龙工挖掘机产品展示会指南(pdf 31页)

《南京农业大学学报》-论文撰写要求

论文撰写要求 1．题名 准确、精炼、清晰，充分反映论文的基本内涵与特色。中英文题名内容应一致，英文题名通常以名词短语为主要形式，整个题名只有第1个词的首字母大写，其余均小（专有名词除外）；禁止使用非公知公用的符号、缩写词、外来语、代号和商品名。 2．作者姓名及单位 中英文作者姓名顺序应一致，通信作者请用“*”标识，作者英文名为汉语拼音，姓在前，名在后，姓全大写，双名只首字母大写，如，WANG Dawei。作者单位请准确写出全称，不能简写。 3．摘要 中文摘要：摘要是对正文主要内容高度浓缩的简短论文，与论文具有同等的信息量，包含“研究目的、方法、结果、结论”4个要素。句首不要简单重复文章题名中的信息。目的、方法、结论要简炼，结果的内容要具体。方法部分须有试验材料和主要设计；结果部分应突出原创性工作，着重反映出文章的创新、独到之处，只叙述新信息和发现及主要数据。缩写或代号首次出现必须加以说明。摘要不宜太短，500字左右。 英文摘要：所有论文都必须有500词左右的英文摘要，包含“研究目的、方法、结果、结论”4个要素，与中文摘要对应，结果部分可以详细些。研究目的用一、两句话概括，写出论文的主要研究目的；方法、结果的内容尽可能详细，即解决问题的主要方法、过程（包括试验材料、试验设计、测定方法等），研究结果部分重点描述研究中的创新内容，尽量包括论文中的主要论点和重要的论证和数据；结论应明确。 中英文摘要的数据必须与正文的数据一致。 摘要模板： 摘要：[目的] ×××××××××××××。[方法] ×××××××××××××。 [结果] ×××××××××××××。[结论] ××××××××××× ××。 Abstract：[Objectives]×××××××××××××.[Methods]×××××××××××××.[Results]×××××××××××××.[Conclusions]××××× ××××××××. 4．关键词 尽量选用主题词，如果自由选词，选词的关键在于要精选能代表文章主要内容的词或词组；每篇论文可列出3～8个关键词；中英文关键词既要意思一致又要顺序一致。 5．中图分类号 从《中国图书馆分类法》（第四版）中查找，自查。 6．引言 内容包括研究意义、研究背景、提出问题即本研究与已有研究的不同之处及研究目的。

自相关仪原理简介

自相关仪原理简介 脉冲宽度是脉冲激光器的重要性能指标，利用扫描自相仪可以测量ps和fs的脉冲宽度。随着激光器的问世脉冲激光器由于峰值功率高而获得广泛的应用，目前在化学反应动力学、非线性光学、光语分析、激光加工、激光测距等科技领域都采用脉冲激光器作为光源。脉冲激光器的脉冲 宽度已从毫秒和纳秒提高到皮秒和飞秒。 关于脉冲激光器脉冲宽度的定义，对于单纵模输出，其脉冲宽度定义为脉冲高度50%的全脉冲宽度（FWHM）；对于多模输出，其脉冲宽度为最佳拟合包络脉冲的FWHM。对于一般脉冲激光器，通 常可以利用一台带宽大于350MHz的示波器，和快速光电二极管（升降时间小于1ns）进行测量。对于ps和fs脉冲激光器，则只能使用条纹相机，或扫描自相关仪进行测量。扫描自相关仪是近十多年来发 展的专门用于测量脉冲宽度的新型仪器，具有高分辫率、高灵敏度和使用方便等优点。目前已出现多 种型号的自相关仪可用于探测超短光学脉冲的瞬时宽度，提供最佳的灵敏度和分辫率，适于测量锁 模染料或蓝宝石激光器的fs脉冲和脉冲半导体激光器或Nd-YAG/YLF激光器的ps脉冲。 利用测量激光的脉冲宽度，整套系统应包括光学系统和用于控制与显示的计算机系统。自 相关仪的光学系统类似于迈克尔逊干涉仪的结构，可以有两种形式共线的和非共线的，如图所示。图中入射光脉冲经分束片分为两束光，然后分别经两棱镜反射后再次共轴输出，即为共线型。 By guruntech 显然，调节棱镜的位置可以使两束光分别有不同的光程，连续改变棱镜的位置可以形成一个脉冲序列对另一脉冲序列的扫描，形成相关函数的波形。选择倍频晶体的方向使输入光E(t)和E(t-τ)一两束 光的波矢量都稍偏离相位匹配方向，因而在单独入射时不产生二次谐波，当两束光同时入射时因合成 矢量满足相位匹配条件则产生二次信频其信号与两束光强的乘积有关，由于倍频光信号仅与两束 光强度的乘积项有关： 因此所产生的二次谐波，由光电倍增管接收并予记录。图所示则是目前应用比较广泛的非共线相 关测法，其中两光束通过透镜聚焦于晶体上，其二次谐波通过滤光片和调节光阑为光电倍增管接收 并予记录。非共线相关测量法能消除背景光，可以达到较高的测量精度。

