有关物质方法学

有关物质方法学验证

（HPLC 法）

一、检测波长与流动相条件的确定。

一般有国家标准的并不改变国家标准，可直接参照国家标准，可不做。

确实有需要的，检测波长一般用紫外扫描确定，流动相可以多种流动相比较

确定，选取其中最合适的。

二、系统适用性

取样品，按照有关物质供试品浓度配制溶液，进样，记录图谱。理论板数应

符合规定，分离度应大于2.0或符合规定、拖尾因子应0.8-1.2或符合规定。

有已知杂质并且杂质对照品可获得的：配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析，该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，理论板数应符合规定，分离度应大于2.0或符合规定、拖尾因子应0.8-1.2或符合规定。

三、专属性

1、空白溶剂干扰试验。

取溶解样品用的溶剂，注入液相色谱仪，记录色谱图。观察溶剂图谱情况。

有辅料的，做空白辅料试验。

2、降解试验

降解对照品溶液：取样品，按照有关物质供试品浓度配制溶液，进样，记录

图谱。

高温降解溶液：取样品，按照有关物质供试品浓度配制溶液，于一定温度水

浴中放置一段时间，补充溶剂至刻度，滤过，进样，记录图谱。

酸降解溶液：取样品，置量瓶中，加入适量流动相溶解，再加入少量一定浓

度盐酸溶液，常温放置或于一定温度水浴中放置一段时间，取出，冷却，加同浓度氢氧化钠溶液调节pH值至中性，再加溶剂稀释至刻度，滤过，进样，记录谱图。有辅料的，做空白辅料酸破坏对照。

碱降解溶液：取样品，置量瓶中，加入适量流动相溶解，再加入少量一定浓

度氢氧化钠溶液，常温放置或于一定温度水浴中放置一段时间，取出，冷却，加同浓度盐酸溶液调节pH值至中性，再加溶剂稀释至刻度，滤过，进样，记录谱图。有辅料的，做空白辅料碱破坏对照。

过氧化氢降解溶液：取样品，置量瓶中，加入适量流动相溶解，再加入少量

双氧水，常温放置或于一定温度水浴中放置一段时间，取出，冷却，加溶剂稀释至刻度，滤过，进样，记录谱图。有辅料的，做空白辅料氧化破坏对照。

3、中间体、降解物、已知其它杂质与主成分的分离度试验及定位试验

取中间体配置成一定浓度，进样，记录图谱。取降解对照品溶液，加入少量

中间体，进样，记录图谱。

取降解物配置成一定浓度，进样，记录图谱。取降解对照品溶液，加入少量

降解物，进样，记录图谱。

取已知其他杂质配置成一定浓度，进样，记录图谱。取降解对照品溶液，加

入少量已知杂质对照品，进样，记录图谱。

可接受的标准：空白对照应无干扰，主峰与杂质峰应完全分离，已知杂质峰

与其它峰应能完全分离，分离度不得小于2.0。

四、检测限与定量限

一般采用信噪比法。

取对照品，加溶剂稀释至很小浓度，进样，记录图谱，观察信噪比。信噪比10：1，为定量限；信噪比为3：1，为检测限。

有已知杂质并且杂质对照品可得的，须用已知杂质对照品同时做。

可接受标准：杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。杂质峰与噪音峰

信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6

份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，峰面积的相对标准差应不大于5.0%。

五、线性关系试验

取对照品，配制成一定浓度（大于自身对照浓度）贮备液，精密稀释，或分

别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，至少制备 5 个浓度。

上述被测物质浓度系列，以自身对照溶液浓度为中间浓度，向两边梯度延伸。比如先配制成自身对照溶液浓度两倍的溶液，分别量取3、4、5、6、7ml置10ml 量瓶中，即得到相对浓度为60%、80%、100%、120%、140%（相对于自身对照浓度）的系列溶液。取该系列溶液进样，记录色谱图，计算回归方程。

若有已知杂质并且杂质对照品可得的，则取已知杂质对照品另作线性关系试验，供试品中已知杂质峰面积，应在线性范围内。一般，此类线性关系试验浓度从定量限浓度起，至杂质对照品溶液浓度的120%或更高。

可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.9990。

六、精密度

1、重复性

无已知杂质的。

取样品，配制成自身对照浓度，由同一人员在相同操作条件下，连续进样6 次，记录图谱，计算rsd。

有已知杂质的。

取杂质对照品溶液，由同一人员在相同操作条件下，连续进样6次，记录图

谱，计算rsd。

可接受的标准为：rsd不得大于2.0%。

2、中间精密度

A、取样品，由不同人员，在不同时间，使用不同仪器，按照测定法测定同

一样品的有关物质。计算检查结果的RSD。RSD不大于2.0%。

可以5名人员分别使用5台仪器，于不同工作日测定。仪器也可3台。

B、配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，分别由两个分析

人员使用不同的仪器与试剂进行测试。RSD不大于2.0%。

七、溶液稳定性

取供试品溶液，规定条件下放置8小时，分别于0、2、4、6、8小时进样，

记录色谱图，观察主峰峰面积变化并计算RSD，观察主要杂质及总杂质峰面积变化并计算RSD，观察是否有新杂质。确定溶液是否稳定，不稳定的应注明立刻进样。

取自身对照溶液同法测定。

有已知杂质的，应另取杂质对照品溶液同法测定。

八、准确度

一般以回收率试验进行验证。无已知杂质的，可不做。

有已知杂质的，须做加样回收试验验证准确度。

例如某杂质的限度为0.2%，取已知杂质含量的样品适量9份，分别加入0.1

％、0.2％和0.3％的杂质（各三份），稀释到有关物质供试品溶液浓度。每个样品进一针，记录色谱图。另取杂质对照品，按照标准配制成杂质对照品溶液，进样，记录色谱图。计算回收率。

该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，

如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。

九、耐用性

分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、

检测波长变化±5nm、流速相对值变化±20％以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。

可接受的标准为：各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其他成分峰

必须达到基线分离；各条件下的杂质含量数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在±0.1％以内。

