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2008抗体生产纯化技术

抗体纯化的方法有哪些

抗体纯化的方法有哪些？抗体制备出来之后，需要进一步纯化得到纯的多抗或单抗，既有利于保存也有利于排除杂蛋白对结果的影响。常规用于纯化的材料是腹水和细胞培养上清，而通常经过免疫制备的硫酸铵沉淀法：基本原理：高浓度的硫酸铵通过与球蛋白竞争水分子破坏蛋白表明的水化膜，降低球蛋白的溶解性，是分离免疫球蛋白的常用方法，而且不同的免疫球蛋白适宜的硫酸铵浓度也稍有差别，一般用来分离抗体的硫酸铵饱和度在33~50%。适用于：鼠抗所有亚类、其他种属抗体、任何种属的IgM、IgG、IgA 基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.加入饱和硫酸铵至终浓度45%，静置沉淀蛋白； 3.沉淀蛋白用最小体积PBS或硼酸盐缓冲液溶解，用PBS或硼酸盐缓冲液透析除盐； 4.过聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱，PBS或硼酸盐（含0.02%叠氮钠）缓冲液洗脱； 5.电泳检测分子量大小，分光光度法测定抗体浓度； 6.抗体保存浓度在0.1-30 mg/mL适宜，-20℃保存不超过一个月，避免反复冻融。亲和层析法基本原理：基因工程改造的protein A和protein G能特异性结合哺乳动物IgG的Fc区段，将protein A和protein G结合到柱料上，通过亲和层析的方式，可将IgG及其亚类与片段纯化出来。成员介绍：protein A分离自Staphylococcus aureus的细胞壁，分子量42 kDa，由spa 基因编码，具有五个同型的免疫球蛋白结合结构域，每个结构域由三个α螺旋构成。 protein A的B结构域

protein A的各个结构域 protein A可结合多数免疫球蛋白的Fc段（尤其是人的IgG1、IgG2、IgG4，豚鼠，猕猴，鼠类IgG2a、兔）以及人VH3家族的Fab段。基因工程改造的protein A通常使用大肠杆菌作为表达宿主，表达产物仍含有五个Fc结合结构域。对其结构上的改造主要是为了增加与多孔性材料的偶联性能，也有的改造protein A含有四个或六个同型Fc结合结构域，另外结构域数目较少的protein A能得到更好的抗体纯化效果。 protein G分离自G Streptococcus的细胞壁，分子量65 kDa，由spg基因编码，可结合抗体的Fc段、Fab段以及血清中的白蛋白。基因工程改造的protein G去掉了与白蛋白的结合位点仅仅保留Fc结合结构域，其结合力较protein A更强。 protein G的B结构域 protein G的各个结构域还有一种protein A/G蛋白，是基因工程改造产物，是将protein A的4个Fc结合结构域与protein G的2个Fc结合结构域融合表达得到的。protein A/G结合了二者的特性，能结合人和鼠的IgG所有亚型，不结合鼠的IgA、IgM。 ①proteinA亲和层析适用于：人（IgG3除外）、兔、豚鼠、猪的抗体；基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.调节pH到8.0：腹水以10倍体积pH8.0 PBS稀释、培养上清用pH8.0 PBS透析或强氧化钠调节； 3.过proteinA琼脂糖凝胶柱，pH8.0 PBS洗杂； 4.柠檬酸缓冲液洗脱抗体（小鼠IgG1用pH6.5，IgG2a用pH4.5，IgG2b和IgG3用pH3.0），并注意收集管内需加入Tris缓冲液中和滴下的抗体溶液； 5.用PBS透析；

抗体ProteinA纯化方法

抗体ProteinA纯化一．P roteinA柱子的制备 1.配制溶液；结合／洗涤缓冲液：NaCl，0.5M ；Na2HPO4，20mM ；PH8.0。配制500ml的方法：称取NaCl 4.383g，Na2HPO43.5814g溶解于450ml的双蒸水中。调节PH为8.0,补加双蒸水至总体积500ml。 2. 制备空柱子（1）先打开用过的PD-10上盖，拿掉上面的盖膜。盖上盖子，摇晃，倒去里面的填料，用PBS清洗3次。（2）用胶带固定好PD-10空柱子，要求垂直放置。（3）在PD-10空柱子里加入2ml的Binding Wash buffer.结合缓冲液。（4）ProteinA填料混匀，（10ml包装一小瓶）。（5）加入5ml的ProteinA到柱子中。（6）（7）（8）二．纯化步骤 1.样品准备；将兔血清与结合缓冲液1：1混合，过滤（防止堵塞柱子）。 2.平衡柱子：用5-10倍体积的结合缓冲液过Protein A柱。 3.上样：将准备好的血清样品上样，根据柱子的结合能力考虑上样量的体积。 4.洗脱杂蛋白：用结合缓冲液冲洗柱子，直至结合液中不含蛋白。 5.收集抗体：用洗脱液过柱，同时收集漏出液（约3-4ml/管），直至漏出液中不含蛋白。测定各收集管中的蛋白含量，合并蛋白管。（注意：收集管中需事先加入约150ul的1M PH9.0 Tris-HCl缓冲液，防止抗体在过酸的环境下失活） 6.柱子再生：用5-10倍体积的再生液再生柱子。 7.PBS透析收集的抗体。三．试剂的制备 1. 结合缓冲液1000ml 500ml 甘氨酸112.6g 56.3g 氯化钠175.2g 87.6g 氢氧化钠调PH至9.0 2. 洗脱缓冲液500ml

