瑞氏-吉姆萨染色法
瑞氏-吉姆萨染色液说明书
【产品名称】
瑞氏-吉姆萨染色液
【包装规格】
货号：DM0007
单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、 2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。【预期用途】
主要用于对血细胞进行染色
【检验原理】
瑞氏染料是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料, 对原生质的染色有很好的区别作用；吉姆萨染料由天青Ⅱ与伊红混合而成，染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，吉姆萨染色对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深，核结构显色不佳，常与瑞氏染色联合使用。
瑞氏-吉姆萨染色液是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成的，细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用，各种细胞及相关成分由于其化学性质不同，对瑞氏-吉姆萨染色液中的酸性染料(伊红)和碱性染料(亚甲蓝)的亲和力也不一样，标本涂片经瑞氏-吉姆萨染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
1、瑞氏-吉姆萨染液瑞氏染料、吉姆萨染料、甲醇
2、磷酸盐缓冲液磷酸盐
【储存条件及有效期】
5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。
2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。
3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。
4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。
【检验方法】
1、滴加瑞氏-吉姆萨染液于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂片，染色；
2、将等量的磷酸盐缓冲液滴加于瑞氏-吉姆萨染液上面，以嘴或洗耳球使两液充分混合，染色；
3、水洗，冲洗时不能先倒掉染色液，可缓慢从玻片一端冲洗，以防有沉渣沉淀在标本上；
4、干燥、镜检。
【检验方法的局限性】
仅供形态学初检观察染色使用。
【注意事项】
1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落，以免影响染色效果。
2、涂片染色中请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗，以免染料沉着于涂片上。
3、染色液用量应充足，勿使染色液蒸发干。
4、制作血细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于保温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。
5、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
6、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
7、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房
瑞氏-姬姆萨染液使用说明
瑞氏-姬姆萨染液使用说明 货号：G1020 规格：100ml/500ml 保存：室温避光保存，有效期至少2年。 产品说明： 瑞氏-姬姆萨染液是一种复合染液，兼有瑞氏和姬姆萨染液二者优点，主要应用于血液和骨髓涂片染色。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料和碱性染料的亲和力也不同，因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，着色清晰，色泽纯正，但是对胞核着色偏深,核结构显示较差。瑞氏染色对细胞核着色程度适中，细胞核结构和色泽清晰艳丽，对核结构的识别较佳，但对胞浆着色较差，故采用瑞氏姬姆萨混合染色，具有染色效果好，对比清晰，操作简便等特点。 使用方法： 本产品可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。具体方法请根据自己需求参考既有文献，本产品以涂片为例，举例说明，仅供参考。 1、取涂片、自然干燥。 2、滴加瑞氏-姬姆萨染液2-3滴覆盖整个标本涂片，染1-2分钟。 3、滴加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)，轻轻晃动玻片,
与瑞氏-姬姆萨染色液充分混匀，染色3-5分钟。 4、水洗、吸干、镜检。 5、染色后胞浆和胞核的染色清晰分明，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆呈浅红色，胞浆中颗粒区分明显。 注意事项： 1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。 2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。冲洗时间不能过久，以防脱色。 3、染色对pH十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。 4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。 相关试剂： P210010×多聚赖氨酸 G1010姬姆萨染色液 G1040瑞氏染液 G1100伊红染色液 G1140苏木素染色液(常规染色
瑞氏染色
1．检验目的 指导瑞氏染色的操作，进行各种涂片的分类。 2．方法原理 瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。各种细胞成分化学性质 不同，对刘氏染液（改良的瑞氏染液）中酸性染料曙红和碱性染料亚甲蓝的亲和力也不 一样，标本涂片经过刘氏染液染色后，各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态、特征的目的。 3．方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特异性） 3.1染色速度快，效果好。 3.2仅供形态学初学者初检观察染色使用。 3.3是临床最常用的染色技术之一，用于细胞分类、寄生虫检出及分类。 4．标本类型（如血浆、血清、尿液等） 4.1血细胞涂片、脱落细胞学标本（脑脊液、胸腹水等）。 4.2标本采集后要及时制片，以免时间久细胞形态发生退化改变。 5．要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统 5.1试剂组分： 5.2试剂存储和有效期： 6．校准程序（计量学溯源性）
