中草药提取物复配化妆品乳液延缓皮肤衰老实验研究
Ch i nese med i c i nal p lant A r te m isia rupestr is L.by high speed
counter current chro m atography[J].J Chromatography A,
2005,1076(1 2):198-201.
[4] 马雁鸣,赵 芸,吴 韬,等.高效液相制备色谱制备一枝
蒿酮酸对照品[J].中草药,2005,36(7):1002-1004.[5] HA JI AKBER A ISA,YONG J P.(5R,8R) 2 (3,8 D i m
ethy l 2 oxo 1,2,4,5,6,7,8,8a octahydroa z u len 5 y l)acry lic
acid(rupestonic ac i d)[J].A ct a C ry st,2008,64:479. [6] 洪筱坤,王智华.中药数字化色谱指纹图谱[M].上海:上
海科学技术出版社,2003:18.
中草药提取物复配化妆品乳液延缓皮肤衰老实验研究*
高瑞英1,2,张秀宇1,2,慕 丹1,傅 中1
(1.广东食品药品职业学院化妆品科学系,广州 510520;2.广东省中药研究所,广州 510520)
[摘 要] 目的 研究当归等5味中草药提取物复配护肤品乳液的抗皮肤衰老作用。方法 将60只12个月龄雌性昆明种小鼠随机分成3组(n=20),自然衰老正常对照组(N组)、低剂量中草药提取物组(L组)、高剂量中草药提取物组(H组);另将20只3个月龄小鼠组成年青对照组(Y组)。L组用4%中草药提取物复配的化妆品乳液外涂,H组用16%中草药提取物复配的化妆品乳液外涂,N组和Y组用不含中草药提取物成分的化妆品基质乳液外涂。连续涂抹60d,取小鼠背部涂抹部位皮肤,测定皮肤组织匀浆中的羟脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(S OD)及过氧化脂质(LPO)代谢产物丙二醛(M DA)、脂褐质(LF)的含量。结果 L组SOD活力较Y组明显下降,而M DA、LF的含量明显增加。L 组及H组小鼠皮肤匀浆中的HY P含量分别达到(30.853.71)和(35.463.54)m g g 1,SOD含量分别达到(17.92
0.58)和(20.380.71)U mL 1,M DA含量达到为(6.921.38)和(5.961.25)mmo l g 1,LF含量达到(6.131.73)
和(4.891.15) g g 1;与对照组比较,均差异有显著性(P<0.05)。结论 当归等5味中药提取物复配护肤品乳液具有较显著的抗皮肤衰老作用。
[关键词] 中草药提取物;复配;抗衰老;皮肤
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1004-0781(2010)07-0857-04 Anti aging Effects of Skin Care Em ulsionM ixed w ith Chinese H erbal Extracts
GAO Ru i y i n g1,2,ZHANG X i u yu1,2,MU Dan1,FU Zhong1(1.D epart m ent o f C os m etic Science,Guangdong
F ood and D rug Vocational College,Guangzhou510520,China;2.Guangdong R esearch Institute of T rad itional
Ch i n ese M edicine,Guangzhou510520,Ch i n a)
ABSTRACT Ob jective T o study the anti ag i ng eff ec ts of sk i n care e mu lsi on m i xed w ith fi ve k i nds o f Chi nese he rbal ex tracts(CHE). M ethods S i xty f em ale m i ce of12m onths w ere rando m l y div i ded into3groups(n=20):norma l ag i ng contro l group(N),low dose(L)and h i gh dose(H)of C HE groups.Tw enty o the r fe m a l e m ice o f3m ont hs we re used as young contro l groups(Y g roup).Sk i n care emu lsi on w ith4%C HE was bes meared on the sk i n o fm i ce i n L group,tha tw it h16%C H E was bes m eared on H group,and cos m etic m atr i x w ithout CHE w as bes m eared on N and Y g roups for60d.T he dorsa l sk i n samp l es w ere co llected to de ter m i ne the contents o f hydroxypro li ne(HYP),supe rox i de dis mutase(SOD),ma londialdehyde (M DA)and li pofusc i n(LF). R esu lts The SOD ac ti v ity o f natural ag ing group(N group)decreasedm ore si gn ifi cantly,and the contents o fM DA and LF inc reased obv i ousl y t han t hose i n t he Y group,w hich showed tha t the natura l ag ing mode l w as successf u lly se t up.T he content of HY P i n L and H g roups reached to(30.853.71)and(35.463.54)mg g 1,SOD were(17.920.58)and(20.380.71)U mL 1,M DA w ere(6.921.38)and(5.961.25)mm o l g 1,LF w ere(6.
