免疫学实验整理
免疫学实验整理
一、凝集试验、吞噬试验
（一）凝集试验
1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）
2、间接凝集反应（类风湿因子测定）
3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验
（二）吞噬试验（示教）
1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）
2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
名解：
1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.
实验及注意点：
1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）
检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
凝集时红细胞凝集成块。
3、间接凝集反应（类风湿因子测定）：人丙种球蛋白吸附在红细胞上成为致敏红细胞，再
用致敏红细胞检测类风湿关节炎患者血清中的类风湿因子（抗变性IgG抗体）。此实验中以“++”的血清最高稀释度作为试验效价，效价>1:40则阳性。
4、金黄色葡萄球菌协同凝集试验：
5、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）；巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
6、吞噬百分率=（吞噬的中性粒细胞数）/（观察记录的中性粒总数（100））×100%
7、吞噬指数=（被吞噬的细菌总数）/（观察记录的吞噬细胞总数（100））【书上和老师课
件上有出入，此为书上版】
二、沉淀试验、溶血反应
（一）沉淀反应
1、单向琼脂扩散试验（示教）
2、双向琼脂扩散试验
3、对流免疫电泳试验
（二）补体参与的免疫反应
1、溶血反应
2、补体结合试验（原理）
名解：
1.沉淀反应（precipitation）：可溶性抗原如血清、毒素、细菌浸出液等与相应抗体结合，当两者比例合适、并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线，称为沉淀反应。单项琼脂扩散实验（未做）：定量实验。将一定量抗体和琼脂混合倾注于玻璃板上，凝固后在琼脂层中打孔，再将抗原加入孔中。孔中抗原向四周扩散，在抗原与抗体比例合适处呈现
白色沉淀环，沉淀环直径大小与抗原浓度成正比。
2.双向琼脂扩散实验：定性或半定量实验。将可溶性抗原和抗体分别加入到琼脂板相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原与抗体相对应，则在两者比例合适处形成白色沉淀线。根据沉淀线位置、形状等可对抗原或抗体做出定性分析。
3.对流免疫电泳：蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体在碱性缓冲液中只带微弱的负电荷，而且其分子量较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极移动，这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线。这种将双向琼脂扩散和电泳技术结合在一起的方法称为对流免疫电泳。由于抗原、抗体在电场中定向移动，限制了抗原抗体的多向自由扩散，加快了抗原抗体的移动速度，因而提高了试验的敏感度，同时也缩短了试验时间，故可用于快速诊断。
4.电渗作用：电渗是在电场中液体对于固体支持物的相对移动。由于琼脂中SO42-带负电荷，其周围的水就带正电荷，向负极移动，这种现象称电渗作用，水向负极移动产生的力为电渗力。因此在电泳的时候既有电泳力，又有电渗力。电渗力会加快带正电的物质向负极移动，但是会拮抗带负电物质向正极移动，甚至使其反而向负极移动。
5.溶血反应：将红细胞多次注射于动物（如将绵羊红细胞多次免疫家兔）可使之产生相应的抗体（溶血素），这种抗体与红细胞结合，在有电解质存在时可发生凝集现象，若同时有补体存在，则补体被激活，红细胞被破坏溶解，这种现象称为溶血反应。
6.补体结合试验：有一种补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。（未做试验，熟悉原理）
实验及注意点：
1.双向扩散时沉淀线的几种情况：
（1）抗原与抗体浓度相等，沉淀线在两孔之间呈直线
（2）有一方浓度低则沉淀线靠近浓度低的一方（扩散慢）
（3）在三角形孔中若两孔内抗原相同，与同一相应抗体反应，则两沉淀顶端相联；若两孔内抗原不同，与两种相应抗体反应，则两沉淀线相交；若两孔内抗原除有相同成分外又有不同成分，抗体孔内有各相应的抗体，则形成的沉淀线相切。
2.溶血实验（图表见书）：
（1）红细胞溶解时细胞浑浊液体变红色透明。红细胞、溶血素、补体存在时可以发生溶血。（2）红细胞和溶血素，不溶血，离心后剩余沉淀物再加入补体，发生溶血，说明溶血素可以与红细胞结合，进而在补体存在条件下发生溶血。
（3）红细胞和补体，不溶血，离心后剩余沉淀再加入溶血素，还是不溶血，说明补体不能结合红细胞。
三、免疫标记技术、细胞免疫功能测定、豚鼠过敏试验
（一）免疫标记技术
1、酶联免疫吸附试验（双抗体夹心法）
2、斑点免疫层析试验
（二）免疫细胞功能测定
1、E玫瑰花环试验（示教）
2、淋巴细胞转化试验（示教）
（三）豚鼠过敏试验（录像）
免疫标记技术
1.原理：酶免疫技术是一种把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用结合起来的方法。将酶与抗体或抗原用交联剂连接起来，此种酶标记抗体或抗原可与组织内的或固相载体上的相应抗原或抗体发生特异性反应，加入相应的酶底物时，底物被酶催化生成有色产物，根据成色深浅判定待测抗原或抗体的浓度与活性。
酶免疫技术可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定两类，前者用于组织切片上抗原
的定性和定位。后者用于标本中抗原或抗体的测定，最常用的方法是酶联免疫吸附试验。2.酶联免疫吸附试验（ELISA）现象：
从左向右看，反应孔1、2（加入样本）和反应孔3、4（加入阳性对照）均呈棕黄色，而反应孔5、6（加入阴性对照）呈无色。
3．结论：试验结果为阳性，待检标本中含有乙肝病毒表面抗原。
斑点免疫层析试验（DICA）
1.原理：斑点免疫层析试验以硝酸纤维素膜为载体，将多个试剂组合在一个约6mm*70mm 的试纸条上，成为单一试剂条，试剂条上端（A）和下端（B）分别为粘贴吸水材料，金标抗体干片粘贴在近下端（C）处，紧贴其上为硝酸纤维膜条。硝酸纤维膜条上有两个反应区域，测试区（T）包被有特异抗体，参照区（R）包被有抗小鼠IgG。测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经C处时使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向膜条移动。若标本中有待测特异性抗原，则与免疫复合物之抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体所捕获，在膜上显出红色反应线条（T）。过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠IgG结合（免疫金复合物中的单克隆抗体为小鼠IgG），而显出红色质控线条（R）。反之，阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
