【开题报告】龙头鱼微卫星标记的开发及筛选

开题报告

生物科学

龙头鱼微卫星标记的开发及筛选

一、论述龙头鱼微卫星多态标记研究现状，说明选题的依据和意义

目前，国内对龙头鱼的研究主要集中在属间的远缘杂交等方面，但是尚未研究成功。对龙头鱼微卫星多态标记的开发目前尚未见报道，而本文主要是通过对龙头鱼微卫星进一步研究，希望能够利用远缘杂交所带来的杂交优势获得具有优良性状子代，那在生产上或遗传学上都将有重大意义。

微卫星标记技术是基于基因组DNA水平的差异进行检测，不受组织，器官种类、环境条件等因素影响，因此可作为水生动物种质鉴定、亲缘关系及种质分类等研究的理想标记。

龙头鱼俗称狗母鱼，属于脊索动物门,硬骨鱼纲,灯笼鱼目,狗母鱼科,龙头鱼属。其形体柔软，长形，略侧扁，头背稍圆。吻短，钝圆，口甚大。龙头鱼生活于暖温性海洋的中下层。运动能力不强。常栖息于浅海泥底的环境中。每年春季为产卵期。杂食性，以小鱼、小虾、底栖动物为食。分布于印度洋和太平洋、我国南海、东海和黄海南部均产之、尤以浙江的温、台和舟山近海以及福建沿海产量较多。属暖水性底层近岸鱼类，缓潮时常到上层。一般只在近海作短距离移动。属捕食性鱼类，生长甚快。以3～4月和9～12月渔获为大。

鉴于恢复与保护野生龙头鱼资源的需要,有必要对龙头鱼的种质遗传基础和种质资源鉴定开展深入的研究。目前,有关龙头鱼群体遗传背景方面的研究很少,仅见于部分学者对龙头鱼野生群体和养殖群体进行了RAPD 分析。然而,迄今为止,尚未见有关龙头鱼微卫星标记研究方面的报道,这严重制约了微卫星标记在龙头鱼遗传学研究中的应用。因此,筛选多态信息含量丰富的龙头鱼微卫星标记,分析龙头鱼群体遗传结构用于标记选择育种等,具有重要的理论意义和应用价值。然而,利用微卫星标记最关键的一步就是微卫星位点的分离和富集。目前,常用的富集微卫星标记的方法主要有3 种: ①构建目标生物小片段插入基因组DNA 文库,通过含有重复序列的探针筛选含有微卫星的阳性克隆; ②通过生物素探针结合链霉亲和素包被的磁珠进行微卫星DNA 片段的富集; ③从公共核酸序列数据库资源中筛选微卫星。其中,传统的构建小

片段插入基因组文库和利用磁珠富集技术筛选微卫星的方法非常繁琐,不仅需要大量的时间和经费,而且获得微卫星的效率较低;在当前公共核酸数据库中也没有足够的有用序列来进行微卫星标记的筛选。这严重阻碍了微卫星技术在许多物种上的推广和应用。因此,必须发展新的方法来解决这道难题。

二、研究的基本内容，拟解决的主要问题：

研究的基本内容：通过构建龙头鱼基因组微卫星富集文库,分离微卫星DNA 序列并对其特征进行分析。

解决的主要问题：

1. 从龙头鱼样本中提取其总DNA。

2. 建立龙头鱼微卫星富集文库

3. 开发多态的微卫星标记；

4. DNA测序

5.筛选微卫星标记；

三、研究步骤、方法及措施：

研究步骤：1. 查阅相关资料, 构建龙头鱼基因组富集文库；

2. 仔细阅读研究文献资料并翻译相关英文资料；

3. 在老师指导下进行克隆、测序；

4. 设计微卫星引物，最终获得多个个多态的微卫星位点；

5. 对开发龙头鱼的多态进行微卫星标记;

6. 构建遗传连锁图谱；

7. 数据整理和分析，撰写毕业论文；

8. 上交论文初稿；

9. 反复修改论文；

10. 论文定稿。

方法、措施：

查阅文献，参考已知文献中关于龙头鱼类微卫星多态的标记开发，构建龙头鱼小片段部分基因组DNA文库。经引物的扩增，得到每个个体的微卫星片段，其中引物能扩增出较好的谱带。用2%的琼脂糖凝胶电泳检测微卫星标记的PCR扩增产物，并对扩增结果进行了统计分析。

四、参考文献

[1]张小谷，童金苟，熊邦喜. 微卫星标记在鱼类遗传及育种研中的应用[J]. 农业生物技术学报，2006，14 (1) : 117 - 121.

[2]李红蕾，宋林生，王玲玲，等. 栉孔扇贝EST中微卫星标记的筛选[J]. 高技术通讯，2003，12: 72 - 75.

[3] 林凯东，罗琛. 鲤的微卫星引物对草鱼基因组分析适用性的初步研究[J]. 激光生物学报，2003，12 (2) : 121 - 127.

[4]孙效文，梁利群. 鲤鱼遗传连锁图谱(初报) [J].中国水产科学，2005，12(2): 192-196.

[5]刘志毅，相建海. 微卫星DNA分子标记在海洋动物遗传分析中的应用[J]. 海洋科学，2001，25 (6): 11-13.

[6] Ellegren H,Microsatellite evolutin:a battle between replication slippage and point mutation,Trends in

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[7] Malia A J R,Glenn C G,George K R,Isolation and characterization of nine microsatellite loci from the

Hawaiian grouper Epinephelus quernus(Serranidae) for population genetic analyses,Marine Biotechnology,2003.

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[9] Zhao H, Waite JH. Coating proteins: structure and cross-linking in fp-1 from the green shell mussel

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[10] Waite, JH. Nature’s underwater adhesive specialist. Chemtech. (1987).17, 692–697.

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[12] Benedict CV, Waite JH. (1986). Composition and ultrastructure of the byssus of Mytilus edulis. J Morphol.

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[14] Waite JH. (1999). Reverse engineering of bioadhesion in marine mussels. Ann N Y Acad Sci, 18(875): 301-

309.

