吲哚胺23双加氧酶在肿瘤局部免疫耐受中的作用

吲哚胺２，３双加氧酶在肿瘤局部

免疫耐受中的作用

王学军

（天津医科大学附属肿瘤医院重点实验室，天津３０００６０）

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关键词：色氨酸；免疫耐受；肿瘤微环境；Ｔ细胞

中图分类号：Ｈ７３０．２３文献标志码：Ａ文章编号：１００２－２６６Ｘ（２００９）３７－０１１０－０２

吲哚胺２，３双加氧酶（ＩＤＯ）是人体肝外色氨酸代谢限速酶，研究表明，在肿瘤微环境内产生免疫耐受的机制中，多种细胞成分通过高表达ＩＤＯ导致肿瘤局部色氨酸代谢异常，在恶性肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥重要作用。现对ＩＤＯ在肿瘤局部免疫耐受中的作用综述如下。

１ＩＤＯ和色氨酸代谢

ＩＤＯ是含亚铁血红素的酶，人类ＩＤＯ基因位于第８号染色体，长约１５０００ｂｐ，有１０个外显子和９个内含子；启动子端有多个重复序列元件，可对ＩＦＮ－ｌｙ刺激产生反应。编码ＩＤＯ相对分子质量约４２０００，由４０３个氨基酸组成，主要在细胞质中发挥作用，人体调控ＩＤＯ表达主要是ＩＦＮ．１等细胞因子‘“。

色氨酸是哺乳动物体内重要的氨基酸，是维持细胞活化和增殖的必需氨基酸，也是构成蛋白质的成分，其缺乏可致一些重要细胞功能失常。哺乳动物体内色氨酸限速酶主要有色氨酸双加氧酶和ＩＤＯ，前者主要存在于肝组织，尚未发现其与免疫系统有密切联系；后者是肝外惟一催化色氨酸分子中吲哚环氧化裂解并沿犬尿氨酸途径分解代谢的酶，在黏膜较多的肺、消化道、胸腺等器官中表达，正常组织微弱表达，在妊娠、器官移植和肿瘤等特殊或病理状态下ＩＤＯ表达增强，并参与介导局部免疫抑制旧Ｊ。

２ＩＤＯ在肿瘤微环境中的表达

现已发现，在多种肿瘤细胞内ＩＤＯ表达增强。Ｈｉｒｏａｋｉ等１３’首次报道ＩＤＯ表达在肺癌组织中明显增强，其平均水平是良性病变的５倍，最高水平是良性病变的２０余倍。Ｕｙｔ—ｔｅｎｈｏｖｅ等Ｈｏ研究表明，胃癌、头颈部癌、卵巢癌等肿瘤组织中的ＩＤＯ表达阳性率多高于５０％，结直肠癌、胰腺癌和富颈癌等组织中多达１００％。

研究表明，在肿瘤微环境内，恶性肿瘤细胞、树突细胞（ＤＣ）及嗜酸性粒细胞ＩＤＯ表达增强。Ｆａｌｌａｒｉｎｅ等检测大鼠肿瘤淋巴结发现，在浆细胞样ＤＣ内ＩＤＯ表达增强。Ｏｒａｂｏｎａ等¨１在小鼠脾内发现ＩＤＯ在ＣＤ；ＤＣ内高表达，且干扰素调节因子１８是维持ＩＤＯ表达及其功能的主要调控因子。Ｆａｌ．１ａｒｉｎｏ等发现，小鼠脾内ＣＤｌｌｃ＋Ｂ２２０＋１２０Ｇ８＋ＤＣ高表达ＩＤＯ，并通过其表面分子ＣＤ２００受体发挥免疫调节作用。Ａｓｔｉｇｉａｎｏ等用免疫组化法检测２５例非小细胞肺癌患者的癌１１０组织标本，发现表达ＩＤＯ的细胞可能是嗜酸性粒细胞。Ｏｄｅ—ｍｕｙｉｗａ等旧１在哮喘患者的肺嗜酸性粒细胞中发现ＩＤＯｍＲ?ＮＡ表达量上升８倍，此作用仅通过ＩＦＮ－１作用形成，在一定程度上支持上述结论。

３ｌＤＯ与Ｔ细胞免疫耐受

研究表明，在肿瘤微环境中，ＩＤＯ可通过色氨酸耗竭、毒性代谢产物和诱导调节性Ｔ细胞增殖机制抑制局部Ｔ细胞免疫反应。ＩＤＯ表达增强的结果是消耗局部色氨酸，产生犬尿氨酸等代谢产物。体外研究表明，在无色氨酸和（或）犬尿氨酸培养条件下，Ｔ细胞发生增殖抑制、活性降低甚至凋亡。Ｂｒａｎｄａｃｈｅｒ等‘¨发现，结直肠癌患者的肿瘤细胞通过消耗局部色氨酸和产生代谢产物诱导其局部免疫耐受，同时肿瘤局部浸润性Ｔ细胞明显减少。ＢｅＨａｄｏｎｎａ等研究表明，色氨酸代谢物犬尿氨酸下游代谢酶也可诱导Ｔ细胞免疫抑制，而Ｄｃ在ＩＦＮ．Ｙ诱导下可表达上述酶，即使在ＩＤＯ功能缺失情况下，仍可维持局部免疫抑制状态。Ｔ调节细胞（Ｔｒｅｇ）可通过细胞间接触和产生抑制性细胞因子发挥Ｔ细胞免疫抑制功能，在肿瘤局部免疫耐受形成中起关键作用，与ＩＤＯ表达有直接关系。Ｍｕｎｎ等【８１发现，ＩＤＯ（＋）ＤＣ可能通过激活Ｔ细胞表面的蛋白激酶２（ＧＣＮ２）而抑制Ｔ细胞增殖和活性，若通过基因敲除Ｔ细胞表面的ＧＣＮ２表达，则此抑制作用消失；并认为Ｔ细胞表面ＧＣＮ２起探测器作用，专门探测／ＤＯ表达导致的局部环境变化。Ｆａｌｌａｒｉｎｏ等研究发现，从敲除Ｔ细胞ＧＣＮ２基因小鼠获得ｃＷＴ细胞，ＩＤＯ（＋）ＤＣ不能将其转化为Ｔｒｅｇ细胞，提示ＩＤＯ（＋）ＤＣ可通过ＧＣＮ２途径诱导Ｔｒｅｇ细胞形成。最近有研究认为，ＩＤＯ（＋）Ｄｃ与Ｔｒｅｇ细胞可能形成一种反馈调节环路。体外研究发现，通过Ｔｒｅｇ细胞表面ＣＴＬＡ４与ＤＣ表面配体Ｂ７－ｌ或Ｂ７－２结合，Ｔｒｅｇ细胞可促进ＩＤＯ在ＤＣ内高表达，人类ＤＣ内也存在此现象。此外，ＤＣ内ＩＤＯ表达也能以诱导纯真ＣＤ：Ｔ细胞形成Ｔｒｅｇ细胞。因此，有人推测ＩＤＯ可能作为Ｔｍｇ诱导免疫抑制的下游凋控因子，与ＩＤＯ（＋）ＤＣ形成相互作用的反馈调节环路。近期研究表明，ＩＤＯ（＋）肿瘤细胞可直接诱导Ｔｒｅｇ细胞产生。Ｌｉｙａｎａｇｅ等将胰腺癌细胞种植于小鼠，发现其外周血Ｔｒｅｇ细胞增加，其机制尚不完全清楚。Ｃｕｒｔｉ等研究发现，外周血ＩＤＯ表达增强的白血病患者Ｔｒｅｇ细胞明显升高。体外

