金银花中绿原酸的提取及检测_乌兰.

下,随着球磨时间的增加,其剪切应力显著下降。

用幂方程τ=k γm (其中k 为稠度系数;m 为流动特征指数对曲线进行拟合,结果如表2所示。

由拟合结果可知,在不同温度下,相关系数R 2在0.9850~0.9993之间,这说明方程与曲线有较好的相关性。同一样品的稠度系数k 随着温度的升高而减小,说明温度升高可以减小体系的稠度,增强淀粉糊的流动性。在同一温度下随着球磨时间的增加,稠度系数k 显著下降,流动指数m 则是呈现增加的趋势,说明球磨后的绿豆淀粉更趋近于牛顿流体。

3结论

上述实验结果表明,机械球磨方法可以有效地将绿豆淀粉非晶化,球磨一定时间后淀粉颗粒的偏光十字消失,X -射线衍射曲线的尖峰衍射特征逐渐减弱,绿豆淀粉颗粒的结晶结构受到严重破坏。球磨处理后绿豆淀粉糊的流变特性在不同浓度和温度下发生了变化,绿豆淀粉糊随着球磨时间的延长稠度系数k 不断减小,而流动特征指数m 则不断增大,说明球磨处理后绿豆淀粉糊趋向于牛顿流体的特征。

参考文献:[1]

Shinji Tamaki,Makoto Hismatsu,Katsunori Teranishi,et al.Structural change of maize starch granules by ball-mill treatment[J].S tarch,1998, 50(8:342-348.[2]

Shinji Tamaki,Makoto Hisamatsu,Katsunori Teranishi,et al. Structural change of potato starch granules by ball-mill treatment[J].S tarch,1997,49(11:431-438.[3]胡飞,陈玲,李琳.马铃薯淀粉颗粒在微细化过程中结晶结构的变化[J].精细化工,2002,19(2:114-117.

[4]

Sherman P.Food texture and rheology[M].New York:Aca-demic Press,1979.[5]Prentice J H.Measurements in the rheology of foodstuffs [M].London:Elsevier Applied Science Publishers,1984.[6]胡飞,李平凡,陈玲.微细化马铃薯淀粉流变性质的研究[J].粮食与饲料工业,2002,(7:41-43.

[7]二国二郎.淀粉科学手册[M].王微青,等,译.北京:轻工业出版社, 1990.31-43,163-167.

[8]

Mohd Nurul I Muhd,Azemi B M N,Manan D M A.Rheo-logical b ehaviour o f s ago(Metroxylon s agu s tarch p aste[J].Food Chemistry,1999,64:501-505.

收稿日期:2004-07-14*通讯作者基金项目:天津市教委科研项目(20039902

作者简介:乌兰(1976-,女,硕士研究生,研究方向为食品科学、天然产物开发。

金银花中绿原酸的提取及检测

乌兰,张泽生*

(天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300222

摘要:采用多种方法分别从金银花中提取绿原酸,用紫外光谱法和高效液相色谱法对其进行定性定量分析。同时用金银花乙醇提取物对大肠杆菌进行抗菌试验。绿原酸提取试验结果表明:用70%乙醇热回流提取是金银花中绿原酸提取的最佳方法,获得绿原酸的提取率高于其他方法,提取终产物与标准品的最高吸收峰均在324nm 处,终产物中绿原酸的含量为43.35%。抗菌试验结果表明:金银花提取物具有较强的抑菌活性。关键词:金银花;绿原酸;提取;检测;抗菌活性

Extraction and Examination of Chlorogenic Acid from Flos Lonicerae

WU Lan,ZHANG Ze-sheng*

(Food Engineering and Biology Technology,Tianjin University of Science and Technology,

Tianjin300222,China

Abstract:Optimization of the extracting method of chlorogenic acid from Flos Lonicerae was studied by several different

methods.Two different ways of Ultraviolet(UV and Visible Spectrophotometr and High Performance Liquid Chromatography (HPLC have been carried out for the quantitative and qualitative determination of chlorogenic acid in Flos Lonicerae.Inhibition test against pathogenic bacteria has been done with Flos Lonicerae ethanol and chlorogenic acid.The results of chlorogenic acid extraction showed that chlorogenic acid tiptop absorb-apex was324nm,with ethanol of70%concentration extraction was remarkably superior to other methods.The content of chlorogenic acid with70%ethanol extraction was43.35%,so the ethanol with70%concentration extraction was the optimum condition. The antibacterial action of chlorogenic acid

in vitro o n E scherichia Coliand extracted with70%ethanol from Flos Lonicerae showed that F los Lonicerae had strong antimicrobial activity.