微信营销社会实践报告

微信营销社会实践报告 篇一：暑期社会实践论文+微信营销 浅谈微信营销存在的问题及对策摘要: 途经闹市，看到商家的促销广告，掏出手机上微信，并扫描商家二维码参与抽奖、购买产品等营销活动，相信我们不少市民都体验过，尽管微信问世才几年，但微信营销已经走进了我们的日常生活。无论是商家还是用户，大家都把微信当作日常生活中必不可少的一部分，也正是这份热度，让互联网一些从事人员看到了营销的商机，利用微信庞大的用户量以及较高的打开率做起了买卖。但是从实际角度出发，微信营销目前仍存在很多短板问题，制约微信营销的发展。本文就微信营销存在的问题以及解决对策进行了简要探讨。关键词：微信营销发展现状问题及对策

微信营销是以微信作为营销平台，通过查找微信号、添加QQ好友等多种方式获得微信好友，每一个微信好友都是潜在营销对象，每个企业通过微信公众平台向网友传播企业、产品的信息，树立良好的企业形象和产品形象。每天的更新的内容就可以跟大家交流，或者有大家感兴趣的话题，这样就可以达到营销的目的，这样的方式就是新兴推出的微信营销。 微信是基于QQ好友，手机通讯录的强关系链。它把庞大的QQ用户和手机通讯录联系在一起，这样使朋友间的联系更加紧密和频繁，加强了彼此的沟通和交流。微信是未来移动互联网的关键入口，移动互联网如此之火，很多公司包括互联网公司都争先寻找互联网的入口，都知道移动互联网是一块很大的肥肉，所以未来微信可能成为腾讯进入移动互联网的最佳入口。 而且，微信软件本身免费，使用任何功能都不会收取费用，微信时产生的

上网流量费由网络运营商收取。⒈2012年3月底，微信用户破1亿，耗时433天。2012年9月17，微信用户破2亿，耗时缩短至不到6个月。截至2013年1月23日，微信用户达3亿，时间进一步缩短至5个月以内。如今，微信有着近6亿的用户数量，而且仍在加速普及中。 从上面的数据，可以得知 2.微信之所以能够成为一种营销工具，这是由于微信的高速增长背后的两个原因：第一是腾讯的7亿海量用户；二是手机上网用户已经超过了4亿。这两个巨大的数字正是商家所要利用的，把数字变成自己产品的目标客户，成为自己产品的受众。数字背后是网络化后潜在的巨大市场，而微信正好成为一种桥梁， 把客户和商家联系在一起了。微信在移动互联网领域开创的新局面，显示了微信本身的时代影响力。但是，商家广泛使用微信作为营销工具，狂热过后便应该冷静思考微信营销究竟能走多远。微信营销存在哪些问题？我们该如

浙江省主要水稻品种微卫星标记数据库的初步构建

浙江省水稻品种DNA指纹数据库的初步构建及其应用 程本义1吴伟2*夏俊辉1刘鑫2庄杰云1杨仕华1 (1中国水稻研究所，浙江杭州310006；2浙江省种子总站，浙江杭州310020；*通讯联系人，E-mail:wuwei1610@https://www.wendangku.net/doc/3f16739178.html,) 摘要：利用前期研究建立的一套水稻品种DNA指纹检测技术体系，对2002-2006年浙江省主要的水稻品种98个、2007-2008年省区试水稻品种155个（181个次，含26个续试品种）进行了DNA 指纹检测，构建了279个次水稻品种×12个微卫星标记的DNA指纹图谱数据库。系统分析了指纹库中各标记的多态性和品种的相似性。基于构建的指纹数据库，对所有品种的特异性及区试续试品种年度间的一致性进行了鉴定。 关键词：水稻品种；微卫星标记；DNA指纹库；特异性 Construction and Application of DNA Fingerprint Database of Rice Varieties in Zhejiang Province CHENG Ben-yi1,WU Wei2,*,XIA Junhui1,LIU Xin2,ZHUANG Jie-yun1,YANG Shi-hua1 (1China National Rice Research Institute,Hangzhou310006,China;2Zhejiang Provincial Seed Management Station,Hangzhou310020,China;*Corresponding author,E-mail:wuwei1610@https://www.wendangku.net/doc/3f16739178.html,) Abstract:A total of98major rice varieties in Zhejiang province from2002to2006 and155rice varieties in Zhejiang provincial regional trial from2007to2008were assayed with a set DNA fingerprint testing system on rice variety.A DNA fingerprint database containing genotypic data of279rice variety times at the12marker loci was constructed.The polymorphism of different markers and genetic similarity of varieties in the DNA fingerprint database were analyzed.Based on the DNA fingerprint database,the distinctness of all rice varieties and consistency of the same varieties in different years were identified. Key words:rice variety;microsatellite marker;DNA fingerprint database; distinctness 特异性（Distinctness）是农作物新品种权申请和品种审（认）定的前提条件。“九五”中后期以来，在种子产业快速发展的推动下，浙江省包括水稻在内的农作物品种数量明显增加，在促进农业生产发展的同时，也不同程度存在品种雷同、侵权等现象。而目前，水稻品种特异性鉴定的主要方法是新品种DUS测试，该方法测试周期长、工作量大，难以及时高效地对浙江省大量水稻品种进行特异性鉴定，有必要寻求一种快速、准确、高效的新方法。 二十世纪九十年代以来，随着分子生物学的发展，以分子标记为基础的DNA指纹 基金项目：浙江省“三农五方”科技协作项目（Sn200606）；中央级公益性科研院所专项资金项目（2006RG002）。 作者简介：程本义（1977-），男，浙江淳安人，助理研究员，主要从事水稻新品种评价和品种DNA指纹鉴定研究。 E-mail：cby_951019@https://www.wendangku.net/doc/3f16739178.html,。