注：本文多处参考20060208，化药药物评价>>化药质量控制，有关物质分析方法验证

的可接受标准简介，黄晓龙。并结合个人平时经验。望指教。

因本人水平有限，错误之处还望指点。大家共同完善本验证方法，以帮助新同仁。

高考化学研究物质实验方法习题精练

第二单元 研究物质的实验方法 学海导航 一、 物质的分离和提纯 根据混合物中各物质溶解性、沸点、被吸附性能及在不同溶剂中溶解性的不同，可以选用过滤和结晶、蒸馏（或分馏）、纸上层析、萃取和分液等方法进行分离和提纯。 分离提纯方法 适用范围 实例 过滤 固体与液体不互溶的混合物 粗盐的提纯 结晶与重结晶 混合物中各成分在溶剂中溶解度不 同，包括蒸发溶剂结晶和降温结晶 分离NaCl 和KNO 3的混合物 蒸馏（分馏） ①难挥发的固体杂质在液体中形成 的混合物 ②互溶液体沸点有明显差异 蒸馏水、无水乙醇的制备、石油的分馏 CCl 4(沸点76.75℃)和甲苯（沸点110.6℃）混合物的分离 层析 被吸附能力不同的物质的分离 红、蓝墨水混合物中的不同色的分离 分液 两种互不混溶的液体混合物 CCl 4和水的分离 萃取 溶质在互不相溶的溶剂里溶解度不 同 利用CCl 4从溴水中萃取溴 注意：不同的分离方法都有一定的适用范围，要根据不同混合物的性质选择合适的方法进行分离，且有时需要多种方法配合使用。 二、 常见物质（离子）的检验 物质（离子） 方法及现象 CO 3 2－ 与含Ba 2+的溶液反应，生成白色沉淀，该沉淀溶于硝酸（或盐酸），生成无色无气味、能使澄清石灰水变浑浊的气体（CO 2）。 SO 42－ 与含Ba 2+的溶液反应，生成白色沉淀，不溶于稀盐酸。 Cl － 与硝酸银溶液反应，生成不溶于稀硝酸的白色沉淀。 NH 4+ 与NaOH 浓溶液反应，微热，放出使湿润的红色石蕊试纸变蓝的刺激性气味 气体（NH 3）。 Na + 焰色反应呈黄色 K + 焰色反应呈紫色（透过蓝色钴玻璃） I 2 遇淀粉显蓝色 蛋白质 灼烧 有烧焦羽毛气味 三、 溶液的配制及分析 1． 物质的量浓度、溶液体积、溶质的物质的量相互关系 V n c B B = ， B B c n V = ， V c n B B = 2．配制一定物质的量浓度的溶液 主要仪器：容量瓶、烧杯、玻棒、胶头滴管、量筒、托盘天平及砝码、药匙 操作步骤：计算—称量—溶解—移液—定容 注意事项：①容量瓶不能配制任意体积的溶液；不能用作反应容器；不能直接在其中进

阿莫西林含量及有关物质检验方法学的确认

阿莫西林含量及有关物质检验方法学的确认 发表时间：2018-10-01T20:19:45.567Z 来源：《世界复合医学》2018年第07期作者：周磊[导读] 本文主要阐述阿莫西林中国药典检验方法含量及有关物质的确认程序，通过这些程序的执行，可以证明阿莫西林含量、有关物质的检验方法在本实验室可行。。哈药集团制药总厂黑龙江哈尔滨 150086 摘要: 确认是对本身性能的认定,内涵属于性能检验, 中华人民共和国药典2015版二部正文品种对阿莫西林检验标准有法定的规范。针对剂型的特点所规定的基本技术要求；通用的检测方法进行相同检查项目的检测时所应采用的统一的设备、程序、方法及限度等，需要在不同 的实验室进行相应的方法学确认，而满足相应的检测要求，本文主要阐述阿莫西林中国药典检验方法含量及有关物质的确认程序，通过这些程序的执行，可以证明阿莫西林含量、有关物质的检验方法在本实验室可行。。关键词：性能检验程序方法限度检测要求1.实验部分 1.1高效液相色谱仪的性能确认 确认高效液相色谱仪能够持续有效的给出准确、可靠的数据。在确认之前，确保确认的人员经过培训；仪器仪表经过校准，且都在校准的有效期内。高效液相色谱仪进行安装确认后，首先进行检测器灯强度测试、波长准确度测试、通过后进行流速准确度及精确度测试、噪声和漂移确认、进样交叉污染测试、柱温箱温度及稳定性确认、需要进行梯度洗脱方法的需进行梯度准确性确认，自动进样器有温控系统的需进行样品温度准确的确认，定性重复性和定量重复性测试。 1.2前期准备：选择符合检验项目要求的高效液相色谱仪，准备检验用试剂，对照品（阿莫西林对照品、阿莫西林系统适用性试验对照品），准备所用的用具（分析天平，感量0.00001g、超声波清洗仪、容量瓶、移液管、量筒、烧杯、抽滤装置等），准备三批样品。 1.3含量测定方法的确认证明阿莫西林含量的检验方法在本实验室可行按中国药典2015版阿莫西林含量测定项下的检验标准，照高效液相色谱法，由两名不同的人员用一套高效液相色谱仪或同一人用两套高效液相色谱仪进行测试。配制系统适用性试验溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱一致。符合规定后，分别称取阿莫西林对照品2份和3批阿莫西林各2份的样品按照规定制备对照品溶液和样品溶液，取对照品1连续进样五次，记录色谱图，以峰面积计算相对标准偏差应不大于 2.0%，取对照品2连续进样两次，供试品每份进样两次，记录色谱图。可接受标准，每批样品两台仪器或两个操作者的结果相对偏差应不大于2.0%。表一：同一操作者两台不同的液相色谱仪3批含量检验结果表二：含量测定系统适用性试验典型图谱1.4有关物质测定的确认证明阿莫西林有关物质测定检验方法在本实验室可行 按照药品质量标准中有关物质项下的规定配制流动相A、B，设定色谱条件，按照系统适用性试验要求进行线性梯度洗脱，取阿莫西林系统适用性对照溶液注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱一致。由两名不同的人员用同一套色谱系统或同一人用两套液相色谱仪进行测试。待系统适用性试验均符合规定后，分别称取双份的对照品和单份的样品，按规定制备对照溶液和样品溶液，对照品每份进样两次，样品进样一次，收集色谱图。计算每批样品两台仪器上或两个操作者检验结果的RD。可接受标准：RD应不大于10%。经两套液相色谱仪测试，三批样品中有关物质单个杂峰及杂峰总和均符合要求。表三：有关物质系统适用性试验典型图谱表四：有关物质典型图谱 2．结果讨论 阿莫西林属于β内酰胺类抗生素，需遮光，密封保存。在含量与有关物质的检验方法学确认的过程中，样品使用带有低温自动进样器的高效液相色谱仪进行含量和有关物质的方法学确认，能够有效地预防含量及有关物质的降解，在有关物质的方法学确认时，需要注入空白溶液，如果空白溶液有干扰，可进行背景扣除。流动相需要新鲜配制，避免磷酸盐缓冲液干扰检验结果的判定。通过对阿莫西林含量及有关物质的方法学确认，证明了该方法在本试验室相应的检验设备上，检验结果可靠，数据准确，通过了药典相应的检验方法的确认。参考文献： 中国药典分析检测技术指南 中华人民共和国药典2015版二部

