汉恒生物实例分享-一步法构建同源重组载体

一步法构建同源重组载体

王海艳

（中国农业大学）

同源重组载体构建需要分别克隆目的片段两端的同源臂（长度~1kb），并与Marker基因进行连接。传统的构建方法是两段同源臂分别克隆构建到目的载体，费时费力。在本例中，本人已经成功应用汉恒生物科技（上海）有限公司的HB-Infusion TM无缝克隆试剂盒，将同源臂及Marker基因一步成功构建到载体上，现将实验过程及结果分享如下：

1. 目的片段引物的设计

用NEBbuilder（https://https://www.wendangku.net/doc/3116437170.html,/watch?v=8_-t5xtJ3y8），或snapgene，genomecompiler等软件，将三个目的片段的基因序列、线性化载体的基因序列按照软件使用说明依次填入，将自动生成所需要的引物序列（如下表）。将引物提交华大基因进行合成。

引物序列列表

2. 目的片段的扩增

反应体系

DNA(248ng/uL) 1uL

Forward Primer (10uM) 2uL

Reverse Primer(10uM) 2uL

ExTaq premix 25uL

DDW 20uL

Total 50uL

（注：此步反应中的酶最好用高保真酶，以免产物出现错配）PCR反应程序

95℃4min

95℃30s

65℃30s

72℃1~2.5min

72℃10min

将扩增到的PCR产物，用1%琼脂糖凝胶电泳后，进行胶回收并用Nanodrop 测量核酸浓度。

图1. 三个目的片段凝胶电泳结果

3. 载体的线性化

酶切：

Plasmid 2ug

34cycles

SacI 2uL

XbaI 2uL

10×M buffer 5uL

DDW39uL

Total 50uL

37℃酶切4h后，用1%凝胶电泳进行分析，并用Axygen凝胶回收试剂盒进行胶回收。

图2. 载体酶切及胶回收实验结果

A：质粒；B：质粒酶切产物；C：目的片段胶回收产物。

4. 冰上融化并且充分混匀HB-infusion TM Master mix，配制反应体系

将各个片段按照说明书的要求计算用量并配制反应体系，如下表所示：

片段

碱基对数

（bp）浓度

（ng/uL)

OD260/280 所需mol数

所需质量

（ng）

所需体积

(uL)

3'-flank 1000 129.5 1.84 0.2 130.00 1.00 5’-flank 1000 141.4 1.89 0.2 130.00 0.92 Marker fragment 2518 184.9 1.88 0.2 327.34 1.77 Lineared vector 2875 95.2 1.85 0.1 186.88 1.96 HB-infusion MIX 10 DDW 4.34 Total 20

5. 将上述反应体系置于50℃孵育60min 。

6. 转化感受态大肠杆菌 1) 在冰上融化一支50uL 的DH5α感受态菌。

2)

取20uL 反应样品加入融化好的感受态菌中，轻轻混匀，将该混合物至

于冰上30min 3) 放入42℃金属浴中热激90s ，迅速放入冰中静置5min

4)

在超净工作台中，向上述管中加入1mL LB （不含抗生素），然后固定到

摇床上37℃震荡1h ，摇床转速180rpm 。 5)

在超净工作台中，取上述转化混合液200uL ，滴到含有Amp+抗性的LB

固体平板上，用酒精灯烧过的涂布棒将液滴涂布均匀，37℃恒温箱中倒置培养过夜。 6) 挑取平板上的单克隆，用载体上的引物M13F/M13R 对目的片段进行扩

增。 7)

用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，实验结果如图。

8)

将5号转化子提交华大生物科技有限公司进行测序。结果表明重组片段

的序列与目的序列信息一致。

图3. 菌落PCR 试验结果

原核生物和真核生物的主要区别

原核生物和真核生物的主要区别 人教版高一必修一生物 一、协作学习任务设计 1、展示原核生物和真核生物的图片或者视频 生物体可以分为非细胞结构和细胞结构。科学家又根据细胞内有无以核膜为界限的细胞核，将细胞分为两类，原核细胞和真核细胞。 提出问题：原核生物和真核生物的主要区别在哪？ 二、教师进行指导，并提供资源 （一）回顾并总结原核生物、真核生物在细胞结构上的特点以及主要类群 （二）原核细胞和真核细胞的结构特点进行比较 （三）在认识和比较的基础上，探讨原核细胞和真核细胞之间的相关性及其发展史。 学习资源 1、教材 2、生物进化史课本 三、开展协作学习 学生之间进行分组，组内进行收集资料，讨论、总结。 四、开展学习活动 五、小组内部进行分工，可以按照老师的指导进行收集资料、进行总结。 原核生物的结构特点： 1、细胞大小：支原体是原核生物中最小的生物体。 2、细胞壁：肽聚糖（糖类与蛋白质结合而成的化合物），不含纤维素。 3、细胞膜：与真核细胞的相似。 4、细胞质：只有核糖体，无其他复杂的细胞器。 5、拟核：有丝状DNA分子，分布于细胞质的一定区域，没有核膜。 原核生物的主要类群： 蓝藻，含有（藻蓝素）和（叶绿素），可进行光合作用。 细菌，（球菌、杆菌、螺旋菌、和乳酸菌） 放线菌，（链霉菌） 支原体，衣原体，立克次氏体 真核生物的结构特点： 1.生物膜结构：以生物膜为基础而形成的膜性结构和细胞器 2.细胞骨架结构：包括细胞质骨架和核骨架 3.细胞质溶胶：为均质半透明液体，是代谢反应进行的场所 4：细胞核:遗传信息储存、表达的部位 真核生物的主要类群： 动物 植物 真菌（青霉菌，酵母菌，蘑菇）