Key words:Flos Lonicerae;chlorogenic

acid;extraction;examination;antimicrobial activity

中图分类号:TS207.3

文献标识码:A

文章编号:1002-6630(200505-0130-05

金银花为忍冬科(Caprifoliaceae忍冬属(Lonicera植物忍冬(Lonicera japonica thunb及同属多种植物的干燥花蕾,它是一种“药食同源”的绿色植物,是临床常用的中药之一。近代研究一般认为金银花的生物活性有效成分为绿原酸类化合物,并且常以绿原酸含量的高低来评价金银花质量的优劣[1]。绿原酸具有显著的清热解毒、

抗菌消炎和抗衰老作用;对消化道的癌症有明显的抑制作用;还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用;绿原酸还具有增香和护色作用,可用于食品和果品保鲜。

绿原酸是含有羧基和邻二酚羟基的有机酸,易溶于水、醇溶液和丙酮等溶剂。目前,从金银花中提取绿原酸多采用水煎法、水提醇沉、稀醇回流法、动态浸提法、超声波法和渗漉法等,国内学者对绿原酸不同提取工艺的评价仍存在分歧,但多数认为乙醇回流法较好。为进一步优化乙醇回流法的提取工艺,本文进行了金银花中绿原酸的提取试验,并采用紫外分光光度法及《中华人民共和国药典》(2000年版要求采用高效液相色谱法(HPLC等作了相应的含量测定,以及经典的生物检测法[2,3]对金银花提取物的生物活性进行检测。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验材料河南金银花。

1.1.2试验菌株大肠埃希氏菌(Escherichia Coil,G-,购自湖北武汉大学中国典型培养物保藏中心。

1.1.3培养基固体肉汤培养基g/L:蛋白胨10.0,牛肉浸膏5.0,NaCl 5.0,琼脂20.0,pH7.2,121℃灭菌20min;半固体肉汤培养基g/L:蛋白胨10.0,牛肉浸膏

5.0,NaCl 5.0,琼脂8.0,pH7.2,121℃灭菌20min;琼脂培养基g/L:琼脂20.0,121℃灭菌20min。

1.1.4实验仪器KDF-2116康达多功能食品粉碎机(天津市达康电器公司,微量进样器(基因公司,O R I O N 818型pH计(美国,RE-3000旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器,SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸,调温加热套(河北省黄骅市中兴,超净工作台(苏净集团,H P S-250生化培养箱(哈尔滨市东明医疗仪器,

AB204-N分析天平(美国Mettler-Toledo Group,Uvmini-1240紫外可见分光光度计(日本岛津有限公司,高效液相色谱仪(美国Lab,数码相机CASIO(日本,游标卡尺。

1.1.5主要试剂无水乙醇、甲醇、氯化钠、柠檬酸、三乙胺(分析纯、乙腈(色谱纯,绿原酸标准品(S i g m a公司,庆大霉素(华北制药厂,生产批号: 20040218,80万单位/2ml。

1.2实验方法

1.2.1绿原酸的基本提取工艺

1.2.1.1破碎水提取时将金银花低温烘干后切至0.6~ 0.8cm;乙醇提取时将烘干后的金银花用粉碎机破碎至约20目;

1.2.1.2热回流浸提破碎后将金银花置于磨口圆底烧瓶中,加入适量的水或乙醇溶液,用调温电热套加热至微沸状态,热回流2次,第一次1h,第二次0.5h;

1.2.1.3抽滤用布氏抽滤器减压处理浸提液;

1.2.1.4浓缩合并浸提液,用薄膜旋转蒸发器减压浓缩(40℃至无乙醇味,回收的乙醇待用;

1.2.1.5冷沉离心将浓缩液置于4℃冷藏24h后10000r/ min离心30min,取上清,同时将沉淀用少量蒸馏水再洗脱一次,离心后合并两次上清液,定容。

1.2.1.6真空冷冻干燥将提取液先于超低温冰箱中冷冻0.5h,然后至于真空冷冻干燥剂中干燥成粉末。1.2.2绿原酸的检测

对金银花中绿原酸定性定量的测定有颜色反应法、容量法、极谱法、比色法、紫外分光光度法、三波长分光光度法、导数光谱法、纸层析—比色法、纸层析—紫外分光光度法、薄层光密度法、薄层层析—紫外分光光度法、薄层扫描法、气相层析法、G C-M C法、高效液相色谱法(HPLC及生物检测法。本试验采用紫外

