ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　 ｏｆ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｇ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｍｐｌｅ ｍｅｎｔ　ｐｒｏｄｕｃｅｓ　ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｏｐｔｉｃａ　ｌｅｓｉｏｎｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．　Ｂｒａｉｎ， ２０１０，１３３：３４９－３６１． ＠＠［２６］　Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ　Ｍ，　Ｎａｋａｔｓｕｊｉ　Ｙ，　Ｋｉｍｕｒａ　Ｔ，　ｅｔ　ａｌ．　Ａｎｔｉ－ａｑｕａｐｏｒｉｎ ４　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｆ ＣＮＳ　ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍ ｍｕｎ，２０１０，３９４　：　２０５－２１０． ２０１１－０３－０４ 万方数据

大鼠骨髓源神经干细胞的分离培养及鉴定

大鼠骨髓源神经干细胞的分离培养及鉴定 目的：对Wistar大鼠骨髓源神经干细胞进行分离、培养和鉴定，观察其生长方式和分化特征。方法：运用无血清培养基对Wistar大鼠骨髓基质细胞进行培养，对分离获得的悬浮生长的神经球采用免疫组织化学法检测CD133和Nestin 表达情况。用血清诱导其分化，分化7 d后，采用免疫荧光细胞化学染色方法检测分化后GFAP、Map2、β-tubulin Ⅲ、Galc的表达情况。结果：大鼠骨髓基质细胞在无血清培养基中，呈悬浮状态生长，形成细胞球，经免疫荧光检测，细胞球呈CD133和Nestin阳性。将细胞球转入含血清培养基后，转为贴壁生长，经免疫荧光检测大部分已分化细胞呈GFAP阳性，少部分细胞呈MAP-2、β-tubulin Ⅲ及Galc阳性。结论：采用含bFGF、EGF的无血清培养基可培养出呈球状聚集生长、具多向分化潜能的大鼠骨髓源神经干细胞。 脑血管病是威胁全世界人类生命健康的一类疾病，其中缺血性脑梗死作为神经系统的常见病、多发病，其发病率、病死率和致残率均很高。且随着人口结构的老龄化和吸烟人口的增加，脑血管病的发病率有进一步上升的趋势。传统的治疗方法包括药物、康复理疗和功能锻炼等，但效果均不理想。近年来，随着干细胞（Stem cells，SCs）理论的提出，不少研究者相继报道从神经组织、脂肪组织、骨髓等组织中分离并培养出了各自的干细胞，其中神经系统来源的干细胞被称之为神经干细胞（Neural stem cells，NSCs）[1]。近年来，随着神经干细胞研究的不断深入，部分研究者将骨髓基质细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）成功诱导为骨髓源神经干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells-derived neural stem cells，BMSCs-NSCs）[2]。BMSCs-NSCs的开发和应用，克服了从成体脑组织中获取神经干细胞和危险性和局限性，也避免了胚胎来源干细胞移植中存在的伦理、免疫排斥、来源有限等问题。骨髓基质细胞源性神经干细胞的移植治疗修复中枢神经系统损害成为了研究重点，这给脑梗死的细胞移植治疗带来了新思路[1-3]。因此，本研究选用Wistar大鼠骨髓基质细胞，运用含bFGF和EGF的无血清DMEM/F12培养基对其进行诱导培养，拟培养Wistar大鼠骨髓源神经干细胞，为骨髓源神经干细胞的进一步研究打下基础，现具体报道如下。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物成年Wistar大鼠，雄性，体重（200±50）g，购于兰州大学实验动物中心，动物合格证号：SCXK（甘）2013-0002。 1.1.2 主要试剂DMEM/F12培养基及0.25%胰蛋白酶（购自Gibco公司）。胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）购自Hyclone公司。B27添加剂购自Invitrogen 公司。表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）购自Peprotech 公司，小鼠抗Nestin抗体、兔抗GFAP抗体、小鼠抗Galc抗体购自Chemicon 公司，小鼠抗MAP2抗体、兔抗β-tubulin Ⅲ抗体购自Abcam公司，兔抗CD133抗体购自Santa Cruz公司。Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG、Alexa Fluor 594标记羊抗兔IgG和Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG购自Molecular Probes公司。DAPI