　万方数据

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植物生长调节剂3-吲哚乙酸的合成

植物生长调节剂3-吲哚乙酸的合成 一、实验目标 1．掌握利用Fe/HCl 体系将-NO2氧化成-NH2的方法； 2．掌握减压蒸馏中真空泵的使用方法； 3．初步掌握利用氮气置换空气的操作方法； 4．初步掌握压热釜的操作方法。 二、产品特性与用途 3-吲哚乙酸的英文名称：3-Indoleacetic acid ，化学式：C10H9NO2，相对分子质量：175.19。 本品为无色结晶，见光后迅速氧化成红色而活性降低，应放在棕色瓶中贮藏。熔点167～169℃，微溶于水、甲苯，易溶于乙酸乙酯。在酸性介质中不稳定，在无机酸作用下能迅速失去活性。其水溶液也不稳定，但其钠、钾盐比游离酸稳定。通常以粉剂或可湿性粉剂使用。 市售3-吲哚乙酸为人工合成产品，其LD50 = 150 mg / kg （小白鼠腹腔注射）。3-吲哚乙酸可以经茎、叶和根系被植物吸收。它对植物生长有刺激作用，可影响细胞分裂、细胞伸长和细胞分化，也影响营养器官和生殖器官的生长、成熟和衰老，可促进植物生根，提高产量，是一种植物生根调节剂。当用于插枝生根的木本植物、草本植物时，可以加速根的形成；当用于处理甜菜种子时，可提高块茎产量与含糖率，也可以促进胡萝卜的生长。 吲哚乙酸由于见光容易分解，在植物体内容易被吲哚乙酸氧化酶分解，并且价格较贵，所以在生产上应用受到限制，主要用于组织培养，诱导愈伤组织和根的形成。 三、实验原理 1．邻甲苯胺的合成 2．N-甲酰基邻甲苯胺的合成 3．吲哚的合成 4．3-吲哚乙酸的合成 CH 3NO 2Fe H-Cl CH 3 NH 2 CH 3NH 2HCOOH CH 3 NHCHO H -OH CH 3NHCHO ( t - C H ) OK N H CH 3 NH 2CO

单胺氧化酶

单胺氧化酶（缩写MAO），EC1.4.3.4，是催化单胺类物质氧化脱氨反应的酶。单胺氧化酶存在于细胞的线粒体外膜上，在人体内分布极广，尤以肝、脑及肾等组织细胞内的含量最高。由于需要黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）作辅因子，因此它属于黄素蛋白酶或含黄素胺氧化酶。 人体内含有两种单胺氧化酶：单胺氧化酶A（MAO-A）和单胺氧化酶B（MAO-B）。两者 都存在于神经元和星形胶质细胞中。除中枢神经系统外，MAO-A还存在于肝、胃肠道和胎盘中，而MAO-B则主要存在于血小板中。 MAO-A是消化道摄取的单胺类物质代谢中的重要酶。MAO的两种亚型都可以使单胺类神 经递质失活，但两者对底物和抑制剂的专一性不同： ?MAO-A偏重于极性芳香胺5-羟色胺、去甲肾上腺素和肾上腺素的分解脱氨，它对选择性抑制剂如氯吉兰敏感。 ?MAO-B偏重于非极性芳香胺苯乙胺的分解脱氨，它对抑制剂司来吉兰和雷沙吉兰敏感。 [2] ?多巴胺被两种MAO亚型分解的机会大致均等。 MAO-A可通过病理途径导致头痛：5-羟色胺可被毛细血管中残留的MAO-A所分解，当它 的含量较少时，血管过度舒张，而产生搏动性头痛。[3] 人和动物的攻击行为与MAO-A基因的变种有关。[4] MAO-A的不同基因型也可能对人对事 物的新奇感产生影响。[5] 吸烟对MAO-B有抑制作用。[6] MAO-B的含量随着年龄的增长而增加，因此MAO-B被认 为是老化的标志，称为老化相关酶。 单胺类物质是一类含有“芳环-CH2-CH2-NH2”的神经递质和神经调质，其中包括儿茶酚胺（多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素）、褪黑素、组胺、5-羟色胺和甲状腺素类似物等。单胺氧化酶所催化的，是单胺被氧化脱氨，生成过氧化氢、氨和相应醛的反应。反应通式可以写为： 生成的醛迅速被醛脱氢酶氧化为相应的羧酸。单胺氧化酶作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺，也作用于长链的二胺。有很强生理作用的单胺类物质在发生这个反应后失活，因此MAO有调节生物体内胺浓度的功能。 在临床检验中，血清MAO升高，见于肝脏病、肢端肥大症、甲亢和糖尿病等。[7] MAO升 高也与抑郁症、痴呆症及巴金森氏症等老年精神病有关。[8] 异丙烟肼和苯异丙肼等单胺氧化酶抑制剂对单胺氧化酶有抑制作用，可用作抗抑郁症的药物，不过由于疗效不佳，且副作用大，现已少用。单胺氧化酶被抑制后，脑中的儿茶酚胺含量增多，有利于延缓衰老。

