生物制药综合性实验实验报告
广东药学院
基因工程（跨课程）综合性实验论文
姓名
班级
学号
指导教师
广东药学院
生命科学与生物制药学院生物制药研究所
目录
摘要 (2)
前言 (3)
一、材料与方法 (3)
1.1 材料 (3)
1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料 (3)
1.1.2重组DNA药物单元的实验材料 (3)
1.2 方法 (4)
1.2.1 重组蛋白质药物单元 (4)
1.2.1.1 工程菌构建（已由老师完成） (4)
1.2.1.2 工程菌表达筛选 (6)
1.2.1.3 制备IL-18工程菌甘油种 (8)
1.2.1.4 GST工程菌生长曲线分析 (8)
1.2.1.5 GST工程菌表达影响因素试验 (8)
1.2.1.6 表达进程分析 (9)
1.2.1.7 凝胶扫描分析 (9)
1.2.1.8 发酵工艺（观摩） (9)
1.2.2 重组DNA药物单元 (9)
1.2.2.1 质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备 (9)
1.2.2.2 TCR质粒-脂质体复合物制备与分析 (10)
1.2.2.3 TCR体外转染活性检测 (11)
1.2.2.4 TCR转染体内试验 (12)
二、结果与讨论 (12)
2.1 重组蛋白质单元结果与讨论 (12)
2.1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE (12)
2.1.2 GST工程菌生长曲线分析 (14)
2.1.3表达影响因素试验 (15)
2.1.4 表达进程试验 (16)
2.2 重组DNA药物单元结果与讨论 (18)
2.2.1质粒阴离子交换层析纯化 (18)
2.2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析 (19)
2.2.3 质粒-脂质体复合物制备 (20)
2.2.4 TCR转染基因表达荧光检测 (20)
2.2.5 TCR体外转染活性检测 (21)
2.2.6 TCR转染体内试验 (23)
三、小结 (25)
致谢 (25)
摘要：本综合性实验分为“重组蛋白质类药物”和“重组DNA类药物”二个单元。重组蛋白质药物以hIL-18的大肠杆菌表达系统为例，全面介绍工程菌构建、表达筛选、甘油种制备、生长与表达分析、发酵工艺单元操作和表达产物分离纯化等基因工程药物研发与生产实践中最常用的技术与工艺过程。“重组DNA药物”单元以质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP为例，介绍质粒DNA大规模制备、阳离子脂质体与质粒DNA复合物制备、T细胞体外转染、转染T细胞目的基因表达和体外活性检测、体内给药试验等。
关键词重组蛋白药物; hIL-18 ; 重组DNA药物 ; 阳离子脂质体与质粒DNA复合物
Abtract：The comprehensive experiments are divided into two units ,which is " Recombinant Protein Drugs" and "Recombinant DNA Drugs". The unit ,Recombinant protein drugs ,takes example for hIL-18 in E. coli expression system.It comprehensively introducted the most usual technology and process of R & D and production practice of the genetic engineering drugs , such as the construction of engineering bacteria, expression screening, glycerol kind of preparation, growth and Expression Analysis, fermentation process unit operation and the purification of expression product.The unit of "Recombinant DNA drug" taked plasmid TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP as example.It introducted the large-scale preparation of plasmid DNA, Preparation of cationic liposomes- plasmid DNA complex, in vitro Transfection of T cells, expression and in vitro activity assaying of the target gene of transfected T cells and undertaking the test in vivo.
Key words Recombinant Protein drugs ; hIL-18 ; Recombinant DNA drugs ; cationic liposomes-plasmid DNA complex
前言
生命科学与生物技术的最主要任务之一是利用其理论与技术研究成果为人类的健康服务，生物技术制药则是其最主要的应用领域，且在重大传染性疾病、恶性肿瘤及其它疑难杂症防治方面具有巨大的潜力。药品的研究开发是一项庞大的系统工程，实验室研究发现的任何候选药物要开发成新药都需要经过生产工艺和质量控制研究、有效性评价和安全性评价等过程。需要特别指出的是，生产工艺和质量控制研究的内容和任务还会始终贯穿于产品投产上市的过程中，相应的技术手段也是作为企业生产或质量控制人员必备的技能。因此，作为生命科学与生物制药学院的本科生，了解生物技术药物研究、开发和生产的过程、掌握与生产工艺和质量控制研究密切相关的技术手段是非常必要的。以蛋白质为基础的基因工程药物和基因工程抗体是当今最主要的生物技术药物形式，以DNA为基础的基因治疗制剂和DNA疫苗是未来生物制药的主要发展方向之一。
一、材料与方法
1.1 材料
1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料
1.1.1.1 仪器
超净工作台、移液枪（量程：10—100，0—1000）、灭菌枪头、标记笔、无菌牙签、带塞试管、恒温摇床、恒温培养箱、带塞三角瓶（500mL）、EP管(1.5mL)、可见分光光度计、电泳仪、垂直电泳装置、水浴锅、离心机、台式高速离心机、培养皿、冰箱（-20℃，-80℃，4℃）、烧杯、凝胶成像系统
1.1.1.2 试剂
氨苄青霉素、LB培养基、pBV220—hIL-18转化平板、GST工程菌平板、2×上样缓冲液、10×电泳缓冲液、10%APS、30%胶母液、10%SDS、TEMED、分离胶缓冲液（pH8.8）、浓缩胶缓冲液（pH6.8）、考马斯亮蓝染色液、脱色液、10%甘油、去离子水、IPTG
1.1.2重组DNA药物单元的实验材料
1.1.
2.1 仪器
高速冷冻离心机、台式高速离心机、离心机、离心杯、离心管、水浴锅、4℃冰箱、
超净工作台、移液枪、灭菌枪头、500mL 三角瓶、常压层析系统、烧杯、水平电泳装置、电泳仪、紫外检测仪、凝胶成像系统、紫外分光光度计、1.5mLEP 管、恒温培养箱、灭菌玻璃滴管、12孔培养板、细胞计数板、电子显微镜、培养瓶、荧光显微镜、一次性1mL 注射器、冰盒
1.1.
2.2 试剂
STE 、碱裂解溶液Ⅰ（（高压灭菌）：50mmol/L 葡萄糖、 25mmol/L Tris －Cl （pH8.0））、碱裂解溶液Ⅱ（0.2M NaOH 、 1％（m/V ）SDS （高压灭菌））、碱裂解溶液Ⅲ（5 mol/L 乙酸钾、冰乙酸、H 2O ）、异丙醇、70%乙醇、TE 、0.02MNaCl 的TE 溶液、0.3M NaCl
的TE 溶液、1.0M NaCl 的TE 溶液、0.5M NaOH 、RNA 酶、双蒸水、生理盐水、1.0MnaCl 、20%乙醇、琼脂糖、TAE 、EB 、电泳缓冲液、Marker 、Buffer 、质粒TCRV α12.2-V β7.1-EYFP 、脂质体、肿瘤细胞BEL-7402、胰酶、完全培养基、4%苯酚溶液、1640培养基、胎牛血清、IL-2、双抗（青霉素、链霉素）
1.2 方法
1.2.1 重组蛋白质药物单元
1.2.1.1 工程菌构建（已由老师完成）
（1）pBV220-hIL-18表达载体和工程菌构建
在本综合性实验中目的基因的表达载体为pBV220，该载体的物理图谱见图1。该载体有一个氨苄青霉素抗性基因，在多克隆位点的上游为λ噬菌体的P L 和P R 启动子，P L 和P R 启动子受λ噬菌体CI 基因的负调控。CI 阻遏蛋白是温度敏感蛋白，
在28-37℃培养时，CI 产生抑制作用，在温度升至42℃时，CI 被破坏，这样就解除了对启动子的封闭，使P L 和P R 启动子开始下游基因转录。
