髓过氧化物酶测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求万孚

1性能指标

1.1外观

外观应符合如下要求：

a)磁珠包被物R1摇匀后应为棕褐色悬浊液；静止久后，棕褐色磁珠沉降于底部，上清液应为无色液体；酶标记物R2应为无色液体，无沉淀或絮状物；校准品和质控品应为外观均匀，成形完整，呈乳白色的冻干品，复溶后较清亮，无浑浊及沉淀；

b)试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；

c)中文包装标签清晰，无磨损。

1.2准确度

将具有溯源性的两个浓度准确度参考品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差在±10%范围内。

1.3空白限

不大于 5.00ng/mL。

1.4线性

试剂盒在7.25ng/mL~1305ng/mL 区间内，其相关系数（r）的绝对值不低于0.9900。

1.5重复性

变异系数CV≤8%。

1.6批间差

变异系数CV≤10%。

1.7校准品

1.7.1校准品准确度

测定校准品，C1，C2 测定结果的相对偏差在±10%范围内。

1.7.2校准品瓶内均一性

校准品C1，C2 瓶内均一性≤8%。

1.7.3校准品瓶间均一性

校准品C1，C2 瓶间均一性≤5%。

1.8质控品

1.8.1瓶内均一性

变异系数CV≤8.0%。

1.8.2瓶间均一性

变异系数CV≤5.0%。

1.8.3靶值及靶值范围

每批质控品均应提供本批产品的靶值单，并应提供赋值方法程序文件。质控品的测试值应在靶值范围内。

酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较

酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较 发表时间：2013-05-09T17:14:22.000Z 来源：《中外健康文摘》2013年第8期供稿作者：黄海深陈志通唐光定江伟河[导读] 化学发光免疫法检测结果的稳定性，灵敏度，精密度均优于酶联免疫法 黄海深陈志通唐光定江伟河（广东省阳山县人民医院检验科 513100）【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）08-0125-02 【摘要】目的对甲胎蛋白(AFP)试验进行方法学探讨。方法①对比实验用酶联免疫法和化学发光免疫法同时测定88例临床送检血清标本甲胎蛋白(AFP)的含量。②线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验。③精密度实验用两法对低、中、高值质控品分别进行精密度实验。结果①结果表明，两法无显著差异(P＞0.05)，相关系数r＝0.995，提示两法呈良好相关性。②线性实验显示酶联免疫法和化学发光免疫法分别在5～400 ng/ml和2～900 ng/ml范围内呈良好的线性关系。③精密度实验表明化学发光重复性好于酶联免疫法,特别是病理高值化学发光明显优于酶联免疫法。结论化学发光免疫法的精密度和准确性均优于酶联免疫法。【关键词】酶联免疫法化学发光免疫法甲胎蛋白比较【Abstract】 Object: The methodology investigate of Alpha-fetoprotein (AFP) test. Methods: ①Comparative experiments: The simultaneous determination of the serum samples of 88 patients censorship alpha-fetoprotein (AFP) levels by ELISA and chemiluminescent immunoassay. ②Linear experiments: the standard solution is diluted at different concentrations,then doing linear experiments.③Precision experiments: Doing precision experiments on low, medium and high-value quality control materials with the two methods. Results: ①The results show that no significant difference in the two methods(P＞0.05). The correlation coefficient of r = 0.995, these two methods showed a good correlation. ②The linear experiments show that the enzyme linked immunosorbent assay and chemiluminescence immunoassay showed a good linear relationship between the range in 5～400ng/ml and 2～900ng/ml.③Precision experiments show that the repeatability of chemiluminescent immunoassay is better than the enzyme-linked immunosorbent assay, specifically at the pathological high value. Conclusion: The precision and accuracy of the chemiluminescent immunoassay are better than enzyme linked immunosorbent assay. 【Key words】 ELISA Chemiluminescent immunoassay Alpha-fetoprotein Comparison 甲胎蛋白（AFP）是哺乳动物胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，是辅助诊断原发性肝癌最常用的检测指标。临床上检测AFP的方法主要有放射免疫法(RIA)、酶免疫法(EIA)、酶联免疫法(ELISA)、荧光免疫法(FIA)、化学发光分析法(ECLIA)等，而近年发展起来的化学发光免疫法因其快速、精确、重现性好及试剂安全无毒的特点，显示出很好的应用前景［1］。酶联免疫法定性检测AFP以其快速、简便、实效的优势在各级医院应用较广。这两种方法临床常用，为进一步了解化学发光免疫法的特点，本文报告用酶联免疫法和化学发光免疫法对比检测88例临床血清标本中AFP的含量，并对结果进行统计分析和比较。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1研究对象：随机抽取88例临床送检血清标本。 1.1.2仪器: 深圳雷杜生命科学股份有限公司RT6100酶标仪，郑州安图生物工程有限公司生产的LUMO化学发光仪。 1.1.3试剂: ①郑州安图生物工程有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)测定试剂盒（酶联免疫法） ②郑州安图生物工程有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)测定试剂盒（化学发光免疫法） 1.2方法 1.2.1酶联免疫法测定甲胎蛋白(AFP)的操作方法见试剂说明书。 1.2.2化学发光免疫法测定甲胎蛋白(AFP)的操作方法见试剂说明书。 2 结果 2.1 线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验，结果显示酶联免疫法和化学发光免疫法分别在5～400ng/mL和2～900ng/mL 范围内呈良好线性关系。 2.2 对比实验用酶联免疫法和化学发光免疫法同时对受检血清标本进行定量分析。结果表明，两法差异无统计学意义（p＞0.05），相关系数(r=0.995)。 表1 两种方法变异系数比较 CV% 酶联免疫法化学发光免疫法 受检血清标本 14.27 14.20 2.3 精密度实验用两法对低、中、高值质控品分别进行精密度实验。表2表明化学发光重复性好于酶联免疫法,特别是病理高值化学发光明显优于酶联免疫法。 表2 两种方法的精密度对比 批内CV% 批间CV% 酶联免疫法化学发光免疫法酶联免疫法化学发光免疫法低值 5.38 3.30 5.68 4.55 中值 6.40 4.95 6.15 5.82 高值 12.49 6.50 13.50 6.88