2010安全生产技术题101

第一章机械电气安全技术一、单项选择题 1.齿轮传动机构可设置在（）。 A.裸露的地方 B.工人不常到的地方 C.易于操作的地方 D.全封闭的地方 2.不能用于容易发生燃烧或爆炸场所的是（）传动机械。 A.齿轮啮合 B.皮带 C.链条 D.联轴器 3.皮带防护罩与皮带的距离不得小于（）。 A.2m B.50mm C.15cm D.3cm 4.紧急停车开关的形状应区别于一般开关，颜色为（）色。 A.红 B.黑 C.白 D.蓝 5.操作限制开关是（）的相关装置。 A.本质安全 B.失效安全 C.定位安全 D.布置安全 6.设计者应该保证当机器发生故障时不出危险，这是（）的体现。 A.本质安全 B.失效安全 C.定位安全 D.布置安全 7.（）是指机械的设计者，在设计阶段采取措施来消除机械危险的一种机械安全方法。 A.本质安全 B.失效安全 C.定位安全 D.布置安全 8.机械安全设计是指在机械设计阶段，从零件材料到零部件的合理形状和相对位置，限制操纵力、运动件的质量和速度到减少噪声和振动，采用（）技术与动力源，应用零部件间的强糊机械作用原理，履行安全人机工程学原则等多项措施，通过选用适当的设计结构，尽可能避免或减小危险。 A.本质安全 B.失效安全 C.定位安全 D.布置安全

9.（）安全装置是一种阻止身体的任何部分靠近危险区域的设施。 A.隔离 B.跳闸 C.自动 D.控制 10.（）安全装置可能起到的保护作用在很大程度上有赖于操作者的使用和对安全装置正确的调节以及合理的维护。 A.控制 B.自动调节 C.可调 D.双手控制 11.设置固定的栅栏是（）安全装置。 A.控制 B.自动 C.联锁 D.隔离 12.仅限于在低速运动的机器上采用的是（）装置。 A.联锁安全 B.自动安全 C.跳闸安全 D.可调安全 13.在设计（）装置时，必须使其在发生任何故障时，都不使人员暴露在危险之中。 A.联锁安全 B.控制安全 C.自动安全 D.可调安全 14.“只有当安全装置关合时，机器才能运转；而只有当机器的危险部件停止运动时，安全装置才能开启。”这是（）安全装置的原理。 A.固定 B.联锁 C.隔离 D.可调 15.（）装置的机制是把暴露在危险中的人体从危险区域中移开。 A.固定安全 B.联锁安全 C.自动安全 D.跳闸安全 16.“登梯子对机器进行维修”应该做到（）。 A.本质安全 B.失效安全 C.定位安全 D.布置安全 17.煤气站应具有（）电源供电。 A.单相