BBB(大鼠脊髓损伤)评分标准

BBB(大鼠脊髓损伤)评分标准： 0分： 无可见后肢运动 1分： 一或两个关节轻微运动，通常为髋和/或膝关节 2分： 一个关节广泛活动或一个关节广泛活动且有另一关节轻微活动3分：两个关节广泛活动 4分： 后肢全部三个关节可轻微活动 5分： 两个关节轻微活动，第三个关节可广泛活动 6分： 两个关节广泛活动，第三个关节可轻微活动 7分： 后肢全部三个关节可广泛活动 8分： 非承重情况下可以爪掌面着地 9分： 间或爪掌面承重支撑或爪背面承重移动，无爪掌面支撑移动10分：偶见爪掌面承重移动；无前后肢协调动作

11分： 可较多的见到掌面承重移动，但无前后肢协调动作 12分： 可较多的见到掌面承重移动，偶见前后肢协调动作 13分： 常见掌面承重移动，可常见前后肢协调动作 14分： 有持续性掌面承重移动和前后肢协调动作；或出现常见的掌面移动，持续型前后肢协调动作，偶有爪背侧移动 15分： 持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中无或欧有抓地；初接触时主动爪位置与身体平行 16分： 步态中可见持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中常见爪抓地；初接触时主动爪位置与身体平行，负重转移后旋转。 17分： 步态中可见持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中常见爪抓地；初接触时和负重转移后主动爪位置均与身体平行。 18分： 步态中可见持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中可持续性爪抓地；初接触时主动爪位置均与身体平行，负重转移后旋转。 19分：

步态中可见持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中可持续性爪抓地；初接触时和负重转移后主动爪位置均与身体平行。尾巴有时或总是下垂。 20分： 持续性掌面移动，持续性协调步态，足趾持续抓地，初接触时和负重转移后主动爪位置均与身体平行，躯干不稳定，尾巴持续翘起。 21分： 持续性掌面移动，持续性协调步态，足趾持续抓地，活动过程中主动爪位置始终与身体平行，躯干持续稳定，尾巴持续翘起。 关于BBB评分，的确有很大的主观性，我目前把BBB评分分三大块，0-7主要看关节动否？有几个关节动？ 8-14看脚掌能否着地？着地后能否运动？运动协调不？ 15-18看脚尖能否抓地？脚尖与前进方向是否一致？前后肢运动是否协调19-21看运动时躯干稳不稳定？尾巴翘不翘？

蛋白质的生物合成习题与参考答案

第十五章蛋白质生物合成 一、填空题： 1．三联体密码子共有 64 个，其中终止密码子共有 3 个，分别为 UAA 、 UAG 、 UGA 。2．密码子的基本特点有四个分别为从5′→3′无间断性、简并性、变偶性、通用性。3．次黄嘌呤具有广泛的配对能力，它可与 U 、 C 、 A 三个碱基配对，因此当它出现在反密码子中时，会使反密码子具有最大限度的阅读能力。 4．原核生物核糖体为 70 S，其中大亚基为 50 S，小亚基为 30 S；而真核生物核糖体为 80 S，大亚基为 60 S，小亚基为 40 S。 5．原核起始tRNA，可表示为 tRNA f甲硫，而起始氨酰tRNA表示为f Met-tRNA f甲硫；真核生物起始tRNA可表示为 tRNA I甲硫，而起始氨酰-tRNA表示为 Met-tRNA f甲硫。 6．肽链延伸过程需要进位、转肽、移位三步循环往复，每循环一次肽链延长 1 个氨基酸残基，原核生物中循环的第一步需要 EF-Tu 和 EF-Ts 延伸因子；第三步需要 EF-G 延伸因子。 7．原核生物mRNA分子中在距起始密码子上游约10个核苷酸的地方往往有一段富含嘌呤碱基的序列称为Shine-Dalgrano序列，它可与16S-rRNA 3′－端核苷酸序列互补。 8．氨酰-tRNA的结构通式可表示为： O tRNA－O－C－R NH2， 与氨基酸键联的核苷酸是 A（腺嘌呤核苷酸）。 9．氨酰-tRNA合成酶对氨基酸和相应tRNA都具有较高专一性，此酶促反应过程中由 ATP 水解提供能量。 10．肽链合成的终止阶段， RF1因子和 RF2因子能识别终止密码子，以终止肽链延伸，而 RF3因子虽不能识别任何终止密码子，但能协助肽链释放。 11．蛋白质合成后加工常见的方式有磷酸化、糖基化、脱甲基化、信号肽切除。12．真核生物细胞合成多肽的起始氨基酸为甲硫氨酸，起始tRNA为 tRNA I甲硫，此tRNA 分子中不含 T C 序列。这是tRNA家庭中十分特殊的。 二、选择题(只有一个最佳答案)： 1．下列有关mRAN的论述，正确的一项是（ C ） A、mRNA是基因表达的最终产物 B、mRNA遗传密码的阅读方向是3′→5′ C、mRNA遗传密码的阅读方向是5′→3′ D、mRNA密码子与tRNA反密码子通过A-T，G-C配对结合 E、每分子mRNA有3个终止密码子 2．下列反密码子中能与密码子UAC配对的是（ D ） A、AUG B、AUI C、ACU D、GUA 3．下列密码子中，终止密码子是（ B ） A、UUA B、UGA C、UGU D、UAU

