Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒操作方法及步骤说明书

Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒

说明：

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。

产品组成（50／25次反应）：

· Annexin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml）

· Binding Buffer 40ml／20 ml

· Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml）

保存条件: 2-8℃储存，有效期一年。

注意事项：

1.为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项；

2.试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖

时液体洒落；

3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用；

4.此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断；

5.本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。

操作注意要点：

1.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作；

2.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰

变；

3.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在操作时请注意避光；

4.成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS

翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的；

5.在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果；

6.PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，上机

前5分钟再加入PI染色。

操作步骤：

1.贴壁细胞，先用胰酶消化；

2.细胞计数后取5×105 ~1×106个/ml 细胞，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清；

3.加入1ml冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮；

4.1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清；

5.重复步骤3、4两次；

6.将细胞重悬于200ul Binding Buffer；

7.加入10ul Annexin V-FITC轻轻混匀，避光室温反应15分钟或4℃反应30分钟。

8.加入300ul Binding Buffer（总反应体积500 ul）以及5ul PI，在1小时内上机检测；（建议在

加入PI之前将细胞悬液用200目筛网过滤。）

9.若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。

自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书 注意：Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴，严禁吸入和食入。 反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中，按有毒废物处理。 需要自己配置的其他物品： 除上表所列试剂外，还需准备以下溶液。下表列出每步所需物品概览：

产品概述： 特异性：TUNEL 反应优先标记凋亡产生的DNA 链断裂，从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的primary DNA 链断裂 实验干扰：假阴性：在某些型式的凋亡细胞中DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻， 如细胞外元件可能阻止TdT 到达DNA 断裂处。两种情况均能产生假阴性。 假阳性：在坏死晚期，可能产生大量的DNA 片段 DNA 链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生 假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式，应认真进行每种细胞的形态学检查 凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式，因此，对于可以结果进行解释时， 细胞形态评估是一项重要的参数 样本：细胞离心涂片和细胞涂片 在chamber slides 上培养的黏附细胞 冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本 分析时间：2-3小时，除外培养、固定和渗透 检测次数：一个试剂盒50T

步骤和所需材料： 1 流程图： 2 样品准备 黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片 需准备的其他试剂：Washing buffer：磷酸盐缓冲液（PBS） Blocking buffer封闭溶液：甲醇稀释的3% H2O2 Fixation solution固定溶液：PBS配制的4%多聚甲醛，ph ，新鲜配制 Permeabilisation solution 渗透液：%Triton1）X-100溶于%柠檬酸钠溶液 中，新鲜配制 步骤：下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。 组织部分 福尔马林-包埋组织 福尔马林包埋组织的预处理：可按4种不同的方式预处理。如用蛋白酶K，不含核酸酶，浓 度、孵育时间和温度应按组织类型优化 注意：只用罗氏应用科学的蛋白酶K，因其经检测不含核酸酶， 核酸酶可导致假阳性。 另外3中替代方法在下表中描述（step 2） 需准备的其他试剂：二甲苯和乙醇（浓度：95%，90%，80%，70%，溶于双蒸水中）

LED显示屏控制软件操纵使用说明(灵信V3.3)

第一章概述 1.1 功能特点 《LED Player V3.3》是本公司新推出的一套专为LED显示屏设计的功能强大,使用方便,简单易学的节目制作、播放软件，支持多种文件格式：文本文件，WORD文件，图片文件（BMP／JPG／GIF／JPEG．．．），动画文件（SWF ／Gif）。 2.2 运行环境 操作系统 中英文Windows/7/NT/XP 硬件配置 CPU: 奔腾600MHz以上 内存:128M 相关软件 OFFICE2000--如需WORD文件必须安装

第二章安装与卸载 2.1 安装 《LED Player》软件安装很简单，操作如下：将LED Player播放软件的安装光盘插入电脑光驱，即可显示LED Player播放软件的安装文件，双击LED Player，即可实现轻松安装。 《LED Player》软件安装成功后，在【开始】/【程序】里将出现“LED软件”程序组，然后进入该程序组下的“LED Player”,单击即可运行，如图所示， opyright ? 2005-2007 Listen tech. All Rights Reserved 灵感设计诚信 同时，桌面上也出现“LED Player”快捷方式：如右图所示，双击它同样可以启动程序。