荧光和化学发光免疫分析方法

荧光和化学发光免疫分析方法 免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即利用抗原与抗体的特异性反应， 应用制备好的抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。由于免疫的特异性结合，免疫分析方法具有很好的选择性，荧光免疫分析和化学发光免疫分析是其中典型的两种。本文将对这两种免疫分析方法进行详细的介绍。 一、免疫 免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。 特异性免疫系统，是一个专一性的免疫机制，针对一种抗原所生成的免疫淋巴细胞（浆细胞）分泌的抗体，只能对同一种抗原发挥免疫功能。而对变异或其他抗原毫无作用。 1、抗原 1.1抗原的定义 抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答(免疫原性) ，并能与相应抗体在体内或体外发生特异性结合的物质(免疫反应性)。 抗原一般为大分子物质，其分子量在10kD以上。 1.2抗原的分类

完全抗原：同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原，如细菌、病毒、异种动物血清等。 半抗原：仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性，而无免疫原性的物质。如大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质，它们本身不具免疫原性，但当与蛋白质大分子结合后形成复合物，便获得了免疫原性， 1.3抗原的性质 决定簇是指抗原分子表面的基团，它直接决定免疫学反映的特异性。 抗原通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答，抗原也藉此与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。 因此，抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。 2、抗体 2.1抗体的定义 抗体：是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白。 2.2抗体的结构 抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性故又称作免疫球蛋白。 人免疫球蛋白有五类，分别为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。 3、抗原抗体的结合

化学发光检测

第一章化学发光技术 一、免疫学检测发展阶段 免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。我国免疫学的检测基本历经了以下几个过程，如图1.1所示。 20世纪60年代70年代90年代时间 图1.1免疫学检测发展阶段 尽管免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位，但是从我国临床免疫诊断现状来看，无论是临床应用方面，还是产业化角度，都处于相对比较落后的状态，亟待改进。下表１.１就此做一比较： 表1.1 中国免疫诊断现状 由以上分析不难看出，化学发光免疫检测是大势所趋；而取代进口，发展我国的化学发光检测事业，

正是临床检验界着手发展的方向。由此，我公司自1998年立项至今，致利于化学发光检测方案设计，自行开发了具有国内领先水平的化学发光底物，与国外知名检测仪器生产商联合开发了化学发光全自动、半自动检测仪，并自行设计开发了化学发光管理软件，而今形成了仪器、试剂、软件全面配套，为我国的临床检验界提供了一套完善的解决方案。 二、化学发光免疫分析技术 【概述】 本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。 化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 【原理】 在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术（ELISA），常采用双抗体夹心法、竞争法、间接法等反应模式，如图1.2，1.3，1.4所示。 如图1.2双抗体夹心法反应原理示意图

