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Tiangen产品DP302--细菌基因组提取试剂盒

产品简介

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。

使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

提取得率

材料提取量DNA得量

细菌培养液106-108 cells 5-20 μg

产品特点

简单快速:1 h内即可获得超纯的基因组DNA。

超纯:获得的DNA纯度高,可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

2.若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,并摇匀后使用。

3.所有的离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。操作步骤

使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1. 取细菌培养液1-5 ml,10,000 rpm(~11,500×g)离心1 min,尽量吸净上清。

2. 向菌体沉淀中加入200 μl缓冲液GA,振荡至菌体彻底悬浮。

注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第2步骤,加入溶菌酶进行破壁处理,具体方法为:加入180 µl缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2% Triton;终浓度为20 mg/ml的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制,否则会导致溶菌酶无活性)),37 ℃处理30 min以上。

如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:RT405-12),振荡15 sec,室温放置5 min。

3. 向管中加入20 μl Proteinase K溶液,混匀。

4. 加入220 μl缓冲液GB,振荡15 sec,70 ℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除

管盖内壁的水珠。

注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。

5. 加220 μl无水乙醇,充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管

盖内壁的水珠。

6. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),

12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。

7. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm

(~13,400×g ) 离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。

8. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm

(~13,400×g ) 离心30 sec,倒掉废液,吸附柱CB3放入收集管中。

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DP302--细菌基因组DNA提取试剂盒

DP302--细菌基因组DNA提取试剂盒 - 操作步骤: 操作步骤: 产品简介: 产品简介: 本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细 菌的基因组...