2.现象：
上图中上纸条为一条红线，下纸条出现两条红线。
3.结论：一条红线为阴性结果，说明待测液体中无HCG，而两条红线为阳性结果，说明待测液体中有HCG。
E玫瑰花环试验
1.原理：人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞（SRBC）受体，在体外一定条件下，当T 细胞与SRBC结合时，可形成以T细胞为中心，四周环绕SRBC的花环。E花环的形成是T细胞独特的标志。E花环形成试验最常用的是总E花环试验和活性E花环试验。总E花环试验代表被检标本中T淋巴细胞的总数和百分率；而活性E花环试验反映的是对SRBC具有高度亲和力的T淋巴细胞亚群，该亚群T细胞与T细胞的体内外功能活性有密切关系，在一定程度上反映机体细胞免疫功能的状态。
2.现象：可见以T淋巴细胞为中心，四周环绕SRBC的花环。
淋巴细胞转化试验
1．原理：将人外周血或分离的淋巴细胞与PHA共同培养一定时间后，取培养细胞涂片染色，镜下计数转化的淋巴母细胞数，计算其转化率，转化率高低可反映人体细胞免疫功能的水平。
2.现象：
可见淋巴母细胞：体积明显增大，核膜清晰，胞核增大，多偏一侧，核染色质疏松呈细网状。胞浆丰富，嗜碱性，有伪足样突出，有时可见小空泡。
核分裂相细胞：可见有丝分裂，可见许多对成堆或散在的染色体。
过渡型淋巴细胞：具有淋巴母细胞的某些特征。核质疏松，可见核仁，胞浆增多，嗜碱性强。
豚鼠过敏试验（属Ⅰ型超敏反应，也称速发型超敏反应）
四、小鼠脾NK细胞活性测定（MTT比色法）
1.实验原理：
将NK细胞和靶细胞共同培养，NK细胞可杀伤靶细胞，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶使外源性黄色的MTT还原成蓝紫色的Formazan结晶，并沉积在细胞里。而死细胞无此功能，通过比色检测可以检测培养物中活细胞的数量，从而计算NK细胞杀伤靶细胞的能力。
2.实验方法：
2.1 NK细胞制备：小鼠脾细胞分离
（1）脱臼法处死小鼠，酒精棉球消毒皮肤，取脾，放入滤网，置于平皿中，在滤网脾脏处加入3ml Hanks液;
（2）用试管底部碾磨脾脏，制成脾细胞悬液，200目滤网制成单细胞悬液;
离心（1500转/分5min），弃去上清;
（3）加入Hanks液3ml ，重悬细胞，1500转/分5min，去上清，加入1ml 1640培养液，混匀细胞；
（3）细胞计数：取细胞悬液20微升，加到含有780微升白细胞稀释液的Eppendorf管中，混匀，取适量细胞悬液（约15ul），加入计数板中。在显微镜下计数，计算细胞数量。（4）根据细胞数量，用1640完全培养基配成2×106/ml浓度的细胞悬液。
2.2 靶细胞的制备：
取对数生长期YAC-1细胞，Hanks液洗涤2次，计数，调整至2×105/ml。
2.3 细胞毒试验（96培养板）：每组做3个复孔
2.4 孵育：
二氧化碳培养箱孵育2小时；加10μl MTT，继续孵育2小时。
2.5 测OD值：
吸取上清约150ul，加150μl 二甲亚砜，振荡10min，测OD值。
3.实验结果：
注：前两次实验根据书本整理，后两次主要为实验报告。大家凑合着看吧，若有差错欢迎指正~祝满绩！
免疫学实验指导
实验一免疫球蛋白的粗提（盐析法） 一、实验目的 1、学习免疫球蛋白的粗提方法 2、实践IgG分离纯化过程 3、了解分离纯化抗体的原理 二、实验原理 随着免疫学的发展和需要，免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多，有单一法，常用盐析法、凝胶柱层析、离子交换剂层析以及免疫亲和层析等技术对血清抗体进行分离纯化。但大多数采用二步法以上相结合的方法，特别是以硫酸铵提纯为基础，再经过透析或层析柱的方法来提高免疫球蛋白及其各成分的纯度最为常用。硫酸铵溶液能使蛋白质胶体脱水并中和其电荷而使之沉淀下来（称为盐析）。不同浓度的硫酸铵盐析蛋白成分不同，利用这一原理提取所需的免疫球蛋白成分。盐析只能粗提，为了获得纯化的免疫球蛋白成分，必须进一步采用层析的方法进行分离。 水膜与同性电荷的排斥作用是蛋白质胶体稳定的基础，在蛋白质胶体溶液中加入一定量的（NH4）2SO4或Na2SO4盐类，使溶液中大部分自由水分子转变为离子水化分子，降低蛋白质极性基团与水分子的相互作用，破坏蛋白质水膜，蛋白质溶解度也随之降低。蛋白质由于分子质量和携带的电荷不同，可在不同浓度的高盐溶液内分级析出。33% （NH4）2SO4为沉淀IgG的最适饱和度。
二、实验材料与试剂配制 1．人全血清（购买商品） 2．硫酸铵饱和溶液 硫酸铵800g~850g H2O 1 000ml 加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH4OH 调pH至7.0（不调pH值也可以）。 注：硫酸铵以质量优者为佳，因次品中含有少量重金属对蛋白质巯基有影响。如次品必须除去重金属，可在溶液中通入H2S，静置过夜后滤过，加热蒸发H2S即可。 3．0.01Mol/L pH7.4 PBS液 A液：0.10Mol/L NaH2PO4液 NaH2PO4·2H2O 15.60g
医学免疫学实验教学大纲
《医学免疫学》实验教学大纲 实验名称：医学免疫学 学时：6学时 学分： 适应专业：护理学专业 执笔人：边藏丽 审定人：王恺兵 一、实验目的与任务 实验教学是医学免疫学教学的重要组成部分，通过实验教学加深对基础理论知识的理解，了解常用的免疫学检查方法，掌握免疫学基本实验技术（试管凝集、玻片凝集、对流免疫电泳、免疫细胞形态观察、淋巴细胞分离、ELISA等），培养学生严谨求实的科学态度以及观察、分析、综合能力、创造思维能力和初步的科研能力。 二、教学基本要求 医学免疫学实验对象多为具有传染性的材料，要求学生在实验教学中严格遵守实验室规则，牢固树立无菌观念，认真操作与观察实验结果，实事求是的记录实验结果，并对实验结果进行认真分析和讨论。 四、实验教学内容及学时分配 实验一凝集反应（试管凝集、玻片凝集） 3学时 1．目的要求 掌握体外抗原抗体反应的特点和影响因素；掌握凝集反应原理、方法和用途。 2．方法原理 颗粒性抗原与相应抗体在一定条件下特异性结合而出现肉眼可见的凝集现象。 3．主要实验仪器及材料 试管、玻片、水浴箱、吸管、伤寒杆菌“H”“O”诊断菌液、大肠埃希菌、大肠埃希菌
