TPD-酸性测定方法

NH3-TPD酸量测定

NH3-TPD酸量测定原理

当碱性气体分子接触固体催化剂时，除发生气－固物理吸附外，还会发生化学吸附。吸附作用首先从从催化剂的强酸位开始，逐步向弱酸位发展，而脱附则正好与此相反，弱酸位上的碱性气体分子脱附的温度低于强酸位上的碱性气体分子脱附的温度，因此对于某一给定催化剂，可以选择合适的碱性气体，利用各种测量气体吸附、脱附的实验技术测量催化剂的强度和酸度。其中比较常用的是程序升温脱附法。

程序升温脱附法（Temperature Programmed Desorption，TPD）就是把预先吸附了某种气体分子的催化剂，在程序加热升温下，通过稳定流速的气体（通常利用惰性气体，如He气），使吸附在催化剂表面上的分子在一定温度下脱附出来，随着温度升高而脱附速度增大，经过数个脱附峰后，脱附完毕。通过测定脱附出来的碱性气体的量，从而得到催化剂的总酸量。通过计算各脱附峰面积含量，可得到各种酸位的酸量。

NH3-TPD酸量测定方法

采用色谱热导检测器，NH3为吸附质，He为载气，对分子筛样品的酸量及其分布进行测量。具体条件如下：监测器温度为80℃，热丝温度100℃，桥电流温度108℃，催化剂颗粒度40～80目，装填量0.2000g。催化剂在流速为40ml/minHe气的吹扫下，以10℃/min升温速度升至500℃，恒温吹扫2h，而后冷却降温至120℃，在120℃吸附NH30.5h，NH3气体流速为20ml/min。切换He吹扫，流速为40ml/min，至热导监测器（TCD）基线平稳。在流速为40ml/minHe气流中进行程序升温脱附，从120℃以15℃/min的升温速度升至800℃。脱附出来的NH3用0.01mol/l的HCl溶液吸收，再用0.01mol/l的NaOH溶液反滴定，即得到总酸量。记录谱图出峰情况得到NH3吸附－温度曲线，根据脱附峰的温度比较样品酸中心的强弱，由峰面积得到样品中不同强度酸中心的酸量。本论文中涉及的HZSM-5及负载型HZSM-5分子筛催化剂的脱附峰，积分得到弱酸量（120～400℃）和强酸量（400～800℃）。NH3-TPD实验装置示意图见图2-3。

图2-3 NH3-TPD实验装置示意图

Fig.2-3 Schematic diagram for NH3-TPD

吡啶FTIR酸类型测定

吡啶FTIR酸类型测定原理

红外光谱可直接测定酸性固体物质中的O-H振动频率；O-H键愈弱、振动频率愈底，酸强度愈高。固体酸吸附吡啶的红外光谱可测定B 酸和L酸[94]。吡啶与B酸形成吡啶鎓盐，而与L酸形成配位键。红外光谱上1540cm-1峰是吸附在B酸中心上的吡啶特征吸收峰，1450cm-1峰是吸附在L酸中心上的吡啶特征吸收峰，1490cm-1峰是代表两种酸中心的总和峰。同样NH3吸附在B酸中心的IR特征峰为3120cm-1或1450cm-1，而吸附在L酸中心的IR特征峰为3330cm-1或1640cm-1，

见图2-4。

图2-4 NH3在硅胶上的红外吸附光谱

Fig. 2-4 FI-IR spectra of silica gel for NH3 adsorption

吡啶FTIR酸类型测定方法

取10mg左右的粉末样品压成薄片，固定在红外池中，先经真空净化（350℃，1×10-3Pa）2小时后，冷却至室温，扫描谱图作本底。在室温下吸附吡啶后，程序升温到测定温度（定点温度分别为200℃，350℃）进行真空脱附（1×10-3Pa）半小时，然后分别冷却至室温，记录1700～1400cm-1波数区域的红外光谱。200℃脱附后所测样品的L酸量和B酸量为不同强度酸的总和，350℃脱附后样品的L酸量和B酸量为中强度酸量