变形梯度凝胶电泳

变性梯度凝胶电泳 变性梯度凝胶电泳（denatured gradient gel electrophoresis，DGGE），是根据DNA在不同浓度的变性剂中解链行为的不同而导致电泳迁移率发生变化，从而将片段大小相同而碱基组成不同的DNA片段分开。具体而言，就是将特定的双链DNA片段在含有从低到高的线性变性剂梯度的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，随着电泳的进行，DNA片段向高浓度变性剂方向迁移，当它到达其变性要求的最低浓度变性剂处，双链DNA形成部分解链状态，这就导致其迁移速率变慢。由于这种变性具有序列特异性，因此DGGE能将同样大小的DNA片段很理想地分开，它是一种很有用的分子标记方法。 DGGE最初是Lerman 等人于20 世纪80 年代初期发明的，起初主要用来检测DNA 片段中的点突变。Muyzer 等人在1993 年首次将其应用于微生物群落结构研究，并证实了这种技术在研究自然界微生物群落的遗传多样性和种群差异方面具有明显的优越性。此后十年间，该技术被广泛用于微生物分子生态学研究的各个领域，现已广泛应用于生物多样性调查、亲缘关系鉴定、基因突变检测等多个领域。这一技术能够提供群落中优势种类信息，并同时分析多个样品，具有可重复和操作简单等特点，适合于调查种群的时空变化。而且可通过对条带的序列分析或与特异性探针杂交分析，鉴定群落组成。DGGE通过逐渐增加的化学变性剂线性浓度梯度，可以把长度相同但只有一个碱基不同的DNA片段分离。 作为一种突变检测技术，DGGE具有如下的优点：（1）突变检出率高。DGGE的突变检出率为99%以上。（2）检测片段长度可达1kb，尤其适用于100~500bp的片段。（3）非同位素性。DGGE不需同位素掺入，可避免同位素污染及对人体造成的伤害。（4）操作简便、快速。DGGE一般在24小时内即可获得结果。（5）重复性好。但是，该方法需要特殊的仪器，而且合成带GC夹的引物也比较昂贵。 DGGE的基本原理及方法： DGGE不是将分子量不同的DNA分开，而是通过聚丙烯酰胺凝胶中变性剂浓度梯度的不同，将序列不同的DNA分开。该方法的原理是根据DNA 的解链特性，不同碱基组成的DNA双螺旋发生变性所要求的变性剂浓度不同，混合双链DNA在变性剂浓度呈线性梯度增加的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，当泳动到与DNA变性所需变性剂浓度一致的凝胶位置时，相对应的DNA发生解链变性，导致电泳迁移速率降低。由于泳动受阻DNA分子在凝胶中

分子生物学课程教学大纲

分子生物学课程教学大纲 课程名称：分子生物学（Molecular Biology） 课程编号：1313072215 课程类别：专业课 总学时数：68 课内实验时数：18 学分：3.5 开课单位：生命科学学院生物技术教研室 适用专业：生物技术 适用对象：本科（四年） 一、课程的性质、类型、目的和任务 分子生物学为高等学校生物技术专业学生必修的一门专业基础课，是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科，主要研究核酸、蛋白质等生物大分子的功能、形态结构特征及其重要性和规律性的科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动地适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科。 通过分子生物学的教学，应使学生了解分子生物学的发展历史以及最新研究成果；熟练掌握DNA的结构与功能、RNA在蛋白质合成中的功能、蛋白质的结构与功能、遗传密码及基因表达调控的本质；了解现代分子生物学基本研究方法，并能运用分子生物学的理论知识分析、研究和解决问题，为进一步学习有关专业课程及从事基因工程领域的研究工作奠定基础。 二、本课程与其它课程的联系与分工 从学科角度来讲，分子生物学涵盖面非常广，与生物学、生物化学和细胞生物学、遗传学等生命科学课程有交叉，《生物化学》是先修课程。 三、教学内容及教学基本要求 [1]表示“了解”；[2]表示“理解”或“熟悉”；[3]表示“掌握”；△表示自学内容；○表示略讲内容； 第一章绪论 第一节引言 创世说与进化论[1]；细胞学说[2]；经典的生物化学和遗传学[3]；DNA的发现[2] 第二节分子生物学简史[1] 第三节分子生物学研究的主要内容 分子生物学的含义[3]；DNA重组技术、基因工程技术概念[3]；分子生物学研究的主要内容[3] 第四节展望 分子生物学的一些分支学科[1]；分子生物学发展的趋势[1] 重点：分子生物学的含义和研究内容

多功能虚拟信号分析仪使用说明书

多功能虚拟信号分析仪使用说明书(U(User ser G uide uide))2.5.8.10 仪星电子科技 2011-8-12

目录 1.分析仪功能介绍........................................................................12.软件界面 (2) 22.1启动界面选择启动界面选择 (2) 22.2恢复显示启动界面恢复显示启动界面 (2) 22.3软件功能界面切换软件功能界面切换 (2) 23.软件中基本操作简介 (3) 3.1鼠标拖动鼠标拖动 (3) 33.2鼠标鼠标测量测量测量 (3) 33.3采样点显示采样点显示 (3) 33.4水平缩放水平缩放 (3) 33.5水平移动水平移动 (4) 43.6水平水平微调微调微调 (4) 43.7垂直缩放垂直缩放 (4) 43.8垂直移动垂直移动 (4) 43.9区域放大区域放大 (4) 44.函数发生器使用函数发生器使用说明 说明………………………………………………………44.1声卡使用说明声卡使用说明……………………………………………………………… ………………………………………………………………44.2USB 模块使用说明模块使用说明………………………………………………………… …………………………………………………………64.3波形文件输出波形文件输出……………………………………………………………… ………………………………………………………………65.示波器使用示波器使用说明 说明………………………………………………………………75.1示波器分析流程示波器分析流程…………………………………………………………… ……………………………………………………………75.2声卡声卡使用说明使用说明使用说明……………………………………………………………… ………………………………………………………………85.3USB 模块使用说明模块使用说明……………………………………………………… ………………………………………………………95.4仿真模式使用说明仿真模式使用说明… ………………………………………………………95.5串口捕获使用说明串口捕获使用说明……………………………………………………… ………………………………………………………95.6数据抓帧数据抓帧……………………………………………………………………………………… (10)