人二胺氧化酶(DAO)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书

人二胺氧化酶(DAO)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中二胺氧化酶(DAO)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的人二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入二胺氧化酶(DAO)，再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人二胺氧化酶(DAO)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存 标准品：27U/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定

吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定一、原理 1、吲哚乙酸产品概述: 吲哚乙酸可占植物体内吲哚乙酸的50-90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。吲哚乙酸可刺激形成层细胞分裂;吲哚乙酸刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长;促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。吲哚乙酸在器官和整株水平上，吲哚乙酸从幼苗到果实成熟都起作用。吲哚乙酸控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制;当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性;当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性;吲哚乙酸造成顶端优势;延缓叶片衰老;施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落;吲哚乙酸促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。 2、试验原理: 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 二、准备仪器及药品 T6新悦型分光光度计离心机 恒温水浴锅天平 研钵试管 移液管烧杯 20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0(见附表2)。

1mmol/L2，4—二氯酚:称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。 1mmol/L氯化锰:称取MnCl?4HO 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。 22 1mmol/L吲哚乙酸:称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约 90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。 吲哚乙酸试剂A或B(任备其中之一): 试剂A:15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸(比重为1.84)，500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。用时1ml样品中加入试剂4ml。 试剂B:10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。用时于样品中加入试剂。试剂B较试剂A灵敏。 三、操作步骤 1(将大豆或绿豆种子于30?温箱中萌发3梍4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶，留下胚轴作材料。 2(取0.5g下胚轴，置研钵中，加入预冷的磷酸缓冲液5ml，置冰浴中研磨成匀浆。再按100mg鲜重材料加0.5ml磷酸缓冲液的比例，用磷酸缓冲液洗涤研钵。离心(4000r/min)10分钟，所得上清液即为粗酶液。 3(取试管2支，于一试管中加入氯化锰1ml，二氯酚1ml，IAA2ml，酶液1ml，磷酸缓冲液5ml，混合均匀。另一试管中除酶液用磷酸缓冲液代替外，其余成分相同。一起置于30?恒温水浴中，保温30分钟。 IAA(175ug磷酸缓冲液处理 MnCl2 2、4-二氯酶液 /mL) (pH6.0) 酚 实验组 1 1 2 1 5 对照组 1 1 2 0 6 4(吸取反应混合液2ml，加入吲哚乙酸试剂B 4ml，摇匀，置于30?的黑暗处保温30分钟，使显色。

肿瘤细胞免疫治疗的原理

顾名思义，肿瘤细胞免疫治疗就是调动人体强大的免疫系统来对抗癌症的治疗方法。那么，人体免疫系统有何强大之处?其对抗肿瘤的原理是什么呢?本期专题将对此做一个简单的解读。 人体免疫系统的基石是细胞，而人体本身就是由各种细胞组成的名副其实的细胞王国，在这个王国里，免疫系统是最忠实的守护神。它有着庞大的防御工事和数量众多的军队，这套防御系统成功地抵御了外敌的入侵，镇压了内部的叛变分子，如果没有他们的出色工作，细胞王国将不能正常运转，感染、癌症将会使这个王国覆灭。 细胞王国的防御工事中最重要的部分是皮肤，完整的皮肤保护了王国绝大多数的边境不受外敌侵犯，而在与外界相通的各个通商口岸，我们也是层层设防。我们口腔中的唾液，含有一种溶菌酶，可以高效地分解细菌;我们的胃酸几乎可以”酸死”食物中的绝大多数微生物，当然也会有漏网之鱼和对强酸有抵抗力的致病菌，如胃中的幽门螺旋杆菌可以在胃酸中闲庭信步(这家伙据科学家说是引起胃炎的祸首);我们的鼻毛虽然不雅，却交织成一张大网，兜住了大部分的灰尘和大点的细菌;呼吸道中覆盖的恶心的黏液可以粘住绝大多数的入侵者，然后通过擤鼻涕和吐痰将它们扫地出门(当然，还通过打喷嚏将敌人吹走)。 对付普通敌人，免疫细胞大军只需派出队伍里的基层士兵 以上说的是细胞王国的强大边境防线，虽然阵地工事建得是固若金汤，拒外来之敌于千里之外，但俗话说得好，”明枪易躲，暗箭难防”，对于出现在人体内部的敌人，如细菌、病毒，这道防线可以说是形同虚设。别忘了免疫系统还有着一支庞大而高效的军队(免疫细胞)，这支军队不仅数量超卓，而且种类繁多，士兵各司其职，战争来临时紧密联系、相互配合，拳头握在一起，把敌人打得落花流水。 免疫细胞大军大部分时间呆在血液中(它们就是我们常说的白细胞)，它们和负责传送氧气的红细胞、负责止血的血小板都来源于骨髓造血干细胞。如果细胞王国安定团结，这些造血干细胞就大多会成长为红细胞，负责传送氧气，只保持一小部分的白细胞维持战斗力;如果细胞王国面临外敌入侵，那骨髓就马上开足马力大量生成造血干细胞，而且这些”儿童”大部分会成长为战士，白细胞数量在短期内大增，全国进入备战状态。 对付普通敌人(如异物、细菌)，免疫细胞大军只需派出队伍里的基层士兵即可搞定，比如中性粒细胞一般与细菌死磕，多数与细菌同归于尽，我们伤口化脓感染的脓液，其实主要就由中性粒细胞的尸体组成。巨噬细胞可将来犯之敌一口吞掉，并将敌人的情报上报上级，这样下次再看到同样的敌人就可以直接消灭。再难对付点的敌人可以由B细胞产生的抗体来消灭，这些抗体像精确制导的”导弹”一样一对一的消灭敌人，极为高效。 对付狡诈多变、凶残暴戾的癌细胞则需要出动精英部队

二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒说明书 微量法

二胺氧化酶（DAO）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号：BC1285 规格：100T/48S 产品内容： 提取液：液体70mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体0.25mL×1支，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，使用时加2mL水溶解，4℃可保存1个月。 试剂三：液体1mL×1支，4℃保存。 产品说明： DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。 DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质，在500nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。 自备实验用品及仪器： 天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、96孔板/玻璃比色皿、蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液） 进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血清等液体：直接测定。