和强酸量之和。以1540cm-1峰表征B酸，以1450cm-1峰表征L酸。

过氧化氢酶的活性测定

过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法（滴定法、比色法）【原理】 过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。 R(Fe+2)+H2O2==R(Fe+3+OH－) R(Fe+3OH－)2+ H2O2==R(Fe+2)2+2H2O+O2 据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2 5 H2O2+2 KMnO4+4H2SO4-------- 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 即可求出消耗的H2O2的量。 【仪器和用具】 研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管（10ml）；恒温水浴；容量瓶25ml×1。 【试剂】 10% H2SO4；0.2mol/L磷酸缓冲液pH7.8； 0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定； 0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定； 0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4?2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。 【方法】 1.酶液提取取小麦叶片 2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 2.取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入高温灭活酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。 3.用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。 4.结果计算： 酶活性用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示： 酶活(mg H2O2/gFW?min)= 式中A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数； VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）; W—样品鲜重（g）；

高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定

高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。 仪器药品 氧电极仪记录仪 电磁搅拌器超级恒温水浴 注射器、微量注射器容量瓶 反应杯亚硫酸钠 过氧化氢酶 50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。 50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。 标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶 (Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液 (pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。 操作步骤 1.仪器的标定 按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。

2.绘制酶活性标准曲线 (1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。 (2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。 (3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。 (5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。 3.样品测定 (1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。 (3)如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。

试验七过氧化氢酶活力的测定

实验七过氧化氢酶活力的测定 一、实验目的 掌握过氧化氢酶活力测定的原理和方法 二、实验原理 过氧化氢酶（catalase,CAT,EC1.11.1.6）普遍存在于植物的各种组织中，其活力大小与植物的代谢强度和抗寒、抗病能力有一定的联系，故常需进行测定。 过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧，其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵作催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。其反应为： 过氧化氢酶 2H2O2-------------------------2H2O+O2 钼酸铵 H2O2+2KI+H2SO4------------------------I2+K2SO4+2H2O I2+2Na2S2O3-------------2NaI+Na2S4O6 反应完后，以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量，即可计算出酶的活力。 三、仪器、试剂和材料 1、仪器：天平，研钵，容量瓶，恒温水浴，移液管，三角瓶，滴定管。 2、试剂： （1）0.01mol|L的过氧化氢溶液； （2）1.8mol|L的硫酸溶液； （3）10%钼酸铵溶液； （4）0.02mol|L硫代硫酸钠溶液； （5）1%的淀粉溶液； （6）20%的碘化钾溶液； （7）碳酸钙粉末。 四、操作步骤 1、酶液提取：称取新鲜油麦菜0.25g，剪碎置研钵中，加入0.1g碳酸钙和2mL水研磨成匀浆，用漏斗移入50mL的容量瓶，研钵用少量的水冲洗，冲洗液也一并移入容量瓶中， 然后用水定容。摇荡片刻，静置澄清后吸取20.0mL上清液至100ml容量瓶中，加水定容，摇匀后备用。 2、取三个100mL三角瓶编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10.0ml，随即在3号瓶中加入1.8mol|L硫酸5.0ml以终止酶的活力，作为空白溶液。各瓶均加入5.0mL0.01mol|L过氧化氢溶液，每加一瓶即摇匀并开始记时。5min（必须准确）后立即向1、2号瓶各加5.0mL1.8mol|L硫酸溶液。 3、各瓶分别加入1.0mL20%的碘化钾溶液和3滴钼酸铵溶液，然后依次用0.02mol|L的硫代硫酸钠滴定，滴定至溶液淡黄色后加入5滴1%的淀粉溶液，再继续滴定至蓝色消失即到终点，记下各瓶消耗的硫代硫酸钠的体积。

测量酶方法

氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力 一、原理 超氧物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料；水稻或小麦叶片 （二）仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）；5.试管或指形管数支。 （三）试剂 :1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）； 2. 130mmol/L 甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至 100ml(现用现配)； 3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml， (避光保存)； 4. 100μmol/L EDTA－Na2溶液：称取0.03721gEDTA－Na2用磷酸缓冲液定容至 1000ml； 5. 20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml(避光保 存)。 三、实验步骤 1. 酶液提取 取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。取1.5～2ml于1000rpm下离心20min，上清液即为SOD粗提液。 2. 显色反应 取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下列加入各溶液：试剂（酶）用量（ml）终浓度（比色时）0.05mol/L 磷酸缓冲液 1.5130mmol/L Met溶液0.313mmol/L 750μmol/L NBT溶液0.375μmol/L 100μmol/L EDTA－Na2液0.310μmol/L 20μmol/L 核黄素0.320μmol/L 酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液蒸馏水0.25总体积3.0混匀后将1支对照管置暗处，其它各管于4000Lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时延长）。 3. SOD活性测定与计算 至反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的吸光度。 四、结果计算 已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 上式中，SOD比活力＝SOD总活性蛋白质含量式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位／mg蛋白表示Ack照光对照管的吸光度AE样品管的吸光度V样品液总体积（ml）Vt测定时样品用量（ml）W样鲜重（g）蛋白质含量单位为：mg蛋白／g鲜重。