131.73)and(4.891.15) g g 1,respecti ve l y,wh i ch w ere si gn ifi cantly different fro m t hose o f the contro l g roup(P<0.
05). Conc l u sion T he skin ca re emu l s i on w it h five C HE inc l udi ng ange licae si nensis has a noticeab l e anti ski n ag i ng effect.
KEY W ORDS Chi nese herba l ex tracts;M i x up;A nti ag i ng;Sk i n
皮肤衰老是一种持续渐进性的生理过程,直接影响皮肤的外观和功能[1]。研究显示,传统护肤方剂中常用中草药,如当归、黄芪、白芷、枸杞、高良姜、佛手、茯苓和人参等均具有维持皮肤的正常组织形态、保养皮肤及抵抗衰老的作用。中药提取物中的有效成分通过透皮吸收,改善皮肤的微循环状况,增强皮肤保持旺盛抗病和修复的能力,达到延缓皮肤衰老的目的。化妆品附加值高,将中草药提取物用于抗衰老化妆品的复配,具有功效持久稳定、作用温和、副作用小的优点,有很大的开发价值[2~11]。笔者在本研究拟以自然老化小鼠为研究对象,以小鼠背部皮肤组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)
和脂褐质(LF)为指标,探讨当归、黄芪、白芷、佛手、茯苓5种中药材提取物与护肤化妆品乳液复配在抗皮肤衰老方面的实际效果。
1 材料与方法
1.1 药材 当归(Rad i x angelicae sinensis)、白芷(R adi x angelicae dahuricae)、黄芪(Rad i x astragali)、佛手(F ruct u s citri sarcodact y lis)、茯苓(F oria)购自广州市清平药材市场,经广东省中药研究所药物研究室鉴定。
1.2 试剂与仪器 各类试剂均为国产分析纯或国产生化试剂,配制水均为双蒸水。752型紫外分光光度计、960型荧光光度计、旋转蒸发仪、真空减压泵、电热恒温水浴箱、中药粉碎机、冷冻离心机(半径9.5c m)、内切式组织匀浆机、电子分析天平、恒温磁力搅拌器。
1.3 实验动物 SPF级雌性昆明种小鼠,3个月龄20只,12个月龄60只,中山大学实验动物中心提供,许可证编号:SCXK(粤) 2004 0011。
1.4 中药材的提取(水提法) 药材100g!破碎!烘干(80?)!粉碎(过内径0.250mm筛)!用双蒸水浸提(分3次进行,3次加水量分别是药材质量的10,6,4倍;浸提温度为100?,每次30m in)!合并3次浸提液!离心(1500r m i n 1,30m in)!滤液!离心(10000r m in 1,15m i n)!滤液!旋转蒸发!药材浓缩液!定容至10mL。每毫升药液相当于含10g生药的水提成分。5种水提药液等体积混合,灭菌,置4?冰箱保存备用。
1.5 护肤乳液的复配 以常规护肤乳液基质原料与中药材水提药液复配制备护肤乳液3组,L组中药材水提药液浓度为4%,H组中药材水提药液浓度为16%,N组仅含护肤乳液基质原料。
1.6 抗小鼠皮肤衰老实验
1.6.1 自然衰老模型的建立及分组 选用自然老龄12个月龄清洁级雌性昆明种小鼠60只,随机分为3组:正常对照组(N组)、中药材提取物低剂量组(L 组)、中药材提取物高剂量组(H组),每组20只。另将20只3个月龄清洁级雌性昆明种小鼠作为年青组(Y组)对照,体质量20~23g。小鼠按组别分笼饲养。在相同的自然条件下,常规饲食饮水,适应性饲养后开始进行实验。实验前用剃毛器脱去小鼠背部两肩[收稿日期] 2009-09-16
[基金项目] *广东省中医药局项目(基金编号: 2009277);广药职院院级项目(基金编号:2006018,2008Z011) [作者简介] 高瑞英(1971-),女,河北沧州人,副教授,副主任药师,博士,主要从事环境健康与安全评价研究,电话: 020-********,E ma i:l g ao laura@g m a i.l com。胛之间皮肤上的毛3c m#3c m,L组用4%中草药提取物复配的化妆品乳液外涂,H组用16%中草药提取物复配的化妆品乳液外涂,N组与Y组用不含中草药提取物成分的化妆品基质乳液外涂,保鲜膜保护2h。qd,每次0.5g,连续涂抹60d。实验完成后将小鼠处死,测定其HYP、SOD、MDA与LF值。