7．质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施 8．程序步骤 8.1标准方法： 8.1.1加刘A（0.5-0.8ml）染色30S。 8.1.2再将刘B滴加于A液上面（滴量为A液的两倍）。以洗耳球轻吹，让两液充分 混合，染色1min。 8.1.3水洗（不能先倒染色液，以流水轻轻冲去），待干后镜检。 8.2快速染色，适用于脱落细胞学标本： 8.2.1加刘A（0.5-0.8ml）后，立即将刘B滴加于A液上面（滴量为A液的两倍）。以 洗耳球轻吹，让两液充分混合，染色10-20S。 8.2.2水洗（不能先倒染色液，以流水轻轻冲去），待干后镜检。 9．计算结果原理 10．生物参考区间 11．警告值、危急值（适用时） 12．检验结果可报告区间 12.1红细胞呈淡红色，白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染 紫红色，核染色质结构清楚。 12.2脱落细胞学标本如脑脊液、胸腹水沉渣涂片，因其细胞通透性较高，应行快速染色 如染色偏深，无法辨识核结构，应适当缩短染色时间，以免误判。 13．对超出可报告范围的结果的处理 14．实验室解释 15．安全防护措施 所有标本按具有潜在传染性的标本处理。 16．最常见的误差源。 17．方法的局限性（如乳糜血、溶血、高胆红素血等干扰影响、交叉反应等） 18．参考文献 18.1全国临床检验操作规程-第三版 18.2《刘氏染液厂家说明书》 19．有关引用程序与文件 20．SOP涉及的记录与表格
瑞氏-姬姆萨复合染色液使用说明
瑞氏-姬姆萨复合染色液使用说明 货号：G3990 保存：室温避光保存，有效期至少2年。 产品内容： 2×100ml2×500ml Storage 试剂(A):Wright-Giemsa Stain100ml500ml RT避光试剂(B):磷酸盐缓冲液100ml500ml RT 产品说明： 瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料，对原生质的染色有很好的区别作用。吉姆萨染液由天青Ⅱ与伊红混合而成，染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同，姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深，核结构显色不佳，常与故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。 Wright-Giemsa Stain以进口瑞氏色素和姬姆萨色素为主要原料，通过研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。染液中加中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。该染液的特点：由瑞氏-姆姆萨复合染色液和磷酸盐缓冲液组成，等量混合使用或分别处理标本使用。 使用方法(仅供参考)： 1、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。 2、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。
3、滴加适量Wright-Giemsa Stain覆盖涂片，室温染色1～2min。 4、涂片滴加等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，使磷 酸盐缓冲液不Wright-Giemsa Stain混匀，室温静置3～10min。 5、步骤3、4亦可以采用如下方法:取Wright-Giemsa Stain和磷酸盐缓冲 液等量混合，即为Wright-Giemsa工作液，滴加该工作液于血液涂片或骨髓涂片上，室温静置3～10min。 6、用自来水或蒸馏水从玻片一端轻轻冲洗。(注:也可用磷酸盐缓冲液等量 稀释后，冲洗玻片，时间控制在30s左右。） 7、干燥。镜检:先用低倍镜观察血涂片，再用油镜。 染色结果： 细菌、细胞核蓝色 组织细胞的细胞质、血红蛋白、嗜酸性颗粒粉红或橘红色 注意事项： 1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，以免影响染色效果。 2、涂片染色中，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。不能先倒掉染液，以免染料 沉着于涂片上。 3、染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。 4、染色过深可用甲醇或乙醇适当脱色，最好不复染。 5、如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液浓度。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
瑞氏染液使用说明
瑞氏染液使用说明 货号：G1040 规格：50ml/100ml 保存：室温避光保存，有效期至少2年。 产品说明： 瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料伊红（Eostm Y）组成的复合染料，溶于甲醇。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。美蓝通常为氯盐，有色部分为阳离子。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红，使其解离为有色美蓝正离子的和伊红负离子。后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是固定细胞形态，加速染色反应，增强染色效果。 使用方法： 本产品可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。具体方法请根据自己需求参考既有文献，本产品以涂片为例，举例说明，仅供参考。 1、取涂片、自然干燥。 2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醇所固定。 3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,与瑞氏染色液混匀，静置5分钟。 4、水洗、吸干、镜检。 5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。
注意事项： 1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。 2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。冲洗时间不能过久，以防脱色。 3、染色对pH十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。 4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。 相关试剂： P210010×多聚赖氨酸 G1010姬姆萨染色液 G1100伊红染色液 G1140苏木素染色液(常规染色) G1120H-E染色试剂盒
瑞氏染色的步骤
瑞氏染色液说明书 【产品名称】 瑞氏染色液 【包装规格】 货号：DM0005 单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml； 每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。 【预期用途】 主要用于对血细胞进行染色。 【检验原理】 瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(MethyleneBlue)组成的复合染料，各种细胞成分化学性质不同对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。本染色液经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色，细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 1、瑞氏染液瑞氏染料、甲醇 2、磷酸盐缓冲液磷酸盐