过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制

过氧化物酶（POD ）活性测定 【实验原理】 过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H 202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。 【实验试剂】 愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL ，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL ，混合均匀保存在冰箱中] 【方法步骤】 （1）、粗酶液的提取 称取小麦叶片0.25g ，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL ，于研钵中研成匀浆，以4000r/min 离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL 提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。 （2）、酶活性的测定 取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL ，KH2PO41mL ，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL ，稀释后的酶液1mL （如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm 波长下测量OD 值，每隔1min 读数一次（4min ）。以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD 值增加0.01定义为一个活力单位。 表1 紫外吸收法测定POD 酶活性配置表 4.结果计算 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。 POD 总活性[u/g(FW)]= 式中：POD 总活性以酶单位每克鲜重表示。其中 △470=ACK-AE 比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。 ACK ——照光对照管的吸光度。 AE ——样品管的吸光度。 Vt ——样品液总体积，mL 。 FW t V . V A T ? ? ? ? 1 470 01 0 ?

过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书 微量法

过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0205规格：100T/96S 产品内容： 提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体125μL×1瓶，4℃保存。产品说明： CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。 H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔（UV 板）、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取： 1、细菌、细胞或组织样品的制备 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。二、测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。 2、CAT 检测工作液的配制：用时在试剂二中加入25mL 试剂一，充分混匀，作为工作液。 3、测定前将CAT 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。 4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL 样本和190μL 工作液，立即混匀并计时，记录240nm 下初始吸光值A1和1min 后的吸光值A2。计算ΔA＝A1-A2。三、CAT 活性计算： a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1、血清（浆）CAT 活力的计算: 单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mL)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷V 样÷T=459×ΔA 2、组织、细菌或细胞中CAT 活力计算：（1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 样)÷T=459×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算： 单位的定义：每g 组织每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×W）÷T=459×ΔA÷W （3）按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/104cell)＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×500）÷T =0.917×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：H 2O 2摩尔消光系数，4.36×104 L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500万；109：单位换算系数，1mol=109nmol。b.用96孔板测定的计算公式如下1、血清（浆）CAT 活力的计算:

试验八过氧化氢酶活力的测定

实验八过氧化氢酶活力的测定 一、实验目的 掌握过氧化氢酶活力测定的原理和方法。 二、实验原理 过氧化氢酶（catalase,CAT,EC1.11.1.6）普遍存在于植物的各种组织中，其活力大小与植物的代谢强度和抗寒、抗病能力有一定的联系，故常需进行测定。 过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧，其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵作催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。其反应为： 过氧化氢酶 2H2O22H2O+O2 钼酸铵 H2O2+2KI+H2SO4I2+K2SO4+2H2O I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6 反应完后，以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量，即可计算出酶的活力。 三、仪器、试剂和材料 1．仪器：天平，研钵，容量瓶，恒温水浴，移液管，三角瓶，滴定管。 2．试剂： （1）0.01mol/L的过氧化氢溶液； （2）1.8mol/L的硫酸溶液； （3）10%钼酸铵溶液； （4）0.02mol/L硫代硫酸钠溶液； （5）1%的淀粉溶液； （6）20%的碘化钾溶液； （7）碳酸钙粉末。 3、材料 油麦菜 四、操作步骤 1．酶液提取 称取新鲜油麦菜0.25g，剪碎置研钵中，加入0.1g碳酸钙和2mL水研磨成匀浆，用漏斗移入50mL的容量瓶，研钵用少量的水冲洗，冲洗液也一并移入容量瓶中，然后用水定容。摇荡片刻，静置澄清后吸取20.0mL上清液至100ml容