小分子物质跨膜转运和离子通道的基础

?基础医学? 小分子物质跨膜转运和离子通道的基础 吴　燕　刘志红 关键词　跨膜转运　膜蛋白　小分子物质　离子通道 中图法分类号　Q73 细胞膜脂质双层结构中的疏水中心对大多数极性分子具有屏障作用,这种屏障作用可维持细胞内外液溶质浓度差,从而保持细胞内液溶质浓度和内环境的稳定。此外,细胞在摄取营养物质分泌代谢性产物以及调节细胞内多种离子特异性跨膜转运时,需要有特异性膜蛋白来辅助完成。现已知道介导上述物质转运的膜蛋白可分为两大类:载体蛋白和通道蛋白,载体蛋白具有可携带特异性分子穿越细胞膜的移动成分;通道蛋白可形成一狭窄亲水孔,使无机离子被动转运,这两类膜蛋白在小分子物质跨膜转运中起着非常重要的作用。 1　膜转运的基本原理〔1〕 1.1　细胞膜脂质双层结构对离子具有高度不通透性　如有足够长时间,任何分子均可顺浓度梯度穿透无蛋白成分脂质双层,其速度取决于脂溶性程度与分子大小。脂溶性越大(即疏水性或非极性强),则扩散速度越快,小的非极性分子,如O2(分子量32)和CO2 (分子量44)易溶于脂质双层,所以能很快扩散穿过脂质双层。不带电荷的极性分子如果分子足够小也很易穿透脂质双层,水(分子量18),乙烷(分子量46)和尿素(分子量60)穿透速度很快,甘油(分子量92)次之,而葡萄糖几乎不能穿越。 相比而言,脂质双层对带电分子(离子)无论大小均高度不通透,电荷及该分子高度亲水性阻止其进入脂质双层的疏水相,所以合成的脂质双层对水的穿透性可比Na+或K+强109倍。 1.2　两类主要的膜转运蛋白——载体蛋白和通道蛋白　和合成的脂质双层一样,非极性分子可通过简单的扩散方式穿透细胞膜,但细胞膜还必须能对多种极性分子通透,如离子、糖、氨基酸、核酸和细胞代谢产物,这些物质通过合成脂质双层速度很慢,特殊膜蛋白成分负责转运这些溶质,这些膜蛋白即膜转运蛋白,它们以不同形式出现于多种生物膜上,特异性转运一种分子或一类分子(图1)。 膜转运蛋白有两种主要类型:载体蛋白和通道蛋白,载体蛋白可与特异性溶质结合,再经过一系列变化转运结合溶质穿过细胞膜;而通道蛋白无须结合溶质,它们集聚成贯穿脂质双层的亲水孔,当这些孔打开时,特异性溶质分子便通过孔穿过细胞膜,所以通道蛋白介导的转运速度远大于载体蛋白。 1.3　主动转运是由载体蛋白介导的一个需能过程　所有通道蛋白和许多载体蛋白可使溶质被动穿膜转运(顺浓度递度),这一过程称为被动转运(或易化扩散),如果被转运分子不带电荷,那么仅由膜两侧的浓度差(其浓度梯度)驱动和决定转运方向;如果溶质带电荷,则由其浓度梯度和膜两侧的电压差影响其转运(电化学梯度),实际上几乎所有的胞浆膜两侧均存在电压差(电压梯度),细胞内相对于细胞外为负值,这种电压差有利于带正电荷离子进入细胞,排斥带负电荷离子进入细胞。 南京军区南京总医院解放军肾脏病研究所 (南京,210002)