目的基因为hIL-18的编码序列（cDNA ），采用RT-PCR 技术从外周血细胞中获得。首先据Genebank 报道序列设计引物，并在引物的5’端引入EcoR I 位点和启始密码子ATG ，在3’端引入Hind Ⅲ位点。IL-18基因的RT-PCR 扩增产物经EcoR I 和Hind Ⅲ双酶切插入表达载体pBV220的相同位点即得hIL-18的表达载体pBV220-hIL-18。构建的表达载体pBV220-hIL-18按常规方法转化大肠杆菌DH5α株后即得“重组hIL-18”的工程菌。
图 1 pBV220物理图谱
（2）pGEX-GST表达载体和工程菌构建
pGEX-GST为商品化融合表达载体，主要用于外源基因的可溶性融合表达。GST （谷胱甘肽转移酶）为大肠杆菌宿主细胞的天然高效、可溶性表达的蛋白。以其作为融合表达“标签”有二点优势：a) GST可以促进二硫键的形成，使目的基因融合表达产物能正确折叠，因而常以可溶的表达产物存在；b)GST属于大肠杆菌高效表达的天然产物，其mRNA的5‘端具有最适的结构，有利于融合基因mRNA的翻译，因此可大大提高融合基因表达水平。
在pGEX-GST中，GST处于复合启动子Tac的控制之下，因此可采用IPTG诱导。其载体如图2所示，图中所示载体中还有一个特殊设计，即GST与目的蛋白的融合位点位PreScission蛋白酶识别位点，融合蛋白可在4℃下进行酶切反应，可避免其它蛋白酶类37℃那样的高温条件对目的产物的破坏。本综合实验中采取的是无外源基因的载体，即只表达GST，主要用于给同学们展示与pVB220-hIL-18不同的另一种启动子和表达诱导方式（PL/PR vs Tac；温控vs IPTG诱导），并便于“表达进程分析”。
图 2 pGEX-GST的物理图谱
1.2.1.2工程菌表达筛选
（1）菌种活化
在无菌操作条件下，用无菌竹签随机挑取中等大小菌落的克隆，先在含有100ug/mL氨苄青霉素的LB平板上轻轻点一下，不要插入平板，随后用带有残余菌体的牙签接种含有2mL LB培养基（含100ug/mL氨苄青霉素）的带塞试管，如此类推。每个学生接种1株，第1位同学负责接种对照，共接种7个转化子单克隆，每个小组共用一个平板；将GST工程菌接种到含有2mL LB培养基（Amp+）的试管中。及时、准确做好划线平板与试管的对应编号和平板编号标记。平板和试管种分别置于37℃培养箱和摇床37℃，160rmp培养过夜。
（2）IL-18工程菌表达诱导
将前一天摇床过夜的6支试管的IL-18菌液按1%（即30 ul）的接种比例分别接种到6支含有3mL LB培养基（含75ug/mL氨苄青霉素）的试管中， 37℃摇床170 rmp培养2.5hr，迅速转移到42℃培养箱中诱导培养4hr。每个小组设一非诱导对照，标记为CK1，CK1于37℃培养6.5hr，不做42℃表达诱导。培养完后，从试管中取300 ul于EP管中，-20℃保存备用。
(3) IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE
（1）菌体样品处理
取-20℃冻存的培养物EP管，置于离心机5000g×5min离心，弃上清，菌体
加入40ul 2×上样缓冲液，封口膜封好EP管，100℃水浴3min(Marker同时一样
处理)，待冷却后10000g×10min离心，小心吸取上清，转入另一标记好的EP管，室温保存备用（如长期放置，则置于4℃保存，电泳前再煮沸2分钟）。
（2）SDS-PAGE
O 3.3mL、30％胶母液 4.0mL、分离胶缓冲液（pH8.8）1、配制适量的12％的分离胶：H
2
2.5mL、10％SDS 0.1mL、10％APS 0.1mL、TEMED 0.008mL。
2、将配制好的分离胶加入制胶槽中，注意应沿着边缘缓慢加入，千万别进气泡。凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳子齿约0.5cm处。
3、轻轻在分离胶溶液上覆盖一层双蒸水封胶，使凝胶表面变的平整，静置47min，使凝胶聚合。凝胶聚合后，在分离胶和水层之间将会出现一个清晰的界面，可以微微倾斜模具，检测凝胶是否聚合。
4、除去上面的水层，再用滤纸吸尽残留的液体。
O 3.4mL、30％胶母液 0.83mL、浓缩胶缓冲液（pH6.8）5、配制5％的浓缩胶：H
2
0.63mL、10％SDS 0.05mL、10％APS 0.05mL、TEMED 0.005mL。
6、迅速将配好的浓缩胶添加到分离胶上面，并将梳子插入凝胶内，至梳子齿的底部与前玻璃板的顶端平齐，小心避免混入气泡。将凝胶垂直放置于室温下，约25min 凝胶聚合。
7、将胶板放入电泳槽中，在上下电泳槽中添加电泳缓冲液，使凝胶的上下端均能浸泡在缓冲液中。轻轻拔出梳子，注意不要将加样孔撕破。
8、在电泳槽的泳道中分别添加蛋白Marker10 ul和样品10ul。每小组共用一胶，每胶15孔，1号孔为蛋白质分子量标准Marker，2-7号孔为自小至大编号的菌株诱导菌体蛋白，8号孔为非诱导菌体蛋白（对照CK1）。加样时用微量移液器将样品加入样品孔的底部，避免带入气泡。
9、接通电源，上槽（加样孔端）接负极，下操接正极，恒流，起始电流20mA，待溴酚篮前沿进入分离胶，电流增加至30mA。
10、待蓝色前沿跑至距电泳槽底部0.5cm时，切断电源，从电极上拔掉电极插头，取出玻璃板。
11、带上手套，小心移去两玻璃之间的隔片，利用专用的铲子轻轻撬开玻璃板，小心从制胶板上将凝胶剥下，弃去浓缩胶。在右下角切去小片作为定位标记。
12、用清水洗胶，将分离胶放入染色液于摇床中40℃，染色30min。
13、从染色液中将凝胶取出用水漂洗后，将胶放入脱色液中进行扩散脱色3次，
直到背景蓝色褪淡，见到条带。倒掉脱色液，加入10%甘油保存至凝胶扫描分析。（4）工程菌表达筛选
观察电泳结果，找出表达量高的条带，对应前面在平板上的划线，挑选高表达的菌落，接种到2mL LB(Amp+)液体培养基中。接种GST工程菌到3管2mL LB(Amp+)液体培养基中，标记好放到摇床中37℃，170rpm摇床培养过夜。
1.2.1.3 制备IL-18工程菌甘油种
取5个EP管，按1：1（V/V）的比例加入250ul无菌的60％甘油和250ul接种的高表达的IL-18工程菌液，混匀后-80℃冰箱保存。
1.2.1.4 GST工程菌生长曲线分析
在超净工作台将过夜培养的GST工程菌种子液按5%的接种量（1mL），接入到19mL LB(Amp+)的三角瓶中。摇匀后取出1.5mL于EP管，用于0小时的OD值测定。将三角瓶置于摇床中37℃，170rpm振摇培养。此时开始计时，然后每培养1小时
值，共测定6小时。其中，前2将三角瓶取出置于超净工作台中，取样测定其OD
600
小时每次取样1.5mL，之后每次取样0.5mL，用LB培养基稀释至1.5ml。
生物量测定时，先将光分光光度计调节波长至600nm，预热30min，取1.5mL 未接种的LB(Amp+)培养基于比色杯中作为空白对照，将菌液加至比色杯中进行测定。记录读数。将测定的OD值填入下表：
时间0h 1h 2h 3h 4h 5h 6h
OD
600
值为纵坐标，绘制GST工程菌的生长曲线。
以上述表格中的时间为横坐标，OD
600
1.2.1.5 GST工程菌表达影响因素试验
（1）诱导时机的影响
按5%的接种量，将3管过夜培养的GST工程菌种子液混在一起，分别取1mL 接入到含19mL LB的三角瓶（标记为A1-1、A1-2、A1-3）中，三角瓶中应先加入氨苄青霉素，三支瓶分别取1.5ml测生物量(OD
0h)，然后置于摇床中37℃，170rpm
600,
振摇培养。培养至1.5h时，取出A1-1，在超净工作台中取出1.5mL测其生物量（OD
,
600 诱导前）。然后加入2ul IPTG继续培养进行诱导表达。当培养至2.5h时，再取出A1-2，取出1.5mL测生物量，加入2ul IPTG继续培养进行诱导表达。当培养至3.5h 时，取出A1-3，操作。三瓶菌体均诱导表达4h。分别培养4h后，将三角瓶从摇
床取出，在超净台上取1ml于EP管中，-20℃冻存备用。
（2）表达因素实验SDS-PAGE
取前一天-20℃冻存的6支样品EP管，置于离心机5000g×5min离心，弃上清，加入40ul 2×上样缓冲液，封口膜封好EP管，100℃水浴3min(Marker同时一样处理)，待冷却后10000g×10min离心，小心吸取上清，转入另一标记好的EP 管，室温保存备用。进行SDS-PAGE电泳（操作同之前）。
1.2.1.6 表达进程分析
（1）GST工程菌表达进程实验接种
在超净台中GST平板上挑选一菌落接种于含2mL LB(Amp+)液体培养基中，同一菌落接种3管，置于摇床中37℃，170rpm振摇培养过夜。
（2）诱导表达并取样进行表达进程分析
从摇床中取出接种了GST工程菌的3支试管，在超净台上将3支试管的菌液混于一支试管中，共有6mL，取出5mL加到含100mL LB(Amp+)的三角瓶中，置于摇床中37℃，150rpm振摇培养。培养2.5h后，取出三角瓶，取1ml于EP管-20℃冻存。往三角瓶中加入100ul IPTG，诱导培养5h。此后每隔1小时取样1ml于EP 管-20℃冻存备用。
（3）表达进程分析SDS-PAGE
如前面操作。上样量为10 uL。
1.2.1.7 凝胶扫描分析
将三次的SDS-PAGE电泳胶进行凝胶扫描。
1.2.1.8 发酵工艺（观摩）
1.2.2 重组DNA药物单元
