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花青素含量测定

花青素含量测定
花青素含量测定

花青素含量测定

实验目的:掌握花青素含量测定的简单方法。

实验原理:花青素又称花色素,是苯并吡喃衍生物,属于多酚类化合物,常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键形成花色苷,是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素,也是树木叶片中的主要呈色物质,在植物细胞液泡不同的pH 条件下,呈现不同的颜色。大量研究表明:花色苷具有很强的抗氧化作用,可以清除体内的自由基;降低氧化酶的活性;可以降低高血脂大鼠的甘油脂水平,改善高甘油脂脂蛋白的分解代谢;抑制胆固醇吸收,降低低密度脂蛋白胆固醇含量;抗变异、抗肿瘤、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能J。苹果花青素主要存在于果皮中,是果皮颜色形成的重要物质。苹果中的花青素由植物次生代谢重要途径一苯丙烷类代谢形成,同位素示踪揭示花青素的碳原子分别来自苯丙氨酸和乙。苹果中的花青素由矢车菊素的三种糖苷组成,分别是矢车菊素-3一半乳糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷和矢车菊素一7·阿拉伯糖苷J。苹果中花青素的含量主要受温度、日照等因素影响,特别是紫外光可以明显提高花青素的合成效率,因此苹果的向阳面较背阳面红L4J。Jerneja等研究表明富士苹果成熟前期是其花青素形成的重要阶段,其中矢车菊素一3一半乳糖苷占总花青素92 %~98%J。

器材与试剂:

实验仪器:分光光度计,电子天平,恒温箱,剪刀,烧杯,量筒,移液管

实验试剂:0.1mol/L HCL, 矢车菊素一3一半乳糖苷,甲醇,蒸馏水

实验材料:苹果

实验内容:

1、作标准曲线:采用l %盐酸甲醇配置矢车菊素-3-半乳糖苷标准系列溶液,浓度分别为100、20.0、10.0、5.0、2.5、1.0 ~g/m L 。用分光光度计测出OD值(波长530nm),计算出标准曲线。

2、选2个苹果,把苹果皮削出,称取5g的果皮加入10m L l %盐酸甲醇溶液匀浆,在40 ℃下提取1h,离心后取上清液在波长530nm测出OD值。

3、计算出苹果中花青素的含量。

花青素含量测定

花青素含量测定 实验目的:掌握花青素含量测定的简单方法。 实验原理:花青素又称花色素,是苯并吡喃衍生物,属于多酚类化合物,常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键形成花色苷,是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素,也是树木叶片中的主要呈色物质,在植物细胞液泡不同的pH 条件下,呈现不同的颜色。大量研究表明:花色苷具有很强的抗氧化作用,可以清除体内的自由基;降低氧化酶的活性;可以降低高血脂大鼠的甘油脂水平,改善高甘油脂脂蛋白的分解代谢;抑制胆固醇吸收,降低低密度脂蛋白胆固醇含量;抗变异、抗肿瘤、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能J。苹果花青素主要存在于果皮中,是果皮颜色形成的重要物质。苹果中的花青素由植物次生代谢重要途径一苯丙烷类代谢形成,同位素示踪揭示花青素的碳原子分别来自苯丙氨酸和乙。苹果中的花青素由矢车菊素的三种糖苷组成,分别是矢车菊素-3一半乳糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷和矢车菊素一7·阿拉伯糖苷J。苹果中花青素的含量主要受温度、日照等因素影响,特别是紫外光可以明显提高花青素的合成效率,因此苹果的向阳面较背阳面红L4J。Jerneja等研究表明富士苹果成熟前期是其花青素形成的重要阶段,其中矢车菊素一3一半乳糖苷占总花青素92 %~98%J。 器材与试剂: 实验仪器:分光光度计,电子天平,恒温箱,剪刀,烧杯,量筒,移液管 实验试剂:0.1mol/L HCL, 矢车菊素一3一半乳糖苷,甲醇,蒸馏水 实验材料:苹果 实验内容: 1、作标准曲线:采用l %盐酸甲醇配置矢车菊素-3-半乳糖苷标准系列溶液,浓度分别为100、20.0、10.0、5.0、2.5、1.0 ~g/m L 。用分光光度计测出OD值(波长530nm),计算出标准曲线。 2、选2个苹果,把苹果皮削出,称取5g的果皮加入10m L l %盐酸甲醇溶液匀浆,在40 ℃下提取1h,离心后取上清液在波长530nm测出OD值。 3、计算出苹果中花青素的含量。

花青素的分离提纯测定实验具体方案.

花青素的提取、测定 仪器材料试剂: 仪器:旋转蒸发仪,真空泵,分光光度计,真空干燥箱,水浴锅,天平材料:新鲜的紫葡萄和青葡萄 试剂:无水乙醇,盐酸,铁氰化钾,三氯乙酸,硫酸亚铁 实验步骤 一、花青素的提取: 1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干,分离出果肉、果皮、籽粒 2、将分离晾干的紫色葡萄果皮,80℃下干燥1h。 3、称取2g磨成粉末 4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次,合并提取液 5、讲合并提取液进行抽滤 6、60℃减压浓缩 7、真空干燥 8、得粗提取液 2、提取条件的优化: p 水平A提取 温度 /℃ B乙醇 浓度/% C提取时 间/min D料液比/ (g/ml) p 1 50 50 60 1:10 p 2 60 60 90 1:20 p 3 70 70 120 1:30

A B C D 结果 实验序 号 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 K1 K2 K3 Q 确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取,测定最佳提取部位。