化学发光免疫分析技术原理简介

化学发光免疫分析技术原理简介 20 世纪60 年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿症患者尿液检查。1977 年Halman 等将化学发光系统与抗原抗体反应系统相结合，创建了化学发光免疫分析法，保留了化学发光的高度灵敏性，又克服了它特异性不足的缺陷。近年来对技术与仪器的不断改进，使此技术已成为一种特异，灵敏，准确的自动化的免疫学检测方法。1996 年推出的电化学发光免疫技术，在反应原理上又具有一些新的特点。这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规免疫学检验。 一、化学发光免疫分析法 化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay , CLlA) 是把免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术，既具有发光检测的高度灵敏性，又具有免疫分析法的高度特异性。在CLIA中，主要有两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统与放射免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化合物如鲁米诺( luminol) 、异鲁米诺(isolu-minol) 、金刚烷( AMPPD) 及吖啶酯( AE) 等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物，当其回到基态时就会将剩余能量转变为光子，随后利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。将发光物质直接标记于抗原(称为化学发光免疫分析)或抗体上(称为免疫化学发光分析) ，经氧化剂或催化剂的激发后，即可快速稳定的发光，其产生的光量子的强度与所测抗原的浓度可成比例。亦可将氧化剂(如碱性磷酸酶等)或催化剂标记于抗原或 抗体上，当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物，再与发光底物反应，其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。发光免疫分析的灵敏度高于包括RIA 在内的传统检测方法，检测范围宽，测试时间短，仅需30 - 60min 即可。试

罗氏电化学发光免疫分析(精)

罗氏电化学发光免疫分析 技术是罗氏公司开发的,但全自动机械制造却由日本的日立公司承担,所以仪器上还有Hitachi的标志。这个仪器让大家吃惊的一大原因就在于一直在实验室研究的电致化学发光居然已经真正地产业化了,其中我们一直无法解决的诸多问题(尤其是重现性均已得到解答,看来罗氏的确花了不少心血开发这款仪器。 罗氏电化学发光免疫分析技术的性能特点——创新的技术,与众不同 一、最先进的检测原理 电化学发光免疫测定,是目前最先进的标记免疫测定技术,是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,具有敏感、快速和稳定的特点,在固相标记免疫测定中技术上居领先地位。 电化学发光(ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上是电化学和化学发光两个过程的完美结合。电化学发光与普通化学发光的主要差异在于前者是电启动发光反应,循环及多次发光,后者是通过化合物混合启动发光反应,是单次瞬间发光。因此ECL反应易精确控制,重复性极好。 电化学发光免疫测定是电化学发光(ECL和免疫测定相结合的产物,直接以[Ru(bpy3]2+标记抗体,反应时标记物直接发光。且[Ru(bpy3]2+在电极表面的反应过程可以周而复始进行,产生许多光子,使光信号得以增强。 二、专利的包被技术 链霉亲和素(streptoavidin,SA和生物素(biotin,B是具有很强的非共价相互作用的一对化合物,特异性强且结合紧密。一分子SA可与四分子B 相结合,增大了抗体结合量,达到放大效果。在ECL的试剂中,SA通过特殊的蛋白结合物均匀牢固地包被在磁性微粒上,形成通用的能与B结合的固相载体,另一试剂为活化的B衍生物化合的抗原或抗体。两种试剂混合时,抗原或抗体即包被在磁性微粒上。 三、独特的载体

化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较(精)