抗体分离纯化技术的研究进展

生物技术通报ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＢＵＬＬＥＴＩＮ ·技术与方法· ２００８年第３期收稿日期：２００７－１１－１９基金项目：内蒙古自治区自然科学基金重大项目（编号２００４０８０２０４０２）作者简介：侯越（１９８２－），男，硕士研究生，研究方向：动物学生物技术通讯作者：吴应积，教授引言抗体是一种特殊的蛋白质分子，被作为体外诊断的试剂、治疗疾病的药物、免疫亲和层析的配基等，在生命科学研究、生物技术及医学领域中有着广泛的应用。尤其是抗体作为各种免疫分析的核心试剂，对免疫分析结果的灵敏度、特异性起着至关重要的作用。在对一些与生命体功能关系密切的新基因产物的研究中，是否拥有相应的抗体以检测与鉴定新基因的产物蛋白质，是整个研究工作能否深入开展的关键。抗体技术是免疫学领域中的一个重要方面，广泛应用于生命科学和医学各学科。从第一代抗体———血清多克隆抗体开始，它就在疾病治疗和体外诊断中发挥了很大的作用。由于免疫动物制备血清抗体的免疫原性和非均质性，给抗体研究和应用造成了困难［１］，激发了人们对抗体进行深入研究的热情。１９７５年Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ通过杂交瘤技术制备出针对一种抗原决定簇的抗体即第二代抗体—— —单克隆抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ，ＭｃＡｂ），是均质的异源抗体［２］。单克隆抗体具有高度均质性、高度特异性，促进了对各种传染病和恶性肿瘤诊断的准确性，是目前应用最广泛的抗体。单克隆抗体的出现，引起了生物学理论的革命，生物学技术的广泛应用提供了重要的工具［３］。２０世纪８０年代采用基因工程的手段研制抗体，并对抗体的基因进行改造和重组等，制备出第三代抗体——— 基因工程抗体（ｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙＧＥＡｂ）。基因工程抗体主要对现有的鼠源性单克隆抗体进行人工改造，并抗体分离纯化技术的研究进展侯越罗奋华吴应积（内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室，呼和浩特０１００２１）摘要：制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础，抗体质量的高低，将直接影响试验的成败。抗体的制备有两个途径：一是一般通用的方法，以纯化的抗原免疫动物，获得多克隆抗体；二是应用杂交瘤技术制备单克隆抗体。但不论用何种技术制备的抗体都需要进行纯化。重要的是根据抗体的性质和来源选择一个合适的分离纯化方法。对当前的纯化方法进行了一个简要的综述。关键词：抗体分离纯化ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＳｅｐａｒａｔｉｏｎＨｏｕＹｕｅＬｕｏＦｅｎｈｕａＷｕＹｉｎｇｊｉ（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＣｈｉｎａｆｏｒＭａｍｍａｌｉａｎＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ，Ｈｏｈｈｏｔ０１００２１）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｐｏｓｓｅｓｓｅｄｈｉｇｈｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄａｆｆｉｎｉｔｙｉｓｔｈｅｂａｓｅｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅｓｕｃｃｅｓｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｄｅｐｅｎｄｓｏｎｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｐｒｅｐａｒｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｈａｓｔｗｏｗａｙｓ：ｏｎｅｉｓｃｏｍｍｏｎｌｙｃｕｒｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄ，ｔｏｂｅｕｓｅｄｔｏｏｂｔａｉｎｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｖｉａｉｍｍｕｎｉｚｉｎｇａｎｉｍａｌｓｗｉｔｈｐｕｒｉｆｉｅｄａｎｔｉｇｅｎ；ｔｈｅｏｔｈｅｒｉｓｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｕｓｉｎｇｈｙｂｒｉｄｏｍａｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｗｈａｔｅｖｅｒｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｕｓｅｄ，ｔｈｅｐｒｅｐａｒｅｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｎｅｅｄｓｔｏｂｅｐｕｒｉｆｉｅｄ．Ｉｔｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｔｏｃｈｏｏｓｅｔｈｅｐｒｏｐｅｒｐｒｏｃｅｄｕｒｅｆｏｒｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎａｎｔｉｂｏｄｙ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｓｏｕｒｃｅｏｆｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｉｓｆｏｃｕｓｅｄｏｎｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＩｓｏｌａｔｉｏｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ

单克隆抗体的制备及应用

单克隆抗体的制备及应用单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇。单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。 1 单克隆抗体的优点与局限性：单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。 (2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。 2 单克隆抗体的制备：单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与免疫、细胞融合、选择杂交瘤细胞及抗体检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。抗原准备抗原，是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性。很多物质都可以成为抗原，抗原的具体分类可以参见抗原，在进行单克隆抗体制备过程中，很多物质都可以成为抗原，在常规的科研实验中，科研者经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug 重组蛋白、偶联多肽、偶联小分子等作为抗原产生特异性的单克隆抗体。动物的选择与免疫

XXXX年安全生产技术模拟题

2010年安全工程师考试《安全生产技术》练习题（1） 2010-7-15 8:40 【大中小】【打印】【我要纠错】 1．刮削工件边缘时，近边缘落刀要（），远边缘起刀要（）。 A．快、慢 B．准、慢 C．准、及时 D．慢、快 2．錾削快到尽头时，必须（）錾去余下部分。 A．轻轻 B．用力 C．掉头 D．从侧面 3．下列关于使用锉刀的说法中哪一个不正确？（） A．锉刀柄必须安装牢固 B．工件必须夹持紧固 C．锉屑要用软质毛刷清除 D．锉削时要在锉刀上涂油 4．钻孔时，当钻尖快要钻穿工件时，应（）钻尖下降速度 A．减慢 B．加快 C．保持不变 D．先慢后快 5．使用手锯切锯条时，锯条要（）钳口。 A．靠近 B．远离 C．离开一定距离 D．垂直 6．铸钢砂箱箱壁、箱带开裂可用下列哪种方法修复？（） A．钻孔夹以钢板 B．冷敲 C．热敲 D．烧焊 7．下列哪项是铸工操作时不需要的？（） A．保持操作场所干燥 B．操作前对工具进行预热 C．正面看着冒口操作 D．阅读操作说明