3、纯化 纸层析法提纯 1.取准备好的滤纸条(2×20cm),将其一端剪去两侧,中间留一长约1.5cm,宽约0.5cm的窄条,并在滤纸剪口上方折叠出一条直线,作为画滤液细线的基准线。 2.用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次,注意要画得匀、直、细,每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。 3.在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇∶V(乙酸∶V(水=4∶1∶5,V(正丁 醇∶V(2mol/LHCl=1∶1,V(乙酸∶V(浓HCl∶V(水=15∶3∶82,1%盐酸,V(浓 HCl∶V(水=3∶97等(即层析液)。然后将滤纸条固定于软木塞上,插入试管内,使窄端浸入溶剂中(色素点要略高于液面,滤纸条边缘不可碰到试管壁),盖紧软木塞,直立于阴暗处进行层析。 4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙醇洗涤、浓缩,即可得到样品。 四、花青素的测定 1.采用普鲁士蓝法测定花青素的还原能力。 取一定浓度的样品溶液1 mL,加入磷酸盐缓冲液和1%K3Fe(CN)6各2.5 mL,混合均匀,混合液50 ℃保温20 min,快速冷却,加入10 %的三氯乙酸溶液2.5 mL,离心10 min。取上清液2.5 mL,加入等量蒸馏水和0.1%的FeCl3 1mL,摇匀,10min后700nm下测定吸光值A700,以抗坏血酸为对照。 2青素清除体外自由基能力测定。 利用Fenton 反应产生羟自由基[6]。取2 mL PBS(磷酸盐缓冲液pH=7.4),依次加入20mmol/L EDTA和12mmol/L FeSO4混合溶液0.1mL,一定浓度的花青素溶液1 mL、100mmol/L H2O2 0.1mL,用磷酸盐缓冲液定容至5 mL,迅速混匀,置于37 ℃水浴15 min。测定510nm 下光吸收值,计算清除率。清除率=(对照吸光度-样品吸光度)/对照吸光度×100%。

原花青素的含量正丁醇测定方法

原花青素含量 1.材料和仪器 主要试剂:提取液,原花青素标样,盐酸正丁醇溶液、NH4Fe(SO4)2、95% 乙醇。 主要仪器:UV2100 型紫外分光光度计、恒温水浴锅。 溶液配制: 2%NH4Fe(SO4)2 称取3.66g七水合硫酸亚铁固体,溶于100ml水中后即得 95%乙醇移取5ml的蒸馏水至100ml容量瓶中用无水乙醇定容 盐酸正丁醇移5ml浓HCL 至100ml容量瓶正丁醇定容 2.实验步骤 a.标准曲线的制备:准确称取原花青素标准样品0.010g,用95% 乙醇溶 解并定容于10mL 容量瓶中,所得浓度为1mg/mL 作标样。吸取标样溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3mL分别于25mL 具塞试管中,加95%乙醇定容为3mL, 然后分别加入0.2mL 2%NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇(5:95)溶液,盖塞,摇匀,于微沸的水浴中加热反应40min 取出,于冷水中迅速冷却,溶液显红色,以0mL 溶液作为空白对照,于546nm 处测定其吸光度。采用最小二乘法作原花青素浓度(C)与吸光度( A ) 线性回归方程。 结果见表 取得标样体 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 积(/ml) 对应标样浓 度(mg/ml) 测的吸光度 值A b.样品测定 分别精确吸取10mL 样品,用95%乙醇定容于50mL 容量瓶。吸取上述样品待测液3mL 于25mL 具塞试管中,按标准曲线制作项下的操作步骤,依次分别加入0.2mL 2%NH4Fe(SO4)2 溶液、6mL 盐酸正丁醇溶液。根据标准曲线计算出结果,按其稀释倍数求得各样品中原花青素含量。

原花青素含量检测的概述

原花青素含量检测的概述 【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点,为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。 【关键词】原花青素;检测;含量 原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物,具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。自20世纪60年代以来,在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。研究表明[1],儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础,继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。且单体具有旋光性,因此要想测定每一种成分的含量非常困难。目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一,现介绍几种常用的方法。 1.可见分光光度法[2] 原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法,它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。 1.1 Porter法(Bate-smith法) 又叫盐酸-正丁醇法,是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解,产生红色花青素,在546nm处有最大吸收,原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。 在强酸作用下,聚合原花青素单元间的连接键易被打开,上部单元生成黄烷-3-醇,下部单元生成花色素。而对于黄烷3,4-二醇单体原花青素来说,C-4位有极强的亲电性,其醇羟基与C-5,C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统,使得4位碳易于生成正离子。在强酸作用下,正碳离子失去质子,生成花色素[5]。对于黄烷-3-醇单体,不会有正离子形成,因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。此法对原花青素具有专一选择性,儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应,不适宜于低聚原花青素的测定,它与原花青素的高聚体反应也不完全。 随后,Porter等对该法的反应条件进行了探索,并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程,提高转化率,其中以Fe3+的催化效果最好。 1.2香草醛-强酸法 常用的酸有盐酸和硫酸,目前的观点认为浓H2SO4更合适,可以提高吸光度值和灵敏性,褪色也较慢[6]。