化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较 颜多清 442400湖南桂阳县人民医院检验科 摘要目的：化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较。方法：化学发光法、酶联免疫法，按仪器操作手册各用配套试剂测定质控品。结果：线性实验：化学发光检测更宽；精密度试验：化学发光的重复性较酶联免役法更好。结论：化学发光法与酶联免役法之间差异无显著性，但化学发光法优点更多。 关键词甲胎蛋白线性范围精密度化学发光酶联免疫 材料和方法 标本来源：随机抽取150份临床送检血清标本，包括正常和异常标本，异常标 本中超过仪器检测范围的结果不予统计。 仪器与试剂：化学发光仪使用Bayer Centaur CP。使用原装配套试剂。酶表仪洗板机使用URANUS AE全自动酶免仪和配套洗板机，严格根据使用说明操作。 方法：按仪器操作规程操作，用配套试剂测定，数值在标定值允许的变异范围 内，接着做线性、相关性、回收率、精密度测试。 结果 线性试验：将AFP测定值在1000～1200ng/ml范围内的5份血清标本混合，反复测定5次，取其均值作为原倍血清测定值即为理论值。将此混合血清做5点倍比稀释，随机排列测定顺序，各反复测定5次，以原倍血清测定值为标准按稀释倍数算得其理论值，求两者相关性并进行回归分析。化学发光回归方程 为：Y=10235X+65594，R=09999。 酶联免疫法回归方程为：Y=06578X+38885，R=09558。化学发光法在2～900ng/ml范围内线性良好，酶联免疫法在5～400ng/ml范围内线性良好， 可见化学发光免疫法的检测范围更宽，更能充分满足临床要求。 相关性试验：用上述二种方法分别对受检血清标本进行AFP定量分析，结果表 明，二种方法差异无显著性（P>005），直线回归方程为：Y=1 0667X-05433，R=09858，提示二种方法相关性良好。 回收试验：取三种浓度的血清(1071ng/ml，1808ng/ml，46 83ng/ml)，分别用不同浓度定值血清混合，配制成浓度分别为211ng/ml， 300ng/ml，773ng/ml，278ng/ml，367ng/ml，84 0ng/ml， 538ng/ml，626ng/ml，1100ng/ml的样本，用化 学发光法与酶联免疫法测得的回收率分别为961～979和953～97 1，平均回收率为977和964。 精密度试验：采取批内和批间差异来确定。用上述二种方法分别对低、中、高值质控品进行精密度试验，每份标本连续测定20次，计算 X，S，求批内CV 值。每日测定1次，连续测定20天，计算X ，S，求批间CV值。结果表明，化学发光免疫法的重复性比酶联免疫法的更好，特别是高值化学发光明显优于酶联免疫法。见表1。

全自动化学发光免疫分析仪Immulite2000标准操作规程完整

IMMULITE ? 2000 全自动化学发光免疫分析仪 标准操作程序 本文件仅供参考，各实验室需根据各自情况建立自己的操作规程 IMMULITE?2000全自动化学发光免疫分析系统标准操作规程

SOP编码：页数： 制定人签名：日期： 审核人签名：日期： 批准人签名：日期： 生效日期：颁发日期：周期性审查：年一次 修订登记： 审查登记：

[目的]描述IMMULITE?2000全自动化学发光免疫分析系统的使用和维护。 [范围] 适用IMMULITE?2000全自动化学发光免疫分析系统的操作。 [仪器工作原理和检测过程] 1 IMMULITE 2000使用包被特定抗体的聚苯乙烯珠子作为固相，包被珠放在一个特定的反应杯中，从而进行温育，清洗以及信号发生。

2. 样本与结合了碱性磷酸酶的试剂温育反应结合之后，通过高速离心将剩余试剂甩到与反应杯同轴的废液管路中。系统在几秒钟内完成四次离心清洗，以便与系统的其他同步。去除未包被试剂的包被珠仍然保留在反应杯中。 3. 包被珠上的结合标记随后同发光底物进行定量发光。当包被珠上结合的碱性磷酸酶标记同化学发光底物反应时，就产生发光。发光强度同样本中待测物的含量有关。仪器通过光电倍增管检测发光强度，随后计算出每个样本的结果。 4. 操作者在IMMULITE 2000上运行测试时，需要做下列操作：： 4.1进行每日探针清洗工作。 4.2 选择RUN IMMULITE 2000按钮。 4.3 查系统状态指示，加满或者清空耗材或者废物。 4.4 初始化样本和试剂加样器、蒸馏水喷嘴和底物喷嘴。 4.5 使用图像扫描器扫描试剂转盘上的过敏原试剂楔。 4.6在样本转盘上装载病人血清、质控、校正液和稀释液。 注意: 运行仪器需要用到的试剂都在 IMMULITE 2000试剂盒中。只有需要预稀释的测试项目才会有稀释液。 4.7 在工作列表列表界面为样本指定测试项目以及编号。 4.8 检查试剂以及与之匹配的包被珠是否足够完成所需测试。 4.9选择RUN开始实验。 5. 仪器自动检测过程: 在操作者按下 RUN 按钮之后，Immulite 2000 自动开始检测并输出检测结 果。 5.1 在反应杯中加入一个包被珠。 5.2 样本，特定的试剂和水加入到包被珠上。 5.3 反应杯运到温育圈，在37°C (98.6°F)的环境中震荡温育。 5.4 清洗测试杯。 5.5 加入底物，发光。 5.6 光电倍增管(PMT)检测光子强度，计算结果并打印。 [免疫分析原理] 1.双抗体夹心法：双抗体夹心法使用ALP标记的抗体在检测单位中进行反应。 1.1 标记的抗体的液相试剂加到检测单位中，标记有ALP的特异性抗体(Ab※ALP)与样品中的相应抗