量瓶中，加水定容，摇匀后备用。 2．酶促反应 取三个100mL三角瓶编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10.0ml，随即在3号瓶中加入1.8mol/L硫酸5.0ml以终止酶的活力，作为空白溶液。各瓶均加入5.0mL0.01mol/L过氧化氢溶液，每加一瓶即摇匀并开始记时。5min（必须准确）后立即向1、2号瓶各加5.0mL1.8mol/L硫酸溶液。 3．滴定 各瓶分别加入1.0mL20%的碘化钾溶液和3滴钼酸铵溶液，然后依次用0.02mol/L的硫代硫酸钠滴定，滴定至溶液淡黄色后加入5滴1%的淀粉溶液，再继续滴定至蓝色消失即到终点，记下各瓶消耗的硫代硫酸钠的体积。 五、结果处理与分析 1．按国际酶活力单位计算 被分解的过氧化氢量（μmol)=1/2×V Na2S2O3(空白滴定值-样品测定值）（mL)×10-3×0.02×106 被分解的过氧化氢量（μmol)×酶液稀释倍数过氧化氢酶活力（U)=--------------------------------------------------------------- 时间（min）×样品重量（g）2．酶活力的习惯计算法 被分解的过氧化氢量（mg)=V Na2S2O3（空白滴定值-样品滴定值）（mL)×0.02×1／2×34.02 被分解的过氧化氢量（mg)x酶液稀释倍数过氧化氢酶活力=--------------------------------------------------------------- 样品重量（g)x时间（min） 其中0.02为硫代硫酸钠的物质的量浓度，34.02是过氧化氢的摩尔质量。 【注意事项】 酶促反应时间必须严格控制。 【思考题】 查阅文献，说明测定过氧化氢酶活力的方法有哪些，原理各是什么？ 【参考资料】 郭蔼光，郭泽坤.生物化学实验技术.北京：高等教育出版社，2007:77-79.

过氧化氢酶米氏常数的测定

过氧化氢酶米氏常数的测定 傅璐121140012 一、实验目的 1. 了解米氏常数的测定方法 2. 学习提取生物组织中的酶 二、实验原理 1.米氏反应动力学 (Michaelis-Menten Equation): 米氏方程 2.米氏常数的意义： ①反映酶的种类：Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关，与酶浓度、 底物浓度无关。 ②米氏常数是酶促反应达到最大反应速度Vmax一半时的底物浓度。其数值大 小反映了酶与底物之间的亲和力：Km值越大，亲和力越弱，反之Km值越小，亲和能力越强。 ③Km可用来判断酶（多功能酶）的最适底物：Km值最小的酶促反应对应底物 就是该酶的最适底物。 3.米氏常数的求法： 该方法的缺点是难以确定最大 反应速度Vmax。

该作图法应用最广。但在低浓度是v值误差较大，在[S]等差值实验时作图点较集中于纵轴。因此在设计底物浓度时，最好将1/[S]配成等差数列，这样可使点距较为平均，再配以最小二乘回归法，就可以得到较为准确的结果。 此法优点是横轴上点分布均匀，缺点是1/v会放大误差，同时对底物浓度的选择有要求。[S]<>Km时直线将在原点附近与轴相交。 4.氧化酶：生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是消除体内自由基： ①POD：过氧化物酶 ②SOD:超氧化物歧化酶 ③CAT：；过氧化氢酶 5.过氧化氢酶的作用： 植物体内活性氧代谢加强而使过氧化氢发生积累。过氧化氢可进行一步生成氢氧自由基。氢氧自由基是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶（catalase，CAT）可以清除过氧化氢、分解氢氧自由基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。 6.过氧化氢酶活力的测定方法：

过氧化氢酶活性的测定

植物体内过氧化氢酶活性的测定 一、目的 过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。 二、原理 过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。以钼酸铵作催化剂，使H2O2与KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为： H2O2 + 2KI + H2SO4 —→I2 + K2SO4 + 2H2O I2 + 2Na2S2O3 —→2NaI + Na2S4O6 根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H2O2的量。 三、材料、仪器设备及试剂 1. 材料：水稻叶、甘蔗叶及其他植物叶片。 2. 仪器设备：分析天平；恒温水浴；研钵；100ml容量瓶；100ml三角瓶；滴定管；滴定管架；移液管；移液管架；漏斗；洗耳球等。 3. 试剂及配制 1.8mol·L－1H2SO4 10﹪(NH4.)6M O7O4 0.02 mol·L－1 Na2S2O3 20﹪KI 1﹪淀粉液 CaCO3粉 石英砂 0.018﹪H 2O 2 溶液配制：吸取30﹪H2O2原液0.3ml至50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻 度，摇匀后再稀释10倍。 四、实验步骤 1. 过氧化氢酶的提取 选取甘蔗功能叶片，擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，加少量CaCO3粉末及石英砂，并加入3～4ml蒸馏水，在冰浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。然后再取滤液10ml 至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。 2. 酶活性测定 2.1取100ml容量瓶4个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml，立即向3、4号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以终止酶活性，作为空白测定。 2.2将各瓶放在20℃水浴中保温5～10min（若室温超过20℃则以室温为准）。保温后向各瓶准确加入 0.018﹪H2O2 5ml, 摇匀并记录酶促反应开始时间。 2.3将各瓶放在20℃水浴中让酶与底物（H2O2）作用5min。时间到后迅速取出，立即在1、2号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以终止酶活性。