生物科学专业_开题报告范例

XX大学本科生毕业论文（设计）开题报告 毕业论文（设计）题目应用原生质体融合技术构建耐胆盐、耐酸乳酸菌菌株 选题类型应用基础型课题来源自选项目 学院生命科学与理学院专业生物科学 指导教师×××职称×× 姓名×××年级2006级学号××× 开题报告（立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献） 1立题依据 2一、选题的理论意义与实践意义： 3选题理论意义: 黄瓜（Cucumis sativus Linn）是我国广泛栽培的夏秋季主要蔬菜之一。它喜温怕热，在胁迫因子当中，夏季高温是影响黄瓜幼苗地上部分生长发育的主要因子，露地和保护地栽培均存在高温热害，高温影响黄瓜的光合作用、呼吸作用和矿质元素的吸收，从而易使黄瓜授粉受精失败，落花落果，严重影响了黄瓜的产量和品质，因此黄瓜耐热性的提高是露地及保护地栽培需要解决的重要问题。 4硒作为谷胱甘肽过氧化物酶系（GSH-Px）的组成成分，参与作物体内自由基的消除，进而提高了植物对逆境的抗性，硒的使用可显著提高黄瓜叶片GSH-Px 的活性，使叶片中丙二醛(MDA)的含量明显降低。高温胁迫下，硒还能中和与衰老相关的氧化胁迫。 5实践意义：高温胁迫使黄瓜的品质下降，严重影响栽培设施的利用效率及黄瓜设施栽培的高效可持续发展。因此，研究硒对高温胁迫黄瓜幼苗地上部的生长调节，可以采取有效措施，对于黄瓜设施生产具有重要意义 牛奶的组成最为接近人体母乳，含有人体所需的全部营养成分，营养最为丰富和均衡，在人们的膳食结构中有其它食品无法替代的地位和作用。由新鲜牛奶发酵成的酸奶由于其丰富的营养、特殊的风味、爽滑的质构和良好的生理功能，倍受人们青睐[1]。在当今社会，酸奶早已成为人们茶余饭后的饮料，酸奶所具有的独特功效备受人们喜爱。1908年俄国诺贝尔奖获得者E．Metchnikof提出“酸奶长寿”理论，认为高加索地区居民长寿者多的原因是由于食用大量的含有乳酸菌的酸奶。

微卫星DNA标记

1微卫星DNA标记的发现 1974年，Skinner等在研究寄居蟹的基因组时发现了微 卫星DNA的重复序列。此后，在人、动物和酵母的基因组中都发现了类似大量的简单重复序列。直到1986年，Ail等首次用合成的微卫星寡核苷酸作为探针用于人的指纹分析，这时才得到重视。1988年，Jeffreys等人做了进一步的研究并使之发展成为新的遗传分子标记系统。1989年，Litt等[1]扩增到了人类基因组微卫星序列，从而创造了“微卫星（microsatellite）”这个名称。 2微卫星DNA的结构 微卫星DNA又称简单重复序列(simplesequencere-peats，SSR)或短串联重复序列(shorttandemrepeats，STR)，是指以少数几个核苷酸（一般是1~6个）为单位串联重复的DNA序列。这些重复序列的重复次数和重复程度在不同的生物体内高度变化，并且随机分布于真核生物基因组中。普遍认为，在染色体上，除着丝粒及端粒区域外，其他区域也广泛散在分布有微卫星位点。Weber根据微卫星核心序列排列方式的不同，将其分为完全（无间隔）、不完全（有非重复单位的碱基间隔）和复合型（2个或更多重复单位彼此毗邻连续出现）微卫星3种类型。 3微卫星DNA标记的优缺点 3.1优点 ①分布广泛。微卫星DNA广泛且均匀地分布于真核生物基因组中。②多态性丰富。由于微卫星在不同个体中的重复单位数目变异大，因而造成其长度具有高度的多态性，使其可以包含大量丰富的信息。③简易高效安全性。微卫星检测方法简便且效率高，单个位点检测时间很短，一般不超过24h，并可以多个位点同时进行检测。微卫星标记没有任何表型效应，因而不存在对家畜个体的有害或次级效应。④保守与通用性。微卫星侧翼序列的保守性以及物种间某些染色体区段的共线性，某一物种的微卫星引物可以应用于相近物种。⑤共显性遗传。微卫星标记的等位基因遵循孟德尔共显性遗传，因而易区分纯合型和杂合型。 3.2缺点 ①建立和筛选基因文库，进行克隆和测序，都是非常繁琐、耗时的工作。②由于不同物种的微卫星侧翼序列不尽相同，因此针对不同物种设计相应的特异性引物也非常耗时。③微卫星进化具有复杂性，可能出现同源异型或异源同型。④PCR 扩增受许多因素的影响，使一些等位基因无法被扩增出来，即“无效基因”。影响亲子鉴定的正确性。⑤目前还没有发现哪个DNA探针能很好地匹配他们各自的多态性 4微卫星DNA的筛选方法 获得微卫星DNA的常规方法主要有两种:①通过构建基因组文库,核心重复序列探针标记,杂交筛选,测序及特异引物设计等一系列步骤;②可利用近缘物种间某些染色体片段的同源关系,以已知的微卫星DNA引物作跨物种使用,从中筛选出适宜于另一物种的微卫星DNA标记. 5微卫星DNA的筛选步骤: ①基因组文库的构建,提取基因组DNA,酶切后与载体连接,将连接产物转入大肠杆菌,涂板后在37℃下培养,用α-互补法筛选阳性的重组质粒;②质粒DNA的提取;

微信营销策略分析

微信营销策略分析 摘要 21世纪新时代我们的传播方式和传播内容也呈现出转型的趋势，以互联网新媒体为代表的传播方式正逐步升级发展，实现传播方式的整合，而这直接催生了新媒体时代。新媒体背景下，微信营销应运而生。在新媒体营销环境下，品牌企业要想逐渐打破传统单一线下销售的格局，充分利用微信营销平台的优势，进而拓展品牌企业营销之路。本文从微信营销的定义及发展历程出发，分析了新媒体视角下微信营销传播特点和传播模式，分析当前微信营销存在的问题，最后为服装品牌企业未来使用微信进行营销提供一些参考。 关键词：微信营销；传播策略；新媒体

目录 1.引言 (3) 2.理论综述 (3) 2.1微信的定义与特点概述 (3) 2.1.1微信的定义 (3) 2.1.2微信的特点 (4) 2.2微信营销的定义 (5) 3.微信营销传播发展趋势 (6) 3.1微信营销传播规模扩大化 (6) 3.2微信营销传播策略多样化 (7) 3.3微信营销传播平台综合化 (8) 4.微信营销存在的问题 (8) 4.1网络信息真假难辨,商品质量有待保证 (8) 4.2微信营销平台不够完善 (9) 4.3品牌推广营销需求难以实现 (9) 4.4粉丝互动感知度低，推送信息阅读率低 (9) 5.微信营销传播策略 (10) 5.1加强微信网络信息安全建设，严格微信商户准入门槛 (10) 5.2加强微信平台建设 (10) 5.3重视品牌推广和微信营销开展 (11) 5.4突出个性，丰富内容，增强互动 (11) 6.结束语 (12) 参考文献 (12)