单元总结-研究物质的实验方法

单 元 总 结 【归纳拓展】 1．物质的分离和提纯的方法 ①过滤，②分液，③结晶、重结晶，④蒸馏和分馏，⑤层析，⑥萃取。 2．常见离子的检验 Cl —的检验：与AgNO 3溶液反应产生不溶于稀硝酸的白色沉淀。 SO 42一的检验：先加稀盐酸无现象，再加入BaCl 2溶液，产生白色沉淀。 CO 32一检验：与稀盐酸反应产生无色无气味的气体，气体能使澄清石灰水变浑。 NH 4+检验：与强碱共热产生能使湿润的红色石蕊试纸变蓝的刺激性气味气体。 3．焰色反应 (1)定义：金属或它们的化合物在灼烧时会使火焰呈现特殊的颜色，称做焰色反应。 (2) 实验操作：铂丝先用稀盐酸洗净后灼烧，灼烧到没有颜色，再蘸取待测物质。 (3) 钠钾元素焰色反应的颜色：钠――黄色；钾――紫色（透过蓝色的钴玻璃）。 4．物质的量与物质的量浓度的计算 物质的量(n) ＝ N N ＝M m ＝V V ＝c B V ；物质的量浓度(c B )＝B M 1000。 5．一定物质的量浓度溶液的配制 (1)实验仪器：容量瓶、托盘天平、药匙、烧杯、玻璃棒、量筒、胶头滴管。 (2)实验步骤：①计算，②称量或量取，③溶解或稀释，④转移，⑤洗涤，⑥振荡，⑦定 容，⑧摇匀，⑨装瓶。 【自主检测】 1．某学生用量筒量取液体，量筒平稳且面对刻度线，开始仰视液面，读数为19.0 mL ， 倒出部分液体后，俯视液面，读数为11.0 mL ，实际倒出液体的体积 ( ) A ．等于8.0mL B ．大于8.0 mL C ．小于8.0 mL D ．无法判断 2．某同学在实验报告中写有以下实验数据：①用托盘天平称取11.7 g 食盐 ②用量筒 量取5.26 mL 的盐酸 ③用广泛pH 试纸测得某酸溶液的pH 是3.3 ④配制250mLNaOH 溶 液所选容量瓶上标记的温度为20℃，其中数据合理的是 （ ） A ．①② B ．③④ C ．①③④ D ．①④ 3．下列各项实验操作中，正确的是 （ ） A ．为了加快过滤速率，可用玻璃棒搅拌过滤器中的液体 B ．为了防止容量瓶漏水，可在玻璃塞上涂上凡士林 C ．为了确定一种纤维是人造毛还是纯羊毛，可在火焰上灼烧 D ．为了除去NaCl 中少量Na 2CO 3，可加入盐酸至溶液显中性 4．实验室需用480mL 0.1mol ·L —1的硫酸铜溶液，现选取500mL 容量瓶进行配制，以 下操作正确的是 （ ） A ．称取7.68g 硫酸铜，加入500mL 水 B ．称取12.0g 胆矾配成500mL 溶液 C ．称取8.0g 硫酸铜，加入500 mL 水 D ．称取12.5g 胆矾配成500mL 溶液 5．要配制浓度约为2mol ·L －1NaOH 溶液100mL ，下面的操作正确的是( ) A ．称取8gNaOH 固体，放入250mL 烧杯中，用100mL 量筒量取100mL 蒸馏水，加入 烧杯中，同时不断搅拌至固体溶解 B ．称取8gNaOH 固体，放入100mL 量筒中，边搅拌，边慢慢加入蒸馏水，待固体完全 溶解后用蒸馏水稀释至100mL ｍ A