过氧化氢酶测定方法

过氧化氢酶测定(容量法) 过氧化氢酶也叫接触酶，能促进过氧化氢对各种化合物的氧化。几乎在所有的生物体内部有过氧化氢酶，在某些细菌里，其数量约为细胞干重的1％。土壤的过氧化氢酶活性，与土壤呼吸强度和土壤微生物活动相关，在一定程度上反映了土壤微生物学过程的强度。 原理 过氧化氢酶的测定有测压法和滴定法。测压法是测定过氧化氢分解时析出的氧量(反应过氧化氢酶 式为：H2O2+H2O O2+H2O，方法简单，但准确性较差。后者则是定量滴定酶促反应后剩余的过氧化氢量，反应式为 2KMnO4+5H2O2+3H2SO42MnSO4+K2SO4+8H2O+5O2，此法测定结果较好。试剂 (1) 0.3% H2O2：按1：100将30％的H2O2用水稀释。 (2) 3N H2SO4（也就是1.5mol/l H2SO4）：以配1000ml为例，需要的浓硫酸的体积为1.5*98.08/1.83=80.39ml，可以取80ml。 KMnO4的分子量=158.026,当量=31.605.高锰酸钾水溶液受到水中还原物和杂质以及受日光直射等影响能分解析出棕色的含水的二氧化锰沉淀，而有浓度的改变。因此在配制其标准溶液时必须使用棕色瓶盛装，以防日光直射作用.配制后并应放置一段时间，待与水中还原物完全作用后，滤去沉淀，然后进行标定，才能得到基本稳定不易变化的标准溶液。 (3) 0.1N KMnO4溶液：称取化学纯高锰酸钾3.161克，溶于l升无CO2蒸馏水（沸水）中，溶解后,在暗处放置一周, 然后用虹吸管将上部澄清溶液移于棕色瓶中(或用玻璃棉滤过)保存，以备标定. 注：C(1/5 KMnO4)=0.1mol/l表示的就是0.1N KMnO4溶液。 0.1N KMnO4溶液标定（GB/T601-2002） 称取0.2g（准至0.0001g）于105~110℃烘至恒重的基准草酸钠。溶于100mL（8+92）硫酸溶液中，用配制好的高锰酸钾溶液[c（1/5 KMnO4）=0.1mol/l]滴定，近终点时加热至65℃，继续滴定至溶液呈粉红色保持30s，同时作空白试验（不加草酸钠，其他一样）。 高锰酸钾溶液标准浓度按下式计算 c（1/5KMnO4）=m*1000/[（V1-V2）*M ] 式中c（1/5KMnO4）—高锰酸钾标准液之物质的量浓度，mol/L； m——草酸钠之质量，g；

过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)

过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法) 简介： 过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD。CAT 能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px 共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。 Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)检测原理是血清或血浆等样品H 2O 2在240nm 处有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过H 2O 2，使待测溶液吸光度随反应时间而减少，通过紫外酶标仪测定240nm 处吸光度，该酶的检测对于研究植物代谢强度及抗旱、抗病能力有一定的价值。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、蒸馏水、生理盐水 2、研钵或匀浆器 3、离心管 4、96孔板 5、酶标仪 操作步骤(仅供参考)： 1、配制CAT Assay buffer 工作液：按CAT Assay buffer(2.5×)：蒸馏水=的比例稀释， 即获得CAT Assay buffer 工作液，4℃预冷，待用。 2、配制100mM H 2O 2基液：本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。而计算出本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2的实际浓度。然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制100mMH 2O 2基液。3、准备样品： ①植物、动物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织(或动物组织)，清洗干净，擦干，切碎， 编号 名称 TO1072100T Storage 试剂(A):H 2O 2基液 2×1ml RT 试剂(B):CAT Assay buffer(2.5×)500ml 4℃避光使用说明书 1份