代谢相关疾病基因功能研究介绍

代谢相关疾病基因功能研究介绍 代谢是生物体内所发生的用于维持生命的一系列有序的化学反应的总称。常见的代谢性疾病有糖尿病、肥胖症、骨质疏松、痛风、脂质代谢紊乱以及甲状腺、垂体、肾上腺、性腺、甲状旁腺等疾病。 一、疾病模型 (一)糖尿病模型。糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素 分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。在对糖尿病的研究中，常见的模型 包括： 1.一型糖尿病模型 A药剂诱导型：①STZ (streptozocin), 链脲菌；②Alloxan,四氧嘧啶 B自发型：①NOD (non-obese diabetes)小鼠；②AKITA小鼠 2.二型糖尿病模型 A肥胖二型糖尿病模型 ①db/db小鼠 ②ob/ob 小鼠 ③Zucker fatty大鼠 ④ZDF (Zucker diabetic fatty) 大鼠 ⑤果糖（fructose）长期饮食的二型糖尿病动物模型 ⑥果糖短期饮食+低剂量STZ一次投药 B瘦型二型糖尿病模型 GK(Goto-Kakizaki )大鼠 (二)肥胖症模型。肥胖症是一组常见的，古老的代谢症群。当人体进食热量多于消耗热 量时，多余热量以脂肪形式储存于体内，其量超过正常生理需要量，且达一定值时 遂演变为肥胖症。在对肥胖的研究中，常见的模型有： 1.谷氨酸钠(MSG)诱导的肥胖动物模型 新生小鼠或大鼠皮下注射MSG可诱导其产生肥胖。脂肪堆积是MSG肥胖动物的主要表现,其体脂在2周龄时即显著增加,一直增加到4月龄时。在30～90d时即已形成脂肪肝。 2.金硫葡萄糖(GTG)致肥胖模型 给成年小鼠腹腔注射GTG可诱导其产生肥胖, GTG所诱导的肥胖,被人们普遍认为系下

高三生物上学期期末考试试题

拉萨市第三高级中学2015—2016学年第一学期 高三生物期末考试题 一、选择题（6ⅹ6=36） 1、下列活动中不属于反射的是（） A．食虫鸟见到某些昆虫的幼虫不敢食 B．熟睡的人被蚊虫叮咬会动一动 C．精彩的哑剧表演引来人们的热烈掌声 D．电刺激与离体腓肠肌相连的坐骨神经，腓肠肌收缩 2、下图为下丘脑某神经细胞的部分膜结构示意图，下列叙述正确的是（） A．若此图为突触后膜局部结构，则兴奋经过此处时的信号转换是：电信号→化学信号→电信号 B．此细胞可以分泌促进水重吸收的激素，且该激素一经靶细胞接受并起作用后就被灭活了C．该细胞可参与形成体温调节中枢、呼吸中枢等重要的生命活动中枢 D．动作电位的形成与膜上的②、④等载体有关，膜外为正电位，膜内为负电位 3、有关右图的各项叙述中，正确的是( ) A．图中有两条捕食链

B．狐与鸟之间既存在捕食关系又存在竞争关系 C．细菌占有第二、三、四、五营养级 D．该图表示生物群落，狐为第三、四营养级 4、以下关于内环境稳态调节的叙述中不正确的是( ) A．主要通过神经—体液—免疫调节网络来实现 B．包括水和无机盐平衡的调节 C．包括pH的调节、血糖的调节 D．体温调节不属于内环境稳态调节的范畴 5、下列说法错误的是 ( ) A.免疫系统能清除部分引起内环境波动的因素 B.食物消化后的酸性物质进入内环境，pH会发生偏移 C.当人体自身调节功能出现障碍时，内环境稳态会被破坏 D.温度影响酶活性，所以人的体温是不变的 6、下列有关内环境和稳态的说法，不正确的是（） A．血浆中的蛋白质含量明显高于淋巴和组织液 B．人体内环境的pH、渗透压等保持相对稳定是细胞正常代谢所必需的 C．个体稳态的实现是神经系统、内分泌系统和免疫系统等共同调节的结果D．人体体温无论在什么情况下始终可以维持在37 ℃左右 二、填空题。（每空2分，共54分） 7、下图是生长素浓度与其作用关系图。回答下列问题：

原核生物和真核生物的比较

原核生物和真核生物基因组的比较（我好想比较过了，是不是？） 原核生物和真核生物DNA复制的特点： 原核：一般只有一个复制起点，即一个复制子，复制子较长，复制起始点oriC含有3个13bp 的串联重复保守序列，复制起始之后在OriC上形式两个复制叉沿着整个基因组双向等速移动，并且形成θ形中间产物，两个复制叉在距离起点180°处汇合，在快速生长时，一个复制起点上可以形成多个复制叉，可以连续开始新的DNA复制； 真核：有多处复制起点，复制子相对较小，复制叉的移动速度较慢，由于有多个复制起点，所以后随链是以半不连续的方式复制的，在染色体全部完成复制之前，各个起始点上的DNA 的复制不能再开始。 原核生物和真核生物DNA转录的特点： 相同点：都是以DNA双链中的反义链为模板，在RNA聚合酶催化下，以4种核糖核苷酸为原料，根据碱基互补配对原则，各核苷酸间以磷酸二酯键相连，不需要引物的参与，按5’- 3’方向合成 不同点：真核生物RNA聚合酶必须借助辅助蛋白才能与启动子结合；原核生物中一种RNA 聚合酶几乎负责所有mRNA、rRNA、tRNA的合成，真核生物有3类RNA聚合酶：I负责rRNA 合成，II负责hnRNA（前体mRNA）合成，III负责tRNA合成；原核生物基因启动区范围较小，而真核生物的启动区范围较大。 真核生物和原核生物mRNA的特征比较（这个也总结过了吧） 真核生物和原核生物在基因结构、转录和翻译方面的总体差异： （1）真核细胞中，一条mRNA链只能翻译出一条多肽链，原核生物则以多基因操纵子形式存在； （2）真核细胞DNA与组蛋白和大量非组蛋白结合，只有一小部分DNA是裸露的； （3）高等真核细胞DNA中很大一部分不转录，存在很多重复序列，而且基因内部还存在不被翻译的内含子； （4）真核生物能够有序根据生长发育阶段的需要进行DNA片段重排，还能根据需要改变基因的拷贝数，原核生物中则非常少见； （5）原核生物转录的调节区很小，而真核生物基因转录的调节区则大得多； （6）真核生物RNA在细胞核中合成，需要通过核膜进入细胞质才能被翻译，原核生物中不存在这样严格的空间间隔； （7）真核生物的基因只用经过复杂的成熟和剪接过程才能被顺利翻译为蛋白质。 原核生物和真核生物细胞的比较： 相同点：都有细胞膜，都含有核糖体合成蛋白，都含有细胞质基质作为生理生化反应的场所，都以DNA作为遗传物质，都遵循碱基互补配对原则以半保留复制方式进行DNA复制； 不同点：（1）真核细胞有核膜包被的细胞核，原核细胞只有核区、没有核膜包被的细胞核；（2）真核细胞含有以高尔基体、内质网为代表的细胞内膜系统，原核细胞则没有；（3）真核细胞DNA与组蛋白及非组蛋白结合为染色质，原核细胞DNA则是裸露的DNA分子；（4）原核生物DNA一般边转录边翻译，而真核生物mRNA则需要先转录然后转运至细胞质基质中再进行翻译