有关物质方法学

有关物质方法学研究 ●主要内容 1、有关物质检查方法建立的研发思路 2、有关物质方法的建立和方法学验证 2.1、原料药和制剂的相关理化性质 2.2、有关物质分析方法的选择 2.3、有关物质分析方法的验证 2.4、有关物质杂质的定量方法 3、有关物质杂质的分析 4、有关物质杂质限度的制订 有关物质检查方法建立的研发思路 ●研发思路：有关物质检测方法的建立重点是测定方法的先进性、准确性、可行性。 ●⑴首先有关物质的方法选择，对于仿制药有EP、BP、USP等质量标准的药品，首选以 上的色谱条件进行筛选，尤其关注的离子对试剂的使用。 ●⑵选用不同色谱条件进行对比研究，如果方法一是等度测定的，方法二最好选用梯度色 谱条件，比较两种方法测定结果的杂质个数及杂质含量等。确证有关物质测定方法的准确性。 ●⑶对所筛选的方法进行系统的方法学研究，比较不同检测方法的优劣，选择较好的色谱 条件作为本品有关物质检查的测定方法。 ●⑷对于仿制药同时要将自制样品与市售原研样品进行全面的质量比较，分析其杂质的种 类和含量，确保自制样品与市售原研样品的杂质在同一水平。 ●原料药和制剂的相关理化性质 ●在建立有关物质检查方法前，需首先了解原料药和制剂的相关理化性质。 ●⑴对于原料药，了解原料药的基本性质和结构特点。了解原料药合成工艺过程中的起始 原料、副产物、副产物产生的杂质、中间产物或可能产生的降解产物等。结合相关已知的杂质来确定有关物质检测的条件。 ●⑵对于制剂，可能影响药物有关物质的重要因素有辅料、剂型、存储条件等，主要了解 辅料对有关物质检测的干扰情况，不同剂型在不同存贮条件下可能产生的杂质等。对于复方制剂，同时要考虑到复方中原料的相互作用可能产生的杂质等。 ●有关物质分析方法的选择 ●有机杂质的检测方法包括化学法、光谱法、色谱法等，因药物结构及降解产物的不同采 用不同的检测方法。通过合适的分析技术将不同结构的杂质进行分离、检测，从而达到对杂质的有效控制。目前普遍采用的杂质检测方法主要有： ●⑴高效液相色谱法（HPLC）目前采用的分析方法主要以高效液相色谱法为主，为常用 的分析方法。选择不同的色谱柱对杂质进行有效的分离。 ●⑵薄层色谱法(TLC) 是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要 的实验技术，但准确性较低。 ●⑶气相色谱法(GC) 气相色谱法主要是用于能气化的物质的检测和分离。一般用于有机 残留溶剂的检测和分离。也可用于一些能挥发的杂质的检测。 ●⑷毛细管电泳法（CE）毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场 为驱动力，依据样品中各组分的淌度和（或）分配行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。其应用比较广泛，但该方法测定精密度不高，专属性不稳定，且CE仪器价格较高。 ●由于各种分析方法均具有一定的局限性，因此在进行杂质分析时，应注意不同原理的分

如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法

如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法 谢沐风 (上海市药品检验所上海200233) 摘要本文就如何建立TLC法测定有关物质的方法进行论述，系统地阐述了薄层色谱法各条件确定的原理，并列举了质量标准制订中存在的某些问题。 关键词薄层色谱法（TLC法）有关物质方法建立 有关物质是研究药品中除主成分以外的杂质，它可能是原料药合成过程中带入的原料、中间体、试剂、降解物、副产物、聚合体、异构体以及不同晶型、旋光异构的物质，也可能是制剂过程中产生的降解物，或是在贮藏、运输、使用过程中产生的降解物等[1]。这些杂质的存在直接反映药品的有效性和安全性，故要对其进行研究，特别是在药品申报的质量研究资料中需建立其检测方法，并根据生产、稳定性考核等实际情况考虑是否在质量标准中制订该检查项，规定其限度。目前，有关物质的常用测定方法有高效液相色谱法(HPLC法)和薄层色谱法(TLC法)。 TLC的特点是快速、简便，尤其是对无紫外吸收的杂质测定，更具有其应用价值。如能将TLC法与HPLC法有机地结合、或彼此间进行比对研究，便可得到更多、更为准确的有关杂质信息，做到两方法间的相辅相成，相益得彰！本文将着重讨论如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法。 1．测定方法类型 常用的方法有杂质对照品法（适用于已知杂质）和自身（稀释）对照法（适用于一般杂质检查，杂质成分少且尚不能取得杂质对照品）。目前国内由于难以获得杂质对照品、故一般均采用自身对照法。 2．展开剂的确定（即专属性试验） 专属性的研究是提供被分析物在杂质和辅料存在时能被区分的证明，该点是色谱条件建立的关键。通常采用在被分析物的对照品或精制品中加入一定量的杂质或辅料，证明色谱条件可将各杂质与被分析物分离[1]。这里的关键是：将多少量的杂质加入到多少量的主成分中。正确的作法是将1%(w/w)浓度量的各杂质加入到100%浓度的主成分中，配制这样的溶液来

有关物质方法研究思路

有关物质方法学研究 l 主要内容 1、有关物质检查方法建立的研发思路 2、有关物质方法的建立和方法学验证 2.1、原料药和制剂的相关理化性质 2.2、有关物质分析方法的选择 2.3、有关物质分析方法的验证 2.4、有关物质杂质的定量方法 3、有关物质杂质的分析 4、有关物质杂质限度的制订 有关物质检查方法建立的研发思路 研发思路：有关物质检测方法的建立重点是测定方法的先进性、准确性、可行性。 ⑴首先有关物质的方法选择，对于仿制药有EP、BP、USP等质量标准的药品，首选以上的色谱条件进行筛选，尤其关注的离子对试剂的使用。 ⑵选用不同色谱条件进行对比研究，如果方法一是等度测定的，方法二最好选用梯度色谱条件，比较两种方法测定结果的杂质个数及杂质含量等。确证有关物质测定方法的准确性。 ⑶对所筛选的方法进行系统的方法学研究，比较不同检测方法的优劣，选择较好的色谱条件作为本品有关物质检查的测定方法。 ⑷对于仿制药同时要将自制样品与市售原研样品进行全面的质量比较，分析其杂质的种类和含量，确保自制样品与市售原研样品的杂质在同一水平。 原料药和制剂的相关理化性质 在建立有关物质检查方法前，需首先了解原料药和制剂的相关理化性质。 ⑴对于原料药，了解原料药的基本性质和结构特点。了解原料药合成工艺过程中的起始原料、副产物、副产物产生的杂质、中间产物或可能产生的降解产物等。结合相关已知的杂质来确定有关物质检测的条件。