诊断血清等。 4．掌握要点 掌握凝集反应原理、方法和用途；血清效价；凝集现象的观察。 5．实验内容： （1）玻片凝集（抗原定性试验） （2）试管凝集（抗体定量试验） 实验二对流免疫电泳、血型鉴定 2学时1．目的要求 掌握沉淀的反应原理、方法和用途；了解对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；掌握血型鉴定的反应原理、方法及结果判断。 2．方法原理 对流免疫电泳是将经典沉淀反应与电泳技术结合而设计的一项实验。沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在一定条件下发生结合并出现肉眼可见的沉淀物的一种血清学反应。 带电的胶体颗粒可在电场中移动，其移动方向与胶体颗粒所带电荷有关。抗原在的缓冲带负电荷，将抗原加于琼脂板阴极端的小孔中，由阴极向阳极移动；抗体为球蛋因电渗作用而流向阴极。当抗原抗体在两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白色沉淀线。此种在双向琼指扩散基础上加电泳的方法，称为对流免疫电泳。 血型鉴定属直接凝集反应。将已知标准抗A和抗B血型抗体分别与待测红细胞混合。如果抗原与抗体相对应，则引起红细胞凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断血型。 3．主要实验仪器及材料 标准的抗A和抗B单克隆抗体（抗A为蓝色，抗B为黄色）、酒精棉球、采血针、载玻片、待测血清、甲胎蛋白诊断血清，肝癌病人阳性血清， L巴比妥缓冲液，琼脂对流免疫板、打孔器、加样器、电泳仪等。 4．掌握要点 （1）对流免疫电泳的操作步骤，结果观察； （2）血型鉴定的方法及结果判断。 5．实验内容： （1）讲述沉淀的反应原理、方法和用途；对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；血型鉴定的反应原理、方法及结果判断； （2）对流免疫电泳的操作及结果观察； （3）血型鉴定的操作及结果观察； 实验三小鼠吞噬细胞及转化细胞形态观察 2学时 1.目的要求 观察吞噬细胞的吞噬现象；了解机体的非特异性免疫功能。观察转化细胞、淋巴母细胞的形态了解机体的特异性免疫功能。 2．方法原理 巨噬细胞可吞噬异种或异体细胞等体积较大的异物，中性粒细胞可吞噬多种细菌。观察这两类细胞的吞噬现象，可计算出吞噬异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数，用以评价机体的免疫状态。 淋巴细胞，在受抗原的刺激后，可转化为淋巴母细胞，淋巴细胞转化率的高低可反映机体细胞免疫水平。
(完整版)临床免疫学检验知识点.doc
临床免疫学检验 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织 4、 B 细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、 Fc 受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟 B 细胞： CD19、CD20、 CD21、 CD22 （成熟 B 细胞的 mIg 主要为 mIgM和 mIgD）同时检测 CD5分子，可分为 B1 细胞和 B2 细胞。 B 细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T 细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是 CD3（多链糖蛋白）；辅助 T 细胞的标志是 CD4；杀伤 T 细胞的标志是 CD8； T 细胞受体 =TCR。 T 细胞和 NK细胞的共同表面标志是CD2（绵羊红细胞受体）； CD3＋ CD4＋CD8－ =辅助性T细胞（Th） CD3＋ CD4－CD8＋ =细胞毒性T 细胞（ Tc 或 CTL）（ T 细胞介导的细胞毒试验） CD4＋ CD25＋ =调节性T细胞（Tr或Treg） T 细胞功能检测：植物血凝素（ PHA）刀豆素（ CONA）刺激 T 细胞增殖。增殖试验有：形态 法、核素法。 T 细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E 花环试验是通过检测SRBC受体而对T 细胞进行计数的一种试验； 6、 NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞） 表面标志： CD16（ ADCC）、 CD56。 测定人 NK细胞活性的靶细胞多用K562 细胞株，而测定小鼠胞株。NK细胞活性则常采 用 YAC-1 细 7、吞噬细胞包括：单核 - 吞噬细胞系统（MPS，表面标志外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。CD14，包括骨髓内的前单核细胞、（表达 MHCⅡ类分子） 8、人成熟树突状细胞（DC）（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a、CD11c和CD83。 9、免疫球蛋白可分为分泌型（ sIg ，主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（ mIg，作为抗原受体表达于 B 细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序） 免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CH、CL） 12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和 VL（高变区）是抗原结合部位。
《医学免疫学与病原生物学》
《医学免疫学与病原生物学》 课程实验教学大纲 [适用对象]中医学（骨伤）、针灸推拿学专业 [实验学时] 9 学时 一、实验教学任务和目的 《微生物与免疫学实验》是与《微生物与免疫学》理论课程密切结合的一门重要的、非单独设课的医学专业基础实验课程。课程学习的目的是让学生掌握本课程基本技能操作，为学习基础医学有关课程和临床医学课程、为学生将来从事医药相关工作和科研工作奠定基础。 二、实验教学基本要求 （1）训练学生掌握微生物学与免疫学最基本的操作技能。 （2）加深理解课堂讲授的微生物学与免疫学理论。 （3）培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力。 （4）培养学生实事求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神。 (5)培养学生树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。 三、实验教学内容 实验一细菌的人工培养法 1、实验目的和要求 （1）掌握各种培养基接种技术。 （2）熟悉细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。 （3）了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。 2、实验内容 （1）分离培养法(平板划线法) （2）斜面培养基接种方法 （3）液体培养基接种法 （4）半固体培养基的接种法 （5）观察细菌在培养基上的生长情况：细菌各种培养物的示教；描述细菌