1.2.2.1 质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备
（1）培养细菌使质粒扩增
500mL菌液接种于200ml LB培养基,用前按1：1000比例加入卡那霉素溶液（50mg/ml）, 37℃,170rpm,培养过夜。
（2）碱法大量提取质粒DNA
将装在500mL三角瓶的200 mL菌液转移到离心杯中，3500rpm离心5min，弃
去上清培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。加入5mL冰预冷的溶液Ⅰ，重悬沉淀。向离心管中加入10mL新鲜配制的溶液Ⅱ，轻轻颠倒离心管5次。将离心管静置5min。后向离心管中加7.5mL冰预冷的溶液Ⅲ，缓慢颠倒4-5次使溶液Ⅲ在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，之后将离心管置冰上5min，12000g，离心15min，取上清。加0.9倍体积的异丙醇，冰上放置10min。12000g，离心20min，弃上清。加10mL 70％乙醇，12000g 离心10min，弃上清，沉淀在空气中干燥。以8mLTE （含20μg/ml的RNase A）溶解沉淀，37℃水浴锅中保温2 hr后取出置于4℃保存。
（3）离子柱层析纯化质粒DNA
①装柱：先用1-2倍柱体积（20mL）双蒸水洗柱。
②平衡：20mL含0.02M NaCl的TE溶液平衡。
③上样：取冻存的质粒溶液取1mL留样用于后面的电泳，余液以TE（pH8.0）稀释至50mL，用恒流泵泵入柱中。走纸速度为12cm/h,灵敏度为0.1A，电压200V,A=280nm。
④冲平：待样品上完，用0.02 M NaCl的TE溶液洗柱至基线。
⑤洗脱：用0.3M NaCl的TE溶液洗柱至基线平衡（去处杂蛋白及其它小分子物质），后改用1M NaCl洗柱至基线平衡（洗脱质粒DNA），再用0.5M NaOH洗柱至基线平衡，接着用水洗至中性。在洗脱过程中用离心管收集各吸收峰，并用EP管收集峰尖留样并标记。
⑥再生：用1.0M NaCl过柱。20%乙醇中保存。
（4）琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒DNA
称取0.8g琼脂糖于三角瓶中，用量筒量取80mLTAE倒入三角瓶。加热溶解，待冷却到60℃再加入5 uLEB。将琼脂糖溶液慢慢倒在插有梳子的胶膜上，厚约3mm，静置。待胶凝固后，拔去梳子，将胶连带胶膜放入已装好电泳缓冲液的电泳槽内。取各峰尖样品8uL+2uL Buffer在透明胶手套上混匀，上样，Marker 10uL。恒流100mA电泳。电泳完毕，用紫外检测仪观察结果，凝胶扫描。
1.2.2.2 TCR质粒-脂质体复合物制备与分析
（1）质粒-脂质体复合物制备：包封率的测定
吸取质粒DNA 2ug (10ul) + NaCl 40 ul = 50ul ① 10min
吸取脂质体 5ul + NaCl 45 ul = 50ul ② 10min
对照质粒DNA 2ug (10ul) ＋NaCl 90 ul= 100ul (B) 10min
将②加入①，室温放置20min，(A)。超速离心，12000 rpm 10min，分别取每管上清50 ul测紫外吸光度OD
260
值，生理盐水50 ul作为空白对照。计算包封率：
包封率（%）＝（OD
B －OD
A
）／OD
B
×100％
（2）质粒-脂质体复合物制备：转染用
吸取质粒DNA 12ug (60ul)
吸取脂质体 30 ul
1640培养基 210 ul
将上述溶液轻轻混匀，室温放置15min。转染用50ul/孔，共转6孔。
1.2.2.3 PBMC体外基因转染
（1）人T淋巴细胞（PBMC）由老师完成。
（2）用含TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的质粒转染人淋巴细胞
取一12孔板，每孔加入1mL淋巴细胞悬液，细胞总数为1×106个。共接种12孔，其中6孔用于转染，6孔作为对照。向转染用的6孔中加入50ul/孔的质粒-脂质体复合物，混匀，放入培养箱中5h后每孔分别加入800 ul培养基+200 ul胎牛血清+2 ul IL-2+20 ul双抗，继续培养24h。
（3）转染T淋巴细胞基因表达荧光检测
将以上培养的12孔板培养48h后置于荧光显微镜下拍照，然后用于Bel-7402细胞共孵育，以及小鼠体内实验。
1.2.2.3 TCR体外转染活性检测
（1）肿瘤细胞BEL-7402接种，培养
取肿瘤细胞BEL-7402一瓶，弃去培养基，用移液器吸取灭菌生理盐水 2mL加入培养瓶中，轻轻洗涤细胞一次，弃上清。向瓶中加入1mL胰酶，盖紧瓶盖，室温消化3分钟，盖紧盖子在显微镜下观察细胞状态。待细胞变圆成单个细胞后，竖起培养瓶，在操作台上打开瓶盖，倒去胰酶液体。向瓶中加入4mL1640培养基，用玻璃滴管吹打，取800ul悬液于EP管中用于细胞计数，计数结果为8.5×105个/mL。取一支离心管，加入750ul细胞悬液，600ul FBS,4650ul 1640培养基，6ul双抗，混匀之后将肿瘤细胞悬液接种于12孔板，1mL/孔，加6孔。将培养板置于细胞培养箱中，37℃培养，24h后与淋巴细胞共孵育。
（2）T细胞-肿瘤细胞共孵育
分别吸取2孔已转染T淋巴细胞，1800rpm,5min离心，弃上清，用1640培养基1ml吹打混匀，加入Bel-7402培养板（先吸去培养液，加入1640 1ml）中，1ml/孔，每孔补加10%血清和双抗（1：1000）；再吸取2孔未转染的T淋巴细胞，也按上面方法处理，余下2孔肿瘤细胞作为对照。将培养板置于细胞培养箱中，37℃培养24小时后置于倒置显微镜下进行拍照。
1.2.2.4 TCR转染体内试验
（1）荷瘤昆明小鼠模型建立（提前一周）
取 8只小鼠(雌雄分开养)，用苦味酸标记。1-7号腹腔注射0.3mLH22细胞液（107个cell/ml），8号腹腔注射0.3mL生理盐水。将8只小鼠置于实验室培养，观察小鼠的腹水生成情况。
（2）转染 T细胞注射荷瘤小鼠
转染T淋巴细胞剩余4孔分别离心1800rpm,5min，分别加入0.2ml生理盐水，腹腔注射小鼠体内，未转染的2孔细胞也按上述处理作为对照，其余小鼠注射0.2ml 生理盐水作为阴性对照。连续一周观察小鼠的腹水生成情况，这期间要每天给小鼠喂食，保持小鼠饲养环境的清洁，最后进行拍照比较。
二、结果与讨论
2.1 重组蛋白质单元结果与讨论
2.1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE
图1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE凝胶扫描图
图1.2 工程菌表达筛选BandScan分析图
泳道1-6对应1-6号菌株，泳道7为对照菌株CK1
每个泳道的上样量为10ul，目的蛋白的分子量为28KD，由图1.1可以看出，1-5泳道均有表达，6、7泳道没有相应的条带。7号为对照组，其菌液始终在37℃下培养，没有进行42℃的诱导，故无目的蛋白产生。而6号无条带属于异常现象，可能是转化时只转入了空质粒。
经BandScan软件进行数据分析（图1.2），2号菌株表达量最高（14.9%），1
号菌株为12.1%，4号菌株12.3%，3号菌株7.0%，5号菌株4.6%。但是从条带上可以看出，2号菌蛋白表达总量比较少，1号菌的表达总量相对是最好的。使用软件我们发现，跑胶的质量直接影响到软件分析的可靠性，我们组的胶跑得不是很好，条带不太清晰，所以软件分析结果参考价值并不是很大。
通过目测，本组选择3号菌株作为高表达菌株保种。
2.1.2GST工程菌生长曲线分析
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
表1.1 GST工程菌生长OD值
时间0h 1h 2h 3h 4h 5h 6h
OD
0.080 0.264 0.728 1.251 1.638 1.896 1.959
600
图1.3 GST工程菌生长曲线
由图1.3可看到，该生长曲线呈S形，经过了延缓期、对数期到稳定期的趋势。0-1h生长较缓慢，从第1h开始呈对数增长，到5h以后生长趋于稳定。对数中期确定第3 个小时。
2.1.3表达影响因素试验
基因工程菌的培养一般分两段。前期是菌体生长，生长到某一阶段，加入诱导因子，诱发产物表达。加入诱导因子的时间被称为诱导时机。对于基因工程菌一般选择其对数生长期作为菌体的诱导时机。如表1.2所示：如果在对数生长早期进行诱导，由于菌体量较少，蛋白的表达量不高。在对数生长中期进行诱导，工程菌的生长速度比较快，这时蛋白的积累加快，蛋白表达水平较高。而菌体进入对数期后期，由于发酵液中营养的消耗，氧气的缺乏及代谢产物的积累，使菌体的生长速度明显受到抑制。在此状态下诱导，表达显然受到影响。
表1.2 诱导时机OD值
1.5小时
2.5小时
3.5小时
0小时0.056 0.050 0.046
1.149
诱导
0.466 0.744
前
图1.4 诱导时机对工程菌表达SDS-PAGE凝胶扫描图
1、 2: 培养1.5h后IPTG诱导4h
3、 4: 培养2.5h后IPTG诱导4h
5、 6：培养3.5h后IPTG诱导4h
每个泳道的上样量均为10ul，图1.4可以看出，表达量最高的是4号泳道，3号泳道的总蛋白量比4号泳道少，所以目的蛋白较少，但比例差不多。其次是1号和2号泳道，最少的是5号和6号泳道。