分光光度法及高效液相色谱(HPLC法,以及经典的生物检测法——管碟法对金银花提取物的生物活性进行检测。

1.2.2.1紫外分光光度法

(1标准曲线的绘制

准确称取绿原酸标准品5.0m g,用30%甲醇溶解并定容于50ml容量瓶中。再准确量取标准溶液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、2.00、2.50、3.00ml分别于10ml

比色管中,用30%甲醇溶液定容。取0.05mol/L的绿原酸标准溶液用紫外分光光度计于200~500nm扫描。然后选取最大吸收波长分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值(OD值,以绿原酸标准品浓度(g/L为横坐标,以其吸光度值(O D值为纵坐标绘制标准曲线。

(2绿原酸含量的测定

将不同提取工艺所得供试品各取1ml用30%的甲醇溶液定容至1000ml;在

324nm处测其吸光度值,以计算其中绿原酸的含量及提取率。

绿原酸含量=根据标准曲线测得含量/原金银花质量

绿原酸提取率=根据标准曲线测得含量/原金银花中绿原酸总含量

1.2.2.2高效液相色谱法(HPLC

(1分析条件

柱:Lab[250mm×4.5mm,C18]分析柱,流动相为乙腈:柠檬酸缓冲溶液:水(10:20:70,流速为1.0ml/min,室温,进样量为20μl,检测波长为324n m。

(2对金银花中绿原酸的定性分析

本试验利用H P L C在相同色谱条件下,将标准溶液色谱图与样品色谱图进行对照,根据保留时间确定样品中的绿原酸等活性物质。

(3标准曲线的绘制

以不同质量浓度的绿原酸标准溶液各20μl分别进样,测定其峰面积。以绿原酸标准品浓度(g/L为横坐标,以与其相应峰面积为纵坐标绘制标准曲线,再取不同工艺条件提取的待测液用同样方法测定其峰面积以求出绿原酸含量。

1.2.3金银花提取物抑菌活性实验——生物检测法

本试验采用测量抗生素效价的牛津杯法对金银花提取物进行效价的测定。牛津杯法(又称管碟法是利用抗生素在营养琼脂培养基中的扩散渗透作用,将已知浓度的标准溶液和未知浓度的样品在含有敏感性实验菌的营养琼脂表面进行扩散渗透,由于抗生素对被试菌的抑制作用而产生透明抑菌圈,抑菌圈的大小和抗生素的浓度之间有一定的比例,从而确定抗生素效价的一种方法。这个方法是利用抗生素可以抑制敏感菌的特点,既符合临床使用的实际情况,而且灵敏度高,又不需要特殊设备,因此被国际公认。

本试验采用管碟法对绿原酸的最低抑菌浓度(MIC进行了测定,利用大肠杆菌(Escherichia Coli G+作为敏感试菌。具体方法如下:

无菌操作。取10ml琼脂培养基于直径为9cm的无菌培养皿中,铺匀,待凝固后,放入两个牛津杯;取含有活菌数为106~108/ml的半固体培养基10ml,加到装有牛津杯的培养皿中,铺匀,待凝固后,拔出牛津杯;在其中一个杯孔中加入50μl不同工艺条件提取的、一系列浓度梯度的金银花提取液或绿原酸纯品;另一个孔作空白对照以便观察所接菌的生长情况,37℃培养24~ 48h后,观察抑菌圈的大小和透明度,相同条

件作三个平行;恰好没有抑菌圈出现的培养皿所用的溶液浓度为最小抑菌浓度(MIC。将稀释一系列的庆大霉素也用上述步骤作阳性对照试验。

2结果与分析

2.1紫外分光光度法对绿原酸含量的测定

将绿原酸标准溶液配制成浓度为0.05mol/L,用紫外分光光度计于200~500nm扫描,如图1所示,绿原酸的最大吸收峰在波长为324n m处,故选取324n m。分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值(OD值,做出标准曲线,如图2所示。