【储存条件及有效期】 5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。 2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。 3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。 4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。 【检验方法】 1、滴加瑞氏染液于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂片，染色； 2、将等量的磷酸盐缓冲液滴加于瑞氏染液上面，以嘴或洗耳球使两液充分混合，染色； 3、水洗，冲洗时不能先倒掉染色液，可缓慢从玻片一端冲洗，以防有沉渣沉淀在标本上； 4、干燥、镜检。 【检验方法的局限性】 仅供形态学初检观察染色使用。 【注意事项】
瑞氏-吉姆萨染液是什么
瑞氏-吉姆萨染色液说明书 【产品名称】 瑞氏-吉姆萨染色液 【包装规格】 货号：DM0007 单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml； 每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、 2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。【预期用途】 主要用于对血细胞进行染色 【检验原理】 瑞氏染料是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料, 对原生质的染色有很好的区别作用；吉姆萨染料由天青Ⅱ与伊红混合而成，染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，吉姆萨染色对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深，核结构显色不佳，常与瑞氏染色联合使用。 瑞氏-吉姆萨染色液是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成的，细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用，各种细胞及相关成分由于其化学性质不同，对瑞氏-吉姆萨染色液中的酸性染料(伊红)和碱性染料(亚甲蓝)的亲和力也不一样，标本涂片经瑞氏-吉姆萨染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 1、瑞氏-吉姆萨染液瑞氏染料、吉姆萨染料、甲醇 2、磷酸盐缓冲液磷酸盐 【储存条件及有效期】 5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。 2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。 3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。 4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。 【检验方法】 1、滴加瑞氏-吉姆萨染液于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂片，染色； 2、将等量的磷酸盐缓冲液滴加于瑞氏-吉姆萨染液上面，以嘴或洗耳球使两液充分混合，染色； 3、水洗，冲洗时不能先倒掉染色液，可缓慢从玻片一端冲洗，以防有沉渣沉淀在标本上； 4、干燥、镜检。 【检验方法的局限性】 仅供形态学初检观察染色使用。 【注意事项】 1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落，以免影响染色效果。
染色液配方
实验室常用染色液配方 1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液 A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升 B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。 2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液 A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升 B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升 将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。 3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫 升 B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升 将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。 两液混合即成。 4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。 5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升 6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔 雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。 7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40% 甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。 8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升 9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.0 10、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸 (比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。 11动物组织石蜡切片染色方法 苏木精-伊红(HE)染色：二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min，蒸馏水洗；入苏木精染液10 min，盐酸酒精分色4 s，自来水洗10 min；依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min，入伊红染液染色10 min；入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明，中性树脂封片. 一、常用染色液的配制 ⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测 定的重要试剂。 配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。 ⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红 色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。 配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油