分子生物学实验教学大纲

分子生物学实验教学大纲 一、说明 1、课程类别 专业课 2、教学目的 通过实验教学使学生了解、验证、巩固和加深所学理论知识，掌握分子生物学研究的基本实验技能，如：质粒（植物/动物）DNA的分离及纯化、植物总RNA的提取，琼脂糖凝胶电泳等技术。培养科学、严谨、实事求是的学风，提高动手能力、分析问题解决问题的能力以及创新性思维。 3、教学内容 本门课教学主要以某一基因为主线，从基因的分离、纯化、克隆、及鉴定等方面入手，帮助学生掌握分子生物学基本的实验方法和技能，在此基础上对分子生物学方法的应用和意义有一个整体的把握，在可能的情况下同时提供多种实验材料让学生自行设计和准备实验，培养其独立科研能力。 4、教学方式 以实验操作为主，配合原理教授、实践性教学、多媒体教学和学生实验报告、撰写论文、自学等方法进行学习。 5、考核内容及方式 实验操作 30％，实验结果 30％，实验报告 30％，考勤 10％。参照以下几个方面评定成绩。 （一）认真预习实验并书写实验预习报告； （二）实验态度认真，操作规范，遵守实验室管理规定； （三）按规定步骤进行实验，实验结果准确； （四）认真撰写实验报告。 6、本课程授课时间（学期），总学时数。 本课程在三年级开设，总计36学时，学时分配见下表: 教学时数分配表

二、教学内容 1、教学目标（课程） 通过本课程的教学使学生了解和掌握现代分子生物学研究的基本原理、方法、技术和技能，包括DNA 提取、PCR 扩增等。通过学生的独立实验设计和实践，训练学生分析问题和解决问题的能力及实际动手能力，同时培养学生的创新思维以及对生命科学探索的兴趣和爱好。 2、教学内容（分章节描述） 实验一质粒DNA的提取 1．主要内容碱裂解法提取载体质粒。 2．教学要求学习和掌握碱裂解法提取质粒的方法和技术。 实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA 1．主要内容（1）电泳基本知识介绍（2）琼脂糖凝胶的制备（3）质粒的定量。 2．教学要求掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。 实验三植物总RNA的提取及检测 1．主要内容（1）RNA的提取（2）核酸的琼脂糖凝胶电泳（3）紫外分光光度法测定核酸的含量和纯度。 2．教学要求掌握植物组织中提取RNA的基本原理和实验技术方法。 实验四动物总DNA的提取 1．主要内容（1）总DNA的提取（2）核酸的琼脂糖凝胶电泳（3）紫外分光光度法测定核酸的含量和纯度。 2．教学要求掌握动物组织中提取总DNA的基本原理和实验技术方法。 实验五 PCR基因扩增 1．主要内容（1）PCR基本原理（2）PCR溶液体系的制备（3）PCR仪使用 2．教学要求掌握聚合酶链式反应的基本原理和实验技术方法。 （二）重点和难点

感受态细胞转化操作步骤12.8

感受态细胞转化 （一）实验准备： 1.Amp母液： 称取氨苄青霉素100mg溶于1ml dd H2O中。0.22μm滤器过滤除菌，用EP管分装后储存于-20℃冰箱. 2.X-Gal溶液（2%，m/v） 称取20mg X-Gal溶于1ml二甲基甲酰胺（DMF）中。用玻璃试管或聚丙烯管分装后储存于-20℃冰箱,装有X-Gal溶液的试管须用铝箔包裹以防因光照而被破坏.（无须过滤） 3.IPTG（20%,m/v,0.8mol/L） 称取IPTG2g溶于8ml dd H2O中。用蒸馏水定容至10mL。0.22μm 滤器过滤除菌，用EP管分装成1mL一小份后储存于-20℃冰箱. （二）操作步骤“ 质粒pBS SK(-)的转化 1.取感受态细胞置于冰浴中，待感受态细胞融化后，分别在100μl 感受态细胞悬液中加入下列DNA质粒或水，轻轻摇匀后冰上放置30分钟。 感受态细胞+pBS SK(-)质粒2μl (含量不超过50ng,体积不超过10μl) 感受态细胞+无菌水2μl （阴性对照） 2. 热击：42℃水浴中热击90秒（注：精确计算时间，过长将对细胞造成伤害）,热击后立即置于冰上冷2-5分钟（禁止摇动）。

