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dna提取步骤

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DNA提取步骤

1, 剪刀酒精消毒,高温消毒,冷却,剪取肌肉组织样品2g,液氮研磨至粉末,称取0.15g 左右于2ml的离心管中,加入2ml 的STE缓冲液,静置5min。

2, 4℃,900g离心15min,取上清液,弃沉淀。

3, 4℃,14000g离心30min,倒去上清液,留下沉淀,此沉淀为线粒体。

4, 加入葡萄糖悬浮液200ul,混匀后,冰浴15min。

5, 加2倍,即400ul的变性液混匀,冰浴10分钟。

6, 加1.5倍,即300ul的复性液混匀,室温静置30min。

7, 4℃,12000g离心10min,取上清液加入到1.5ml的离心管中,弃沉淀。

8, 加0.6倍(450ul)异丙醇混匀,-20℃沉淀30min,小心弃上清液。

9, 400ul 70%乙醇洗1~3次。

10, 12000g离心10min,倒去上清液,室温晾干15min。

11, 加100ulTE完全溶解20min,加入RNaseA(2ul),37℃消化1~3h。

12, 加等体积饱和酚(102ul),轻摇15min后,4℃,12000g离心10min,取上清液。13, 加等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)(102ul),轻摇15min后,4℃,12000g离心10min,取上清液。

14,加等体积氯仿(102ul),轻摇15min后,4℃,12000g离心10min,取上清液。

15,加2.5倍无水乙醇(300ul),于-20℃沉淀30min~60min。

16, 4℃,12000g离心10min,弃上清,晾干15min。

17, 50ulTE溶解,置于-20℃备用。

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