保健食品检验与评价技术规范》2003版中“保健食品中原花青素的测定

花青素的测定 保健食品检验与评价技术规范》 2003 版中“保健食品中原花青素的测定 原花青素含量测定方法 1、 原理 原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色,但经过 用 热酸处理后,可以生成深红色的花青素离子。本方法用分光光度法测定原花青素 在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 硫酸铁铵 NH4Fe(S04)2?12HO 溶液:用浓度2mmol/l 盐酸配成2%(w/v)的 溶液。 4.1.1 片剂 取 20 片试样,研磨成粉状。 4.1.2 胶囊 挤出 20 粒胶囊内容物,研磨或搅拌均匀,如内容物含油,应将内 容物尽可能挤出。 4.1.3 口服液 摇匀后取样。 4.2 提取 保健食品检验与评价技术规范》 2003 版中 保健食品中原 2.1 甲醇 分析纯 2.2 正丁醇 分析纯 2.3 盐酸 分析纯 2 、 试剂 2.4 2.5 原花青素标准品 葡萄籽提取物,纯度 95% 3、 仪器 3.1 分光光度计 3.2 回流装置 4、 分析步骤 4.1 试样的制备

421粉状试样称取50-100mg试样置于50ml容量瓶中,加入30ml甲醇,超声处理20min,放冷至室温后,加甲醇至刻度,摇匀,离心或放置至澄清后取上清液备用。 4.2.2含油试样称取50mg试样置于小烧杯中,用20ml甲醇分数次搅拌,将 原花青素洗入50ml 容量瓶中,直至甲醇提取液无色,加甲醇至刻度,摇匀。 5.2.3 口服液吸取适量试样(取样量不超过1ml)置于50ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。 4.3 测定 4.3.1标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中,吸取该溶液 0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml置于10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各 取1ml 测定。与试样测定方法相同。 4.3.2 试样测定将正丁醇与盐酸按95:5 的体积比混合后,取出6ml 置于具塞 锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵溶液和1ml试样溶液,混匀,置沸水浴回流, 精确加热40min后,立即置冰水中冷却,在加热完毕15min后,于546nm波长处测 吸光度,由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在 1 小时内稳定。5、分析结果表述 试样中原花青素测定结果按(1) 式计算 5.1 计算: m1x v x 1000 m x 1000x 1000 式中:X —试样中原花青素的百分含量,g/100g; m1—反应混合物中原花青素的量,ug; v—待测样液的总体积,ml; m—试样的质量,mg 5.2 结果表示

葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法

葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法 葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”,其抗氧化能力是VC的20倍,VE的50倍。也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂,因此在促进皮肤新陈代谢,分解黑色素,以及提高机体免疫力,延缓衰老方面的应用极为广泛。 葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的,由于原花青素的成分极其复杂,目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品,因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。 一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量 西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究:(一)Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量 【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品,因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值,其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。 【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。 【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15~40mg)用甲醇溶解,最后定溶于100ml。从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中,然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V),在97℃±1下反应40min后,取出迅速冷却,在550nm处测定其吸光度,以甲醇代替提取物溶液作为空白。 原花青素指数=A×7.0/W W:样品质量(g); A:吸光度 【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80~100之间,有时也可能大于100。因此,目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量,是不正确的。 (二)Porter法测定葡萄籽原花青素含量 【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。因此Porter等人对Bate-Smith法进行了改进。Porter法改进之处主要是在试剂中添加了Fe3+,以提高反应的程度和颜色的稳定性。此方法测定的也是原花青素的相对含量,结果用PVU(porter value unit)表示。 【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约10~30mg)用甲醇溶解,最后定溶于100ml。从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中,然后依次加入6ml盐酸-正丁醇(5/95,V/V),0.2ml 2.0%硫酸铁铵溶液(用2mol.L-1的盐酸溶解),在97℃±1下反应40min后,取出迅速冷却,在550nm 处测定其吸光度,以甲醇代替提取物溶液作为空白。

保健食品检验与评价技术规范》2003版中“保健食品中原花青素的测定

保健食品检验与评价技术规范》2003 版中“保健食品中原 花青素的测定 《保健食品检验与评价技术规范》2003 版中“保健食品中原花青素的测定原花青素含量测定方法 1、原理原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色,但经过用热酸处理后,可以生成深红色的花青素离子。本方法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 2 、试剂 2.1 甲醇分析纯 2.2 正丁醇分析纯 2.3 盐酸分析纯 2.4硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2?12H2溶液:用浓度2mmol/l盐酸配成2%(w/v)的 溶液。 2.5 原花青素标准品葡萄籽提取物,纯度95% 3、仪器 3.1 分光光度计 3.2 回流装置 4、分析步骤 4.1 试样的制备 4.1.1 片剂取20 片试样,研磨成粉状。 4.1.2 胶囊挤出20粒胶囊内容物,研磨或搅拌均匀,如内容物含油,应将内容物尽可能挤出。

4.1.3 口服液摇匀后取样 4.2 提取 4.2.1 粉状试样称取50-100mg 试样置于50ml 容量瓶中,加入30ml 甲醇,超 声处理20min,放冷至室温后,加甲醇至刻度,摇匀,离心或放置至澄清后取上清液备用。 422含油试样称取50mg试样置于小烧杯中,用20ml甲醇分数次搅拌,将原花青 素洗入50ml 容量瓶中,直至甲醇提取液无色,加甲醇至刻度,摇匀。 5.2.3 口服液吸取适量试样(取样量不超过1ml)置于50ml容量瓶中,加甲醇至刻 度,摇匀。 4.3 测定 4.3.1标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中,吸取该溶液 0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml置于10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各取1ml 测定。与试样测定方法相同。 4.3.2 试样测定将正丁醇与盐酸按95:5 的体积比混合后,取出6ml 置于具塞 锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵溶液和1ml试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,在加热完毕15min后,于546nm波长处测吸光度,由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在 1 小时内稳定。5、分析结果表述 试样中原花青素测定结果按(1) 式计算 5.1 计算: m1x v x 1000 X(%), x 100,,,,,,,,,,,,(1) m x 1000x 1000