在各种培养基上的生长现象；观察大肠杆菌与痢疾杆菌在半固体培养基上的现象。 3、实验仪器 普通琼脂平板，普通琼脂斜面，半固体培养基，肉汤培养基，接种环，接种针，酒精灯，大肠杆菌24小时斜面培养物等。 4、实验学时 1学时 实验二细菌的分布及消毒与灭菌 1、实验目的和要求 掌握高压蒸气灭菌器的使用方法及注意事项；证实热力和紫外线的杀菌效果；证实常用消毒剂的消毒效果；证明细菌在自然界和正常人体的存在，为在医学实践中树立严格的“无菌观念”提供依据。 2、实验内容 （1）高压蒸气灭菌法 （2）干热灭菌器（干烤箱） （3）紫外线的杀菌实验 （4）热力对芽胞及繁殖体的作用 （5）药物敏感性试验 （6）化学消毒剂的杀菌的作用———手指皮肤消毒前后的细菌学检查 （7）空气中的细菌检查 （8）污水和净水中的细菌数检查 （9）皮肤表面的细菌检查 3、实验仪器 普通琼脂平板、1％高层琼脂，血琼脂平板，无菌试管，无菌吸管，无菌平皿，灭菌棉签，咽拭子，酒精灯等。 4、实验学时 2学时 实验三细菌形态与结构的检查法 1、实验目的和要求 (1)学会显微镜油镜的使用和保护方法。 (2)认识细菌的基本形态和特殊结构(荚膜、鞭毛、芽胞)。 (3)掌握革兰氏染色方法 (4)了解细菌的动力 2、实验内容 (1)显微镜油镜的使用 (2)观察细菌的形态结构 (3)动力试验 (4)革兰染色 3、实验仪器
临床免疫学检验 名词解释&重要知识点 (上)
抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。 抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。 亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。 亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。 抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。 带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。 免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。 半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。 载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。 载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。 单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。 多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~ 基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。 杂交瘤技术 【原理】以聚乙二醇（PEG）为细胞融合剂，使免疫后能产生抗体的小鼠脾细胞与能在体外长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，通过次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷（HAT）选择性培养基的作用，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养（克隆化），最终获得机能产生所需单克隆抗体又能长期体外繁殖的杂交瘤细胞系。将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，可从小鼠腹水中得到高效价的单克隆抗体。（一）小鼠骨髓瘤细胞 理想骨髓瘤细胞的条件：①细胞株稳定，易于传代培养；②细胞株本身不产生免疫球蛋白或细胞因子；③该细胞是HGPRT或TK的缺陷株；④能与B细胞融合成稳定的杂交瘤细胞； ⑤融合率高。 目前最常用的是NS-1和SP2/O细胞株 （二）免疫脾细胞
医学免疫学实验设计例子
《医学免疫学》实验设计 期别:xxx 班级:xx 学号:xxxxxxxx 姓名:OOO IL-35对小鼠Ⅰ型糖尿病的治疗效果及免疫机制 【立题依据】 自身免疫性疾病(Autoimmune diseases)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。如今越来越多的自身免疫性疾病被不断发现和认识,也越来越引起人们的关注。Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员,在全球大约有2000万患者,中国至少有100万的患者,但是Ⅰ型糖尿病常常在幼儿和青少年时期发生且为一种多基因遗传病有较高的遗传度(75%),表现为明显的家族遗传性。同时,Ⅰ型糖尿病患者如治疗不善将引发严重的并发症,如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。因此如果能正确了解Ⅰ型糖尿病的免疫学机制,并探索更加有效治疗及预防方案,对于患者本身乃至整个家族的身体和生活质量的提高意义重大。 Ⅰ型糖尿病的免疫学发病机制是体内除了抗原提呈细胞(APC)和活化的T淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子,研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ,由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子,这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击,使其丧失胰岛素分泌活性,最终导致体内胰岛素缺乏。调节性T细胞(Treg)是一些CD4+T cell还可高表达IL-2受体的α链(CD25)分子,胞质中表达Foxp3转录因子的T细胞分化亚群。它的主要功能是通过抑制CD4+ Tcell 和CD8+ Tcell的活化与增殖从而达到免疫的负调节作用。通过协调Treg水平来调节Ⅰ型糖尿病患者的免疫功能可能成为新的治疗手段。 白细胞介素-35(IL-35)是2007年新发现的一种独特的具有免疫抑制功能的调节因子,属于IL—12细胞因子家族,IL-35为异源二聚,主要由活化的Treg分泌,对
微生物免疫学实验报告
1实验内容： 2显微镜油镜的使用与保护。 3细菌的形态与结构的观察。 4实验目的： 5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。 6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。 7熟悉细菌的特殊结构。 8实验材料： 显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。 4实验方法： (1)显微镜油镜的使用与保护 显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的 工具。因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。 1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。 2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。 3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。 ⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。 ⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。 4、显微镜的保护： ⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。 ⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。 ⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。置于干燥处，以防受潮。 (二)细菌形态观察