2.2 卸载 《LED Player》软件提供了自动卸载功能，使您可以方便地删除《LED Player》的所有文件、程序组和快捷方式，用户可以在“LED软件”组中选择“卸载LED Player”，也可在【控制面板】中选择【添加/删除程序】快速卸载. 第三章使用详解 3.1 节目组成 每块显示屏由一个或多个节目页组成。节目页是用来显示用户所要播放的文本、图片、动画等内容。区域窗口有十一种：图文窗、文本窗、单行文本窗、静止文本窗、时间窗、正计时窗、倒计时窗、模拟时钟窗、表格窗、动画窗、温度窗。 文件窗：可以播放各种文字、图片、动画、表格等几十种文件。 文本窗:用于快速输入简短文字，例如通知等文字。 单行文本窗：用于播放单行文本，例如通知、广告等文字。 静止文本窗：用于播放静止文本，例如公司名称、标题等文字。 时间窗：用于显示数字时间。 计时窗：用于计时，支持正/倒计时显示。

Annexin V-FITC PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 一、试剂盒说明 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS ）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS ）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素FITC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI ）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。 二、试剂盒组份 组份 (20 assays) (50 assays) (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 100 μL 250μL 500 μL Propidium Iodide 100 μL 250μL 500 μL Binding Buffer 10.0 mL 25 mL 50 mL 注：1、Annexin V-FITC 组份建议按需分装小份冻存于-20 ℃，避免反复冻融； 2、Propidium Iodide 和Binding Buffer 组份不用时可放置于4℃保存，Propidium Iodide 需要避光。 3、Store at -20℃ for 12 months 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube 、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS 、不含EDTA 的胰酶消化液 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-FITC ，Propidium Iodide （PI ）避光保存及使用。对于Annexin V-FITC 这个组份，建议您在收到产品之后，分装为小份避光保存于-20℃，即用即取。 3. Propidium Iodide （PI ）有毒，操作时要戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而 用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每 次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 五、 操作方法 1. 悬浮细胞离心（2000rpm 离心5min ）收集；贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不 易过长，否则容易引起假阳性）； -20℃避光 4℃避光 4℃

翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书

罗氏(R o c h e)公司T u n e l试剂盒操作说明书(In situ cell death detection kit-POD法) 一、原理： TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。 二、器材与试剂 器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等； 试剂：试剂盒含： 1号（蓝盖）Enzyme Solution 酶溶液：TdT 10×、 2号（紫盖）Label Solution标记液：荧光素标记的dUTP 1×、 3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP；

自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5 μl 20×DAB+1μL 30%H2O2+94 μl PBS）、 Proteinase K工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl，pH ）或细胞通透液（% Triton X-100 溶于% 柠檬酸钠，临用前配制）、 苏木素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml–3 U/ml in 50 mM Tris-HCl， pH ，10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。 三、实验步骤 操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL反应液→加converter-POD→与底物DAB反应显色→光学显微镜计数并拍照。 具体操作步骤（石蜡包埋切片的检测）： 1. 用二甲苯浸洗2次，每次5min； 2. 用梯度乙醇（100、95、90、80、70%）各浸洗1次，每次3min； 注：上面两步是针对石蜡切片样本的处理 4. 用Proteinase K工作液处理组织15-30 min 在21–37°C（温度、时间、浓度均需摸索）如果凋亡细胞染色较弱时，可用高浓度的 Proteinase K（400μg/mL）处理5 分钟。其它替代方法：石蜡切片的预处理也可根椐实际情况可采用下述三种替代方法之一，即 蛋白酶K 处理的步聚改用下述方法，其余步聚均相同： 替代方法1: 将脱蜡及水合好的切片浸入通透液中8-10 min（通透 液：%TritonX-100 溶于%柠檬酸钠，需新鲜配制） 替代方法2：将脱蜡及水合好的切片浸入胃蛋白酶或胰蛋白酶中8-10 min （胃蛋白酶：%%溶于HCl PH2，胰蛋白酶%%溶于HCl ）

LXM调试软件Somove使用说明

L X M26调试软件S o m o v e使用说明安装LXM26调试软件调试软件 如果没有安装Somove，需要先安装Somove 下载地址： 安装好Somove 后需要安装Lexium26 的DTM 下载地址： 软件注册 如果尚未注册软件系统会自动提示注册，注册是免费的。 连接电脑 Lexium26通过CN3口（modbus485）和电脑进行通讯，施耐德标准通讯线缆型号是TCSMCNAM3M002P，此电缆连接电脑一端为USB口 在第一次进行调试时，需要查明电脑分配给此调试电缆的COM口，打开硬件管理器就可以看到，此处为COM4 确认COM口后，需要在Somove里面设定对应的COM口，单击编辑链接 选择modbus串行，并单击最右边编辑图标 选择对应的COM端口，单击应用并确定