求得线性回归方程为Y=57.497x+0.0482,R2=0.9999,

说明本方法在绿原酸的质量浓度为0.005~0.03g/L时具有

良好的线性。

在不同工艺条件对金银花的提取液在324nm测其吸光度值经过公式计算结果如图3。

根据用紫外分光光度法测定绿原酸的含量、提取率与成本来看,应选取70%乙醇进行对绿原酸的提取,提取率可达96.81%,终产物中绿原酸的质量百分数为

43.35%。

2.2用高效液相色谱法(HPLC对金银花中绿原酸的检测

对金银花提取液中是否含有绿原酸进行定性分析,标准样品的色谱图如图4所示,样品则选取了70%乙醇提取液进行谱图绘制,如图5。

根据图4、图5表明检测物均在10.211min处出现最大吸收峰,可以初步断定两种物质为同一化合物。

绿原酸的标准曲线如图6所示。

求得线性回归方程为Y=1.0066×108x+8530000, R2=0.9985,说明本方法在绿原酸的质量浓度为0.005~ 0.025g/L时具有良好的线性。

用不同工艺条件提取的待测液每次进样20μl,测其峰面积以求出绿原酸含量结果如图7所示。

从结果可以看出,紫外分光光度法测定的结果含量往往较高,重现性不好。而用高效液相色谱法测定的结果较稳定,偏差小。根据以上的不同检测结果可以看出,紫外分光光度法与高效液相色谱法得出的结果趋势一致,故在提取绿原酸时应选取70%乙醇作为提取溶剂,用H P L C测的绿原酸的提取率为85.63%。

2.3生物检测法测定金银花提取物的最低抑菌浓度(MIC

本试验采用管碟法对不同提取工艺得到的金银花提取物和绿原酸标准品的最低抑菌浓度(M I C

进行了测

定,并设阴性对照与阳性对照(庆大霉素1.0g/L。结果如表1。

样品MIC(g/L水提取0.87060%乙醇提取0.90070%乙醇提取0.83580%乙醇提取1.000绿原酸标准样品

1.110庆大霉素

0.750

表1不同工艺条件提取的绿原酸及绿原酸标准样品的

最低抑菌浓度(MIC

Table 1 Results of distill solution antimicrobial activity of MIC

根据以上结果表明:(1金银花中所含绿原酸并非唯一抑菌成分,其它成分也有抑菌作用,有待于进一步研究;(2确定了金银花中绿原酸提取的最佳工艺为:70%乙醇提取。

本试验又比较了70%乙醇提取液和庆大霉素的抑菌圈,从中可以看出,0.8g/L的庆大霉素与1.0g/L的70%乙醇提取液效果相当(图8、图9。庆大霉素,虽对大肠杆菌具有强抑菌作用,但它对人体有肾毒性、耳毒性、过敏反应等,而金银花提取液的毒副作用还未见文献报道,又因为金银花来源丰富、价格低廉,所以金银花与庆大霉素等比较,在临床应用上更为安全、方便,可供临床选用防治大肠杆菌等感染的参考

[4]

。

3讨论

3.1

在金银花的提取中,采用70%乙醇提取能有效提

取出金银花中的绿原酸,纯度较高。且金银花中的有效成分以绿原酸为指标,再根据其生物有效性来看,应选取70%乙醇提取。3.2

在绿原酸的检测中,紫外分光光度法所测结果与高效液相所测结果相比偏差较大,但趋势相同,故检测绿原酸应采用高效液相法为佳。3.3

抑菌实验结果表明,金银花的提取物具有很好的体外抑菌作用,对临床有指导意义,而且说明提取物中除绿原酸以外还存在其它较强的抑菌物质,有待于对其它成分的进一步研究。

参考文献:[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(第一部[M].化学工业出版社,2000.177.

[2]杜连祥,等.工业微生物学实验技术[M].科学技术出版社,1992.

[3]邬行彦,熊宗贵,胡章助.抗生素生产工艺学[M].化学工业出版社, 1987.

[4]

戴自英.临床抗菌药物学[M].北京:人民卫生出版社,1985.219-223.