8．锻造生产中使用煤气加热炉时，若停炉应先关（），再关（），最后关（）。 A．总阀、煤气阀、空气阀 B．煤气阀、总阀、空气阀 C．空气阀、煤气阀、总阀 D．煤气阀、空气阀、总阀 9．下列操作哪一个不能防止焊割作业中的回火现象？（） A．焊（割）炬不要过分接近熔融金属 B．焊（割）嘴不能过热 C．乙炔不能开得太大 D．如乙炔瓶内部已燃烧，要用自来水降温灭火 10．装过煤油、汽油或油脂的容器焊接时，应先用热（）水冲洗，再用蒸汽吹洗，确信干净后方可焊接。 A．酸 B．碱 C．盐 D．清 1-5：CCDAA 6-10：DCDCB 11．根据建筑设计防火规范对库房建筑层数的规定，为了减少火灾的损失及有利于灭火抢救，甲类贮存的库房建筑层数最多允许（）层。 A．一 B．二 C．三 D．四 12．化工厂区内火灾危险较高、散发烟尘、水雾和噪声的生产部分应布置在全年（），厂前、机、电、仪修和总变配电部分应位于全年最小风向频率下风方向，厂前区宜面向城镇和工厂居住区一侧。 A．最大风向频率上风方向 B．最小风向频率上风方向 C．最大风向频率下风方向 D．最小风向频率下风方向 13．下列哪个措施不能消除导致火灾爆炸的物质条件？（） A．生产中尽量少用可燃物 B．使空气中可燃物浓度保持在安全限度以下 C．加强爆炸危险物的管理 D．采取必要的疏散措施 14．按照____分类，人机系统可分为开环人机系统的闭环人机系统。 A．人机系统组合方式 B．有无反馈控制作用 C．人机系统自动化程度

抗体纯化

一、抗体纯化部分 1、腹水/血清的亚型测定完成后，IgG亚型的腹水/血清使用Protein G 抗体纯化柱纯化；IgM 亚型的腹水/血清则使用饱和硫酸铵沉淀法沉淀。 1.1 Protein G 抗体纯化步骤：（1）新柱子先用DDW 5ml过柱；（2）10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱；（3）抗体过柱，过程中要求缓慢过柱，以求抗体蛋白更好的结合在结合位点上；（4）继续10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱；（5）5倍柱体积甘氨酸-盐酸缓冲液（pH 2.7）洗脱结合位点上的抗体，并加入Tris-HCI(pH 9.0)中和甘氨酸，使pH保持为适合抗体保存的中性；（6）10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱；（7）5倍柱体积20%乙醇溶液过柱，于4℃条件下保存纯化小柱；（8）将洗脱的抗体用聚乙二醇浓缩并透析，以彻底去除不相干离子。其中所用试剂配方： DDW：超纯水 Binding Buffer（100ml）：A液，0.2M磷酸氢二钠61ml B液，0.2M磷酸二氢钠39ml 磷酸氢二钠4.37g 磷酸二氢钠1.22g 甘氨酸-盐酸缓冲液：0.1M甘氨酸溶液加浓盐酸调pH 2.7 Tris-HCL缓冲液：1M Tris溶液加浓盐酸调pH 9.0 1.2 饱和硫酸铵沉淀法步骤：（1）配制饱和硫酸铵溶液，再用氨水调节pH至8.5 （2）沉淀：a、腹水/血清离心去除细胞碎片，保留上清液并测定体积； b、边搅拌边逐滴滴入等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀使蛋白充分沉淀； c、上述蛋白质溶液经过离心弃上清取沉淀，并用PBS溶液（pH 7.0）溶解； d、继续向上一步蛋白溶液中滴入1/2体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀使蛋白充分沉淀； e、继续离心沉淀弃上清去沉淀，用PBS溶液（pH 7.0）溶解；（3）透析：每隔3-6小时换一次透析液，以彻底去除硫酸铵。其中所用试剂配方： PBS缓冲液（1L pH 7.0）：氯化钾0.2g 磷酸二氢钾0.2g 磷酸氢二钠3.35g 氯化钠8g

多克隆抗体的制备,纯化及检测

实验九多克隆抗体的制备，纯化及免疫电泳【实验目的】 ⒈ 加深对抗体基本知识的了解。 ⒉ 了解多克隆抗体的制备及纯化的基本方法。 ⒊ 了解免疫电泳的基本过程和实验依据。一、多克隆抗体的制备【实验原理】当将抗原注射入实验动物体内时，一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合，受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。将抗原导入敏感动物体内后，可刺激网状内皮细胞系统，尤其是淋巴结和脾脏中的淋巴细胞大量增殖。如图所示，实验动物对初次免疫和二次免疫的应答有明显的不同。通常初次免疫应答往往比较弱，尤其是针对于易代谢，可溶性的抗原。首次注射后大约7天，在血清中可以观察到抗体但抗体的浓度维持在一个较低的水平，在大约10天左右抗体的滴度会达到最大值。但同种抗原注射而产生的二次免疫应答的结果明显不同，和初次免疫应答相比抗体的合成速度明显增加并且保留时间也长。免疫应答的动力学结果取决于抗原和免疫动物的种类，但初次和二次免疫应答之间的关系是免疫应答的一个重要特点。三次或以后的抗原注射所产生的应答和二次应答结果相似：抗体的滴度明显增加并且血清中抗体的种类和性质发生了改变，这种改变被称为免疫应答的成熟，具有重要的实际意义。通常在抗原注射4-6周后会产生具有高亲和力的抗体。【实验材料】 ⒈ 实验动物初次抗原注射后的周次 0 1 2 3 4 5 6 7 初次免疫二次免疫血清中抗体的水平