二、测定操作表： 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。 2、操作表 对照管测定管 粗酶液（μL）5050 提取液（μL）128108 试剂一（μL）22 试剂二（μL）2020 试剂三（μL）20 混匀，37℃水浴30min，测定500nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。 三、酶活性计算公式： a.使用96孔板测定的计算公式如下 1、动物组织DAO活力的计算 （1）按蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO（U/mg prot）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(cpr×V样本)÷T=30×ΔA÷cpr （2）按样本鲜重计算 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。DAO（U/g鲜重）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(W÷V提取×V样本)÷T=30×ΔA÷W 2、血清（浆）DAO活力的计算 单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO（U/L）=ΔA÷d÷ε×V反总÷V样本÷T=30×ΔA V反总：反应总体积，0.2mL；V样本：加入粗酶液体积，0.05mL； V提取，加入提取液体积，1mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本鲜重，g；d：光径，0.6cm；

单胺氧化酶酶活测试

单胺氧化酶酶活的测试 作者：陈志坚 1 准备工作 0.2M pH=7.6的缓冲液的制备：A：B=87：13（抽滤冰箱后使用） 0.2M Na2HPO4：35.82g Na2HPO4于500mL蒸馏水溶解（A） 0.2M NaH2PO4：15.605g NaH2PO4于500mL蒸馏水溶解（B） 0.3M蔗糖：10.268g蔗糖，加入100mL缓冲液 2 酶液制备 将1只雄性wista大鼠脱颈椎处死，取出其肝脏，用预冷的磷酸缓冲液冲洗肝脏表面。将肝脏剪碎，用磷酸缓冲液(pH=7．6)洗涤数次以冲洗去血水，待洗涤干净后，加入20 mL，0．3 M蔗糖缓冲液进行匀浆，充分匀浆后，各取10 mL倒入两个50 mL离心管中。用20 mL，o．3 M蔗糖缓冲液洗涤匀浆器后，各取10 mL倒入前面所述的离心管中。经托盘天平配平(误差不能超过0．01 g)后进行低温差速离，在-4℃下，1000×g离心10 min。吸取上清液，将上清液配平，1200×g离心15 min，吸取上清液，将上清液配平，10000Xg离心30 min，弃去上清液，沉淀加4 mL的磷酸缓冲液混匀，得到Wistar大鼠肝脏线粒体浓缩物，即为实验用单胺氧化酶。 3 酶活性抑制测试 所提取的酶液按照1:3倍稀释（体积比），并进行超滤。（2只小鼠肝脏，最后我们拿到4mL 酶原液，那我们就稀释到12mL使用） 3.1 配药液 配药液（浓度为100μmol/L）= (Mw *10-7 g/ml）：x/(10-7*M)=Y 【X】克晶体，用【X*107/MW】ml溶剂溶解x为晶体质量，M为晶体的相对分子质量，Y为溶剂的体积。 例如：称出晶体质量为0.0010g，M=341，则溶解它的溶剂（DMSO:水=1:1）Y就为 Y=0.0010/（10-7*341）=29ml，用29ml的（DMSO:水=1:1）溶剂溶解0.0010g的晶体。 3.2 底物、显色液

血清单胺氧化酶(MAO)活性测定及意义

血清单胺氧化酶（MAO）活性测定及意义 单胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO），为催化单胺氧化脱氨反应的酶，作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺，也作用于长链的二胺。对所谓生物胺，即酪胺、儿茶酚胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素等也有作用。此酶多见于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，但在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在。在细胞内存在于线粒体外膜上，是不溶性酶。含FAD。1-异烟酰-2-异丙基肼（iproniazid）、β-苯基异丙基肼（pheniprazine）等药物对此酶有强烈的竞争性的阻抑作用，称为MAO抑制剂，但如果给动物，则可提高脑中去甲肾上腺素和5-羟色胺等单胺的浓度，造成行动的刺激。所以认为单胺氧化酶具有调节生物体内胺浓度的功能。MAO有MAO-Ⅰ、MAO-Ⅱ及MAO-Ⅲ三型，血清MAO-Ⅰ活性升高常见于器官纤维化，特别是肝硬化和肢端肥大症；血清MAO-Ⅱ活性升高常见于大面积肝坏死。 1．正常参考值： 健康成人血清MAO活性小于36 U/L。 2．临床意义： MAO为广泛分布于肝、肾、胃、小肠及脑组织中的酶，在细胞内定位于线粒体膜外。血清MAO活性测定是检查肝纤维化病变的重要指标。纤维化发生在汇管区之间或汇管中心区之间时，MAO活性明显增高，阳性率在80%以上；在假小叶周围有广泛纤维化形成时，则几乎全部增高，且升高同幅度最大。纤维化病变侵入肝实质内时，升高率仅为30%。 血清MAO-Ⅰ活性升高主要见于肝硬化和肢端肥大症；而MAO-Ⅱ升高则主要见于大面积肝坏死。器官纤维化患者血清MAO活性升高与结缔组织代谢亢进有关；爆发性

肝炎患者血清MAO活性升高与MAO从坏死的肝细胞线粒体上脱落有关。因此，爆发性肝炎、重症肝细胞坏死时，线粒体的MAO释放，血清中该酶活性增高，阳性率可达73%以上。