从图1.5可看出，2-7泳道都有目的蛋白表达，5号泳道的目的蛋白表达量最高，2号泳道的目的蛋白表达量高于6泳道。所以在GST培养1.5h—2.5h时对工程菌进行诱导得到的目的蛋白含量最高。
图1.5 诱导时机对工程菌表达的影响BandScan分析图
2.1.4表达进程试验
诱导时间是指加入诱导剂后的培养时间。随着诱导时间的延长，外源蛋白的表达量增加，但外源蛋白在细胞内的积累，对重组菌产生毒性，合成速率下降，甚至产物被分解。由上述实验选择了培养2.5小时作为诱导时机。
图1.6所示，1号泳道有少量蛋白表达（28KD），因为还没有开始诱导，应该
属于本底表达；之后的泳道诱导时间逐渐增加，相应的目的蛋白的条带颜色也在加深，蛋白总的表达量也在增加，但是目的蛋白的含量未见明显增加。软件的分析也表明了这一点。因此，虽然诱导时间的延长有助于总蛋白量的增加，但如果目的蛋白的增加不多的话，考虑到成本和经济效益，应该选择一个合适的诱导时间。
图1.6 GST表达进程SDS-PAGE凝胶扫描图
1：培养2.5h的样品 2: IPTG诱导1h的样品
3：IPTG诱导2h的样品 4：IPTG诱导3h的样品
5：IPTG诱导4h的样品 6：IPTG诱导5h的样品
图1.7 GST表达进程BandScan分析图
2.2 重组DNA药物单元结果与讨论
2.2.1质粒阴离子交换层析纯化
如图2.1所示，A1-2和A1-2-2为穿透峰，A1-3 、A1-4、 A1-5分别为用含0.3 mol/L NaCl的TE、含1.0 MNaCl的TE、1.0M NaOH的洗脱峰。上样后用平衡缓冲液过柱后，除去大量的杂质，产生穿透峰。洗脱峰A1-3是用0.3M NaCl的TE 溶液洗柱产生的，除去与柱子结合不太紧密或者一些非特异性结合的物质。洗脱峰A1-4是用1M NaCl洗柱产生的，可洗脱质粒DNA，洗脱峰A1-5是用1.0M NaOH
洗脱的，可除去与柱子结合得比较紧密的物质。
图2.1 阴离子交换纯化层析图
2.2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析
琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物，可作为电泳支持物，适用于分离大小范围在0.2-50kb的DNA片段。DNA分子的迁移率与分子量的对数值成反比关系。观察其迁移距离，与标准DNA片段进行对照，就可获知该样品分子量大小。在质粒抽提过程中，由于各种因素的影响，使质粒DNA呈现超螺旋的共价闭合环状、开环状分子、线状分子三种不同的构型，这三种分子有不同的迁移率。在一般情况下，超螺旋型迁移速度最快，其次为线状分子，最慢的为开环状分子。用荧光染料溴化乙锭（ethidium bromide, EB ）进行检测，溴化乙锭嵌入碱基对之间形成荧光络合物，在紫外线激发下发出红色荧光。
如图2.2所示，原样是纯化前样品，有若干明显的条带，是不同构型的质粒和一些DNA杂质。泳道1、2的样品主要是一些杂蛋白，不含DNA，故无条带；泳道3中有一条比较模糊的条带，对应于质粒的开环构型；泳道4洗脱峰为质粒，条带比较模糊，可能是洗脱不彻底，而泳道5中出现明显的条带，与原样的组成相似，说明在用1M NaCl过柱时，并不能很好的将质粒洗脱下来，同时也解释了泳道4中出现的现象。可以考虑用更高的盐浓度来洗脱。
图2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析
原样：上柱前样品1、2：0.02 mol/L NaCl洗脱峰样品3：0.3 mol/L NaCl洗脱峰样品4：1.0 mol/L NaCl洗脱峰样品5：1 mol/L NaOH洗脱峰样品
会计综合实训实验报告
专业综合训练报告 ( 姓名： 学号： 班级：
专业综合训练任务书
专业综合训练 一、专业综合训练整体目标 会计专业综合训练的目的，主要是通过模拟实训，系统、全面地掌握企业会计制度和企业会计核算的基本程序和具体方法，加强对会计基本理论的理解、对会计基本方法的运用和对会计基本技能的训练，将会计专业知识和会计实务有机的结合在一起，真正掌握会计实务处理方法。同时，在通过与岗位要求完全相同的实验操作中，培养职业意识，提高职业素质，形成工作能力，为即将从事的会计工作打下坚实的基础，成为理论与实际相结合的会计专业人才。 " 二、专业综合训练具体内容 （一）实验一系统管理和基础管理 1．启动系统管理：开始程序用友ERP-U872系统服务系统管理。 2．以系统管理员身份注册登录系统管理：系统注册出现登录对话框，输入“admin”，确定，如图1-1. 图1-1 3．增加操作员：权限用户进入“用户管理”增加，出现“增加用户”对话框，依次输入资料内容如图1-2.
图1-2 4．建立账套：账套建立，打开“创建账套”对话框输入账套信息输入单位信息输入核算类型确定基础信息确定编码方案数据精度定义退出如图1-3. \ 图1-3 5．财务分工：权限权限，进入“操作员权限”窗口选账套，选年度，选用户修改或增加，打开“增加和调整权限”对话框按资料设置各用户权限退出 6．系统启用与基础设置 (1)登录“企业应用平台”：开始程序用友ERP-U872企业用用平台，打开登录对话框以账套主管身份登录。 (2)系统启用：基础设置基本信息系统启用启用总账，启用日期2013年4月1日。注意：若建账套时已完成启用，则略过此步骤。 (3)进行基础设置：基础设置基础档案选择录入项目录入资料所给内容如图1-4-1.
陶瓷综合性实验报告记录
陶瓷综合性实验报告记录
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陶瓷综合性实验报告 ——总结报告
一、实验目的、实验原理 1． 实验目的 了解和掌握瓷质玻化砖的制备工艺 2． 实验原理 陶瓷是把粘土原料、瘠性原料及溶剂原料，经过适当的配比、粉碎、成形并在高温焙烧情况下经过一系列的物理化学反应后，形成的坚硬物质。陶瓷坯体是由经过高温焙烧后生成的晶相、玻璃相、原料中未参加反应的石英和气孔组成。玻化砖是一种强化的抛光砖，它采用高温烧制而成。质地比抛光砖更硬更耐磨。玻化砖颜色均匀、防污、耐磨、好打理，而且光亮如镜。质量过关的玻化砖要求吸水率小于0.5。 实验要求玻化砖的配方组成范围为 组成 2SiO 32O A l O Na 2+O K 2 含量（%） 65-75 16-19 <7 二、实验部分 2.1实验仪器、药品 实验仪器 实验设备 球磨机、行星球磨机、分离式液压起顶机、箱式电阻炉、茂福炉 性能测试设备 茂福炉、三点抗弯、电炉 其它 研钵（杵）、烧杯、20目筛、80目筛、250目筛、刚玉球、直尺、小刀、砂纸 实验药品 SiO 2 Al 2O 3 Fe 2O 3 CaO MgO K 2O Na 2O 烧失量 TiO 2 中山水洗泥 57 37 0.5 — — — — 12 — 滑石 45 — — — 31 — — — — 粘土1/2 70 12 1.5 3-4 2-3 2.0 — 0.7-0.8 钾长石 70 15 0.5 — — 13-14 0.5 0.2-0.3 钠长石 70 13 1.0 — — 2.0 8.0 1.0 0.7-0.8 叶腊石 60 22-24 0.1 — — — — <1.0 — 宣化土 71 12 1.5 4-5 — <3.0 6.0 1.0 2.2实验步骤
信息科学与工程学院综合性设计性实验报告
重庆交通大学信息科学与工程学院 综合性设计性实验报告 专业：通信工程专业11级 学号：0204 姓名：何国焕 实验所属课程：宽带无线接入技术 实验室(中心)：软件与通信实验中心 指导教师：吴仕勋 一、题目 OFDM系统的CFO估计技术 二、仿真要求 要求一：OFDM系统的数据传输 ①传输的数据随机产生； ②调制方式采用16QAM； 要求二：要求对BER的性能仿真 设计仿真方案，比较两个CFO的性能（基于CP与基于训练符号Moose），并画出不同SNR下的两种估计技术的均方差（MSE）性能。
三、仿真方案详细设计 1、首先OFDM技术的基本思想和现状了解。认真学习OFDM技术的基本原理，包括OFDM系统的FFT实现、OFDM系统模型、OFDM信号的调制与解调、OFDM信号的正交性原理，根据PPT及网上查阅资料加以学习。其次，了 解OFDM的系统性能，包括OFDM系统的同步技术及训练序列等。 2、同步技术：接收机正常工作以前，OFDM系统至少要完成两类同步任务： ①时域同步，要求OFDM系统确定符号边界，并且提取出最佳的采样时钟，从而减小载波干扰(ICI)和码间干扰(ISI)造成的影响。 ②频域同步，要求系统估计和校正接收信号的载波偏移。在OFDM系统中，N个符号的并行传输会使符号的延续时间更长，因此它对时间的偏差不敏感。对于无线通信来说，无线信道存在时变性，在传输中存在的频率偏移会使OFDM 系统子载波之间的正交性遭到破坏。 3、载波频率的偏移会使子信道之间产生干扰。OFDM系统的输出信号是多个相互覆盖的子信道的叠加，它们之间的正交性有严格的要求。无线信道时变性的一种具体体现就是多普勒频移引起的CFO，从频域上看，信号失真会随发送信道的多普勒扩展的增加而加剧。因此对于要求子载波严格同步的OFDM 系统来说，载波的频率偏移所带来的影响会更加严重，如果不采取措施对这种信道间干扰（ICI）加以克服，系统的性能很难得到改善。 OFDM系统发射端的基本原理图OFDM信号频谱 4、训练序列和导频及信道估计技术 接收端使用差分检测时不需要信道估计，但仍需要一些导频信号提供初始的相位参考，差分检测可以降低系统的复杂度和导频的数量，但却损失了信噪
