体内药物分析总结 药物分析专业专用
首过效应：药物经肠道吸收首次进入肝脏时，有些药物可被肠液或肠道上的肠菌酶破坏，或在肝内受到微粒体混合功能氧化酶代谢，使进入体循环的药量减少。
肠肝循环：药物经胃肠吸收，经胆汁分泌进入小肠或药物经吸收后在肝转化为代谢物，经胆汁分泌排入小肠，在小肠处重吸收的过程。特征为“双吸收峰”。
平衡透析法：将含药物的血浆与透析液放置于半透膜两侧，在一定温度下搅拌使其平衡。半透膜能阻挡血浆蛋白和结合药物的血浆蛋白，而游离药物自由通过半透膜并达平衡。优点：平衡状态下，结果真实可靠缺点：受稀释作用影响，费时
超滤法：利用离心力迫使药物通过半透膜，同时血浆中水分也不断被滤除，使样品管内血浆样品不断浓缩，打破了药物与血浆蛋白结合的动态平衡。优点：设备简单，时间短，收集到足够的超滤液可直接进样缺点：非平衡状态下测定。
液液萃取法：基于被测组分在不混溶的两种溶剂中的分配系数不同而得到分离。
固相萃取：SPE是一种吸附剂萃取，样品通过填充吸附剂的一次性萃取柱，分析物和杂质被保留在柱上，然后分别用选择性溶剂去除杂质，洗脱出分析物，从而达到分离的目的。
萃取方法选择：1较亲脂药物最好用烷基硅胶键合相省时，碱性药物用大孔树脂为佳。 2较亲水且具有酸碱性，可电离，采用离子交换树脂；3较亲水但不能解离，不易萃取，沉淀蛋白后直接进样
柱切换技术：指由阀来改变流动相走向与流动相系统,从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入分析柱的技术。
衍生化技术：在色谱过程中用特殊的化学试剂，借助化学反应给样品化合物接上某个特殊基因，使其转变为相应衍生物之后进行检测的方法。目的：1使极性药物变成非极性易挥发药物，使其具有能被分离的性质。2增加药物的稳定性。3提高对光学异构体的分离能力。
顶空气相色谱法：在封闭恒温系统中气相和凝聚相（液相或固相）存在着分配平衡，因此气相的组成能反应凝聚相的组成，用GC法来分析平衡体系中气体的方法。分为静态顶空气相色谱法和动态顶空气相色谱法。
微透析技术：实质是一种膜分离技术，利用膜透析原理，微量地对细胞液进行流动性连续采样的采样和色谱样品制备技术。
电渗流：在pH>3时，毛细管壁上的硅羟基负离子使毛细管壁内表面带负电，和溶液接触时相应的缓冲液带正电，形成双电层。在高电压作用下，双电层中水合阳离子引起流体整体地朝负极方向移动，该现象叫电渗流。具平面流型。
毛细管电泳免疫分析法(CEIA)：利用抗原抗体复合物与游离的抗原抗体在电泳行为上的差异，将毛细管电泳作为分离分析的手段，分为竞争性CEIA和非竞争性CEIA。
P450酶的生物学特性：1.P450酶是一个多功能的酶系.2.P450酶对底物的结构特异性3.P450酶存在有明显的种属、性别和年龄的差异.4.P450酶具有多型性和多态性.5.P450酶具有可诱导和可抑制性.
肝微粒体体外温孵法：用制备的肝微粒体辅以氧化还原辅酶（NADPH再生系统），在模拟生理条件下进行代谢反应，经一段反应时间后，采用HPLC、LC-MS和LC-MS/MS等方法对待测物进行初步分析和鉴定。
一、选择哪一种离子源？
1.电喷雾离子化（ESI）原理：通过电场使雾滴带电，然后通过离子蒸发等机制生成气相离子，再送入MS的过程。将离子由液相转至气相为强吸热过程，能量大于C-C键断裂能。但ESI可在相对低温下，逐步去溶剂化，是最软的质谱离子化方式。三个步骤：静电喷雾；去溶剂；离子蒸发。
2.大气压化学离子化（APCI原理：大气压条件下采用电晕放电使流动相离子化，然后流动相作为气相试剂使样品离子化的技术。离子化可通过质子化或电荷转移，去质子, 电子捕获及形成加合物等方式实现。
3.大气压光离子化（APPI）
ESI：通过喷口与毛细管间高压离子化，适于中、强极性化合物，特别是在溶液中能预先形成离子化合物和可以获得多个质子的大分子，对流动相组成有要求。
APCI：通过电晕针放电离子化，流动相作为化学离子化反应气，适于非极性、中等极性小分子。不适于热不稳定、难于气化的极性和大分子化合物。离子化过程对流动相组成依赖小。
APPI: 通过吸收光子而离子化，适用于有共轭基团的非极性或弱极性物质。介质效应小，对磷酸盐有很好的耐受，较ESI有较小的离子抑制。
二、待测物什么情况下需要采用衍生化, 如何选择合适的衍生化试剂？
优点：1增强离子化效率；2改变分子碎裂类型；3改善分离效果；4优化色谱行为。
1. 小分子非极性化合物：小分子醛、酮类化合物. 对于这类化合物较难质子化。使用最多的衍生化试剂是硝基苯肼类化合物，通过引入易质子化的含氮基团和能促进雾化的疏水芳香基团来提高离子化效率。
2.小分子极性化合物：极性基团虽够有效促进待测物解离, 但是疏水结构特征对于一个待测物在离子源中的有效雾化也极其重要，并且可以使待测物在常用的反相色谱柱上得到适当保留，因此,往往需要通过衍生化的方法引入一些疏水基团以提高待测成分的离子化效率并且增加色谱保留。
a.氨基酸类:同时具有易质子化的基团(氨基)和易去质子化的基团(羧基), 在离子化过程中易发生反荷离子效应进而导致该类化合物的质谱响应极弱, 甚至没有质谱响应。
对策：通过简单的衍生化反应掩蔽羧基或氨基
b.羧酸类：一些结构较小并且极性较大的羧酸，质谱响应和色谱保留行为均不理想。
对策：使用衍生化掩蔽羧基同时引入一些离子化能力较强的基团.
c.嘌呤嘧啶拮抗物：极性很强, 且缺乏合适的离子化官能团。
常用衍生化试剂：丹酰氯重氮甲烷对溴苯甲酰甲基溴（具体例子见笔记）
3.痕量待测物：如激素类药物的检测, 衍生化也可以作为一种提高灵敏度的重要手段。
4. 蛋白质以及多肽：
5. 不稳定化合物：如易氧化化合物
五、如何正确地认识并且科学地评价残留效应？
残留效应(carry-over effect，COE) ：指在高浓度的样品进样分析后, 在进样系统中残留了一定量的待测物, 从而影响了下一次进样时低浓度样品测定结果的准确度。
产生原因：清洗自动进样针的溶剂选择不当、洗针和进样程序设计不合理或者是进样针座吸附了待测物. 对策：1.采用甲醇-水(50:50)组成的洗针液能有效清除进样针上的残留待测物。但对疏水性极强的化合物, 采用更高比例的甲醇能更有效地消除残留效应。2. 在自动进样器中产生残留的主要部位是进样阀,通过改变进样模式消除。评价方法：观察连续分析高浓度样品后空白溶剂或空白样品的待测物位处有无信号。若无响应信号，则判为无残留效应。若有信号且大于10%LLOQ的响应，则判断为有残留效应干扰，需改进方法；若小于10%LLOQ的响应，则判断为残留效应可忽略。
六、如何正确处理高通量分析和专属性之间的关系？
高通量LC-MS 分析有时会导致假阳性结果, 进而降低测定结果的可靠性。
原因1：二相代谢物容易在离子源内发生中性丢失反应形成与母体药物相同的离子, 从而影响对后者的准确定量。对策：调节色谱保留使其在LC中分开后再进入MS。
原因2：质谱的专属性有时还受到其自身分辨力的限制, 尤其单个离子或是伪离子对检测时。对策：在选择检测离子/离子对时, 不仅要考虑检测对象在质谱中的绝对响应, 还应注意选择受生物基质干扰较少的监测离子或离子对,如一些小分子的中性丢失反应(如脱水反应)就不适合作为监测对象
二、何为LC-MS的介质效应？建立生物样品中药物的LC-MS测定方法时如何进行介质效应的考察？其评判标准是什么？
介质效应（ME）是指样品基质中其他成分对待测物响应值的影响。
对策：a优化改进样品提取制备方法；b优化色谱条件；调节色谱保留；改善峰形；梯度洗脱；加入添加剂c减少进样体积；d根据被测药物离子化机理选择合适的质谱接口，并优化质谱分析条件；抗基质干扰能力依次为: APPI＞APCI＞ESI；e选择合适的内标
考察：标准曲线法：本法需配制2组不同的标准曲线，每组包括5条标准曲线。第1组用流动相配制，制成含系列浓度待测组分的标准曲线。第2组标准曲线是将5种不同来源的空白生物样品(如：血浆)经提取后分别加入与第1组相同系列浓度的待测组分后制得。通过比较两组标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。分别求得第1组和第2组标准曲线斜率的平均值：S1和S2。
ME＝│S1－S2│/S1×100％若ME≤15％，则表示无介质效应或介质效应可以忽略。
ME＝S2/ S1×100%，若85%≤ME≤115％，则表示无介质效应或可以忽略。
⑴特异性：考察来自6个不同个体的空白生物基质，必须证明所测定物质是受试药品的原形药物或特定活性代谢物，生物样品所含内源性物质或其他代谢物及替他药物不得干扰对样品的测定。
⑵标准曲线和定量范围：配制标准样品应使用与待测样品相同生物介质，至少用6 个浓度建立标准曲线。定量范围要能覆盖全部待测的生物样品浓度范围，不得用定量范围外推的方法求算未知样品的浓度。标
准曲线各浓度点的实测值与标示值之间的偏差可接受范围一般规定为最低浓度点的偏差在±20%以内，其余浓度点的偏差在±15%以内。
⑶定量下限：标准曲线上的最低浓度点，表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度。LLOQ 应能满足测定3～5 个消除半衰期时样品中的药物浓度或能检测出Cmax 的1／10～1／20 时的药物浓度。其准确度应在真实浓度的80%～120%范围内，相对标准差(RSD)应小于20%。
⑷精密度与准确度：一般要求选择高、中、低3 个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度选择在LLOQ 的3 倍以内，高浓度接近于标准曲线的上限，中间选一个浓度。批内精密度，每一浓度至少制备并测定5 个样品。批间精密度应至少在不同天连续制备并测定3 个合格的分析批，至少45 个样品。通常用质控样品的批内和批间RSD 来考察方法的精密度。一般RSD 应小于15％，在LLOQ 附近RSD 应小于20％。准确度一般应85％～115％范围内，在LLOQ 附近应在80％～120％范围内。
⑸样品稳定性：根据具体情况，对含药生物样品在室温（1~10h）、反复冻融（至少三次，每次时间至少24h,12h,12h）或长期冰冻条件下进行稳定性考察。还应考察储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析物的稳定性。
⑹提取回收率：应考察高、中、低3 个浓度的提取回收率，其结果应当精密和可重现。
⑺质控样品：高、中、低3种浓度，双质控，每个分析批至少插5％质控样品（但至少6个质控样品）。质控样品测定结果的偏差一般应小于15%，低浓度点偏差一般应小于20%，最多允许1/3 的质控样品结果超过上述限度，但不能出现在同一浓度中。
五、固相萃取法中，C18填料比较常用，请说明适用于C18填料SPE法测定的药物类型，并简述使用C18填料SPE法测定时的一般操作步骤以及各步的目的或注意事项。
1使用甲醇润湿小柱，活化填料。目的：使固相表面易于和被分析物发生分子间相互作用，并可除去填料中可能存在的杂质。注意：甲醇含量大于8%，否则将导致回收率降低。
2用水或适当的缓冲液冲洗小柱，转移过多的甲醇。目的：以便样品适当的与固相表面发生作用。注意：但清洗不宜过分，否则会使甲醇含量过低，从而导致湿润度不足，回收率降低。
3加样，使样品经过经过小柱，弃去废液。
4用水或适当的缓冲液冲洗小柱，转移样品中的内源性杂质和其他相关杂质。
5选择适当的洗脱溶剂洗脱被分析物，收集洗脱液，挥干溶剂以备后用或直接进行在线分析。
注意事项:1体液样品可直接上柱，体积0.1~2ml，流速1~2ml/min。2萃取碱性药物时，常加酸，有机胺或氨水，醋酸铵或离子对试剂，以减少硅醇基的吸附作用3苯基，腈基柱有一定极性，可用于正相模式。
六、简述常见生物样品的种类、特点及其前处理方式？