1.引言 微信是腾讯公司在2011年推出的一款社交网络软件，支持短信、即时通讯、语音聊天、LBS定位等多种沟通功能，适用于手机终端。微信一经推出变风靡整个手机APP市场，不到两年时间用户突破3亿，而通过微信积聚起来的庞大的用户群体为网络营销提供了最优质的平台。2014年开放微信支付功能，2015年微信用户突破6亿，用户覆盖了全球200多个国家和地区，共发布了超过20多个语言版本的系统。国内微信月活跃用户超过2.7亿，而微信公众号增长在最近的一年中达到200多万个，信息交互次数超过亿次。微信的飞速发展，让腾讯公司创作了一项奇迹，而微信作为主流的社交瓶体，为很多企业创造了无数的营销商机。微信精确定位营销、口碑式传输、病毒式传播等特点，拥有巨大的注册用户群体，成为当前许多互联网商家必争的营销平台。许许多多商业品牌在微信中进行宣传营销，并取得了巨大的成功。微信营销是随着互联网科技更新发展而产生的一种与传统营销方式截然不同的营销方式，企业以微信为公众平台，发布商品和服务营销信息，从而实现在自己品牌、服务以及产品的营销。在微信公众号平台上企业可以与用户进行即时交流，缩短商家与用户之间的距离，从而实现以最低的营销成本获得高收益的目的。以服装品牌为例，服装品牌在经历了网络营销和微博营销后，进军微信营销，并形成了一定规模和独具特色的线上线下微信互动的营销模式。 2.理论综述 2.1微信的定义与特点概述 2.1.1微信的定义 微信是2011年1月腾讯公司退出的一款即时语音文字聊天、图片发送、支持实时多人对讲的交际软件。微信支持文字、图片、语音、视频等多种格式文件的发送，并逐步推出了朋友圈、公众号、信息分享等功能，添加好友和关注公众号的方式多种多样。此外微信支持多国语言，支持WiFi、2G、3G、4G等移动数

微卫星荧光标记基因组扫描

文章编号:1007-7847(2000)S0-0018-06 微卫星荧光标记基因组扫描 X 邓 昊,何云贵,夏家辉(湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室,中国湖南长沙 410078) 摘 要:微卫星荧光标记基因组扫描为20世纪90年代发展起来的一项分子生物学技术,在基 因定位、个体识别等方面有广泛的应用.文中对其原理、策略、分析方法及应用作了论述,并探讨 了它的发展前景. 关键词:微卫星;荧光标记基因组扫描;基因定位;分析方法 中图分类号:Q78 文献标识码:A Fluorecence -based Genescan with Microsatellite Markers DENG Hao,HE Yun -gui XIA Jia -hui (National Laboratory of Medical Genetics,Hunan Medical University ,Changsha 410078,Hunan,China) Abstract:Fluorescence -based genescan with microsatllite markers is a molecular -biology technique which developed in 1990p s.It is used widely in the field such as gene mapping,personal identifica -tion.Here we demonstrate its principle,research stra te gy,analysis methods,applications and discuss the developing prospec t. Key words:microsatellite;fluorescence based genescan;gene mapping;analysis method 人类基因组计划已开展了近10年,1999年12月1日美、日等国科学家宣布,人类22号染色体的测序工作业已完成,其余染色体的大规模测序工作在近3年也已将完成.运用大规模测序的大量数据,将cDNA 与致病基因一一对应起来,将疾病定位到染色体某一位置后进行突变检测,不失为基因克隆的一条捷径.微卫星(Microsatellite)DNA 标记是简单重复的DNA 片段,每个重复单位一般1~6个碱基(bp),重复次数10~20次左右,广泛存在于真核生物中[1].由于其种类多,高度多态,基本上呈平均分布并可用PC R 检测,具有共显性遗传特征,因而广泛用于遗传作图.近年来绝大部分基因定位和克隆都运用了微卫星荧光标记的基因组扫描分析技术. 1 原理与策略 微卫星DNA 在人基因组中平均每30kb 存在1个,人类基因组中以(CA/GT)n 重复序列 第4卷 第2期(专辑)2000年6月 生命科学研究Life Science Research Vol 14 No 12(Suppl.)Jun 12000 X 收稿日期:2000-06-12 基金项目:国家杰出青年基金资助项目(39525012);国家自然科学基金重大项目(39896200) 作者简介:邓昊(1973-),男,湖南长沙人,硕士研究生,从事细胞遗传学和分子遗传学研究;何云贵(1970-),男,湖南湘乡人,博士研究生,从事细胞遗传学和分子遗传学研究;夏家辉(1937-),男,湖南医科大学教授,中国工程院院士,博士生导师.

微生物学专业硕士研究生培养实施方案

微生物学硕士研究生培养方案 一、培养目标 在思想品德、业务水平、工作能力等方面达到较高要求，成为从事微生物科研、教学、技术推广和管理工作的高层次人才。 1、思想素质上。要求较好地掌握马克思主义、毛泽东思想和邓小平理论，拥护党的基本路线，热爱祖国、献身农业，遵纪守法，品德高尚，爱岗敬业，治学严谨，具有强烈的开拓意识，创新精神及组织协作的科学作风，积极服务于社会主义现代化建设。 2、业务素质上。掌握本学科坚实的基础理论，系统的专门知识和熟练的实验操作技术。具有较强的社会实践能力，以及分析和解决问题的能力，了解所从事研究方向的国内外发展动态，有较强的独立从事教学、科研、技术推广和管理工作的能力，能用外语较熟练地参阅专业外文资料，具有初步的听、说、写能力，能通过论文的发表阐明研究工作的进展及成果。 3、身体健康。 二、研究方向 1、应用微生物学 2、微生物分子生物学 三、学习年限 全日制攻读硕士学位研究生的学习年限一般为 2.5 —3年，可根据实际情况允许提前或延 期毕业。非全日制攻读硕士学位的学习年限一般不超过4年。 四、培养方式 1、实行导师负责制。以导师为主建立研究生指导小组，由导师和指导小组全面负责研究生培养工作，制定培养计划，对论文进行全面指导。 2、研究生入学半年后在导师和指导小组的指导下确定培养计划。结合自身和本学科发展需要以及研究领域所需的知识结构，确定选修课程，鼓励跨学科选修。 3、研究生在导师和指导小组指导下，积极参加各种学术活动、教学实践和社会实践。 4、学习课程考核。公共课及专业基础课以笔试为主，专业课采用笔试和专题报告相结合的方式，重点考核对专业知识的把握程度及其基础理论分析实际问题的能力。 5、研究生入学后第四个学期进行中期考核。由学科点有关教师组成的考核小组对研究生的课程学习情况、毕业论文的准备（开题报告）和进展情况以及对本学科国内外最新研究动态的了解掌握情况等进行综合检查和考核，对考核不合格或完成学业确有困难者，劝其退学或作肄业处理。其中对成绩优秀的硕士研究生优先考虑作为提前攻读博士学位的人选。 五、课程设置