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信息

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金银花中绿原酸的体外抑菌和抗氧化性的研究

第20卷第2期2005年6月 天津科技大学学报Journal of Tianjin University of Science &Technol ogy Vol .20　No .2 Jun .　2005 金银花中绿原酸的体外抑菌和抗氧化性的研究 3 张泽生,乌　兰 (天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300222) 摘　要:用紫外光谱法(UV )和高效液相色谱法(HP LC )对金银花中提取的绿原酸进行定性 定量分析,测定了绿原酸对食品中常见的致病菌的抑菌能力,清除DPPH ?自由基的能力和对Fe 3+的还原能力。结果表明:金银花中绿原酸具有较强的抑菌效果,对自由基有较强的清除能力,对Fe 3+有较强的还原能力。关键词:金银花;绿原酸;抑菌;抗氧化 中图分类号:TS207.3 文献标识码:A 文章编号:167226510(2005)022******* An ti m i crob i a l and An ti ox i da ti on I nv itro of Chlorogen i c Ac i d i n F los L on icerae ZHANG Ze 2sheng,W U Lan (College of Food Engineering and B i otechnol ogy Tianjin University of Science &Technol ogy,Tianjin 300222,China ) Abstract:Quantative and qualitative analysis of chl or ogenic acid in Flos L onicera were devel oped by UVand HP LC .Detect the bacteri ostatic acti on against pathogenic bacteria in diets ,the capacity of eli m inating DPPH ?and deoxidizing Fe 3+ .The results suggested that chl or ogenic acid has a str ong antibacterial acti on,a superi or capacity of eli m inating DPPH ?and deoxidizing Fe 3+ .Key words:Flos L onicerae ;chl or ogenic acid;bacteri ostatic acti on;anti oxidati on 金银花在我国分布广,药用历史悠久,是常用的清热解毒药。金银花为忍冬科(Caprifoliaceae )忍冬属(L on icera )植物忍冬(L onicera japonica thunb )及同属多种植物的干燥花蕾,是临床常用的中药之一。近年来研究发现,金银花中富含多种对人体健康有益的物质,诸如挥发油黄酮及绿原酸类、三萜类和微量元素等,具有很高的利用价值。在众多的成分中绿原酸较为丰富且具有多种活性功能,因此常以绿原酸含量的高低评价金银花质量的优劣[1] 。 绿原酸是一种含有酚羟基的化合物,药理学证明, 绿原酸具有保护心血管的活性[2] 。人体内的低密度脂蛋白(LDL )被氧化是引起心血管病的一个重要原因[3] 。绿原酸能有效地保护人体LDL 中α2Tocopher 2ol,使其LDL 免受氧化 [4]。当人体摄入一定量含有酚羟基化合物的食物时,这些物质可降低或淬灭人体中自由基的产生。据统计在心脏病低发病率的人群中,发病率与绿原酸的摄入有一定联系,其部分抗病机制是绿原酸对人体LDL 中α2T ocopher ol 氧化的抑制作用[5] 。 本文在对金银花中绿原酸的抗菌、抗氧化活性等方面做一些探讨,为工业化生产该类物质提供一定的技术依据。 1　材料和方法 1.1　材料与仪器1.1.1　试验材料 河南产金银花,经干燥后破碎。 3 　收稿日期:2004211202 　33基金项目:天津市教委科研基金资助项目(20039902) 　33作者简介:张泽生(1956-),男,天津市人,教授,博士生导师;研究方向:食品营养、天然产物开发与研究. E 2mail:zhangzesheng@hot m ail .com.

金银花中绿原酸的提取

金银花中绿原酸的提取、分离纯化 绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸组成的缩酚酸，异名咖啡鞣酸，是植物在有氧呼吸 过程中经莽草酸途径代谢产生的苯丙素类化合物。化学结构为： 绿原酸 由结构可以看出它是含有羧基和邻二酚羟基的极性有机酸化合物，为酸性。由于分子内含有邻二酚羟基，受热、见光易氧化，因此供试液要在阴凉、避光下保存备用，且高温和长时间加热不利于绿原酸的提取。在碱性条件下，绿原酸易发生水解，植物体内存在的绿原酸往往是混合物而非单一组分。 绿原酸物理性质： 名称 分子式 分子量 性状 熔点 溶解度 绿原酸 C 16H 18O 9 345.30 半水化合物为针状晶（110℃变为无水化合物） 208℃ 水中4%，在热水中溶解度更 大，易溶于乙醇、丙酮和甲醇 等极性溶剂，难溶于氯仿、苯、 乙醚等亲脂性有机溶剂 一、实验目的： 1、了解金银花中有关成分，掌握绿原酸的相关性质，设计提取方案 2、掌握pH 梯度萃取法分离所需成分 3、掌握聚酰胺柱层析的方法 二、实验试剂、仪器 试剂：金银花，乙醇（70%、10%），盐酸（6mol/L ），乙酸乙酯，NaOH （5%），乙酸，聚酰胺，硅胶 仪器：冷凝回流装置，抽滤装置，旋蒸仪，分液漏斗，层析柱 三、绿源酸的提取、分离和纯化 （1）提取： 称取金银花50g 加入1000mL 的圆底烧瓶中，加入500mL （10倍量）70%的