原花青素值的测定

3.1 原花青素值的测定 原花青素值的测定采用Bates—smith法和Poaer 法。原理:原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素,而儿茶素、表儿茶素等黄烷一3一醇单体没有此反应(图2)。它们测出的结果是原花青素的相对含量,分别用原花青素指数和PVU表示,是根据经验公式求得的。葡萄籽提取物中的原花青素指数一般在80~100之间,PVU一般在250~350之间。 原花青素值只是相对含量,并非原花青素的真实含量。据调查,同为原花青素值95的产品,多酚含量相差15%,质量大相径庭四。很多生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量是错误的。 3.2 原花青素含量的测定 原花青素的含量测定方法很多,也比较混乱。常用的有以下几种方法。 3.2.1 铁盐催化法 此方法的反应原理与原花青素值测定原理相同,在计算原花青素的含量时使用了原花青素标准品。Fe¨、盐酸为常用的催化剂和酸解剂。由于水、乙醇为反应介质时吸光值很低,一般采用正丁醇为反应介质【15-161。通常的具体操作:取1.0 mL 样液(或原花青素溶液)于10 mL刻度试管中,加入6.0 mL正丁醇一浓盐酸(95:5)与2%硫酸铁铵溶液(溶解于2 mol/L 盐酸)0.2mL,混匀,置于沸水浴中加热40min后,立即取出用冰水快速冷却至室温,在550 Nm处测定吸光值。 此方法较简便,而且对原花青素的选择性反应较好。铁盐催化法对反应体系中的含水量和Fe 浓度要求比较严格,一般要求含水量6%,Fe 浓度4.5x10 %,而且过高的Fe¨浓度对反应没有影响【l51。傅武胜【l61 研究表明3%~4%为合适的含水量,Fe 浓度选择在9.OxlO %左右。但是也有学者总结分析2%~6%含水量对花青素的形成有抑制作用,稍高的Fe¨浓度(>15 g/L)也抑制花青素的生成. 在铁盐催化反应的基础上,杨大进【l I等人利用高效液相色谱法检测了原花青素含量。该方法将原花青素在上述铁盐催化条件下生成的深红色花青素离子进行高效液相色谱分析,从而确定原花青素的含量。此方法能够排除部分杂质的影响,具有定性定量准确的优点。 3.2.2 香草醛法 测定原理:原花青素和儿茶素类单体的A环的化学活性较高,在酸性条件下,其上的问苯二酚或间苯三酚与香草醛发生缩和,产物在浓酸作用下形成红色的正碳离子,样品的浓度与产生的颜色呈正相关,在500 llm波长下测定其吸收光值

花青素测定

花青素的测定 目的花青素是类黄酮类色素中最重要的一种,广泛存在于植物花、果实、茎叶中,对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。本实验学习花青素的提取及测定方法。 一、实验原理 花青素在酸性溶液中呈红色,其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。花青素酸性溶液的吸收高峰波长是530nm,摩尔消光系数为4.62×104,故可用分光光度法测定其含量。但是一些提取液中常有叶绿素存在,干扰测定。因此,需同时测定提取液在620nm(可溶性糖)和650nm(叶绿素的吸收值)波长下的光密度值,并用Greey公式准确计算出花青素的光密度值,才能计算花青素的含量。 二、材料、设备及试剂 1.材料茶叶 2.2. 设备分光光度计、电子天平、水果刀、50ml具塞三角瓶、25ml容量瓶。 3. 试剂0.1 mol·L-1的盐酸乙醇溶液(8.3ml浓盐酸用95%乙醇稀释成1L)。 三、操作方法 1. 花青素的提取取0.100g一串红和0.116g红花继木分别放在编号为1、2的三角瓶中,加10ml盐酸乙醇溶液,在60℃水浴中加10ml提取液浸提30min,把溶液倒入25ml容量瓶中,再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中,再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中,共浸提1h,最后定溶到25ml。 2. 测定以0.1mol·L-1的盐酸乙醇溶液做参比液,在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。 四、实验结果 实验结果如下表 依据公式 1.计算花青素的光密度值 ODλ=(OD530-OD620)-0.1(OD650-OD620) 2.计算花青素含量 =ODλ ε × V ×1000000 m 花青素含量(nmol/g) ODλ:花青素在530nm波长下的光密度 ε:花青素摩尔消光系数4.62×106 v:提取液总体积(ml) m:取样质量(g) 1000000: 计算结果换算成nmol的倍数 由一串红测得结果则有:ODλ=(1.360-0.024)-0.1(0.043-0.024)=1.3341 所以,花青素含量(nmol/g)=1.3341/4.62/104×25/0.100×106=7219.156 由红花继木测得结果则有:ODλ=(0.370-0.062)-0.1(0.183-0.062)=0.2959 所以,花青素含量(nmol/g)=0.2959/4.62/104×25/0.116×106=1380.337 五、结果分析与讨论

PH示差法测量花青素含量

PH示差法测定火棘果花青素含量 原理:花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物,广泛存在于植物中的水溶性天然色素。花青素在自然状态下常与各种单糖形成糖苷,称为花色苷。溶液PH不同,花色苷的存在形式也不同。对于一个给定的PH值,在花色苷的4种结构之间存在着平衡:蓝色的醌式(脱水)碱,红色的花烊正离子,无色的甲醇假碱和查尔酮。花色苷在PH值很低时,其溶液呈现最强的红色。随着PH值的增大,花色苷的颜色将褪至无色,最后在高PH值时变成紫色或蓝色。PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数,起干扰作用的褐色降解物的特性不随PH变化。因此在花青素最大吸收波长下确定两个对花青苷吸光度差别最大但是对花色苷稳定的PH值。 原料与仪器 原料:火棘果花青素提取液,乙醇95%(AR),盐酸 仪器:PHs-3B型酸度计,紫外分光光度计 实验步骤: 1,火棘果的定性分析 取提取液稀释至一定的体积,用稀氢氧化钠和稀盐酸调节PH,观察提取液在不同PH下的颜色变化。对提取液进行200~800nm全波长扫描,绘制光谱图 PH 1.0 2.0 原液 4.5 9.5 溶液颜色