人教版高一年级生物下学期一单元原核细胞与真核细胞知识点

人教版高一年级生物下学期一单元原核细 胞与真核细胞知识点 相同点： 有细胞膜细胞质，均有核糖体，均能进行转录与翻译过程合成蛋白质。 2.均有DNA和RNA，且均以DNA为遗传物质。 区别： 1.大小区别：小、大。 2.种类区别：细菌、蓝藻、放线菌、衣原体、支原体 动物、植物、真菌、衣藻、绿藻、红藻等 3. 细胞壁：为肽聚糖、真核为纤维素和果胶 4.细胞质中细胞器：不含复杂的细胞器，但有的能、。其场所分别在中、细胞膜上进行。例、蓝藻、硝化细菌等。高等植物成熟的叶肉细胞特有：细胞壁、大的液泡、叶绿体低等的特有: 细胞壁、液泡、叶绿体、中心体特有：中心体，（无细胞壁、叶绿体和大的液泡）。 5.均以DNA为遗传物质：DNA在拟核、质粒中。无染色体结构。（染色体由DNA和蛋白质组成）DNA在细胞核、线粒体或叶绿体中。

6.的遗传不遵循孟德尔的遗传规律，其变异靠基因突变，细胞不能进行有丝分裂和减数分裂。真核生物的遗传遵循孟德尔的遗传规律，其变异来源有基因突变、基因重组、染色体变异。 7.生殖方式：只进行，主要进行分裂生殖进行有性生殖，但酵母菌在不良的环境下进行有性生殖，在良好的环境下进行。 8.从生态系统的组成成分上看：某些能进行活化能合成作用的原核生物属于生产者，为自养生物。例、蓝藻、硝化细菌等。多数细菌为分解者，例大肠杆菌、乳酸菌等；有的为消费者，例根瘤菌等。 练习题： 1．用高倍显微镜观察黑藻叶绿体时，可见叶绿体( ) A．具有双层膜 B．呈绿色带状 C．内部有许多基粒 D．呈绿色椭球形 答案：D 2．细胞质基质是细胞结构的重要组成部分，下列关于细胞质基质的叙述，错误的是( ) A．影响细胞的一系列活动 B．是活细胞进行新陈代谢的主要场所

汉恒生物 荧光素酶实验原理

汉恒生物 荧光素酶检测服务 汉恒生物科技（上海）有限公司 地址：上海浦东新区蔡伦路150号1号楼

psiCHECK2---miRN A与其靶点相关分析,包括miRNA靶基因验证(参考案例二A和B)、lncRNA (参考案例三)与circRNA (参考案例四)吸附miRNA 验证等。需要把miRNA 潜在结合靶点克隆到R-Luciferase (hRLuc) 3’UTR区域，然后与待测miRNA共同转染细胞内测定R-Luciferase活性高低，F-Luciferase （hLuc+）作为校正内参校正不同样品之间转染的转染效率。 pGL3-Basic---用于转录因子结合位点与启动子活性分析。把待分析启动子区段构建到F-Luciferase上游，和转录因子共转染分析F-Luciferase活性即可反应启动子的活性高低。该质粒通常需要结合持续性表达R-Luciferase的载体作为内参以校正不同样品之间转染的转染效率(参考案例一)。 两种常用载体类型极其应用场景 技术线路 学术、技术团队根据顶级学术论文真实案例协助方案设计 根据实验目的确定设计方案 采用汉恒HB-Infusion TM 无缝克隆策略，提高载体构建效率 根据实验目的确定设计方案 独家定制的转染试剂和病毒转导 系统确保基因转导效率 根据实验目的确定设计方案 顶级商品化检测试剂盒和强大高 效的检测仪器 根据实验目的确定设计方案 详实的原始数据，细致的结果分 析，清晰的实验结论 根据实验目的确定设计方案

LncRNA转录因子结合位点与启动子活性分析 论文来源: Wang, P ., et al. (2014). "The STAT3-binding long noncoding RNA lnc-DC controls human dendritic cell differentiation." Science 344(6181): 310-313. 本文是曹雪涛实验室在2014年发表在Science上一篇研究性论文。作者通过芯片鉴定出DC (树突状细胞)发育相关的一个lncRNA，命名为lnc-DC。同时高通量测序也发现了这条差异lncRNA的存在。进而作者通过Northern Blot验证了这条lnc-DC。由于lnc-DC极其特异和稳定地高表达在DC发育过程的某一时期，所以作者假设lnc-DC可能是和表观遗传学调控事件相关的。为了验证这一假设，作者通过染色体免疫沉淀结合测序的技术-CHIP-seq和qPCR发现lnc-DC的转录起始位点（TSS）附近富集了Pol II、H3K4me3和H3K27ac等蛋白（下图A），提示DC发育过程中表观遗传学变化与lnc-DC的转录增强事件相对应。进而作者通过序列分析发现在lnc-DC的转录起始位点附近（+44-+50）存在一个经典的PU.1结合位点。作者假设PU.1参与了lnc-DC的特异性表达。于是作者设计了如下实验进行了进一步的验证（下图B）。 作者把lnc-DC的启动子区段（-1447-+223）及其不同的突变体版本分别克隆到F-Luciferase表达框上游，然后和转录因子PU.1表达质粒或者空载体（Vector）共同转染到模式细胞系HEK-293T，通过测量荧光强度的变化间接反应转录活性的高低。最终证明转录因子PU.1通过经典结合位点（+44-+50）介导了lnc-DC在DC发育过程中的特异表达。 LncRNA通过吸附miRNA调控靶基因mRNA的表达 (ceRNA) 论文来源: Cesana, M., et al. (2011). "A long noncoding RNA controls muscle differentiation by functioning as a competing endogenous RNA." Cell 147(2): 358-369. 作者通过表达分析发现了一条肌肉发育相关的lncRNA---lnc-MD1.前期功能研究发现lnc-MD1可以调控肌肉分化的时间。信息学分析发现这条肌肉特异的lncRNA上包含36个miRNA的结合位点。如果只考虑肌肉发育相关的miRNA和基因，36个候选miRNA里面只剩下miR-133和miR-135。作者通过荧光素酶实验进行了验证。首先作者把野生型及其缺失miR-133和miR-135结合位点的Lnc-DC1克隆到进R-Luc的3’UTR，然后分别与表达miR-133和miR-135前体的质粒共同转染到细胞进行荧光素酶活性检测（下图A和B）。证明lnc-MD1缺失存在miR-133和miR-135的结合位点。 进一步的信息学预测，miR-133和miR-135分别靶向两个基因- MAML1 和 MEF2C。同样，作者还是通过荧光素酶实验进行验证。研究者把MAML1 和 MEF2C的3’UTR （WT）和miRNA结合位点缺失突变体（-mut）分别克隆在RLuc表达框的下游，然后和miRNA过表达载体共转染细胞进行酶活测定。结果显示miR-133和miR-135确实分别靶向了MAML1 和 MEF2C两个基因（下图C）。最后的模型是lnc-MD1通过ceRNA机制吸 附miR-133和135，正向调控了MAML1 和 MEF2C的表达，参与调控肌肉发育。 经典应用案例二