(1) 血液：分为血浆/血清或全血。测定血浆或血清中的药物浓度能较好反映体内药物浓度变化；若专门测定平均分布于血细胞内、外的药物浓度，则用全血；血浆采集应加入抗凝剂，离心,取上清液；血清静置，挑走血饼，离心，去上清液。处理方法有沉淀蛋白法、液液萃取法、固相萃取法。
(2) 尿样：用于药物剂量回收研究、药物尿清除率、生物利用度研究。易收集，但易受生理情况情况影响。方法：酸解或酶解可使药物从缀合物中游离出来。
(3) 唾液：易收集，采集后应立即测定除去泡沫部分的体积，放置后易分层，离心，取上清液。
(4) 组织：为药物的吸收、分布、代谢、排泄等体内过程提供重要信息。组织处理方法：匀浆化法、蛋白沉淀法，酸（碱）水解、酶水解。
(5) 头发：取样方便，无伤害，检样的掺伪可能性低，可测微量元素。头发采集后需洗涤，处理方法有提取法、有机破坏法。
(6) 其他：乳汁、精液。
七、请描述各种生物样品前处理技术的操作方式，适用范围，需要注意的问题及优缺点。
有机破坏法：一般包括湿法破坏、干法破坏及氧瓶燃烧法三种方法，适合于人发样品的破坏。破坏能力强，反应比较激烈。
直接沉淀法：将一定量生物样品加蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清夜进样。当样品中待测物浓度较高，所用方法的特异性和灵敏度达到检测要求时可以考虑用直接沉淀法来处理样品。注意沉淀剂体积、沉淀剂的选择及对药物稳定性的影响（氧化、对酸不稳定）。直接沉淀法可使结合型的药物释放出来，但缺点在于容易发生乳化现象。
液液萃取法：取一定量生物样品加有机提取溶剂，涡旋，离心，取有机层，氮气吹干，流动相溶样进样。多数药物是亲脂性的，在适当的有机溶剂中的溶解度大于在水相中的溶解度，而血样或尿样中的含有的大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质。用液液萃取可除去大部分杂质，从大量的样品中提取药物经浓集后用于分析。注意⑴水相pH值，⑵提取溶剂选择，⑶有机相和水相的体积。优点在于它的选择性，这依赖于有机溶剂的选择；药物能与多数内源性物质分离。缺点在于乳化现象的产生；有机溶剂易挥散、有毒性、对环保不利及不能自动化也是该法的不足之处。
固相萃取法：将不同填料作为固定相装入微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到“吸附”或“分配”或“离子交换”或其它亲和力作用时，药物或杂质被保留在固定相上，用适当溶剂洗除杂质，再用适当溶剂洗脱药物。注意⑴流速，⑵装样量，⑶缓冲液pH及用量。SPE中萃取剂与样品有很大的接触面，因此可以在短时间内达到有效的萃取，可以采用动态的柱操作，可自动化；可以避免乳化的形成；柱子可弃，无污染。缺点在于价格昂贵，技术要求高，批与批之间有差异，柱子易阻塞，影响分离效果。
膜萃取：将膜看成“两相间的选择性屏障”，在膜两侧施加一驱动力时，药物就会从一侧（供给相）迁移到另一相（接受相）。供给相的流速对萃取效率有很大的影响。它不仅可以实现样品分离，由于膜材料相当多，还具有很高的选择性，而且易于实现自动化。
八、试述各种色谱-光谱联用技术在药物代谢物结构鉴定（确证）方面各有何特点？
(1) HPLC-DAD
(2) GC/MS：灵敏度高，分析快，鉴别能力强，可同时完成待测组分的分离和鉴定，适于多组分混合物中未知组分的定性定量分析。对挥发性成分可直接分析；对不挥发性热不稳定的物质，可做成适宜的挥发性衍生物再分析。
(3) LC/MS：可获得复杂混合体中单一成分的质谱图，有利于药物、药物代谢物和内源性化合物的分离和鉴定。药物代谢反应一般在母体药物结构上进行部分结构修饰，据此可对代谢物进行识别，结合其他碎片特征，对结构作合理推断。
(4) LC/NMR：将分离和结构鉴定连为一体，能提供最大量的分子结构信息。在体内药物分析中的应用主要是药物代谢产物的结构与构型研究、药物在体液中的毒性与药代动力学研究以及微生物代谢物研究。
九、试述衍生化技术在体内药物分析中的应用特点？
答：(1) 衍生化GC：极性大、挥发性低，对热不稳定的药物。目的：使极性药物变成非极性的、易于挥发的药物，使具有被分离的性质；增加药物的稳定性；提高对光学异构体的分离能力。
(2) 衍生化HPLC：对检测器不够敏感或化学不稳定的药物。目的：提高对样品检测的选择性和灵敏度、改善样品混合物的分离度、适合于进一步做结构鉴定。
(3) 衍生化LC-MS: a提高响应值，通过将易检测基团加到不检测的被测物上，增加离子化效率提高检测器的响应值；b易于结构鉴定，通过衍生化改变碰撞离子的裂解形式，得到更明确或不同的结构信息十、请简述竞争性毛细管电泳免疫分析方法的原理。
竞争性CEIA原理：第一种：已知数量的标记抗原和有限数量的抗体与待测物混合：
Ag + Ag* + Ab(有限) = Ab-Ag + Ab-Ag* + Ag + Ag* [划线部分为两个峰，大小呈反比]
第二种：已知数量的标记抗体和有限数量的抗原与待测物混合：
Ab + Ag* + Ag(有限) = Ab-Ag + Ab-Ag* + Ab + Ab* [划线部分为两个峰，大小呈反比]
当待测物为抗原（Ag）时，抗体（Ab）的量是有限制的，将待测物，标记抗原（有限量）和抗体（有限量）混合，标记抗原和待测物就会竞争与抗体结合，反应为：Ag+Ag（标记）+Ab=Ab-Ag+Ab-Ag（标记）+Ag+Ag（标记）。检测时混合物产生两个峰，分别是Ag（标记），和Ab-Ag（标记），样品中Ag越多则游离的Ag（标记）越多，形成的Ab-Ag（标记）越少。采用一定的方法将游离抗原和抗原-
抗体复合物分离，测定Ab-Ag（标记）强度，即可知道待测的浓度
十一、在体内药物分析中，常用内标法来实现定量，若现有一药物待测，需要寻找一个内标，请简述其内标的选择原则。
理想的内标化合物应与待测组分在样品制备、色谱分离和质谱检测的全过程中具有相似的行为并且对待测组分的提取、测定无任何干扰。在样品制备过程中，内标应能追踪待测组分，以校正待测物在移液、吹干、复溶等过程中的损失。在色谱分离和质谱检测过程中，内标应与待测组分的色谱和质谱行为相似，以校正待测组分由于基质效应影响所引起的响应信号的改变。
选择原则：A 与待测物仅差一个元素 B 与待测物为同系物 C 与待测物结构相似，化学性质相似
十二、比较LC-MS仪中的ESI和APCI两种离子化方式的工作原理及适用范围。
APCI工作原理是在大气压条件下采用电晕放电方式使流动相离子化，然后流动相作为化学离子化反应气使样品离子化。样品分子的离子化通过质子化或电荷转移来实现，还可以通过去质子，电子捕获及形成加和物的方式来实现。
ESI工作原理是样品溶液通过毛细管导入大气压电离源内，在气化气的帮助下和源内毛细管终端与反电极之间强电场的作用下，样品溶液形成带电荷的雾，即电喷雾。这些雾滴在热氮气流下蒸发，半径逐渐缩小，雾滴表面的电场不断增强到某一临界点时发生离子的场发射，或溶剂完全蒸发。生成的样品气相离子经质量分析器分析，测得它们的质荷比。
APCI适合于挥发性的热稳定性药物，适合非极性、中等极性的药物，适合于小分子药物的分析。
ESI适合于热不稳定性药物，适合于极性、中等极性的药物，可用于大分子药物、蛋白质、多肽的分子。
十三、试述现在液质联用仪中主要有哪几种扫描方式，特点如何，在体内药分中有何应用？
四极杆质量分析器扫描方式：
全扫描（full scan，SCAN）在给定的时间内不断地对设定荷质比（m/z）范围内所有离子进行扫描。应用：未知化合物的定性分析，测定未知混合物中各组分的分子量和质谱图。进行SIM之前，用SCAN 确定扫描的目标离子及其最佳电离参数。
选择离子监测（selected ion monitoring，SIM）在给定的时间内选择性的扫描某一个或几个选定荷质比的离子，得到的不是化合物全谱。
应用：定量分析用于目标化合物的检测和在数量众多的样品中快速帅选目标化合物。优点：扫描更低的检测限，更快的速度，更好的灵敏度，更短的分析时间，适于定量。缺点：不适于定性。专属性差，可能是假阳性。故检测离子的选择很重要。
三级四极杆质量分析器扫描方式：1 SCAN和SIM 2产物离子扫描3前体离子扫描4中性丢失扫描（NLS）5选择反应检测（SRM）
应用：定量分析，优点：比单级杆的SIM方式有更高的专属性（经历了两次选择）和抗干扰能力，信噪比更高，更低的检测限。
离子阱质量分析器扫描方式：全扫描，扫描离子监测，多级质谱扫描（获得结构信息的手段之一）
十五、不稳定药物的样品前处理
A易被酶水解的药物，如蛋白质多肽类：蛋白变性、酶抑制，如重金属离子、EDTA等
B易氧化的药物：加入抗氧剂，如VC+EDTA、l-半胱氨酸；2-巯基乙醇；
C易水解的药物：选择适当的溶剂；调节PH
D对光不稳定的药物，避光操作
E将不稳定药物转化为稳定药物：1)衍生化2)更换溶剂：如酯键在甲醇和水中容易水解，可换成乙腈。3）加酯酶抑制剂：如避免被血清酯酶酶解。4）沉淀蛋白：血清酯酶也是蛋白
首过效应：药物经肠道吸收首次进入肝脏时，有些药物可被肠液或肠道上的肠菌酶破坏，或在肝内受到微粒体混合功能氧化酶代谢，使进入体循环的药量减少。
肠肝循环：药物经胃肠吸收，经胆汁分泌进入小肠或药物经吸收后在肝转化为代谢物，经胆汁分泌排入小肠，在小肠处重吸收的过程。特征为“双吸收峰”。
平衡透析法：将含药物的血浆与透析液放置于半透膜两侧，在一定温度下搅拌使其平衡。半透膜能阻挡血浆蛋白和结合药物的血浆蛋白，而游离药物自由通过半透膜并达平衡。优点：平衡状态下，结果真实可靠缺点：受稀释作用影响，费时
超滤法：利用离心力迫使药物通过半透膜，同时血浆中水分也不断被滤除，使样品管内血浆样品不断浓缩，打破了药物与血浆蛋白结合的动态平衡。优点：设备简单，时间短，收集到足够的超滤液可直接进样缺点：非平衡状态下测定。
液液萃取法：基于被测组分在不混溶的两种溶剂中的分配系数不同而得到分离。
固相萃取：SPE是一种吸附剂萃取，样品通过填充吸附剂的一次性萃取柱，分析物和杂质被保留在柱上，然后分别用选择性溶剂去除杂质，洗脱出分析物，从而达到分离的目的。
萃取方法选择：1较亲脂药物最好用烷基硅胶键合相省时，碱性药物用大孔树脂为佳。 2较亲水且具有酸碱性，可电离，采用离子交换树脂；3较亲水但不能解离，不易萃取，沉淀蛋白后直接进样
柱切换技术：指由阀来改变流动相走向与流动相系统,从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入分析柱
的技术。
衍生化技术：在色谱过程中用特殊的化学试剂，借助化学反应给样品化合物接上某个特殊基因，使其转变为相应衍生物之后进行检测的方法。目的：1使极性药物变成非极性易挥发药物，使其具有能被分离的性质。2增加药物的稳定性。3提高对光学异构体的分离能力。
顶空气相色谱法：在封闭恒温系统中气相和凝聚相（液相或固相）存在着分配平衡，因此气相的组成能反应凝聚相的组成，用GC法来分析平衡体系中气体的方法。分为静态顶空气相色谱法和动态顶空气相色谱法。
微透析技术：实质是一种膜分离技术，利用膜透析原理，微量地对细胞液进行流动性连续采样的采样和色谱样
品制备技术。
电渗流：在pH>3时，毛细管壁上的硅羟基负离子使毛细管壁内表面带负电，和溶液接触时相应的缓冲液带正电，形成双电层。在高电压作用下，双电层中水合阳离子引起流体整体地朝负极方向移动，该现象叫电渗流。具平面流型。
毛细管电泳免疫分析法(CEIA)：利用抗原抗体复合物与游离的抗原抗体在电泳行为上的差异，将毛细管电泳作为分离分析的手段，分为竞争性CEIA和非竞争性CEIA。P450酶的生物学特性：1.P450酶是一个多功能的酶系.2.P450酶对底物的结构特异性3.P450酶存在有明显的种属、性别和年龄的差异.4.P450酶具有多型性和多态性.5.P450酶具有可诱导和可抑制性.
