Tiangen产品DP302--细菌基因组提取试剂盒
产品简介
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
提取得率
材料提取量DNA得量
细菌培养液106-108 cells 5-20 μg
产品特点
简单快速：1 h内即可获得超纯的基因组DNA。
超纯：获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。
注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并摇匀后使用。
3．所有的离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。操作步骤
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 取细菌培养液1-5 ml，10,000 rpm(~11,500×g)离心1 min，尽量吸净上清。
2. 向菌体沉淀中加入200 μl缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮。
注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶进行破壁处理，具体方法为：加入180 μl缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton；终浓度为20 mg/ml的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制，否则会导致溶菌酶无活性))，37 ℃处理30 min以上。
如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15 sec，室温放置5 min。
3. 向管中加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
4. 加入220 μl缓冲液GB，振荡15 sec，70 ℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除
管盖内壁的水珠。
注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
5. 加220 μl无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管
盖内壁的水珠。
6. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），
12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm
(~13,400×g ) 离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm
(~13,400×g ) 离心30 sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中。
Order: 010-********
Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
9. 重复操作步骤8。
10. 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min ，倒掉废液。将吸附柱
CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
11. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl 洗脱缓
冲液TE ，室温放置2-5 min ，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min ，将溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl ，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH 2O 做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5范围内，pH 值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min ，12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min 。
DNA 浓度及纯度检测
得到的基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA 应在OD 260处有显著吸收峰，OD 260值为1相当于大约50 μg/ml 双链DNA 、40 μg/ml 单链DNA 。
OD 260/OD 280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH 2O ，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
版本号: DP121221
产品内容
产品组成
DP302-02
(50 preps) 缓冲液GA (Buffer GA) 15 ml 缓冲液GB (Buffer GB) 15 ml 缓冲液GD (Buffer GD) 13 ml 漂洗液PW (Buffer PW) 15 ml 洗脱缓冲液TE (Buffer TE)
15 ml Proteinase K
1 ml 吸附柱CB3 (Spin Columns CB3) 50个
收集管（2 ml ）(Collection Tubes 2 ml)
50个
选配试剂
RNase A （100 m g /ml ）（目录号：RT405-12）；溶菌酶
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min ，以溶解沉淀。
TIANamp Bacteria DNA Kit
细菌基因组DNA 提取试剂盒
（离心柱型）目录号：DP302