单胺氧化酶抑制剂

单胺氧化酶抑制剂【转】 单胺氧化酶抑制剂有那些？ 首先应把单胺氧化酶抑制剂这个名词解释清楚，所谓单胺。在化学上称做一元胺，指结构中含有一个氨基的物质，在自然界分布广泛，如多巴胺和5－羟色胺都是单胺类物质，有些食物如奶酪也富含单胺。许多单胺类物质有着很强的生理活性（如升高血压的作用）。再说说什么是单胺氧化酶。单胺氧化酶是一类能够选择性代谢（氧化脱氨基）单胺类物质的酶系，单胺氧化酶在人体内分布极广，除了红细胞之外，几乎所有的细胞内都有单胺氧化酶，专门对付单胺。前面讲到，单胺具有很强的生理作用，是个“危险分子”，它们一进入人体，在胃肠道和肝脏，便遭到单胺氧化酶的“围歼”，迫使它们氧化失活（失去活性），绝不让它们进入血循环。如果没有单胺氧化酶及时灭活这些单胺类物质，则可能引起严重后果，从这个意义上说，单胺氧化酶是有保护作用的。再说单胺氧化酶抑制剂。单胺氧化酶抑制剂就是专门抑制单胺氧化酶的，单胺氧化酶一旦受到抑制，单胺类物质便又可以“兴风作浪”了。同是单胺氧化酶抑制剂，药物的化学结构可能大相径庭，治疗的疾病也各种各样。那么，究竟哪些药是单胺氧化酶抑制剂呢？ 常用的单胺氧化酶抑制剂有： 苯乙肼、异烟肼（雷米封）、异丙肼、异卡波肼（异唑肼、闷可乐）、苯异丙肼、异丙烟肼、异恶唑酰肼、苯二肼、沙夫肼、丙炔苯丙胺、超苯环丙胺、反苯环丙胺、吗氯贝胺、巴吉林、和苯环丙胺、尼亚胺、灰黄霉素、百乐明(强内心)等； 1.治疗帕金森病： 咪多吡（司来吉兰（林）、丙炔苯丙胺、芬兰奥立安集团）----B型单胺氧化酶抑制剂 舒震宁（司来吉林：法国狄朗有限公司）----B型单胺氧化酶抑制剂 思吉宁：盐酸司来吉兰（林）片 克金平：司来吉兰（林） 烟草及其烟雾中的单胺氧化酶抑制剂2，3，6-三甲基1，4-萘醌 2.降压药：帕吉林（优降宁） 3、止泻药：痢特灵（呋喃唑酮） 4、抗肿瘤药：甲基苄肼(Procarbazine、甲苄肼，甲苄芋肼、丙卡巴肼) 5、局麻药：普鲁卡因、奴弗卡因novocaine 6、抗衰老药： 中老年生物素、益康宁、复方益康宁、福康乐、老年维生素H3 某些中药也有单胺氧化酶抑制作用，如靛红、鹿茸、山楂、何首乌等。 下列药物禁止或不宜与单胺氧化酶抑制剂合用，否则可能引起不良反应，甚至是严重的、危及生命的不良反应，如血压骤然升高，甚至导致高血压危象，心动过速，呼吸困难，运动失调，高热，精神错乱等。 ●抗抑郁药：丙米嗪（米帕明）、氯米帕明、阿米替林等三环类抗抑郁药，马普替林、米氮平、米安色林等四环类抗抑郁药，氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、茚达品、舍曲林、西酞普兰、安非他酮等5羟色胺摄取抑制剂，苯丙胺、诺米芬新等。 ●降压药：可乐定、胍乙啶、利血平以及含利血平的复方制剂。 ●中枢神经抑制药：水合氯醛、卤恶唑仑、替吡度尔、苯二氮卓类。 ●镇咳药：右美沙芬及其复方制剂。 ●平喘药：麻黄碱。 ●镇痛药：哌替啶、舒马普坦、芬太尼。 ●抗帕金森药：左旋多巴。 ●抗过敏药：苯噻啶。

常用的单胺氧化酶抑制剂有

常用的单胺氧化酶抑制剂有： 苯乙肼、异烟肼（雷米封）、异丙肼、异卡波肼（异唑肼、闷可乐）、苯异丙肼、异丙烟肼、异恶唑酰肼、苯二肼、沙夫肼、丙炔苯丙胺、超苯环丙胺、反苯环丙胺、吗氯贝胺、巴吉林、和苯环丙胺、尼亚胺、灰黄霉素、百乐明(强内心)等。以下按照其治疗作用的不同分类列出：1、治疗帕金森病： 咪多吡（司来吉兰（林）、丙炔苯丙胺、芬兰奥立安集团）----B型单胺氧化酶抑制剂 舒震宁（司来吉林：法国狄朗有限公司）----B型单胺氧化酶抑制剂 思吉宁：盐酸司来吉兰（林）片 克金平：司来吉兰（林） 烟草及其烟雾中的单胺氧化酶抑制剂2，3，6-三甲基1，4-萘醌 2、降压药：帕吉林（优降宁） 3、止泻药：痢特灵（呋喃唑酮） 4、抗肿瘤药：甲基苄肼(Procarbazine、甲苄肼，甲苄芋肼、丙卡巴肼) 5、局麻药：普鲁卡因、奴弗卡因novocaine 6、抗衰老药：中老年生物素、益康宁、复方益康宁、福康乐、老年维生素H3 7、某些中药也有单胺氧化酶抑制作用，如靛红、鹿茸、山楂、何首乌等。 下列药物禁止或不宜与单胺氧化酶抑制剂合用，否则可能引起不良反应，甚至是严重的、危及生命的不良反应，如血压骤然升高，甚至导致高血压危象，心动过速，呼吸困难，运动失调，高热，精神错乱等。 ●抗抑郁药：丙米嗪（米帕明）、氯米帕明、阿米替林等三环类抗抑郁药，马普替林、米氮平、米安色林等四环类抗抑郁药，氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、茚达品、舍曲林、西酞普兰、安非他酮等5羟色胺摄取抑制剂，苯丙胺、诺米芬新等。 ●降压药：可乐定、胍乙啶、利血平以及含利血平的复方制剂。 ●中枢神经抑制药：水合氯醛、卤恶唑仑、替吡度尔、苯二氮卓类。 ●镇咳药：右美沙芬及其复方制剂。 ●平喘药：麻黄碱。 ●镇痛药：哌替啶、舒马普坦、芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、曲马多等。 ●抗帕金森药：左旋多巴。 ●抗过敏药：苯噻啶。 ●促智药：阿米三嗪－萝巴新（都可喜）。 ●单胺氧化酶抑制剂：单胺氧化酶抑制剂之间亦不可合用。单胺氧化酶抑制剂作用时间较长，必须在停药两周以上方可开始服用以上药物。如果先用了上述药物，也必须停药一段时间才可以开始用单胺氧化酶抑制剂，至于停药多长时间，每种药都不一样，比如氟西汀就至少要停药5周，请注意仔细阅读药品说明书。 单胺氧化酶抑制剂亦可通过抑制肝药酶系统，影响某些药物的代谢，致血药浓度升高，半衰期延长，药理活性增强。例如有报道单胺氧化酶抑制剂可延缓口服降糖药甲磺丁脲、氯磺丙脲、巴比妥类、苯妥英钠、乙醚和抗组胺药异丙嗪和苯海拉明的代谢，使这些药的药效增强。 特别要提及的是，服用单胺氧化酶抑制剂期间，禁食富含单胺的食物和饮料，如奶酪、酸奶、动物肝脏、腌鱼、香肠、腊肉、蚕豆、扁豆、巧克力、酵母、腐乳、罐头无花果、菠萝、啤酒、葡萄酒、柑橘类果汁等，否则可因酪胺大量吸收造成血压急剧上升。曾有人报道服用苯环丙胺的患者，食用鸡肝后均引起血压升高。