肝微粒体体外温孵法：用制备的肝微粒体辅以氧化还原辅酶（NADPH再生系统），在模拟生理条件下进行代谢反应，经一段反应时间后，采用HPLC、LC-MS和LC-MS/MS等方法对待测物进行初步分析和鉴定。
一、选择哪一种离子源？
1.电喷雾离子化（ESI）原理：通过电场使雾滴带电，然后通过离子蒸发等机制生成气相离子，再送入MS的过程。将离子由液相转至气相为强吸热过程，能量大于C-C键断裂能。但ESI可在相对低温下，逐步去溶剂化，是最软的质谱离子化方式。三个步骤：静电喷雾；去溶剂；离子蒸发。
2.大气压化学离子化（APCI原理：大气压条件下采用电晕放电使流动相离子化，然后流动相作为气相试剂使样品离子化的技术。离子化可通过质子化或电荷转移，去质子, 电子捕获及形成加合物等方式实现。
3.大气压光离子化（APPI）
ESI：通过喷口与毛细管间高压离子化，适于中、强极性化合物，特别是在溶液中能预先形成离子化合物和可以获得多个质子的大分子，对流动相组成有要求。APCI：通过电晕针放电离子化，流动相作为化学离子化反应气，适于非极性、中等极性小分子。不适于热不稳定、难于气化的极性和大分子化合物。离子化过程对流动相组成依赖小。
APPI: 通过吸收光子而离子化，适用于有共轭基团的非极性或弱极性物质。介质效应小，对磷酸盐有很好的耐受，较ESI有较小的离子抑制。
二、待测物什么情况下需要采用衍生化, 如何选择合适的衍生化试剂？
优点：1增强离子化效率；2改变分子碎裂类型；3改善分离效果；4优化色谱行为。
1. 小分子非极性化合物：小分子醛、酮类化合物. 对于这类化合物较难质子化。使用最多的衍生化试剂是硝基苯肼类化合物，通过引入易质子化的含氮基团和能促进雾化的疏水芳香基团来提高离子化效率。
2.小分子极性化合物：极性基团虽够有效促进待测物解离, 但是疏水结构特征对于一个待测物在离子源中的
有效雾化也极其重要，并且可以使待测物在常用的反相色谱柱上得到适当保留，因此,往往需要通过衍生化的方法引入一些疏水基团以提高待测成分的离子化效率
并且增加色谱保留。
a.氨基酸类:同时具有易质子化的基团(氨基)和易去质
子化的基团(羧基), 在离子化过程中易发生反荷离子
效应进而导致该类化合物的质谱响应极弱, 甚至没有
质谱响应。
对策：通过简单的衍生化反应掩蔽羧基或氨基
b.羧酸类：一些结构较小并且极性较大的羧酸，质谱响应和色谱保留行为均不理想。
对策：使用衍生化掩蔽羧基同时引入一些离子化能力较强的基团.
c.嘌呤嘧啶拮抗物：极性很强, 且缺乏合适的离子化官能团。
常用衍生化试剂：丹酰氯重氮甲烷对溴苯甲酰甲基溴（具体例子见笔记）
3.痕量待测物：如激素类药物的检测, 衍生化也可以作为一种提高灵敏度的重要手段。
4. 蛋白质以及多肽：
5. 不稳定化合物：如易氧化化合物
五、如何正确地认识并且科学地评价残留效应？
残留效应(carry-over effect，COE) ：指在高浓度的样品进样分析后, 在进样系统中残留了一定量的待测物, 从而影响了下一次进样时低浓度样品测定结果的
准确度。
产生原因：清洗自动进样针的溶剂选择不当、洗针和进样程序设计不合理或者是进样针座吸附了待测物.
对策：1.采用甲醇-水(50:50)组成的洗针液能有效清除进样针上的残留待测物。但对疏水性极强的化合物, 采用更高比例的甲醇能更有效地消除残留效应。2. 在自动进样器中产生残留的主要部位是进样阀,通过改变进样模式消除。评价方法：观察连续分析高浓度样品后空白溶剂或空白样品的待测物位处有无信号。若无响应信号，则判为无残留效应。若有信号且大于10%LLOQ的响应，则判断为有残留效应干扰，需改进
方法；若小于10%LLOQ的响应，则判断为残留效应可
忽略。
六、如何正确处理高通量分析和专属性之间的关系？
高通量LC-MS 分析有时会导致假阳性结果, 进而降低
测定结果的可靠性。
原因1：二相代谢物容易在离子源内发生中性丢失反应
形成与母体药物相同的离子, 从而影响对后者的准确
定量。对策：调节色谱保留使其在LC中分开后再进入
MS。
原因2：质谱的专属性有时还受到其自身分辨力的限
制, 尤其单个离子或是伪离子对检测时。对策：在选择
检测离子/离子对时, 不仅要考虑检测对象在质谱中的
绝对响应, 还应注意选择受生物基质干扰较少的监测
离子或离子对,如一些小分子的中性丢失反应(如脱水反
应)就不适合作为监测对象
二、何为LC-MS的介质效应？建立生物样品中药物的
LC-MS测定方法时如何进行介质效应的考察？其评判
标准是什么？
介质效应（ME）是指样品基质中其他成分对待测物响
应值的影响。
对策：a优化改进样品提取制备方法；b优化色谱条件；
调节色谱保留；改善峰形；梯度洗脱；加入添加剂c减
少进样体积；d根据被测药物离子化机理选择合适的质
谱接口，并优化质谱分析条件；抗基质干扰能力依次为:
APPI＞APCI＞ESI；e选择合适的内标
考察：标准曲线法：本法需配制2组不同的标准曲线，
每组包括5条标准曲线。第1组用流动相配制，制成含
系列浓度待测组分的标准曲线。第2组标准曲线是将5
种不同来源的空白生物样品(如：血浆)经提取后分别加
入与第1组相同系列浓度的待测组分后制得。通过比较
两组标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影
响。分别求得第1组和第2组标准曲线斜率的平均值：
S1和S2。
ME＝│S1－S2│/S1×100％若ME≤15％，则表示无
介质效应或介质效应可以忽略。
ME＝S2/ S1×100%，若85%≤ME≤115％，则表示无
介质效应或可以忽略。
三、分析方法验证内容与要求
必
须证明所测定物质是受试药品的原形药物或特定活性
代谢物，生物样品所含内源性物质或其他代谢物及替他
药物不得干扰对样品的测定。
⑵标准曲线和定量范围：配制标准样品应使用与待测样
品相同生物介质，至少用6 个浓度建立标准曲线。定
量范围要能覆盖全部待测的生物样品浓度范围，不得用
定量范围外推的方法求算未知样品的浓度。标准曲线各
浓度点的实测值与标示值之间的偏差可接受范围一般
规定为最低浓度点的偏差在±20%以内，其余浓度点的
偏差在±15%以内。
⑶定量下限：标准曲线上的最低浓度点，表示测定样品
中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度。LLOQ 应
能满足测定3～5 个消除半衰期时样品中的药物浓度或
能检测出Cmax 的1／10～1／20 时的药物浓度。其准
确度应在真实浓度的80%～120%范围内，相对标准差
(RSD)应小于20%。
⑷精密度与准确度：一般要求选择高、中、低3 个浓
度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。低
浓度选择在LLOQ 的3 倍以内，高浓度接近于标准曲
线的上限，中间选一个浓度。批内精密度，每一浓度至
少制备并测定5 个样品。批间精密度应至少在不同天
连续制备并测定3 个合格的分析批，至少45 个样品。
通常用质控样品的批内和批间RSD 来考察方法的精密
度。一般RSD 应小于15％，在LLOQ 附近RSD 应小
于20％。准确度一般应85％～115％范围内，在LLOQ
附近应在80％～120％范围内。
⑸样品稳定性：根据具体情况，对含药生物样品在室温
（1~10h）、反复冻融（至少三次，每次时间至少
24h,12h,12h）或长期冰冻条件下进行稳定性考察。还
应考察储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析
物的稳定性。
⑹提取回收率：应考察高、中、低3 个浓度的提取回
收率，其结果应当精密和可重现。
⑺质控样品：高、中、低3种浓度，双质控，每个分析
批至少插5％质控样品（但至少6个质控样品）。质控
样品测定结果的偏差一般应小于15%，低浓度点偏差
一般应小于20%，最多允许1/3 的质控样品结果超过
上述限度，但不能出现在同一浓度中。
五、固相萃取法中，C18填料比较常用，请说明适用
于C18填料SPE法测定的药物类型，并简述使用C18
填料SPE法测定时的一般操作步骤以及各步的目的或
注意事项。
1使用甲醇润湿小柱，活化填料。目的：使固相表面易
于和被分析物发生分子间相互作用，并可除去填料中可
能存在的杂质。注意：甲醇含量大于8%，否则将导致
回收率降低。
2用水或适当的缓冲液冲洗小柱，转移过多的甲醇。目
的：以便样品适当的与固相表面发生作用。注意：但清
洗不宜过分，否则会使甲醇含量过低，从而导致湿润度
不足，回收率降低。
3加样，使样品经过经过小柱，弃去废液。
4用水或适当的缓冲液冲洗小柱，转移样品中的内源性
杂质和其他相关杂质。
5选择适当的洗脱溶剂洗脱被分析物，收集洗脱液，挥
干溶剂以备后用或直接进行在线分析。
注意事项:1体液样品可直接上柱，体积0.1~2ml，流速
1~2ml/min。2萃取碱性药物时，常加酸，有机胺或氨
水，醋酸铵或离子对试剂，以减少硅醇基的吸附作用3
苯基，腈基柱有一定极性，可用于正相模式。
六、简述常见生物样品的种类、特点及其前处理方式？
(1) 血液：分为血浆/血清或全血。测定血浆或血清中的
药物浓度能较好反映体内药物浓度变化；若专门测定平
均分布于血细胞内、外的药物浓度，则用全血；血浆采
集应加入抗凝剂，离心,取上清液；血清静置，挑走血
饼，离心，去上清液。处理方法有沉淀蛋白法、液液萃
取法、固相萃取法。
(2) 尿样：用于药物剂量回收研究、药物尿清除率、生
物利用度研究。易收集，但易受生理情况情况影响。方
法：酸解或酶解可使药物从缀合物中游离出来。
(3) 唾液：易收集，采集后应立即测定除去泡沫部分的
体积，放置后易分层，离心，取上清液。
(4) 组织：为药物的吸收、分布、代谢、排泄等体内过
程提供重要信息。组织处理方法：匀浆化法、蛋白沉淀
法，酸（碱）水解、酶水解。
(5) 头发：取样方便，无伤害，检样的掺伪可能性低，
可测微量元素。头发采集后需洗涤，处理方法有提取法、
有机破坏法。
(6) 其他：乳汁、精液。
七、请描述各种生物样品前处理技术的操作方式，适用
范围，需要注意的问题及优缺点。
有机破坏法：一般包括湿法破坏、干法破坏及氧瓶燃烧
法三种方法，适合于人发样品的破坏。破坏能力强，反
应比较激烈。
直接沉淀法：将一定量生物样品加蛋白沉淀剂，涡旋，
离心，取上清夜进样。当样品中待测物浓度较高，所用
方法的特异性和灵敏度达到检测要求时可以考虑用直
接沉淀法来处理样品。注意沉淀剂体积、沉淀剂的选择
及对药物稳定性的影响（氧化、对酸不稳定）。直接沉
淀法可使结合型的药物释放出来，但缺点在于容易发生
乳化现象。
液液萃取法：取一定量生物样品加有机提取溶剂，涡旋，
离心，取有机层，氮气吹干，流动相溶样进样。多数药
物是亲脂性的，在适当的有机溶剂中的溶解度大于在水
相中的溶解度，而血样或尿样中的含有的大多数内源性
杂质是强极性的水溶性物质。用液液萃取可除去大部分
杂质，从大量的样品中提取药物经浓集后用于分析。注
意⑴水相pH值，⑵提取溶剂选择，⑶有机相和水相的
体积。优点在于它的选择性，这依赖于有机溶剂的选择；
药物能与多数内源性物质分离。缺点在于乳化现象的产