瑞氏染液
由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。 目录 简介 使用方法 染液配制 缓冲液配制 染色步骤 染液鉴定 混合染色 简介 英文拼写Wright's stain 是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。 使用方法 瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色： 1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。 2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用： （1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。 甲醇 ME（瑞氏染料）----→M+ + E- 在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。 （2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。 编辑本段染液配制 (1) 瑞氏染液配制： 瑞氏染料830gm或1g 甲醇（AR）500ml或600ml ○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。 ○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。 ○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。 (2) 缓冲液： ●缓冲液作用： ○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重
瑞氏染液配制、使用方法及注意事项
瑞氏染液配制、使用方法及注意事项 南宁市二医院检验科马升俊 1.瑞氏染色的原理： 瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。 2.试剂的配制： 2.1 瑞氏染液的配制： 2.1.1 自配染液:瑞氏染粉0.1g，甲醇（AR）60ml。 将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将巳溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。染液配好后放于室温下，一周后即可使用。新配制染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油2～3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。 2.1.2 成品瑞氏染液: 现巳有成品瑞氏染液，如四川迈克科技公司出的快速瑞氏染色试剂（500ml/瓶）其只需室温密闭储存，可长期稳定，染色效果好。2.2 缓冲液的配制: 称取磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2 g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在PH6.4～6.8即可，后塞紧瓶口备用。 3. 瑞氏染色的使用方法： （以血涂片为例）： 3.1把制好的血涂片编好号，然后将血片平放在染色架上； 3.2加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定细胞约1分钟； 3.3滴加等量或稍多的缓冲液（可按1：2滴加），使染液充分混匀，染色5～10分钟；
瑞氏-姬姆萨复合染色液
瑞氏-姬姆萨复合染色液 简介： 瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料, 对原生质的染色有很好的区别作用。吉姆萨染液由天青Ⅱ与伊红混合而成，染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同，姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深，核结构显色不佳，常与故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。Wright-Giemsa Stain 以进口瑞氏色素和姬姆萨色素为主要原料，通过研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。 2、 将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。 3、 滴加适量Wright-Giemsa Stain 覆盖涂片室温染色。 4、 涂片滴加等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，使磷酸盐缓冲液与 Wright-Giemsa Stain 混匀室温静置。 5、 步骤3、4亦可以采用如下方法: 取Wright-Giemsa Stain 和磷酸盐缓冲液等量混合， 即为Wright-Giemsa 工作液，滴加该工作液于血液涂片或骨髓涂片上室温静置。 6、 用自来水或蒸馏水从玻片一端轻轻冲洗。(注: 也可用磷酸盐缓冲液等量稀释后，冲洗玻 片，时间控制在30s 左右。） 7、 干燥。 8、 镜检: 先用低倍镜观察血涂片，再用油镜。 编号 名称 DM0007 2×100ml DM0007 2×500ml Storage 试剂(A): Wright-Giemsa Stain 100ml 500ml RT 避光 试剂(B): 磷酸盐缓冲液 100ml 500ml RT 使用说明书 1份
瑞氏吉姆萨复合染色液
瑞氏-吉姆萨复合染色液(Wright-Giemsa stain ) 产品简介： 瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料, 对原生质的染色有很好的区别作用。吉姆萨染液由天青2与伊红混合而成，染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同，姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳，常与故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。 Leagene Wright-Giemsa stain以进口的瑞氏色素和吉姆萨色素为主要原料，通过研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。染液中加中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。 Leagene Wright-Giemsa stain的特点： 由瑞氏-吉姆萨复合染色液和磷酸盐缓冲液组成，等量混合使用或分别处理标本使用。 产品组成： 主要成分： 试剂(A): 主要由瑞氏色素、吉姆萨色素、甲醇等组成。 试剂(B): 主要由磷酸盐等组成。 自备材料： 1、载玻片 2、蒸馏水或去离子水 3、染色架 4、显微镜 操作步骤（仅供参考）： 1、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。