高三上学期生物期末试题(含答案)

2019高三上学期生物期末试题(含答案) 为了帮助学生们更好地学习高中语文，查字典生物网精心为大家搜集整理了2019高三上学期生物期末试题，希望对大家的语文学习有所帮助! 一、选择题：(每题只有一个选项符合要求。共20题，每题1分，共20分) 1.下列有关化合物分类关系的集合图中正确的是 2.图a、b、c分别是三种生物细胞的结构模式图。下列叙述正确的是 A.三种细胞内遗传物质的载体都是染色体 B.a细胞有细胞壁，b、c细胞没有该结构 C.三种细胞中共同具有的细胞器只有核糖体 D.a、b细胞内具膜结构的细胞器构成了生物膜系统 3.细胞作为生命活动的基本单位，其结构和功能高度统一。下列叙述不正确的是 A.卵细胞体积较大有利于与周围环境进行物质交换，为早期胚胎发育提供养料 B.哺乳动物成熟的红细胞表面积与体积之比相对较大，有利于提高气体交换效率 C.小肠绒毛上皮细胞内有大量的线粒体，有助于物质运输的能量供应 D.哺乳动物成熟精子中细胞质较少，外形似蝌蚪，有利于精子运动 4.下列有关ATP的说法正确的是 A.ADP转化为ATP需要Pi、酶、腺苷、能量

B.人体细胞内储存有大量的ATP C.线粒体是蓝藻细胞产生ATP的主要场所 D.光合作用和细胞呼吸都能产生ATP 5.在真核细胞中，核孔复合体是细胞核与细胞质进行物质交换的通道。下列物质经核孔复合体向细胞质方向运输的是 A.DNA B.DNA连接酶 C.转运RNA D.RNA聚合酶 6.下列有关酶的实验设计思路正确的是 A.利用淀粉、蔗糖、淀粉酶和碘液验证酶的专一性 B.利用过氧化氢和淀粉酶探究温度对酶活性的影响 C.利用过氧化氢、鲜肝匀浆和FeCl3研究酶的高效性 D.利用胃蛋白酶、蛋清和pH分别为5、7、9的缓冲液验证pH对酶活性的影响 7.下图所示为甘蔗的叶肉细胞内的系列反应过程，下列有关说法正确的是 A.过程①消耗CO2释放O2，过程③消耗O2释放CO2 B.过程②只发生在叶绿体基质，过程③只发生在线粒体基质 C.过程①产生[H]，过程②消耗[H]，过程③产生[H]也消耗[H] D.若过程②的速率大于过程③的速率，则甘蔗的干重必然增加 8.右图示某同学在高倍镜下观察到的水仙根尖细胞有丝分裂的情况，相关叙述正确的是(数字标识其左侧细胞) A.1的染色单体数为其它细胞的两倍 B.2的染色单体数与核DNA分子数比为1∶2

自噬监测——LC3双标腺病毒(完整版)

自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南 1 自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南 背景： 自噬是细胞内的一种“自食（Self-eating ）”的现象，凋亡是“自 杀（Self-killing ）”的现象，二者共用相同的刺激因素和调节蛋白， 但是诱发阈值和门槛不同，如何转换和协调目前还不清楚. 自噬是指 膜（目前来源还有争议，大部分表现为双层膜，有时多层或单层）包 裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体，最后与 溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，以实现细胞稳 态和细胞器的更新。目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略 和手段有：通过western blot 检测LC3的剪切；通过电镜观测自噬体 的形成；在荧光显微镜下采用GFP （-RFP ）-LC3等融合蛋白来示踪自 噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多，针对于此我们 汉恒生物科技（上海）有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流) 的mRFP-GFP-LC3腺病毒，mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指 示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对 酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检 测到红色荧光。这种串联的荧光蛋白表达载体系统直观清晰的指示了 细胞自噬流的水平，是我们自噬研究尤其是自噬流研究不可或缺的利 器。

mRFP-GFP-LC3腺病毒的操作 收到病毒后的处理 （一）、腺病毒的储存 1、腺病毒采用冰袋运输。 （1）、收到病毒液后如未融化请置于-80℃冰箱，下次使用时再进 行分装； （2）、如客户收到时腺病毒已融化，请直接分装后置于-80℃冰箱 保存；若短期内用于实验，可分装部分于4℃保存（尽量一周内用完）。 2、尽量避免反复冻融，否则会降低病毒滴度（每次冻融会降低病 毒滴度10%）。建议不要在-20℃下长期保存。如果病毒储存时间 超过6个月，应该重新测定病毒滴度。 3、建议收到病毒产品后根据实验需求自行分装或购买经过分装的小 包装病毒产品（购买时请提出）。 （二）、腺病毒的稀释需要稀释病毒时，将病毒取出后置于冰上融解，使用培养目的细胞 用PBS 或培养基稀释到所需浓度后混匀分装后4℃保存，并尽快用于 实验（尽量一周内用完），动物实验建议使用注射用平衡液来稀释， 并尽快用完。 感染目的细胞 2