2,测定波长的选择 取火棘果花青素提取液用5%HCL-EtOH(15:85)溶液稀释至一定体积,进行光谱扫描,确定最大吸收波长。 紫外可见吸收光谱 3,PH示差法中PH的选择 在选定PH时应考虑以下因素:在此两个PH处测定的花青素的吸收值差异应是最显著的;单一PH的轻微变动,对花青素吸光值的影响是极小的;花青素在所处的两个PH下,应是相当稳定的。由于花青素只有在酸性介质中是稳定的,因此只测定PH小于7条件下花青素吸光值的变化。PH为1.0时,花青素以红色的2-苯基苯并吡喃的形式存在PH为4.5时,花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。因此选择PH为1.0和4.5。 4,平衡时间的确定 因为花青素在溶液介质中存在4种结构形式,这4种结构形式在某一PH下处于动态平衡,当PH改变时,动态平衡发生转移,总的趋势是PH降低时,平衡向红色的2-苯基苯并吡喃阳离子移动;PH 升高时平衡向蓝色醌式移动。一定时间后达到一个新的平衡。因此提取液用缓冲液稀释后,必须静置一段时间,等动态平衡处于稳定后,才能测定吸光值。

原花色素的测定方法

方法1:原花色素的测定方法(分光光度法) 本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂(如葡萄子与松树皮提取物)中原花色素含量的测定。 1. 方法提要 原花色素(也称缩合单宁)是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体,属多酚类化合物。与其他酚类化合物不同,黄烷醇(缩合单宁,单体,双体等)在酸性介质中可与香草醛反应,生成在500nm处有最大吸收的有色物质,可通过比色测其含量。 2. 仪器 分光光度计。 3. 试剂 所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 (1)香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。 (2)提纯的原花色素或儿茶素。 (3)4%香草醛甲醇液。 (4)标准使用液:将提纯的原花色素溶于蒸馏水,制成1mg/mL储备液,将储备液稀至浓度为1×10-2mg/mL至1mg/mL的标准使用液。标准使用液应于测定当天配制。 如无提纯的原花色素,可用儿茶素代替,配制方法同上。 4. 测定步骤 (1)样品中原花色素的制备:植物材料经4倍体积丙酮+水(7+3,体积比)或者经60%甲醇提取,40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂,水相再经乙醚洗涤后定容。冰冻干燥的固体原花色素制剂,直接溶于水中(先加少量甲醇助溶)制成原花色素液。 原花色素液于5℃下暗环境中保存备用。 (2)样品测定:用锡箔将试管(14mm×20mm)包裹严,仅留管口用于加样。向管内加入试样0.5mL,再加3.0mL 4%香草醛甲醇液混合,然后加入1.5mL浓盐酸,彻底混匀,室温下显色15min。也可在暗环境下进行以上操作。最后在500nm 处比色。 可按以上操作步骤制得标准曲线(即0.1mg原花色素在500nm处的吸收值为0.55)。 5. 结果计算 计算原花色素量的公式, 原花色素(1×10-3mg)=A500nm÷0.55×100×V 式中V——试样稀释体积(倍数)。 6. 注释 (1)本方法的检测范围为(5~500)×10-3mg/0.5mL样液。精密度与准确度大于1×10-3mg。 (2)反应试管应用清洁剂浸泡24h,彻底洗涤干净。 (3)进行比色时,用水作空白。 (4)500nm处的OD值应控制在3以下。 (5)试样中原花色素含量较高时,应从香草醛存在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值。 (6)显色液应避光放置。

植物原花青素(OPC)含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法

植物原花青素(OPC)含量检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC1350 规格:50T/24S 产品内容: 提取液:60%乙醇,自备,4℃保存。 试剂一:11%盐酸25mL,自备,4℃保存,即7.5mL盐酸溶于17.5mL蒸馏水。 试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存,临用前加25mL提取液溶解。 标准品:粉剂×1支,10mg原花青素。 工作液:临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。 产品说明: 原花色素(Oligomeric Proantho Cyanidins,OPC)是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物,广泛存在于植物的各种器官中,具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用,广泛的应用于医药,食品,化妆品,保健品行业。 在酸性条件下,植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应,产生有色化合物,在500nm处有特征吸收峰,测定500nm光吸收值,可计算植物中原花青素的含量。 自备实验用品及仪器: 天平、常温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水、11%盐酸和60%乙醇。 操作步骤: 一、OPC提取 将样本烘干至恒重,粉碎,过40目筛之后,称取约0.1g,加入1mL提取液,用超声提取法进行提取,超声功率300W,破碎5s,间歇8s,提取,30min,12000rpm,25℃,离心10min,取上清,用提取液定容至1mL,待测。 二、测定操作表