成年兔。 ⒉实验器材特制兔盒；刀片；25G针头；1ml注射器；20 ml 血液收集管；药铲；离心机以及塑料离心管；加样器及加样管；烧杯。 ⒊实验试剂 ⑴抗原；乙醇；20mM 磷酸缓冲溶液pH7.2。 ⑵福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂：【实验方法】 ⒈抗原的制备抗原制备的主要目的在于在免疫动物体内产生最强、最适当的抗体。由于纯化的抗原适合产生抗体，因此在注射前通常采用一些经典的方法，比如柱层析、分级萃取、亚细胞分离等进行抗原的分离和纯化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中为可见的单一带，抗原从凝胶中的抽提可作为纯化的最后一个步骤。 ⒉预放血轻轻的将兔子放在特制兔盒中，处于放松状态的兔子采血会较容易。按压兔子耳根部直至血管突出,然后将针头插入耳部血管的中上部，观察到进针后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。结束收集后，退出针头并按压伤处以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C 恒温箱中放置30分钟以防止激活补体系统，再将试管在4°C放置过夜使血液凝固。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液在4°C保存。 ⒊注射抗原 ⑴准备两只成年兔，将100μg抗原/兔溶入1ml磷酸缓冲溶液中待用。在1ml福氏不完全佐剂中加入分枝杆菌制成完全佐剂，并加入1ml抗原溶液，剧烈震荡使之充分乳化，用3ml注射器抽取该乳化液，接上25G针头，排除注射器中的气泡。从笼中取出兔子放在平坦处，在4个不同的部位进行皮下注射，两处在后背，两处在大腿处。抚去注射处的兔毛并用乙醇消毒暴露的皮肤。捏出皮肤，将针头以相对皮肤15度的角度进针，进针深度为1cm-2cm，小心不要刺入肌肉中，在4个不同部位分别各注射约500μl抗原溶液。注射结束后，将针在注射处放置几秒钟后再轻轻拔出，并用乙醇在注射处消毒。在4个部位重复上述操作。用相同方法免疫另一只家兔。 ⑵每4-6周注射抗原，并在注射后的7天-10天按照步骤2收集血液。将收集的血液与注射前收集的血液进行比较，检查是否有抗体产生。待确定产生抗体后可大量收集血液，但每只兔子收集血液不能多于40ml以防止休克。 ⒋收集血液 ⑴将家兔轻轻放入固定架上,二甲苯涂于耳部血管的上中部，用刀片倾斜45°在该处切出0.23cm-0.3cm的切口使血液能自由的流出。用消毒后的管收集滴出的血液，若在结束之前出现凝固可用温水轻擦切口处，再继续收集。收集适量血液后可用消毒后的纱布轻擦患处，轻按患处10秒-20秒确定血流停止后方可结束。

2008年安全工程师安全生产事故案例分析考试真题及答案 (1)

2008年安全工程师安全生产事故案例分析考试真题及答案一、某储运公司仓储区占地300m×300m，共有8个库房，原用于存放一般货物。3年前，该储运公司未经任何技术改造和审批，擅自将1号、4号和6号库房改存危险化学品。 2008年3月14日12时18分，仓储区4号库房内首先发生爆炸，12分钟后，6号库房也发生了爆炸，爆炸引发了火灾，火势越来越大，之后相继发生了几次小规模爆炸。消防队到达现场后，发现消火栓不出水，消防蓄水池没水，随后在1公里外找到取水点，并立即展开灭火抢险救援行动。事故发生前，1号库房存放双氧水5t;4号库房存放硫化钠10t、过硫酸铵40t、高锰酸钾10t、硝酸铵130t、洗衣粉50t;6号库房存放硫磺15、甲苯4t、甲酸乙脂10t。事故导致15人死亡、36人重伤、近万人疏散，烧损、炸毁建筑物39000m2和大量化学物品等，直接经济损失1.2亿元。根据以上场景，回答下列问题（共14分，每题2分，1～3题为单选题，4～7题为多选题）： 1.依据《危险货物品名表》（GB12268—1990），下列物质中，属于氧化剂的是（）。 A.硫化钠 B.高锰酸钾 C.甲酸乙脂 D.硫磺 E.甲苯 2.依据《重大危险源辨识标准》（GB18218—2000），关于该仓储区重大危险源辨识结果，下列说法中，正确的是（）。 A.1号库房构成重大危险源 B.4号库房构成重大危险源 C.6号库房构成重大危险源 D.仓储区构成重大危险源 E.仓储区不构成重大危险源 3.本案中，第一次爆炸最可能的直接原因是（）。