(完整版)高三生物必修一一轮复习试题

高三生物一轮复习必修一试题 说明：本试卷分为两部分，考试时间90分钟，共100分 第Ⅰ卷（本卷共50个小题） 一、选择题(1—40每题1分，41—45每题2分。共50分) 1、（课标Ⅰ卷）关于细胞膜结构和功能的叙述，错误 ．．的是（） A.脂质和蛋白质是组成细胞膜的主要物质 B.当细胞衰老时，其细胞膜的通透性会发生改变 C.甘油是极性分子，所以不能以自由扩散的方式通过细胞膜 D.细胞产生的激素与靶细胞膜上相应受体的结合可实现细胞间的信息传递 2、（课标Ⅱ卷）关于细胞的叙述，错误 ．．的是 A．植物细胞的胞间连丝具有物质运输的作用 B．动物细胞间的黏着性与细胞膜上的糖蛋白有关 C．ATP水解释放的能量可用于细胞内的吸能反应 D．哺乳动物的细胞可以合成蔗糖，也可以合成乳糖 3、（福建卷）细胞的膜蛋白具有物质运输、信息传递、免疫识别等重要生理功能。下列图中，可正确示意不同细胞的膜蛋白及其相应功能的是 4、（2014重庆卷）获2013年诺贝尔奖的科学家发现了与囊泡运输相关的基因及其表达蛋白的功能， 揭示了信号如何引导囊泡精确释放运输物。突触小泡属于囊泡，以下相关叙述，错误 ．．的是A．神经元中的线粒体为突触小泡的运输提供了能量 B．神经元特有的基因决定了突触小泡的运输方式 C．突触前膜的特定蛋白决定了神经递质的释放位置 D．突触小泡中运输物的释放受到神经冲动的影响

5、（2014山东卷）有关细胞内囊泡运输的描述，正确的是 A．细胞核内的RNA通过囊泡运输到细胞质 B．蛋白质类激素经囊泡运输分泌到细胞外 C．细胞器之间都能通过囊泡进行物质运输 D．囊泡运输依赖膜的流动性且不消耗能量 6、（安徽卷）下列关于线粒体的叙述，正确的是 A.线粒体外膜上的蛋白质含量比内膜的高 B.葡萄糖分解为丙酮酸的过程发生在线粒体基质中 C.成人心肌细胞中的线粒体数量比腹肌细胞的多 D.哺乳动物精子中的线粒体聚集在其头部和尾的基部 7、（江苏卷）下列关于细胞结构和功能的叙述，错误 ．．的是 A.性激素主要是由内质网上的核糖体合成 B.囊泡可以由内质网向高尔基体转运 C.膜蛋白的形成与核糖体、内质网、高尔基体有关 D.内质网既参与物质合成，也参与物质运输 8、（广东卷）以下细胞结构中，RNA是其结构组成的是（） A、液泡 B、核糖体 C、高尔基体 D、溶酶体 9、（大纲卷）下列有关细胞核的叙述，错误 ．．的是 A.蛋白质是细胞核中染色质的组成成分 B.细胞核中可进行遗传物质的复制和转录 C.小分子物质可以通过核孔，大分子物质不能 D.有丝分裂过程中存在核膜消失和重新形成的现象 10、（课标Ⅰ卷）下列关于植物细胞质壁分离实验的叙述，错误 ．．的是（） A.与白色花瓣相比，采用红色花瓣有利于实验现象的观察 B.用黑藻叶片进行实验时，叶绿体的存在会干扰实验现象的观察 C.用紫色洋葱鳞片叶外表皮不同部位观察到的质壁分离程度可能不同 D.紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞的液泡中有色素，有利于实验现象的观察 11、（北京卷）比较生物膜和人工膜（双层磷脂）对多种物质 的通透性，结果如右图。据此不能 ．．得出的推论是 A.生物膜上存在着协助H2O通过的物质 B.生物膜对K+、Na+、Cl-的通透具有选择性 C.离子以易化（协助）扩散方式通过人工膜 D.分子的大小影响其通过人工膜的扩散速率 12、（上海卷）以紫色洋葱鳞叶为材料进行细胞质壁分离和复原的实验，原生质层长度和细胞长度分别用X和Y表示（如图6），在处理时间相同的前提下 A．同一细胞用不同浓度蔗糖溶液处理，X/Y值越小，则紫色越浅

真核生物与原核生物的区别

真核生物的特征 原核细胞功能上与线粒体相当的结构是质膜和由质膜内褶形成的结构，但后者既没有自己特有的基因组，也没有自己特有的合成系统。 真核生物的植物含有叶绿体，它们亦为双层膜所包裹，也有自己特有的基因组和合成系统。与光合磷酸化相关的电子传递系统位于由叶绿体的内膜内褶形成的片层上。原核生物中的蓝细菌和光合细菌，虽然也具有进行光合作用的膜结构，称之为类囊体，散布于细胞质中，未被双层膜包裹，不形成叶绿体。 原核生物的特点 ①核质与细胞质之间无核膜因而无成形的细胞核（拟核或类核）； ②遗传物质是一条不与组蛋白结合的环状双螺旋脱氧核糖核酸（DNA）丝，不构成染色体（有的原核生物在其主基因组外还有更小的能进出细胞的质粒DNA）； ③以简单二分裂方式繁殖，无有丝分裂或减数分裂; ④没有性行为，有的种类有时有通过接合、转化或转导，将部分基因组从一个细胞传递到另一个细胞的准性行为（见细菌接合）； ⑤没有由肌球、肌动蛋白构成的微纤维系统，故细胞质不能流动，也没有形成伪足、吞噬作用等现象； ⑥鞭毛并非由微管构成，更无“9+2”的结构，仅由几条螺旋或平行的蛋白质丝构成； ⑦细胞质内仅有核糖体而没有线粒体、高尔基器、内质网、溶酶体、液泡和质体（植物）、中心粒(低等植物和动物)等细胞器； ⑧细胞内的单位膜系统除蓝细菌另有类囊体外一般都由细胞膜内褶而成，其中有氧化磷酸化的电子传递链（蓝细菌在类囊体内进行光合作用，其他光合细菌在细胞膜内褶的膜系统上进行光合作用；化能营养细菌则在细胞膜系统上进行能量代谢）； ⑨在蛋白质合成过程中起重要作用的核糖体散在于细胞质内，核糖体的沉降系数为70S;