常见化学发光免疫分析技术比较

常见化学发光免疫分析技术比较 1、化学发光免疫分析 化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，英音：[,kemi,lju:mi'nes?ns] [,imju:n?u?'sei] 是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 1.1、化学发光免疫分析原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hv) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。 1.2、化学发光免疫分析类型

化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种: (1)化学发光标记免疫分析法; (2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法 1.2.1化学发光标记免疫分析 化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) , 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester (AE) , 是有效的发光标记物，其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法, 大分子抗原则采用夹心法, 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。 1.2.2化学发光酶免疫分析 从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物, 在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) , 它们有各自的发光底物。 12.2.1HRP 标记的CLEIA

酶联免疫法与电化学发光法检测AFP肿瘤标志物结果对比分析

酶联免疫法与电化学发光法检测AFP肿瘤标志物结果对比分析 【摘要】目的探讨酶联免疫法(ELISA)与电化学发光法(ECLIA)检测血清甲胎蛋白(AFP)肿瘤标志物的检测结果比较。方法采用酶联免疫法和电化学发光法，对2012年1月至2012年6月期间采集的60例血清标本，进行甲胎蛋白的检测，并对两种检测方法的结果，进行比较和分析。结果通过最小二乘法拟合直线方式，比较酶联免疫法(Y)与电化学发光法(X)检测结果，是否具有相关性，结果表明酶联免疫法与电化学发光法具有线性关系，并且具有高度相关性。首先对两种检测方法的甲胎蛋白检测结果，进行正态分布分析，结果显示符合正态分布，然后对均值，进行t检验，结果显示，在95%的可信区间，双尾检验的P=02875，表明酶联免疫法与电化学发光法的检测结果不具有统计学意义。结论酶联免疫法与电化学发光法都能较为准确的反应甲胎蛋白水平，对于肿瘤的诊断和治疗的预后，提供重要的理论依据。 【关键词】酶联免疫法；电化学发光法：甲胎蛋白；结果对比 1资料与方法 11一般资料2012年1月至2012年6月期间采集的60例血清标本，其中男32例，女28例，年龄369～695岁。60例血清标本中，33例检测结果显示甲胎蛋白水平处于正常范围，而另外的27例超出正常范围。 12检测试剂、仪器及血样采集 121酶联免疫法严格按照试剂盒操作说明书(购自武汉博世德科技责任有限公司)，通过酶标仪，对甲胎蛋白水平进行检测。 122电化学发光法采用罗氏Cobase411电化学发光自动分析仪，对甲胎蛋白水平进行检测。 13统计学方法所有数据采用SPSS 170统计学软件，进行分析和处理，计 量资料以(均数±标准差)表示，P＜005，认为差异有统计学意义。 2结果 通过最小二乘法拟合直线方式，比较酶联免疫法(Y)与电化学发光法(X)检测结果，是否具有相关性，结果表明酶联免疫法与电化学发光法具有线性关系，并且具有高度相关性。首先对两种检测方法的甲胎蛋白检测结果，进行正态分布分析，结果显示符合正态分布，然后对均值，进行t检验，结果显示，在95%的可信区间，双尾检验的P=02875，表明酶联免疫法与电化学发光法的检测结果差异无统计学意义。 3讨论 甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)作为特异性强的原发性肝癌标志物，主要是由胎儿肝脏组织合成，待胎儿娩出后，甲胎蛋白水平急速下降，待出生后几个月或者一个年内，基本降至正常范围，使甲胎蛋白水平低于20ng/ml［3］。大多数原发性肝癌患者体内的甲胎蛋白水平出现异常升高，转移性肝癌患者体内的甲胎蛋白水平也相对较高，但是一般情况下，甲胎蛋白水平不高于350～400IU/ml，而畸胎瘤、急性病毒性肝炎、乙肝病毒携带者，以及酒精性肝硬化患者，由于肝脏组织的代偿性增生，甲胎蛋白水平也有轻度升高。目前，临床实验室检测甲胎蛋白方法中，以放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)、化学发光法(ECLIA)，以及免疫层析法为主［4］。 化学发光法(ECLIA)是近年来才发展起来的新兴技术，作为新型标记免疫分