上市十大重磅新药

2018年上市十大重磅新药 作者: 李敏华 生物制药公司的研究开发人员在审视他们的后期开发项目时，都会津津乐道、滔滔不绝地谈论医疗领域尚未满足的需求。然而，市场是严酷的，潜在的希望会激起投资者的兴趣，有的创新他们也可能冷淡以对。着名的市场调查机构Evaluate公司日前公布了一份2018年上市的预期销售峰值Top10药品。一些成熟的公司正在鼎力为2018年上市新的重磅药品鼓足干劲。在艾滋病和糖尿病方面有了新的进展，10个预期的重磅药品中有6个是新的癌症治疗药物或罕见病治疗药物。Bictegravir/F/TAF企业：吉利德销售峰值：亿美元类别：艾滋病毒感染这是吉利德最大的“明星”项目，将实验性整合酶链转移抑制剂Bictegravir（50mg）（BIC）与恩曲他滨/替诺福韦甲酰胺（FTC/TAF）固定剂量组合，用于艾滋病患者治疗。吉利德公司已于今年6月12日向美国FDA提交了新药批准申请，并计划迅速在欧洲提交上市申请。该组合新药可以简化艾滋病治疗，给患者带来方便。该产品一直被寄予厚望，2017年1月，EvaluatePharma预测其2022年销售额可达亿美元。现在，吉利德公司正等待2018年2月12日（PDUFA，即美国FDA新药审批规定日期）的审批结果，并为该药上市作准备。该药将显示出吉利德公司在艾滋

病治疗市场的地位，不少分析师给予高度评价，对其期望值明显提高。吉利德多年来一直是抗艾滋病毒药物市场的主角，无意将市场拱手让给葛兰素史克刚刚（11月21日）获准的两种药物组合Juluca（Dolutegravir-Rilpivirine）。葛兰素史克的这个产品也是这个领域的标志性成就，鸡尾酒疗法依从性比以往更好；而吉利德的优势在于其更加了解艾滋病市场。届时，吉利德科学和葛兰素史克将在市场上直接竞争。Semaglutide企业：诺和诺德销售峰值：27亿美元类别：糖尿病12月5日，美国FDA为诺和诺德（Novo Nordisk）的semaglutide（司美鲁肽）开了绿灯，这是一种每周一次的GLP-1（胰高血糖素样肽-1）糖尿病药物。它将以Ozempic 为商品名销售，肌肉注射给药，其作用机理与礼来的Trulicity （Dulaglutide，杜拉鲁肽）相同，且在一项直接比较研究中击败了Trulicity。与同样每周一次的Trulicity相比，Semaglutide降低HbA1c（糖化血红蛋白）和体重更加显着。这将给礼来带来相当大的压力。作为销售预期高达20亿美元的重磅药品，诺和诺德还启动了一项大型的肥胖症试验，意在观察能否让病人摆脱导致糖尿病的体重问题。这使得该药对市场上所有的相关药品造成明显的威胁，其它药品在这方面都没有明显作用。Epacadostat企业：Incyte公司销售峰值：亿美元类别：肿瘤Epacadostat是Incyte公司研发的一种小分子吲哚胺2,3-双加氧酶（Indoleamine 2,3-dioxygenase，

DAO,二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书

DAO，二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书 本试剂仅供研究使用 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔 中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀； 然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为90ng/L，60ng/L ，30ng/L，15ng/L，7.5ng/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相 同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍 稀释后备用。 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后 弃去，如此重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测 定应在加终止液后15分钟以内进行。 DAO，二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书 注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

沙利度胺治疗多发性骨髓瘤的临床应用

沙利度胺治疗多发性骨髓瘤的临床应用 【关键词】沙利度胺;多发性骨髓瘤;治疗结果 20世纪50年代沙利度胺(反应停)最先在德国上市，作为镇静、镇痛药，其主要用于治疗妊娠恶心、呕吐，由于其严重的致畸作用而停用。但随着深入研究，发现其在免疫、抗炎、抗血管生成的药理和一些疑难病症上的临床治疗研究中取得了令人欣喜的结果，尤其在治疗多发性骨髓瘤(MM)的研究更是其中热点。本文以国内外发表的文献为依据，就沙利度胺的药理、治疗MM作用机制、临床疗效、不良反应等综述如下。 1 概述 MM是一种起源于骨髓单克隆浆细胞的恶性肿瘤性疾病，约占全部恶性肿瘤的1%，血液恶性肿瘤的10%。大多数患者发病年龄超过60岁，且呈增长趋势。MM发病率为(3～4)/10万，每年新增病例数呈逐年增多趋势[1]。MM起病缓慢，可有数月至十余年无症状期，早期易被误诊。MM的临床表现繁多，持续性的无法解释的骨骼疼痛(特别是在背部或胸廓),肾衰竭,反复发生细菌性感染(特别是肺炎球菌性肺炎)是最常出现的症状，病理性骨折和椎骨压缩常见,有些患者以贫血,伴乏力和疲劳为主,少数患者有高黏滞综合征，淋巴结和肝脾肿大不常见，MM病因不明，在骨髓瘤患者培养的树突状

细胞中,发现了与卡波西肉瘤相关的疱疹病毒,提示两者存在一定的联系。该病毒编码白介素6(IL6)的同系物，而人类IL6可促进骨髓瘤生长,同时刺激骨的重吸收,此种特殊的细胞来源不明。通过免疫球蛋白的基因序列和细胞表面标志分析，提示为后生发中心细胞恶性变而来。MM标准治疗为间断化疗，在老年患者中多应用马法兰和泼尼松。MM 是难治性疾病，其有效药物是烷化剂和皮质激素。传统化疗可缓解，但完全缓解率低于10%，自体干细胞移植联合大剂量化疗治疗可明显延长无病生存期及总生存期。但在治疗过程中有可能发生耐药现象而致病情进展或复发，且复发性骨髓瘤患者治疗效果较差。沙利度胺是20世纪90年代末最先引进MM治疗的，并有一定疗效，被视为多发性骨髓瘤患者的新希望。 2 沙利度胺的药理作用 (1) 免疫调节作用：沙利度胺抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)的合成,能够诱发并增强IL4和IL5的合成，抑制植物凝集素刺激人外周血单核细胞合成干抗素γ(IFNγ)，降低TNFα、IL6和IL10 mRAN的水平，沙利度胺还可以激活T淋巴细胞产生IL2，促进T淋巴细胞增殖。(2) 抑制肿瘤细胞生长作用：沙利度胺能够抑制碱性成纤维细胞产生因子的表达，进而减少血管的生成。此外，沙利度胺还可以通过其代谢产物抑制肿瘤细胞与ConA