过氧化氢测定方法

过氧化氢测定方法 A1 原理 酒中过氧化物在稀硫酸中能使碘化钾氧化，产生定量的碘，此碘用硫代硫酸钠标准溶液滴定，以淀粉作指示剂。同时用过氧化氢酶分析过氧化氢后，用硫代硫酸钠标准溶液滴定除过氧化氢外的过氧化物，从未加过氧化氢酶样品所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数，计算过氧化氢的含量，其反应式为： 2KI+H2SO4+H2O2──→ K2SO4+2H2O+I2 ..........(A1) I2+2Na2S2O3───→ Na2S4O6+2NaI ...........(A2) 2H2O2──→ 2H2O+O2 ........................(A3) A2 试剂 A2.1 0.05mol/L硫代硫酸钠标准溶液（用前标定）；临用时稀释成0.0025mol/L。 A2.2 1%淀粉指示剂。 A2.3 10%碘化钾水溶液。 A2.4 10%硫酸。 A2.5 3%钼酸铵水溶液。 A2.6 0.1%过氧化氢酶溶液：称0.10g过氧化氢酶，用100mL蒸馏水分多次将其溶解，置冰箱保存。 A3 测定方法 用欧氏吸管或容量瓶取25.0mL辐照薯干酒于250mL的碘量瓶中，取A、B二份；B 瓶中加入0.1%过氧化氢酶0.5mL，混匀，放置10min(放置过程中摇动数次）。在A、B两瓶中各加入10%硫酸溶液5.0mL及10%碘化钾溶液5.0mL，并各加3%钼酸铵3滴，混匀，置暗处放置10min，各加水75mL，分别用0.0025mol/L硫代硫酸钠滴定，待滴至微黄色时，加淀粉指示剂0.5mL，继续滴至蓝色消失，分别记录A、B二份消耗硫代硫酸钠的毫升数。 A4 计算 (V A-V B)×c×34.02 过氧化氢(mg/L) = ───────────────× 1000 .................(A4) V 式中：V A──A瓶中消耗硫代硫酸钠的毫升数； V B──B瓶中消耗硫代硫酸钠的毫升数； c──硫代硫酸钠的摩尔浓度； 34.02──与 1.00mL 硫代硫酸钠标准溶液[c(Na2S2O3)=1.000mol/L]相当的以毫克表示的过氧化氢的质量； V──取薯干酒样的毫升数。

过氧化氢酶活力的测定

实验三过氧化氢酶活性的测定 一、实验目的： 了解过氧化氢酶的作用，掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法； 二、实验原理: 过氧化氢酶是一类色素蛋白，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。 R（Fe＋2）2＋H2O2---R(Fe+3OH)2 R(Fe+3OH)2+ H2O2 ----R（Fe＋2）2+2H2O+O2 并合上式：H2O2 ----2H2O+O2 据此，可根据消耗H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量的过氧化氢溶液，经酶促反应后，加入过量的KI溶液生成的I2用标准的Na2S2O3滴定，根据N a2SO3消耗的体积计算H2O2的消耗量。 三、实验材料、仪器和试剂： 1、实验材料：小白菜 2、仪器：恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶 3、试剂： （1）0.05mol/L H2O2 （2）2mol/LH2SO4 （3）0.1mol/L Na2S2O3 （4）1%淀粉溶液（5）10%(NH4)6Mo7O24 （6）pH7.8的磷酸缓冲液（7）20% KI （8）CaCO3 四、实验步骤： （1）酶液提取： 称取2.5g白菜叶，加少量CaCO3，2mLpH7.8的缓冲液少量，研成匀浆，移入100ml容量瓶，用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容，静置10分钟，过滤。取滤液10mL于另一100mL的容量瓶中稀释定容待测（根据酶活高低而定）。 （2）酶促反应： 取锥形瓶4个，编好号各加入10ml酶液之后，立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL，终止酶活性，作空白对照。向另外两瓶各加H2O2 5mL，摇匀，在加入H2O2的那一刻起，记录时间，5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL，终止酶活性。向三角瓶中加1mL 20% KI和3滴(NH4)6Mo7O24，摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄色，加入1mL1%淀粉指试剂，蓝色恰好消失，