2、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。 3、滴加Leagene Wright-Giemsa stain覆盖涂片，室温染色1～2min。 4、涂片滴加等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，使磷酸盐缓冲液与 Wright-Giemsa stain混匀，室温静置3～10min。 5、步骤3、4亦可以采用如下方法：取Leagene Wright-Giemsa stain和磷酸盐缓冲液 等量混合后，即为Wright-Giemsa stain工作液，滴加工作液于血液涂片或骨髓涂片上，室温静置3～10min。 6、用自来水或蒸馏水从玻片一端轻轻冲洗。（注：也可用磷酸盐缓冲液等量稀释后，冲洗 玻片，时间控制在30s左右。） 7、干燥、镜检: 先用低倍镜观察血涂片，再用油镜。 染色结果： 细菌、细胞核蓝色 组织细胞的细胞质、血红蛋白、嗜酸性颗粒粉红或橘红色 注意事项： 1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，以免影响染色结果。 2、涂片染色中，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。不能先倒掉染液，以免染料沉着 于涂片上。 3、染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。 4、染色过深可用甲醇或酒精适当脱色，最好不复染。 5、如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液的浓度。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 相关产品： 产品编号 产品名称 DM0002吉姆萨/姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9) DM0005瑞氏染色液(Wright Stain ) DM0015标准革兰氏染色试剂盒(Gram Stain) DM0035抗酸染色试剂盒(Kinyoun冷染法) DM0080乳酸酚棉蓝染色液
瑞氏染色原理及作用
瑞氏染色原理及作用 本篇文章由专业生化试剂供应商岚兴生物为您提供。 瑞氏染液由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇 ，后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。瑞氏染色法就是用瑞氏染色液对细菌进行染色。那么瑞氏染色原理是什么？ 瑞氏染色原理： 瑞氏染料是由碱性染料美蓝（ Methvlem blue ）和酸性染料黄色伊红 （ Eostm Y ）合称伊红美蓝 染料即瑞氏 （美蓝－伊红Y）染料。伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。 为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须进行染色。瑞氏染色法是血细胞分析最经典和最常用的染色法。 细胞的各大种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质是两性电解质，所带正电荷的数量随溶液pH而定。对某一蛋白质而言，如环境pH
瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。 瑞氏染液染色鉴定 瑞氏或姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定： 1．取1滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有伪足形成。 2．取1滴染液加1滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。 3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况，pH是否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。 以上为瑞氏染色原理，瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美蓝混合经化学作用后，变成中性之 伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。由于系中性染料，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。
常用染色液的配制
一、常用染色液的配制 ⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。 配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。 ⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。 配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油 （2）先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。 （3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。 ⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。 配方：洋红1g ；45％醋酸100ml 煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。 ⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine）核染色剂。 配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。 原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。 原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。 原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）。 （原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用） 染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1~，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。 适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用，假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。 ⒌中性红（neutral red）溶液用于染细胞中的液泡，可鉴定细胞死活。 配方：中性红；蒸馏水100ml 使用时再稀释10倍左右。 ⒍曙红Y（伊红，eosin Y）酒精溶液常与苏木精对染，能使细胞质染成浅红色，起衬染