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。 2、将标准品用提取液溶解得到10mg/mL标准液,用提取液梯度稀释为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、 0.078、0.039、0.02、0.01mg/mL的标准溶液。 3、操作表 样本(μL)200200 标准溶液(μL)200 工作液(μL)800800800 H O(μL)800200 2 ,计算?A测定=A测定管-A对照管,?A标混匀,30℃水浴30min,1mL玻璃比色皿,立即测定A 500 准=A标准管-A空白管。空白管只做一管。 三、OPC计算公式 1、标准曲线的绘制 以?A标准为y轴,标准溶液浓度为x轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b。 2、OPC的计算 将?A测定带入方程,得到x(mg/mL) (1)按样本鲜重计算 OPC含量(mg/g鲜重)=x×V提取÷W=x÷W。 (2)按样本蛋白浓度计算 OPC含量(mg/mg prot)=x×V提取÷(Cpr×V提取)=x÷Cpr V提取:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。 注意事项: 1、配制好的试剂二应尽快使用,4℃保存时间不超过一个月。 2、吸光度变化应该控制在0.05~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

红米花青素检测报告-2

“红米提取物”花青素类化合物测试报告2012年8月2号接到云南瑞宝生物科技有限公司邮寄来的红米提取物S-HMT120731、紫甘薯提取物S-ZGT120730A、甘蓝提取物S-GT120730A、萝卜提取物S-LT120730A,其中除红米样品外的其他样品的测试工作仍未完成。 红米样品中已完成花青素的检测任务,具体工作内容及结果如下: 定性:采用制备色谱对样品中花青素进行分离纯化,收集纯化后的样品进行紫外光谱扫描(UV)、飞行时间多级质谱(MS n)检测,并将结果进行了数据解析,推测化合物结构。 定量:采用HPLC技术,外标法定量“红米样品”中三种花青素。 1.研究方法 1.1 定性研究 1.1.1 仪器及试剂 WATERS 2695 高效液相色谱仪,配二极管矩阵检测器。 ESI-IT-TOF 质谱仪(Shimadzu公司,日本)。 岛津UV2550 紫外分光光度计。 甲醇,乙酸等。 1.1.2 样品溶液制备 称取红米样品400mg,用甲醇定容至10mL,配成质量浓度为40mg/mL的储备液,置于4℃冰箱中备用。 1.1.3实验条件 1.1.3.1制备色谱条件 制备色谱系统:色谱柱,C18,250mm×8 mm,粒径:20-40μm;流动相:V (甲醇) /V (水)/V (乙酸) = 40:60:0.5;检测波长:520 nm;进样体积:2.5 mL;进样量:100 mg;柱温:室温。 样品溶液分5次进样,每次2.5mL,收集保留时间为8.2,11.5和12.8min的三个流份。合并5次收集的流份,分别冷冻干燥,得三种花青素浓缩液,该浓缩液用于以下的质谱检测及紫外光谱扫描。 1.1.3.2 质谱条件 电喷雾电离:正离子模式喷雾电压4.5kV。加热模块(BH)温度200℃;曲形脱溶剂管(CDL)温度200℃。碰撞诱导解离(CID)参数: (1)碰撞能量:MS1~MS3,50%。(2)碰撞气比例:MS1~MS3, 50%。(3)碰撞时间:MS1~MS3,30ms。雾化气采用氮气(纯度≥99.5%),流速1.5L/min,检测器电压1.70kV。高纯(纯度≥99.99%)氩气作为CID碰撞气及冷却气。使用2.5mmol/L三氟醋酸钠溶液对正、负离子模式下m/z 100--1000范围的质量数进行校正。 使用自动采集模式,每一级质谱自动选择基峰离子作为下一级质谱的母离子进行碎裂。据分析由LCMS solution 3.41工作站完成。结合分子式预测软件(日本岛津公司)对多级质谱碎片作综合分析,得到化合物的分子式及碎片信息。 1.1.3.3 紫外扫描测试 将三种浓缩液分别配成约1mg/mL的水溶液在UV2550紫外/可见光度计上作1000-190nm全程扫描。花青素特征吸收峰为270-280nm与500-540 nm。 1.2 定量研究 1.2.1 仪器及试剂 WATERS 2695 高效液相色谱仪,配二极管矩阵检测器。 标准品飞燕草素葡萄糖苷,甲醇,乙腈,甲酸等。 1.2.2 溶液制备 样品溶液制备:称取红米样品60mg,用甲醇定容至10mL,配成质量浓度

原花青素的含量测定方法

原花青素含量 思路:主要采用紫外分光光度法测定火棘果提取液中原花青素含量。通过在特定的波长或某一范围的波长下,测定待测物品的吸光度,近而对原花青素进行定量分析。 原花青素(procyanidins,简称PC)是植物中广泛存在的一类属于双黄酮衍生物的天然多化合物,原花青素具有极强的抗氧化特性,一般存在于植物的果实、种子、花和皮中,在葡萄、山楂、花生、银杏、白桦树、松树等植物中的含量都很丰富。在原花青素各种不同聚合体中以二聚体的抗氧化能力最强.原花青素具有多种生物活性,能防治多种疾病,具有高效、低毒、高生物利用率等特点,在植物中的主要作用是保护植物中易被氧化的成分,在人体内的抗氧化和清除自由基的能力是V-E50 倍,并且还具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐射、抗突变及美容等作用. 1.实验原理 朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律,俗称光吸收定律,是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时,溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。 比耳的结论是,当用适当波长的单色光照射一固定液层厚度的均匀溶液时,A与C成正比,其数学表达式为: (此即称为比耳定律,k称为比例系数) 当C采用摩尔浓度mol/L时,吸收定律表达为: (ε称摩尔吸光系数,单位为) 2.材料和仪器 主要试剂:火棘果提取液,原花青素标样,盐酸正丁醇溶液(量取95mL 正丁醇,加入5mL 浓盐酸,混匀)、NH4Fe(SO4)2、95% 乙醇。 主要仪器:UV2100 型紫外分光光度计、恒温水浴锅。 3.实验步骤 a.标准曲线的制备:准确称取原花青素标准样品0.0504g,用95% 乙醇 溶解并定容于100mL 容量瓶中,所得浓度为5.04mg/mL 作标样。吸取标样溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3mL分别于25mL 具塞试管中,加95%乙醇定容为3mL, 然后分别加入0.2mL 2%NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇溶液,盖塞,摇匀,于95℃的水