生；有机溶剂易挥散、有毒性、对环保不利及不能自动
化也是该法的不足之处。
固相萃取法：将不同填料作为固定相装入微型小柱，当
含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到“吸附”或“分
配”或“离子交换”或其它亲和力作用时，药物或杂质被保
留在固定相上，用适当溶剂洗除杂质，再用适当溶剂洗
脱药物。注意⑴流速，⑵装样量，⑶缓冲液pH及用量。
SPE中萃取剂与样品有很大的接触面，因此可以在短时
间内达到有效的萃取，可以采用动态的柱操作，可自动
化；可以避免乳化的形成；柱子可弃，无污染。缺点在
于价格昂贵，技术要求高，批与批之间有差异，柱子易
阻塞，影响分离效果。
膜萃取：将膜看成“两相间的选择性屏障”，在膜两侧施
加一驱动力时，药物就会从一侧（供给相）迁移到另一
相（接受相）。供给相的流速对萃取效率有很大的影响。
它不仅可以实现样品分离，由于膜材料相当多，还具有
很高的选择性，而且易于实现自动化。
八、试述各种色谱-光谱联用技术在药物代谢物结构鉴
定（确证）方面各有何特点？
(1) HPLC-DAD
(2) GC/MS：灵敏度高，分析快，鉴别能力强，可同时
完成待测组分的分离和鉴定，适于多组分混合物中未知
组分的定性定量分析。对挥发性成分可直接分析；对不
挥发性热不稳定的物质，可做成适宜的挥发性衍生物再
分析。
(3) LC/MS：可获得复杂混合体中单一成分的质谱图，
有利于药物、药物代谢物和内源性化合物的分离和鉴
定。药物代谢反应一般在母体药物结构上进行部分结构
修饰，据此可对代谢物进行识别，结合其他碎片特征，
对结构作合理推断。
(4) LC/NMR：将分离和结构鉴定连为一体，能提供最大
量的分子结构信息。在体内药物分析中的应用主要是药
物代谢产物的结构与构型研究、药物在体液中的毒性与
药代动力学研究以及微生物代谢物研究。
九、试述衍生化技术在体内药物分析中的应用特点？
答：(1) 衍生化GC：极性大、挥发性低，对热不稳定
的药物。目的：使极性药物变成非极性的、易于挥发的
药物，使具有被分离的性质；增加药物的稳定性；提高
对光学异构体的分离能力。
(2) 衍生化HPLC：对检测器不够敏感或化学不稳定的
药物。目的：提高对样品检测的选择性和灵敏度、改善
样品混合物的分离度、适合于进一步做结构鉴定。
(3) 衍生化LC-MS: a提高响应值，通过将易检测基团
加到不检测的被测物上，增加离子化效率提高检测器的
响应值；b易于结构鉴定，通过衍生化改变碰撞离子的
裂解形式，得到更明确或不同的结构信息
十、请简述竞争性毛细管电泳免疫分析方法的原理。
竞争性CEIA原理：第一种：已知数量的标记抗原和有
限数量的抗体与待测物混合：
Ag + Ag* + Ab(有限) = Ab-Ag + Ab-Ag* + Ag + Ag*
[划线部分为两个峰，大小呈反比]
第二种：已知数量的标记抗体和有限数量的抗原与待测
物混合：
Ab + Ag* + Ag(有限) = Ab-Ag + Ab-Ag* + Ab + Ab*
[划线部分为两个峰，大小呈反比]
当待测物为抗原（Ag）时，抗体（Ab）的量是有限制
的，将待测物，标记抗原（有限量）和抗体（有限量）
混合，标记抗原和待测物就会竞争与抗体结合，反应为：
Ag+Ag（标记）+Ab=Ab-Ag+Ab-Ag（标记）+Ag+Ag
（标记）。检测时混合物产生两个峰，分别是Ag（标
记），和Ab-Ag（标记），样品中Ag越多则游离的Ag
（标记）越多，形成的Ab-Ag（标记）越少。采用一定
的方法将游离抗原和抗原-抗体复合物分离，测定Ab-Ag
（标记）强度，即可知道待测的浓度
十一、在体内药物分析中，常用内标法来实现定量，若
现有一药物待测，需要寻找一个内标，请简述其内标的
选择原则。
理想的内标化合物应与待测组分在样品制备、色谱分离
和质谱检测的全过程中具有相似的行为并且对待测组
分的提取、测定无任何干扰。在样品制备过程中，内标
应能追踪待测组分，以校正待测物在移液、吹干、复溶
等过程中的损失。在色谱分离和质谱检测过程中，内标
应与待测组分的色谱和质谱行为相似，以校正待测组分
由于基质效应影响所引起的响应信号的改变。
选择原则：A 与待测物仅差一个元素 B 与待测物为同
系物 C 与待测物结构相似，化学性质相似
十二、比较LC-MS仪中的ESI和APCI两种离子化方
式的工作原理及适用范围。
APCI工作原理是在大气压条件下采用电晕放电方式使
流动相离子化，然后流动相作为化学离子化反应气使样
品离子化。样品分子的离子化通过质子化或电荷转移来
实现，还可以通过去质子，电子捕获及形成加和物的方
式来实现。
ESI工作原理是样品溶液通过毛细管导入大气压电离源
内，在气化气的帮助下和源内毛细管终端与反电极之间
强电场的作用下，样品溶液形成带电荷的雾，即电喷雾。
这些雾滴在热氮气流下蒸发，半径逐渐缩小，雾滴表面
的电场不断增强到某一临界点时发生离子的场发射，或
溶剂完全蒸发。生成的样品气相离子经质量分析器分
析，测得它们的质荷比。
APCI适合于挥发性的热稳定性药物，适合非极性、中
等极性的药物，适合于小分子药物的分析。
ESI适合于热不稳定性药物，适合于极性、中等极性的
药物，可用于大分子药物、蛋白质、多肽的分子。
十三、试述现在液质联用仪中主要有哪几种扫描方式，
特点如何，在体内药分中有何应用？
四极杆质量分析器扫描方式：
全扫描（full scan，SCAN）在给定的时间内不断地对
设定荷质比（m/z）范围内所有离子进行扫描。应用：
未知化合物的定性分析，测定未知混合物中各组分的分
子量和质谱图。进行SIM之前，用SCAN确定扫描的目
标离子及其最佳电离参数。
选择离子监测（selected ion monitoring，SIM）在
给定的时间内选择性的扫描某一个或几个选定荷质比
的离子，得到的不是化合物全谱。
应用：定量分析用于目标化合物的检测和在数量众多的
样品中快速帅选目标化合物。优点：扫描更低的检测限，
更快的速度，更好的灵敏度，更短的分析时间，适于定
量。缺点：不适于定性。专属性差，可能是假阳性。故
检测离子的选择很重要。
三级四极杆质量分析器扫描方式：1 SCAN和SIM 2产
物离子扫描3前体离子扫描4中性丢失扫描
（NLS）5选择反应检测（SRM）
应用：定量分析，优点：比单级杆的SIM方式有更高的
专属性（经历了两次选择）和抗干扰能力，信噪比更高，
更低的检测限。
离子阱质量分析器扫描方式：全扫描，扫描离子监测，
多级质谱扫描（获得结构信息的手段之一）
十五、不稳定药物的样品前处理
A易被酶水解的药物，如蛋白质多肽类：蛋白变性、酶
抑制，如重金属离子、EDTA等
B易氧化的药物：加入抗氧剂，如VC+EDTA、l-半胱氨
酸；2-巯基乙醇；
C易水解的药物：选择适当的溶剂；调节PH
D对光不稳定的药物，避光操作
E将不稳定药物转化为稳定药物：
1)衍生化2)更换溶
剂：如酯键在甲醇和水中容易水解，可换成乙腈。3）
加酯酶抑制剂：如避免被血清酯酶酶解。4）沉淀蛋白：
血清酯酶也是蛋白
药物分析总结
各论总结第六章芳酸类非甾体抗炎药物 1.结构特征：苯环、游离羧基 2.代表药物：水杨酸（游离羧基）、阿司匹林（酯键、游离羧基）、双水杨酯（酯键、游离羧基）、二氟尼柳（游离羧基）、甲芬那酸（游离羧基）、双氯芬酸钠（酯键）、布洛芬（游离羧基）、酮洛芬（二苯甲酮、游离羧基）、萘普生（酯键）、吲哚美辛（游离羧基）、吡罗昔康（S、酰胺键）、美洛昔康（S、酰胺键）、尼美舒利、对乙酰氨基酚（酰胺键） 3.鉴别实验： （1）三氯化铁反应： ①．水杨酸反应：水杨酸加三氯化铁试液，生成紫堇色配位化合物 阿司匹林（水解）、双水杨酯（水解）、二氟尼柳 ②．酚羟基反应：对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液，显蓝紫色 吡罗昔康、美洛昔康：烯醇式羟基 （2）缩合反应（酮洛芬） 酮洛芬（二苯甲酮）：乙醇溶解，酸性条件下（硫酸），与二硝基苯肼缩合（加热至沸）生成橙色的偶氮化合物 （3）重氮化偶合反应（对乙酰氨基酚：潜在的芳伯氨基）
对乙酰氨基酚：稀盐酸加热条件下，与亚硝酸钠试液，再加入碱性β萘酚生成红色偶氮化合物 （4）水解反应（阿司匹林） 阿司匹林与碳酸钠加热水解，加入过量稀硫酸酸化，生成白色沉淀，并产生醋酸臭气（5）荧光反应（甲芬那酸） 溶于硫酸后，与重铬酸钾反应显深蓝色，随即变为棕绿色 4.阿司匹林及双水杨酯中游离水杨酸与有关物质的检查 （1）阿司匹林中的有关物质：合成起始原料苯酚及合成中间体与副产物，如游离水杨酸、醋酸苯酯、水杨酸本酯、水杨酰水杨酸、水杨酸酐、乙酰水杨酸本酯、乙酰水杨酸酐 游离水杨酸：阿司匹林为乙酰水杨酸，在生产过程中因乙酰化不完全，或在精制过程中及贮藏期间的水解而产生水杨酸。游离水杨酸对人体有毒性，因其分子中所含的酚羟基在空气中易被逐渐氧化生成一系列有色（如淡黄、红棕甚至深棕色）醌型化合物而使阿司匹林成品变色，因而需加以控制 ①阿司匹林中游离水杨酸的检查（HPLC） 检测方法：稀硫酸铁铵溶液显色反应 注：药典采用1%冰醋酸溶液制备供试品溶液，以防阿司匹林水解，同时采用HPLC检查，C18作填充柱 ②双水杨酯中游离水杨酸的检查（紫外）
药物分析学相关知识点总结
药物分析学相关知识点总结： 国务院药品监督管理部门颁布的《中华人民共和国药典》（缩写Ch.P）和药品标准为国家药品标准。 中国药典(1953 1963 1977 1985 1990 1995 2000 2005 2010 ) USP NF JP Ph.Eur Ph.Int GLP GSP GMP GCP 药典概况： 真伪、纯度、品质的质量要求，三者集中体现药物的有效性和安全性。 中国药典的内容包括凡例、正文、附录、索引。 乙醇未指明溶度时，均系95%（ml/ml）的溶液 液体的滴数，系在20℃时，以1.0ml水进行换算。 称取0.1g系指称取重量在0.06—0.14g，称取2g系指称取重量在1.5---2.5；称取2.0系指称取1.95—2.05；称取2.00系指称取1.995---2.005。精密称定系指精确至千分之一，称定系指精确至百分之一，约/若干系指不超过±10%。除另有规定外，实验时的温度均指25±2℃。实验用水除另有规定外，均系指纯化水；酸碱度检查所用水，均系指新沸并放冷至室温的水。酸碱实验时，如未指明用何种试剂，均系指石蕊试纸。 正文品种按中文笔画编排；附录包括制剂通则、通用检测方法、和指导原则，按分类编码。除另有规定外，水溶液的PH值应以玻璃电极为指示电极、饱和甘汞电极为参比电极的酸度计进行测定。酸度计应定期进行检定。 鉴别是用来判定药物的真伪，而检查和含量测定则可用来判定药物的优劣。 药物的鉴别实验： 性状(一般用于原料药的鉴别项目)：外观、溶解度、物理常数（熔点、比旋度、吸收系数）比旋度：药物通过1dm且每1ml中含旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度为比旋度 吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等的条件下测得的吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。 一般鉴别实验只能证实是某一类药物，而不能证实是某一种药物。 有机氟化物：氧瓶燃烧法进行破坏后，加茜素氟蓝试液、硝酸亚沛在PH4.3溶液中形成蓝紫色络合物。 水杨酸盐：与三氯化铁试液生成配位化合物，在中性时显红色，弱酸性时紫色。加稀盐酸，析出白色沉淀；分离，白色沉淀在醋酸铵试液中溶解。 酒石酸（C4H6O6）盐：中性试品，加氨制硝酸银试液数滴，置水域中加热，银游离并附着在试管内壁成银镜。 芳香第一胺类：加亚硝酸钠和碱性β-奈酚试液数滴（重氮化偶合反应），视供试品不同，颜色从橙黄色到猩红色。 托烷生物碱类：均具有莨菪酸结构，可发生Vitali反应，经发烟硝酸加热处理，转变为三硝基衍生物，再与氢氧化钾醇溶液作用，转变形成醌型产物而显深紫色。后马托品不具莨菪酸结构。 无机金属盐：钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应 钠盐显鲜黄色；钾盐显紫色；钙离子显砖红色。 铵盐：加氢氧化钠试液，加热，即分解产生氨臭。遇湿润的红色石蕊试纸，使之变蓝色，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。 无机酸根： 氯化物：①稀硝酸酸化后加硝酸银试液，生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化沉淀复生成。②供试品少量，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸润湿，缓缓