1.6.2 10%皮肤匀浆的制备及SOD、MDA、LF的测定 取背部脱毛后皮肤组织块约0.5g,经预冷0.9%氯化钠溶液漂洗,除去皮下脂肪和其他结缔组织,滤纸拭干,称定质量,组织块剪碎后倒入匀浆管中,加入该组织块9倍质量的预冷0.9%氯化钠溶液,用内切式组织匀浆机制成10%组织匀浆(在冰水中进行),然后反复冻融3次,使其完全破碎,细胞内容物完全游离在液相中。皮肤匀浆中SOD活性、MDA含量、皮肤LF等指标参数,均参照南京建成生物工程公司试剂盒说明书方法进行测定。
1.6.3 HYP与胶原蛋白的测定 小鼠背部皮肤脱毛并除去结缔组织后,丙酮 乙醚=1 1(V/V)脱脂, 80?烘干,精密称取50m g,加6m ol L 1盐酸溶液2mL混匀,于80?烘箱水解36h;取水解液0.4mL用6m o l L 1的氢氧化钠溶液调节其p H值在6~7之间,加水定容至10.0mL;取水解液0.2mL入试管,依次加入缓冲液1mL,氨胺T1mL,高氯酸1m L,显色剂1mL,混匀,60?水浴15m in,550nm波长1c m光径比色,空白调零,同时配制标准曲线管。样品中胶原蛋白的质量分数以胶原蛋白中HYP质量分数为13%进行计算。
1.7 统计学方法 采用SPSS11.0统计分析软件,所有测定数据均以(x s)表示,组间比较采用t检验。P<0.05表示差异有显著性,P<0.01为差异有极显著性。
2 结果
2.1 小鼠皮肤SOD、MDA、LF的测定结果 结果见表1。实验结果表明,N组SOD活性较Y组显著下降(P<0.01),而M DA、LF的含量显著增加(P<0.01)。不同剂量中药材提取液复配护肤化妆品乳液均能明显升高自然衰老小鼠皮肤SOD活性,使其MDA、LF的含量明显下降。本实验结果证实中药材提取液复配护肤化妆品乳液具有显著的抗皮肤衰老作用。
2.2 小鼠皮肤HYP和胶原蛋白含量的测定结果 中药材提取物复配护肤乳液对小鼠皮肤中HYP及胶原蛋白含量的影响结果见表2。实验结果表明中药材提取物高、低剂量复配的护肤化妆品乳液组小鼠皮肤中HYP 的含量较N组有明显提高,差异有极显著性(P<0.
01)。提示当归等5种中药材提取物复配护肤化妆品乳液可促进皮肤胶原蛋白的合成,使皮肤趋于年轻化。 表1 中药材提取物复配护肤乳液对小鼠皮肤中S O D, M DA,LF含量的影响
T ab.1 E ffects of skin care emu lsi on m ixed w ith ch inese herba l extracts on th e con ten t of SOD,MDA and LF in s k in of m i ce x s
组别小鼠/
只
月龄
SOD/
(U mL 1)
M DA/
(mm ol g 1)
LF/
( g g 1)
L组201217.920.58*1 6.921.38*26.131.73*1 H组201220.380.71*2 5.961.25*24.891.15*2 Y组20321.640.62*2 5.441.41*24.611.03*2 N组201217.510.699.871.167.421.24
与N组比较,*1P<0.05,*2P<0.01
Compared w ith the N group,*1P<0.05,*2P<0.01
表2 中药材提取物复配护肤乳液对小鼠皮肤中HY P及胶原蛋白含量的影响
T ab.2 E ffects of skin care emu lsi on m ixed w ith ch inese herba l extracts on th e conten t of H YP and coll agen in skin of m ice x s
组别小鼠/
只
月龄
HYP/
(mg g 1)
胶原蛋白/
(m g g 1)
提高率/
%
L组201230.85 3.71*1237.3128.54*18.93
H组201235.46 3.54*2272.7727.23*225.21
Y组20342.47 3.59*2326.6927.62*249.96
N组201228.32 3.67217.8528.23?