⑵对于制剂，可能影响药物有关物质的重要因素有辅料、剂型、存储条件等，主要了解辅料对有关物质检测的干扰情况，不同剂型在不同存贮条件下可能产生的杂质等。对于复方制剂，同时要考虑到复方中原料的相互作用可能产生的杂质等。 有关物质分析方法的选择 有机杂质的检测方法包括化学法、光谱法、色谱法等，因药物结构及降解产物的不同采用不同的检测方法。通过合适的分析技术将不同结构的杂质进行分离、检测，从而达到对杂质的有效控制。目前普遍采用的杂质检测方法主要有： ⑴高效液相色谱法（HPLC）目前采用的分析方法主要以高效液相色谱法为主，为常用的分析方法。选择不同的色谱柱对杂质进行有效的分离。 ⑵薄层色谱法(TLC)是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，但准确性较低。 ⑶气相色谱法(GC)气相色谱法主要是用于能气化的物质的检测和分离。一般用于有机残留溶剂的检测和分离。也可用于一些能挥发的杂质的检测。 ⑷毛细管电泳法（CE）毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分的淌度和（或）分配行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。其应用比较广泛，但该方法测定精密度不高，专属性不稳定，且CE仪器价格较高。 由于各种分析方法均具有一定的局限性，因此在进行杂质分析时，应注意不同原理的分析方法间的相互补充与验证，如HPLC与TLC及HPLC与CE的互相补充，反相HPLC系统与正相HPLC系统的相互补充，HPLC不同检测器检测结果的相互补充等。 有关物质分析方法的验证 ①检测波长的选择 有关物质检测波长是结合主成分与杂质的最大吸收波长进行选择。 测定方法：分别称取待测供试品、对照品、空白辅料、市售对照样品适量，用流动相溶解并稀释到一定浓度，配制成对照品溶液、供试品溶液以及空白辅料溶液，分别于采用HPLC法测定，采用DAD检测器进行，确定待测物质中各杂质的最

化学实验基础与研究物质的实验方法

第二单元化学实验基础与研究物质的实验方法 一、选择题 1.(2014年7月·浙江学考)欲分离某CCl4和H2O的混合液，除铁架台、铁圈外，还需要用到的仪器是( ) 2.选择萃取剂将碘水中的碘萃取出来，有关这种萃取剂应具备的性质和说法正确的是( ) A.萃取剂可以选择酒精 B.难溶于水，且必须比水密度小 C.难溶于水，且必须易与碘发生化学反应 D.难溶于水，且碘在此萃取剂中的溶解度远大于在水中的溶解度 3.下列实验操作或事故处理正确的是( ) A.金属钠着火，立即用水扑灭 B.实验结束后，用嘴吹灭酒精灯 C.皮肤上不慎沾上NaOH溶液，立即用盐酸冲洗 D.稀释浓硫酸时，将浓硫酸沿器壁慢慢注入水中，并不断搅拌 4.(2014年1月·浙江学考)下列说法中不正确的是( ) A.利用焰色反应可鉴别KCl溶液和NaCl溶液 B.利用丁达尔效应可鉴别溶液和胶体

C.运用蒸馏的方法，可以分离沸点相差较大的液体混合物 D.用pH试纸测定某溶液的pH时，需预先用蒸馏水湿润pH试纸 5.下列溶液中Cl-浓度最小的是( ) A.200 mL 2 mol·L-1MgCl2溶液 B.1 000 mL 2.5 mol·L-1NaCl溶液 C.300 mL 5 mol·L-1KClO3溶液 D.250 mL 1 mol·L-1FeCl3溶液 6.某溶液可使紫色石蕊溶液变红，向其中加入BaCl2溶液，有白色沉淀生成，该溶液中可能含有的离子是下列中的( ) A.S B.C C.Mg2+ D.N 7.除去下列括号内的杂质，试剂和操作均正确的是( ) 选项物质试剂操作 A Na2CO3(NaHCO3) 盐酸蒸发，结晶 B Cl2(HCl) 饱和食盐水气体通过洗气瓶 C NaCl(Na2CO3) 稀硫酸蒸发结晶 D NH3(H2O) 浓硫酸气体通过洗气瓶 8.某物质灼烧时，焰色反应为黄色，下列判断中正确的是( ) A.该物质一定是钠的化合物 B.该物质一定含钠元素 C.该物质中不含钾元素 D.该物质一定是金属钠

有关物质检查方法学验证标准操作规程

有关物质（包括已知杂质）检查方法验证标准操作规程 1.目的 为保证检测工作的可靠性和可重现性，在未知样品的检测前必须对检测方法进行验证以证明所采用的检测方法适合于相应的检测要求。 2.范围 建立药品质量标准时、药品生产工艺变更时、制剂组分发生变更时、原分析方法修订时均应进行有关物质检测的方法学的验证。 3.责任人 检测员、项目负责人、各级项目经理：要求系统、全面验证含量测定方法并记录整理验证数据。 4.程序 4.1验证内容：杂质检测方法的建立基于方法学研究，主要包括专属性试验、检测限试验、溶液稳定性试验等内容，如果定量检测杂质则需进行线性、精密度、稳定性、重现性及回收率等试验，从不同的角度、层面验证分析方法的可行，从而保证药品中的杂质能够有效地检测。 4.2 杂质检测方法建立验证及可接受标准 1）专属性试验主要通过破坏性实验实现。 破坏性试验，也称为强制降解试验（stressing test），它是在人为设定的特殊条件下，如酸、碱、氧化、高温、光照等，引起药物的降解，通过对降解产物的测定，验证检测方法的可行性，分析药物可能的降解途径和降解机制。每项破坏性试验通常包括以下内容：酸降解一般采用0.1mol/L－1mol/L盐酸或硫酸；碱降解采用0.1mol/L－1mol/L的氢氧化钠溶液；氧化降解采用合适的过氧化氢溶液。以上三种试验，为了加快反应或者提高降解强度，必要时可以加热或提高浓度；高温试验通常温度高于加速试验温度的10℃，如50℃、60℃等，对于原料药有时需考虑水溶液或混悬液的降解，或者考虑在不同的pH值条件下的降解；光照试验条件可采用4500LX。破坏性试验的具体条件，与具体药物密切相关，需结合具体药物的特点，选择合适的条件，使药物有一定量的降解，并对可能的降解途径和降解机制进行分析，保证实验的意义。 药物经强力破坏产生的降解产物通常采用色谱法测定，需结合药物和可能降