1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌 2、细菌的特殊结构： 荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌 鞭毛：水弧菌（周毛菌） 芽胞：破伤风杆菌（芽胞位于菌体顶端，呈鼓槌状）
研究生临床免疫学知识点总结
一、病毒性心肌炎的免疫学发病机制 病毒在心肌细胞内复制、繁殖导致心肌细胞溶解，由此引发一系列免疫反应，分两期 急性期-病毒对心肌的直接损伤作用，病毒进入机体后在宿主心肌细胞内大量繁殖、增殖，释放病毒及产生溶细胞物质，直接导致心肌细胞的死亡和代谢功能的丧失 慢性期-病毒感染第二周开始，变性、坏死心肌周围炎性细胞浸润、B淋巴细胞介导的体液免疫、T淋巴细胞介导的细胞免疫和细胞因子的作用使心肌细胞进一步受损 1、巨噬细胞和NK细胞作用 抗病毒作用：可直接灭后病毒，通过ADCC作用清除病毒 损伤心肌作用：溶解吞噬病毒感染的心肌细胞，通过释放细胞因子增强细胞毒性T淋巴细胞导致心肌细胞受损 2、抗体作用： （1）病毒抗体-病毒特异性抗体（早期，针对机体产生特异性IgM抗体。后期有病毒特异性IgG抗体出现）病毒中和抗体（病毒心肌炎可持续性存在） 病毒抗体可以出现双重作用：抗病毒作用，早期抗体与病毒结合，阻断病毒在心肌内扩散或从外周进入心肌，减轻病毒对心肌的损害。 损伤心肌的作用：病毒蛋白与心肌细胞某些成分有相同抗原位点，所以病毒抗体可与心肌细胞结合引起心肌细胞损伤 （2）自身抗体的作用-损伤的心肌细胞内自身抗原释放，浸润心肌的巨噬细胞等APC将其摄取并加工处理后，递给B淋巴细胞，产生心脏反应性自身抗体，引起心肌细胞损伤。 3、TC作用： 病毒入侵机体，经过APC摄取加工处理，递给T细胞，后者活化致敏，病毒再次入侵机体，致敏的T淋巴细胞增殖分化成效应T细胞，TDTH释放细胞因子吸引单核细胞进入抗原存在部位吞噬抗原释放炎症介质，损伤心肌细胞；CTL释放毒性蛋白（穿孔素、颗粒酶）导致心肌细胞溶解、 4、细胞因子的作用： IFN-浸润的心肌炎症细胞释放IFN、在病毒性心肌炎早期有抗病毒作用 TNF-由浸润心肌的巨噬细胞和T细胞分泌，是病毒性心肌炎发病机制中致心肌损伤的重要因素之一。 5、其他细胞因子 巨噬细胞炎性蛋白，IL-2 二、肿瘤抗原的分类及其特征。 1.根据肿瘤抗原特异性分类：a.肿瘤特异性抗原-仅表达于肿瘤细胞表面而不存在于正常组织细胞的抗原，此类抗原是通过动物肿瘤移植排斥实验所证明，故又称肿瘤特异性移植抗原。 b.肿瘤相关性抗原-并非肿瘤细胞所特有的，正常组织或细胞也可表达的抗原物质，但其含量在细胞癌变时明显增高，此类抗原仅表现为量的变化，无严格的肿瘤特异性 2.根据肿瘤抗原产生的机制分类： a.理化因素诱生肿瘤抗原-化学致癌剂或者物理致癌因素可引起基因突变或者潜伏的致癌病毒诱发的肿瘤，并且表达新抗原，此类抗原的特点是特异性强，免疫性弱，有明显个体特异性。 b.病毒诱生的肿瘤抗原-某些的肿瘤发生与病毒感染有关，致癌的病毒基因可以整合到宿主细胞基因组中，从而诱发细胞癌变。同一种病毒诱发的不同类型的肿瘤，均可表达相同的抗原，且具有较强的免疫原性。此类肿瘤抗原虽然由病毒基因编码，但与病毒本身的抗原不同，又称病毒相关的肿瘤抗原 c.自发性肿瘤抗原-突变的基因产物（自发性肿瘤表面所表达肿瘤特异性抗原，大部分可能为基因突变所致，基因突变诱因不详；
免疫学实验报告
免疫实验—抗血清制备及抗体效价检测 摘要：用具有抗原性的物质牛血清白蛋白（BSA)注入到健康动物例如鼠、兔的 机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。抗血清，是指含有免疫蛋白的血清。抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。此次实验主要是进行小鼠的牛血清白蛋白（BSA)抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验（ELISA）对其进行抗体效价检测。 关键字：牛血清白蛋白（BSA) 抗血清抗体效价免疫 实验过程： 本次实验一共分为三个分实验： 实验一：免疫 实验二：抽血、放血，分离抗血清 实验三：ELISA测定抗体效价 实验一：免疫 一、抗血清制备的原理 用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。二、目的 制备高效价的抗血清 三、实验仪器、材料和试剂 实验仪器：1mL 注射器，酒精棉球，剪刀 材料：家兔，小鼠 试剂：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸，牛血清白蛋白（BSA) 三、方法和步骤 1、动物编号 左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右侧从前至后依次为7、8、9。红色表示十位数,用黄色表示个位数。免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。
如下图所示抓取目标动物 家兔为300～600 μg/次（400），每次不超过2mL；小鼠为10～100 μg /次（10-20，20~40 μg / ml），每次不超过0.5mL。 小鼠腹腔注射 以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推 0.5～1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液， 为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。
免疫学实验61977
实验四免疫学实验 一、机体体液免疫功能测定 （一）凝集反应 【目的】 了解玻片凝集试验、试管凝集试验及胶乳间接凝集抑制试验的操作过程、结果分析和实际应用。 【原理】 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在一定电解质存在的条件下发生特异性结合并出现肉眼可见的凝集块的现象称为凝集反应。凝集反应既可用已知抗体检查和鉴定未知的抗原(如鉴定细菌)，也可用已知抗原检查血清中相应的抗体；既可用作定性检测，又可用于定量检测。 凝集反应分两种。一种是颗粒性抗原与抗体直接结合出现的凝集现象，称为直接凝集反应；另一种是将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的载休颗粒表面，再与相应的抗体结合而出现的凝集反应，称为间接凝集反应。如将抗体吸附于载体颗粒表面，再与相应的抗原结合而出现的凝集反应则称为反向间接凝集反应。 1、玻片凝集反应 【材料】 伤寒诊断血清、伤寒沙门菌及大肠埃希菌培养物、载玻片、生理盐水等。 【方法】 ①取载玻片1张，左侧加生理盐水1滴，中间及右侧各加伤寒诊断血清1滴； ②用接种环取伤寒沙门菌培养物少许，分别与盐水及中间的伤寒诊断血清混匀。同法取大肠埃希菌培养物与右侧伤寒诊断血清混匀； ③轻轻摇动玻片1～2min后，观察结果； ④观察后，将玻片直接投入消毒缸，不要冲洗，以防污染。 【结果】 出现凝集物者为阳性反应，均匀混浊无凝集物 者为阴性反应。 【注意事项】 玻片凝集反应 ①用接种环取一种试剂前后均需进行烧灼，不可有杂菌污染以及前一试剂残留。 ②用接种环取细菌时应先烧灼灭菌，待冷却后方可挑取细菌。 ③用接种环加细菌于血清中后，应先烧灼接种环，再取细菌加入另一血清中。 【结果分析】 左： 中：