3. 复苏：向每管中加入400μl LB液体培养基(注：不含Amp),混匀后37℃轻摇培养1~1.5小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Ampr )。 涂布平板筛选转化质粒 方法一（《分子克隆实验指南》标准方法） 1.将溶化的顶层琼脂分装于17*100mm试管，将试管置于45℃的加 热块槽内备用。 （90mm培养板用3mL顶层琼脂；150mm培养板用7mL顶层琼脂）2．从加热块取出一支试管，快速加入活菌含量不多于3000（90培养基）或10000（150培养基）的细菌悬液0.1mL。盖紧试管盖颠倒数次。以使细菌在琼脂中混匀。 3.按下表加入： 4. 快速将溶化的顶层琼脂倾入含有适当抗生素的凝固琼脂板的中部，旋转培养板使琼脂散匀。 .注：含Amp的LB固体培养基倒板 (1)配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 (2)抗生素的加入：高压灭菌后，应使培养基降温至50℃，方可加入Amp，按每100ml培养基加10mg/ml Amp溶液1ml，使其终浓度为

RNA干扰载体的构建的实验流程图

RNA干扰载体的构建的实验流程 RNA干扰载体主要用来研究基因表达调控，RNA干扰技术已已被广泛用于基因结构功能研究和传染性疾病及基因治疗领域，进行RNA干扰实验首先是构建RNA干扰载体，本文以pRI系列载体为例论述了干扰载体的构建的实验流程。 产品技术背景 pRI系列载体是基于III类rna聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA 经过RISC剪切后形成有2个U突出末端的成熟siRNA。由于H1启动子对转录产物长度的严格限制，基本上杜绝了非特异性干扰片段的产生，将载体转染细胞后对其它基因的影响降到最低。 pRI系列载体已经成功用于多种哺乳动物细胞进行基因的RNA干扰。本系列中含有新霉素抗性基因的载体用于稳定表达siRNA，可以在更长时间对基因表达抑制后的细胞功能和生理现象进行观察和分析。插入寡核苷酸设计

pRI系列载体的使用需要将人工设计的寡核苷酸片段插入pRI系列载体中特定的酶切位点之间，寡核苷酸片段中包含了针对目标基因的mRNA设计的长度为19nt的干扰片段。 合成时需要化学合成正向和反向两条寡核苷酸。正、反向寡核苷酸退火后与载体连接，插入载体XhoI，BglII位点之间，位于载体上H1启动子下游正确的位置上。连接后的载体转入哺乳动物细胞在H1启动子作用下转录产生shRNA。 1. 选择干扰序列 在RNA干扰实验中，RNA干扰序列的选择会显著影响RNA干扰效果。我们建议您按照以下几点指导原则选择RNA干扰序列： 推荐长度为19 nt，采用21 nt序列也可以取得良好效果。 RNA干扰序列中不包含大于3 nt的连续相同碱基。 RNA干扰序列的GC含量为低到中等水平(推荐GC含量在35%到50%之间)。 不要将RNA干扰序列设计在已知的RNA-蛋白质结合位置附近。 确保RNA干扰序列与其它基因没有较高的同源性。 方向：在编码mRNA的正义链上选择RNA干扰序列。

重组质粒在大肠杆菌中的表达

重组质粒在大肠杆菌中的表达 1. 仪器耗材 紫外分光光度计（配石英比色杯）、振荡摇床、超净台、细菌培养皿、20ml试管、250ml 三角烧瓶、移液枪、枪头。 2. 试剂及配制 （1）LB培养基（100ml）：胰化蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl 1g，定容至100ml，高压灭菌，4℃保存备用。 （2）LB平板（100ml，Kan+，50μg/ml）：胰化蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl 1g，琼脂1.5 g，定容至100ml，高压灭菌，水浴调温至50-60℃，加入10mg/ml kan 500μl，旋转混匀，铺制平板（90mm直径的平皿约5个），4℃保存备用。 （3）10mg/ml kanamycin：称量0.5g kan，用蒸馏水溶解、定容至50ml，0.22μm滤器过滤除菌，分装于高压灭菌的1.5 ml离心管中，每管1 ml，-20℃保存备用。 （4）1M IPTG：称量11.915g IPTG，用蒸馏水溶解、定容至50ml，0.22μm滤器过滤除菌，分装于高压灭菌的1.5 ml离心管中，每管1 ml，-20℃保存备用。 3. 实验步骤 （1）构建好的表达质粒转化表达菌株BL-21后，均匀涂布LB培养基平板（Kan+，50μg/ml），过夜培养（约12h）。 （2）挑取2-4个生长良好的单菌落，用20ml试管分别接种于3ml LB液体培养基（Kan+，50μg/ml）中，37℃、250rpm振荡过夜培养。 （3）把以上培养物接种新鲜的LB培养基（Kan+，50μg/ml），二者的体积比为1:100，并且总体积不能超过培养用三角瓶容积的1/5。 （4）37℃、250rpm振荡培养至对数生长中期（OD600约0.4～0.8），此细菌密度必须在1.5到3小时内达到。 （5）取出2ml培养物作为诱导前对照，在剩余培养物中加入IPTG，使终浓度为1mM（最佳用量需摸索），继续培养。 （6）诱导3小时后，取样1ml留存，之后每一小时取样1ml留存，直至8h诱导结束。（7）将不同诱导时间的菌样进行SDS-PAGE，分析蛋白的诱导表达情况。