实验报告范本
学生实验报告书 实验课程名称 开课学院 指导教师姓名 学生姓名 学生专业班级 200-- 200学年第学期
实验教学管理基本规范 实验是培养学生动手能力、分析解决问题能力的重要环节；实验报告是反映实验教学水平与质量的重要依据。为加强实验过程管理，改革实验成绩考核方法，改善实验教学效果，提高学生质量，特制定实验教学管理基本规范。 1、本规范适用于理工科类专业实验课程，文、经、管、计算机类实验课程可根据具体情况参 照执行或暂不执行。 2、每门实验课程一般会包括许多实验项目，除非常简单的验证演示性实验项目可以不写实验 报告外，其他实验项目均应按本格式完成实验报告。 3、实验报告应由实验预习、实验过程、结果分析三大部分组成。每部分均在实验成绩中占一 定比例。各部分成绩的观测点、考核目标、所占比例可参考附表执行。各专业也可以根据具体情况，调整考核内容和评分标准。 4、学生必须在完成实验预习内容的前提下进行实验。教师要在实验过程中抽查学生预习情况， 在学生离开实验室前，检查学生实验操作和记录情况，并在实验报告第二部分教师签字栏签名，以确保实验记录的真实性。 5、教师应及时评阅学生的实验报告并给出各实验项目成绩，完整保存实验报告。在完成所有 实验项目后，教师应按学生姓名将批改好的各实验项目实验报告装订成册，构成该实验课程总报告，按班级交课程承担单位（实验中心或实验室）保管存档。 6、实验课程成绩按其类型采取百分制或优、良、中、及格和不及格五级评定。
实验课程名称：__通信原理_____________ 图1 AMI/HDB3码型变换电路原理图 含有丰富的时钟分量，因此输出数据直接送到位同步提取锁相环（PLL） 编译码系统组成电原理图见图1。
(4)综合性实验报告
MFC 基 本 应 用 程 序 的 建 立 学院：计算机与信息工程学院专业：通信工程 班级：12级通信一班 学号：1208224030 姓名：孙航
计算机与信息技术学院综合性、设计性实验报告 1.理解Windows编程特点，比较命令控制台项目与Windows编程的异同。 2.了解MFC应用程序的消息映射，数据映射，运行时类型检查和诊断信息转储机制。 3.掌握用AppWizard(exe)创建SDI，MDI以及基于对话框的应用程序的方法。 4.了解SDI和MDI编程，功能等方面的异同。 5.掌握使用项目工作区窗口的Class View 页面的为一个类添加成员的方法。 6.掌握用Class Wizard映射消息的方法等。 二、实验仪器或设备： 三、总体设计（设计原理、设计方案及流程等） 原理：MFC应用程序的建立 主要流程： 1、创建单文档 2、添加成员 3、添加消息映射 4、调试 四、实验步骤（包括主要步骤、代码分析等）
实验内容： （1）在一个默认的单文档应用程序Ex_ SDI中通过映射计时器消息实现这样的功能：无论在应用程序的窗口客户区中单击鼠标左键或右键，都会弹出 “消息”对话框，显示鼠标左键或右键的单击次数。Ex_ SDI运行结果如图所示。 （2）使用调试器对上诉程序的流程和鼠标单击次数进行调试。 实验步骤： 1.创建工作文件夹 打开计算机，在“F：\我的C++”文件夹中创建一个新的子文件夹“实验4”。 2.创建单文档应用程序Ex_SDI 创建单文档应用程序Ex_SDI的具体步骤如下： （1）启动Visual C++ 6.0。 （2）选择“文件”→“新建”菜单命令，显示出“新建”对话框。从列表中选中MFCAppWizard(exe)的项目类型项。
生物工程工艺综合性实验报告
(此文档为word格式，下载后您可任意编辑修改！) 生物工程工艺综合性实验报告 院（系）：城市建设学院 专业班级：生物工程1101 学生姓名：马雪文 学号： 指导教师：李世杰 20 14 年 5 月 26 日至20 14 年 6 月 15 日
发酵工艺综合性实验指导书 一、实验目的 微生物发酵技术是生物工程最核心的技术，微生物发酵按其对 氧的需求可分为好氧微生物发酵，和厌氧微生物发酵。好氧和厌氧发酵有较大的区别，各自对工艺条件、发酵设备有不同的要求。分别掌握好氧和厌氧发酵技术也就比较全面的掌握了工业微生物技术。 本实验分别开出典型的好氧和厌氧发酵实验，训练学生掌握这两种工艺的基本技术、操作程序、分析手段，全面锻炼同学们实际动手能力。巩固和提高微生物净化操作能力、显微观察技术、培养基配制和灭菌技术、无菌取样和细胞量的确定、生长曲线的制作、光谱分析技术、气象色谱分析技术。初步培养同学们工业微生物领域科学研究和技术开发的基本能力。 二、实验原理 红曲霉通过有氧发酵将淀粉质原料转化为次级代谢产物红曲色素。 丙丁梭状芽孢杆菌经厌氧发酵将农副产品转化为丁醇和丙酮。 三、实验内容 1、好氧实验：红曲的发酵实验及其抑菌作用研究 2、厌氧实验：丁醇的发酵实验及其气相色谱检测 四、仪器设备和试剂、消耗品： 1．仪器设备： 电子分析天平 手提式蒸汽灭菌锅、自动控制蒸汽灭菌锅 双孔水浴锅 1000W电炉 5台 生物显微镜、电脑成像生物显微镜 生物培养箱、培养摇床 真空干燥箱 紫外可见分光光度计 离心机
真空泵、真空干燥器 蒸发器 气象色谱仪 2．药品和耗材： 药品：可溶淀粉 1瓶（500克），蛋白胨 1瓶（500克），琼脂，饴糖（麦 芽汁）麦芽1000克，大米粉 5公斤，硝酸钠NaNO 31瓶（500克），磷酸二氢钾KH 2 PO 4 1瓶（500克），磷酸氢二钾K 2HPO 4 1瓶，硫酸镁MgSO 4 ·7H 2 O 1瓶（500克）,硫酸 铵(NH 4) 2 SO 4 1瓶，氯化锰MnCL 2 1瓶，硫酸锰MnSO 4 ·H 2 O 1瓶，碳酸钙CaCO 3 1瓶， 维生素B1(盐酸硫胺素)1小瓶，酵母膏1瓶，乳酸（液态1瓶500克），葡萄糖（分析纯）1瓶，乙醇（分析纯）5瓶(5×500克)，乙醇(色谱纯Aladdin) 2瓶,丁醇（色谱纯Aladdin）2瓶，丙酮（色谱纯Aladdin）2瓶，叔戊醇（色谱纯Aladdin）2瓶 耗材：500ml三角瓶50只， 250ml三角瓶16个，100ml粗口径试管50只，1000ml烧杯10个，培养皿160套，常规试管160个，200ml烧杯16个，1ml移液枪头5盒，标签纸若干，玻璃真空干燥器大号1个，波美计8只，移液枪（1000ml）2只，玻璃珠2盒，100ml量筒8个，500ml量筒2个，称量纸2盒，不锈钢试剂勺4根， pH试纸2包，玻璃棒若干，玻璃推棒32根，5ml移液管16只 五、实验方法步骤和具体操作过程 （一）红曲的发酵实验及其抑菌作用研究 红曲是一种具有一定营养和药理作用的纯天然红色素，可赋予肉制品、食品、饮料等鲜艳的色泽及特殊风味，而且具有较好的营养价值和一定的防腐作用，因而被广泛地应用于食品工业。 红曲是由红曲霉经发酵分泌到胞外的一种色素，发酵的主要原料是淀粉类如大米、薯类等。红曲霉发酵合成色素同时对有害菌产生抑制作用。本实验分为两个部分，前一部分为红曲的发酵实验，后一部分为红曲的抑菌试验。 （Ⅰ）红曲的发酵实验 1．菌种 本实验室保藏的红曲霉菌种monascus purpureus。用本实验室自主设计的保藏方法，在短梗霉多糖膜片中封存，置于冰箱中保藏。使用时每取出一片，
网页制作综合性实验报告模板
“巴黎文化之旅”简介 华南师范大学大学网页制作基础课程综合设计性实验报告 年级专业：协作小组编号： 以小组名义写报告，一个小组一份。红字部分为提醒学生修改的部分。记得删除指导教师：李桂英 学号姓名（组长排名第一） 20080000001 张三 200802010301 李四 摘要：网页是当前Intetnet的最常见应用之一，是人们获取和发布 信息的主要途径，掌握网页制作的原理和方法，对今后工作生活有很 大的帮助。本综合实验是在了解了网页设计的原则方法，掌握了Fireworks、Dreamweaver等工具处理网页中的图形图像及建立、编 辑网页页面的操作技能后，运用所学过的所有相关知识综合设计制作 一个介绍巴黎文化和风光的网站。通过设计与制作，了解和掌握了网 站的设计建立流程与网页的制作方法。 关键词：图形图像处理、表格布局、网页模板、超链接、框架、音频、 视频 一、“巴黎文化之旅”设计要求
1、绘制网站结构图，将各模块关系用简明的图示描述出来 2、网站制作时需要使用Dreamweaver建立并管理站点，并在 站点根目录下建立images等文件夹。 3、网站至少包括10个以上的网页，每个同学至少制作2个以 上的网页。 4、要求至少要使用模板技术或框架技术中的一种来搭建网站 整体架构。 5、页面美观，包含多种媒体，如文字、图片、动画（GIF或 FLASH等）音频、视频等。 6、网站制作完成后采用压缩工具将整个网页文件夹转换成压 缩文件再上传。 二、“巴黎文化之旅”设计方案 ⑴网站标题：巴黎文化之旅 ⑵网站内容简介：本网站通过图片、视频、音乐、文字等多种媒体的形式展现花都巴黎的文化和城市风光、并为旅行者提供了旅游信息和建议。 ⑶网站结构图 网站首页 (FLASH) Index.htm 内文首页default.htm
大学物理综合设计性实验(完整)
综合设计性物理实验指导书黑龙江大学普通物理实验室