【开题报告】龙头鱼微卫星标记的开发及筛选

开题报告 生物科学 龙头鱼微卫星标记的开发及筛选 一、论述龙头鱼微卫星多态标记研究现状，说明选题的依据和意义 目前，国内对龙头鱼的研究主要集中在属间的远缘杂交等方面，但是尚未研究成功。对龙头鱼微卫星多态标记的开发目前尚未见报道，而本文主要是通过对龙头鱼微卫星进一步研究，希望能够利用远缘杂交所带来的杂交优势获得具有优良性状子代，那在生产上或遗传学上都将有重大意义。 微卫星标记技术是基于基因组DNA水平的差异进行检测，不受组织，器官种类、环境条件等因素影响，因此可作为水生动物种质鉴定、亲缘关系及种质分类等研究的理想标记。 龙头鱼俗称狗母鱼，属于脊索动物门,硬骨鱼纲,灯笼鱼目,狗母鱼科,龙头鱼属。其形体柔软，长形，略侧扁，头背稍圆。吻短，钝圆，口甚大。龙头鱼生活于暖温性海洋的中下层。运动能力不强。常栖息于浅海泥底的环境中。每年春季为产卵期。杂食性，以小鱼、小虾、底栖动物为食。分布于印度洋和太平洋、我国南海、东海和黄海南部均产之、尤以浙江的温、台和舟山近海以及福建沿海产量较多。属暖水性底层近岸鱼类，缓潮时常到上层。一般只在近海作短距离移动。属捕食性鱼类，生长甚快。以3～4月和9～12月渔获为大。 鉴于恢复与保护野生龙头鱼资源的需要,有必要对龙头鱼的种质遗传基础和种质资源鉴定开展深入的研究。目前,有关龙头鱼群体遗传背景方面的研究很少,仅见于部分学者对龙头鱼野生群体和养殖群体进行了RAPD 分析。然而,迄今为止,尚未见有关龙头鱼微卫星标记研究方面的报道,这严重制约了微卫星标记在龙头鱼遗传学研究中的应用。因此,筛选多态信息含量丰富的龙头鱼微卫星标记,分析龙头鱼群体遗传结构用于标记选择育种等,具有重要的理论意义和应用价值。然而,利用微卫星标记最关键的一步就是微卫星位点的分离和富集。目前,常用的富集微卫星标记的方法主要有3 种: ①构建目标生物小片段插入基因组DNA 文库,通过含有重复序列的探针筛选含有微卫星的阳性克隆; ②通过生物素探针结合链霉亲和素包被的磁珠进行微卫星DNA 片段的富集; ③从公共核酸序列数据库资源中筛选微卫星。其中,传统的构建小

微卫星位点筛选方法综述

论文综述 微卫星分子标记筛选方法综述 摘要：微卫星是一种短的串联重复序列(short tandem repeat, STR)或简单重复序列(simple sequence repeats, SSR)。它作为一种重要的分子遗传标记，能较好地反映物种的遗传结构和遗传多样性变化，被广泛应用于实验动物的研究。本文概述了获得和富集微卫星位点的常用方法。最简便、最省时的方法是从从公共数据库（如Genbank、EMBL、EST数据库等）或已发表的文献中查找到微卫星位点，但只限于已经有序列数据发布的物种；第二种方法是种间转移扩增，即从相近物种的数据库中查找微卫星位点，或使用已有数据发表的遗传距离相近物种的微卫星标记。第三种方法是从基因组DNA中筛选微卫星位点，其中用于富集微卫星的方法有引物法、磁珠杂交法、尼龙膜杂交法以及分子标记技术法。 关键词：微卫星；分子标记；实验动物 微卫星（Microsatellite），又称为简单序列重复（Simple Sequence Repeat , SSR），短串联重复（Short Tandem Repeat STR），是以少数几个核苷酸（一般1～6个）为重复单位的串联重复DNA序列。微卫星位点广泛分布于真核生物的基因组中[1]，在植物基因组中平均每33 Kb存在一个20 bp长的微卫星位点，而在哺乳动物中每6 Kb存在一个20 bp长的微卫星位点[2]。并且SSR的重复次数不同和重复程度不同，使其呈现高度的多态性。微卫星标记共显性的特点使它能够用于研究等位基因，区分二倍体（或多倍体）的纯合体或杂合体，这是AFLP、RAPD 等显性标记所无法做到的。另外，微卫星的特异性引物扩增具有良好的重复性和保真性，方便各实验室间的交流。目前，微卫星标记已被广泛应用到基因连锁与遗传图谱构建、遗传多样性研究、谱系和发育研究、疾病检测以及品种鉴定、亲本分析与个体、纯系检验上。 随着微卫星标记在图谱上的丰富,将显现出更大的优势。但微卫星分析中引 物的获得需要预先获知核酸序列,其广泛应用受限于从特定的物种中分离微卫星 位点的难度和花费。微卫星标记分离最大的困难是引物的获得。同RAPD、AFLP 等遗传标记不同，微卫星研究首先需要获知位点的序列信息，以便从重复序列两端侧翼的保守序列中设计引物。因而微卫星引物的开发是应用该技术的关键。目前已知微卫星位点的物种很有限，这是因为微卫星位点的获得需经过克隆、杂交筛选、测序等步骤，因此需花费一定的人力、金钱，这限制了微卫星标记的大量