自相关仪

超短脉冲激光的相位与振幅测试 测试激光脉冲的光谱随时间变化的方法，成为频率分辨光学开关法（FROG），它是一种能以各种实验几何形式应用的通用技术。主要有两种几何形式：放大系统的自衍射（SD FROG）和振荡器的二次谐波（SHG-FROG）。SHG-FROG可以在450nm~2000nm范围内工作，主要取决于非线性晶体。 由于时间-带宽不确定原理的影响，所以超短激光脉冲具有很大的带宽。如光谱分量同时进入激光脉冲的带宽范围内，可认为该脉冲已达到其变换极限。脉冲达到变换极限说明其持续时间最短。 材料特性（如色散）能改变光线光谱分量之间的（相位）关系，从而能及时有效地从脉冲中分离蓝色和红色分量。这就是啁啾效应，对于超短脉冲而言，它能及时延长脉冲。虽然自相关仪能测量超短脉冲的持续时间，但是它不能对不同光谱分量之间的相位关系进行测试。主要原因是自相关仪采用了单元素光电探测器，它能有效合并脉冲的光谱轮廓。 FROG是一种能监视脉冲光谱轮廓随时间变化的先进技术。我们能利用这些技术完整地重建电场。在这些技术中，FROG是最直接和最简单的方法。如上所述，FROG能完整地恢复输入场的相位，却不存在自相关导致的模糊性。 每种几何外形都有一定的优势与局限，这要根据需测量的激光脉冲的应用环境具体判断。SD FROG跟踪能提供脉冲的直观画面（保留时间方向），这正是我们迫切需要的实时激光对中功能。而且它的几何外形与扫描式自相关仪完全相同，其中的非线性介质是一片薄玻璃（<200μm），因此这种几何外形不仅极具成本效益，而且便于直接应用。在衰减过程中，SD FROG 需要相对较高的峰值功率，但大部分超快振荡器都无法提供这种功率，因此它仅限于在放大系统中使用。 SHG FROG是应用很广泛的FROG，它其实就是一种光谱分辨自相关仪。虽然光谱相位会在测量时丢失，但我们能利用有效的算法推断出光谱相位的阶次和幅度，这样当需要再次测量时就能确定相位信息。

某公司内部的CRISPR-Cas9操作流程

Genloci Classic CRISPR-Cas9内 部操作流程

1，CRISPR-Cas9基因编辑实验流程图如下： pGK1.1 U6 CACC G CAAA 4 5 5’ -5’ 3’ -3’ - - ～20bp

2，操作步骤 实验前，请您务必做好以下验证实验： A．单细胞生长情况，确保单个细胞可以正常生长形成单克隆，即，低密度的细胞在培养皿中可以形成单克隆。 B．目的基因的表达情况分析，为防止因染色体缺失等情况导致靶基因缺失，首先需要PCR扩增靶基因，并对PCR结果进行测序，确保靶基因的完整存在；其次，您还可以用RT-PCR分 析靶基因的活跃度。 1. 设计Oligo DNA序列 首先，您需要在靶标DNA区域中设计一对20bp左右的oligo DNA，您可以通过以下在线工具设计： ●麻省理工学院的CRISPR Design：https://www.wendangku.net/doc/315591761.html,/ ●德国癌症研究中心的E-Crisp：https://www.wendangku.net/doc/315591761.html,/E-CRISP/designcrispr 下面我们选择麻省理工学院的CRISPR Design工具来做设计举例，以Fut8基因为例，一次只能输入大小为23～250bp的基因片段，最好一次只输入一个外显子，避免Guide序列跨内含子的。 点击“Download as genbank”按钮，出现以下界面：“Fut8” 根据左边的score的高低选取合适的Guide序列，以Guide#1序列为例，2条单链oligo的序列如下（红色字体部分是要与Bbs I酶切后的载体相互补的部分）： Fut8-F: cacc G AATGAGCATAATCCAACGCC Fut8-R: aaac GGCGTTGGATTATGCTCATTC ※注意：oligo DNA设计序列的第一个碱基必须是G，如果你选取的Guide序列的第一个碱基不是G，可自行加一个G上去。 另外，需在位点上下游各设计一条引物，用于后续PCR或测序检测阳性克隆，引物能扩增约300bp 的DNA片段，上游引物距突变位点约100bp，下游引物距突变位点约200bp。 将设计后的序列送到值得信赖的公司合成，纯化级别为PAGE。 2. T4 DNA Ligase连接 将合成后的2条单链oligo DNA退火形成双链DNA，再与载体连接，pGK1.1 linear vector是线性化载体，无需酶切处理，可直接用于T4 DNA Ligase连接反应，pGK1.1载体已经优化过，其转染和敲除的效率比一般CRISPR载体更高。

ZPW388操作软件使用指南

ZPW388 操作软件使用指南
目录
一. 软件各菜单简介……………………………………………… 1 1. File （文件）……………………………………………… 1 2. View （查看）………………………………………………… 3. Setup（设置）………………………………………………… 4. Particle Sizing （微粒粒径）…………………………… 5. Display （显示）…………………………………………… 6. Weighting （分布图）……………………………………… 二. 简要操作步骤 ……………………………………………… 三. 常见故障和疑难解答…………………………………………

一. 软件各菜单简介
FILE （文件）
下面提供了 ZPW388 软件使用中，文件选项使用的简要说明。 文件选项入门： a. 在 File（文件）选项加亮的位置上用鼠标左键单击一次，文件选项 菜单窗口显示如下：
图 2：文件选项窗口
b. 滑动鼠标到加亮的选项条，选中并左键单击你想要操作的选项。 下面对提供的每一选项进行描述。