有关物质分析方法验证的可接受标准

#1 有关物质分析方法验证的可接受标准有关物质分析方法验证的可接受标准简介药审中心黄晓龙摘要：本文介绍了在对有关物质检查所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。关键词：有关物质检查分析方法验证可接收标准药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。由于这些有关物质的存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有关物质的控制是药品研发的一个重要方面，也是我们在药品审评中一直重点关注的要点之一。而要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法，这就涉及到分析方法的筛选与验证。从现有的申报资料看，药品研发单位已基本上意识到分析方法验证的重要性，但是对验证时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标准，从而难以对验证结果进行评判。为解决这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对有关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差（RSD）。该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。2．线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴截距应在100％响应值的25％以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。3．精密度1）重复性配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于15%。2）中间精密度配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于20%。4．专属性可接受的标准为：空白对照应无干扰，该杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小于2.0。5．检测限杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。6．定量限杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，峰面积的相对标准差应不大于5.0%。7．耐用性分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化±5nm、流速相对值变化±20％以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离；各条件下的杂质含量数据（n=6）的相对标准差应不大于 2.0%，杂质含量的绝对值在±0.1％以内。8、系统适应性配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析，该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，理论塔板数应符合质量标准的规定。9．溶液稳定性按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量，然后将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室（4℃）中，在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。可接受的标准为：主成分的含量变化的绝对值应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在±0.1％以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。

规律总结-研究物质的实验方法

规律总结 1．物质检验的操作步骤 （1）物理方法：依据特殊的物理性质（如颜色、气味、溶解性、溶解时的热效应等）进行观察、分析、判断，得出结论。 （2）化学方法：一般应包括取样、操作、现象、结论四个部分，要求做到： ①“先取样，后操作”，如果样品是固体，一般先用水溶解，配成溶液后再检验； ②要“各取少量溶液，分别加入几支试管”进行检验，不得在原试剂瓶中进行检验； ③要“先现象，后结论”，如向Na2CO3溶液中滴加盐酸，所观察到的现象应记录为“有 气泡产生”或“有无色气体放出”，不能说成“碳酸钠和盐酸反应，放出二氧化碳”，或“有无色二氧化碳气体放出”。 2．常见物质的主要物理特性 （1）固体物质的颜色 ①白色固体：CuSO4、MgO、P2O5、CaO、Ca（OH）2、CaCO3、KClO3、KCl、NaCl、Na2CO3等②红色固体：Cu、Fe2O3③黑色固体：C（木炭）、CuO、MnO2、Fe3O4、铁粉④蓝色固体：CuSO4·5H2O⑤绿色固体：Cu2（OH）2CO3⑥淡黄色固体：S。 （2）沉淀的颜色 ①不溶于水也不溶于稀硝酸的白色沉淀物是AgCl、BaSO4。 ②不溶于水但能溶于酸，且能产生大量气泡，生成能使澄清石灰水变浑浊的气体的白色沉淀物常见的是CaCO3、BaCO3、MgCO3、ZnCO3、BaSO3、CaSO3。 ③不溶于水，能溶于酸，但没有气泡生成的白色沉淀物常见的是Mg（OH）2、Zn（OH） 、Al（OH）3。 2 ④不溶于水的蓝色沉淀物是Cu（OH）2。 ⑤不溶于水的红褐色沉淀是Fe（OH）3。 （3）溶液的颜色 ①蓝色溶液：含Cu2＋的溶液，如CuSO4溶液、CuCl2溶液（带绿色）。 ②黄色溶液：含Fe3＋的溶液，如Fe2（SO4）3溶液、FeCl3溶液。 ③浅绿色溶液：含Fe2＋的溶液，如FeSO4溶液、FeCl2溶液。 ④无色溶液一般是不含Cu2＋、Fe3＋、Fe2＋的溶液。 （4）有刺激性气味的气体是SO2、HCl、NH3。 （5）酸碱盐的溶解性表。

有关物质方法确认方案

METHOD VERIFICATION PROTOCOL FOR CHROMATOGRAPHIC PURITY OF CYTARABINE 阿糖胞苷有关物质检查方法确认方案

Contents 目录 一、In troduct ion (3) 二、Scope (3) 三、Resp on sibility (3) 四、Defin iti ons (4) 五、Project (6) 六、Refere nces (27)

In troduct ion 简介 ## is in the process of developing Cytarabine Injection, a liquid product for pare nteral adm ini strati on, for ##. Cytarab ine is a chemotherapy age nt with a molecular weight of 243.2. The API from Zhejia ng Hisun Pharmaceutical Co. Ltd, which is approved by FDA, is used for Cytarab ine Injection by Lummy.The Chromatographic purity method for Cytarab ine is the method in the current USP34. The HPLC method for Chromatographic purity test of Cytarabine is a quantitative method. The method will be verified according to USP<1226>, including system suitability, specificity, LOD, LOQ, precisi on, soluti on stability and mobile phase stability . 阿糖胞苷注射液是一种临床用液体产品，##药业为##药业研发该品种。阿糖胞苷 是一种化学药，分子量为243.2。莱美研发阿糖胞苷注射液所用原料药来源于浙江海正药业，是获得了FDA认证的原料药。阿糖胞苷色谱纯度检测方法来自现行USP34, 色谱纯度检查方法，是定量检测方法。依照USP<1226>，本次确认内容包括系统适 用性，专属性，检测限，定量限、精密度、溶液稳定性和流动相稳定性。 Scope 范围 This protocol applies to the verification for chromatographic purity of cytarab ine. 该方案适用于阿糖胞苷色谱纯度的方法确认。 Resp on sibility 职责