视神经脊髓炎与其特异性抗体——抗水通道蛋白4抗体(综述)

视神经脊髓炎与其特异性抗体——抗水通道蛋白4抗体(综述) 作者：梁松岚， 王维治， 梁庆成 作者单位：哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科,黑龙江,哈尔滨,150086 刊名： 中国神经免疫学和神经病学杂志 英文刊名：CHINESE JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY AND NEUROLOGY 年，卷(期)：2008,15(2) 参考文献(11条) 1.Lennon VA;Kryzer TJ;Pittock SJ IgG marker of optic-spinal multiple sclerosis binds to the aquaporin-4 water[外文期刊] 2005(04) 2.Lennon VA;Wingerchuk DM;Kryzer TJ A serum autoantibody marker of neuromyelitis optica 2004 3.Takata K;Matsuzaki T;Tajika Y Aquaporins:water channel proteins of the cell membrane 2004(01) 4.Pittock SJ;Weinshenker BG;Lucchinetti CF Neuromyelitis optica brain lesions localized at sites of high aquaporin 4 expression[外文期刊] 2006(7) 5.Vernant JC;Cabre P;Smadja D Recurrent optic neuromyelitis with endocrinopathies:a new syndrome[外文期刊] 1997(01) 6.Roemer SF;Parisi JE;Lennon VA Pattern-specific loss of aquaporin-4 immunoreactivity distinguishes neuromyelitis optica from multiple sclerosis[外文期刊] 2007(05) 7.Misu T;Fujihara K;Kakita A Loss of aquaporin 4 in lesions of neuromyelitis optica:distinction from multiple sclerosis[外文期刊] 2007(05) 8.Takahashi T;Fujihara K;Nakashima I Anti-aquaporin-4 antibody is involved in the pathogenesis of NMO:a study on antibody titre[外文期刊] 2007(05) 9.Weinshenker BG;Wingerchuk DM;Vukusic S Neuromyelitis optica IgG predicts relapse after longitudinally extensive transverse myelitis[外文期刊] 2006(03) 10.Paul F;Jarius S;Aktas O Antibody to aquaporin 4 in the diagnosis of neuromyelitis optica[外文期刊] 2007(04) 11.Matsuoka T;Matsushita T;Kawano Y Heterogeneity of aquaporin-4 autoimmunity and spinal cord lesions in multiple sclerosis in Japanese[外文期刊] 2007(05) 本文读者也读过(10条) 1.王慧娟抗水通道蛋白-4抗体对MS与NMO鉴别诊断价值的研究进展[学位论文]2008 2.陈敏水通道蛋白-4与视神经脊髓炎[期刊论文]-中国实用神经疾病杂志2011,14(13) 3.肖琴华.涂江龙.熊友生水通道蛋白4与视神经脊髓炎[期刊论文]-中国临床神经科学2008,16(4) 4.孙巧松.刘俊秀.丰岩清.国宁.陈曦.赖蓉.黄帆.SUN Qiao-song.LIU Jun-xiu.FENG Yan-qing.GUO Ning.CHEN Xi .LAI Rong.HUANG Fan中国人视神经脊髓炎疾病谱NMO-IgG/anti-AQP4抗体检测方法学的比较[期刊论文]-中山大学学报（医学科学版）2010,31(6) 5.宋德禄.钟勇.Song Delu.Zhong Yong水通道蛋白4在视神经脊髓炎发病机制中的研究进展[期刊论文]-眼科研究2009,27(7) 6.尤小凡.胡文立水通道蛋白4与视神经脊髓炎的发病机制[期刊论文]-中华神经科杂志2010,43(4) 7.武雷.黄德晖.吴卫平水通道蛋白4抗体在视神经脊髓炎发病机制中的作用[期刊论文]-中国神经免疫学和神经病学杂志2011,18(6)