⑩大部分原核生物有成分和结构独特的细胞壁等等。总之原核生物的细胞结构要比真核生物的细胞结构简单得多。 真核细胞与原核细胞的区别 真核细胞与原核细胞的主要区别是： ①真核细胞具有由染色体、核仁、核液、双层核膜等构成的细胞核；原核细胞无核膜、核仁，故无真正的细胞核，仅有由核酸集中组成的拟核。 ②真核细胞的转录在细胞核中进行，蛋白质的合成在细胞质中进行，而原核细胞的转录与蛋白质的合成交联在一起进行。 ③真核细胞有内质网、高尔基体、溶酶体、液泡等细胞器，原核细胞没有。 ④真核生物中除某些低等类群（如甲藻等）的细胞以外，染色体上都有5种或4种组蛋白与DNA 结合，形成核小体；而在原核生物则无。 ⑤真核细胞在细胞周期中有专门的DNA复制期（S期）；原核细胞则没有，其DNA复制常是连续进行的。 ⑥真核细胞的有丝分裂是原核细胞所没有的。 ⑦真核细胞有发达的微管系统，其鞭毛（纤毛）、中心粒、纺锤体等都与微管有关，原核生物则否。 ⑧真核细胞有由肌动、肌球蛋白等构成的微纤维系统，后者与胞质环流、吞噬作用等密切相关；而原核生物却没有这种系统，因而也没有胞质环流和吞噬作用。 ⑨真核细胞的核糖体为80S型，原核生物的为70S型，两者在化学组成和形态结构上都有明显的区别。 ⑩真核细胞含有的线粒体，为双层被膜所包裹，有自己特有的基因组、核酸合成系统与蛋白质合成系统，其内膜上有与氧化磷酸化相关的电子传递链。 11真核生物细胞较大，一般10~100纳米，原核生物细胞较小，大约1~10纳米。

逆转录病毒试用装操作手册

汉恒逆转录病毒操作手册 一、逆转录病毒的试用装分装与储存 1.收到汉恒生物逆转录病毒产品后，请先对逆转录病毒产品进行分装处理，建议20-50μl/管。如1-2天内使用，则留足够量病毒4℃保存，余下逆转录病毒置于-80℃长期保存。 2.病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前重新测定病毒滴度。 3.反复冻融会降低逆转录病毒滴度：逆转录病毒滴度越低，冻融对滴度的影响越大，108IU/ml的逆转录病毒冻融2次滴度没有显著性差异，第3次冻融开始，每冻融一次滴度降低约10%；滴度107IU/ml滴度逆转录病毒，从第2次冻融开始，每次冻融病毒滴度下降10%-15%。 二、逆转录病毒试用装实验策略与关键知识点 1.逆转录病毒感染策略：逆转录病毒本身的病毒滴度不高，感染细胞时病毒消耗量较大，试用装体积较小，建议使用96孔板进行MOI梯度感染测试。逆转录病毒感染细胞后会反转录并插入基因组形成稳转，因此逆转录病毒感染一般采用感染少量细胞，然后将细胞放大化培养。而不是直接大量感染。 注意：对于一些传代能力较差的原代细胞，比如BMSC等，建议采用腺病毒感染。 2.逆转录病毒感染关键知识点 1）细胞准备：由于试用装体积有限，请使用96孔板准备细胞，逆转录病毒感染细胞前，请确保目的细胞状态良好、无支原体污染。逆转录病毒感染的时候细胞汇合率为40%～60%间为宜。 2）感染细胞最佳MOI的测定：MOI（感染复数）是指每个细胞感染的病毒数。 逆转录病毒对于不同种类不同来源的细胞，其最适MOI各有差别，原则上最适MOI是感染效率较好的最低MOI。MOI一般以3：10：30：100的比例递增进行梯度摸索，一般的细胞基础逆转录病毒感染MOI 可从3为开始，即设立4个常规的MOI摸索，即3，10，30，100。 3)助转剂polybrene的选择：实验证明，polybrene可提高逆转录病毒对大部分细胞的感染效率，但polybrene 有一定的细胞毒性，不同细胞对polybrene的敏感度不同，polybrene最常用的工作浓度为5～8μg/ml。 4）MOI对应病毒体积的换算（非常重要） 感染时细胞数（一般以传代计数细胞数×2计算）×MOI=病毒个数；则加入的病毒体积数=病毒个数/病毒滴度。

真核生物和原核生物的异同

从DNA复制、RNA转录、蛋白质翻译3个方面，叙述真核生物和原核生物的异同。 一、真核生物和原核生物的不同点 A、真核生物和原核生物复制的不同点： 1.真核生物DNA的合成只是在细胞周期的S期进行，而原核生物则在整个细胞生长过程中都可进行DNA合成 2.原核生物DNA的复制是单起点的，而真核生物染色体的复制则为多起点的。真核生物中前导链的合成并不像原核生物那样是连续的，而是以半连续的方式，由一个复制起点控制一个复制子的合成，最后由连接酶将其连接成一条完整的新链。 3.真核生物DNA的合成所需的RNA引物及后随链上合成的冈崎片段的长度比原核生物要短。 4.原核生物中有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种聚合酶，并有DNA聚合酶Ⅲ同时控制两条链的合成。真核生物中有α、β、γ、ε、δ五种聚合酶。聚合酶α、δ是DNA 合成的主要酶，分别控制不连续的后随链以及前导链的生成。聚合酶β可能与DNA修复有关，聚合酶γ则是线粒体中发现的唯一一种DNA聚合酶. 5.染色体端体的复制不同。原核生物的染色体大多数为环状，而真核生物染色体为线状。末端有特殊DNA序列组成的结构成为端体。 B、真核生物和原核生物转录的不同点： 1.真核生物的转录在细胞核内进行，原核生物则在拟核区进行。 2.真核生物mRNA分子一般只编码一个基因，原核生物的一个mRNA分子通常含多个基因。 3.真核生物有三种不同的RNA聚合酶催化RNA合成，而在原核生物中只有一种RNA聚合酶催化所有RNA 的合成。 4.真核生物的RNA聚合酶不能独立转录RNA，三种聚合酶都必须在蛋白质转录因子的协助下才能进行RNA的转录，其RNA聚合酶对转录启动子的识别也比原核生物要复杂得多。原核生物的RNA聚合酶可以直接起始转录合成RNA。 C、真核生物和原核生物翻译的不同点： 1.氨基酸的活化：原核起始氨基酸是甲酰甲硫氨酸，真核是从生成甲硫氨酰-tRNAi开始的。 2.翻译的起始：原核的起始tRNA是fMet-tRNA(fMet上角标），30s小亚基首先与mRNA

汉恒生物-micorRNA研究整体策略

microRNA整体解决方案汉恒Th物技术服务手册

microRNA研究总体策略 功能模型芯片筛选 芯片结果的QPCR验证 过表达和抑制miRNA实验及功能分析 靶基因Th物信息学预测及内源性分析 靶标蛋白的内源性和外源性验证 3’UTR靶标回复实验（rescue实验） 研究实例 8