有关物质分析方法验证的可接受标准简介黄晓龙

国家食品药品监督管理局药品审评中心-电子刊物 发布日期20060208 栏目化药药物评价>>化药质量控制 标题有关物质分析方法验证的可接受标准简介 作者黄晓龙 部门 正文内容 黄晓龙 摘要：本文介绍了在对有关物质检查所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。 关键词：有关物质检查分析方法验证可接收标准 药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。由于这些有关物质的存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有关物质的控制是 药品研发的一个重要方面，也是我们在药品审评中一直重点关注的要点之一。而要对有关物 质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法，这就涉及到分析方法的筛选 与验证。从现有的申报资料看，药品研发单位已基本上意识到分析方法验证的重要性，但是 对验证时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标准，从而难以对验证结果进行评 判。为解决这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对有

关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差（RSD）。 该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。 2．线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴截距应在100％响应值的25％以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。 3．精密度 1）重复性 配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于15%。 2）中间精密度 配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于20%。 4．专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，该杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小

2020高中化学专题1第二单元研究物质的实验方法第1课时物质的分离与提纯学案苏教版必修

第1课时物质的分离与提纯 知识内容必考要求加试要求物质的分离与提纯(过滤、蒸馏、萃取、分液、结晶)。 b c 目标 定位 1.根据混合物各成分的性质会选择物质的分离方法。 2．初步学会使用过滤、蒸发、蒸馏、萃取等方法对混合物进行分离 提纯。 一过滤与蒸发 1．过滤——是分离固体和液体混合物最常用的方法之一，主要除去液体中的不溶性固体。 (1)主要仪器及用品：漏斗、烧杯、玻璃棒、铁架台(附铁圈)、滤纸等。 (2)在进行过滤操作时应注意的问题： ①一贴：滤纸紧贴漏斗内壁； ②二低：滤纸边缘略低于漏斗边缘；液体的液面略低于滤纸的边缘； ③三靠：向漏斗中倾倒液体时，烧杯的尖嘴应靠到玻璃棒上；玻璃棒的底端 应轻靠到漏斗三层滤纸一侧；漏斗颈的末端应靠到烧杯的内壁上。 2．蒸发——是指给液体加热，使液体受热汽化，从溶液中分离出固体物质的方法。蒸发可得晶体，蒸发也用于浓缩溶液。 (1)主要仪器：蒸发皿、铁架台、酒精灯、玻璃棒等。 (2)在进行蒸发操作时应注意的问题： ①在加热蒸发过程中，应用玻璃棒不断搅拌，防止由于局部过热造成 液滴飞溅； ②加热到蒸发皿中剩余少量液体时(出现较多晶体时)应停止加热，用 余热蒸干； ③热的蒸发皿应用坩埚钳取下，不能直接放在实验台上，以免烫坏实 验台或引起蒸发皿破裂。如果的确要立即放在实验台上，则要放在石 棉网上。 归纳总结 1．固体＋液体混合物的分离方法 (1)若固体不溶于水，采用过滤法。 (2)若固体溶于水，采用蒸发浓缩、冷却结晶方法。

2．固体＋固体分离的物理方法 (1)若一种组分易溶于水，另一组分难溶于水，可以先加适量的水溶解混合物，然后过滤。 (2)若两种组分都溶于水，且溶解度随温度变化有较大差异，可以先加适量水溶解混合物，然后蒸发结晶或冷却结晶。 [提醒] (1)沉淀的洗涤：为除去沉淀表面附着的可溶性物质需对沉淀进行洗涤，其方法是向漏斗中的沉淀里加入蒸馏水至浸没沉淀，让水自然滤出，重复2～3次。 (2)检验沉淀是否洗净的方法是取洗涤液加入沉淀剂没有沉淀产生，表明洗涤液中无杂质离子，沉淀已洗净。 (3)过滤及洗涤沉淀的操作中不能用玻璃棒搅拌液体。 1．粗盐提纯实验中，下列操作不正确的是( ) A．先用酒精灯加热蒸发皿，再将滤液倒入蒸发皿 B．蒸发过程中用玻璃棒不断搅拌 C．当加热至蒸发皿中有较多固体析出时停止加热，利用余热将液体蒸干 D．蒸发完成时，用坩埚钳把蒸发皿移至石棉网上 答案 A 2．蒸发时，下列说法正确的是( ) A．等到蒸发皿中出现较多固体时，停止加热 B．当蒸发皿盛满溶液时，用微火加热 C．将蒸发皿放在石棉网上，用酒精灯加热 D．在蒸发溶液时，为防止污染药品，一般不用玻璃棒搅拌 答案 A 解析用蒸发皿蒸发溶液时，若蒸发皿盛满溶液，加热沸腾会使溶液大量溢出，B选项不正确；蒸发皿可用酒精灯直接加热，C选项不正确；为防止因局部过热造成液滴飞溅，应用玻璃棒不断搅拌，D选项不正确。 二萃取与分液 1．从溴水中提取溴的实验 (1)在试管中加入2～3 mL溴水，再向试管中加入1 mL CCl4，振荡、静置。观察到的实验现象是________________________________________________________________________。(2)产生此现象的原因是____________________________________________________ ________________________________________________________________________。