目录绪论 实验1 几何光学设计性实验 实验2 LED特性测量 实验3 超声多普勒效应的研究和应用 实验4 热辐射与红外扫描成像实验 实验5 多方案测量食盐密度 实验6 多种方法测量液体表面张力系数 实验7 用Multisim软件仿真电路 实验8 霍尔效应实验误差来源的分析与消除 实验9 自组惠斯通电桥单检流计条件下自身内阻测定实验10 用迈克尔逊干涉仪测透明介质折射率 实验11 光电效应和普朗克常数的测定液体电导率测量实验12 光电池输出特性研究实验 实验13 非接触法测量液体电导率
绪论 一．综合设计性实验的学习过程 完成一个综合设计性实验要经过以下三个过程： 1．选题及拟定实验方案 实验题目一般是由实验室提供，学生也可以自带题目，学生可根据自己的兴趣爱好自由选择题目。选定实验题目之后，学生首先要了解实验目的、任务及要求，查阅有关文献资料（资料来源主要有教材、学术期刊等），查阅途径有：到图书馆借阅、网络查询等。学生根据相关的文献资料，写出该题目的研究综述，拟定实验方案。在这个阶段，学生应在实验原理、测量方法、测量手段等方面要有所创新；检查实验方案中物理思想是否正确、方案是否合理、是否可行、同时要考虑实验室能否提供实验所需的仪器用具、同时还要考虑实验的安全性等，并与指导教师反复讨论，使其完善。实验方案应包括：实验原理、实验示意图、实验所用的仪器材料、实验操作步骤等。 2．实施实验方案、完成实验 学生根据拟定的实验方案，选择测量仪器、确定测量步骤、选择最佳的测量条件，并在实验过程中不断地完善。在这个阶段，学生要认真分析实验过程中出现的问题，积极解决困难，要于教师、同学进行交流与讨论。在这种学习的过程中，学生要学习用实验解决问题的方法，并且学会合作与交流，对实验或科研的一般过程有一个新的认识；其次要充分调动主动学习的积极性，善于思考问题，培养勤于创新的学习习惯，提高综合运用知识的能力。 3．分析实验结果、总结实验报告 实验结束需要分析总结的内容有：（1）对实验结果进行讨论，进行误差分析；（2）讨论总结实验过程中遇到的问题及解决的办法；（3）写出完整的实验报告（4）总结实验成功与失败的原因，经验教训、心得体会。实验结束后的总结非常重要，是对整个实验的一个重新认识过程，在这个过程中可以锻炼学生分析问题、归纳和总结问题的能力，同时也提高了文字表达能力。 在完成综合性、设计性实验的整个过程中处处渗透着学生是学习的主体，学生是积极主动地探究问题，这是一种利于提高学生解决问题的能力，提高学生的综合素质的教学过程。 在综合设计性实验教学过程中学生与教师是在平等的基础上进行探讨、讨论问题，不要产生对教师的依赖。有些问题对教师是已知的，但对学生是未知的，这时教师应积极诱导学生找到解决问题的方法、鼓励学生克服困难，并在引导的过程中帮助学生建立科学的思维方式和研究问题的方法。有些问题对教师也是一个未知的问题，这时教师应与学生共同思考共同解决问题。 二．实验报告书写要求 实验报告应包括：1实验目的；2实验仪器及用具；3实验原理；4实验步骤；5测量原始数据；6数据处理过程及实验结果；7分析、总结实验结果，讨论总结实验过程中遇到的问题及解决的办法，总结实验成功与失败的原因，经验教训、心得体会。 三．实验成绩评定办法 教师根据学生查阅文献、实验方案设计、实际操作、实验记录、实验报告总结等方面综合评定学生的成绩。 （1）查询资料、拟定实验方案：占成绩的20%。在这方面主要考察学生独立查找资料，并根据实验原理设计一个合理、可行的实验方案。 （2）实施实验方案、完成实验内容：占成绩的30%。考察学生独立动手能力，综合运用知识解决实际问题的能力。 （3）分析结果、总结报告：占成绩的20%。主要考察学生对数据处理方面的知识运用情况，分析问题的能力，语言表达能力。 （4）科学探究、创新意识方面：占成绩的20%。考察学生是否具有创新意识，善于发现问题并能解决问题。 （5）实验态度、合作精神：占成绩的10%。考察学生是否积极主动地做实验，是否具有科学、
Web应用程序设计综合实验报告解析
Web应用程序设计综合实验报告题目：网上购物系统 学生姓名： XXX 学号： XXXXXXXXXXX 院（系）： XXXXXXX 专业： XXXXXXXXXX 指导教师： XXXXXXXXXX 2014 年 7月 6 日
1、选题背景 随着计算机技术的发展和网络人口的增加，网络世界也越来越广播，也越来越来越丰富，网上商城已经成为网上购物的一股潮流。互联网的跨地域性和可交互性使其在与传统媒体行业和传统贸易行业的竞争中是具有不可抗拒的优势。在忙碌丰富的社会生活中，人们开始追求足不出户就能买到心仪的商品，是越来越多的上网爱好者实现购物的一种方式，对于企业来说，网络交易能大大提高交易速度、节约成本。在这种形势下，传统的依靠管理人员人工传递信息和数据的管理方式就无法满足企业日益增长的业务需求，因而开发了这样一个具有前台后台的网上商城系统，以满足购物者和企业的需求。 因此这次毕业设计题目就以目前现有的网上商城系统为研究对象，研究一般的网上商城的业务流程，猜测其各个功能模块及其组合、连接方式，并分析其具体的实现方式，最后使用Java加web服务器和数据库完成一个网上商城系统的主要功能模块。通过这样一个设计，可以提高自己Java编程的水准，也练习了怎样构建一个完整的系统，从系统的需求分析到设计，直至编码、测试并运行，熟悉并掌握一个完整的Web开发流程，为今后工作打下基础。 1.1设计任务 从以下几个方面实现网络商城的基本功能： 1、用户部分： （1）用户的登录和注册，用户必须注册才能购物，注册时系统会对注册信息进行验证，进入系统或是结账时，用户可以进行登录，登录时，如果密码错误，系统会进行验证并提示错误。 （2）浏览商品，实现用户可以在网络商店中随意浏览商品，商品按类别分类，方便用户查找不同类别的商品 （3）购物车管理，能实现添加商品、删除商品、更新商品的功能。 （4）生成订单，查看购物车后单击下一步则生成订单信息表，一旦提交订单，则购物车就不能被改变。 2、管理员部分：
《计算智能》综合性实验报告 -
华北科技学院基础部综合性实验 实验报告 课程名称计算智能 实验学期 2013 至 2014 学年第 2 学期学生所在系部基础部 年级 12 专业班级计算B121 学生姓名郭春元学号 201209014115 任课教师杨文光 实验成绩
《计算智能》课程综合性实验报告 开课实验室：数学应用实验室2014 年7月12 日 实验题目自动倒车简易模糊差值控制 一、实验目的 1.了解一些算法，知道matlab的应用 2.上机实验操作，熟悉matlab的程序 二、设备与环境 Matlab软件。 三、实验内容及要求 内容：针对倒车问题的程序模仿实验。 第一步：简易模糊插值的控制方法： 对于双输入单输出系统而言，设输入量x，y的论域分别为X，Y，输出变量为z，论域为Z。基于模糊控制系统可以表示成为一个二元分片插值函数： 第二步：模型的建立 对输入变量y的实际物理论域[-10,10]划分为5个三角模糊集，对输入变量θ的实际物理论域[-pi,pi]划分为7个三角模糊集，对于输出变量（即控制量）η的实际物理论域[-pi/9,pi/9]划分为7个单点模糊集，具体隶属函数见下图： 这是输入变量y的隶属函数模糊集模型
这是输入变量θ的隶属函数模糊集模型的建立 这是控制量η的隶属函数的模糊集模型 有这三个隶属函数就可以对这个模型进行控制。 第三步：自动倒车仿真实验 在matlab软件编写程序不难实现倒车模型在各种倒车环境下仿真曲线，自动倒车的方程函数如下：
控制规则： 有matlab程序可以知道倒车图像：
5 10 15 20 25 8.28.48.68.89 9.29.49.69.81010.2x/m y /m θ=pi/3 y=10m 510 152025 8.599.5 10 x/m y /m θ=pi/4 y=10m 050100 150200250-10 -8-6-4-20 24 6 x/m y /m 050100 150200250 -10 -8-6-4-20 2 4 6 x/m y /m 不同的角度和初始变量的值对应的倒车图像不同。 第四步：根据仿真实验找到合适的初值： 在完成自动倒车的模型建立和规则数据集的提取工作后，根据以上图像的核心函数知道： 为了更好的实现仿真实验的拟合更好的位置纵坐标的y 量化因子k （y ）=0.4，输入量θ的量化因子k （θ）=2，控制量η的比例因子k （η）=20. 由上知道： 在倒车实验中，均采用相同的量化因子和比例因子，显示出各种参数具
胰岛素设计性实验报告doc
胰岛素设计性实验报告 篇一：实验设计-修订版 胰岛素所致的低血糖休克及药物 和激素对血糖的影响 第一临床医学院XX级医学检验一班 设计人：郭英刘雨霏刘妮彭超 XX年3月12日 【题目】胰岛素所致低血糖休克及药物和激素对血糖的影响 【背景】 胰岛素是重要的内分泌激素之一，主要生理作用是全面地调节糖类代谢，同时也相应地调节脂肪和蛋白代谢。正常动物由于神经系统的调节和激素的相互作用，血液中胰岛素浓度是相对稳定的。若给正常动物注射胰岛素，可造成人胰岛素性低血糖症状。血糖浓度持续降低而出现交感神经兴奋性增高和脑功能障碍症群而导致的综合症就是低血糖休克。在实验条件下如果给动物注射过量的胰岛素，使动物体内胰岛素量骤然升高，可造成动物实验性低血糖，会使神经组织的正常代谢和功能发生障碍，以至产生痉挛昏迷，外部表现为惊厥，称之为胰岛素休克。小鼠的低血糖休克实验属于经典实验．传统的胰岛素休克实验目的是观察人工胰岛素性低血糖休克以及注射葡萄糖后的消失过程，以加深对胰岛素