2012年 初级药师考试复习总结 药物分析
第一节 药物分析理论知识 一、总论 （一）药品质量控制的目的、全面控制药品质量与质量管理的意义（重点、但容易理解） 1.目的：保证用药的安全、合理和有效 2.全面质量控制：药物的研制、生产、供应以及临床使用。 药品质量应从药品的性状、真伪、有效性、均一性、纯度、安全性和有效成分的含量进行综合评价。 3.常见的质量管理文件：《药品非临床研究质量管理规范》（GLP）、《药品生产管理规范》（GMP）、《药品经营质量管理规范》（GSP）、《药品临床试验管理规范》（GCP）。 （二）药品质量标准 1.药品质量标准：是国家对药品质量、规格及检验方法所做的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。 2.国内药品标准：《中国药典》（Ch.P）、药品标准 国外药品标准：美国药典（USP）、美国国家处方集（NF）、英国药典（BP）、日本药局（JP）、欧洲药典（Ph.Eur）和国际药典（Ph.Int）。（掌握各自的简称） 3.《中国药典》 《中国药典》由凡例、正文、附录和索引等四部分组成。 1.凡例，把与正文品种、附录及质量检定有关的共性问题加以规定，避免在全书中重复说明。 主要内容有： （1）检验方法和限度 检验方法：《中国药典》规定的按药典。仲裁以《中国药典》方法为准。 （2）标准品、对照品 标准品：用于含量或效价测定的标准物质，按效价单位（或μg）计。 对照品除另有规定外，均按干燥品（或无水物）进行计算后使用。 （3）精确度 “精密称定”：千分之一； “称定”：百分之一； “精密量取”指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求。
各类药物知识点总结-执业药师考试药物分析,推荐文档
表1执业药师考试药物分析部分所要求的典型药物及其制剂章名典型药物典型制剂 芳酸及其酯类药物的阿司匹林阿司匹林片、阿司匹林肠溶片 分析布洛芬布洛芬片、布洛芬缓释胶囊 丙磺舒 巴比妥类药物的分析苯巴比妥苯巴比妥片 司可巴比妥钠 注射用硫喷妥钠 胺类药物的分析盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因注射液 盐酸利多卡因 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚制剂 肾上腺素盐酸肾上腺素注射液 磺胺类药物的分析磺胺甲熾唑磺胺甲鹊唑片、复方磺胺甲唑片 磺胺嘧啶磺胺嘧啶片 杂环类药物的分析异烟肼异烟肼片 硝苯地平 左氧氟沙星左氧氟沙星片 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪片、盐酸氯丙嗪注射液 地西泮地西泮片、地西泮注射液 氟康唑氟康唑片和胶囊 生物碱类药物的分析盐酸麻黄碱盐酸麻黄碱制剂 硫酸阿托品硫酸阿托品片与注射液 盐酸吗啡盐酸吗啡片 磷酸可待因磷酸可待因片、注射液、糖浆 硫酸奎宁 甾体激素类药物的分醋酸地塞米松醋酸地塞米松片和注射液、 析丙酸睾酮 黄体酮 雌二醇雌二醇缓释贴片
维生素类药物的分析维生素B i维生素B i片和注射液 维生素C维生素C片和注射液 维生素E 维生素K i维生素K i注射液 抗生素类药物的分析青霉素钠和青霉素注射用青霉素钠和注射用青霉素 钾钾 阿莫西林阿莫西林片和胶囊剂 头抱羟氨苄头抱羟氨苄制剂 硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素制剂 盐酸四环素盐酸四环素制剂 阿奇霉素阿奇霉素制剂 糖类药物的分析葡萄糖葡萄糖注射液 右旋糖酐40右旋糖酐40氯化钠注射液
表2典型药物的化学鉴别方法 药物种类药物名称反应名称反应过程反应现象 芳酸及其阿司匹林（1 ）三氯化铁反应pH4~6下，水解后与显紫堇色 酯类 （2）水解反应 三氯化铁反应碱性水解 后加稀硫酸白色水杨酸并有臭 味产生 丙磺舒（1 ）三氯化铁反应中性条件下，与三氯 化铁反应 米黄色沉淀 （2）分解反应碱性条件下加热显硫酸盐反应 巴比妥类丙二酰脲（1 ）银盐反应在碳酸钠溶液中，与二银盐白色沉淀 类 （2 ）铜盐反应银盐溶液反应 在吡啶液中，与铜盐生成紫色沉淀； 反应含硫兀素巴比妥类 呈绿色。 苯巴比妥（1 ）与硫酸-亚硝酸钠与硫酸-亚硝酸钠反应生成橙黄色产 反应物，并随即变成橙 红色 （2）与甲醛-硫酸反应与甲醛试液共热后，试液分层，接界 滴加硫酸面呈玫瑰红色 （3）丙二酰脲类反应 司可巴比（1 ）与碘试液反应与碘试液反应碘试液的棕黄色 妥 （2 ）丙二酰脲类反应 消失 硫喷妥钠（1）与醋酸铅试液反应在氢氧化钠条件下反先产生白色沉 应后加热淀，后变为黑色沉 淀 （2）丙二酰脲类反应其中与铜吡啶反 应显绿色 胺类盐酸普鲁（1 ）重氮化-偶合反应在盐酸溶液中，与亚生成橙红色偶氮 卡因硝酸钠反应，再与碱性 3-萘酚反应 化合物 （2）水解反应与氢氧化钠反应并加产生白色沉淀， 热 八、、 并生成使红色石蕊 试纸变蓝的气体 盐酸利多与硫酸铜试液反应碱性条件下，与硫酸生成蓝紫色配位 卡因铜反应，后加入氯仿化合物，转入氯仿 中显黄色 对乙酰氨（1 ）与三氯化铁反应直接与三氯化铁反应显蓝紫色 基酚 （2 ）重氮化-偶合反应在盐酸溶液中，与亚生成橙红色偶氮 硝酸钠反应，再与碱性 3萘酚反应 化合物
最新药物分析总结
各论总结 第六章芳酸类非甾体抗炎药物 1.结构特征：苯环、游离羧基 2.代表药物：水杨酸（游离羧基）、阿司匹林（酯键、游离羧基）、双水杨酯（酯键、游离羧基）、二氟尼柳（游离羧基）、甲芬那酸（游离羧基）、双氯芬酸钠（酯键）、布洛芬（游离羧基）、酮洛芬（二苯甲酮、游离羧基）、萘普生（酯键）、吲哚美辛（游离羧基）、吡罗昔康（S、酰胺键）、美洛昔康（S、酰胺键）、尼美舒利、对乙酰氨基酚（酰胺键） 3.鉴别实验： （1）三氯化铁反应： ①．水杨酸反应：水杨酸加三氯化铁试液，生成紫堇色配位化合物 阿司匹林（水解）、双水杨酯（水解）、二氟尼柳 ②．酚羟基反应：对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液，显蓝紫色 吡罗昔康、美洛昔康：烯醇式羟基 （2）缩合反应（酮洛芬） 酮洛芬（二苯甲酮）：乙醇溶解，酸性条件下（硫酸），与二硝基苯肼缩合（加热至沸）生成橙色的偶氮化合物 （3）重氮化偶合反应（对乙酰氨基酚：潜在的芳伯氨基） 对乙酰氨基酚：稀盐酸加热条件下，与亚硝酸钠试液，再加入碱性β萘酚生成红色偶氮化合物 （4）水解反应（阿司匹林） 阿司匹林与碳酸钠加热水解，加入过量稀硫酸酸化，生成白色沉淀，并产生醋酸臭气
（5）荧光反应（甲芬那酸） 溶于硫酸后，与重铬酸钾反应显深蓝色，随即变为棕绿色 4.阿司匹林及双水杨酯中游离水杨酸与有关物质的检查 （1）阿司匹林中的有关物质：合成起始原料苯酚及合成中间体与副产物，如游离水杨酸、醋酸苯酯、水杨酸本酯、水杨酰水杨酸、水杨酸酐、乙酰水杨酸本酯、乙酰水杨酸酐 游离水杨酸：阿司匹林为乙酰水杨酸，在生产过程中因乙酰化不完全，或在精制过程中及贮藏期间的水解而产生水杨酸。游离水杨酸对人体有毒性，因其分子中所含的酚羟基在空气中易被逐渐氧化生成一系列有色（如淡黄、红棕甚至深棕色）醌型化合物而使阿司匹林成品变色，因而需加以控制 ①阿司匹林中游离水杨酸的检查（HPLC） 检测方法：稀硫酸铁铵溶液显色反应 注：药典采用1%冰醋酸溶液制备供试品溶液，以防阿司匹林水解，同时采用HPLC 检查，C18作填充柱 ②双水杨酯中游离水杨酸的检查（紫外） 检测方法：铁盐比色法（水杨酸可与三价铁生成有色配位化合物） 注：为避免双水杨酯的水解，以三氯甲烷为溶剂，采用水相萃取比色法 （2）对乙酰氨基酚中对氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查 ①对氨基酚及有关物质 对氨基酚同时含有酚羟基和氨基，具有酸碱两性，在反相色谱条件下易出现峰拖尾和峰分裂的现象，可使用离子对色谱法消除这一现象 检测方法：以四丁基氢氧化铵为离子对试剂，采用离子对反相HPLC法检查 5.含量测定
药物分析总结
药物分析总结Last revision on 21 December 2020
各论总结第六章芳酸类非甾体抗炎药物 1.结构特征：苯环、游离羧基 2.代表药物：水杨酸（游离羧基）、阿司匹林（酯键、游离羧基）、双水杨酯（酯键、游离羧基）、二氟尼柳（游离羧基）、甲芬那酸（游离羧基）、双氯芬酸钠（酯键）、布洛芬（游离羧基）、酮洛芬（二苯甲酮、游离羧基）、萘普生（酯键）、吲哚美辛（游离羧基）、吡罗昔康（S、酰胺键）、美洛昔康（S、酰胺键）、尼美舒利、对乙酰氨基酚（酰胺键） 3.鉴别实验： （1）三氯化铁反应： ①．水杨酸反应：水杨酸加三氯化铁试液，生成紫堇色配位化合物 阿司匹林（水解）、双水杨酯（水解）、二氟尼柳 ②．酚羟基反应：对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液，显蓝紫色 吡罗昔康、美洛昔康：烯醇式羟基 （2）缩合反应（酮洛芬） 酮洛芬（二苯甲酮）：乙醇溶解，酸性条件下（硫酸），与二硝基苯肼缩合（加热至沸）生成橙色的偶氮化合物 （3）重氮化偶合反应（对乙酰氨基酚：潜在的芳伯氨基） 对乙酰氨基酚：稀盐酸加热条件下，与亚硝酸钠试液，再加入碱性β萘酚生成红色偶氮化合物 （4）水解反应（阿司匹林） 阿司匹林与碳酸钠加热水解，加入过量稀硫酸酸化，生成白色沉淀，并产生醋酸臭气