全自动化学发光免疫分析仪产品技术要求

全自动化学发光免疫分析仪 主要由主机（包含样本架输送模块、反应杯配备模块、加样模块、试剂处理模块、温育反应模块、清洗分离模块、光学检测模块、电路控制模块）、软件（发布版本：V1.0）、电源线、串口线及附件（包含样本架、液路管）组成。 该产品基于间接化学发光法，与配套的检测试剂共同使用，在临床上用于对来源于人体血清、血浆或者其他体液样本中的被分析物进行体外定性或定量检测。 1.1产品型号划分说明 1.2结构组成 主要由主机（包含样本架输送模块、反应杯配备模块、加样模块、试剂处理模块、温育反应模块、清洗分离模块、光学检测模块、电路控制模块）、软件（发布版本：V1.0）、电源线、串口线及附件（包含样本架、液路管）组成。 1.3软件信息 1.3.1 软件名称：利德曼化学发光免疫分析仪器软件平台 1.3.2 发布版本：V1.0 1.3.3 版本命名规则 发布版本号：VX.Y 其中：VX.Y由version缩写V，主版本号及次版本号构成：表示正式发布的第一版程序。 X为主版本号，表示全功能集成第一个版本； Y为次版本号，表示此版本程序发布后暂时未发生变更。 1.3.4 运行环境 硬件配置：

CPU：主频1.7GHz以上。 内存：1G以上内存。 硬盘空间：40G以上均可。 软件配置：操作系统：WINDOWS 7 或WINDOWS 10。 2.1加样正确度与重复性 对仪器标称的样品最小加样量和最大加样量、试剂最小加样量和最大加样量进行检测，应符合表1的规定。 表1 加样正确度与重复性要求 2.2 反应区温度控制的正确度和波动度 反应区温度的偏倚应在：37.0℃±0.5℃，波动度不超过0.5℃。 2.3 光检测装置部分 2.3.1仪器噪声 检测空反应管的发光值应不大于200RLU。 2.3.2发光值的线性 在不小于3个发光值数量级范围内，线性相关系数（r）应≥0.99。 2.3.3发光值的重复性 采用发光剂法，变异系数（CV）不超过5％。 2.3.4发光值的稳定性 采用发光剂法，发光值的变化不超过±10％。 2.4 携带污染率 携带污染率应≤10-5。 2.5临床项目的批内精密度

化学发光免疫分析方法

化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。 化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。 一、化学发光免疫分析方法的类别 化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为 3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。 （一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。 1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。 鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。 2. 吖啶酯类标记的化学发光免疫分析 吖啶酯用于化学发光免疫分析方法（ChemiluminescentImmunoassay，CLIA）由于热稳定性不是很好，Klee 等研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物。在含有H2O2的碱性条件下，吖啶酯类化合物能生成一个有张力的不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N－甲基吖啶酮，当其回到基态时发出一最大波长为430 nm 的光子。吖啶酯类化合物量子产率很高，可达0.05。吖啶酯作为标记物用于免疫分析，发光体系简单、快速，不需要加入催化剂，且标记效率高，本底低。吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物应用于CLIA，通常采用HNO3+H2O2和NaOH 作为发光启动试剂，有些在发光启动试剂中加入Triton X－100，CTAC，Tween－20等表面活性剂以增强发光。 （二）化学发光酶免疫分析 化学发光酶免疫分析（Chemiluminescent Enzyme Immunoassay,CLEIA）是以酶标记生物活性物质进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP），它们有各自的发光底物。HRP 最常用发光底物是鲁米诺及其衍生物。在CLEIA 中，使用过氧化物酶标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在过氧化物酶和起动发光试剂（NaOH和H2O2）作用下鲁米诺发光，酶免疫反应物中酶的浓度决定了化学发光的强度。此传统的化学发光体系（HRP－H2O2－lumi-nol）为几秒内瞬时闪光，存在发光强度低、不易测量等缺点。后来，在发光系统中加入增强发光剂，以增强发光信号，并在较长时间内保持稳定，便于重复测量，从而提高分析灵敏度和准确性。碱性磷酸酶（ALP）已广泛用于酶联免疫分析和核酸杂交分析。 碱性磷酸酶和1，2－二氧环己烷构成的发光体系是目前最重要、最灵敏的化学发光体系。这类体系中具有代表性的是Bronstein 等提出的ALP－AMPPD 发光体系。AMPPD 为1，