生理作用的理解．但实验中一般不测定小鼠血糖的变化，只是观察胰岛素造成低血糖休克时的行为变化。 现阶段对胰岛素降低血糖的原理研究较多，其他药物和激素如甲状腺素、生长激素、糖皮质激素对血糖的研究也以较多，但都是单量试验，并未将多种激素和药物联合起来观察对血糖影响的研究。本次试验将通过制作胰岛素低血糖休克模型来同时观察多种药物和激素对血糖的影响。 体内降低血糖的激素只有胰岛素一种，但升高血糖的激素却不止胰高血糖素一种。糖皮质激素是一种胰岛素拮抗激素，可以增强肝脏中的糖原异生，促进肝糖原分解，抑制外周组织对葡萄糖的摄取和利用，从而导致血糖升高。而甲状腺素有促进生长发育的作用，也能够促进糖的吸收和糖异生，也可升高血糖。生长激素的主要生理功能是促进神经组织以外的所有其他组织生长；促进机体合成代谢和蛋白质合成；促进脂肪分解；对胰岛素有拮抗作用；抑制葡萄糖利用而使血糖升高等作用。但其剂量不同，对血糖的影响亦不同，本次试验就胰岛素等临床常见的与血糖有关的药物和激素对血糖的影响做相应的探讨。 【目的】 学习检测血糖的方法，观察胰岛素及药物和激素对血糖的影响，同时验证不同剂量的生长激素对血糖的影响不同，从而加深理解药物和激素影响血糖水平的机制。
实验报告4类与对象
实验名称：类与对象 一．实验目的： （1）理解C#语言是如何体现面向对象编程基本思想； （2）掌握类对象的定义； （3）了解类的封装方法，以及如何创建类和对象； （4）了解成员变量和成员方法的特性； （5）掌握静态成员的用法； （6）掌握构造函数和析构函数的含义与作用、定义方式和实现，能够根据要求正确定义和重载构造函数。能够根据给定的要求定义类并实现类的成员函数； （7）掌握参数传递的用法； （8）掌握属性的作用和使用。 二．上机内容： 1）创建MyDataTime类，熟悉构造函数、析构函数的定义方法、属性的定义方法以及一般方法的定义过程。 （2）创建Fraction类，掌握运算符重载、静态方法的使用及其与实例方法的区别。（3）创建Swap类，掌握C#方法中参数的传递。 （4）整理上机步骤，总结经验和体会。 （4）完成实验报告。 四．上机步骤： 类的创建与应用： 创建一个MyDataTime类，要求如下：
（1）私有字段：year，month，day； （2）属性：Year，Month，Day。注意在定义Month和Day的settor时要检验设置值的有效性，其中，，同时在对Day进行设置的时候要注意闰 年和平年的2月的天数。 （3）方法：构造函数：根据需求确定不同参数列表的构造方法。 析构函数：提示析构对象。 PrintMyDataTime：以“2011/4/24”、“2011年4月24日”、“2011.4.24”、“二〇一一年四月二十四日”的形式输出Year，Month和Day。 using System; using System.Collections.Generic; using System.Text; namespace ConsoleApplication1 { class MyDataTime { private int year; public int Year { set { year = value; } get { return year; } }
有机综合实验报告
广州大学化学化工学院 本科学生综合性实验报告 实验课程基础合成实验A1 实验项目磺胺药物的合成 专业化学教育班级1班学号1105100065 姓名彭兰真 指导教师及职称陈国术刘天穗 开课学期2012 至2013 学年二学期 2013年5月30日
磺胺药物的合成研究 姓名：彭兰真 指导老师：陈国术、刘天穗 单位：化学化工学院11化师 摘要：对氨基苯磺酰胺（又称磺胺），是医药磺胺药物的中间体，也是除草剂磺草灵的中间体。磺胺是磺胺药物中结构最简单的具有抗菌活性的化合物。本实 验项目以硝基苯为原料，经还原、乙酰化、氯磺酰化和氨解、水解等常规反应，合成了一系列的中间体和磺胺。通过熔点的测定、红外光谱（IR）来鉴定其化学结构和纯度。 关键词：对氨基苯磺酰胺对甲基苯磺酸抗菌活性红外光谱（IR）Abstract：Para amino benzene sulfonamide (also called SN), is a pharmaceutical sulfonamide drug intermediates,is also the sulfonated grass herbicides of intermediates.Sulfonamide is the simplest of sulfonamide structure that has the antibacterial activity of the compounds.This experiment compound a series of intermediates and sulfanilamide by nitrobenzene as raw materials, via reduction, acylation, sulfonyl chloride conventional reactions such as acylation, hydrolysis and ammonia solution. To identify the chemical structure and purity by melting point determination, IR spectrum (IR). Keywords：p-anilinesulfonamide 4-Toluene sulfonic acid antibacterial activity IR
用地适宜性评价实验报告
本科生实验（实习）报告 学院： 学年学期：学年学期 课程名称：地理信息系统软件应用 学时数： 班级： 姓名： 学号： 指导教师： 教务处印制
资源与环境学院实验（实习）报告专业班级：专业级学号： 课程名称：地理信息系统软件应用指导教师： 实验时间：成绩： 第四章城市用地适宜性评价 启动Arcmap加载练习数据，自定义-拓展模块-spatial analyst。 4.2单因素适宜性评价分级 4.2.1交通便捷性 打开道路图层属性表，在表选项弹出菜单选择打开属性表，按属性选择类型=省道。 在工具箱中打开多环缓冲区构建离省道距离的多环缓冲区。
同上述操作输出要素离县道距离的缓冲区，如图。 利用工具箱中的联合工具综合省道缓冲区和县道缓冲区，输出要素类交通便捷性评价。 在要素类交通便捷性评价的属性表中添加短整型评价值字段，打开字段编辑器，输入如图代码，让评价值等于自定义变量value，使得value值由离省道距离和离县道距离决定。
利用工具箱中的面转栅格，设置像元大小为10，在环境设置中设置范围为与图层研究范围相同，转换为和研究范围一致的栅格图像。 4.2.2环境适宜性 计算河流缓冲区，勾选仅外部多边形，计算溪流缓冲区，联合叠加输出滨水环境评价要素类，编辑代码综合评价，转换成栅格数据步骤同上。
计算工业区缓冲区，勾选仅外部多边形，利用工具箱更新工具更新叠加，设置多出来的记录离工业距离字段为0，编辑代码综合评价，转换成栅格数据步骤同上。
森林环境评价步骤同工业污染评价。 4.2.3城市氛围评价 对居民点图层中的城镇和村庄要素做缓冲区并更新叠加，联合叠加得到城市氛围评价，编辑代码综合评价，转换成栅格数据步骤同上。 4.2.4地形适宜性评价 打开工具箱重分类工具，应提前加载，设置如图数据进行高程重分类得到高程评价，同步骤进行坡度评价。
烃类的性质实验报告doc
烃类的性质实验报告 篇一：烃类有机物性质总结 本章重难点专题突破 1 各类烃的结构与性质归纳解读 后者为铁粉。②苯不能使酸性高锰酸钾溶液褪色，但苯的同系物一般能被氧化而使酸性高锰酸钾溶液褪色。 溴水、溴的四氯化碳溶液、光照、催化剂等)对反应的影响。 2 烃类燃烧规律集锦 1．烃完全燃烧前后气体体积变化规律 yy点燃烃完全燃烧的通式：CxHy＋(x＋2――→xCO2＋H2O 42 (1)燃烧后温度高于100 ℃，即水为气态 yΔV＝V后－V前＝－1 4 ①y＝4时，ΔV＝0，体积不变②y>4时，ΔV>0，体积增大③y (2)燃烧后温度低于100 ℃时，即水为液态yΔV＝V前－V后＝1＋ 4 [特别提示] 烃完全燃烧时，无论水是气态还是液态，燃烧前后气体体积变化都只与烃分子中的氢原子数有关，而与烃分子中碳原子数无关。 2．烃完全燃烧时耗氧量规律 y(1)等物质的量的烃(CxHy)完全燃烧时，其耗氧量的大
小取决于(x＋的值，其值越大，耗氧 4 量越多。 (2)等质量的烃完全燃烧，其耗氧量大小取决于该烃分子中氢的质量分数，其值越大，耗氧量越多。相同碳原子数的烃类，碳的质量分数越大，耗氧量越多。 (3)最简式相同的烃，不论它们以何种比例混合，只要总质量一定，完全燃烧时所消耗的氧气为定值。 (4) 3(1)2(2)碳的质量分数相同的烃，只要总质量一定，以任意比混合，完全燃烧后，产生的CO2的量总是一个定值。 4．燃烧时火焰亮度与含碳量的关系比较规律 (1)含碳量越高，燃烧现象越明显，表现为火焰越明亮，黑烟越浓。如C2H2、苯、甲苯等燃烧时火焰明亮，并伴有大量浓烟；而含碳量越低，燃烧现象越不明显，无黑烟，如甲烷；对于C2H4及单烯烃的燃烧则是火焰较明亮，并伴有少量黑烟。 (2)含碳原子较少的各类烃，燃烧时的现象是不同的，烷烃无黑烟产生，烯烃有少量黑烟产生，炔烃及芳香烃有浓黑烟产生。应用燃烧来鉴别简单的烷烃、烯烃和炔烃是一种简单而有效的方法。 3、确定混合烃组成的四种方法 1．平均相对分子质量法