褪黑素在植物中的功能分析

褪黑素在植物中的功能分析 一．褪黑素简介 （1）褪黑素的分子式为C13H16N2O2，相对分子质量为232.27，熔点为116 ～118℃，褪黑素的生物合成主要是在松果腺细胞内进行，以色氨酸为原料，经羟化、脱羧及N-乙酰转移酶等的催化作用，最终形成褪黑素。 （2）褪黑素（(N-acetyl-5-methoxytryptamine，N-乙酰基-5-甲氧基色胺）作为一种主要由松果体分泌的（哺乳动物和人）神经内分泌激素（吲哚胺类激素，主要在夜间分泌），有调节睡眠 / 觉醒周期、免疫调节、细胞凋亡调节及抗氧化等多种生理功能。在正常生理状态下，人类和哺乳动物血清褪黑素浓度呈昼夜节律性波动，表现为夜间分泌达到峰值，白天则降至谷值。 （3）褪黑素的化学结构： 二．褪黑素在植物中的功能分析 （1）褪黑素对植物生长调节的作用 ①促进根的生长与再生：

（i）在植物中褪黑素具有与吲哚乙酸（ＩＡＡ）相似的生理功能。可能因为褪黑素与吲哚乙酸具有相似的结构，所以它可能结合在吲哚乙酸受体上行使相应功能; （ii）低浓度可以促进不定根和侧根的形成，高浓度则起抑制作用。因此，褪黑素促进植物生根的作用与其施加浓度密切相关，主要作用方式是以提高内源吲哚乙酸的含量为主;（实验植物：羽扇豆、樱桃） （iii）与吲哚乙酸的内源含量水平相近，推测二者可能协同进植物的生长发育。（实验植物：羽扇豆、单子叶大麦、燕麦、牧草） ②提高种子萌发率： 褪黑素很容易进入种子内部，并且褪黑素具有抗氧化能力，因此可以保护种子内的脂类抵抗氧化伤害，从而提高了其活力和萌发率； ③对植物繁殖的调节作用： 植物内源褪黑素的含量变化可能会影响花的发育，对植物的繁殖有一定的作用，起到类似开关的作用，引导植物由有性向无性生殖转换。 （2）褪黑素在植物中的抗氧化作用

吲哚乙酸氧化酶活性的测定

植物生理学模块实验指导 李玲主编 科学出版社 吲哚乙酸氧化酶的测定方法 【实验目的】 学习用比色皿法测定吲哚乙酸氧化酶 【实验原理】 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶懂得作用下，被氧化破坏失去活性。吲哚乙酸氧化酶活力的大小可通过其破坏吲哚乙酸的速度表示，用比色法测定吲哚乙酸的含量。 【器材与试剂】 1.实验仪器与用具 分光光度计、离心机、恒温水浴锅、天平、研钵、试管、移液管、烧杯 2.实验试剂 1mmol/L 2,4-二氯酚：称取16.3mg 2,4-二氯酚，用蒸馏水溶解并定容至100ml。 1 mmol/L氯化锰：称取19.8mg MnCl2·4H2O，用蒸馏水溶解并定容至100ml。 1 mmol/L吲哚乙酸：称取17.5mg IAA，用少量乙醇溶解，用蒸馏水定容至100ml。 吲哚乙酸试剂：10ml 0.5 mol/L FeCl3，500ml 35% 过氯酸，使用前混合即可，不光保存。用时将1ml样品加入2ml试剂。 20 mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0） 3.实验材料 同过氧化氢酶 【实验步骤】

1. 称取植物组织材料鲜重1.0g，置于研钵中，加5ml预冷的磷酸缓冲液研磨成匀浆，再加入1ml磷酸缓冲液稀释，4000r/min离心20min，上清液为粗酶提取液。 2. 取试管2支，于1支试管中加入氯化锰1ml、2,4-二氯酚1ml、IAA2ml、粗酶提取物1ml、磷酸缓冲液5ml，混合。 3. 吸取反应混合液2ml，加入吲哚乙酸试剂4ml，摇晕。在黑暗条件下，置于30℃恒温水浴中20min，使显色。 4. 将显色的反应液与分光光度计中测定530nm处的OD值。根据读数从标准曲线上查出相应的吲哚乙酸残留量。 5. 配制浓度从0~30μg/ml的吲哚乙酸浓度，按照上述方法，分别测定OD值，绘制标准曲线或计算直线回归方程。 【实验报告】 按照下列公式，计算不同处理的材料吲哚乙酸氧化酶的活力（μg IAA/g鲜重·h）。 式中，C1为反应液中残留的酶IAA量（μg/ml）；C2为无酶提取液中的IAA量（μg/ml）；V1为样品制得的粗酶提取液体积（ml）；V为反应液中粗酶提取物体积（ml）；W为测试材料鲜重（g）；t为反应时间；10为反应液体积（ml）。 【注意事项】 制作标准曲线时，OD值在0.2~0.6时，测量的误差最小，所以当反应液浓度测定的OD 值大于0.6且接近1时，需要稀释后才能进行测定。 【思考题】 反应混合液与吲哚乙酸试剂混合后，为什么要在暗条件下对IAA进行显色反应？

二胺氧化酶(Diamine Oxidase,DAO)试剂盒说明书

货号：MS1406 规格：100管/48样二胺氧化酶（Diamine Oxidase，DAO）试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。 测定原理： DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在460nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。 自备实验用品及仪器： 天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。 试剂组成和配制： 提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体0.25mL×1支，4℃保存。 试剂二：液体2mL×1管，4℃保存。 试剂三：液体1mL×1管，4℃保存。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血清等液体：直接测定。 测定操作表： 1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至460nm，蒸馏水调零。 酶活性计算公式： 第1页，共3页