RESTORE （恢复储存） 一旦自相关计算器被中止，使用恢复键来收集数据，当这项被选
择后将出现下列警示对话框：
点击：
图 3：储存确认对话框
“是”： 屏幕上的数据图将被清除，且数据将被收集， 保存。
“否”： 警示框将消失且自相关计算器将不会进行数据 收集。
READ （读取） 数据文件已经储存了测量的数据能够重新在显示屏上显示微粒
粒径分布图。当选择此项时，一张数据文件列表将在读取数据文件窗 口上显示出来，如下图：

分子克隆实验指南

做了快一年的分子克隆，犯了很多错误，经历了很多坎坷，也学到了很多东西。分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了，大家抱怨的也最多，我也陷入在个步骤上很久。经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会，在这里跟大家分享一下我的经验，以供和我一样陷入困境及刚开始做克隆的同学参考。 关于连接的提问多集中在连接的体系、DNA的用量、vector和insert的比例、连接酶等。但是我认为，连接不成功，问题并不一定出在连接这步上。 有很多环节影响连接的成败，如酶切的好不好、回收的质量好坏、连接时的浓度或比例、感受态等。以下我详细说明。 1，PCR引物的设计。通俗的不说，需要指出的是设计引物时一定要考虑切点的甲基化问题。做普通的克隆会涉及到甲基化形式有两种：dam甲基化和dcm甲基化。常用的大肠杆菌都有这两种甲基化酶。dam甲基化酶识别GATC位点并甲基化；dcm甲基化酶识别CCWGG 位点（W是A或T）并甲基化。如果有这两种位点那么多数情况内切酶是切不开了。容易受甲基化影响的内切酶有：Dpn1（GA/TC）天生就甲基化；Cla1（A TC/GAT）如果前面加个G或后面加个C那么恭喜你，dam甲基化；Xba1（T/CTAGA）如果前面加个GA或后面加个TC也是dam甲基化，等等有好多。这些容易甲基化的切点设计引物时一定要注意，避免引入甲基化位点。如果真是避免不了或者后来才发现问题，那么把甲基化的质粒转化到甲基化酶缺陷型大肠杆菌中再提质粒就没有甲基化，可以切了。甲基化缺陷型菌有：DM1（Invitrogen）、INV110（invitrogen）、JM110等。 2，PCR产物。两种方式：一种纯化后直接酶切连接；一种连T载体再往下切连接。我个人强烈建议第二种，连T载体。因为PCR产物直接酶切我觉得有两个缺点：①由于两头把手太短，虽说有保护碱基，但我觉得还是不如从质粒上往下切好切，而且容易切坏、切碎；②无法从电泳上看出来切没切开，因为也就切下了几个十几个bp，带形没啥变化。连T载体的优点：①进载体后，大提一次的质粒夸张点说够用一辈子的，不用总PCR往出调了，再说PCR那东西还不太稳定，一把多一把少的。②酶切会很清晰，切下来了就是有带，没切动就是没有，没连上也能知道不是没切开而是别的步骤有问题。连T载体也有些麻烦的地方，如需要的切点有时跟T载体上自带的切点冲突，这就要小心鉴别；而且连T载体最好测序看一下PCR的产物对不对、切点对不对。总体来讲连T载体是很有优势的。 3，提质粒。有时手工小提或粗提的质粒酶切效果不好，这可能是提取的不够纯或者内切酶品质不好。所以若酶切效果不佳建议用柱子精提或大提。 4，酶切。用于连接的酶切很关键。需注意如下几点： ①如果是双酶切A和B，预实验中必须做A和B各自的单酶切和A+B的双酶切,好确认这几种酶都好用，质粒上的切点都好用。如果切不开就要考虑是不是酶的问题，buffer的问题，质粒上有没有这些切点，序列是否甲基化等。 ②酶切尽量用大体系，如50ul、100ul等。大体系能稀释内切酶包装中的甘油，对反应有利。相反，连接尽量用小体系，以增加DNA末端的碰撞机会。 ③如果要回收、连接，酶切用的DNA量我的经验是不用太大。大了会切碎，形成一些不规则的末端，不利于连接。 ④酶切后的电泳，即切胶的那次电泳中，如果切成的条带很清晰，不拖泥带水，没有弥散，没有拖尾，那做回收、连接效果最好。相反，若有弥散、拖尾、不清楚、一团亮等情况就是切的不好，做后续实验成功率会降低。若真是效果很差建议改进体系重新切。 5，回收。回收可以用柱式试剂盒或手工法。柱式回收试剂盒：此类试剂盒适合各种长度DNA，对黏性末端基本没有破坏，回收效率也不错。手工醇沉法步骤如下，把切得的胶弄碎，用Tris-HCl浸泡一段时间，吸出所有的液体，用酚抽提一遍，氯仿抽提一遍，加盐和醇醇沉，