（5）荧光反应（甲芬那酸） 溶于硫酸后，与重铬酸钾反应显深蓝色，随即变为棕绿色 4.阿司匹林及双水杨酯中游离水杨酸与有关物质的检查 （1）阿司匹林中的有关物质：合成起始原料苯酚及合成中间体与副产物，如游离水杨酸、醋酸苯酯、水杨酸本酯、水杨酰水杨酸、水杨酸酐、乙酰水杨酸本酯、乙酰水杨酸酐 游离水杨酸：阿司匹林为乙酰水杨酸，在生产过程中因乙酰化不完全，或在精制过程中及贮藏期间的水解而产生水杨酸。游离水杨酸对人体有毒性，因其分子中所含的酚羟基在空气中易被逐渐氧化生成一系列有色（如淡黄、红棕甚至深棕色）醌型化合物而使阿司匹林成品变色，因而需加以控制 ①阿司匹林中游离水杨酸的检查（HPLC） 检测方法：稀硫酸铁铵溶液显色反应 注：药典采用1%冰醋酸溶液制备供试品溶液，以防阿司匹林水解，同时采用HPLC检查，C18作填充柱 ②双水杨酯中游离水杨酸的检查（紫外） 检测方法：铁盐比色法（水杨酸可与三价铁生成有色配位化合物） 注：为避免双水杨酯的水解，以三氯甲烷为溶剂，采用水相萃取比色法 （2）对乙酰氨基酚中对氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查 ①对氨基酚及有关物质 对氨基酚同时含有酚羟基和氨基，具有酸碱两性，在反相色谱条件下易出现峰拖尾和峰分裂的现象，可使用离子对色谱法消除这一现象 检测方法：以四丁基氢氧化铵为离子对试剂，采用离子对反相HPLC法检查
药物分析重点(仅供借鉴)
1、简述《中国药典》附录收载的内容。 答：药典附录主要收载制剂通则、通用检测方法和指导原则。制剂通则系按照药物的剂型分类，针对剂型特点所规定的基本技术要求。通用检测方法系正文品种进行相同检查项目的检测时所应采用的统一的设备、程序、方法及限度等。指导原则系为执行药典、考察药品质量、起草与复核药品标准等所制定的指导性规定。 2、简述药品标准中药品名称的命名原则。 答：药品中文名称须按照《中国药品通用名称》收载的名称及其命名原则命名。《中国药典》收载的药品中文名称均为法定名称；药品英文名称除另有规定外，均采用国际非专利药名。 有机药物的化学名称须根据中国化学会编撰的《有机化学命名原则》命名，母体的选定须与国际纯粹与应用化学联合会的命名系统一致。 3、简述药品标准的制定原则。 答：药品标准的制定必须坚持“科学性、先进性、规范性和权威性”的原则。 ①科学性：国家药品标准适用于对合法生产的药品质量进行控制，保障药品安全有效质量可控。所以，药品标准制定首要的原则是确保药品标准的科学性。应充分考虑来源、生产、流通及使用等各个环节影响药品质量的因素，设置科学的检测项目、建立可靠的检测方法、规定合理的判断标准/限度。 ②先进性：质量标准应充分反映现阶段国内外药品质量控制的先进水平。在标准的制定上应在科学合理的基础上坚持就高不就低的标准先进性原则。坚持标准发展的国际化原则，注重新技术和新方法的应用，积极采用国际药品标准的先进方法，加快与国际接轨的步伐。 ③规范性：药品标准制定时，应按照国家药品监督管理部门颁布的法律、规范和指导原则的要求，做到药品标准的体例格式、文字术语、计量单位、数字符号以及通用检测方法等的统一规范。 ④权威性：国家药品标准具有法律效力。应充分体现科学监管的理念，支持国家药品监督管理的科学发展需要。 4、简述中国药典凡例的性质、地位与内容。 答：凡例是正确使用《中国药典》进行药品质量检定的基本原则，是对《中国药典》正文、附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。 凡例和附录中采用“除另有规定外”这一用语，表示存在与凡例或附录有关规定不一致的情况时，则在正文品种中另作规定，并按该规定执行。 凡例中有关药品质量检定的项目规定包括：名称及编排，项目与要求，检验方法和限度，标准品、对照品、对照药材、对照提取物或参考品，计量，精确度，试药、指示剂，动物试验，说明书、包装、标签等。 5、简述药品检验工作的机构和基本程序。 答：药品检验工作的机构有国家食品药品监督管理局领导下的国家级药品检验机构即中国药品生物制品检定所（中国药品检验总所），以及省级（各省、自治区、直辖市）、市级药品检验所，分别承担各辖区内的药品检验工作。 药品检验工作的基本程序一般为取样（检品收检）、检验、留样、报告。取样必须具有科学性、真实性和代表性，取样的基本原则应该是均匀、合理；常规检验以国家药品标准为检验依据；按照质量标准及其方法和有关SOP进行检验，并按要求记录；检验过程中，检验人员应按原始记录要求及时如实记录，并逐项填写检验项目；根据检验结果书写检验报告书，药品检验报告书是对药品质量作出的技术鉴定，是具有法律效力的技术文件。6、简述高效液相色谱法用于杂质检测的几种方法及其适用条件。 答：高效液相色谱法用于杂质检测主要有以下几种方法： ①外标法（杂质对照品法），适用于有杂质对照品，而且进样量能够精确控制（以定量环或自动进样器进样）的情况。 ②加校正因子的主成分自身对照测定法，该法仅适用于已知杂质的控制。以主成分为对照，用杂质对照品测定杂质的校正因子，杂质的校正因子和相对保留时间直接载入各品种质量标准中，在常规检验时用相对保留时间定位，以校正该杂质的实测峰面积。
药物分析实验报告
实验四苯甲酸钠的含量测定 一、目的 掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的原理和操作 二、操作 取本品1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水约25mL，乙醚50mL和甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5mL洗涤，洗涤液并入锥形瓶中，加乙醚20mL，继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每1mL的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg的C7H5O2Na。 本品按干燥品计算，含C7H5O2Na不得少于99.0％ 三、说明 1.苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。 COO Na +H C l COOH +N aC l 在水溶液中滴定时，由于碱性较弱(Pk b=9.80)突跃不明显，故加入和水不相溶混的溶剂乙醚提除反应生成物苯甲酸，使反应定量完成，同时也避免了苯甲酸在瓶中析出影响终点的观察。 2.滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醚层。 3.在振摇和分取水层时，应避免样品的损失，滴定前，使用乙醚检查分液漏斗是否严密。 四、思考题 1.乙醚为什么要分两次加入?第一次滴定至水层显持续橙红色时，是否已达终点?为什么? 2.分取水层后乙醚层用5mL水洗涤的目的是什么? 实验五阿司匹林片的分析 一、目的 1.掌握片剂分析的特点及赋形剂的干扰和排除方法。 2.掌握阿司匹林片鉴别、检查、含量测定的原理及方法。 二、操作 [鉴别] 1.取本品的细粉适量(约相当于阿司匹林0.1g)，加水10mL煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。 2.取本品的细粉(约相当于阿司匹林0.5g)，加碳酸钠试液10mL，振摇后，放置5分钟，滤过，滤液煮沸2分钟，放冷，加过量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气。 [检查] 游离水杨酸 取本品的细粉适量(约相当于阿司匹林0.1g)，加无水氯仿3mL，不断搅拌2分钟，用无水氯仿湿润的滤纸滤过，滤渣用无水氯仿洗涤2次，每次1mL，合并滤液和洗液，在室温下通风挥发至干；残渣用无水乙醇4mL溶解后，移至100mL量瓶中，用少量5％乙醇洗涤容器、洗液并入量瓶中，加5％乙醇稀释至刻度，摇匀，分取50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液[取盐酸液(1mol/L)1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后，再加水适量使成100mL] 1mL，摇匀；30秒钟内如显色，和对照液(精密称取水杨酸0.1g，置1000mL量瓶中，加冰醋酸1mL，
药物分析计算题总结
（一）杂质限量计算题4道 1.检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml （每1ml 相当于1μg 的As ）制备标准砷斑，砷盐的限量为0.0001％，应取供试品的量为多少？ 答：g 0.2% 0001.0% 100102g/m l 1%1006=???=?= -ml L CV S μ 供试品应取2.0g 2.取葡萄糖4.0g ，加水30ml 溶解后，加醋酸盐缓冲溶液（pH 3.5）2.6ml ，依法检查重金属（中国药典），含重金属不得超过百万分之五，问应取标准铅溶液多少ml ？（每1ml 相当于Pb10μg/ml ） 答：ml C LS V 2% 10010ml /g 10g 0.4105%1006 -6=????=?=-μ 标准铅溶液应取2.0ml. 3.肾上腺素中肾上腺酮的检查：称取肾上腺素0.250g ，置于25mL 量瓶中，加0.05mol/L 盐酸液至刻度，量取5mL 置另一25mL 量瓶中，用0.05mol/L 盐酸液稀释至刻度，用此液照分光光度法，在310nm 处测定吸收度，不得大于0.05，问肾上腺素的限量是多少？（以百分表示，肾上腺素 %1cm 1E =453） 答：%055.0%100g 250.0ml 5ml 25ml 25100145305.0=?? ??==S CV L 肾上腺酮的限量为0.055% 4. Ch.P.（2010）泼尼松龙中有关物质的检查： 取本品，加三氯甲烷-甲醇（9∶1）溶解并稀释制成每1 ml 中约含3 mg 的溶液，作为供试品溶液；精密量取2 ml ，置100 ml 量瓶中，用三氯甲烷-甲醇（9∶1）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录V B ）试验，吸取上述两种溶液各5 μl ，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（77∶12∶6∶0.4）为展开剂，展开，晾干，在105 ℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。 答：%02.0%1005 35 10023%100=???? = ?= 供试品量 杂质最大允许量 L （二）含量测定15道计算题 一、原料药的含量测定 1、精密称得乙酰半胱氨酸供试品W=0.3001g ，加水30mL 溶解后，精密量取25ml 于锥形瓶，
药物分析 总结归纳