单胺氧化酶抑制剂

关于单胺氧化酶抑制剂 全网发布：2011-08-17 16:19 发表者： (访问人次：2937) 有经验的麻醉医师都知道，许多常用的麻醉药如杜冷丁、芬太尼等说明书上都在注意事项中明确提示“不得与单胺氧化酶抑制剂合用”。单胺氧化酶抑制剂都包括哪些药物呢 首先应把单胺氧化酶抑制剂这个名词解释清楚，所谓单胺，在化学上称做一元胺，指结构中含有一个氨基的物质，在自然界分布广泛，如多巴胺和5－羟色胺都是单胺类物质，有些食物如奶酪也富含单胺。许多单胺类物质有着很强的生理活性（如升的作用）。再说什么是单胺氧化酶。单胺氧化酶是一类能够选择性代谢（氧化脱氨基）单胺类物质的酶系，单胺氧化酶在人体内分布极广，除了红细胞之外，几乎所有的细胞内都有单胺氧化酶，专门对付单胺。前面讲到，单胺具有很强的生理作用，是个“危险分子”，它们一进入人体，在胃肠道和肝脏，便遭到单胺氧化酶的“围歼”，迫使它们氧化失活（失去活性），绝不让它们进入血循环。如果没有单胺氧化酶及时灭活这些单胺类物质，则可能引起严重后果，从这个意义上说，单胺氧化酶是有保护作用的。再说单胺氧化酶抑制剂，单胺氧化酶抑制剂就是专门抑制单胺氧化酶的，单胺氧化酶一旦受到抑制，单胺类物质便又可以“兴风作浪”了。同是单胺氧化酶抑制剂，药物的化学结构可能大相径庭，治疗的疾病也各种各样。那么，究竟哪些药属于单胺氧化酶抑制剂呢 常用的单胺氧化酶抑制剂有： 苯乙肼、异烟肼（雷米封）、异丙肼、异卡波肼（异唑肼、闷可乐）、苯异丙肼、异丙烟肼、异恶唑酰肼、苯二肼、沙夫肼、丙炔苯丙胺、超苯环丙胺、反苯环丙胺、吗氯贝胺、巴吉林、和苯环丙胺、尼亚胺、灰黄霉素、百乐明(强内心)等。以下按照其治疗作用的不同分类列出： 1.治疗帕金森病： 咪多吡（司来吉兰（林）、丙炔苯丙胺、芬兰奥立安集团）----B型单胺氧化酶抑制剂 舒震宁（司来吉林：法国狄朗有限公司）----B型单胺氧化酶抑制剂 思吉宁：盐酸司来吉兰（林）片 克金平：司来吉兰（林） 烟草及其烟雾中的单胺氧化酶抑制剂2，3，6-三甲基1，4-萘醌 2.降压药：帕吉林（优降宁） 3、止泻药：痢特灵（呋喃唑酮） 4、抗肿瘤药：甲基苄肼(Procarbazine、甲苄肼，甲苄芋肼、丙卡巴肼) 5、局麻药：普鲁卡因、奴弗卡因novocaine 6、抗衰老药：中老年生物素、益康宁、复方益康宁、福康乐、老年维生素H3 7、某些中药也有单胺氧化酶抑制作用，如靛红、鹿茸、山楂、何首乌等。 下列药物禁止或不宜与单胺氧化酶抑制剂合用，否则可能引起不良反应，甚至是严重的、危及生命的不良反应，如血压骤然升高，甚至导致，心动过速，呼吸困难，运动失调，高热，精神错乱等。 ●抗药：丙米嗪（米帕明）、氯米帕明、阿米替林等三环类抗抑郁药，马普替林、米氮平、米安色林等四环类抗抑郁药，氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、茚达品、舍曲林、西酞普兰、安非他酮等5羟色

生长素

生长素 生长素（auxin)是一类含有一个不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内源激素，英文简称IAA，国际通用，是吲哚乙酸（IAA）。4-氯-IAA、5-羟-IAA、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸等为类生长素。1872年波兰园艺学家谢连斯基对根尖控制根伸长区生长作了研究；后来达尔文父子对?草胚芽鞘向光性进行了研究。1928年温特首次分离出这种引起胚芽鞘弯曲的化学信使物质，命名为生长素。1934年，凯格等确定它为吲哚乙酸，因而习惯上常把吲哚乙酸作为生长素的同义词。 生长素在扩展的幼嫩叶片和顶端分生组织中合成，通过韧皮部的长距离运输，自上而下地向基部积累。根部也能生产生长素，自下而上运输。植物体内的生长素是由色氨酸通过一系列中间产物而形成的。其主要途径是通过吲哚乙醛。吲哚乙醛可以由色氨酸先氧化脱氨成为吲哚丙酮酸后脱羧而成，也可以由色氨酸先脱羧成为色胺后氧化脱氨而形成。然后吲哚乙醛再氧化成吲哚乙酸。另一条可能的合成途径是色氨酸通过吲哚乙腈转变为吲哚乙酸。 在植物体内吲哚乙酸可与其它物质结合而失去活性，如与天冬氨酸结合为吲哚乙酰天冬氨酸，与肌醇结合成吲哚乙酸肌醇，与葡萄糖结合成葡萄糖苷，与蛋白质结合成吲哚乙酸-蛋白质络合物等。结合态吲哚乙酸常可占植物体内吲哚乙酸的50~90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。 植物组织中普遍存在的吲哚乙酸氧化酶可将吲哚乙酸氧化分解。 生长素有多方面的生理效应，这与其浓度有关。低浓度时可以促进生长，高浓度时则会抑制生长，甚至使植物死亡，这种抑制作用与其能否诱导乙烯的形成有关。生长素的生理效应表现在两个层次上。 在细胞水平上，生长素可刺激形成层细胞分裂；刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长；促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。 在器官和整株水平上，生长素从幼苗到果实成熟都起作用。生长素控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制；当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性；当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性；吲哚乙酸造成顶端优势；延缓叶片衰老；施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落；生长素促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。 近年来提出激素受体的概念。激素受体是一个大分子细胞组分，能与相应的激素特异地结合，尔后发动一系列反应。吲哚乙酸与受体的复合物有两方面的效应：一是作用于膜蛋白，