基于微信公众平台的家教服务系统开题报告

基于微信公众平台的家教服务系统开题报告

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ＸX大学本科毕业设计(论文）开题报告 学院专业 学生姓名学号 指导教师职称 合作导师职称 论文题目基于微信公众平台的家教服务系统 一、选题背景和意义 随着计算机技术的发展与壮大,互联网极大地改变了人们的生活方式,丰富 了人们获取信息的途径，使得人们更倾向于通过网络查询自己所需要的信息。而现在我国的教育仍然是以文化科的学习为主,以成绩为重,特别是每年的小升中、中考、高考，是每位有志学子为之奋斗的目标。因此，每位望子成龙、望女成凤的家长都会为自己的孩子找一个优秀的家教，让他们在假期、周末甚至是每天晚上来辅导孩子的功课。而大学生作为经历过中考、高考的成功者，有着非常宝贵的学习与考试经验,也就成为了家长对家教的最理想选择。 大学生获得家教信息的途径主要有通过中介公司介绍、通过兼职网站介绍以及通过同学推荐。这些获取家教信息的途径都需要付出一定的信息费才能获取它们,但是信息的真实性与有效性却还待检验，很多大学生都有过被中介公司坑骗的经历，所以很多大学生嫌麻烦，怕被骗，宁愿选择去发传单、送外卖这样的兼职工作，而这些兼职工作却不能让人得到有用的锻炼。大部分的家长更愿意选择所在地知名高校的大学生作为孩子的家教老师,而家长们获取家教信息的方式也主要是通过家教中介介绍,但是这些中介介绍的家教老师却往往不能满足家长和孩子的要求，这样不仅浪费了孩子的时间，也给家长造成不小的经济损失。现在在网络上也有很多的家教网站,虽然这些网站是以一种全新的方式出现在我们眼前,但是仍旧不能摆脱他们中介的本质，网站虽然允许家长和大学生以匿名的方式浏览部分信息，但是如果想要获取进一步的信息去联系对方,就需要注册登录并支付一定的费用。所以考虑到家教中介对大学生和家长的信息欺诈，我决定设计开发一个免费的大学生家教信息服务平台。该信息服务平台将在保证家教信息有效性的基础上,为大学生和家长提供一个信息发布、信息检索以及信息分享的空间。 在如今智能手机已经普及的时候，人们可以随时随地的上网，这是PC电脑所做不到的,所以做移动端软件比PC的更好，而做移动端的话常见的有传统aｐｐ和微信公众平台，传统ａpｐ开发成本比微信公众平台高，开发周期相对也会长一点,而且传统app的推广是个难题,一个ａｐｐ的体量少的几兆，多的几十兆，虽然现在家里单位WｉFi很普遍，但是总有找不到ＷｉFi却出现突发的app需求的时候,而依靠目前2g龟速，４g舍不得用的时候,许多人也是有心无力，而微信是每个智能手机用户手机里必装的一个应用,人们只需要搜索一个公众账号或者扫一个二维码，添加，然后就可以使用。传统ａpp升级也是个难题，不仅耗费时间流量，而且也有可能会破坏现有的使用习惯(升级后界面面目全非）,而微信公众平台不同,它的所有功能升级都在后台进行，用户并不需要去体验这个过程，只可能会在下次打开这个账号的时候发现功能更多了，仅此而已。在传统app中，两个不同领域的app 只能是隔绝的，而在微信公众平台中它们却能“在一起”,微信公众平台能将原本八

棉花微卫星标记的PAGE_银染快速检测

收稿日期:2000-06-24,3论文联系人 基金项目:国家自然科学基金(39830240,3980089),国家 转基因植物研究专项(J 992A 2023)资助项目 作者简介:张　军(1968-),男,在职博士研究生,工作单 位为山东省农业科学院.棉花微卫星标记的PA GE 银染快速检测 张　军,武耀廷,郭旺珍,张天真3 (农业部农作物种质资源与育种重点开放实验室,南京农业大学农学系,南京210095)摘要:利用一种简便、快速的PA GE 银染方法检测了异源四倍体棉花栽培种陆地棉与海岛棉之间 的微卫星多态性,并检测到了微卫星在陆地棉品 种间的多态及微卫星标记位点在陆地棉品种间的 复等位性。 关键词:棉花;微卫星;PA GE ;银染 中图分类号:S 562.035.3 文献标识码:A 文章编号:100227807(2000)0520267203Fa st Screen i ng of M icrosa tell ite M arkers i n Cotton w ith PAGE sil -ver Sta i n i ng ZHAN G Jun ,W U Yao 2ting ,GUO W ang 2zhen ,ZHAN G T ian 2zhen (A g rono m y D ep a rt m en t ,N anj ing A g ricu ltu ra l U n iversity ;K ey L abora tory of C rop Ger m p las m and B reed ing ,M in istry of A g ricu ltu re ,N anj ing 210095,Ch ina )Abstract :Po lym o rph is m of m icro satellite m ark 2ers betw een cu ltivars of allo tetrap lo id co tton species (Gossyp ium h irsu tum L .)and the seais 2land co tton (G .baba rd ense L .)w as screened u s 2ing a rap id and si m p le m ethod of PA GE silver stain ing .T he po lym o rp h ic and m u ltiallelic char 2acter of m icro satellite m arkers am ong up land co tton cu ltivars w ere iden tified as w ell .Key words :co tton ;m ico satellite ;PA GE ;silver stain ing 微卫星(m icro satellite )或短串联重复(STR ) 又称简单序列重复(SSR )。是指一类遍布于生物基因组中的由几个核苷酸对(称为核心序列,一般为1～6bp S )为重复单位组成的简单串联重复。其重复次数在同一物种不同的遗传型间是高度可变的,但这段重复的两端却是相对保守的单拷贝序列,据此设计引物,即可通过PCR 技术分析核心序列重复次数的变异,在不同的遗传型间检测到多态,称为简单序列长度多态性(SSL P )。微卫星首先是在人类遗传研究中发现的[1],以后发现在 植物中也普遍存在。现在,微卫星作为一种分子标 记技术已经用于植物遗传、育种研究。Yu 等[2]利 用研究开发出的棉花微卫星的引物,进行棉花遗 传图谱构建及Q TL 分析。但是,微卫星的长度很 小,一般为100～300bp S ,有时甚至小于100bp S , 其多态性有时仅表现为几个bp S 的差异。因此一 般的琼脂糖凝胶电泳很难检测微卫星的多态性。 早期的研究是在PCR 反应体系中加入一种用放 射性同位素标记的脱氧核苷酸底物,利用变性或 非变性的PA GE 经放射自显影检测多态性[3,4], 这给研究中利用微卫星标记带来很大的麻烦。利 用高分辨率的琼脂糖凝胶电泳可以检测到大多数 微卫星的多态[4],但这种琼脂糖凝胶的制备费时、 费力。Panaud 等[5]尝试利用PA GE 银染技术检 测微卫星的多态性。银染的灵敏度非常高,但一般 的银染方法操作比较繁琐,不容易控制染色背景, 使得结果不稳定。我们利用一种快速简便的银染 方法,通过非变性的PA GE 有效地检测了陆地棉 与海岛棉种间及陆地棉种内品种间微卫星的多 态性。1　材料和方法1.1　植物材料 陆地棉遗传标准系TM —1、海岛棉高产抗病 品系海7124及其杂交F 1。陆地棉6个栽培品种。 1.2　棉花基因组DNA 的分离纯化参考郭旺珍等[6]的方法。1.3　微卫星的PCR 扩增PCR 反应体系(67mM T ris 2HC l (pH 8.8), 16mM (N H 4)2SO 4,0.002%明胶,0.2mM dN T P S , 7 62　棉花学报　A cta Go ssyp ii Sinica 2000,12(5):267～269