保健食品中原花青素的测定

保健食品中原花青素的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中原花青素的测定方法。 本方法适用于保健食品中原花青素的含量测定。 本方法最低检出量为3μg,最低检出浓度为3μg/mL。 本方法最佳线性范围:3~150μg/mL。 2 原理 原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色,但经过用热酸处理后,可以生成深红色的花青素离子。本法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 3 试剂 3.1 甲醇分析纯。 3.2 正丁醇分析纯。 3.3 盐酸分析纯。 3.4 硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2·12H2O溶液:用浓度为2mol/L盐酸配成2%(w/v)的溶液。 3.5 原花青素标准品葡萄籽提取物,纯度95%。 4 仪器 4.1 分光光度计 4.2 回流装置 5 分析步骤 5.1 试样的制备 5.1.1 片剂取20片试样,研磨成粉状。 5.1.2 胶囊挤出20粒胶囊内容物,研磨或搅拌均匀,如内容物含油,应将内容物尽可能挤出。 5.1.3 口服液摇匀后取样。 5.2 提取 5.2.1 粉状试样称取50—100mg试样置于50mL容量瓶中,加入30mL甲醇,超声处理20min,放冷至室温后,加甲醇至刻度,摇匀,离心或放置至澄清后取上清液备用。 5.2.2 含油试样称取50mg试样置于小烧杯中,用20mL甲醇分数次搅拌,将原花青素洗入50mL容量瓶中,直至甲醇提取液无色,加甲醇至刻度,摇匀。 5.2.3 口服液吸取适量样液(取样量不超过1mL)置于50mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。 5.3 测定 5.3.1 标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10mL甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各取1mL测定。与试样测定方法相同。 5.3.2 试样测定将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后,取出6mL置于具塞锥瓶中,再加入0.2mL硫酸铁铵溶液和1mL试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,在加热完毕15min后,于546nm波长处测吸光度,由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在1小时内稳定。 6 分析结果表述

花青素检测方法 - 行规(2014.9 29)

西安隆泽生物工程有限责任公司 花青素含量测定方法(行标) 编号: 起草人/日期:审核人/日期: 批准人/日期:版本号:编写依据:CP2005USP29EP5修订号:颁布日期:实施日期: 操作程序注意事项一、仪器与试剂 紫外一可见光分光光度计。 甲醇(AR) 36%浓盐酸(AR) 2%盐酸-甲醇溶液:36%HCl(浓盐酸)5ml加85ml甲醇。 对照样品(花青素含量25%) 二、样品溶液制备 准确称取样品约20mg(W1),置50mL容量瓶中,加入约40mL2% 盐酸-甲醇溶液,在超声水浴中(20℃左右)振荡溶解20min,放置 10min至室温后,用2%盐酸-甲醇溶液定容,再吸取5mL用2%盐酸 -甲醇溶液稀释至100mL过滤,取过滤液作为供试样品溶液,准备测 定。 三、对照样品溶液制备 准确称取对照样品约20mg(W2),其他处理同样品溶液制备. 四、测定 用1㎝比色皿,以2%盐酸-甲醇溶液做空白,在540nm处测定 供试样品溶液的吸光度(A1)、对照样品溶液的吸光度(A2)。 计算公式如下(以飞燕草素计): A1×W2 含量(%)=x K A2×W1

西安隆泽生物工程有限责任公司式中:A1——样品吸光度 W1——样品称样量(g) A2——对照样品吸光度 W2——对照样品称样量(g) K——对照样品纯度 注意:样品溶液吸光度应保持在0.3~0.7之间。否则,调整样品稀释倍数。 五、误差范围 以绝对偏差判定。绝对偏差=测量值—平均值 1、同一时间平行样测定结果绝对偏差为±0.2%。 2、不同时间、不同人员平行样测定结果绝对偏差为±0.2%。

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原花青素检测方法注意细则

原花青素(20150518) 1、原理 原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色,但经过用热酸处理后,可以生成深红色的花青素离子。本方法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 2、试剂 2.1 甲醇分析纯 2.2 正丁醇分析纯 2.3 盐酸分析纯 2.4 硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2?12H2O溶液:用浓度2mmol/l盐酸配成2%(w/v)的溶液。(1.67ml盐酸,加水至10ml) 2.5 原花青素标准品葡萄籽提取物,纯度95% 2.6 正丁醇盐酸混合液:正丁醇:盐酸=95:5(v:v) 3、仪器 3.1 分光光度计 4、分析步骤4.1试样的制备 4.1.1 片剂取20片试样,研磨成粉状。 4.1.2 胶囊挤出20粒胶囊内容物,研磨或搅拌均匀,如内容物含油,应将内容物尽可能挤出。 4.1.3 口服液摇匀后取样。 4.2 提取 4.2.1 粉状试样称取70mg试样置于50ml容量瓶中,加入30ml甲醇,超声处理30min,放冷至室温后,加甲醇至刻度,摇匀,静置30min,取上清液过滤备用。 4.2.2 含油试样称取50mg试样置于小烧杯中,用20ml甲醇分数次搅拌,将原花青素洗入50ml容量瓶中,直至甲醇提取液无色,加甲醇至刻度,摇匀。 5.2.3 口服液吸取适量试样(取样量不超过1ml)置于50ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。 4.3 测定 4.3.1 标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.3、0.5、1.0、1.5ml(用2ml刻度吸管量取)置于10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各取1ml 测定。与试样测定方法相同。 4.3.2 试样测定取1ml试样溶液于10mL比色管中,加入6ml正丁醇盐酸混合液,再加入0.2ml 硫酸铁铵溶液,混匀,用封口膜封紧比色管口,置沸水浴精确加热40min后(氺浴锅调至100度,将装有比色管的烧杯放入氺浴锅中),立即置冰水中冷却3—5min后,取出放置约15min使供试液至室温,于546nm波长处测吸光度,由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在1小时内稳定。 5、分析结果表述 试样中原花青素测定结果按(1)式计算 5.1 计算: M1 ×V2×1000×100 X(g/100g) = ____________________________ _ m× 1000× 1000 式中:X—试样中原花青素的百分含量,g/100g;