有关物质方法开发及验证

有关物质方法开发以及验证 有关物质方法开发流程（主要针对仿制药）： 1.有关物质条件的选择：查询或者购买开发品种的国内外质量标准，有进口的 得到进口注册标准，找到国内代表性企业的质量标准（主要是首仿厂家和最新批准厂家的质量标准），比较这些标准，绝大多数情况下可以筛选出理想的检测条件。筛选过程一般以相同浓度样品进行，得到以下结果： 波长的选择：有关物质检测主要是考虑所有杂质的检出情况，因此，应全盘关注杂质的检测波长，可以采用已知杂质UV扫描和对未知杂质的DAD扫描得出较好的检测波长，切记不能只考虑主成分的最大吸收。 2.系统适应性 系统适应性主要考察杂质与主峰、杂质与杂质的分离情况，一般要求杂质与主峰或者已知杂质与杂质之间的分离度不小于1.5，未知杂质与未知杂质之间的分离度不小于1.2，同时关注拖尾因子与理论塔板数等信息。 通常采用在被测物对照品（或者供试品）中加入适量的杂质或辅料，以检测分离情况。杂质加入量一般为被测物浓度的1%，以模拟被测物中杂质的存在状态。接收标准：每个成分6针相对标准偏差不大于5.0%，此数据也可作为精密度试验数据。 3.定量方法的选择 有关物质定量方法主要有杂质对照品法、加校正因子的主成分自身对照法、不加校正因子的主成分自身对照法、峰面积归一化法等几种。在我国，峰面

积归一化法暂时还未能接受，毫无疑问，定量最精确的为杂质对照品发，但有些杂质对照品的获得极难，成本也很大，尤其是在订入质量标准中，无疑为以后产品的生产检测带来极大困难与成本的大幅增加；加校正因子的主成分自身对照法为杂质定量的合适方法，但要求计算校正因子，有时在进口标准或者国外药典标准中已有杂质校正因子，但为了验证自身实验条件或者实验环境的精确情况，一般重新再计算校正因子与已知校正因子进行对比，在正常情况下，自身计算的校正因子与已知的校正因子无明显差异为最佳情况，校正因子的计算要求采用不同的色谱柱在不同的液相系统多次计算求得平均值作为校正因子。校正因子的获得最常用的就是分别制备相同浓度的被测物与各杂质溶液，分别得到标准曲线，其斜率值即为相应的校正因子（f）。当f 为0.8~1.2时，可以采用不加校正因子的主成分自身对照法定量，若f≥1.2或≤0.8时，则应加入校正因子进行定量；不加校正因子的自身对照法操作简单，但要求其杂质响应与主峰一致。 4. 供试品溶液浓度的确定、检测限和定量限 供试品溶液的浓度应能有效检出相关杂质，但浓度太高会产生主峰严重拖尾、分裂、检测器和色谱柱过载等情况，若浓度太低，则不利于杂质检出。一般以检测限作为衡量指标，谢沐峰老师的一片文章提到主峰浓度应为检测限浓度的2000~5000倍，通常情况，我们做到主峰浓度不小于检测限浓度的10000倍。数据如下报告： 5. 强力破坏试验 破坏条件有酸、碱、高温、光照、氧化，为了确认杂质的来源，同时对比空白（酸、碱、过氧化氢）与未破坏样品。 强力破坏以两种状态进行： 溶液状态：热、酸及碱水解、氧化、光照 固体状态：高温、高湿和光照 破坏程度不宜太大，以产生20%左右杂质的条件为宜，在破坏试验过程中，最好采用二极管阵列检测器，便于检测各峰的峰纯度，同时应该注意物料平衡以及过氧化氢溶液的浓度不宜太大（否则很溶液损坏色谱柱）。下面采用一个表格说

药典分析方法验证和确认usp37 1225 1226

药典分析方法验证和确认usp37 1225 1226 <1225>药典分析方法验证 用于评价药物质量的检验方法应符合一定要求。根据联邦食品、药品、化妆品第501条的规定，在美国药典(USP)和国家处方集(NF)的正文检验方法和规定为法定标准。按照现行药品生产管理规范有关条文[21 CFR 211.194(a)]要求，用于评价药品是否符合既定标准规定的分析方法应具有一定准确性和可靠性。按照该要求[21 CFR 211.194(a)(2)]，USP和NF分析方法使用者不必验证方法的准确性和可靠性，但要确认在实际使用条件下的适用性。考虑到USP和NF标准法定地位这一基本情况，所以，药典品种新方法或修订方法得建议，应由充分实验室数据支持，以说明方法有效。 本指导通则内容尽可能与三方国际协调会(ICH)关于在欧盟、日本和美国注册申报资料要求中与分析方法部分有关的分析方法验证和方法学文本一致。 药典申报 新的或修订的分析方法得药典申报，应报送充分的资料，以便美国药典委员会专家理事会及其专家委员会建议的方法是否清晰完整，需要建立该方法的结论，以及方法验证文本。方法类型不同，申报要求可能不同，一般包括下列内容: 理由写明需要本方法的理由、用途以及与其他方法比较的优点。修订的方法应写明现行药典方法的局限性以及建议方法得优点。 建议的分析方法应完整详细地写明建议的分析方法，以便他人依法操作。文字应包括全部重要的操作参数和有关事项以及明确的试验结果计算公式。 数据元素本部分要求提供详细、完整的分析方法验证文件，文件应包括实验数据及各适用的分析方法运行特性计算结果。运行特性在下文中叙述。 验证

含量和物质方法学验证内容

含量和物质方法学验证 内容 文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]

含量测定方法学验证内容及可接受标准： 1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在%%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于%。 2．线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：在80％至120％的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于%。？ 3．精密度 1）重复性配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于%。 2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于%。？ 4．专属性可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。？ 5．检测限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。

6．定量限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于%。 7．耐用性分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±、柱温变化 ±5℃、流速相对值变化±20％时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于%。 8、系统适应性配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于%，主峰保留时间的相对标准差应不大于%。另外，主峰的拖尾因子不得大于，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。 有关物质测定方法学验证内容及可接受标准： 1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为%，则可分别配制该杂质浓度为％、％和％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差（RSD）。该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。