自相关仪测量激光器时基抖动

Measuring Timing Jitter With Optical Cross Correlations Leaf A.Jiang,Samuel T.Wong,Matthew E.Grein,Student Member,IEEE,Erich P.Ippen,Fellow,IEEE,and Hermann A.Haus,Life Fellow,IEEE Abstract—The use of optical cross correlations for character- izing timing jitter is investigated.Applications,limitations,and correspondence to radio frequency measurements are presented and clarified.The probability density function of the timing jitter of semiconductor mode-locked lasers is deconvolved from the cross-correlation measurements with the aid of pulse characteri- zation techniques. Index Terms—Actively mode-locked laser diode,cross correla- tion,fluctuations,monolithic passively mode-locked laser diode, noise measurements,probability density function,pulse-to-pulse jitter,timing jitter,variance. I.I NTRODUCTION I NTEREST in fast noise dynamics of mode-locked lasers has been spurred recently by their potential application to high-speed optical analog-to-digital converters[1].In addition, the noise of mode-locked lasers may have a direct impact on high-speed fiber optic communications[2]and ultrafast optical pump-probe measurements[3],[4].For these applications,it is important to be able to characterize the noise spectral density of the timing jitter of a mode-locked laser from0Hz to half its repetition rate. Optical cross correlations using a nonlinear crystal and second-harmonic generation provide a direct,time-domain method for characterizing high-frequency timing fluctuations and pulse-to-pulse timing jitter.By changing the length of a low-loss fiber in one arm of the cross correlator,the integrated timing jitter can be measured accurately.The increase in the width of the cross correlation over that of the autocorrelation is due to timing jitter.Amplitude noise is conveniently averaged out.Broadening due to dispersion in the fiber delay arm can be accounted for with an additional autocorrelation.Pulses at high repetition rates(

分子克隆实验指南

连接经验分享来源：https://www.wendangku.net/doc/315591761.html,作者：基因时代时间：08-07-13 点击： 做了快一年的分子克隆，犯了很多错误，经历了很多坎坷，也学到了很多东西。分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了，大家抱怨的也最多，我也陷入在个步骤上很久。经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会，在这里跟大家分享一下我的经验，以供和我一样陷入困境及刚开始做克隆的同学参考。 关于连接的提问多集中在连接的体系、DNA的用量、vector和insert的比例、连接酶等。但是我认为，连接不成功，问题并不一定出在连接这步上。 有很多环节影响连接的成败，如酶切的好不好、回收的质量好坏、连接时的浓度或比例、感受态等。以下我详细说明。 1，PCR引物的设计。通俗的不说，需要指出的是设计引物时一定要考虑切点的甲基化问题。做普通的克隆会涉及到甲基化形式有两种：dam甲基化和dcm甲基化。常用的大肠杆菌都有这两种甲基化酶。dam甲基化酶识别GATC位点并甲基化；dcm甲基化酶识别CCWGG 位点（W是A或T）并甲基化。如果有这两种位点那么多数情况内切酶是切不开了。容易受甲基化影响的内切酶有：Dpn1（GA/TC）天生就甲基化；Cla1（ATC/GAT）如果前面加个G或后面加个C那么恭喜你，dam甲基化；Xba1（T/CTAGA）如果前面加个GA或后面加个TC也是dam甲基化，等等有好多。这些容易甲基化的切点设计引物时一定要注意，避免引入甲基化位点。如果真是避免不了或者后来才发现问题，那么把甲基化的质粒转化到甲基化酶缺陷型大肠杆菌中再提质粒就没有甲基化，可以切了。甲基化缺陷型菌有：DM1（Invitrogen）、INV110（invitrogen）、JM110等。 2，PCR产物。两种方式：一种纯化后直接酶切连接；一种连T载体再往下切连接。我个人强烈建议第二种，连T载体。因为PCR产物直接酶切我觉得有两个缺点：①由于两头把手太短，虽说有保护碱基，但我觉得还是不如从质粒上往下切好切，而且容易切坏、切碎；②无法从电泳上看出来切没切开，因为也就切下了几个十几个bp，带形没啥变化。连T载体的优点：①进载体后，大提一次的质粒夸张点说够用一辈子的，不用总PCR往出调了，再说PCR那东西还不太稳定，一把多一把少的。②酶切会很清晰，切下来了就是有带，没切动就是没有，没连上也能知道不是没切开而是别的步骤有问题。连T载体也有些麻烦的地方，如需要的切点有时跟T载体上自带的切点冲突，这就要小心鉴别；而且连T载体最好测序看一下PCR的产物对不对、切点对不对。总体来讲连T载体是很有优势的。 3，提质粒。有时手工小提或粗提的质粒酶切效果不好，这可能是提取的不够纯或者内切酶品质不好。所以若酶切效果不佳建议用柱子精提或大提。 4，酶切。用于连接的酶切很关键。需注意如下几点： ①如果是双酶切A和B，预实验中必须做A和B各自的单酶切和A+B的双酶切,好确认这几种酶都好用，质粒上的切点都好用。如果切不开就要考虑是不是酶的问题，buffer的问题，质粒上有没有这些切点，序列是否甲基化等。 ②酶切尽量用大体系，如50ul、100ul等。大体系能稀释内切酶包装中的甘油，对反应有利。相反，连接尽量用小体系，以增加DNA末端的碰撞机会。 ③如果要回收、连接，酶切用的DNA量我的经验是不用太大。大了会切碎，形成一些不规则的末端，不利于连接。 ④酶切后的电泳，即切胶的那次电泳中，如果切成的条带很清晰，不拖泥带水，没有弥散，没有拖尾，那做回收、连接效果最好。相反，若有弥散、拖尾、不清楚、一团亮等情况就是切的不好，做后续实验成功率会降低。若真是效果很差建议改进体系重新切。 5，回收。回收可以用柱式试剂盒或手工法。柱式回收试剂盒：此类试剂盒适合各种长度DNA，对黏性末端基本没有破坏，回收效率也不错。手工醇沉法步骤如下，把切得的胶弄碎，用Tris-HCl浸泡一段时间，吸出所有的液体，用酚抽提一遍，氯仿抽提一遍，加盐和醇醇沉，