乙醇，75℃冷凝回流3h，倒出液体，再用400mL（8倍量）、400mL（8倍量）回流两次，每次2h,过滤，合并滤液，然后80℃下浓缩滤液或者是用旋蒸仪旋干滤液至无醇味。 （2）分离纯化： ①取金银花提取浓缩液，以浓度6mol/L的HCl溶液调pH值至3.0左右，以3倍量的乙酸乙酯分3次萃取，合并萃取液（乙酸乙酯层），以5%的NaOH溶液调萃取液pH至8.0左右，分取水层减压浓缩。 ②取金银花浓缩液，用聚酰胺拌样，用聚酰胺（80-100目）装柱（用量大概为绿原酸粗品的5倍），装入柱径与柱长比为1：7的层析柱中，常压下用10%的乙醇作为洗脱剂洗脱，收集流分，点样与标准品对照（标准品用50%的甲醇溶解，0.2mg/mL），合并相同流分，旋干即为所要提取的绿原酸。展开剂为乙酸乙酯：乙酸：水=2:1:1（硅胶色谱）。 (将相同流分合并后用乙酸乙酯重结晶能提高纯度)

金银花中绿原酸的提取及检测_乌兰.

下,随着球磨时间的增加,其剪切应力显著下降。 用幂方程τ=k γm (其中k 为稠度系数;m 为流动特征指数对曲线进行拟合,结果如表2所示。 由拟合结果可知,在不同温度下,相关系数R 2在0.9850~0.9993之间,这说明方程与曲线有较好的相关性。同一样品的稠度系数k 随着温度的升高而减小,说明温度升高可以减小体系的稠度,增强淀粉糊的流动性。在同一温度下随着球磨时间的增加,稠度系数k 显著下降,流动指数m 则是呈现增加的趋势,说明球磨后的绿豆淀粉更趋近于牛顿流体。 3结论 上述实验结果表明,机械球磨方法可以有效地将绿豆淀粉非晶化,球磨一定时间后淀粉颗粒的偏光十字消失,X -射线衍射曲线的尖峰衍射特征逐渐减弱,绿豆淀粉颗粒的结晶结构受到严重破坏。球磨处理后绿豆淀粉糊的流变特性在不同浓度和温度下发生了变化,绿豆淀粉糊随着球磨时间的延长稠度系数k 不断减小,而流动特征指数m 则不断增大,说明球磨处理后绿豆淀粉糊趋向于牛顿流体的特征。 参考文献:[1] Shinji Tamaki,Makoto Hismatsu,Katsunori Teranishi,et al.Structural change of maize starch granules by ball-mill treatment[J].S tarch,1998, 50(8:342-348.[2] Shinji Tamaki,Makoto Hisamatsu,Katsunori Teranishi,et al. Structural change of potato starch granules by ball-mill treatment[J].S tarch,1997,49(11:431-438.[3]胡飞,陈玲,李琳.马铃薯淀粉颗粒在微细化过程中结晶结构的变化[J].精细化工,2002,19(2:114-117. [4]