A.氧化剂与还原剂混存发生反应 B.库房之间安全距离不够 C.硝酸铵存储量达130t D.高锰酸钾存储量达10t E.库房管理混乱 4.甲苯挥发蒸气爆炸的基本要素包括（）。 A.甲苯蒸气与空气混合浓度达到爆炸极限 B.环境相对湿度超过50% C.开放空间 D.点火源 E.受限空间 5.根据相关法律，法规和规定，下列物质中，目前在我国属于危险化学品的有（）。 A.高锰酸钾 B.硝酸铵 C.甲苯 D.洗衣粉 E.甲酸乙酯 6.该仓储区应采取的安全技术措施包括（）。 A.安装可燃气体监测报警装置 B.仓库内使用防爆电器 C.安全巡检措施 D.防爆、隔爆、泄爆措施

2010年安全技术真题及答案

2010年度全国注册安全工程师执业资格考试试卷安全生产技术必做部分一、单项选择题（共60题，每题l分。每题的备选项中，只有1个最符合题意） 1．某机械厂一次桥式起重机检修中，一名检修工不慎触及带电的起重机滑触线，强烈电击，坠落地面，经抢救无效身亡。从主要危险和有害因素的角度分析，这起死亡事故属于（）类型的事故。 A．车辆伤害 B．触电 C．高处坠落 D．其他伤害【答案】B 2．煤气站房必须有通风系统，而且进气口、排气口的位置必须正确。下列有关进气口与排气口位置的说法中，符合规定的是（）。 A．进气口和排气口都在站房的下方 B．进气口在站房的下方，排气口在站房的上方 C．进气口在站房的上方，排气口在站房的下方 D．进气口和排气口都在站房的上方【答案】B 3．为防止机械伤害，在无法通过设计实现本质安全的情况下，应使用安全装置。下列有关安全装置设计要求的说法中，错误的是（）。 A．安全装置有足够的强度、刚度、稳定性和耐久性 B．安全装置不影响机器的可靠性 C．将安全装置设置在操作者视线之外 D．安全装置不带来其他危险【答案】C 4．机器的安全装置包括固定安全防护装置、联锁安全装置、控制安全装置、自动安全装置、

隔离安全装置等。其中，利用固定的栅栏阻止身体的任何部分接近危险区域的装置属于（）。 A．隔离安全装置 B．联锁安全装置 C．自动安全装置 D．固定安全防护装置【答案】A 5．砂轮机是机械厂最常用的机器设备之一，砂轮质脆易碎、转速高，容易发生机械伤害。下列有关砂轮机现场检查的记录中，符合安全要求的是（）。 A．砂轮机无专用砂轮机房，其正面装设有高度1.6m的固定防护挡板 B．砂轮直径为砂轮卡盘直径的4倍 C．砂轮防护罩与主轴水平线的开1=1角为90。 D．砂轮直径140mm，无砂轮托架【答案】D 6．剪板机、曲柄压力机、液压机都是容易发生机械伤害的设备，伤害程度与运动部件速度、加速度有密切关系。下图是曲柄压力机的传动示意图。当滑块在最高位置时，下列有关滑块加速度与速度的说法中，正确的是（）。

抗体纯化大全资料

抗体的纯化第一节硫酸铵沉淀法基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球蛋白从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。试剂及仪器 ·组织培养上清液、血清样品或腹水等 ·硫酸铵（NH4）SO4 ·饱和硫酸铵溶液（SAS） ·蒸馏水 · PBS(含0.2g/L叠氮钠) (见附录一) ·透析袋 ·超速离心机 · pH计 ·磁力搅拌器实验步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。一、配制饱和硫酸铵溶液（SAS）将767g（NH4）2SO4 边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25°C）；其它不同饱和度硫酸铵溶液的配制见表1；

二、沉淀 1、样品（如腹水）20 000′g 离心30 min，除去细胞碎片； 2、保留上清液并测量体积； 3、边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（v/v）； 4、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。三、透析 1、蛋白质溶液10 000′g 离心30 min（4°C）。弃上清保留沉淀； 2、将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L 叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3、透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。应用提示一、先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1、边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v)； 2、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）； 3、3000′g 离心30 min（4°C），保留上清液； 4、上清液再加SAS到0.5:1 (v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨； 5、杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效的；二、为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；三、硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。参考文献 1、Burd, R.S., Raymond, C.S., Ratz, C. A and Dunn, D.L (1993) A rapid procedure for purifying IgM monoclonal antibodies from murine ascites using a DEAE – disk. Hybridoma

多克隆抗体技术

第九章多克隆抗体技术（Polyclone antibodies preparation technique）一、概述（一）多克隆抗体的概念抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B 淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monclone antibody）。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD 等五类抗体。（二）免疫动物供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关。如要获得大量的抗体，多采用大动物；如要是获得直接标记诊断的抗体，则直接采用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体；如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备；一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。由于对免疫应答的个别差异，免疫时应同时选用数只动物进行免疫。抗原是多种多样的，而且千差万别。就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。为了 ? 1 ?