然后电脑和伺服驱动器的通讯就可以开始了，单击连接 选择Lexium26 ，并单击连接 参数上载后后可以进行Somove在线调试 我的设备 用途：我的设备页面用于显示伺服驱动器和电机的基本信息，包括 驱动器型号 驱动器序列号 驱动器固件版本 电机型号 驱动器额定/峰值电流 电机额定/峰值转速 电机额定/峰值扭矩 … 参数列表 用于：参数列表页面用于设置驱动器P参数，可以按照P参数组开设置，也可以按照操作模式来设置。 相关参数说明可以在Lexium26手册第九章查询

错误内存 用途：错误内存界面用来查看伺服的故障历史，可以显示当前故障，已经5次历史故障，并且指明故障原因和处理方式。 可视化 用途:可视化界面用于显示以下信号的状态或者数值 数字输出/输出 模拟量输入/输出 指定参数的数值 指定参数显示需要 1.选定要显示的参数 2.在右侧区域用鼠标选择显示区域 示波器 用途：可同时捕捉驱动器内部的最多4个变量，例如电流、电压、位置误差、实际速度等，并绘制成以时间为横坐标的曲线图，以此观察驱动器及电机的运行性能是否符合要求，并相应的做出控制环参数调整。 左侧三个输入区域分别用于： Channels：选择希望监视的参数 Trigger：选择开始捕捉参数的触发条件 Settings：选择需要做出调整的控制环参数 这三个输入区域可以分别用右侧示波器栏顶部的三个按钮打开 这是右侧示波器栏顶部的一排按钮，它们的功能是这样的： ：用于打开和关闭左侧三个输入区域 ：用于加载和保存捕捉到的波形文件 ：用于导出和导入示波器的配置文件 ：分别用于给波形曲线加注释，将波形拷贝为图形文件(*.png)，设置FFT功能的采样参数 ：用于对波形进行放大、缩小、移动 ：分别用于在波形上加两个光标以准确读出光标点的数值，在示波器上显示波形名称样例，对波形进行FFT转换观察频域分布 示波器的一般使用顺序为： 1.在左边第一个输入区域中选择希望捕捉的参数： 1)按打开可以捕捉的参数列表，示波器同时最多捕捉4个参数

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书 货号：T2190 规格：20次 保存：-20oC保存，荧光标记液需避光保存。 产品简介： 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。产品内容： 1.TdT酶100μl 2.荧光标记液900μl 3.TdT酶稀释液(选用)500μl

D06调试软件说明

D06调试软件说明 首先要将D06按照使用说明书安装好。用汽油启动汽车,通过专用串口连接线把D06与PC 机连接。启动D06调试软件。 启动后的主界面: VEHICLE CONFIGURATION 参数配置 DISPLAY 数据显示 AUTOCALIBRATION 自动配置 SA VE CONFIGURATION 保存配置 LOAD CONFIGURATION 读入配置 ECU REPROGRAMMING 重新编程 EXIT 退出

选择语言,操作如下图: 进入VEHICLE CONFIGUNATION 菜单,内部有F1、F2、F3、F4四张表格。F1表格的内容如下图:

Fuel type 燃料类型 默认状态: LPG (液化气) 选择项: Methane (天然气) Inj、喷射的方式 默认状态:Sequential (顺序喷射) 选择项:Full Group (分组喷射) Injectors 喷嘴类型 默认状态:Omvl FAST 选择项:Omvl STD Reducer:减压器类型燃料类型选择为Methane时,就没有此选项 默认状态: STD 选择项:MP 选择项:HP Type of revolution signal 转速信号的类型 默认状态:Standard 选择项:Weak No、of cylinders 汽缸数 默认状态:4 Cylinders 选择项:3 Cylinders Ignition type 线圈类型 默认状态:Two coils 选择项:One coil 选择项:RPM sensor 选择项:RPM sensor2 Type of change over 转换类型 默认状态:In acceleration 选择项:IN DECELERTION REV、THRESHOLD FOR CHANG-OVER 转换的转速 默认状态:1600 选择项:800—3000 REDUCER TEMPERATURE FOR CHANGE-OVER 转换时的减压器温度 默认状态:30