过氧化氢酶活力测定CAT

过氧化氢酶活力测定碘量法 目的意义过氧化氢酶(Catalase，CAT)普遍存在于植物所有组织中，其活性与植物的代谢强度、抗衰老、抗寒、抗病能力有一定关系，在生产实践中常进行测定。学习几种测定CAT活性的方法，理解其测定原理。 一、实验原理 过氧化氢酶能把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，可以一定时间内分解的过氧化氢量或生成氧气的量来表示。H202的测定常采用氧化还原滴定法，碘量法是其经典方法。其原理是在有催化剂钼酸铵存在时，过氧化氢与碘化钾反应，放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘，以淀粉指示剂指示滴定终点。根据空白和测定二者滴定值之差，即可算出酶分解的过氧化氢量。其反应为： H2O2十2KI十H2S04→I2十K2S04十2H20 I2+2Na2S2O3→2NaI+NaS406 二、材料、设备与试剂 1．植物材料小麦或其他植物新鲜叶片。 2．主要设备天平、研钵、100ml容量瓶、50ml酸滴定管、移液管(1、5、10ml)、100ml 三角瓶。 3．试剂 (1)碳酸钙粉末 (2)1.8mol/L的硫酸取1000ml烧杯1只，加入约500ml蒸馏水，边搅拌边加入100ml 浓硫酸，冷却后用量瓶定容到1000ml。 (3)10％的钼酸铵溶液：称取钼酸10g，溶于蒸馏水中使成100ml。 (4)1％淀粉溶液：取1g可溶性淀粉于小烧杯中加约20ml水调匀，慢慢倾入约80m1沸水中，在搅拌下加热至重新沸腾冷却后贮于滴瓶中(可加少量HgCl2防腐)。 (5)0.05mol/L硫代硫酸钠称取Na2S2O3·5H2O 25g，溶于新沸腾并冷却过的蒸馏水中，加入约0.1gNa2CO3，，并稀释至1升，保存于棕色试剂瓶中，放置暗处。一天后进行标定。 标定方法：精确称取分析纯K2Cr207约0．15g于500ml三角瓶中，加30ml蒸馏水溶解，加入2gKI和5ml 6mol/L盐酸，在暗处放置5min，然后用水稀释至200ml，用0.05mol/L 硫代硫酸钠溶液滴定，当溶液由棕红色变为浅黄色时，加入1ml淀粉溶液，继续滴至溶液由蓝色变为亮绿色(Cr3+离子的颜色)为止。计算出Na2S203的浓度(K2Cr2O7的相对分子质 量为294．18)。 (6)0.01mol/L 硫代硫酸钠，用20ml移液管吸取标定过的0.05mol/L硫代硫酸钠溶液20m1，加入100ml量瓶中，加水定容，摇匀即成，用时现配。 (7)0.05mol/L过氧化氢，取1ml 30％的过氧化氢用水稀释至150ml，用0.05mol/L硫代硫酸钠标定。 三、操作方法 1．酶液提取 称取混匀的新鲜小麦叶片1g，置研钵中加0.2g碳酸钙和蒸馏水2m1，仔细研磨成匀浆，移入100mL量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，振荡片刻，静置。取上清液10ml移人100ml量瓶加蒸馏水稀释至刻度(稀释10倍)、摇匀备用。 2．反应 取100m1三角瓶4个，编号。向各瓶准确加入稀释后的酶液10m1，立即向3、4号瓶中加入1．8mol/L硫酸5ml以终止酶的活动，作为空白。然后将各瓶放在20℃水浴中保温，待瓶内溶液温度达20℃时，向各瓶准确加入58ml 0.05mol/L过氧化氢，摇匀并记录加入时

过氧化氢酶的活性测定

过氧化氢酶的活性测定 方法一：高锰酸钾滴定法 1、实验目的：掌握高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶的活性的原理和方法。 2、实验内容： 实验原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2。即可求出消耗的H2O2的量。 试剂： 10％H2SO4； 0.2mol／L磷酸缓冲液pH7.8； 0.02mol／L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，用0.1mol／L草酸溶液标定； 0.1mol／L H2O2：市售30％H2O2大约等于17.6mol／L，取30％H2O2溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02molKMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定； 0.1mol／L草酸：称取优级纯H2C2O2·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。 操作步骤： 3.1酶液提取： 取高羊茅草叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r／min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 3.2酶反应过程 取50mL三角瓶4个(3个测定，1个对照)，测定瓶中加入酶液2.5mL，对照瓶中加入煮死酶液2.5mL，再加入2.5mL 0.1mol／L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％H2SO4 2.5mL。 3.3标定 用0.02mol／L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色(在30s内不消失)为终点。 3.4结果计算