选用有功能差异对比的样本，进行mir 芯片筛选 （mir-array ），筛选出变化明显的mir 。 现在主流的芯片平台是 Agilent 和Affymetrix ， Agilent 只检出成熟体，而 Affy 的芯片前体和成熟体 皆 检出，假阳性率较高， 但 Affy 的容量相比 Agilent 的 大很多。 汉恒Th 物（Hanbio ） 提 供Agilent 和 Affymetrix 平 台的 mirarray 筛选服务及后 续 的芯片数据分析及靶基因 聚类分析。 mir 进行 QPCR 验证，挑选出丰度高且变化显著的mir （以下简称mir- X ）。 Mir 的QPCR 验证最首选的当然是Life 的Taqman 系列探针和kit 权威，但价格极其昂贵。与之相比，特定引物SYBR 法检测mir 价 格适中，但误差率较高。 1

汉恒Th物（Hanbio）特有一步反转技术，特异性好，简单易用。汉恒已开发出针对不同种属mir的miRNA快速检测技术 MiRQeasy，与市面一般的mir引物相比，信号更单一，且操作极其简便。汉恒独有MiRTeasy一步法反转录试剂，一次性转录，兼顾了专一性和通用性。 过表达和封闭miRNA实验及功能验证 原则： 与mir变化相反的处理是否取缔功能表型的变化，而同向mir变化处理是否能模拟出功能表型变化。比如我们发现mir-X在细胞某种诱导分化后升高，则诱导时取缔这种升高是否会抑制分化，而单单升高该mir 能否模拟出细胞分化表型。 1）初筛选： 选取出若干芯片与QPCR验证变化一致，且组织表达丰度较高的Mir，运用Mimics（过表达）和inhibitor（封闭）分别在 细胞中过表达和封闭特定的mir，观察细胞功能的变化。 注：Mimics和inhibitor表达时程很短，一般72-96小时，所以一般只作为初筛。 2）m i r与A n t i-m i r的克隆高表达：Mir过表达：从miRbase上调出pri-mir序列，直接克隆pri- mir至表达载体。

高三生物期末考试试题

高三生物期末考试试题2019 在紧张的考试复习中，除了复习好知识点以外，做题也是很重要的，详细内容请看下文高三生物期末考试试题。双项选择题：本题共9小题，每小题6分，满分54分.在每小题给出的四个选项中，只有2个选项符合题目要求，全选对的得6分，只选1项且正确的得3分，有选错或不答的得0分. 24.下列能说明酶不同于一般催化剂的催化特性的是 A.酶都是蛋白质 B.酶是活细胞产生的，只能在生物体内发挥催化作用 C.酶的催化作用存在最适温度 D.每一种酶只能催化一种或一类物质的化学反应 25.下面是以小麦为实验材料所进行的实验，其中叙述正确的是 A.将发芽的种子研磨液置于试管内，加入斐林试剂，试管内呈现砖红色沉淀，这是因为发芽的小麦种子中含有还原性糖 B.利用小麦叶片进行观察DNA和RNA在细胞中的分布的实验时，叶片需要用酒精进行脱色处理，实验结果是绿色主要分布在细胞核，红色主要分布在细胞质 C.用显微镜观察小麦根尖成熟区表皮细胞，可观察到有丝分裂的图像，从而判断出每个细胞中的染色体数目 D.若利用小麦根毛细胞进行质壁分离实验，由于观察的细胞

无色透明，为了取得更好的观察效果，调节显微镜的措施是缩小光圈或换平面反光镜 三、非选择题：本题共11小题，满分182分. 26.(16分)下图中A～E是从几种生物细胞中分离出来的5种细胞器，①～④是从这5种细胞器中分离出来的几种有机物(①④只表示某有机物的局部)，a～d是细胞结构中发生的化学反应。请回答下列问题(在[ ]中填写数字或符号，在______上填写文字)： (1)请从①～④中选出两个生物大分子[ ]，5种细胞器都含有的有机物是[ ] ___________。 (2)具有①结构的物质存在于[ ]中，用无水乙醇提取该物质后，分离它所用的方法是_______________。 (3)能够合成③物质的细胞器有[ ] ，在这些细胞结构中进行的反应分别是[ ]。 (4)不发生a～d四种反应的细胞器是[ ]。 (5)影响图c和图d膜上生化反应的主要外界因素分别为 _____________________。 27.(16分)下图是对某植物进行光合作用研究的实验结果。图中a、b、c代表温度，且aⅠ、Ⅱ、Ⅲ代表CO2浓度，且ⅠⅢ。请回答： (1)本实验的目的是研究___________________________等因素对光合作用速率的影响。

原核生物与真核生物复制的区别

原核生物与真核生物复 制的区别 集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]

（二）D N A 的复制的必要条件 1、摸板：母链DNA 解链成单链后的两条链均可作为摸板。 2、原料：4种脱氧核苷三磷酸。 3、需要一小段RNA 作为引物，提供3'-OH 末段。 4、需要ATP 和无机离子。 5、需要多种酶和蛋白因子：如引物酶、DNA 聚合酶、拓扑酶、SSB 蛋白等。 以上必要条件中，原核生物和真核生物在DNA 的复制所需要引物、酶和蛋白因子等存在差别。其中DNA 聚合酶种类存在较大的差别。DNA 聚合酶是指以DNA 为摸板，在RNA 引物3'-OH 末段沿5'→3'方向按照碱基互补的原理催化合成DNA 链的酶，也称为依赖DNA 的DNA 聚合酶。原核生物和真核生物DNA 聚合酶的区别主要见下表1 表1 原核生物和真核生物DNA 聚合酶的区别 原核生物三种 DNA 聚合酶都有 5'→3'聚合活性和3'→5'外切酶活性，不同的是DNA-polⅠ还有5'→3'外切酶活性，即外切酶活性有双方向。真核生物五种DNA 聚合酶都有5'→3'外切酶活性，DNA-polα，DNA-polβ无3'→5'外切酶活性，DNA-polβ无5'→3'聚合活性。 原核生物DNA 聚合酶 真核生物DNA 聚合酶 DNA-polⅠ复制过程中的校读，填补缺口，修复。 DNA-polⅡDNA 损伤的应急修复。 DNA-polⅢ延长新链核苷酸的聚合。 DNA-polα起始引发，引物酶活性。 DNA-polβ低保真复制。 DNA-polγ催化线粒体DNA 的复制。 DNA-polδ延长子链的主要酶，解螺旋 酶活性。 DNA-polε填补引物空隙，切除修复，重组。 （三）DNA 复制的过程 原核生物和真核生物DNA 的过程大致可分为：起始+延长+终止三个阶段。 1、起始阶段表2 （1）解链/旋，解链/旋酶催化。 （2）起始点识别。 （3）原核生物形成复制叉。（真核生物形成多个复制单位） （4）引物酶催化引物合成。引发体与引物酶结合到DNA 链上，在引物酶的作用下合成一小段引物。 表2原核生物和真核生物DNA 复制的起始阶段的特点比较 原核生物 真核生物 复制起始点 起始点识别 引物 起始点长度 复制单位 参与的酶和蛋白因子 一个OriC DnaA 长、多 长 一个双向复制 DnaA 识别复制起始点 DnaB 解螺旋酶活性 DnaC 运载和协助DnaB DnaG 引物酶活性 多个 可能有“蛋白质-DNA 复合物 参与” 短、少 短 多个双向复制 DNA-polα起始引发，引物酶 活性 DNA-polδ解螺旋酶活性