药物分析总结归纳 第一节药品质量标准 重点：中国药典 1.药品质量控制的目的、质量管理的意义:保证用药的安全、合理和有效 2.全面质量控制:研制、生产、供应、临床使用 3.药品质量标准: 是国家对药品质量、规格及检验方法所做的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。 4.掌握各自的简称: 《中国药典》（Ch.P） 美国药典（USP）、美国国家处方集（NF）、英国药典（BP）、日本药局（JP）、欧洲药典（Ph.Eur）、国际药典（Ph.Int）5.《中国药典》： 1）历史沿革： 第一部：中药材、 中药成方制剂 第二部：化学药品、 抗生素、生化药品、 放射性药品及其制剂 第三部：生物制品 2）基本结构和主要内容： 中国药典的内容分为凡例、正文、附录和索引四部分。 ①凡例： ⑴关于检验方法和限度的规定：仲裁以《中国药典》方法为准。 ⑵考点：混淆标准品、对照品的概念： 标准品： 用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位（或μg）计，以国际标准品标定；对照品：指用于检测时，按干燥品（或无水物）计算后使用的标准物质。 ⑶关于精确度的规定： Ⅰ“精密称定”指称取重量应准确至所取重量的千分之一； Ⅱ“称定”指称取重量应准确至所取重量的百分之一； Ⅲ取用量为“约”若干时，指该量不得超过规定量的±10%。 Ⅳ“精密量取”指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求。 考点：“称重”或“量取”的量，小数点后多一位 例如：
⑷计量： 1→10符号：固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml的溶液； （了解） ②附录:制剂通则、通用的检测方法和指导原则。 6.制定药品质量标准的基本原则与依据: 基本原则：坚持质量第一，“安全有效、技术先进、经济合理” ① 检测项目和限度——针对性、合理性② 检测手段选用——可行性、先进性 第二节药品检验的主要任务和方法 重点：一般杂质检查的方法与原理（掌握反应试剂） 1.药检任务：包括常规的检验，工艺流程、反应历程、生物体内代谢过程等方面的监测。 2.药品检验程序： 1）取样：应具有科学性、真实性和代表性。取样的基本原则应该是均匀，合理。 2）药品的鉴别：判断药物及其制剂的真伪。 3）药物的检查：包括有效性、均一性、纯度要求与安全性四个方面。 4）药物的含量测定：测定药物中主要有效成分的含量。 5）检验记录与报告：检验记录必须真实、完整、科学。 6）留样：留样数量不得少于一次全项检验用量。留样检品保存一年，进口检品保存一年，中药材保存半年，医院制剂保存3个月 3.鉴别方法： 1）化学鉴别法： ①呈色反应鉴别法主要有： ⑴三氯化铁呈色反应：酚羟基或水解后产生酚羟基药物的鉴别。（水杨酸、对乙酰氨基酚）三氯化铁 ⑵异羟肟酸铁反应：芳胺或酰胺类药物的鉴别，（β-内酰胺类抗生素：青霉素）盐酸羟胺、三氯化铁； ⑶茚三酮呈色反应：脂肪氨基或α-氨基酸结构药物的鉴别（氨基糖苷类抗生素：链霉素、庆大霉素）茚三酮 ⑷重氮化-偶合显色反应：芳伯氨基或水解后产生芳伯氨基药物的鉴别，（盐酸普鲁卡因）亚硝酸钠试液、β-萘酚试液 ⑸氧化还原显色反应：还原基团药物的鉴别，（维生素C） ②沉淀生成反应鉴别法主要有：
药物分析知识点总结
国家药品标准是《中国药典》（缩写Ch.P）和局颁标准。 药品质量标准：是药品现代化生产和质量管理的重要组成部分，是药品生产、经营、使用和行政、技术监督管理各部门应共同遵循的法定技术依据。 药典内容分：凡例、正文、附录、索引。 药品质量管理规范（5个G）《药品非临床研究质量管理规定GLP》《药品生产质量管理规范GMP》《药品经营质量管理规范GSP》《药品临床试验质量管理规范GCP》《中药材生产质量管理规范GAP》。 标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位计，以国际标准品进行标定。 对照品除另有规定外，均按干燥品（或无水物质）进行计算后使用。 药品检验工作的基本程序一般为取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告。 杂质两个来源：一是由生产过程中引入，二是贮藏过程中引入。 杂质按照来源分：一般杂质和特殊杂质；按毒性分：毒性杂质和信号杂质；按理化性质分：有机杂质、无机杂质和残留杂质。 杂质限量：药物中含杂质的最大允许量。 杂质限量%=杂质最大允许量/供试品量*100% 杂质限量%=标准溶液的浓度*标准溶液的体积/供试品量*100%即L=CV/S*100% 1.氯化物检查，在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，浊度不得更大。加硝酸目的：避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银及氧化银沉淀的干扰，且可加速氯化银沉淀的生产并产生较好的乳浊，酸度以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。 2.硫酸盐检查，在稀盐酸酸性条件下与氯化钡反应，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下产生的硫酸钡浑浊程度比较。 3.铁盐检查，硫氰酸盐法，铁盐在盐酸酸性与硫氰酸盐作用生产红色可溶性硫氰酸铁配离子 4.重金属检查，硫代乙酰胺法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物；炽灼后的硫代乙酰胺法适
(精选)药物分析复习总结
第二章药品质量控制与药物分析方法验证 1.SOP（标准操作规程） 2.QC（质量控制） 3.GLP（药物非临床研究质量管理规范）（Laboratory） 4.GCP（药物临床试验质量管理规范）（Clinical） 5.GMP（药物生产质量管理规范）（Manufacture） 6.系统误差（具有固定的正或负偏差）(方法误差；试剂误差；仪器误差；操作误差) 偶然误差（不可定误差） 7.RSD即变异系数（相对标准偏差） 8.容量分析相对误差（RE）通常在0.2%以下；仪器分析法RE通常为2%~5% 9.称量的误差应小于1% 10.药典中API未规定含量百分数上限时，即不超过101.0% 11.消除系统误差方法：回收试验、校准仪器、对照实验、空白试验（回收试验：考察分析 方法能够对样品中被测物给予全量相应的能力验+证试验 12.95%的置信区间用1.96σ值进行计算 13.方法学验证参数：专属性；准确度（回收率）；精密度（RSD）；定量限；检测限；定量 限；线性与范围 14.称量时要多称一位，比如要称2.0g，则应称取1.95g~2.05g，而不是1.5g~2.5g 15.精密称量指称取重量应准确至所取质量的千分之一 16.热水指70~80度的水 17.不管鉴别、杂质测定（定量、限度）、含量测定，都需要进行的方法学验证为“专属性” 和“耐用性” 18.常用化学试剂质量等级：化学纯、分析纯、试剂纯、优质纯 19.分析方法验证的主要效能指标：准确度；精密度（重复性，中间精密度，重现性）；专 属性；耐用性；线性和范围；检测限和定量限； 20.测量不确定度的含义：是表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相联系的参数。 21.药典附录包括“制剂通则”“通用检测方法”“指导原则” 22.杂志检查一般为限度检查
工业药物分析章总结
第五章化学药物及制剂分析 1.药物的检验依据：定性和定量——物质的性质——化学结构； 方法：化学方法、物理方法、生物方法教学检测； 步骤：定性（药物真伪）——定量（杂质检查和含量测定） 2.化学药物的分类按作用对象分： 抗感染药物、神经系统药物、呼吸系统药物、消化系统药物、心血管系统药物、血液系统药物、抗过敏镇痛药物、抗炎免疫系统药物、特种疾病药物等。 按化学结构分：巴比妥类药物、芳酸及其酯类、芳香胺类、杂环类、维生素类、甾体激素类、抗生素类等。化学药物分析的特点：(1)分析涉及的范围广（原材料、中间体、成品）；(2)化学药物自身的各向异性； (3)先进行药物的定性（鉴别和检查），后进行含量测定。 4.合成药物原材料的种类(1)芳烃及其衍生物（广泛合成青霉素类的原料）：苯巴比妥类、芳酸类、芳胺类、等； (2)吡啶及其衍生物：作为甾族、磺胺类、抗组胺等的医药产品合成的原料； (3)哌嗪及其衍生物：哌嗪酸及其盐、利福平、等 (4)噻吩及其衍生物：合成新型广谱抗菌素（头孢霉素类、先锋霉素类、等）——疗效更好！ (5)吡嗪、吗啉、咪唑及其衍生物：利尿药、布洛芬、真菌药 5.原料药分析方法（1）已知原材料的化学组成和含量，看根据其结构和性质选择化学分析法或仪器分析方法。定性测纯度可采用熔点测定或TLC展开，若具有手性需旋光度测定。定量可采用滴定分析法、光度法、色谱法；（2）对于药物合成过程中的挥发性有机溶剂限量控制可采用GC法进行；（3）若进行手性药物的合成（如对映异构体的纯度测定）可采用HPLC法进行；（4）复杂药物的分析——采用仪器联用技术 6.生产过程检测（1）合成中间体结构特性（2）分离与鉴别（3）含量测定 7.原料药物分析是指对于没有经过加工的药物原料的分析，工作主要是关于所用药物的分子式等有关的药物分子结构的分析，以及粒径大小等与其溶解度有关的性质分析。 8.原料药按结构分为：巴比妥类药物、芳酸及其酯类药物、芳胺类药物、杂环类药物、维生素类药物和甾体激素类药物，等。 9.巴比妥类药物理化性质和定性鉴别 （1）. 主要理化性质：白结晶(粉末)，有熔点，加热易升华，微溶于水，易溶于有机溶剂，而钠盐则相反。 （2）鉴别反应：可与重金属离子显色反应 ①丙二酰脲类鉴别反应：+AgNO3生白↓，过量其二银盐不溶；+铜盐——显紫色或紫色↓，此反应可区别巴比妥类和硫代巴比妥类。 ②取代基的反应： +亚硝酸钠-硫酸——显橙黄色转橙红色； +甲醛-硫酸——分层，液界面显玫瑰红色。 ③烯丙基的反应：+碘试液——棕黄色消失 ④硫元素反应：+碱+Pb2+——生白↓，△变黑 10.芳酸及酯类药物（水杨酸、阿司匹林等） （1）. 主要理化性质 固体、熔点，绝大多数难溶于水，易溶于有机溶剂。具有一定的特征吸收光谱信息。 (2). 鉴别反应：可与重金属离子显色反应 ①与铁盐的显色反应：
最全药物分析知识点归纳总结整理
最全药物分析知识点归纳总结整理 药物分析是一门利用分析测定手段，发展药物的分析方法研究药物的质量规律，对药物进行全面检验与质量控制的科学。 药品质量应从药品的性状、真伪、有效性、均一性、安全性、纯度和有效成分的含量进行综合评价。 第一节药品质量标准 药品质量标准是国家对药品质量、规格及检验方法所做的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。 常见的国家标准： 国内：《中华人民共和国药典》（Ch.P） 其他药品标准； 常见国外药品标准： 美国药典（USP）、美国国家处方集（NF）、英国药典（BP）、日本药局方（JP）、欧洲药典（Ph.Eur）和国际药典（Ph.Int）。 一、《中国药典》 1.历史沿革： 1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005、2010、2015年版。