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)（BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本） 使用说明书 一、TUNEL制品说明 凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被染色。 本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。 本试剂盒特点 ●操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有Proteinase K 和DAB。 ●高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。 ●高特异性：能特异性染色凋亡细胞。 ●快速操作：整体操作约需3小时。 ●用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。 ●方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。 ●高正确性：有阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性

使用注意事项 1．使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。 2．因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。 3．为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。 4． TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 5. 为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。 7. 使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。 8. 进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。 9. DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10 mg/ml）后，按说明书显色使用。 二、TUNEL试剂盒组分 试剂盒以外自备仪器和试剂

invitrogen AnnexinV PI双染试剂盒说明书中文

流式细胞仪 1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组 2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗 3，准备1X的annexin结合液，例如，对于10个实验来说，加1ml 5X annexin 结合液（组分C）到4ml 去离子水中 4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。没有使用的这部分工作液用于以后的实验。 5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备100ul 足够的体积。 6，加5ul Alexa Fluor 488 annexin V(组分A)和1ul 100ug/ml PI工作液（4步骤中准备的）到每100ul的细胞悬液中。 7，室温孵育细胞15min. 显微镜观察 1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组 2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗 3，准备1X的annexin结合液，例如，配置1ml，加200ul 5X annexin 结合液（组分C）到800ul去离子水中 4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。没有使用的这部分工作液用于以后的实验。 5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备足够的体积。 6，加5-25ul的annexin V缀合物（组分A）和1-2ul(100ug/ml)PI工作液到100ul 的细胞悬液中。高浓度的annexinV缀合物会产生较好的结果；最佳染色浓度需要凭借经验 7，室温孵育细胞15min 8，1X annexin 结合液清洗细胞 9，用一个合适方法使细胞固定在载玻片上，用一个适当的滤镜观察荧光效果。 细胞应该被分成3组：活细胞，凋亡细胞和死细胞。活细胞在细胞膜上有微弱的annexin V染色，而凋亡细胞在膜上有一个显著亮度，死亡细胞在膜上有annexin染色和核上的PI染色。

串口调试软件使用说明2.0

串口调试软件使用说明 首先，运行该软件显示的是一个对话窗。在该界面的左上角有五个小的下拉窗口，分别为串口，波特率，校验位，数据位，停止位。 串口窗口应为仪表与计算机相连时所使用的串口。 波特率窗口选择仪表设置的波特率。校验位选择无。 数据位选择8位 停止位选择2位 在停止位的下面是显示区的选项，选择十六进制显示。 在整个界面的下方是发送区，主要选择十六进制发送，发送方式可选手动发送或自动发送。其中自动发送可设置发送周期（以毫秒为单位）。除直接发送代码外本软件也可直接发送文件。 仪表通讯协议如下： 通讯格式为8位数据，2个停止位，无校验位。 仪表读写方式如下： 读指令：Addr＋80H Addr＋80H 52H 要读参数的代号 写指令：Addr＋80H Addr＋80H 43H 要写参数的代号写入数低字节写入数高字节 读指令的CRC校验码为：52H＋Addr 要读参数的代号，Addr为仪表地址参数值范围是0-100。 写指令的CRC校验码为：43H＋要写的参数值＋Addr 要写的参数代号。 无论是读还是写，仪表都返回以下数据： 测量值PV＋给定值SV ＋输出值MV及报警状态＋所读/写参数值 其中PV、SV及所读参数值均为整数格式，各占2个字节，MV占1个字节，报警状态占1个字节，共8个字节。 每2个8位数据代表一个16位整形数，低位字节在前，高位字节在后，各温度值采用补码表示，热电偶或热 电阻输入时其单位都是0.1℃，1V或0V等线性输入时，单位都是线性最小单位。因为传递的是16位二进制 数，所以无法表示小数点，要求用户在上位机处理。 上位机每向仪表发一个指令，仪表在0-0.2秒内作出应答，并返回一个数据，上位机也必须等仪表返回数 据后，才能发新的指令，否则将引起错误。如果仪表超过最大响应时间仍没有应答，则原因可能无效指 令、通讯线路故障，仪表没有开机，通讯地址不合等，此时上位机应重发指令。