益生菌开题报告

本科生毕业论文 开题报告 题目：益生菌奶片的研究 学生： 学号： 院（系）： 专业： 指导教师：

毕业设计开题报告 1.实验目的及意义 益生菌定义为“一种通过改善肠道微生物平衡从而对宿主施加有益影响的微生物添加物”。常应用的益生菌是产生乳酸的细菌，如嗜酸乳杆菌和双歧杆菌等，它们是人类肠道重要的生理菌，对机体有多种其它正常生理菌群无法比拟的生理作用。其生理作用包括：调整肠道菌群；提高蛋白质和维生素的代谢；防止便秘；产生抗菌素；缓解乳糖不耐症；治疗肝损伤；降低结肠癌的发病率；抗肿瘤；增强免疫系统；降低胆固醇；治疗泌尿系统感染等。肠道菌群的组成对人体营养、免疫、癌症、衰老等有着密切的关系，促进肠道中有益菌的增殖，抑制有害细菌的生长，对于高血压、高血脂、心脏病、糖尿病和癌症等生活习惯病防治方面的主要意义，已经引起各国的重视。因此，目前益生菌及其制品成为国内外研究热点，在食品、保健品、药品等领域已有多种益生菌制剂问世，并普遍受到广大消费者的欢迎。 而奶片的主要营养成分主要包括蛋白质、脂肪、碳水化合物等，由于其营养丰富、可直接食用、携带方便、保质期长等优点，与鲜奶相比，奶片无需冷藏、无需加热食用，已成为乳制品中的亮点。食用奶片可享受到牛奶的风味和质地，独有的加工工艺，保留了牛奶中多种营养成分。将益生菌加入奶片中，制成益生菌咀嚼奶片．这样在保留了牛奶的营养的同时又达到了上述的益生菌的生理保健目的。此产品成本中等，附加值高，可成为市场上新星的产品，有很好的市场前景。 2.产品研发现状 目前，奶片食品还没有国家标准，生产工艺较为简单，配方也无固定的模式，其硬度、粘度或营养辅料的比例视消费者的爱好或需要而定。各种配方的奶片执行各自企业制定的企业标准，营养成分含量的差别是比较大的。奶片的配方不统一，又随意性。尽管各种品牌奶片的配方不同，营养成分的含量也不尽相同，但是奶片中的蛋白质和脂肪含量应该，也大多是在70%左右，每天用量可折合鲜奶250毫升或奶粉30克。而且有关奶片的相关指标和规定尚未出台，从营养价值和卫生角度衡量，也没有一个统一的规范。在研究开发奶片产品时，必须要做到营养均衡，同时奶片产品应该有自身的特点，必须有良好的风味及口感，食用及携带方便，所以在研究开发奶片产品时，主要是从奶片产品的营养、风味及口感方面进行研究。

微信营销文献综述终审稿)

微信营销文献综述 文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-

精准营销新渠道—微信营销 文献综述 一、摘要 微博营销方兴未艾，微信又迅速成为众品牌商除官方微博外另一互联网营销热地。自2012年8月18日微信公众平台正式上线后，媒体、品牌商及名人使用更多的手段向他们的粉丝推送各种信息，微信的营销效果越来越不可忽视。微信营销，逐渐蔓延至国内的各个行业销售领域之中，并为改变现有的营销模式发挥着重要的作用。本文是对前人有关微信营销研究进行的归纳总结，经过分析说明，总结有关学者对微信营销的研究成果。对微信营销的模式，利弊，前景以及微信营销存在的问题和对策进行综述，并提出自己的思考方向。 二、主题 1.微信营销模式的诞生 近几年来，虽然国内的各个企业在电子营销方面都的带了大幅度的提升但那是其依旧会受到社会环境的影响和制约。当企业在市场销售过程中产生风险的时候，那么因为风险而产生的费用就会得到提升，而产品的销售也会一同受到影响，这对企业而言是十分危险的。怎样采用较小的投资方式获得较大的销售回报，也成为了企业所需要考虑的关键问题，微信的出现则是成为了解决企业营销模式的灵丹妙药。微信公众平台进行传播的主要方式就是二维码，二维码的出现对于国内外的众多企业而言是一个具备创造性的变革，其也为营销广告和媒体传播行业等带来了新的发展动力。在市场竞争日益激烈的今天，微信、二维码这些成本低、见效快的网络营销方式很快被众多企业所采用。

从目前开通微信企业来看，他们会把经销商拉到微信阵营来，企业可以让一些骨干员工参与，组建起一支企业的微信大军。从发布的信息来看，主要以品牌信息、行业资讯、企业活动、官方网站、促销活动等，其实都是为企业宣传、品牌塑造、资讯推送搭建了良好平台。 2.关于微信营销模式的探讨 (1)关于微信营销模式被人们所熟知的是以下四种模式： (2)LBS+“查看附近的人”功能，挖掘潜在客户群，开拓企业销售新渠道； (3)O2O+“二维码扫描”功能，助推品牌病毒式传播，打通企业线上和线下的关键入口； (4)微信公众平台+“朋友圈”新功能，打造全新社交关系链，开创企业口碑宣传新方式； (5)互动式推送微信，通过一对一的推送，品牌可以与“粉丝”开展个性化的互动活动，提供更加直接的互动体验。 张莉（2013）在分析企业微信的营销应用时，认为对企业来说，微信营销的以上的营销模式必须区别使用，对于不同的企业不同的产品服务，要采用不同的营销方式，如O2O+扫描二维码模式适用于餐饮，娱乐等产品或服务与用户紧密相联系的企业；她还指出微信营销的营销成本低，潜在客户多等优势。3.关于微信营销的定义与传统模式的对比 微信营销是网络经济时代企业对的创新，是伴随着的产生的一种网络营销方式，微信不存在距离的限制，用户注册微信后，可与周围同样注册的“”形