2.基本结构和主要内容 凡例：为解释和使用中国药典，正确进行质量检验提供的指导原则。 正文包括所收载药品或制剂的质量标准 通则包括制剂通则、通用检测方法和指导原则 （1）检验方法和限度 ◆检验方法：《中国药典》规定的按药典，采用其他方法的要与药典方法对比。仲裁以《中国药典》方法为准。 ◆限度： （2）标准品和对照品 相同点： 用于鉴别、检查、含量或效价测定测定的标准物质。 不同点： 标准品 用于生物检定或效价测定的标准物质，其特性量值一般按效价单位（或μg）计。 对照品 指采用理化方法进行鉴别、检查、含量测定的标准物质。其特性量值一般按纯度（%）计。 （3）精确度 药典规定取样量的准确度和试验精密度。 ◆“精密称定”指称取重量应准确至所取重量的千分之一。 ◆“称定”指称取重量应准确至所取重量的百分之一。 ◆取用量为“约”若干时，指取用量不得超过规定量的±10%。 ◆“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求； ◆“量取”系指可用量筒或按照量取体积的有效数位选用量具。
执业药师药物分析考点总结归纳满分覆盖
执业药师药物分析考点总结归纳满分覆盖
药物分析总结归纳 第一节药品质量标准 重点：中国药典1.药品质量控制的目的、质量管理的意义:保证用药的安全、合理和有效 2.全面质量控制:研制、生产、供应、临床使用 3.药品质量标准: 是国家对药品质量、规格及检验方法所做的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。 4.掌握各自的简称: 《中国药典》（Ch.P） 美国药典（USP）、美国国家处方集（NF）、英国药典（BP）、日本药局（JP）、欧洲药典（Ph.Eur）、国际药典（Ph.Int） 5.《中国药典》： 1）历史沿革： 2）基本结构和主要内容： 中国药典的内容分为凡例、正文、附录和索引四部分。 ①凡例：
⑴关于检验方法和限度的规定：仲裁以《中国药典》方法为准。 ⑵考点：混淆标准品、对照品的概念： 标准品： 用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位（或μg）计，以国际标准品标定； 对照品：指用于检测时，按干燥品（或无水物）计算后使用的标准物质。 ⑶关于精确度的规定： Ⅰ“精密称定”指称取重量应准确至所取重量的千分之一； Ⅱ“称定”指称取重量应准确至所取重量的百分之一； Ⅲ取用量为“约”若干时，指该量不得超过规定量的±10%。Ⅳ“精密量取”指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求。 考点：“称重”或“量取”的量，小数点后多一位 例如： Ⅴ“空白试验”系指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下，按同法操作所得的结果；
Ⅵ“恒重”，除另有规定外，系指供试品经连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量； ⑷计量： 1→10符号：固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml 的溶液； （了解） ②附录:制剂通则、通用的检测方法和指导原则。 6.制定药品质量标准的基本原则与依据: 基本原则：坚持质量第一，“安全有效、技术先进、经济合理” ① 检测项目和限度——针对性、合理性② 检测手段选用——可行性、先进性 第二节药品检验的主要任务和方法 重点：一般杂质检查的方法与原理（掌握反应试剂）1.药检任务：包括常规的检验，工艺流程、反应历程、生物体内代谢过程等方面的监测。 2.药品检验程序： 1）取样：应具有科学性、真实性和代表性。取样的基本原则应该是均匀，合理。
体内药物分析总结 药物分析专业专用
首过效应：药物经肠道吸收首次进入肝脏时，有些药物可被肠液或肠道上的肠菌酶破坏，或在肝内受到微粒体混合功能氧化酶代谢，使进入体循环的药量减少。 肠肝循环：药物经胃肠吸收，经胆汁分泌进入小肠或药物经吸收后在肝转化为代谢物，经胆汁分泌排入小肠，在小肠处重吸收的过程。特征为“双吸收峰”。 平衡透析法：将含药物的血浆与透析液放置于半透膜两侧，在一定温度下搅拌使其平衡。半透膜能阻挡血浆蛋白和结合药物的血浆蛋白，而游离药物自由通过半透膜并达平衡。优点：平衡状态下，结果真实可靠缺点：受稀释作用影响，费时 超滤法：利用离心力迫使药物通过半透膜，同时血浆中水分也不断被滤除，使样品管内血浆样品不断浓缩，打破了药物与血浆蛋白结合的动态平衡。优点：设备简单，时间短，收集到足够的超滤液可直接进样缺点：非平衡状态下测定。 液液萃取法：基于被测组分在不混溶的两种溶剂中的分配系数不同而得到分离。 固相萃取：SPE是一种吸附剂萃取，样品通过填充吸附剂的一次性萃取柱，分析物和杂质被保留在柱上，然后分别用选择性溶剂去除杂质，洗脱出分析物，从而达到分离的目的。 萃取方法选择：1较亲脂药物最好用烷基硅胶键合相省时，碱性药物用大孔树脂为佳。 2较亲水且具有酸碱性，可电离，采用离子交换树脂；3较亲水但不能解离，不易萃取，沉淀蛋白后直接进样 柱切换技术：指由阀来改变流动相走向与流动相系统,从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入分析柱的技术。 衍生化技术：在色谱过程中用特殊的化学试剂，借助化学反应给样品化合物接上某个特殊基因，使其转变为相应衍生物之后进行检测的方法。目的：1使极性药物变成非极性易挥发药物，使其具有能被分离的性质。2增加药物的稳定性。3提高对光学异构体的分离能力。 顶空气相色谱法：在封闭恒温系统中气相和凝聚相（液相或固相）存在着分配平衡，因此气相的组成能反应凝聚相的组成，用GC法来分析平衡体系中气体的方法。分为静态顶空气相色谱法和动态顶空气相色谱法。 微透析技术：实质是一种膜分离技术，利用膜透析原理，微量地对细胞液进行流动性连续采样的采样和色谱样品制备技术。 电渗流：在pH>3时，毛细管壁上的硅羟基负离子使毛细管壁内表面带负电，和溶液接触时相应的缓冲液带正电，形成双电层。在高电压作用下，双电层中水合阳离子引起流体整体地朝负极方向移动，该现象叫电渗流。具平面流型。 毛细管电泳免疫分析法(CEIA)：利用抗原抗体复合物与游离的抗原抗体在电泳行为上的差异，将毛细管电泳作为分离分析的手段，分为竞争性CEIA和非竞争性CEIA。 P450酶的生物学特性：1.P450酶是一个多功能的酶系.2.P450酶对底物的结构特异性3.P450酶存在有明显的种属、性别和年龄的差异.4.P450酶具有多型性和多态性.5.P450酶具有可诱导和可抑制性.
【通用】药物分析总结.doc
药物分析总结 1，《新修本草》，这是世界上最早的一部药典。 2，国家药品（质量）标准：是国家对药品质量规格及检验方法所作的技术规定，是药品生产、供应(经营）、使用、检验和行政、技术监督管理部门共同遵循的法定技术依据。是强制性的法定计术标准。 3，药典（Pharmacopeia ）：国家关于药品质量标准的法典。 4， 2009-6-186求 实 创 新 勤 奋 严 谨Pharmaceutical Analysis-2009.2-6 （1）新中国药典： 1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005版 始分 一二 两部 有英文 版出现 二部注 释选编 《药品红 外光谱集》 另行出版 多种配套 丛书 分为 三部 首次 收载 指导 原则 二部 药品 名称 取消 了拉 丁名 建国之后至今共出了八版 2.中国药典 5，2005年版主要内容 一部：中药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂 二部：化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品 三部：生物制品（《中国生物制品规程》） 6，其他重要规定 水浴温度：除另有规定外，均指98~100 ℃ 室温：10~30 ℃ 冰浴：0 ℃ 放冷：指放冷至室温 阴凉处：不超过20 ℃ 凉暗处：避光并不超过20 ℃ 1 10：固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml的溶液。 溶液的滴：20℃时，1.0ml水相当于20滴 恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下。 精密称定：称取重量应准确至所取重量千分之一。 称定：称取重量应准确至所取重量的百分之一。 约：指取用量不得超过规定量的±10% 标准品&对照品：用于鉴别、检查和含量测定的标准物质，指定单位制备、标定、供应。标准品指用于生物检定、抗生素或生化药品含量或效价测定的标准物质，一般按效价单位
药物分析(题库)
1. (4分) 盐酸普鲁卡因属于( ) A. 酰胺类药物 B. 杂环类药物 C. 生物碱类药物 D. 芳酸类药物 E. 以上都不对 得分：0 知识点：药物分析作业题 收起解析 答案E 解析 2. (4分) 检查某药品杂质限量时，称取供试品W(g)，量取标准溶液V(ml)，其浓度为C(g/ml)，则该药的杂质限量(％)是() A. B. C. D. 得分：0 知识点：药物分析作业题 收起解析 答案C 解析 3. (4分) 两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每1ml氢氧化钠溶液(0.1mol/L)相当于阿司匹林(分子量＝180.16)的量是：( ) A. 18.02mg B. 180.2mg C. 90.08mg D. 45.04mg E. 450.0mg 得分：0 知识点：药物分析作业题 收起解析 答案A 解析 4. (4分) 有的药物在生产和贮存过程中易引入有色杂质，中国药典采用() A. 用溴酚蓝配制标准液进行比较法 B. 用HPLC法 C. 用TLC法 D. 用GC法 E. 以上均不对 得分：0 知识点：药物分析作业题
答案E 解析 5. (4分) 在碱性条件下与AgNO3反应生成不溶性二银盐的药物是( ) A. 尼可刹米 B. 安定 C. 利眠宁 D. 乙酰水杨酸 E. 以上都不对 得分：0 知识点：药物分析作业题 收起解析 答案E 解析 6. (4分) 对乙酰氨基酚的化学鉴别反应，下列哪一项是正确的( ) A. 直接重氮化-偶合反应 B. 直接重氮化反应 C. 重铬酸钾氧化反应 D. 水解后重氮化-偶合反应 E. 以上都不对 得分：0 知识点：药物分析作业题 收起解析 答案D 解析 7. (4分) 氧瓶燃烧法测定盐酸胺碘酮含量，其吸收液应选() A. H2O2+水的混合液 B. NaOH+水的混合液 C. NaOH+H2O2混合液 D. NaOH+HCl混合液 E. 水 得分：0 知识点：药物分析作业题 收起解析 答案B 解析 8. (4分) 酰肼基团的反应是以下哪个药物的鉴别反应( ) A. 巴比妥类 B. 维生素B1 C. 异烟肼 D. 尼可刹米 E. 青霉素 得分：0