SIEMENS ADVIA Centaur CP全自动化学发光免疫分析报告系统

1 目的 建立标准规范的西门子ADVIA CENTAUR CP全自动化学发光免疫分析仪操作规程。 2 范围 适用于生化科经授权的检验专业技术人员操作使用。 3 责任 由经过培训合格后，并经授权的检验专业技术人员操作，由科主任负责技术指导和质量监督。 4 程序 4.1 系统简介 SIEMENS ADVIA Centaur CP全自动化学发光免疫分析系统，提供了一个前所未有的临床免疫检查设备。该系统时刻处于准备状态。不停止上载试剂和样本及消耗品，不必每日开关机；可连续不断的样本加载，具有真正的急诊功能，15min分钟内即可提供急诊标本的检测结果；24小时随时待机，载机容量大，高达15种不同的试剂包或更多的过敏原测试方面的载机容量，最有特色是多达300以上的过敏原测试。灵活多样的样本加载方式。 ADVIA Centaur CP免疫分析各方面的设计都是为了提高检测效率和测试结果可靠性。具有凝块发现及管理，自动稀释，自动反射检测，自动复检等功能，不停止上载样本等功能，可大大缩短周转时间，急诊实验通道可在任何时候进行急诊测试而不需打断正常工作流程，一次性吸样头和反应杯，没有潜在的样本沾滞，用一次性的样本吸头减少了交叉污染，可在任何时候更换废料和水。多种分析形式的设计，双向运行的80个位置温育盘易于进行夹心法及其他测定。最优化的检测性能和生产力，每小时达180个测试，所有的试剂探针和冲洗探针都是独立运行和快速操作。

4.2运行环境 电源：207～253V/ 47-603HZ ；室内温度：18～3029℃；室内相对湿度：20%-80%。 4.3 测定原理 化学发光系统是利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的测定方法，用高敏感性的吖啶酯（Acridinium Ester ）作为化学发光标记物，以极细的磁性颗粒(PMP)作为固相载体，提供最大的包被面积。 4.3.1 液相：吖啶酯（AE ） 化学结构 N + CH 3 C O O R