医学免疫学教案
第1次课教学整体设计
、课堂训练内容安排 （1）案例； （2）通过图片思考、根据情境设计展开讨论分析； （3）问题探讨，总结归纳； （4）培养学生创新思维。 三、课后作业与思考题：（根据课程内容适当设计巩固性作业、项目式作业、预习性作业、推荐参考书及网站） （1）项目式作业： 每小组针对每种类型超敏反应至少写出两种疾病和对应的治疗方案、护理注意事项（2）预习性作业： 案例角色扮演 教学后记:
教学过程（教学设计实施步骤及时间分配） 步骤1：师生互问好，考勤（3 分钟） 步骤2：复习，提问（4 分钟） 步骤3：图片展示，案例，学生分析（8 分钟） 步骤4：教师对知识点进行集中总结 一、概念 机体接受某些抗原刺激后，再次接触相同抗原时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。 二、类型 I型超敏反应：速发型 U型超敏反应：细胞毒型、细胞溶解型 川型超敏反应：免疫复合物型、血管炎型 W型超敏反应：迟发型 （一）1型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 过敏性休克：某男孩，15 岁，急性扁桃体炎，青霉素治疗。皮试为弱阳性，护士误作阴性处理，给患者静脉滴注青霉素，约半分钟后，患者出现胸闷、气急、呼吸困难，随即抽搐、昏迷、抢救不及而死亡。（时间短、症状重）步骤5：学生分析，回答（5 分钟） 2、常见疾病 过敏性鼻炎、荨麻疹、湿疹、哮喘、消化道上吐下泻等 3、变应原接触/吸入性变应原：花粉、室尘、动物皮毛等 食物变应原：鱼、虾、蛋、牛奶、海产品等药物：青霉素、异种免疫血清（TAT、普鲁卡因、VitB等 步骤6：视频播放（5 分钟）
（二）n型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 某产妇27岁，血型RH-,产下的RH+女婴浑身多处瘀斑，2天后死亡。诊断死于新生儿溶血症。 新生儿溶血的机制 步骤7：学生分析（5 分钟、 2、常见疾病 输血反应、新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血、药物过敏性血细胞减少症、甲状腺功能亢进症 （三）川型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 某男8岁，因患白喉大量注射动物免疫血清，1 -2周后局部红肿、淋巴结肿大、皮肤出现皮疹、 发痒、面部及眼睑浮肿、关节疼痛、肾小球肾炎、尿中出现蛋白。为什么 步骤8：学生分析（5 分钟、 2、常见疾病 局部免疫复合物病、全身性免疫复合物病 （四）W型超敏反应（5分钟） 1 、案例分析 高校新生入学后，以0T试验普查对结核病免疫力。 1 、常见疾病 传染性迟发型超敏反应性疾病、接触性皮炎、同种异型移植排斥反应3、特点 （1 ）发生较慢，常需24?72小时; （2）无抗体和补体参与。 （3）炎症反应与效应T 细胞和吞噬细胞及其产生的细胞因子或细胞毒性介质有关步骤9：临床案例，小组分析，讨论（10 分钟）
免疫学实验整理
免疫学实验整理 一、凝集试验、吞噬试验 （一）凝集试验 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 （二）吞噬试验（示教） 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬） 名解： 1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。 2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。 3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。 4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。 5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。 6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer. 实验及注意点： 1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原） 检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
实验五 凝集反应—医学免疫学实验指导
医学免疫学实验指导 实验五凝集反应 由长沙达尔锋生物科技有限公司整理
【文章介绍】 实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。 BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。 【实验目的】 1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。 2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。 【实验用品】 1. 材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。 2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。 【内容和方法】 一、玻片凝集试验(slide agglutination) 1.原理 玻片凝集试验(slide agglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。 2.方法 （1）取载玻片一张（平置实验台上），用特种铅笔或记号笔划分为3格，并标明1、2、3。 （2）取巴氏吸管一支，套上乳胶皮头后，吸取1:10 稀释的伤寒杆菌诊断血清1～2 滴于第1、2 格内，另取巴氏吸管一支，吸取生理盐水1～2 滴于第3格内。 （3）将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后取少许伤寒杆菌菌培养物与第1、3格内的诊断血清、生理盐水混合并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法取少许大肠杆菌培养物与第2格内的的诊断血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。 3.结果观察与判定
《医学免疫学》教学大纲