自相关仪超快飞秒脉冲激光测量

超快飞秒脉冲激光测量 一、超快激光是什么？ 我们所说的超快激光器，一般是指脉冲宽度达到 皮秒 量级的脉冲激光器。其具有一下特点： （1）具有极短的激光脉冲。脉冲持续时间只有几个皮 秒或飞秒。 （2）具有极高的峰值功率。其电场远远强于原子内库 仑场，具有极高的电场强度，足以使任何材料发生电 离。 近十几年来，由于啁啾脉冲放大(chirped pulse amplification, 简称CPA)技术的提出和应用，宽带 激光晶体材料（如掺钛蓝宝石）的出现，以及克尔透 镜锁模技术的发明，使超强超快激光技术得到迅猛发 展。小型化飞秒太瓦（1012瓦）甚至更高数量级的超 强超快激光系统已在各国实验室内建成并发挥重要作用。图1、100飞秒激光器时域分布最近，更短脉冲和更高功率的激光输出，如直接由激光振荡器产生的短于5飞秒的激光脉冲，小型化飞秒100太瓦级超强超快激光系统，以及 CPA技术应用到传统大型钕玻璃激光装置 上获得1拍瓦（1015瓦）级激光输出已有 报道，激光功率密度达到1019～1020瓦 / 厘米2的超强超快激光与物质相互作用研 究也已开始进行。 传统的激光放大采用直接的行波放大，而 对超短激光脉冲来说，随着能量的提高， 其峰值功率将很快增加，并出现各种非线 性效应及增益饱和效应，从而限制了能量的进一步放大。图2、脉冲序列分布 CPA技术的原理是，在维持光谱宽度不变的情况下通过色散元件将脉冲展宽好几个数量级，形成 所谓的啁啾脉冲。这样，在放大过程中，即使激光脉冲的 能量增加很快，其峰值功率也可以维持在较低水平，从而 避免出现非线性效应及增益饱和效应，保证激光脉冲能量 的稳定增长。当能量达到饱和放大可获得的能量之后，借 助与脉冲展宽时色散相反的元件将脉冲压缩到接近原来 的宽度，即可使峰值功率大大提高。 为了突破CPA技术的一些局限性，目前国际上正在积 极探索发展新一代超强超快激光的新原理与新方法，如啁 啾脉冲光学参量放大（OPCPA）原理，目标是创造更强更 快的强场超快极端物理条件，特别是 图3、钛蓝宝石超快激光器

热点实验：CHIP染色质免疫共沉淀实验案例介绍

背景：真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比，染色质免疫沉淀技术（CHIP）能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最佳方法。 原理：是在活细胞状态下以甲醛固定蛋白质－DNA复合物，超声将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后加入目的蛋白抗体，通过抗体沉淀靶蛋白-DNA复合物，通过洗脱的方法得到富集的靶蛋白-DNA复合物，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测（PCR分析），从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。 应用：1.组蛋白修饰研究 2.转录调控分析 3.药物开发研究 4.有丝分裂研究 5.DNA损伤与凋亡分析。 步骤： 1）甲醛处理细胞 2）收集细胞，超声破碎 3）加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合 4）加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，沉淀 5）对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合 6）洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物 7）解交联，纯化富集的DNA-片断 8）PCR或基因芯片分析。 实验案例证明C/EBP与Tmub1启动子或增强子序列的结合

实验背景：在IL－6诱导条件下,利用CHiP技术提取C/EBP－DNA复合物，以Tmub1基因的碱基序列设计引物，以提取的DNA为底物，进行扩增，从而证明C/EBP结合的DNA含有Tmub1基因，进一步确认C/EBP与Tmub1启动子或增强子序列的相互作用。 实验分组：分2个组进行实验普通PCR检测和WB检测（检测Tmub1蛋白表达水平，抗体嘉美生物实验室提供。注：嘉美生物实验室提供绝大多数常用国外原装进口抗体，为实验委托者节约大量实验经费。） 第一组：A组 第二组：B组 转染3天后收集细胞做CHIP-PCR以及WB检测 实验对照：设定的对照有 1、阳性对照（系统阳性对照，Anti-RNA Polymerase II） 2、INPUT对照（DNA片段在沉淀以前，收集下来的对照） 3、阴性对照（非免疫IgG血清吸附，Normal Mouse IgG） 细胞转染流程:略 EZ-ChIP?染色质免疫共沉淀实验检测流程（Upstste Catalog # 17-371) 1、Kit Description：试剂盒内含的RNA聚合酶II阳性对照抗体 2、试剂盒组分： A. Provided Kit Components Store at 4℃: ChIP Blocked Protein G Agarose 1.5 ml ChIP Dilution Buffer, One vial containing 24 ml Low Salt Immune Complex Wash Buffer 24 ml High Salt Immune Complex Wash Buffer 24 ml LiCl Immune Complex Wash Buffer 24 ml TE Buffer 24 ml 0.5 M EDTA 250 ul 5 M NaCl 500 ul SDS Lysis Buffer 10 ml 1 M Tris-HCl, pH 6.5 500 ul 10X Glycine 11 ml 10X PBS 24 ml Store at -20℃: Protease Inhibitor Cocktail II（蛋白酶抑制剂） 2×110 ul RNase A 600 ug of RNase A in 60 ul sterile water. Proteinase K 600 ug of Proteinase K in 60 ul 1M NaHCO3 600 ul Anti-RNA Polymerase II 25ug clone CTD4H8. Normal rat IgG Store at Room Temperature: