无菌USP36
Fluid Thioglycollate Medium (Continued)
Interpretation of Results
or Thioglycolic Acid
0.3 mL The product to be examined complies with the test if Resazurin Sodium Solution (1 in 1000),fluorescence typical of Mycoplasmas is not present. The test freshly prepared 1.0 mL is invalid if the positive controls do not show fluorescence Purified Water
1000 mL
typical of Mycoplasmas. The test is invalid if the negative controls show fluorescence typical of Mycoplasmas.
pH after sterilization: 7.1±0.2.
Mix the L -cystine, agar, sodium chloride, dextrose, yeast extract, and pancreatic digest of casein with the purified water, and heat until solution is effected. Dissolve the so-dium thioglycollate or thioglycolic acid in the solution and,if necessary, add 1N sodium hydroxide so that, after sterili-zation, the solution will have a pH of 7.1 ± 0.2. If filtration is ?71? STERILITY TESTS
necessary, heat the solution again without boiling, and filter while hot through moistened filter paper. Add the resazurin sodium solution, mix, and place the medium in suitable ves-sels that provide a ratio of surface to depth of medium such x
Portions of this general chapter have been harmonized that not more than the upper half of the medium has un-with the corresponding texts of the European Pharmacopeia dergone a color change indicative of oxygen uptake at the and/or the Japanese Pharmacopeia. Those portions that are end of the incubation period. Sterilize using a validated pro-not harmonized are marked with symbols (x x ) to specify this cess. If the medium is stored, store at a temperature be-fact.x
tween 2° and 25° in a sterile, airtight container. If more These Pharmacopeial procedures are not by themselves than the upper one-third of the medium has acquired a designed to ensure that a batch of product is sterile or has pink color, the medium may be restored once by heating been sterilized. This is accomplished primarily by validation the containers in a water-bath or in free-flowing steam until of the sterilization process or of the aseptic processing the pink color disappears and by cooling quickly, taking procedures.
care to prevent the introduction of nonsterile air into the The test is applied to substances, preparations, or articles container. Do not use the medium for a longer storage pe-which, according to the Pharmacopeia, are required to be ster-riod than has been validated.
ile. However, a satisfactory result only indicates that no con-Fluid Thioglycollate Medium is to be incubated at 30°–35°.taminating microorganism has been found in the sample ex-For products containing a mercurial preservative that cannot amined under the conditions of the test .
be tested by the membrane filtration method, Fluid Thiog-lycollate Medium incubated at 20°–25° may be used instead of Soybean–Casein Digest Medium provided that it has been PRECAUTIONS AGAINST MICROBIAL
validated as described in Growth Promotion Test of Aerobes,CONTAMINATION
Anaerobes, and Fungi . Where prescribed or justified and au-thorized, the following alternative thioglycollate medium The test for sterility is carried out under aseptic condi-might be used. Prepare a mixture having the same composi-tions. In order to achieve such conditions, the test environ-tion as that of the Fluid Thioglycollate Medium , but omitting ment has to be adapted to the way in which the sterility the agar and the resazurin sodium solution. Sterilize as di-test is performed. The precautions taken to avoid contami-rected above. The pH after sterilization is 7.1 ± 0.2. Heat in nation are such that they do not affect any microorganisms a water bath prior to use and incubate at 30°–35° under that are to be revealed in the test. The working conditions anaerobic conditions.
in which the tests are performed are monitored regularly by appropriate sampling of the working area and by carrying out appropriate controls.
Soybean–Casein Digest Medium
Pancreatic Digest of Casein 17.0 g CULTURE MEDIA AND INCUBATION
Papaic Digest of Soybean Meal 3.0 g TEMPERATURES
Sodium Chloride
5.0 g Media for the test may be prepared as described below or Dibasic Potassium Phosphate
2.5 g equivalent commercial media may be used provided that Dextrose Monohydrate/Anhydrous 2.5/2.3 g they comply with the requirements of the Growth Promotion Purified Water
1000 mL
Test of Aerobes, Anaerobes, and Fungi .
The following culture media have been found to be suita-pH after sterilization: 7.3±0.2.
ble for the test for sterility. Fluid Thioglycollate Medium is Dissolve the solids in the Purified Water, heating slightly primarily intended for the culture of anaerobic bacteria.
to effect a solution. Cool the solution to room temperature,However, it will also detect aerobic bacteria. Soybean–Casein and adjust the pH with 1N sodium hydroxide so that, after Digest Medium is suitable for the culture of both fungi and sterilization, it will have a pH of 7.3 ± 0.2. Filter, if necessary aerobic bacteria.
to clarify, dispense into suitable containers, and sterilize us-ing a validated procedure. Store at a temperature between 2° and 25° in a sterile well-closed container, unless it is in-Fluid Thioglycollate Medium
tended for immediate use. Do not use the medium for a longer storage period than has been validated.
L -Cystine
0.5 g Soybean–Casein Digest Medium is to be incubated at 22.5Sodium Chloride
2.5 g ± 2.5°.
Dextrose Monohydrate/Anhydrous 5.5/5.0 g Agar
0.75 g x
Media for Penicillins or Cephalosporins
Yeast Extract (water-soluble) 5.0 g Pancreatic Digest of Casein 15.0 g Where sterility test media are to be used in the Direct
Inoculation of the Culture Medium method under Test for Ste-Sodium Thioglycollate
0.5 g
rility of the Product to be Examined , modify the preparation
of Fluid Thioglycollate Medium and the Soybean–Casein Digest cfu) of the following microorganisms, using a separate por-Medium as follows. To the containers of each medium,
tion of medium for each of the following species of microor-transfer aseptically a quantity of β-lactamase sufficient to in-ganism: Aspergillus brasiliensis , Bacillus subtilis, and Candida activate the amount of antibiotic in the specimen under
albicans . Incubate for not more than 3 days in the case of test. Determine the quantity of β-lactamase required to inac-bacteria and not more than 5 days in the case of fungi.tivate the antibiotic by using a β-lactamase preparation that Seed lot culture maintenance techniques (seed-lot systems)has been assayed previously for its penicillin- or cephalospo-are used so that the viable microorganisms used for inocula-rin-inactivating power. [N OTE —Supplemented β-lactamase tion are not more than five passages removed from the media can also be used in the membrane filtration test.]original master seed-lot.
Alternatively (in an area completely separate from that The media are suitable if a clearly visible growth of the used for sterility testing), confirm that an appropriate
microorganisms occurs.
amount of β-lactamase is incorporated into the medium, fol-lowing either method under Method Suitability Test , using x
DILUTING AND RINSING FLUIDS FOR
less than 100 colony-forming units (cfu) of Staphylococcus aureus (see Table 1) as the challenge. Typical microbial MEMBRANE FILTRATION
growth of the inoculated culture must be observed as a
confirmation that the β-lactamase concentration is appropri-ate.x
Fluid A
Table 1. Strains of the Test Microorganisms Suitable for Use in the Growth Promotion Test and the Method Suitability Test PREPARATION
Aerobic bacteria Dissolve 1g of peptic digest of animal tissue in water to Staphylococcus aureus
ATCC 6538, CIP 4.83,make 1L, filter or centrifuge to clarify, if necessary, and ad-NCTC 10788, NCIMB just to a pH of 7.1 ± 0.2. Dispense into containers, and 9518, NBRC 13276sterilize using a validated process.
Bacillus subtilis
ATCC 6633, CIP 52.62,NCIMB 8054, NBRC PREPARATION FOR PENICILLINS OR CEPHALOSPORINS 3134
Pseudomonas aeruginosa x 1x
ATCC 9027, NCIMB
Aseptically add to the above Preparation , if necessary, a 8626, CIP 82.118, NBRC quantity of sterile β-lactamase sufficient to inactivate any re-13275
sidual antibiotic activity on the membranes after the solu-Anaerobic bacterium tion of the test specimen has been filtered (see Media for Clostridium sporogenes x 2x
ATCC 19404, CIP 79.3,Penicillins or Cephalosporins ).
NCTC 532 or ATCC 11437, NBRC 14293
Fluid D
Fungi
Candida albicans
ATCC 10231, IP 48.72,To each L of Fluid A add 1mL of polysorbate 80, adjust to NCPF 3179, NBRC 1594
a pH of 7.1 ± 0.2, dispense into containers, and sterilize Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, IP 1431.83,using a validated process. Use this fluid for articles contain-(Aspergillus Niger)IMI 149007, NBRC 9455ing lecithin or oil, or for devices labeled as “sterile x 1An alternative microorganism is Kocuria rhizophila (Micrococcus pathway.”
luteus) ATCC 9341.x
x 2An alternative to Clostridium sporogenes, when a nonspore-forming Fluid K
microorganism is desired, is Bacteroides vulgatus (ATCC 8482).x
The media used comply with the following tests, carried Dissolve 5.0g of peptic digest of animal tissue, 3.0g of out before, or in parallel, with the test on the product to be beef extract, and 10.0g of polysorbate 80 in water to make examined.
1L. Adjust the pH to obtain, after sterilization, a pH of 6.9 ±0.2. Dispense into containers, and sterilize using a validated process.x
Sterility
Incubate portions of the media for 14 days. No growth of METHOD SUITABILITY TEST
microorganisms occurs.
Carry out a test as described below under Test for Sterility of the Product to be Examined using exactly the same meth-Growth Promotion Test of Aerobes,
ods, except for the following modifications.
Anaerobes, and Fungi
Test each lot of ready-prepared medium and each batch Membrane Filtration
of medium prepared either from dehydrated medium or from ingredients. Suitable strains of microorganisms are in-After transferring the content of the container or contain-dicated in Table 1.
ers to be tested to the membrane, add an inoculum of a Inoculate portions of Fluid Thioglycollate Medium with a small number of viable microorganisms (not more than small number (not more than 100 cfu) of the following mi-100 cfu) to the final portion of sterile diluent used to rinse croorganisms, using a separate portion of medium for each the filter.
of the following species of microorganism: Clostridium
sporogenes , Pseudomonas aeruginosa , and Staphylococcus au-Direct Inoculation
reus . x Inoculate portions of alternative thioglycollate me-dium with a small number (not more than 100 cfu) of Clos-After transferring the contents of the container or contain-tridium sporogenes .x Inoculate portions of Soybean–Casein ers to be tested (for catgut and other surgical sutures for Digest Medium with a small number (not more than 100
veterinary use: strands) to the culture medium, add an inoc-
ulum of a small number of viable microorganisms (not more Table 2. Minimum Quantity to be Used for Each
than 100 cfu) to the medium.
Medium (Continued)
In both cases use the same microorganisms as those de-Minimum Quantity to be Used scribed above under Growth Promotion Test of Aerobes, An-(unless otherwise justified and
aerobes, and Fungi . Perform a growth promotion test as a Quantity per Container authorized)
positive control. Incubate all the containers containing me-x
Surgical dressing/cotton/100 mg per package dium for not more than 5 days.
gauze (in packages)
If clearly visible growth of microorganisms is obtained af-Sutures and other individually The whole device
ter the incubation, visually comparable to that in the control packaged single-use material vessel without product, either the product possesses no anti-Other medical devices
The whole device, cut into pieces or microbial activity under the conditions of the test or such disassembled x
activity has been satisfactorily eliminated. The test for steril-ity may then be carried out without further modification.If clearly visible growth is not obtained in the presence of the product to be tested, visually comparable to that in the Table 3. Minimum Number of Articles to be Tested in Relation
control vessels without product, the product possesses anti-to the Number of Articles in the Batch
microbial activity that has not been satisfactorily eliminated Minimum Number of Items
under the conditions of the test. Modify the conditions in to be Tested for Each order to eliminate the antimicrobial activity, and repeat the Number of Items in the Medium (unless otherwise Method Suitability Test .
Batch *
justified and authorized)**This method suitability is performed (a) when the test for Parenteral preparations
sterility has to be carried out on a new product; and (b)Not more than 100 containers 10% or 4 containers, whichever whenever there is a change in the experimental conditions is the greater of the test. The method suitability may be performed simul-taneously with the Test for Sterility of the Product to be More than 100 but not more 10 containers
Examined .
than 500 containers
More than 500 containers
2% or 20 containers, whichever is less
TEST FOR STERILITY OF THE PRODUCT TO
x
For large-volume parenterals
2% or 10 containers, whichever BE EXAMINED
is less
Antibiotic solids
Pharmacy bulk packages (<5 g)20 containers x
Number of Articles to Be Tested
Pharmacy bulk packages (≥5 g) 6 containers
Bulks and blends
See Bulk solid products x
Unless otherwise specified elsewhere in this chapter or in the individual monograph, test the number of articles speci-Ophthalmic and other noninjectable preparations fied in Table 3. If the contents of each article are of suffi-cient quantity (see Table 2), they may be divided so that Not more than 200 containers 5% or 2 containers, whichever is
equal appropriate portions are added to each of the speci-the greater
fied media. [N OTE —Perform sterility testing employing two More than 200 containers 10 containers or more of the specified media.] If each article does not If the product is presented in contain sufficient quantities for each medium, use twice the the form of single-dose con-number of articles indicated in Table 3.x
tainers,
apply the scheme shown above Table 2. Minimum Quantity to be Used for Each Medium
for preparations for parenteral use.
Minimum Quantity to be Used Catgut and other surgical su-2% or 5 packages, whichever is
(unless otherwise justified and
tures for veterinary use the greater,
Quantity per Container authorized)up to a maximum total of 20Liquids
packages
Less than 1 mL The whole contents of each con-x Not more than 100 articles 10% or 4 articles, whichever is
tainer
greater
1–40 mL
Half the contents of each container,More than 100, but not more 10 articles but not less than 1 mL than 500 articles
Greater than 40 mL, and not 20 mL
More than 500 articles 2% or 20 articles, whichever is
greater than 100 mL less x
Greater than 100 mL 10% of the contents of the contain-Bulk solid products er, but not less than 20 mL Up to 4 containers Each container Antibiotic liquids
1 mL
More than 4 containers, but not 20% or 4 containers, whichever Insoluble preparations, creams,Use the contents of each container more than 50 containers is greater and ointments to be suspend-to provide not less than 200 mg
More than 50 containers 2% or 10 containers, whichever
ed or emulsified is greater
Solids
*If the batch size is unknown, use the maximum number of items Less than 50 mg
The whole contents of each con-prescribed.
tainer
**If the contents of one container are enough to inoculate the two 50 mg or more, but less than Half the contents of each container,media, this column gives the number of containers needed for both 300 mg but not less than 50 mg the media together.
300 mg–5 g 150 mg The test may be carried out using the technique of Mem-Greater than 5 g
500 mg
brane Filtration or by Direct Inoculation of the Culture Medium Catgut and other surgical su- 3 sections of a strand (each 30-cm with the product to be examined. Appropriate negative tures for veterinary use
long)
controls are included. The technique of membrane filtration
is used whenever the nature of the product permits; that is,myristate shown not to have antimicrobial activity in the
for filterable aqueous preparations, for alcoholic or oily prep-conditions of the test. Allow the oil to penetrate the mem-arations, and for preparations miscible with, or soluble in,brane by its own weight, and then filter, applying the pres-aqueous or oily solvents, provided these solvents do not sure or suction gradually. Wash the membrane at least three have an antimicrobial effect in the conditions of the test.times by filtering through it each time about 100mL of a
suitable sterile solution such as x Fluid A (see Diluting and
Rinsing Fluids for Membrane Filtration)x containing a suitable Membrane Filtration emulsifying agent at a concentration shown to be appropri-
ate in the Method Suitability Test, for example polysorbate Use membrane filters having a nominal pore size not80 at a concentration of 10g per L
x(Fluid K)x. Transfer the greater than 0.45 μm, in which the effectiveness to retain membrane or membranes to the culture medium or media,
microorganisms has been established. Cellulose nitrate fil-or vice versa, as described above for Aqueous Solutions, and ters, for example, are used for aqueous, oily, and weakly incubate at the same temperatures and for the same times. alcoholic solutions; and cellulose acetate filters, for example,
are used for strongly alcoholic solutions. Specially adapted
filters may be needed for certain products (e.g., for OINTMENTS and CREAMS antibiotics).
The technique described below assumes that membranes Use for each medium not less than the quantities of the about 50mm in diameter will be used. If filters of a different product prescribed in Tables 2 and 3. Ointments in a fatty diameter are used, the volumes of the dilutions and the base and emulsions of the water-in-oil type may be diluted washings should be adjusted accordingly. The filtration ap-to 1% in isopropyl myristate as described above, by heating, paratus and membrane are sterilized by appropriate means.if necessary, to not more than 40°. In exceptional cases it The apparatus is designed so that the solution to be ex-may be necessary to heat to not more than 44°. Filter as amined can be introduced and filtered under aseptic condi-rapidly as possible, and proceed as described above for Oils tions: it permits the aseptic removal of the membrane for and Oily Solutions.
transfer to the medium, or it is suitable for carrying out the
incubation after adding the medium to the apparatus itself.
x PREFILLED SYRINGES
AQUEOUS SOLUTIONS For prefilled syringes without attached sterile needles, ex-
pel the contents of each syringe into one or two separate
If appropriate, transfer a small quantity of a suitable, ster-membrane filter funnels or into separate pooling vessels
ile diluent such as x Fluid A (see Diluting and Rinsing Fluids for prior to transfer. If a separate sterile needle is attached, di-Membrane Filtration)x onto the membrane in the apparatus rectly expel the syringe contents as indicated above, and and filter. The diluent may contain suitable neutralizing sub-proceed as directed for Aqueous Solutions. Test the sterility of stances and/or appropriate inactivating substances, for ex-the needle, using Direct Inoculation under Method Suitability ample, in the case of antibiotics.Test.
Transfer the contents of the container or containers to be
tested to the membrane or membranes, if necessary, after
diluting to the volume used in the Method Suitability Test SOLIDS FOR INJECTION OTHER THAN ANTIBIOTICS with the chosen sterile diluent, but using not less than the
quantities of the product to be examined prescribed in Ta-Constitute the test articles as directed on the label, and bles 2 and 3. Filter immediately. If the product has antimi-proceed as directed for Aqueous Solutions or Oils and Oily crobial properties, wash the membrane not less than three Solutions, whichever applies. [N OTE—If necessary, excess di-times by filtering through it each time the volume of the luent can be added to aid in the constitution and filtration chosen sterile diluent used in the Method Suitability Test. Do of the constituted test article.]
not exceed a washing cycle of five times 100mL per filter,
even if during method suitability it has been demonstrated
ANTIBIOTIC SOLIDS FOR INJECTION
that such a cycle does not fully eliminate the antimicrobial
activity. Transfer the whole membrane to the culture me-
dium or cut it aseptically into two equal parts, and transfer Pharmacy Bulk Packages, <5g—From each of 20 con-one half to each of two suitable media. Use the same vol-tainers, aseptically transfer about 300mg of solids, into a ume of each medium as in the Method Suitability Test. Alter-sterile 500-mL conical flask, dissolve in about 200mL of natively, transfer the medium onto the membrane in the Fluid A (see Diluting and Rinsing Fluids for Membrane Filtra-apparatus. Incubate the media for not less than 14 days.tion), and mix; or constitute, as directed in the labeling,
each of 20 containers and transfer a quantity of liquid or
suspension, equivalent to about 300mg of solids, into a SOLUBLE SOLIDS sterile 500-mL conical flask, dissolve in about 200mL of
Fluid A, and mix. Proceed as directed for Aqueous Solutions Use for each medium not less than the quantity pre-or Oils and Oily Solutions, whichever applies.
scribed in Tables 2 and 3 of the product dissolved in a suita-Pharmacy Bulk Packages, ≥5g—From each of 6 con-ble solvent, such as the solvent provided with the prepara-tainers, aseptically transfer about 1g of solids into a sterile tion, Sterile Water for Injection, sterile saline, or a suitable500-mL conical flask, dissolve in about 200mL of Fluid A, sterile solution such as x Fluid A (Diluting and Rinsing Fluids and mix; or constitute, as directed in the labeling, each of 6 for Membrane Filtration),x and proceed with the test as de-containers and transfer a quantity of liquid, equivalent to scribed above for Aqueous Solutions using a membrane ap-about 1g of solids, into a sterile 500-mL conical flask, dis-propriate to the chosen solvent.solve in about 200mL of Fluid A, and mix. Proceed as di-
rected for Aqueous Solutions.
OILS and OILY SOLUTIONS
ANTIBIOTIC SOLIDS, BULKS, and BLENDS
Use for each medium not less than the quantity of the
product prescribed in Tables 2 and 3. Oils and oily solutions Aseptically remove a sufficient quantity of solids from the of sufficiently low viscosity may be filtered without dilution appropriate amount of containers (see Table 2), mix to ob-through a dry membrane. Viscous oils may be diluted as tain a composite, equivalent to about 6g of solids, and necessary with a suitable sterile diluent such as isopropyl
transfer to a sterile 500-mL conical flask. Dissolve in about CATGUT and OTHER SURGICAL SUTURES FOR VETERINARIAN 200mL of Fluid A, and mix. Proceed as directed for Aqueous USE
Solutions.
Use for each medium not less than the quantities of the
product prescribed in Tables 2 and 3. Open the sealed pack-STERILE AEROSOL PRODUCTS
age using aseptic precautions, and remove three sections of
the strand for each culture medium. Carry out the test on For fluid products in pressurized aerosol form, freeze the
three sections, each 30-cm long, which have been cut off containers in an alcohol-dry ice mixture at least at –20° for
from the beginning, the center, and the end of the strand. about 1hour. If feasible, allow the propellant to escape
Use whole strands from freshly opened cassette packs. before aseptically opening the container, and transfer the
Transfer each section of the strand to the selected medium. contents to a sterile pooling vessel. Add 100mL of Fluid D
Use sufficient medium to cover adequately the material to to the pooling vessel, and mix gently. Proceed as directed
be tested (20mL to 150mL).
for Aqueous Solutions or Oils and Oily Solutions, whichever
applies.
x SOLIDS
DEVICES WITH PATHWAYS LABELED STERILE
Transfer a quantity of the product in the form of a dry
solid (or prepare a suspension of the product by adding Aseptically pass not less than 10pathway volumes of Fluid
sterile diluent to the immediate container), corresponding to D through each device tested. Collect the fluids in an ap-
not less than the quantity indicated in Tables 2 and 3. Trans-propriate sterile vessel, and proceed as directed for Aqueous
fer the material so obtained to 200mL of Fluid Thioglycollate Solutions or Oils and Oily Solutions, whichever applies.
Medium, and mix. Similarly, transfer the same quantity to
In the case of sterile, empty syringes, draw sterile diluent
200mL of Soybean–Casein Digest Medium, and mix. Proceed into the barrel through the sterile needle, if attached, or
as directed above.
through a sterile needle attached for the purpose of the
test, and express the contents into a sterile pooling vessel.
Proceed as directed above.x PURIFIED COTTON, GAUZE, SURGICAL DRESSINGS, and
RELATED ARTICLES Direct Inoculation of the Culture Medium
From each package of cotton, rolled gauze bandage, or Transfer the quantity of the preparation to be examined large surgical dressings being tested, aseptically remove two prescribed in Tables 2 and 3 directly into the culture me-or more portions of 100- to 500-mg each from the inner-dium so that the volume of the product is not more than most part of the sample. From individually packaged, single-10% of the volume of the medium, unless otherwise use materials, aseptically remove the entire article. Immerse prescribed.the portions or article in each medium, and proceed as di-If the product to be examined has antimicrobial activity,rected above.
carry out the test after neutralizing this with a suitable neu-
tralizing substance or by dilution in a sufficient quantity of
STERILE DEVICES
culture medium. When it is necessary to use a large volume
of the product, it may be preferable to use a concentrated
Articles can be immersed intact or disassembled. To en-culture medium prepared in such a way that it takes into
sure that device pathways are also in contact with the me-account the subsequent dilution. Where appropriate, the
dia, immerse the appropriate number of units per medium concentrated medium may be added directly to the product
in a volume of medium sufficient to immerse the device
in its container.
completely, and proceed as directed above. For extremely
large devices, immerse those portions of the device that are OILY LIQUIDS to come into contact with the patient in a volume of me-
dium sufficient to achieve complete immersion of those Use media to which have been added a suitable emulsify-portions.
ing agent at a concentration shown to be appropriate in the For catheters where the inside lumen and outside are re-Method Suitability Test, for example polysorbate 80 at a con-quired to be sterile, either cut them into pieces such that centration of 10g per L.the medium is in contact with the entire lumen or fill the
lumen with medium, and then immerse the intact unit.x OINTMENTS and CREAMS
OBSERVATION AND INTERPRETATION OF Prepare by diluting to about 1 in 10 by emulsifying with RESULTS
the chosen emulsifying agent in a suitable sterile diluent
such as x Fluid A (see Diluting and Rinsing Fluids for Mem-At intervals during the incubation period and at its con-brane Filtration).x Transfer the diluted product to a medium clusion, examine the media for macroscopic evidence of mi-not containing an emulsifying agent.crobial growth. If the material being tested renders the me-Incubate the inoculated media for not less than 14 days.dium turbid so that the presence or absence of microbial Observe the cultures several times during the incubation pe-growth cannot be readily determined by visual examination, riod. Shake cultures containing oily products gently each14 days after the beginning of incubation transfer portions day. However, when Fluid Thioglycollate Medium is used for(each not less than 1mL) of the medium to fresh vessels of the detection of anaerobic microorganisms, keep shaking or the same medium, and then incubate the original and trans-mixing to a minimum in order to maintain anaerobic fer vessels for not less than 4 days.
conditions.If no evidence of microbial growth is found, the product
to be examined complies with the test for sterility. If evi-
dence of microbial growth is found, the product to be ex-
amined does not comply with the test for sterility, unless it
can be clearly demonstrated that the test was invalid for
causes unrelated to the product to be examined. The test
may be considered invalid only if one or more of the follow-Two general techniques are employed: the cylinder-plate ing conditions are fulfilled:
(or plate) assay and the turbidimetric (or tube) assay. Table a.The data of the microbiological monitoring of the ste-1 lists all the antibiotics that contain microbial assays and rility testing facility show a fault.
specifies the type of assay (cylinder-plate or turbidimetric).
b.A review of the testing procedure used during the test in question reveals a fault.
Table 1
c.Microbial growth is found in the negative controls.Antibiotic
Type of Assay
d.After determination of the identity of the microorgan-Amphotericin B Cylinder-plate isms isolated from the test, the growth of this species (or these species) may be ascribed unequivocally to Bacitracin Cylinder-plate faults with respect to the material and or the tech-Bleomycin Cylinder-plate nique used in conducting the sterility test procedur
e.Capreomycin Turbidimetric If the test is declared to be invalid, it is repeated with the Carbenicillin
Cylinder-plate same number of units as in the original test. If no evidence Chloramphenicol Turbidimetric of microbial growth is found in the repeat test, the product Chlortetracycline Turbidimetric examined complies with the test for sterility. If microbial growth is found in the repeat test, the product examined Cloxacillin
Cylinder-plate does not comply with the test for sterility.
Colistemethate Cylinder-plate Colistin
Cylinder-plate Cylinder-plate APPLICATION OF THE TEST TO PARENTERAL Dihydrostreptomycin Turbidimetric PREPARATIONS, OPHTHALMIC, AND OTHER Erythromycin Cylinder-plate NONINJECTABLE PREPARATIONS REQUIRED Gentamicin Cylinder-plate TO COMPLY WITH THE TEST FOR STERILITY
Gramicidin Turbidimetric When using the technique of membrane filtration, use,Nafcillin Cylinder-plate whenever possible, the whole contents of the container, but Natamycin Cylinder-plate not less than the quantities indicated in Table 2, diluting Cylinder-plate Neomycin where necessary to about 100mL with a suitable sterile so-Turbidimetric lution, such as x Fluid A (see Diluting and Rinsing Fluids for Novobiocin Cylinder-plate Membrane Filtration ).x
Nystatin
Cylinder-plate When using the technique of direct inoculation of media,use the quantities shown in Table 2, unless otherwise justi-Oxytetracycline Turbidimetric fied and authorized. The tests for bacterial and fungal steril-Paromomycin Cylinder-plate ity are carried out on the same sample of the product to be Penicillin G Cylinder-plate examined. When the volume or the quantity in a single con-Polymyxin B Cylinder-plate tainer is insufficient to carry out the tests, the contents of Sisomicin Cylinder-plate two or more containers are used to inoculate the different Tetracycline Turbidimetric media.
Thiostrepton Turbidimetric Troleandomycin Turbidimetric MINIMUM NUMBER OF ITEMS TO BE TESTED
Tylosin
Turbidimetric Vancomycin
Cylinder-plate
The minimum number of items to be tested in relation to the size of the batch is given in Table 3.
[N OTE —Perform all procedures under conditions designed to avoid extrinsic microbial contamination. Take adequate safety precautions while performing these assays because of possible allergies to drugs and because live cultures of or-ganisms are used in the procedures.]
Cylinder-plate assay:The cylinder-plate assay depends on Biological Tests and
diffusion of the antibiotic from a vertical cylinder through a solidified agar layer in a Petri dish or plate. The growth of Assays
the specific microorganisms inoculated into the agar is pre-vented in a circular area or zone around the cylinder con-taining the solution of the antibiotic.
Turbidimetric assay:The turbidimetric assay depends on the inhibition of growth of a microorganism in a uniform solution of the antibiotic in a fluid medium that is favorable ?81? ANTIBIOTICS—MICROBIAL
to the growth of the microorganism in the absence of the antibiotic.
ASSAYS
Units and Reference Standards:The potency of antibiot-ics is designated in either units (U) or μg of activity. In each case the unit or μg of antibiotic activity was originally estab-lished against a United States Federal Master Standard for that antibiotic. The corresponding USP Reference Standard Introduction and General Information
is calibrated in terms of the master standard.
Originally, an antibiotic selected as a reference standard The activity (potency) of antibiotics can be demonstrated was thought to consist entirely of a single chemical entity by their inhibitory effect on microorganisms under suitable and was therefore assigned a potency of 1000μg/mg. In conditions. A reduction in antimicrobial activity may not be several such instances, as the manufacturing and purification adequately demonstrated by chemical methods. This chap-methods for particular antibiotics became more advanced,ter summarizes procedures for the antibiotics recognized in antibiotics containing more than 1000μg of activity/mg be-the United States Pharmacopeia (USP ) for which the microbi-came possible. Such antibiotics had an activity equivalent to
ological assay is the standard analytical method.
微生物限度检查方法及其验证报告(修改)
文件编号：73021微生物限度检查方法及其验证报告
目录1 样品相关信息 1.1 基本信息 2 主要仪器设备和试验耗材信息 2.1 主要使用的仪器设备 2.2 试验用培养基 2.3 试验用试剂 2.4 试验用菌种 3 试验环境 3.1 无菌室 3.2 洁净工作台 3.3 生物安全柜 4 试验方案 4.1 验证试验目的 4.2 微生物限度检查方法草案 5 方法验证试验 5.1 菌液制备 5.2 计数培养基适用性检查 5.3 控制菌检查用培养基使用性检查 5.4 供试液制备 5.5 方法验证 5.5.1 菌落计数方法验证试验 5.5.2 控制菌检查方法的验证 5.6 方法验证结论 6 供试品微生物限度检查结果
1 样品相关信息 1.1 基本信息（三批） 2 主要仪器设备和试验耗材信息2.1 主要使用的仪器设备 2.2 试验用培养基 2.2.1 对照培养基
2.2.2 试验用培养基 2.3 试验用试剂 2.4 试验用菌种
3 试验环境 《中国药典》2015版规定，微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域进行。 本公司微生物限度室、阳性对照室、生物安全柜及超净工作台洁净度检测无特殊情况下每季度进行一次。 3.1 无菌室 无菌室按《医药工业洁净厂房设计规》GB 50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对10000级洁净度要求。 3.2 超净工作台 超净工作台按《医药工业洁净厂房设计规》GB50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。 超净工作台沉降菌检测记录 2015.11.15 3.3生物安全柜 生物安全柜按《生物安全实验室建筑技术规》GB50346-2011监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。 生物安全柜沉降菌监测记录 2015.11.15 4 试验方案 按《中国药典》2015年版第四部：（通则1105）非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、（通则1106）非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、（通则1107）非无菌药品微生物限度标准及（通则1121）抑菌效力检查法规定，本品微生物限度标准为：1g供试品中，需氧菌总数不得过1000cfu，霉菌和酵母菌总数不得过100cfu，大肠埃希菌不得检出。
微生物限度检查记录 版
表：微生物限度检查记录（通用） 三、大肠埃希菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）
微生物限度检查记录 （30～35℃，3～5天） 20℃～25℃，5～7天） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：） 三、控制菌检查（30-35℃）
表： 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：） （30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：） 五、耐胆盐革兰阴性菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）
表： （含药材原粉的片剂） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、麦康凯液体培养基（配制批号： ）麦康凯琼脂培养基（配制批号： ） （30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号： ），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号： ）、三糖铁琼脂（配制批号： ） 五、耐胆盐革兰阴性菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号： ），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号： ）
表：微生物限度检查记录（蛇胆川贝液） 三、大肠埃希菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）
制药企业微生物限度控制菌检查培养基适用性检查记录表式样
控制菌检查培养基适用性检查记录 一、菌液制备（需要的菌种在□内划“√”）： □（1）大肠埃希菌新鲜肉汤培养物1ml ，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（2）金黄色葡萄球菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（3）乙型副伤寒沙门菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（4）铜绿假单胞菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（5）生孢梭菌新鲜硫乙醇酸盐流体培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； 二、每ml菌液含菌量的计数测定。 测定方法：取稀释后的菌液1ml（剩余的菌液冷藏保存）,置直径90mm的无菌平皿中，注入15-20ml已经过适用性检查确正的温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基（细菌类别计数选用该培养基）或玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌、酵母菌类别计数选用该培养基），混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。细菌类别培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌类别培养温度为23℃～28℃。细菌类别培养3天，霉菌、酵母菌类别培养5天。 三、检查结果：需做的检查在□内划“√”。 □ 1. 增菌培养基促生长能力检查
分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌。 检验标准：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。 结论： □ 2. 固体培养基促生长能力检查 检验标准：被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。 结论： □ 3. 培养基抑制能力检查 分别接种试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养，试验菌。 检验标准：试验菌应不得生长。 结论： □ 4. 培养基指示能力检查 分别接种少量试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养。被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等。 检验标准：被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。 结论： 结论： 检验人：复核人：
无菌检查和微生物限度检查操作规范
无菌检查和微生物限度检查操作规范 （中国药品生物制品检定所） 一、无菌室的要求： 无菌室是无菌检查、微生物限度检查的重要设备，面积不小于6平米，高度2.4-2.8m为宜。建筑材料要光洁，不吸潮，无凸起，耐腐蚀，易清洗。无菌室内部应六面光滑，无缝隙，里面连接处应呈凹凸形，不留死角。操作间和缓冲间的门不应直对，缓冲间两个。 无菌室内采光面积要大，照明灯应镶嵌在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300lux，电源开关应设在室外。 无菌室、缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯，每立方米2-2.5瓦，距实验台高度不超过1米，并应定期检查辐射强度，距1米处应不低于70微瓦/平方厘米，无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置，控制温度18-26℃，相对湿度40%-60%，操作间或净化工作台的洁净空气应保持与相临环境形成正压，不低于4.9帕。操作区洁净度100级，操作间洁净度10000级，洁净度定期检查。 无菌室及缓冲间不得存放其他杂物，如培养箱。 用消毒液清洁无菌室操作台面，开启无菌室紫外灯和层流空气过滤30分钟以上。无菌室的无菌程度，常用的沉降菌测定方法为：取营养肉汤琼脂平板3个，置无菌室的操作区台面左、中、右位置上，开盖暴露30分钟，在30-35℃培养2天后，计算菌落数。用于无菌检查的无菌室或微生物限度检查的无菌室，细菌总数应小于3个，浮游菌每立方米应小于5个，否则，不能用于无菌检查和微生物限度检查。 二、培养基的准备 1、培养基的制备： 配制培养基的蒸馏水或去离子水应符合规定。再称取需气菌、厌气菌培养基、真菌培养基的干燥培养基，加水溶化后，调节PH值，使灭菌后需气菌、厌气菌培养基的PH值为7.0-7.3，真菌培养基的PH值为6.2-6.6，分装、盖塞、灭菌，待用。 2、培养基灵敏度试验： 培养基是无菌试验的基准物质，关系到无菌试验结果的科学、准确、可信度，因此，培养基灵敏度试验是无菌试验的重要组成部分。只有使用灵敏度试验合格的培养基，才能保证无菌试验结果准确、可靠。 培养基灵敏度试验操作如下：取藤黄微球菌、生孢梭菌、白色念珠菌的新鲜培养液，分别10倍递增稀释，制成每ml 含10-100个菌，并作菌落记数。将制备好的菌液分别加至需气菌、厌气菌培养基、真菌培养基各3管。至规定温度培养5天，每株菌接种的培养基不少于2管生长，则改培养基的灵敏度试验合格。 3、培养基用前的检查： （1）无菌检查：各种培养基在规定温度培养3天，应无菌生长。 （2）新鲜程度检查：需气菌、厌气菌培养基氧化层的颜色用前不能超过1/5，否则，不能使用。应煮沸去氧，只限加热一次。 4、培养基的保存时限： 配制好的无菌试验用培养基在2周内用完。 三、菌种复苏和保藏 1、菌种复苏： 先将冻干菌种的封口端用砂轮刻痕，在刻痕处过火焰数次，用无菌湿棉球炸裂后打开，然后，加入0.3-0.4ml稀释液于菌种管底部，将菌种稀释、混匀，并吸出菌液，接种于适宜的培养基。培养时间和温度根据不同的菌种而定。仔细检查菌种的有关特性，如无发现异常，即可传代、使用。 2、药品微生物用的菌种传代方法： 取复苏好的菌种一支，接种于规定的培养基数管，培养后，置冰箱中保藏。取出使用的菌种，经一段时间后即可废弃。 为防止微生物突变，菌种应尽量避免不必要的接种和传代。
微生物实验报告模板
微生物实验报告模板 淀粉与微生物篇一：实验十分离产淀粉酶的微生物 第十次实验分离产淀粉酶微生物 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 年级：20XX级 姓名： 学号：1007040085 20XX年XX月XX日 实验十分离产淀粉酶的微生物 一、实验目的 1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。 2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。 3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。 4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。 二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般
在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有 1、简单单细胞挑取法 2、平板分离法和稀释涂布平板法 此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括： 1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株 2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案 1.目的： 为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准 2.范围： 本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。 3.规范性引用文件： 根据《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ J 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。 4.验证实施： 4.4.1 试验前的准备: 4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天内使用。 4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。 4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。 4.4.2 试验菌的制备和稀释：
无菌加工译文
无菌加工 Aseptic Processing Rakesh K. Singh Advances inThermal 和 Non-ThermalFood Preservation 引言 无菌加工的布丁、糊状物、调味料和饮料等多种产品在市场上已经三年有余。液体食品或含有颗粒的液体通过无菌加工系统进行处理，产品和无菌加工的物料必须可以泵送，泵送的食品、容器和封盖的单独灭菌，冷却后在无菌环境下灌装和密封食品于容器之中。（Clark2004）。食品分为pH＜4.6的酸性或酸化产品和pH＞4.6的低酸产品，由于存在肉毒梭状芽孢杆菌的生长可能性，对低酸食品的规定比酸性或酸化食品更加严格。因此，以往许多无菌产品都是酸性的或酸化的食品，或两者兼而有之，而且主要是液体和含有微粒的液体，低酸液体很少。（Singh和Lee 2002；Singh和Nelson1992）。由于技术的发展和过程的开发，塑料瓶等新包装材料正在用于开发无菌低酸饮料和及低酸颗粒食品。 无菌包装的容器范围从消费者的几十克的（60—180g）零售包装到散装储存容器（IBC），最大超过4—6M3。这种最大的散装容器用于从巴西向不同国家航运单倍橙汁。大量的橙汁需要冷藏贮存，控制果汁的化学反应，而不是微生物。铁桶（190L）散货包装用于储存和运输番茄酱。铁路货运和卡车容器桶用来贮藏番茄酱和香蕉泥。378000L的大罐用于储藏酱油和其他液体。番茄丁、菠萝块，草莓配
料等无菌包装在1140L的复合袋里，放在硬质的纸盒里获得支撑。最近令人感兴趣的进展是无菌塑料容器中包装营养食品或功能性食品，尤其是饮料。功能性食品中某些成分的热敏性质要求在较低的温度下进行热处理。无菌加工也用于为供膳机构包装半加工食品。供膳机构产品包装在4—20L的塑料容器之中。 产品的重要特性、产品的流动和加热/冷却特性与系统的设计与成功运行密切相关。在加工过程中，产品通过一系列设备或单元操作进行特定的处理。重要的设备包括冷藏储罐、水罐，增压泵，热交换器（加热和冷却），保温管，脱气器，阀门、管道、其他泵和包装系统（图3.1）。这些组件的性能可能影响整个系统的性能。考虑产品质量时，加工者不应视设备的单个组件，而要把他们连接在一起作为整个系统。
微生物检验报告结果及事项
微生物检验报告结果及事项--青岛科标生物实验室 一、涉及定性项目的检验结果报告 沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠杆菌O157：H7、空肠弯曲杆菌、副溶血性弧菌（定性）等，如果检样是称重取样，则最后检测结果一定报告为检出/25g或未检出/25g。如果检样是体积取样，则最后检测结果一定报告为检出/25mL或未检出/25mL。检测标准要求g必须要小写，mL中m必须小写，L则必须大写。记录中所有有用的信息必须填上，无法填充的用“/”划掉。 二、菌落总数检验结果报告 1.菌落总数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约以整数报告，如80.5CFU 可修约报告为81CFU;80.4CFU则修约报告为80CFU。 2.菌落总数大于等于100CFU时，左边数第3位数字采用四舍五入原则修约后，取前2位数字，后面位数用0代替，也可用10的指数形式表示：如10-2两平板平均菌落数为238CFU/g，可修约为240CFU/g，最后报告为24000CFU/g 或2.4×104CFU/g。 3.霉菌、酵母菌、乳酸菌、蜡样芽孢杆菌、产气荚膜梭菌报告形式和菌落总数一样。 4.称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。 三、大肠菌群检验结果报告。 LST初发酵，产酸产气，接种BGLB复发酵后仍产酸产气，则证明样品受到了大肠菌群污染，可检索MPN表，得出相应结果。检测时如果采用（10-1，10-2,10-3）三个稀释度，最后BGLB产气管为（2，0，0），查MPN表可得出大肠菌群检
测值为9.2MPN/g；检测时如果采用（100，10-1,10-2）三个稀释度，最后BGLB 产气管仍为（2，0，0），查MPN表可得大肠菌群检测值为0.92MPN/g；如果采用（10-2，10-3,10-4）三个稀释度，最后BGLB产气管仍然为（2，0，0），查MPN表可得大肠菌群检测值为92MPN/g。称重取样以MPN/g为单位报告，体积取样以MPN/mL为单位报告。大肠杆菌、粪大肠群群、副溶血性弧菌（定量）、总大肠菌群当检出阳性结果时，都会涉及查MPN表，其规律和大肠菌群一样。 四、饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌检验结果报告 根据CN平板上生长的蓝色或绿色菌落的计数和生化确证试验的结果，计算出每250mL水样中的铜绿假单胞菌数量，结果以CFU/250mL报告。 五、饮用天然矿泉水中产气荚膜梭检验结果报告 根据SPS平板上黑色菌落的计数和生化确证试验的结果，计算出每50mL水样中产气荚膜梭菌的数量，结果以CFU/50mL报告。 六、涉及到用29921进行结果判定的项目，每个项目要出5份报告。送检样品用企业标准进行结果判定的，出报告时要参考企标进行出具。 七、阪崎肠杆菌检验结果报告 根据阪崎肠杆菌显色培养基绿色菌落的生长情况和生化确证试验的结果，报告每100g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。 八、化妆品中粪大肠菌群检验结果报告 根据发酵乳糖产酸产气，EMB平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告每10g被检样品中检出粪大肠菌群。 九、化妆品中铜绿假单胞菌检验结果报告
微生物限度检查办法验证方法
微生物限度检查方法验证方案 1. 目的： 为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准 2. 范围： 本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。 3. 规范性引用文件： 根据《中国药典》2010 年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。 4. 验证实施： 4.4.1 试验前的准备: 4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径 0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3 天内使用。 4.4.1.2 试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4- 甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在 2 小时内，放于湿热灭 菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3 周内使用。 4.4.1.3 试验用稀释剂/ 缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法， 配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml ）聚山梨酯80的 0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3
【实验报告】微生物学实验报告格式
微生物学实验报告格式 专业学号 姓名 实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量） 四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？ 实验二自生固氮菌的分离纯化 （这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。） 一、实验目的
二、实验原理 三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？ 实验三平板培养测数法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙相关步骤） 五、实验结果 六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？
2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。 实验四简单染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态） 六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 实验五革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？） 六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？
无菌室级别
无菌室级别 无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间.可以用板材和玻璃建造.面积不宜过大,约 4 — 5 平方米即可,高 2.5 米左右.无菌室外要设一个缓冲间,缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向,以免气流带进杂菌.无菌室和缓冲间都必须密闭.室内装备的换气设备必须有空气过滤装置.无菌室内的地面、墙壁必须平整,不易藏污纳垢,便于清洗.工作台的台面应该处于水平状态.无菌室和缓冲间都装有紫外线灯,无菌室的紫外线灯距离工作台面 1 米.工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装,戴帽子. 当前无菌室多存在于微生物工厂,一般实验室则使用超净台.超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃.通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面,使台面始终保持在流动无菌空气控制之下.而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入. 在条件较困难的地方,也可以用木制无菌箱代替超净台.无菌箱结构简单,便于移动,箱正面开有两个洞,不操作时用推拉式小门挡住,操作时可以将双臂伸进去.正面上部装有玻璃,便于在内部操作,箱内部装有紫外线灯,从侧面小门可以放进去器具和菌种等. 无菌操作技术当前不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用,而且在许多生物技术中也被广泛应用.例如转基因技术、单克隆抗体技术等.
无菌室级别 根据空气洁净度的不同，无菌室可分为哪几个级别一般情况下，无菌室的等级有百级，千级，万级，十万级，百万级等等。 净化等级一般分为100级、1000级、10000级、100000级，现在2010年版的GMP 净化车间已经不用这个叫法了，分为ABCD级别，分别相对应于98版的几个级别，通过检测区域内的尘埃粒子数、浮游菌数、沉降均数评价净化级别，各个级别 有不同的要求，净化等级分静态、动态两种。 百级无菌实验室 洁净室是指将一定空间范围内之空气中的微粒子、有害空气、细菌
临床微生物检验报告单的解读
首先，准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果，给临床选择用药提供科学的参考依据，是我们微生物实验室不可推卸的责任，但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识，可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中，由于多种条件致病菌的存在，是否引起感染、是否需要抗菌治疗，都需要临床医生综合分析后判断，以下几点是临床工作中可能会遇到的问题： 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例：头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物，主要用于治疗革兰氏阴性杆菌，如大肠埃希菌等。CLSI 规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15 耐药，≥21 敏感，所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中，但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI 没有判定折点，所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药，也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先，新药由于刚刚推广，还没有列入CLSI 的监测范畴，没有依据加以判断。其次，药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性，不能面面俱到，如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感，那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药，该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌：对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌：对亚胺培南（泰能）、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复方新诺明、头孢 1 代、头孢2 代天然耐药。 更为特殊的是，铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感，在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效，但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性，在初期可能没有表现出来，一旦接触某种抗生素，沉睡的基因被激活，耐药性表现出来，这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显，可能在体外试验敏感，在实际治疗中却无效，所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险，这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性，意在找到一定的原因和规律性，在使用广谱抗菌药物之前，应先采集标本送检，再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案，使临床应用抗菌药物趋向合理，减少用药的盲目性和随意性，提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素，绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的，其中的临床思维和临床操作都十分复杂，要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效，这需要微生物实验室和临床科室的共同努力，我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识，力争为临床科室提供更有价值的参考依据。
微生物检验报告的解读
微生物检验报告的解读 首先，准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果，给临床选择用药提供科学的参考依据，是我们微生物实验室不可推卸的责任，但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识，可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中，由于多种条件致病菌的存在，是否引起感染、是否需要抗菌治疗，都需要临床医生综合分析后判断，以下几点是临床工作中可能会遇到的问题： 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例：头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物，主要用于治疗革兰氏 阴性杆菌，如大肠埃希菌等。CLSI规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15耐药，≥21敏感，所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中，但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI没有判定折点，所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药，也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先，新药由于刚刚推广，还没有列入CLSI的监测范畴，没有依据加以判断。其次，药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性，不能面面俱到，如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感，那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药 有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药，该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌：对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢 菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌：对亚胺培南（泰能）、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复 方新诺明、头孢1代、头孢2代天然耐药。 更为特殊的是，铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感，在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效，但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性，在初期可能没有表现出来，一旦接触某种抗生素，沉睡的基因被激活，耐药性表现出来，这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显，可能在体外试验敏感，在实际治疗中却无效，所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险，这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性，意在找到一定的原因和规律性，在使用广谱抗菌药物之前，应先采集标本送检，再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案，使临床应用抗菌药物趋向合理，减少用药的盲目性和随意性，提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素，绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的，其中的临床思维和临床操作都十分复杂，要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效，这需要微生物实验室和临床科室的共同努力，我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识，力争为临床科室提供更有价值的参考依据。
工业微生物学
工业微生物学 一、介绍： 生物梅里埃工业部是生物梅里埃的一个独立的部门，拥有专业的研发队伍、市场以及商业资源。生物梅里埃工业部为不同领域的微生物质控实验室提供专业的解决方案，包括农产品、制药和化妆品工业，也包括血库、组织库以及生物技术公司。自从工业行业越来越多地受到HACCP、GMP、鉴定、认证等机构的关注...，生物梅里埃的使命包括为其提供微生物质控过程提供迅速、高效和创新的解决方案。生物梅里埃全力提供一流的产品以满足顾客的需要，协助其保持稳定的产品质量。 二、食品领域 食品安全是农产品工业的主要关注点，生物梅里埃协助微生物质控实验室以满足其日益增长的需求。生产过程的不同步骤中，从原材料到成品，包括关键点的环境控制，生物梅里埃提供完整的解决方案包括致病菌的筛选、卫生指标（腐败菌）计数、微生物鉴定和产品无菌测试。近期，生物梅里埃研发出一种基于一种突破性的分子生物学技术的新系统来开拓对食品和饲料真实性的确认市场。食品实验室可根据实际需要选择生物梅里埃提供的手工或自动的方法得到快速正确的结果。 食品应用： 生物梅里埃致力于保护消费者的健康和生活质量。因此提供广大领域如农产品工业肉、禽、冰冻食品等从样品准备到最终的微生物鉴定整套解决方案。 食品安全 *致病菌检测：使用手动检测或用VIDAS(r)自动检测 *微生物的鉴定：使用API(r)/ID32手动检测或用VITEK(r)自动检测 食品质量 *质量指标计数：使用培养基手动进行或使用TEMPO(r)自动进行 *环境管理：使用Count-Tact(tm)和培养基手动，或air IDEAL(r)3P(tm)自动进行 *无菌和过程中检测：使用培养基手动，或BacT/ALERT(r)自动检测 *使用FoodExpert-ID(r)进行可靠性的检测 1、简介： 所有这些解决方案均符合您从原料质控、生产过程(HACCP,环境......)及决定保质期的成品检测所采用的标准。考虑到不同国家的文化、生产过程、饮食习惯等...，生物梅里埃已通过了大量不同食品的验证。其在全世界的广泛应用已证明其能提供不同的解决方案。判断检测方法的可行性是看是否符合类似于ISO等国际标准的要求。考虑到这点，生物梅里埃制定的检测方法都是依照国际公认的方法AOAC或AFNOR来制定的。生物梅里埃欢迎提供关于我们产品的问题和建议，以便更好地为食品行业服务。 2、致病菌检测： 每年食品消耗量都在大量增加...为了保护消费者的健康，厂家必须对产品质量负有责任，涉及食品生产过程的全部步骤，包括从农场到成品...致病菌检测是食品工业的一个重要关注点，主要包括沙门氏菌、李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、弯曲菌、弧菌、阪崎肠杆菌以及现在新出现的致病菌。我们将不断地推出新产品以满足您的需要。 3、质量指标计数： 农产品工业中，从原料到成品的加工过程中通常以微生物菌群计数为整个过程中的微生物质量控制指标，同时检测微生物的致病菌来确保食品生产的安全性。从原料到保质期结束，卫生指标是建立HACCP方法和保证成品商业价值的主要重点。卫生指标主要包括：细菌总
微生物限度检验方法验证方案
微生物限度检验方法验证方案 1.适用范围 本方案适用于本公司各品种微生物限度检验方法的验证。 2.目的 通过验证确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度的测定。 3.职责 项目责任人：负责验证方案的起草及具体实施。 验证管理员：负责验证工作的组织、协调及管理。 QA现场监控员：负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。 QC负责人：负责验证方案中检验方法的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。 QC检验员：负责验证方案的起草与参与实施，并对所测数据准确性负责。 质量部经理：负责验证方案及报告的审核和批准。 4.内容 4.1.概述 通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定；确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 4.2细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 当建立药品的微生物限度检查时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。.验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。 4.2.1.验证用菌株及菌种要求 大肠埃希菌【CMCC（B）44102】、金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、黑曲霉【CMCC（F）98003】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】。大肠埃希菌为革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，枯草芽孢杆菌为产芽孢杆菌，前述菌株作为细菌计数验证用菌株；黑曲霉为霉菌，白色念珠菌为酵母菌，作为霉菌及酵母菌计数验证用菌株。 验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0 代），
FDA工业指南用无菌工艺生产的无菌药品
F D A工业指南用无菌工 艺生产的无菌药品 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
工业指南 用无菌工艺生产的无菌药品—— 现行良好生产方法 美国健康及人类服务部 食品药品监督管理局 药品评估和研究中心（CDER） 生物药品评估和研究中心（CBER） 法规事务办公室（ORA） 2004年9月 Pharmaceutical CGMPs 工业指南 用无菌工艺生产的无菌药品—— 现行良好生产方法 美国健康及人类服务部 食品药品监督管理局 药品评估和研究中心（CDER） 生物药品评估和研究中心（CBER） 法规事务办公室（ORA） 2004年9月 Pharmaceutical CGMPs 目录 I、序言 (5) II、背景 (6) A、法规规章 (6) B、技术方面 (6) III、范围 (7) Ⅳ、厂房设施 (7)
A、关键生产区-100级 （ISO5） (8) B、辅助洁净区 (10) C、洁净区的分隔 (10) D、空气过滤 (10) 1、膜 (10) 2、高效空气过滤器（HEPA） (11) E、设计 (12) Ⅴ、人员培训、确认及监控 (14) A、人员 (15) B、实验室人员 (16) C、监控计划 (16) Ⅵ、组分和容器/密封件 (17) A、组分 (17) B、容器/密封件 (18) 1、准备工作 (18) 2、容器密封件系统的检查 (19) Ⅶ、内毒素的控制 (19) Ⅷ、时间限制 (20) Ⅸ、无菌生产加工方法及灭菌的验证 (20) A、模拟生产过程 (20)
微生物限度检查记录(2015年版)
表：2.1-024微生物限度检查记录（通用） 三、大肠埃希菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）
审核者：检验者： 微生物限度检查记录 （30～35℃，3～5天） 20℃～25℃，5～7天） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：） 三、控制菌检查（30-35℃）
表：2.1-024 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：） （30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：） 五、耐胆盐革兰阴性菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）
表：2.1-024 （含药材原粉的片剂） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、麦康凯液体培养基（配制批号： ）麦康凯琼脂培养基（配制批号： ） （30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号： ），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号： ）、三糖铁琼脂（配制批号： ） 五、耐胆盐革兰阴性菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号： ），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号： ）
表：2.1-024微生物限度检查记录（蛇胆川贝液） 三、大肠埃希菌检查
四、沙门菌检查（30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：） 表：2.1-024微生物限度检查记录 （30～35℃，3～5天） 20℃～25℃，5～7天） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）
090207工业微生物学
《工业微生物学》课程（090207）教学大纲 一、课程基本信息 课程中文名称:工业微生物学 课程代码：09207 学分与学时：4.0学分，72学时；（理论课3学分，54学时；实验课0.5学分，18学时） 课程性质：专业必修 授课对象：生物技术（专科） 二、课程教学目标与任务 通过教学，使学生掌握工业微生物学的完整基本知识，包括工业微生物的形态构造、生理代谢、遗传变异、生态分布等；了解和掌握微生物菌种分离和培养、染色和观察、菌种选育、菌种保藏以及有害微生物控制等基本微生物实验技术原理和方法；向学生展示工业微生物在现在发酵工业、食品工业、制药工业和环境工程等方面的应用现状和研究进展，使所学基本理论更好结合生产实践。在教学中要把精力集中在培养学生分析问题，解决问题的能力上。 三、学时安排 四、课程教学内容与基本要求 教学要求和教学方法： 1. 突出四性：基础性、系统性、先进性、应用性 2.多种教学方式：采用多媒体课件将授课内容、图表、照片、结论式条文展示出来，把原本活生生的微生物还原其本来面貌，触发学习者的形象思维，加深对基本理论的认识和掌握；每章节重点、难点的提示、章后小结，少而精，使学习者能触类旁通，举一反三、思维活跃、知识丰收； 3.理论与实验、理论与实践紧密结合 教学内容 目的和要求：本章主要引导学生了解什么是微生物，工业微生物学的建立和发展历史，对人类生产实践活动以及其他学科的影响，明确微生物学作为一门独立学科在生命科学发展中的重要作用和地位，了解微生物的分类、鉴定和命名，激发学生对微生物学的浓厚兴趣，启迪学生，勤于思考，勇于实践，为科学发展做出奉献。 重点与难点：要求掌握微生物学科发展历史中几位重要的奠基人物对微生物学的主要贡献；微生物的几大共性特征。 第一章微生物与工业微生物学
工业生产常用的微生物及要求
工业生产常用得微生物及要求 摘要：世界上得微生物种类多样，数目众多，在生物界来说就是极其丰富得。同时，微生物对于人类又有着巨大得贡献，如食品、药品、各种各样得产品都里就有大量微生物产品。 关键词：微生物；工业发酵；细菌 自然界中微生物无所不在，我们实际上生活在一个充满着微生物得环境中。在空气中、土壤中、水等环境中生长存在得微生物就是各种各样得，种类繁多，且都就是混合在一起得。尤其土壤就是微生物得大本营，种类之多，数量之大。比如酵母菌多分布在土壤中，并且在海洋与淡水中都有一定数量得分布。在比如在人体得肠道中、植物得叶片上等都存在大量得微生物。由此可见，微生物在自然界中得数量之庞大令人所惊奇。我们通过菌种选育得方法，从中筛选出所需要得菌株，满足一定得生产要求后，才可以扩大培养应用到工业发酵生产当中。 1工业生产常用微生物得种类 在发酵工业生产上，我们所选择得用于生产产品得微生物大致有四类：细菌、放线菌、酵母菌与霉菌，这四种菌也就是我们所熟悉得。现在由于发酵工程本身发展迅速，科技手段越来越先进，藻类、病毒等也正在逐步成为工业生产所应用得微生物得一员。
工业发酵常用得微生物种类大致如下： 1、1细菌 细菌就是单细胞原核生物，其繁殖方式一般就是无性繁殖，主要得繁殖方式就是裂殖。裂殖分为三个阶段：核分裂、形成横隔、子细胞分离。细菌染色体复制后，复制后得核物质髓细胞得生长向细胞得两级移动，质膜由外而内推进，形成间隔，细胞膜发生内陷，母细胞得细胞壁向内生长，将细胞质隔膜分成两层，细胞壁横隔也分成两层，由此形成两个相同得子细胞。细菌就是自然界分布最广、数量最多得一类微生物。 细菌得形状大致分为杆状、球状、螺旋状，其中杆状最多，球状次之，螺旋状较少。而工业生产中常用得细菌，应用较多得为杆状与球状，其中还就是以杆状居多。比如保加利亚乳杆菌可以用来发酵酸奶；醋酸杆菌可以制作果醋；乳酸杆菌、乳酸球菌制优格；乳脂链球菌可以制作干酪、酸制奶油发酵剂得菌种；肠膜状明串珠菌生产酸泡菜及右旋糖苷；嗜盐片球菌酿造酱油。 1、2酵母菌 酵母菌其实就是俗称，就是单细胞得真核微生物。酵母菌能够发酵糖类，大多数为腐生微生物，所以喜欢存在于含糖较多得环境中，比如在含糖分较多得水果中。酵母菌得无性繁殖分为芽殖、裂殖、及产生无性孢子。有性繁殖就是由