2010安全生产技术题0801

第八章建筑工程施工安全技术一、单项选择题 1.以下不属于建筑施工过程中“五大伤害事故”的是（）。 A.高处坠落 B.机械伤害 C.起重伤害 D.坍塌 2.《建筑法》规定：建筑施工企业在编制施工组织设计时，应当根据建筑工程的特点制定相应的（）。 A.操作规范 B.技术标准 C.规章制度 D.安全技术措施 3.指导全局、统筹规划建筑工程施工活动全过程的组织、技术、经济文件是建筑工程的（）。 A.标准图纸 B.施工组织设计 C.施工图设计 D.施工合同 4.为了保证施工过程中施工人员的安全和健康，施工现场应实行封闭式管理，四周用硬质材料进行围挡封闭，在市区内围挡的高度不得低于（）m。 A.1.2 B.1.5 C.1.8 D.2.0 5.建设部《建设施工安全检查标准》(JGJ59-1999)规定，施工现场的入口处应当设置（） A.二图五牌 B.一图七牌 C.二图七牌 D.一图五牌 6.建筑施工要针对季节的变化制定相应施工措施，主要包括（）。 A.夏季施工和冬季施工 B.春季施工和冬季施工 C.雨季施工和冬季施工 D.春季施工和雨季施工 7.任何一项（）工程在施工前，工程技术人员都应根据施工组织设计的要求，编写有针对性的安全技术交底书，由施工员对班组工人进行交底。 A.分部 B.单位 C.分项 D.分部分项 8.挖掘较潮湿的或散粒的土及挖土深度小于5m的基坑支护方法是（）。 A.斜柱支撑 B.钢构架支护 C.短桩隔断支撑 D.连续式水平支撑

9.基坑挖好后，不能及时进行下一道工序，要预留（）cm厚覆盖土层。 A.5～10 B.10～15 C.15～20 D.15～30 10.土方开挖前应制定专项施工方案。采用多台挖土机同时开挖基坑时，挖土机之间的距离应大于（）m。 A.4 B.6 C.8 D.10 11.以下不属于常用的模板的是（）。 A.定型组合模板 B.墙体大模板 C.滑升模板 D.木质小模板 12.一般模板的组成不包括（）。 A.模板面 B.模板底 C.支撑结构 D.连接配件 13.覆面木胶合板的规格和技术性能应符合的规定：厚度应采用（）mm的板材。 A.10—15 B.11—17 C.12—18 D.13—20 14.复合纤维板应符合的规定：厚度应采用（）mm及以上的板材。 A.10 B.12 C.15 D.18 15.荷载分项系数：永久荷载为（）。 A.1 B.1.2 C.1.4 D.1.5 16.钢模板及其支架的荷载设计值可乘以系数（）予以折减。 A.0.8 B.0.85 C.0.9 D.0.95 17.采用冷弯薄壁型钢，其荷载设计值（）。 A.应折减 B.应增加

抗体纯化常见问题回答

用户园地Q & A 30 鉴于亲和层析技术的发展,抗原抗体之间的特异性相互作用，使得抗体的纯化相对来说比较简单,一步亲和层析即可达到90%以上的纯度, 这为科研和实验室使用的抗体纯化提供很好的解决方案。然而要得到高质量高纯度的抗体，需要我们从样品处理，纯化介质的选择以及纯化方法上悉心考虑，这里我们就这些大家常见的问题来讨论。 1，对于血清、腹水或细胞悬浮物来源的抗体样品，有哪些样品处理的方法？在纯化前，合适的样品处理不仅可以帮助我们得到高纯度高质量的抗体,还有助于保护亲和层析柱，延长使用寿命。对于血清、腹水或细胞悬浮物来源的样品经常含有脂蛋白，酚红，小分子污染物等等。腹水中经常含有高浓度的脂蛋白，这些脂蛋白和脂类物质会堵塞层析柱，最好能在纯化之前去除。方法一是在二价离子存在的情况下，硫酸右旋葡糖酐能够沉淀脂蛋白，沉淀可以通过离心除去；方法二PVP能产生一个pH值依赖的沉淀效应，PVP在pH＝7.0时能够沉淀b-脂蛋白和球蛋白。很多时候，可以考虑进样前用亲和结合缓冲液稀释腹水，不仅保证样品的结合pH，还有利于降低黏度。酚红是一种在实验室细胞培养中的pH指示剂，虽然并不直接的影响纯化，但是酚红可能结合到某些纯化介质上，应该尽可能早的被除去，可以使用脱盐柱除去酚红。对于一些低分子污染物可以使用分级沉淀法去除，如硫酸铵沉淀，羊脂酸沉淀的方法。最后利用脱盐柱来更换缓冲液并除盐，把样品换到合适的缓冲液中（PH和盐浓度），并除去没有用处的小分子。更多详细的方法可以参考《抗体纯化手册》。 2，实验室需要纯化小鼠的IgG1，我是选择ProteinG 还是ProteinA？首先我们要根据不同的种属亚型参考“相对结合强度”表（图1）来获取选择哪种配基的指导，针对小鼠的 IgG1， ProteinA结合相对弱，可以选择ProteinG配基的介质。但由于Protein G结合力较强，因此有时需要pH低于2.0 才能有效洗脱，容易导致某些对酸敏感的抗体聚集沉淀。此时可以考虑结合力相对较弱的protein A填料，结合缓冲液中需要加入0.5~3M 的氯化钠以增加结合能力，目标抗体在pH4.5左右就可以被温和的洗脱。若实验室有AKTA系统，那么Hitrap ProteinG HP是高分辨率方便快捷的首选。若没有AKTA系统，MabTrap抗体纯化试剂盒可以给你带来最大的快捷和便利，试剂盒含有一个Hitrap ProteinG HP1ml的预装柱，结合，洗脱和中和的缓冲液，一个具有接头的注射器、以及经过优化的纯化操作规程。 Ab Spin Trap是预装了100ulProteinGHP填料的离心柱，和标准的小离心机一起使用，仅用20分钟就可以完成一次小规模的抗体纯化。 ProteinG HP MultiTrap96孔板适用于高通量的筛选。 3，面对ProteinA如此多的配基形式，它们有何区别和应用？蛋白A (Protein A) 来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结构域，可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性，通常一步亲和层析就可达到超过95%的纯度。 ProteinA sepharoseCL-4B，是将从金黄色葡萄球菌表达纯化出蛋白A通过CNBr的方法偶联在sepharose CL-4B的介质上，可以纯化体液或细胞培养液中的免疫球蛋白。 nproteinA sepharose4FF，nprteinA即为天然 (Native Protein A)，表示其在生产过程中没有引入任何动物来源的组分。 rproteinA sepharose4FF，重组的蛋白A (rProtein A)，经基因工程改造后含有一个C末端半胱氨酸，可以单一位点定向偶联于琼脂糖骨架上，有效降低空间位阻，增加了与IgG 的结合能力。同时配基在发酵和纯化过程中没有引用人源的IgG，避免了人源IgG的污染风险。 rmpProteinA，多位点附着的技术，保证更低的配体的脱落。一步高度纯化单抗和多抗。 2005年我们推出了新一代的MabSelect ，是第一个使用高流速琼脂糖凝胶 ( High ?ow Agarose) 作为骨架的新型蛋白A层析介质，专为大规模抗体纯化而设计。相比传统抗体纯化常见问题回答