碧云天 细胞凋亡-一步法TUNEL检测试剂盒

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒 产品简介： 碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。 注：FITC是fluorescein isothiocyanate的缩写，实际上大多数情况下所谓的FITC即为fluorescein。 本试剂盒有如下优点。(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。(2) 特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3) 快速：仅需约1-2个小时即可完成。(4) 方便：只需一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。(5) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。 极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。 本试剂盒足够检测20个样品。 保存条件： -20℃保存，荧光标记液需避光保存。 注意事项： 需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)，用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1％ Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。 如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K，二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.对于贴壁细胞或细胞涂片： a.PBS或HBSS洗涤一次。 b.如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。 c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。 d.用PBS或HBSS洗涤一次。 e.加入含0.1％ Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。 f.转步骤5。 2.对于悬浮细胞或细胞悬液： a.收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。 b.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团，宜在侧摆摇床或 水平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。 c.用PBS或HBSS洗涤一次。

翻译好罗氏公司Tel试剂盒操作说明书

罗氏(Roche)公司Tunel试剂盒操作说明书 (In situ cell death detection kit-POD法) 一、原理： TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。 二、器材与试剂 器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等； 试剂：试剂盒含： 1号（蓝盖）Enzyme Solution 酶溶液：TdT 10×、 2号（紫盖）Label Solution标记液：荧光素标记的dUTP 1×、 3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP； 自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、

TD调试软件使用方法

TD调试软件使用方法 TDebug（文件名TD.EXE）是调试8086汇编语言的工具软件。TD主要用来调试可执行文件（.EXE文件）。它具有功能强、使用灵活方便、人－机界面友善、稳定可靠等特点，能提高工作效率，缩短调试周期。 1．启动方法 使用TDebug软件时，必须有以下文件： TD.EXE——可执行文件。 在DOS状态下键入TD即可启动TD软件。 例如： C:\SY86>TD 文件名 或 C:\SY86>TD F1-Help F2-Bkpt F3-Mod F4-Here F5-Zoom F6-Next F7-Trace F8-Step F9-Run 10-Menu 如果在键入TD之后又键入了文件名，则TD就将指定的文件装入以供调试；如果不指定文如果在键入TD之后又键入了文件名，则TD就将指定的文件装入以供调试；如果不指定文件名，则可以在TD的菜单操作方式下取出文件，然后进入调试状态。 2．窗口功能和操作 进入TD调试软件后，屏幕上出现五个窗口，系统现场信息分别显示在各窗口内。如上图所示。图中，第一行为菜单信息，最后一行为热键信息，中间即为

窗口信息。 窗口由五部分组成，利用Tab键可在各窗口之间进行切换。 ⑴CPU窗口： CPU窗口分别显示段地址寄存器cs、偏移地址、十六进制机器码和源程序代码。“?” 对应的偏移地址表示当前PC指针位置；用“↑”“↓”键移动光标可以使窗口上下卷动以便观察前、后的程序代码信息及地址信息； ⑵寄存器（Registers）窗口： 寄存器窗口显示所有寄存器信息。用“↑”“↓”键移动光标可以选中任一个寄存器。 选中寄存器后按数字键即会弹出一个窗口： 窗口提示输入数据。此时在光标位置处输入数字就改变了该寄存器的数值； ⑶标志窗口： 标志窗口显示各标志位的当前状态。用“↑”“↓”键移动光标选中某一标志后，按回车键即可改变该标志状态； ⑷堆栈窗口： 堆栈窗口显示堆栈寄存器ss的信息，包括堆栈偏移地址和堆栈数据。“?”对应的偏移地址表示当前堆栈指针位置；用“↑”“↓”键移动光标可以选择堆栈指针位置，然后按数字键即会弹出一个窗口： 窗口提示输入字数据。此时在光标处输入数字就改变了该偏移地址的数值； ⑸内存数据（Dump）窗口： Dump窗口分别显示数据寄存器ds、偏移地址、字节数据和ASCII代码。用“↑”“↓”“→”“←”键移动光标可以选择某一内存地址，然后按数字键会弹出一个窗口： 窗口提示输入一个字节数据。此时在光标处输入数字就改变了该内存地址的数值。 3．菜单操作与热键操作

细胞凋亡试剂盒(FITC)

凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 （Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit） Cat number：KGA For Research Use Only Store at4℃for one year Expire date： 一、试剂盒说明 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。 二、试剂盒组份 组份Cat: KGA105 (10 assays) Cat: KGA106 (20 assays) Cat: KGA107 (50 assays) Cat: KGA108 (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光 Propidium Iodide 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光 Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃ 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液 四、使用注意事项 1．微量试剂取用前请离心集液。 2．Annexin V-FITC，Propidium Iodide （PI）避光保存及使用。 3．Propidium Iodide （PI）有毒，操作时要戴手套。 4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。 5．推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS中，防止进一步的损伤。 6．细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。 7．因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 五、操作方法 1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性）； 2．用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；

