糖化血红蛋白的检测方法

Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2017, 7(3), 163-170

Published Online August 2017 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/journal/aac

https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.12677/aac.2017.73022

Methods for Detection of Glycosylated

Hemoglobin

Zongli Huang, Zhirong Gan, Wan Lan, Jiating Hou, Xiaozhen Feng, Guocheng Han*

College of Life and Environmental Sciences, Guilin University of Electronic Technology, Guilin Guangxi

Received: Jul. 3rd, 2017; accepted: Jul. 28th, 2017; published: Jul. 31st, 2017

Abstract

Diabetes mellitus is one of the highest morbidity in the world. At present, the detection of glycosy-lated hemoglobin has become the standard diagnostic method of diabetes monitoring. Hemoglo-bin plays an important role in human body, as a macromolecular protein which is mainly respon-sible for carrying oxygen. And the combination of high blood glucose in patients with diabetes will induce glucose and hemoglobin in HbA1c generation function, blood oxygen capacity, so the de-termination of glycosylated hemoglobin in blood shows great significance. There are more than 30 methods used for the determination of glycosylated hemoglobin in clinical laboratories. According to the principle of the reaction, which can be divided into two categories, the first category is based on the different charge of GHb and non GHb, including ion exchange chromatography, electropho-resis, isoelectric focusing, etc. The second category is based on the structural characteristics of GHb, including affinity chromatography, ion capture, immunization, etc. This article overviewed detection methods of glycosylated hemoglobin in clinical practice.

Keywords

Diabetes Mellitus, Standard Diagnostic, Hemoglobin, Glycosylated Hemoglobin, Detection

糖化血红蛋白的检测方法

黄宗利，甘志荣，兰万，侯嘉婷，冯小珍，韩国成*

桂林电子科技大学生命与环境科学学院，广西桂林

收稿日期：2017年7月3日；录用日期：2017年7月28日；发布日期：2017年7月31日

*通讯作者。

黄宗利 等

摘 要

糖尿病是世界上发病率最高的疾病之一。目前，检测糖化血红蛋白已经成为糖尿病监控的标准诊断方法。血红蛋白在人体中承担着重要作用，是主要担负着运载氧的功能的大分子蛋白质，糖尿病患者过高的血糖会诱使葡萄糖和血红蛋白结合，生成没有功能的糖化血红蛋白，影响血液的输氧能力，因此血液中的糖化血红蛋白的检测意义重大。临床实验室常用的测定糖化血红蛋白的方法有30多种，根据反应原理的不同可分为两大类：第一类基于GHb 与非GHb 的电荷不同，包括离子交换色谱法、电泳法、等电聚焦法等；第二类基于GHb 的结构特点，包括亲和色谱法、离子捕获法、免疫法等。本文主要对临床常用的糖化血红蛋白检测方法进行了综述。

关键词

糖尿病，标准诊断，血红蛋白，糖化血红蛋白，检测

Copyright ? 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/licenses/by/4.0/

1. 引言

糖尿病是世界上发病率最高的疾病之一，仅次于心脑血管疾病和肿瘤，并且其发病率还在不断的上升，它是一种由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所导致的以高血糖为特征的代谢性疾病。持续高血糖与长期代谢紊乱等可导致全身组织器官受损，特别是眼、肾、心血管及神经系统的损害及其功能障碍和衰竭，是严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。血糖、葡萄糖耐量实验(OGTT)是国际公认的诊断糖尿病的指标，2010年美国糖尿病协会(ADA)又将糖化血红蛋白(HbA1c)纳入了糖尿病的诊断标准[1]。血红蛋白是由血红素和球蛋白组成的球形大分子化合物，作为红细胞内的一种机能蛋白，在生物体内起到传输氧气、传递电子等功能，与氧和能量代谢有关的重要活动。血红蛋白的研究主要集中在其结构、输氧功能，以及蛋白质分子与电极之间电子转移过程的机理等方面。糖尿病患者过高的血糖会使得葡萄糖和血红蛋白结合，生成没有功能的糖化血红蛋白，从而影响血液的输氧能力。一般糖尿病患者若病情控制不稳，往往会引起血糖的波动，有时极高，有时又较低，甚至发生低血糖。而糖化血红蛋白则反映一段时间内病人血糖的总体控制情况，因此人体血液和尿液中的血红蛋白的测定是临床检测的一个重要内容。