酶联免疫吸附法和化学发光法对甲胎蛋白检测功效的比较

酶联免疫吸附法和化学发光法对甲胎蛋白检测功效的比较 发表时间：2011-05-30T17:51:01.920Z 来源：《中外健康文摘》2011年第7期供稿作者：何彩华 [导读] 肿瘤已成为当今世界严重危害人类的疾病，死亡率仅次于心血管疾病居全球第二。 何彩华（河源市妇幼保健院检验科广东河源517000） 【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2011）7-0096-03 【摘要】目的比较ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay)和CL(chemi-luminescence)两种检测方法对AFP检测的稳定性、敏感性及重复性。方法对110名患者血标本同时采用ELISA和CL两种方法进行AFP检测，对同一标本连续测定20次进行批内变异的比较；同时对标本每天测定1次，连续测定20天进行批间变异比较。采用方差分析比较两种方法敏感性；并对两种方法进行线性回归分析，评价两种方法相关性。结果CL批内变异系数和批间变异系数均较ELISA小，具有较好的重复性及稳定性；当AFP<400μg/L时，ELISA和CL法检测AFP敏感性相似，当AFP>400μg/L时，CL法敏感性高于ELISA（P<0.05）。结论CL较ELISA稳定性好、敏感性高、重复性好，而ELISA 具有经济、在AFP浓度值低于400μg/L时也具有较好的敏感性。 【关键词】甲胎蛋白酶联免疫吸附法化学发光法 【Abstract】Object：To compare the stability,sensitivity and reproducibility of ELISA and CL on the detection of AFP. Method：Enrolled 110 patients who were drawn blood samples to undertook ELISA and CL detections AFP totally 20 times to compare intra－assay coefficient variation and once every day for 20 days to compare inter－assay coefficient variation;analysis of variance was used to compare the sensitivity between these two methods，and we also used lineal regression analysis to compare the correlation between these two methods. Result:Intra-assay and inter-assay coefficient variation of CL were smaller than ELISA which indicated that the CL had a better reproducibility and stability. The sensitivity was similar between ELISA and CL when AFP <400μg/L whereas it was more sensitive in CL when AFP>400μg/L（P <0.05.）. Conclusion：CL was more stable ,more sensitive and better reproducibility than ELISA whereas ELISA was less expensive and had a similar sensitivity with CL when AFP concentration was smaller than 400μg/L. 【Keywords】AFP (alpha fetal protein) ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay) CL (chemi-luminescence) 肿瘤已成为当今世界严重危害人类的疾病，死亡率仅次于心血管疾病居全球第二。每年有成千上万新诊断肿瘤患者，当中不少患者由于就诊时已出现远处转移或是已出现全身严重症状，导致治疗效果不佳、远期预后差[1,2]。随着近几十年来各种生化检测仪器的发展以及肿瘤标志物的发现，使得对肿瘤的早期筛查和诊断成为可能。肿瘤标志物（tumor markers,TM）是肿瘤组织和细胞由于其癌基因异常表达所分泌的、存在于肿瘤组织及全身血液和体液中的浓度明显高于正常值的一类物质。如甲胎蛋白（alpha fetal protein, AFP）和癌胚抗原（carcinoma antigen embryo，CEA）等，其中甲胎蛋白（AFP）被公认为是诊断原发性肝癌的重要肿瘤标志物[3]。甲胎蛋白(AFP)是胚胎发育早期的一种主要血清蛋白，由胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，分子量约70000，含糖40g/L，由96%蛋白质和4%的碳水化合物组成，正常人血清中AFP含量在2-8g/L之间，AFP正常值一般低于25g/L，AFP是诊断肝癌最特异的标志物，是目前最好的可实际用于早期诊断原发性肝癌的指标，可在症状出现之前作出诊断。目前临床检验中AFP的检测方法主要有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、荧光免疫法(FIA)、化学发光分析法(CLIA)等，本研究主要比较近几年来我院常用的ELISA和CL两种检测方法，分析两种方法对AFP诊断的稳定性、敏感性及重复性，现报道如下。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1标本采集本研究收集了从2008年8月至2010年9月在我院住院及门诊患者110例的血清标本，男性9名，女性101名，年龄45.2±3.1岁。 1.1.2试剂ELISA检测使用郑州博赛生物工程股份有限公司AFP诊断试剂盒，操作步聚均严格按照试剂盒操作说明书进行；CL法检测试剂从雅培公司购买并按照仪器的使用说明及操作规程进行。 1.1.3 实验仪器采用芬兰雷勃全自动酶标仪、深圳雷杜全自动酶标洗板机进行ELISA检测；Axsym 高效能全自动化学发光免疫分析仪进行CL检测；质控品由雅培公司提供。 1.2 方法对同一患者的血清分别用ELISA和CL法进行AFP检测，每份标本每天检测1次，连续检测20天，比较ELISA和CL在AFP检测上的重复性和稳定性，同时比较ELISA和CL检测AFP的敏感性。 1.3 数据分析和统计方法 1.3.1 AFP<20μg/L为阴性；AFP >20μg/L为阳性，阳性中分为20-400μg/L和>400μg/L为强阳性（原发性肝癌诊断界值）。 1.3.2 采用SPSS11.0统计软件进行数据统计与分析。采用x2检验对资料进行敏感性和稳定性比较，同时采用Pearson相关对ELISA和CL进行相关性分析。P<0.05具有统计学意义。 2 结果 2.1 敏感性比较： ELISA和CL对AFP检测敏感性比较见表1 由表1见当AFP<400μg/L时，ELISA和CL对AFP检测敏感性差别无统计学意义；当AFP>400μg/L时，CL（38例）检测敏感性高于ELISA（29例），差别具有统计学意义（P <0.05）。 2.2 重复性和稳定性测定：采用批内和批间差异进行确定。ELISA和CL两种检测方法分别对低、中、高值质控品进行精密度试验,每份标本连续测定20 次，计算均数和标准差,求批内变异系数（coefficient variable，CV）值。每份标本每日测定1 次，连续测定20 天，计算均数和标准差，求批间CV 值，结果见表2。由表2可见在AFP检测上，CL较ELISA重复性好、稳定性高。

化学发光免疫分析技术题库1-0-8

化学发光免疫分析技术题库1-0-8

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列有关化学发光错误的说法是（）. A.化学发光是指伴随着化学反应过程所产生的光的发射现象 B.化学发光与荧光形成激发态分子的激发能相同 C.化学发光是吸收了化学能使分子激发而发射的光 D.大多数化学发光反应为氧化还原反应 E.化学发光必须提供足够的化学能 化学发光是吸收了化学能使分子激发而发射的光，而荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列关于化学发光效率说法错误的是（）. A.又称化学发光反应量子产率 B.发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率 C.发光效率决定于激发态分子发射效率 D.发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质决定 E.所有的发光反应都具有相同的化学发光效率 每一个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发光效率。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]化学发光剂的标记方法不包括（）. A.碳二亚胺缩合法 B.过碘酸钠氧化法 C.重氮盐偶联法 D.N-羟基琥珀酰亚胺活化法 E.基因工程法 除选项E外，其余项均为化学发光剂的常用标记法。 (电子竞技 https://www.wendangku.net/doc/401639466.html,/)

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]影响发光剂标记的因素有（）. A.被标记蛋白的性质 B.原料比 C.标记率 D.温度 E.以上都是 影响发光剂标记的因素除上还有发光剂的选择、纯化与保存等因素。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]电化学发光法的检测范围很广，其检测灵敏度可达（）. A.gL B.mgdl C.pgml D.ngml E.mgL 电化学发光法的检测灵敏度可达pgml。