(整理)微波调试软件使用说明

D O C N O.:M A001 VER:5.0.0.0 2007-11

目录 一、系统构成 (3) 二、安装与卸载 (3) 三、图示方法 (3) 1、红点 (3) 2、绿点 (3) 3、蓝点 (4) 4、坐标 (4) 四、操作说明 (4) 1、SYSTEM(系统) (4) 2、DATA（数据） (5) 3、PARAMETER SET（参数设置） (5) 4、OPERATION（操作） (6) 5、INFORMATION(工程信息) (8) 五、调试方法 (9) A、数据显示部分 (9) B、参数设置部分 (10) C、调试过程 (10)

一、系统构成 系统由一个EXE文件构成，打开系统时会自动建立Log和Project 目录。Log用于保存日志时的默认路径，Project用于保存工程文件 时的默认路径。 系统同时支持整体式和分体式的微波调试。 二、安装与卸载 本系统不需要安装，是绿色软件，直接复制MW Analyzer.exe即可。 卸载时直接删除MW Analyzer.exe和自动生成的Log和Project目录 即可。 三、图示方法 1、红点 红点是按F的当前值为横坐标，U的当前值为纵坐标画出的点，“” 表示最近一次红点的位置。 2、绿点 绿点是按F的平均值（30次）为横坐标，U的平均值（30次）为纵 坐标画出的点，“”表示最近一次绿点的位置。只有当F的当前值与 平均值之差小于5时才打印出绿点。

3、蓝点 在画板上单击左键即可，同时会把当前的坐标显示到OPERATION 中的X，Y中。也可以输入X，Y的值，点击画蓝点。 4、坐标 坐标是按F、U的真实值显示出来，默认的坐标范围是F:0430H-082FH，U:0640H-0A40H，如果显示的坐标不在此范围内时时,请单击按钮,系统自动按当前的F和U的值为中 心点输入到中,你也可以手动输入此值。设定好中心 点的值以后，单击按钮确认以后，系统即会重新设定起始坐标。 鼠标右键可以在当前位置上显示坐标虚线，便于查看坐标。 四、操作说明 1、SYSTEM(系统) OPEN（打开） CLOSE（关闭） EXIT(退出系统)

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(PI法)

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(PI法) 产品简介： Leagene细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一种采用经典的碘化丙啶染色(PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中与直接和的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被Propidium Iodide染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。 碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。 细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征，根据光散射的特点，PI染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。细胞凋亡时，出现凋亡细胞皱缩、染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的前向光散射低于正常。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。细胞坏死时细胞多表现为细胞肿胀，因此前向光散射高于正常，对侧向光散射高于正常。 Leagene Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。 主要成分：

翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书

罗氏 (Roche)公司 Tunel 试剂盒操作说明书 (In situ cell death detection kit-POD法) 一、原理： TUNEL （TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒 是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA 的断裂情况。其 原理是荧光素（ fluorescein）标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移 酶（ TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的 3’-OH 末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与 HRP 底物二氨基联苯胺（DAB ） 反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的 细胞几乎没有 DNA 断裂，因而没有 3‘-OH 形成，很少能够被染色。本 试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细 胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗 肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。 二、器材与试剂 器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱 布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试 剂：试剂盒含： 1 号（蓝盖） Enzyme Solution 酶溶液： TdT 10×、

2号（紫盖） Label Solution 标记液：荧光素标记的 dUTP 1×、 3号（棕瓶） Converter-POD:标记荧光素抗体的 HRP； 自备试剂： PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、 70%）、 DAB 工作液（临用前配制， 5 μl 20 ×DAB+1 μL 30%H2O2+94 μl PBS）、 Proteinase K工作液（ 10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl ，pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 溶于 0.1% 柠檬酸钠，临用前配制）、 苏木素或甲基绿、 DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl ， pH 7.5， 10 mM MgCl2 ，1 mg/ml BSA ）等。 三、实验步骤 操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL 反 应液→加 converter-POD→与底物 DAB 反应显色→光学显微镜计数并拍照。 具体操作步骤（石蜡包埋切片的检测）： 1.用二甲苯浸洗 2 次，每次 5min； 2.用梯度乙醇（ 100、95、90、80、70%）各浸洗 1 次，每次 3min；注：上面两步是针对石蜡切片样本的处理 4.用 Proteinase K工作液处理组织 15-30 min 在 21–37°C（温度、时间、浓度均需摸索）如果凋亡细胞染色较弱时，可用高浓度的