原花青素的测定

原花青素的分光光度测定法 本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂(如葡萄子鱼松树皮提取物)中原花青素含量的测定。 1.方法提要 原花青素(也称缩合单宁)是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体,属多酚类化合物。与其他酚类化合物不同,黄烷醇(缩合单宁、单体、双体)在酸性介质中可与香草醛反应,生成在500nm处有最大吸收的有色物质,可通过比色测其含量。 2.仪器 分光光度计。 3.试剂 所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 (1)香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。 (2)提纯的原花青素或儿茶素。 (3)4%香草醛甲醇液。 (4)标准使用液:将提纯的原花青素溶于蒸馏水,制成1mg/ml储备液,将储备液稀释至终浓度为1.0×10-2mg/ml至1mg/ml的标准使用液。标准使用液应于测定当天配制。 如无提取纯的原花青素,可用儿茶素代替,配制方法同上。 4.测定步骤 (1)样品中原花青素液的制备:植物材料经4倍体积丙酮+水(7+3,体积比)或者经60%甲醇提取,40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂,水相再经乙醚洗涤后定容。 冰冻干燥的固体原花青素制剂,直接溶于水中(先加少量甲醇助溶),制成原花青素液。 原花青素液于5℃下暗环境中保存备用。 (2)样品的测定:用锡箔将试管(14m m×120mm)包裹严,仅留管口用于加样。向管内加入试样0.5ml,再加3.0ml4%香草醛甲醇液混合,然后加入1.5ml浓盐酸,彻底混匀,室温下显色15min,也可在暗环境下进行以上操作。最后在500nm处比色。 可按以上操作步骤制得标准曲线(0.1mg原花青素在500nm处的吸收值为0.55)。 5.结果计算 计算原花青素量的公式: 原花青素(1×10-3mg)=A500nm÷0.55×100×V

保健食品中原花青素的测定

1原花青素的测定(来源于《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)) 1.1 范围 本方法规定了保健食品中原花青素的测定方法。 本方法适用于保健食品中原花青素的含量测定。 本方法最低检出量为3μg,最低检出浓度为3μg/mL。 本方法最佳线性范围:3-150μg/mL。 1.2 原理:原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色,但经过用热酸处理后,可以生成深红色的花青素离子。本法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 1.3 试剂 1.3.1甲醇:分析纯。 1.3.2正丁醇:分析纯。 1.3.3盐酸:分析纯。 1.3.4硫酸铁铵:NH 4Fe(SO 4 ) 2 ·12H 2 0溶液:用浓度为2mol/L盐酸配成2%(w/v)的 溶液。 1.3.5原花青素标准品:葡萄籽提取物,纯度95%。 1.4仪器 1.4.1分光光度计。 1.4.2回流装置 1.5 分析步骤 1.5.1试样的制备 1.5.1.1片剂:取20片试样,研磨成粉状。 1.5.1.2胶囊:挤出20粒胶囊内容物,研磨或搅拌均匀,如内容物含油,应将内容物尽可能挤出。 1.5.1.3口服液:摇匀后取样。 1.5.2 提取 1.5. 2.1粉状试样:称取50-100mg试样,置于50mL容量瓶中,加入30mL甲醇,超声处理20min,放冷至室温后,加甲醇至刻度,摇匀,离心或放置至澄清后取上清液备用。

1.5. 2.2含油试样:称取50mg试样,置于小烧杯中,用20mL甲醇分数次搅拌,将原花青素洗入50mL容量瓶中,直至甲醇提取液无色,加甲醇至刻度,摇匀。 1.5. 2.3口服液:吸取适量样液(取样量不超过1mL),置于50m容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。 1.5.3测定 1.5.3.1标准曲线:称取原花青素标准品10.0mg溶于10mL甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL,置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各取1mL测定。与试样测定方法相同。 1.5.3.2试样测定:将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后,取出6mL置于具塞锥瓶中,再加入0.2mL硫酸铁铵溶液和ImL试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热4Omin后,立即置冰水中冷却,在加热完毕15min后,于546m波长处测吸光度,由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在1小时内稳定。 1.6分析结果表述:试样中原花青素测定结果按(1)式计算 1.6.1 计算: ×v ×1000 m 1 X(%)= --------------- ×100 (1) m ×1000 ×1000 式中 X—试样中原花青素的百分含量,g/100g; —反应混合物中原花青素的量,μg; m 1 v—待测样液的总体积,mL; m—试样的质量,mg。 1.6.2结果表示:计算结果保留三位有效数字。 1.7技术参数 1.7.1相对标准偏差:<10% 1.7.2回收率:84.6-94.4%。

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