汉恒生物实例分享-一步法构建同源重组载体

一步法构建同源重组载体 王海艳 （中国农业大学） 同源重组载体构建需要分别克隆目的片段两端的同源臂（长度~1kb），并与Marker基因进行连接。传统的构建方法是两段同源臂分别克隆构建到目的载体，费时费力。在本例中，本人已经成功应用汉恒生物科技（上海）有限公司的HB-Infusion TM无缝克隆试剂盒，将同源臂及Marker基因一步成功构建到载体上，现将实验过程及结果分享如下： 1. 目的片段引物的设计 用NEBbuilder（https://https://www.wendangku.net/doc/3116437170.html,/watch?v=8_-t5xtJ3y8），或snapgene，genomecompiler等软件，将三个目的片段的基因序列、线性化载体的基因序列按照软件使用说明依次填入，将自动生成所需要的引物序列（如下表）。将引物提交华大基因进行合成。 引物序列列表 2. 目的片段的扩增 反应体系 DNA(248ng/uL) 1uL Forward Primer (10uM) 2uL Reverse Primer(10uM) 2uL

ExTaq premix 25uL DDW 20uL Total 50uL （注：此步反应中的酶最好用高保真酶，以免产物出现错配）PCR反应程序 95℃4min 95℃30s 65℃30s 72℃1~2.5min 72℃10min 将扩增到的PCR产物，用1%琼脂糖凝胶电泳后，进行胶回收并用Nanodrop 测量核酸浓度。 图1. 三个目的片段凝胶电泳结果 3. 载体的线性化 酶切： Plasmid 2ug 34cycles

SacI 2uL XbaI 2uL 10×M buffer 5uL DDW39uL Total 50uL 37℃酶切4h后，用1%凝胶电泳进行分析，并用Axygen凝胶回收试剂盒进行胶回收。 图2. 载体酶切及胶回收实验结果 A：质粒；B：质粒酶切产物；C：目的片段胶回收产物。 4. 冰上融化并且充分混匀HB-infusion TM Master mix，配制反应体系 将各个片段按照说明书的要求计算用量并配制反应体系，如下表所示： 片段 碱基对数 （bp）浓度 （ng/uL) OD260/280 所需mol数 所需质量 （ng） 所需体积 (uL) 3'-flank 1000 129.5 1.84 0.2 130.00 1.00 5’-flank 1000 141.4 1.89 0.2 130.00 0.92 Marker fragment 2518 184.9 1.88 0.2 327.34 1.77 Lineared vector 2875 95.2 1.85 0.1 186.88 1.96 HB-infusion MIX 10 DDW 4.34 Total 20

2019-2020年高三生物上学期期末考试试题(可编辑修改word版)

2019-2020 年高三生物上学期期末考试试题 （考试时间：90 分钟 总分：100 分） 一．选择题（共 30 题，1-10 每题 1 分,11-30 每题 2 分，总分 50 分） 1.不能体现细胞膜的流动性的是 A ．由一个细胞分裂为二个子细胞 B ．高尔基体产生的囊泡与细胞膜融合C ．萎蔫的植物细胞出现质壁分离 D ．细胞膜糖蛋白的识别过程 2. 细胞核是由核膜、染色质、核仁、核孔组成，下列有关叙述中，不正确的是 A.核膜是双层膜，把核内物质与细胞质分开 B.染色质由 DNA 和蛋白质组成 C.核仁与某种 RNA 的合成以及核糖体的形成有关 D.核孔实现了细胞间的信息交流3.有关细胞呼吸的叙述中，错误的是 A ．蛔虫进行无氧呼吸 B ．哺乳动物成熟的红细胞只能进行无氧呼吸C ．长跑时，人体产生的 CO2 是有氧呼吸和无氧呼吸的共同产物 D ．马铃薯块茎进行无氧呼吸能产生乳酸 4. 将同一植物的细胞分别放在 0．3mol 的蔗糖溶液、0．5mol 的甘油溶液和清水中，测得细胞体积随时间的变化曲线如图所示，则 a 、b 、c 依次代表： 蔗糖溶液、甘油溶液、清水 B ．甘油溶液、蔗糖溶液、清水 C ．清水、蔗糖溶液、甘油溶液 D ．清水、甘油溶液、蔗糖溶液 5. 有关“一定”的说法正确的是 ①光合作用一定要在叶绿体中进行 ②有氧呼吸的第二、三阶段一定在线粒体中进行 ③ 没有细胞结构的生物一定是原核生物 ④酶催化作用的最适温度一定是37℃ ⑤细胞内的遗传物质一定是 DNA ⑥产生 CO2 一定不是无氧呼吸产生乳酸的过程；⑦有 H2O 生成一定不是无氧呼吸 A ．②③⑥ B ．⑤⑥⑦ C ．①④⑤⑦ D ．全部不对6.如下图是某细胞在进行某生命活动前后几种生物 膜面积的变化图，在此变化过程中最可能合成A ．抗体 B ．雄性激素 C ．呼吸酶 D ．DNA 合成酶7.衰老的红细胞具有以下哪些特征 ①水分减少，细胞萎缩 ②新陈代谢的速度减慢 ③某些酶的活性降低 ④呼吸速率上升 ⑤色素积累增多 ⑥呼吸速率减慢 ⑦细胞核的体积增大⑧细胞膜的通透性功能发生改变 A.①②③④⑤⑥B.①②③④⑤⑥⑦⑧C.①②③⑤⑥⑧ D.①②③④⑤⑧ 8. 光能转化成人体肌细胞内 ATP 的能量，需要经过的主要生理过程的正确顺序是A ．光合作用→消化吸收→主动运输→有氧呼吸 B ．光合作用→呼吸作用→消化吸收→主动运输 C ．呼吸作用→光合作用→主动运输→消化吸收 D ．主动运输→消化吸收→有氧呼吸→光合作用 a b c