《医学免疫学》教学大纲 课程编号：03100030 课程名称：医学免疫学（） 学分：2.5学分 总学时：45学时 理论学时：27学时 实验学时：18学时 先修课程：生物学、生物化学、生理学、病理学 适应专业：临床医学五年制 使用教材： 1.曹雪涛.医学免疫学（第6版），人民卫生出版社，2013. 2.高劲松、吴高莉. 病原生物免疫学实验教程.北京大学医学出版社，2014. 参考教材： 1.曹雪涛、何维.医学免疫学（第3版），人民卫生出版社，2015. 2.郝素珍.医学免疫学，人民卫生出版社，2010. 3.司传平、丁剑冰.医学免疫学，高等教育出版社，201 4. 4.柳忠辉、吴雄文.医学免疫学实验技术，人民卫生出版社，2014. 一、课程在培养方案中的地位、目的和任务 免疫学是研究机体防御系统——免疫系统的组织结构和生理功能的科学，主要包括三部分。基础免疫学从基因、分子、细胞和整体等不同水平研究免疫系统的结构与功能；抗原的特性；及免疫系统对抗原应答的机制与规律。临床免疫学包括免疫病理学和临床疾病免疫学。免疫病理学主要研究在疾病条件下，免疫系统的变化及对抗原应答的规律。免疫学技术主要包括免疫学诊断、预防、治疗技术原理，以及免疫学实验原理与技术操作。 医学免疫学还广泛渗入到医学各个领域，形成了众多分支学科，成为指导医学实践的理论基础。因此，医学免疫学是医学教育中的一门主干课程，是医学生必修的医学基础课程。本课程的任务是，通过教学使学生掌握免疫学的基础理论，基本知识和基本技能，为学习其他基础医学课程及临床医学课程奠定基础。 二、课程基本要求 1.基础理论与基本知识 （1）免疫学概论
免疫学实验
实验一、免疫细胞的形态观察 一、实验目的 1、掌握微量采血及血涂片的制作方法。 2、在光学显微镜下观察免疫细胞。 二、实验原理 血涂片是临床化验中最常规的技术，也是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏（Wright）染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颜色大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。 三、实验器材 1、器材：医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片。 2、试剂：瑞氏（Wright）染液，瑞特氏染料0.1克溶于60mL甲醇中，过滤。贮藏褐色瓶中备用。（配制时，要先将瑞特氏染料置研钵内边研磨边滴加甲醇，使染料溶解的更好。） 四、实验步骤 1、采血 采血前用75%酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核细胞较多）。 2、涂片 挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以30~40度为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜（如图），推进时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀。
3、染色 待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴瑞氏染液盖满血膜为止，染色1~3min。然后滴加等量的缓冲液（pH6.4）或蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。 4、封片 经染色的涂片完全干燥后，用中性树胶保存。 5、观察 分别用低倍、高倍和油镜观察血涂片，分辨不同的血细胞类型。 五、实验结果 拍摄血细胞照片，标出并分析比较各种免疫细胞类型和形态特征。
临床免疫学与检验重要知识点汇总
免疫应答主要分为哪几个阶段？ 1)识别阶段 2)活化与增值阶段 3)免疫效应 中枢免疫器官与外周免疫器官有哪些器官组成？各有什么功能？ 1)中枢免疫器官:免疫细胞发生、分化、成熟得场所,如骨髓,胸腺2)外周免疫器官:免疫细胞产生应答得场所。如脾脏,淋巴结,黏膜,扁桃体等。 T细胞、B细胞与NK细胞得主要功能分别就是什么？ 1)T细胞: 介导细胞免疫,辅助体液免疫。2)B细胞: 产生体液免疫3)NK细胞:介导天然免疫,发挥细胞毒作用。 根据作用方式及其特点得不同,机体存在两类免疫简述各自得概念与特征？ 1)先天性免疫或固有性免疫,就是个体出生就是就具有得天然免疫,可通过遗传获得,就是机体在长期进化过程中逐渐建立起来得主要针对入侵病原体得天然防御功能。其主要特征就是反应迅速,针对外来异物得范围较广,不针对某个特定异物抗原,也称非特异性免疫。2)适应性免疫,就是个体出生后,接触到生活环境中得多种异物抗原,并在不断刺激中逐渐建立起来得后天免疫,也称获得性免疫。其主要特征就是针对某个特定得异物抗原而产生免疫应答,开始得应答过程比较缓慢,一旦建立清除该抗原得效率很高,特异性很强,也称特异性免疫。 简述抗原抗体反应得原理。 答:抗原与抗体能够特异性结合就是基于抗原表位与抗体超变区分子间得结构互补性与亲与性,这种特性就是由抗原、抗体分子空间构型所决定得,它们之间得结合就是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面得结合 简述抗原抗体反应得类型。 答:抗原抗体反应分为五种类型:①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生得凝集反应; ②可溶性抗原与相应抗体结合所产生得沉淀反应;③抗原抗体结合后激活补体所致得细胞溶解反应;④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致得中与反应;⑤免疫标记得抗原抗体反应等。 什么就是带现象? 答:在抗原抗体反应等价带前后,由于抗体或抗原过量(形成前带或后带),上清液中可测出游离得抗体或抗原,形成得沉淀物少,不出现可见反应,这种现象在做血清学试验时称为带现象。 影响抗原抗体反应得环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素? 答:环境条件包括:电解质,酸碱度与温度。稳定条件:①电解质:常用O.85％氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体得稀释液及反应液;②酸碱度:pH过高或过低都将影响抗原与抗体得理化性质,抗原抗体反应一般在pH为6～8时进行;③温度:一般以15, 40℃为宜,最佳反应温度为37℃。 简述单克隆抗体制备技术得主要步骤。 单克隆抗体就是应用B细胞杂交瘤技术进行制备得,其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞得选择与制备、细胞融合、杂交瘤细胞得筛选与克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体得纯化与鉴定。 试述免疫血清应如何进行纯化。 免疫血清得纯化主要就是指提纯免疫血清中得IgG并去除无关得杂抗体。提纯IgG类
临床免疫学与检验重要知识点汇总