与N组比较,*1P<0.05,*2P<0.01
Compared w ith the N group,*1P<0.05,*2P<0.01
3 讨论
胶原蛋白是哺乳动物皮肤的主要组成部分,其结构和含量与皮肤的衰老有着密切关系。HYP在胶原蛋白组成中占13%~14%,是维持胶原蛋白纤维稳定性的重要单元,通常HYP的含量随着皮肤的衰老而降低,是反映胶原纤维变化的敏感生化指标。自由基学说认为自由基可导致衰老,使脂类发生过氧化,最终产物是MDA。MDA与体内的一些生物大分子交联而形成LF,导致黄褐斑。MDA和LF可作为皮肤衰老程度的评价指标。SOD广泛存在于一切生物体内,是唯一能够特异性清除超氧自由基(衰老启动因子)的抗氧化酶。SOD活性已经成为抗衰老药物和抗衰老化妆品的一个重要指标。
判断一种物质是否具有抗氧化活性,主要看它是否具有以下性质,%是否能起到供氢体的作用,作为自由基吸收剂,即是否可以迅速将一个氢原子提供给自由基,从而干扰自由基链式反应。&生成的自由基中间体是否稳定,自由基中间体比原来的自由基更稳定或能转变成其他的稳定化合物,就能降低链式反应的传递速度,从而起到清除自由基的作用。?是否能对金属离子起络合作用,即是否作为金属离子螯合剂,因为金属离子,特别是那些具有两价或更高价态,且在它们之间有合适的氧化还原电势的重金属,(例如钴、铜、铁、镁等)可缩短反应引发期的时间,加快脂类氧化的速度。因此一旦这些催化剂被络合,就可能有助于延长脂质的稳定状态,从而起到抗氧化性的作用。
现代药理研究表明,当归对自由基阻滞所致的面色灰暗、不华或生疮肿,均有特效[12]。黄芪有抗衰老、免疫调节、促进造血、加强心肌收缩力、保护肾功能等多方面的药理作用,清除自由基作用亦有报道[13]。佛手性温味辛、苦、酸,有舒肝理气、和胃镇痛之功效,具抗衰老和抗氧化作用[14]。茯苓多糖能增高老年患者体液免疫功能,推测其可能具有抗衰老作用[15 16]。白芷具有较强的光敏作用和解热、镇痛、平喘、降压、兴奋运动和呼吸中枢等作用,同时还有抗菌、抑制脂肪细胞合成及解痉等多方面的作用[17]。
当归含有多糖、藁本内酯、阿魏酸等化合物[18];黄芪含有黄酮类、皂苷类及多糖类化合物[19];佛手含有香豆素类、黄酮类、三萜类和多糖等化合物[14];茯苓含有多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等化合物[15];白芷含有香豆素类和多糖类化合物[20]。除此之外,5种中药材还富含多种微量元素如硒等,这些成分对提取物的抗氧化和抗衰老效果起着关键的作用。相关构效机制有待进一步研究。
[DO I] 10.3870/yydb.2010.07.008
[参考文献]
[1] BERM ANN P E.A g i ng ski n:causes,treat m ents,and pre
venti on[J].N urs C lin N orth Am,2007,42(3):485-500.
[2] 张 岗,王 涛,陈俊禧.中草药提取物在抗皮肤衰老
化妆品中的应用[J].食品与药品,2007,9(07A):68-
70.
[3] CERNA S OV D,NAVA D.T he desi gn and developm ent of
anti aging for mu l ations[M].N orw ich,NY:W illia m
Andrew Publi sh i ng,2009:291-325.
[4]GLA SER D A.A nti ag i ng products and cos m eceutica ls[J].
Faci al P lastic Sur C lin N ort h Am,2004,12(3):363-372.
[5] J ACKSON B A.Cos m etic considerations and nonlase r co s
m etic procedures i n ethn i c ski n[J].D er m atol C lin,2003,
21(4):703-712.
[6] KL IGMAN A M.CO S M ET ICS:A derma tolog i st looks to
t he fut u re:prom i ses and proble m s[J].D er m atol C lin,
2000,18(4):699-709.
[7] 张 玲,王文君.中药延缓皮肤老化作用的研究进展
[J].中西医结合学报,2009,7(3):276-279.
[8] 王红丽,吴 铁,吴志华,等.人参皂苷、丹参酮和川芎
嗪抗小鼠皮肤衰老作用研究[J].第二军医大学学报,
2006,27(5):525-527.
[9] AT S UYA I N H,I KUKO N.De ter m i nati on o f hydroxypro
li ne i n rat u ri ne by hi gh perfor m ance li qui d chroma t og raphy
w it h e lec trogene m ted che m ilu m i nescence detec ti onusi ng tris
(2,2' bi pyr i dyl)ruthen i u m(II)[J].A naly tica Ch i m ica
A cta,2005,22(536):129-133.
[10] 陈蔚青.黄芪沐浴剂抗皮肤衰老作用研究[J].浙江树
人大学学报,2004,4(6):90-93.
[11] C A I Y,LUO Q,S UN M,et al.A nti ox i dant acti v ity and
pheno li c compounds of112traditiona l Chinese m edic i nal
p l ants assoc i a ted w ith anti cance r[J].L i fe Sciences,2004,
74(17):2157-2184.