16瑞氏染色操作规程
瑞氏姬姆萨染色操作规程生效日期：20150125 页码：第1页共2页 1 目的：规范瑞氏姬姆萨染色操作规程，保证染色效果。 2 原理： 2.1 染色原理：瑞氏姬姆萨染色液是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成。细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料（伊红）和碱性染料（亚甲蓝）的亲和力也不一样。因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。 2.2 试剂组成：瑞氏姬姆萨A液（瑞氏染料、姬姆萨染料） 瑞氏姬姆萨B液（磷酸盐） 3 操作步骤： 3.1 滴加瑞氏姬姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min； 3.2 再将瑞氏姬姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异） 3.3 水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。 4 结果解释： 4.1 血细胞涂片、骨髓涂片染色：红细胞呈粉红色，白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。 4.2 阴道分泌物（妇科白带染色）： 4.2.1 滴虫：经过染色后的滴虫跟活的滴虫呈现完全不同形态，一般情况下，看不到鞭毛，经过染色后，滴虫多为梨形、圆形、椭圆形或呈不规则形态，浆被染成灰蓝或天蓝色，核小，枣核状，常偏于一侧，需注意观察，避免与上皮细胞混淆。 4.2.2 念珠菌（霉菌）：染成深蓝色，可见芽生孢子，假菌丝细长而直。 4.2.3 白细胞：形态上与血细胞涂片的白细胞相同，一般白细胞的多少，提示发炎程
瑞氏吉姆萨复合染色液
外周血涂片的制作方法 1、采血：胶头滴管吸取血液，血液直接滴加到洗净烘干并且硅化过的载玻片的一头。 2、推片：将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。以约30度的夹角向前均匀地推动推片即可制成血涂片。其薄厚度要适中，分布均匀而无空泡，边缘整齐。 3、固定：推片做好后，涂片后潮干固定，以免细胞漂落太多，影响制片质量， 甲醇固定液固定：涂片直接浸入固定液内，因固定液充足，固定效果较好。但细胞易脱落而发生交叉污染，因此应该分瓶固定，固定液回收时应过滤。多数标本用此法固定，固定时间15-30分钟。 4、染色：瑞氏-基姆萨双染 1）从固定缸里取出载片后，在室温下通风晾干。将载片平放在玻璃板上准备染色。 2）所用的两种染料事先过滤好（染料中有颗粒物，会沉淀在载玻片上影响载片的质量） 3）将染料滴加到载玻片上以后，让其均匀覆盖住载片上的血细胞，染色时间约为2到3分钟。等瑞氏染液有变红的趋势时，迅速滴加与瑞氏染液等量的PBS 溶液。继续染色2到3分钟。 4）染色时间到后，用PBS溶液冲片，小股水流，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。冲片结束后将载片放到阴凉处风干。 5）在玻璃板上放好牙签，将风干的载片倒扣在一根牙签上，从背面滴加基姆萨染液进行扣染。染色时间约为10分钟。时间到后用蒸馏水冲片，洗净染液后常温下风干。 5、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。 6、显微观察：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。 所需材料：硅化过的载玻片，推片，甲醇瑞氏-基姆萨双染，过滤，PBS，牙签，蒸馏水，中性树胶，显微镜，吸耳球 1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。 2．推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm宽度的推片。 目的：制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片
瑞氏染色法、
瑞氏染色法： 为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及异常变化，血涂片必须进行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变而来。目前常用瑞氏染色法。 【目的】掌握血涂片的染色方法。 【原理】把已制成的血细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色。其着色的原理包括物理吸附及化学亲和作用。不同种类的细胞及同一细胞的不同成分及不结构，对酸性及碱性染料的结合能力不同，因而使不同种类的细胞染成不同的颜色，呈现各自的特点。 【器材】我们今天的器材是：载玻片、推片、吸耳球、显微镜。 【试剂】 1瑞氏染料由酸性染料伊红(eosin,E)和碱性染料亚甲蓝(methylene blue,M|+)组成的复合染料。 ★亚甲蓝(又名美蓝)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。 ★伊红通常为钠盐。 ★将适量的伊红，美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。 甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红ME，使其解离为M+和E+，后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是具有很强的脱水作用，可固定细胞的形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。 2瑞氏染液的配制：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油15ml。 操作如下：将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨(至少半小时)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油，密闭保存。这只就是我们配制的I液。 说明：新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，美蓝逐渐转变为天青B后方可使用，这一过程称染料成熟。放置时间愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰，但我们所用的甲醇必须纯净。 II液：又称磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氢钾0.3g，磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正PH，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。也可用蒸馏水代替。 3染色：①血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴，使其盖满血涂片，大约1分钟后，滴加等量或稍多的II液，用吸耳球轻轻混匀。
瑞氏吉姆萨和NBT染色
吉姆萨(Giemsa)染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本 相同。 嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质;细胞核 蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质; 中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。 PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电 荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红;在偏三性环境 中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染 色用正经片必须清洁，无酸碱污染。配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。 一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染 色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染 色法春天要常用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，常用可加快皮肤血液循环，剌 激面部细胞分泌，有效改善皮肤生理环境，减少气候对皮肤的危害。 步骤：瑞士染液染2-3min，不冲掉后加吉姆萨染液染3min。 瑞士染液用原液，吉姆萨染液稀释10倍用。 瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue ）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y ）合称 伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Y）染料。 1.伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为 酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为 阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。 2.用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：（1 ）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M ）与伊红（ E ）在溶液中离解，可使细胞成分选择性 吸附其中的有色物质而着色。甲醇ME （瑞氏染料）————→M + + E - 在配制的瑞 氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼 此结合的反应。 （2 ）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高 细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。3. 瑞氏染液配制： (1)瑞氏染液配制：瑞氏染料830gm 或1g ；甲醇（AR ）500ml 或600ml 先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一 面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液 体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料 及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一 般储存3 个月以上为佳。 (2) 缓冲液： 1) 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH 值的改变，可使蛋白质与染 料形成的化合物重新离解。缓冲液须保持一定的pH 使染色稳定，PBS 的pH 一般在6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中 和作用，使pH 恒定。
(推荐)瑞氏染色
瑞氏染色 瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。 1原理： 瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美篮混合经化学作用后，变成中性之伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。由于系中性染料，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。 2 试剂配制： 1、瑞氏试剂瑞氏染料（粉）1克，加不含醋酮之甲醇600毫升溶解过滤后即成。混合方式可将瑞氏染料置于研钵内，加适量甲醇混合研磨，使染料溶解，将已溶解的液体倒入清洁玻瓶，再放入甲醇继续溶解剩下染料，直至染料及甲醇均用完为止，然后过滤，以深色中性之玻璃瓶储备待用。亦可将1克染料一次加入600毫升甲醇中，盛深色玻璃瓶内，塞好瓶口，置于温暖而黑暗之处或37度温箱内，每日振荡5min，连续7天以上，然后过滤储备用。染液宜久置后使用，通常存放愈久，染色效果愈好。 2、缓冲液由1%的磷酸氢二钠和1%的磷酸二氢钾各30毫升加蒸馏水1000毫升配成，或以上两药各1克加2500毫升左右蒸馏水制成。以石蕊试纸检验、调整酸碱度，使PH在6.5-7之间即可。
缓冲液亦可永新鲜蒸馏水或煮沸后密闭保存的蒸馏水。如蒸馏水与空气过多接触，则可因吸收空气中之二氧化碳而使PH值变低，影响染色，故不宜使用。 3、染色步骤 1 将已编号之涂片水平置于染色板或者染色架上，涂片两端各划一道蜡笔线，主要防止染液外溢。 2 滴加瑞氏染色液。其多少依标本所占面积大小而定，一般为4-8滴，至染液将标本完全盖住为止。染液不宜过少，否则，甲醛挥发后，易产生沉淀；不可过多，以免因过盛而流失，影响染色。 3 1-2分钟后，滴入缓冲液（染液与缓冲液的比例约为1：1.5，冬季1：1，夏季1：2）。以气囊向玻璃片上轻轻打气，使染液和缓冲液混合均匀，一般不宜口吹起，以免呼出二氧化碳改变缓冲液酸碱度而影响染色。 4 自缓冲液滴入10-15分钟后，用自来水冲洗。冲洗时应将玻片持平，以流水滴入使染液及缓冲液自玻片边缘溢出，染料沉淀即随水浮去。冲洗时，切忌水力过大，以免将标本并染液同时冲走；冲洗前切不可先将染液倾去，否则沉淀将附于标本上不能除去，染色时间与染液的性质、酸碱度、气温等关系甚大，因此应灵活掌握。最好先冲洗一张，于低倍镜下初步检查，如细胞核浆分明，颗粒清楚，表示染色满意，此时，始可将其余涂片全部冲洗。如染色过浅，则需延长染色时间。