山东大学网络教育2008秋安全工程管理《安全生产技术上》1考试题加答案

《安全生产技术》1 一、单项选择题 1.压力机上常用压塌片作为机械薄弱环节，保护主要受力曲轴免受超载造成的破坏，这种防护装置为D A.隔离保护装置 B.定位安全装置 C.连锁防护装置 D.过载保护装置 2.对复合型钢丝绳的有关描述错误的是B＿。 A.组成复合型钢丝绳的钢丝直径不同 B.复合型钢丝绳为点接触钢丝绳 C.复合型钢丝绳的寿命比普通钢丝绳长 D．复合型钢丝绳可用于起重机的起升机构 3.以下说法正确的是D A．滑轮直径的大小对钢丝绳的寿命没有影响 B．起重机起升机构的滑轮常采用灰铸铁、铸钢 C．起重机起升机构使用滑轮的目的就是为了省力 D．滑轮出现裂纹时，应及时修补后再使用 4.下列关于防止电器火花和雷击的措施说法不正确的是＿D。 A.除本质安全仪表外，生产车间不应装设其他电器设备和线路 B.照明等应采取防爆的型号，其他电器设备应符合防爆的规定 C.雷雨时危险车间应停止工作，人员撤出车间 D.有药车间架设临时线路和使用临时性的电器设施时应通过主管部门审批 5.从民用爆破器材、烟花爆竹生产间清理出来的药尘等应___ A ___。 A.由专人负责按规定方法在指定地点销毁

B.由专人负责按规定方法就近销毁 C.埋人地下 D.倒人水中 6.压力管道的末期检查及寿命评估主要是针对＿C。 A.管道的严密性 B.管道的振动情况 C.管道材料的老化情况 D.管道的磨损情况 7.下列现象中C＿不属于锅炉缺水事故的症状。 A.水位报警器发出低水位警报 B.水位表内看不到水位，表内发白发亮 C.过热蒸汽温度下降 D.锅炉排烟温度上升 8.长时间单调、乏味、紧张的作业，持续的精神压力，对工作不感兴趣、工作中心情不愉快等因素，会促使作业时___ B.___疲劳的发生或加重。 A.肌肉 B.精神 C.神经 D.关节二、多项选择题在每小题列出五个备选项中有二至五个是符合题目要求的，错选、多选、少选或未选均无分。 1.钢丝绳使用安全程度可由＿ABCD等指标进行考核。 A.断丝的性质和数量 B.断丝的局部密集程度 C.断丝的增长率 D.绳端断丝情况 2.金属切削过程中最有可能发生＿BD。 A.中毒 B.触电事故 C.灼烫 D.机械伤害 3.对于有爆炸危险的可燃物，当可燃物的＿AB，则发生爆炸危险性越大。 A.爆炸下限越低 B.爆炸上限越高