[12] 席淑华,石延榜.当归的炮制及有效成分研究[J].中
国现代药物应用,2008,2(4):50-51.
[13] 索 贞,任 敏,周好田.黄芪的化学成分及现代药理
[J].现代医院,2005,5(9):85-86.
[14] 朱晓燕,邬建敏,贾之慎.佛手多糖的化学组成及体外
抗氧化活性研究[J].高等学校化学学报,2005,26(7):
1264-1267.
[15] 沙 飞,禹志领,王一涛.土茯苓品质与药理研究进展
[J].中药材,2006,29(5):516-519.
[16] 侯安继,陈腾云,彭施萍,等.茯苓多糖抗衰老作用研究
[J].中药药理与临床,2004,20(3):10-11.
[17] 何开家,张涵庆.白芷化学成分及其药理研究进展[J].
现代中药研究与实践,2008,22(3):59-62.
[18] 王亚丽,梁逸曾,陈 练,等.当归活性成分的血清药物
化学研究[J].现代中药研究与实践,2004,18(B12):
75-79.
[19] 景 倩,梁 静,贾梅林.黄芪活性成分研究[J].黑龙
江医药,2008,21(1):22-23.
[20] 郑 辉,王德才.白芷的药理作用与临床应用研究进展
[J].医药导报,2009,28(1):83-86.
麻黄根抗高血压活性部位药理筛选研究*
杨艳芳1,陆 毅1,吴高峰2,李立展1,吴和珍1
(1.湖北中医药大学中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室,武汉 430065;2.湖北福人药业股份有限公司,湖北通城 437400)
[摘 要] 目的 筛选麻黄根抗高血压的活性部位。方法 自发性高血压大鼠(S HR)56只随机分为空白对照组、阳性对照组(给予复方罗布麻片水溶液)、总提物组(给予麻黄根乙醇提取物)、石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水液组。灌胃给药后检测受试大鼠的收缩压和舒张压。结果 乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组与空白对照组比较差异有显著性(P<0.05)。与阳性对照组比较,乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组的舒张压差异无显著性,而三者之间收缩压差异有显著性(P<0.05),乙酸乙酯部位、正丁醇部位对S HR舒张压的作用与阳性对照药的药效相当,而对收缩压的作用不及阳性对照药。乙酸乙酯部位组与正丁醇部位组抗高血压活性相当,差异无显著性。结论 乙酸乙酯部位、正丁醇部位均为麻黄根抗高血压作用活性部位。
[关键词] 麻黄根;抗高血压;活性部位;高血压,自发性;药理筛选
[中图分类号] R285.5;R965 [文献标识码] A [文献标识码] 1004-0781(2010)07-0860-03 Phar macological Screening of Anti h ypertensive Active Sites of Ephedrae Root
YANG Y an fang1,LU Y i1,WU G ao feng2,LI Li zhan1,WU H e zhen1(1.K ey Laborator y of T rad itional Ch i n ese M ed icine R esource and Co mp ound P rescri p tion,H ubei Universit y o f Traditional Chinese M edicine, M inistr y of Educa tion,Wuhan430065,China;2.H ubei Furen P har m acy Co.,L t d.,Tong cheng437400, Ch i n a)
ABSTRACT Ob jective To screen the anti hypertens i ve acti ve sites o f Ep he dra roo t. M ethod s T he spontaneously hypertensive rats(S HR)were d i v i ded i nto7g roups at random:blank con tro,l pos i tive contro l(l uobuma co m po sed tablets), ethano l ex trac ted,petro l eu m e t her extrac ted,acetic ether extracted,n butano l extracted and w ate r ex tracted groups.T he data o f systo lic press ure and diasto li c pressure w ere reco rded a fter the rats w ere treated by i ntrag astric ad m inistrati on. Resu lts The blood pressures of t he acetic ethe r ex tracted and,n bu tanol ex tracted groups w ere si gn ifi cant d ifferent co m pa red w ith t he b l ank contro l one.The ir d i asto lic pressures bu t not sy sto li c pressures w ere not significant different from the positi ve contro l group.The effects on diasto li c pressure by acetic ether extraction and n butano l extraction w ere equated t o t hat of the positi ve drug,wh ile the i r effects on systo lic press u re w ere not as good as t he po siti ve one.N o sta ti stica l diff e rence w as f ound bet w een t hese t w o groups. Conc l u sion T he ace ti c e t her ex tracts and n butano l extracts are bo t h anti hypertens i ve active sites o f Ephedra roo t.