高效快速筛选新发现的微卫星位点的方法-HRM

高效快速筛选新发现的微卫星位点的方法-HRM 摘要：本文介绍了一种新的识别微卫星位点的方法，微卫星标记是一种功能强大的共显性标记，扩增产物可靠且可以确定已知物种的高度的多态信息含量，但是对于新位点的发现依然是一种费时费力的方法。相对于大肠杆菌文库分离方法，新一代测序技术（NGS）可以得到更多可用的候选基因。我们对已知微卫星引物的注释作了系统的论述，并发现无论采用什么分离技术，由于PCR 未充分扩增，基因位点的单态性或多拷贝都会导致一半以上的候选基因丢失。因此，在分子标记技术上，筛选候选基因依然是一个很关键的步骤。我们通过重新评估毛细电泳法进行基因分型，发现HRM可以用于基因分型及筛选候选基因，对此列出了具体的流程。通过该流程，或许我们可以快速地进行新一代标记的检测，并可以把费用降低到传统方法的一半甚至四分之一。 关键词：HRM 微卫星重新分离技术分子标记新一代测序技术群体遗传学 引言 微卫星也叫简单重复序列（SSRs），是群体遗传学中最强大的共显性标记，具有广泛的应用(e.g., Chambers and MacAvoy 2000; Ellegren 2004; Jarne and Lagoda 1996;MacDonald et al. 2011)。最近由于新一代测序技术（NGS）的发展正解决SSRs技术中的一个重要的缺陷，不能获得足够的设计引物的数据。扩增片段多态位点的选择，依然是一件费时费力的工作，这是SSRs发展

中的另一个瓶颈。因此我们引进了HRM用于识别潜在的SSR位点，并且HRM有望加快SSR的发展速度，降低传统方法的费用。SSRs 一般是以核心序列1-6bp为重复单位首尾串联而成的短的DNA序列(Wan et al. 2004)。微卫星具有高突变率、易于进行PCR扩增、便于毛细电泳法(CE)的分析以及可以利用许多软件工具进行生物学推论的诸多优点，使其在群体遗传学方面得到广泛应用。传统的SSR位点的重新分离，是借助于丰富的基因文库(Glenn and Schable 2005; Zane et al. 2002)，但是该法对于SSR位点不多的物种则不能检测到足够的位点进行分析(Arthofer et al. 2007; Megle′cz et al. 2004)。由于NGS的不断改进，尤其是罗氏454 FLX 钛化学（ Titanium XL ?试剂盒可以使其被更广泛的应用）能够识别更多的片段，NGS如今已逐渐取代克隆文库(Castoe et al. 2010; Santana et al. 2009; Vanpe′ et al. 2009)。最重要的一点是NGS建立了无可比拟的信息含量，而在大部分文献中大肠杆菌文库的克隆序列却低于1000个（参考本文文献评论），NGS可以产生成千上万的序列，其中SSR位点达好几千。这些重复区域可以用来设计引物，也可以用软件包进行分析了(Kofler et al. 2007; Megle′cz et al.2009)。借助于传统的和是基于NGS的分离技术，就可以对扩增的新位点、基因组中单拷贝位点及丰富的多态性进行检测。筛选步骤通常包括个体序列的扩增，确定扩增片段质量的凝胶电泳和评定等位基因多样性的毛细管电泳。

产纤维素酶菌种的研究开题报告

一、研究的目的及其意义 1.意义：能源危机这个时代沉重不可避免的话题以及同样重要的环境污染问题需要更加重视。纤维素乙醇作为新的清洁能源的一支,正在备受瞩目的开发研究之中。当前获得的纤维素酶的活性偏低,满足不了工业化生产的要求。虽然微生物可以直接降解天然的纤维素原料,但是,已知的纤维素酶却不能直接高效的降解结晶纤维素。如何快速有效地获得高活性的纤维素酶及产酶菌株成为了研究的热点之一。本实验利用刚果红脱色圈法,从多种含降解纤维素的自然环境中,得到高纤维素酶的细菌,进一步进行紫外诱变处理,获得酶活显著提高且具有遗传稳定性的菌株,最后通过单因素优化实验,初步确定较优的培养条件。这对利用木质纤维素原料的发酵制备燃料乙醇,解决当今世界所面临的环境污染、资源和能源危机等问题具有一定的现实意义。 2.目的 ①了解产纤维素酶微生物分离的基本原理和方法； ②掌握筛选原则与操作方法； ③掌握纤维素酶活力检测原理与方法； ④掌握诱变育种原理与紫外诱变的操作方法； ⑤掌握优化方法； ⑥掌握发酵罐的基本操作； ⑦了解正交分析方法。 二、国内外的研究现状和发展趋势 据估计,通过植物的光合作用,地球上每年合成的植物量约达1.8*1011t,其中有一半是纤维素物质[1,3],我国每年农作物稻秆?产量达6xl08t之多,利用微生物产生的纤维素酶,将这些闲置的纤维素资源水解转化,则可以在能源、词料、食品、纺织、造纸等方面得以有效利用[4,6],不仅可以减少因堆弃和焚烧对环境带来的污染,还将带来的巨大的经济效益和社会价值。 能源危机和环境污染的凸显,使得可再生清洁能源之一的生物质乙醇的进一步研发迫在眉睫。虽然国内外对于发酵工艺和代谢工程的研究较为广泛,但是目前取得的进展仍然存在较大的不足。一方面,人类获得的纤维素酶酶活力偏低,且不能直接高效降解天然结晶的木质纤维素。另一方面,自然界的大量微生物却可以直接快速的利用天然的木质纤维素来迅速繁衍。筛选并获得高活性的纤维素酶及其菌种,对于纤维素乙醇的研究具有重要意义。 三、研究的主要任务 1.调查并充分查阅资料； 2.设计实验方案； 3.样品的采集与处理； 4.实验操作的准备； 5.详细的实验流程；