免疫应答主要分为哪几个阶段？ 1）识别阶段 2）活化和增值阶段 3）免疫效应 中枢免疫器官和外周免疫器官有哪些器官组成？各有什么功能？ 1）中枢免疫器官：免疫细胞发生、分化、成熟的场所，如骨髓，胸腺2)外周免疫器官：免疫细胞产生应答的场所。如脾脏，淋巴结，黏膜，扁桃体等。 T细胞、B细胞和NK细胞的主要功能分别是什么？ 1）T细胞：介导细胞免疫，辅助体液免疫。2）B细胞：产生体液免疫3）NK细胞：介导天然免疫，发挥细胞毒作用。 根据作用方式及其特点的不同，机体存在两类免疫简述各自的概念和特征？ 1)先天性免疫或固有性免疫，是个体出生是就具有的天然免疫，可通过遗传获得，是机体在长期进化过程中逐渐建立起来的主要针对入侵病原体的天然防御功能。其主要特征是反应迅速，针对外来异物的范围较广，不针对某个特定异物抗原，也称非特异性免疫。2)适应性免疫，是个体出生后，接触到生活环境中的多种异物抗原，并在不断刺激中逐渐建立起来的后天免疫，也称获得性免疫。其主要特征是针对某个特定的异物抗原而产生免疫应答，开始的应答过程比较缓慢，一旦建立清除该抗原的效率很高，特异性很强，也称特异性免疫。 简述抗原抗体反应的原理。 答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合 简述抗原抗体反应的类型。 答：抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应； ②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等。 什么是带现象? 答：在抗原抗体反应等价带前后，由于抗体或抗原过量(形成前带或后带)，上清液中可测出游离的抗体或抗原，形成的沉淀物少，不出现可见反应，这种现象在做血清学试验时称为带现象。 影响抗原抗体反应的环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素? 答：环境条件包括：电解质，酸碱度和温度。稳定条件：①电解质：常用O．85％氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液；②酸碱度：pH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，抗原抗体反应一般在pH为6～8时进行；③温度：一般以15， 40℃为宜，最佳反应温度为37℃。 简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。 单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内
常见免疫学试验技术
常见免疫学试验技术-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
免疫学实验 实验一与免疫相关的细胞形态的观察目的要求： 观察与免疫相关的几种细胞的形态，了解它们在机体免疫反应中的作用。 实验器材： 显微镜 血液涂片（瑞氏染色） 结缔组织切片 方法： 油镜观察 一．血涂片的观察 （A）红细胞：淡红色，无核的圆形细胞，因红血球为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7—8微米。 （B）颗粒白血球 嗜中性颗粒白血球：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1—5叶，核叶之间联以染色质细丝，染色质染成粉色，其中充满细小的大小均匀的颗粒被染成紫红色。直径10—12微米。 嗜酸性颗粒白血球：略大于嗜中白血球，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。直径10—15微米。 2
嗜碱性颗粒白血球：体积略小于嗜酸性白血球，细胞质中有大小不等被染成紫色颗粒，颗粒数目较嗜酸性白血球的颗粒少，核为1—2叶染成淡兰色。直径10—11微米。 （C）无颗粒白血球 淋巴细胞：涂片中可观察到中、小型两种。小淋巴细胞与红血球大小相似，圆形。其中含致密的核，染成深紫色。周围仅有一薄层嗜硷性染成淡蓝的细胞质。中淋巴细胞较大，有较宽层的细胞，核圆形。6-8微米。 单核细胞：体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径14-20微米。 二．肥大细胞的观察（示教） 胞体较大，呈卵圆形，胞质内充满粗大均等的嗜硷性颗粒。其中含肝素、组织胺等物质。常成群地分布于血管的周围。 三．浆细胞的观察（示教） 细胞呈圆形或卵圆形，胞质丰富，呈嗜硷性。核圆形，着色深，多偏于细胞的一侧，染色质核膜呈车轮分布。正常组织浆细胞少，慢性炎症时增多。浆细胞合成和分泌抗体，对免疫有重要意义。 四．巨噬细胞：又称组织细胞，细胞形态不规则。常伸出短而钝突起，有很强的吞噬能力。 附： 瑞特氏染色： 1．染色液配置 3
《医学免疫学》课程实验教学大纲
医学免疫学》课程实验教学大纲 一、基本情况 1、实验总学时： 2、试验项目数： 3、适合专业： 4、开课学期： 5、实验教材（或指导书、参考书）： 司传平主编，《医学免疫学实验》人民卫生出版社 龚非力主编，《医学免疫学》科学出版社 二、实验目的及任务： 医学免疫学实验课的实验目的及任务是使学生通过实验来验证和巩固已学习的理论知识，并通过实验课的基本技术的操作、基本技能的掌握培养学生认真观察、独立思考和辩证分析问题的能力，训练严格的科学作风、严肃的科学态度和严密的工作方法，并启发学生的创新能力为进一步学习临床专业课和今后从事医学专业工作打下良好的基础。 三、考核方式及评分办法： 评阅实验报告及作业 四、试验主要仪器设备： 显微镜、离心机、恒温箱、水浴箱、酶标仪等 五、实验项目 实验 1 免疫器官的大体形态学观察和免疫细胞的获取（ 3 学时） （一）实验类型：综合性实验 （二）实验类别：基础实验 （三）每组人数：30 人 （四）实验目的与要求： 掌握中枢和外周免疫器官的解剖学形态；掌握免疫细胞的获取和计数方法。 （五）实验内容提要： 观察免疫器官和免疫细胞。 （六）主要仪器设备及配套数： 眼科剪刀，镊子，解剖台（10套）；离心机（1台）；显微镜（10台）。
实验2 E-玫瑰花环形成实验（4学时） （一）实验类型：综合性实验 （二）实验类别：基础实验 （三）每组人数：30 人 （四）实验目的与要求： 掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法；熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。 （五）实验内容提要： 以玫瑰花环试验体外测定人外周血中T 淋巴细胞数量。 （六）主要仪器设备及配套数：离心机、水浴箱、电冰箱（各1台）；显微镜（10套）。 实验 3 中性粒细胞吞噬功能测定（3 学时） （一）实验类型：综合性实验 （二）实验类别：基础实验 （三）每组人数：30 人 （四）实验目的与要求： 掌握中性粒细胞吞噬白色葡萄球菌实验的操作过程；掌握瑞氏染色的基本步骤及吞噬百分率的计算。（五）实验内容提要：观察中性粒细胞吞噬金黄色葡萄球菌的结果，计算吞噬百分率。 （六）主要仪器设备及配套数： 水浴箱、离心机（各 1 台）；采血全套用品。 实验 4 抗原抗体反应及免疫学标本片的观察（2学时） （一）实验类型：综合性实验 （二）实验类别：基础实验 （三）每组人数：30 人 （四）实验目的与要求： 掌握凝集反应和沉淀反应的基本原理；熟悉凝集反应和沉淀反应的操作方法；了解E-玫瑰花 环实验、淋巴细胞转化实验、大小吞噬实验和一些常用生物制品。 （五）实验内容提要： 观察肝癌病人阳性血清与抗血清的反应（双向）以及抗IgG 抗体与IgG 的反应（单向），观察 E-玫瑰花环实验、淋巴细胞转化实验、大小吞噬实验镜片