金银花中绿原酸的提取与分离

现代分离技术实验安排 一、实验说明 1、本课程实验为一次性综合大实验，采取分班进行，每班实验必须在连续两天内 完成，各组的实验安排均为周六和周日的上午8点到晚上的8点。 每次实验1个班，每个实验由两个人共同完成，即两人一组，每组一套实验仪器和一张实验台。每班的班长负责实验室的卫生和安全。 2、课程考核方法采用实验考察形式进行，每人只安排一次实验机会，过期不补，希 望各位同学能够按时参加。若有冲突，学生之间可相互对调。 3、进入实验室后，各组同学首先按照仪器清单检查仪器的数量和完好情况。若有 仪器短缺或破损等问题，请在上课后20分钟内与实验室工作人员及时联系，并要求实验人员进行补充或更换。 4、实验结束后，各组同学应对照仪器清单检查，分别洗净后交实验人员验收。如 有损坏或缺少，应按规定缴纳赔偿金。因此，希望同学们爱惜仪器，认真操作。 实验期间，应注意保持实验室台面、地面和水槽的卫生，尤其是自己的工作区域。同时应注意实验室的财产安全和自身安全，不可在实验室喧哗吵闹。 二、实验内容 题目：金银花中绿原酸的提取与分离 学习内容：固体中有效成分的提取（索氏法）技术； 减压浓缩（旋转蒸发）技术；硅胶吸附柱层析； 硅胶吸附TLC技术；薄层色谱对产品纯度检测 金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属多种植物的干燥花蕾，它是一种“药 食同源”的绿色植物，是临床常用的中药之一。具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆的功能，主治痈肿疗疮、喉痹、丹毒、热血毒痢、风热感冒、瘟病 发热、急性支气管炎、肺炎、腮腺炎、胆道感染、关节炎等，能改善放、化疗所 致的白细胞降低，有“中药中的青霉素”的美誉。另外，金银花还被广泛地应用 于保健品、化妆品、卷烟、食品等行业。近代研究一般认为金银花的主要生物活 性有效成分为绿原酸类化合物，并且常以绿原酸含量的高低来评价金银花质量的

金银花中绿原酸提取法

金银花中绿原酸提取法(索氏提取法为最佳提取方法) 1 . 1 主要材料与仪器 金银花( 购自药房) , 无水乙醇( AR ), 甲醇( A R 厂) , 乙酸乙酯( AR )。 索氏提取器(上海洪纪仪器设备有限公司),ESJ2 05 4型电子天平( 沈阳龙腾电子有限公司),UV 22 50 型紫外分光度计( 日本岛津) , 水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂) , KD M 型可调控温度电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司), 800 1 离心机(江苏金坛市荣华仪器制造有限公司), K Q 50 B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) 。 1 . 2 标准曲线的绘制 准确称取绿原酸对照品1 0 m g , 用60 %乙醇溶解并定容至50 m L ,备用.然后分别取0 . 0 、0 . 5 、1 . 0 、2 . 0 、3 . 0 、4 . 0 、5 . 0 mL , 再用60 %乙醇定容至50 mL以4号标准样在200 ~ 600 n m 波长范围内进行波长扫描, 测出绿原酸的最大吸收波长为326 n m。然后以60 % 乙醇作空白对照,测定每个标准样的吸光度( A ) 值。再以吸光度( A )值为纵坐标, 以标准样品质量浓度为横坐标绘制标准曲线。得到回归方程y = 9 . 8019 x+ 0 . 0186R2= 0 . 999 3 。 1 ) 索氏提取法 干燥的金银花用研钵研碎, 称取10 g , 用滤纸包好, 置于索氏提取器中, 取有机溶剂80 mL , 先往索氏提取器中加70 % 的甲醇至与虹吸管相平, 剩余液体加入圆底烧瓶中, 对样品浸泡2 h , 然后在水浴锅上加热回流, 控制温度在70 左右, 虹吸5 次。把回流液倒于蒸馏瓶中进行减压蒸馏至30 mL , 超声溶解, 用0 . 25 u m 滤膜过滤, 测定其吸光度。 2 ) 超声波法 干燥的金银花用研钵研碎, 称取6 g , 置于锥形瓶中, 加入准确量取的100 mL 蒸馏水, 超声溶解,一段时间后过滤, 向滤渣中再加100 mL 蒸馏水,重复上述步骤, 把所得的滤液在离心机以3 000 r /m i n离心10 m i n .在把溶液进行减压蒸馏至30 mL ,得待测液, 测定其吸光度。 3 ) 水提法 干燥的金银花用研钵研碎, 称取6 g , 置于锥形瓶中, 加入准确量取的1 00 mL 蒸馏水, 水 浴加热,控制好温度, 一段时间后过滤, 向滤渣中再加100mL 蒸馏水, 重复上述步骤, 把所 得的滤液在离心机以3000 r /m i n 离心10 m i n 。在把溶液进行减压蒸馏至30 mL 得待测液, 测定其吸光度。