紫外吸收法测定-过氧化氢酶的活性(准确,无误)

FW t V .V A T ????124010?过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法 【原理】 H 2O 2在240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A 240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 【仪器与用具】 研钵；离心机；250ml 容量瓶；移液管（0.5ml 、2ml 各2支）；10ml 试管3支；恒温水浴；紫外分光光度计； 【试剂】 0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）； 0.1mol/L H 2O 2（用0.1mol/L 高锰酸钾标定）。 【方法】 1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g 置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml 容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min ，取上部澄清液在4000rpm 下离心15min ，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。 2.酶活性测定 取10ml 试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表2-14-1顺序加入试剂。 将S0号管在沸水浴煮1min 以杀死酶液，冷却。然后将所有试管在25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L 的H 2O 2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色皿中，240nm 下测定吸光度，每隔1min 读数1次，共测4min ，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。 3.结果计算： 以1min 内A 240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u ）。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=

土壤过氧化氢酶的测定方法

ICS13.080.30 B10 团体标准 T/NAIA XXXX—2020 土壤过氧化氢酶活性的测定 （高锰酸钾滴定法） 2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施宁夏化学分析测试协会发布

前言 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》规定编写。本标准由宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）提出。 本标准由宁夏化学分析测试协会归口。 本标准起草单位：宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）、宁夏大学、宁夏农林科学院荒漠所、银川能源学院、宁夏化学分析测试协会。 本标准主要起草人：任亚丽、白玲、张亮亮、卜姣姣、杨洁、季波、鲁静、张小飞、刘娜娜。本标准于2020年XX月XX日首次发布。

土壤过氧化氢酶的测定 （高锰酸钾滴定法） 1范围 本标准规定了土壤过氧化氢酶的测定方法（高锰酸钾滴定法）。 本标准适用于各类土壤过氧化氢酶的测定（高锰酸钾滴定法）。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 601化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存 3原理 在4℃条件下，土壤过氧化氢酶酶促分解过氧化氢，用高锰酸钾标准溶液滴定反应剩余过氧化氢，所消耗的高锰酸钾标准溶液体积数来表示过氧化氢酶的活性。 4试剂和溶液 除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为GB/T 6682规定的三级水。 4.1甲苯（C 7H 8）。 4.2浓硫酸（H 2SO 4）。 4.3过氧化氢（H 2O 2）。 4.4高锰酸钾（K 2MnO 4）。 4.5硫酸溶液（0.2mol/L） 准确移取5.43mL 浓硫酸，缓缓注入400mL 水中，冷却后用水定容至500mL。置于4℃冰箱贮存。 4.6高锰酸钾标准溶液c（1/5K 2MnO 4）=0.1mol/L 称取3.3g（精确至0.0001g）高锰酸钾，溶于1050mL 水中，缓缓煮沸15min，冷却，于暗处放置两周，过滤。贮存于棕色瓶中，并按照GB/T 601对其进行标定。 4.7过氧化氢水溶液（3%） 准确量取30%过氧化氢溶液25mL，用水定容至250mL，配成3%过氧化氢水溶液，置

测定切花中过氧化氢酶活性的3种常用方法的比较

- 测定切花中过氧化氢酶活性的3种常用方法的比较、① 陈晓敏② (华南热带农业大学园艺学院 海南儋州 571737) 方法二 过氧化氢酶的活力测定——紫外吸收法 H 2O 2在240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A 240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活力。 三、材料、仪器与试剂 （一）、材料：小麦叶片 （二）、仪器（仪器的选择在实验开始前由学生在预习报告中提出方案后教师审定） 紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml 容量瓶1个；0.5ml 刻度吸管2支，2ml 刻度吸管1支；10ml 试管3支；恒温水浴； （三）、试剂（试剂的选择在实验开始前由学生在预习报告中提出方案后教师审定后并配制） 0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L H 2O 2（用0.1mol/L 高锰酸钾标定）。 四、实验操作： 1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g 置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml 容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min ，取上部澄清液在4000rpm 下离心15min ，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。 2.测定：取10ml 试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。 22速倒入石英比色杯中，240nm 下测定吸光度，每隔1min 读数1次，共测4min ，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活力。 五、计算 以1min 内A 240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u ）。 过氧化氢酶活力(u/gFW/min)=FW t V .V A T ????124010? 式中 ?A 240 = A S0－() A A S S 122+