网络综合实验报告
专业综合实验报告 课程名称：专业综合实验课题名称：校园网—接入层和汇聚 层姓名： 班级：带教老师： 报告日期： 2013.12.9--2013.12.13 电子信息学院 目录 一、综合实验的目的和意义 (4) 二、综合实验的内容 (5) 2.1 校园网需求分 析 (5) 2.2校园网规划............................................................................... ...... 7 2.3网络技术指导与测试分 析 ............................................................ 9 三、综合实验的步骤与方法 .. (17) 3.1项目需求分 析 ............................................................................. 17 3.2制定网络工程项目实施目标方案 (17) 四、综合实验的要点 ..................................... 18 五、小组分 工 ........................................... 19 六、结果分析与实验体会.................................. 19 七、问 题 ............................................... 20 参考文 献 (21) 前言 通过专业综合实验，使学生在掌握了网络工程专业的理论知识和实践知识的前提下，能够完成从网络设备的选型、配置、设计、施工、组建，到测试、管理、维护、应用、开发等一系列贯穿网络工程全过程所有实验 任务。同时，也使得每个学生能够满足网络工程专业的“建好网、管好网、用好网”的四年培养目标。因此，专 业综合实验对学生的网络工程能力培养具有重要的作用和意义。 一、综合实验的目的和意义 《专业综合实验》课程是网络工程及相关计算机专业学生的一门实践课程，本课程旨在计算机网络的理论知识和实践知识的结合下教授学生设计，构建和维护计算机网络的知识技能。同时对于学生掌握计算机网络的 基础理论和过程，对于熟悉网络构建和管理的技术和方法也是一个非常重要的检测，对学生的计算机应用能力 的培养具有重要的作用和意义。 通过专业综合实验，使学生在掌握了网络工程专业的理论知识和实践知识的前提下，能够完成从网络设备的选型、配置、设计、施工、组建，到测试、管理、维护、应用、开发等一系列贯穿网络工程全过程所有实验 任务。同时，也使得每个学生能够满足网络工程专业的“建好网、管好网、用好网”的四年培养目标。因此，专 业综合实验对学生的网络工程能力培养具有重要的作用和意义。 本课程要求学生综合所有计算机网络课程的相关知识，包括：计算机网络的基本理论和方法、网络的构建、交换机路由器的配置以及各种网络服务的配置、网络安全工程的设计与实现、网络编程技术的应用等内容。网
本科护理专业综合性实验报告
2010级本科护理专业综合性、设计性实验报告 一、实验设计方案 实验名称：慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并慢性肺源性心脏病（失代偿期）的护理实验时间：2012年4月8日 小组成员：沈敏李瑞易亭亭赖宇鑫刘琴赵春明沈静超柯文露吴雪芬 盛叶青陈宇辉胡新和 1、实验目的：（1）通过运用用药、吸氧、饮食调节、生命体征测量等操作治疗病人的病症： 慢性阻塞性肺疾病及慢性肺源性心脏病； （2）通过心理护理、吸痰、呼吸功能锻炼等操作缓解病人的心理、生理不适 2、实验设备及材料：吸氧设施一套、血压计一台、吸痰设施一套、药物注射用物一套、静 脉输液用物一套、雾化吸入用物一套 3、理论依据： （1）体位与休息：病人呼吸困难，故要采取舒适的体位，晚期宜采取身体前倾位，使辅助呼吸肌参与呼吸；视病情安排合适的活动量，活动以不感到疲劳、不加重症状为宜。 （2）氧疗：病人呼吸困难，所以要进行氧疗，这样可改善呼吸困难，有利于减轻病人痛苦。（3）呼吸功能锻炼：病人呼吸困难，所以要锻炼呼吸功能，缩唇呼吸可形成微弱阻力来延长呼气时间，增加气道阻力，延缓气道塌陷。 （4）吸痰：病人咳嗽、咳痰、喘息，所以必要时需吸痰，这样可及时清除呼吸道异物，防止窒息。 （5）病情观察：病人病情可能变化，故要经常观察咳嗽、咳痰、呼吸困难程度，及时测量生命体征，这样有利于掌握病情变化，减少意外发生。 （6）饮食指导：呼吸功的增加可使热量和蛋白质消耗增多，导致营养不良，所以应制定高热量、高蛋白、高维生素的饮食计划，以补充能量；餐后避免平卧，有利于消化。 （7）健康指导：因为病人对疾病了解较少，及时宣教相关知识，有利于病人避免引发疾病的因素，减少发病机率。 （8）用药护理：因病人呼吸功的增加需静滴葡萄糖可迅速补充能量；病人呼吸困难，使用氨茶碱可舒张支气管，减轻病情；急性加重期要用抗生素控制感染，所以注射头孢呋辛钠；患者咳嗽、咳痰，故要用祛痰药物来祛痰镇咳，所以口服复方甘草片；患者患有慢性肺源性心脏病，会出现心力衰竭，要用地高辛片来调整肌力、频率，静滴辅酶Q10来保护缺血的心肌；地塞米松可抗炎、抗过敏、抗风湿；硫酸特布他林有利于消除水肿。 （9）实验室检查：通过实验室检查，更确定的诊断疾病。 （10）心理护理：病人对病情焦虑，要及时进行心理疏导，减轻焦虑，有利于病情恢复。4、实验内容 （1）病史摘要：40余年前因受凉后出现咳嗽、喘息、咳白色稀痰，量少，偶有黄痰，无咯血及痰中带血，伴呼吸困难，闻及刺激性气味如油漆味等可诱发 及加重。冬春季节反复发作； 近5年频繁发作、伴活动后气促； 近2年双下肢反复浮肿、夜间不能平卧； 5天前受凉后再发，咳白色稀痰，无发热，感呼吸困难加重，伴腹胀、 纳差，无双下肢凹陷性浮肿，夜间睡眠差。 （2）护理内容： <评估>
综合性设计性实验报告
化学综合设计实验报告 学院：理化学院班级：应用化学1002 2012--2013学年第二学期学号311013030225 姓名严威指导教师王枫 课程名称化学综合实验1 课程编号130030501 实验名称 1 2,6-二氯-4-硝基苯胺的制备（氯化）实验类型综合性 实验地点一号实验楼有机化学实验室实验时间2013.06.28 实验内容：（简述） 根据引入卤素的不同，卤化反应可分为氯化、溴化、碘化和氟化。因为氯代衍生物的制备成本低，所以氯代反应在精细化工生产中应用广泛；碘化应用较少；由于氟的活泼性过高，通常以间接方法制得氟代衍生物。 实验目的与要求： 1、掌握2,6-二氯-4-硝基苯胺的制备方法。 2、掌握氯化反应的机理和氯化条件的选择。 3、了解2,6-二氯-4-硝基苯胺的性质和用途。 设计思路：（设计原理、设计方案及流程等） 卤化剂包括卤素（氯、溴、碘）、盐酸和氧化剂（空气中的氧、次氯酸钠、氯化钠等）、金属和非金属的氯化物（三氯化铁、五氯化磷等）。硫酰二氯（SO2Cl2）是高活性氯化剂。也可用光气、卤酰胺（RSO2NHCl）等作为卤化剂。卤化反应有三种类型，即取代卤化、加成卤化、置换卤化。 由对硝基苯胺制备2,6-二氯-4-硝基苯胺有多种合成方法。直接氯气法；氯酸钠氯化法；硫酰二氯法；次氯酸法；过氧化氢法。 工业生产一般采用直接氯气法。其优点是原材料消耗低、氯吸收率高、产品收率高、盐酸可回收循环使用。 关键技术分析： 直接氯气法的反应方程式如下 氯酸钠氯化法是由对硝基苯胺氯化、中和而得，反应方程式如下：
过氧化氢法是由对硝基苯胺在浓盐酸中与过氧化氢反应而得，反应方程式如下： 实验过程：（包括主要步骤、实验结果、实验分析等） 方法一：氯酸钠氯化法。 在装有搅拌器、温度计和滴液漏斗（预先检查滴液漏斗是否严密，不能泄漏。）的250mL 四口瓶中，加入5.5g（质量分数为100%）对硝基苯胺，再加入质量分数36%盐酸100mL，搅拌下升温至50℃左右，使物料全部溶解。然后，慢慢冷却至20℃左右，滴加预先配好的氯酸溶液（3g氯酸钠加水20mL），约在1～1.5h内加完，然后，在30℃下再反应1h。用50mL水稀释上述反应物，倾入烧杯中，并用少量水冲洗四口瓶，将物料全部转移到烧杯中，过滤。 滤液倒入废酸桶，滤饼以少量水打浆，并用水调整体积至100mL左右，用质量分数为10%的氢氧化钠中和至pH=7～8，再过滤，干燥。产品称重，计算收率。测熔点。 方法二：过氧化氢法。 在装有搅拌器、温度计和滴液漏斗（预先检查滴液漏斗是否严密，不能泄漏。）的250mL四口瓶中，加入13.8g对硝基苯胺，再加入50mL水，搅拌下慢慢加入45mL浓盐酸，加热至40℃，于搅拌下1h内滴加23mL质量分数30% 过氧化氢，滴加过程中温度控制在35～55℃，加完后，在40～50℃下继续反应1.5h。随着反应的进行，逐渐产生黄色沉淀。反应结束后，过滤，水洗，烘干，称重，计算收率，测熔点。 方法三：直接氯气法。 向带有回流冷凝器和填充氢氧化钠的气体吸收柱的反应器中加入对硝基苯胺138g(1mol) 和4.5mol/L 的盐酸水溶液1L。悬浮液在搅拌下加热至105℃左右。在该温度下通氯气，约15min后出现沉淀。约2h后逐渐减少氯气量，至不再吸收氯为止（通入约2.2mol的氯气）。反应混合物冷却到70～80℃，过滤，水洗。干燥，称重，计算收率，测熔点。 实验制得黄色针状结晶。熔点192℃～194℃。难溶于水，微溶于乙醇，溶于热乙醇和乙醚。本品有毒。