糖化血红蛋白(Glycated Hemoglobin ，简称GHb)是由红细胞中血红蛋白与葡萄糖经非酶促糖化缓慢形成的，该反应持续且不可逆，形成两周后不易分开。GHb 的体内合成受红细胞中葡萄糖浓度的影响，在正常的生理条件下，非酶促糖化反应产物生成量与反应物浓度成正比，当血液中葡萄糖浓度较高时，人体所形成糖化血红蛋白的含量也会相对较高。由于蛋白质浓度相对稳定，糖化水平主要取决于葡萄糖的浓度，同时与蛋白质和葡萄糖接触的时间长短也有关。人体内红细胞的生命周期一般为120天，在红细胞死亡之前，血液中糖化血红蛋白含量是保持相对不变的，因此糖化血红蛋白水平可以反映前120天内的平均血糖水平，而与病人抽血时间，是否空腹，是否使用胰岛素等因素无关，是判定糖尿病长期控制的重要指标。HbA1c 是评价血糖控制好坏的重要标准，它是血液中和葡萄糖结合了的那一部分血红蛋白，约占糖化血红蛋白的65%左右，结构稳定。因此，糖化血红蛋白的检测对于糖尿病的监测来说具有Open Access

黄宗利等

一定的说服力、稳定性也较好，它能反映糖尿病患者2到3个月以内血糖的控制情况，在糖尿病学上有很大的临床参考价值[2][3]。

糖化血红蛋白的增高会对人体有多方面影响，它会加剧心、脑血管疾病、导致肾病等[4]，所以，无论是早期筛查，还是在患病期间的监控，对糖化血红蛋白进行检测具有重大的实际意义。因此，糖化血红蛋白最终成为糖尿病众多检测标准中的“金标准”[5]，并且在国际上已经达到大家的一致认可。

2. 糖化血红蛋白的检测

2.1. 血红蛋白的检测

糖化血红蛋白是红细胞中血红蛋白与葡萄糖经非酶促的不可逆反映的产物，主要是通过血红蛋白β链N-末端的撷氨酸被糖化而形成的，因此血红蛋白的测定是一个重要内容。目前，随着检验技术的飞速发展和医疗器械的不断改进，血红蛋白含量检测方法主要有以下几种测定方法。

1) 比重法[6]：它是测定血红蛋白最原始的方法，通过血滴在水中的比重变化来推算是否贫血，该方法不需要特定的设备，操作简单，但准确度低，没有准确的文字描述，不适合推广。

2) 比色法[7]：主要包括①氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法[8]：该法1966年被国际血液学标准化委员会(ICSH) [9]和世界卫生组织(WHO)推荐为国际标准参考方法，操作简单，显色快，结果可靠稳定，读取吸光度后可直接定值，但此法试剂中氰化钾(KCN)有剧毒，使用管理不当可能造成公害。②氧合血红蛋白测定法：虽然该法试剂处理安全，但其缺点是不能将高铁血红蛋白转化为氧合血红蛋白，同时，该法受仪器等外界因素影响较大，使其应用受到了限制。③十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白(SLS-Hb)法：该法操作简单，呈色稳定，准确性和精确性较好，并且无公害。但SDS质量差异较大，且SDS可破坏白细胞，摩尔系数尚未最后确认不能直接用吸光度计算Hb浓度。

3) 分光光度法[10]：此法可以反映血红蛋白含量情况，因其试剂、仪器干扰因素比较多，测定时存在一定误差，但该方法简便易行，基层卫生所、乡镇卫生院、实验室单个检测用，缺点：不利于普查。

4) 库尔特电阻抗法：该法较比重法、比色法测定结果精确可靠，而比分光光度法等在实验室技术成本、难度高、安全无创伤，适用于大型医院。它的操作简单易行，对儿童、老人、病人等测定血红蛋白更为实用。缺点：一般家庭不能普遍使用，试剂条费用比较高，应用仍有局限性。

5) 电化学分析检测法：此法具有快速、不破坏样品、易于自动化等优点，主要包括①裸银电极[11]：它在测定血红蛋白时大多用促进剂来活化蛋白质氧化还原中心，进而改善蛋白质在电极表面的直接电子转移，提高可靠性。②修饰银电极：卡托普利[12]通过分子中的硫原子修饰到银电极表面，对血红蛋白的电催化行为进行了研究，建立了一种简单、快速、干扰性小的测定人体血液中血红蛋白含量的新方法，取得了较好的结果。③染料修饰玻碳电极[13][14][15]：用于研究血红蛋白在电极上的电化学行为，是发展最快、检测效果最好、研究最多的一种修饰电极，在检测中多采用三电极工作体系，电极稳定性好、寿命长，是电化学分析检测血红蛋白比较理想的方法。

以各种染料作为媒介体的修饰电极对血红蛋白的电化学性质进行了研究。这些染料主要起到在电极上与血红蛋白之间传递电子的作用，多具有氧化还原活性，其在电极上的固定方法有吸附、共价桥联、聚合或电沉积，已用的基体电极有玻碳、石墨、碳糊、碳纤维、铂、银电极等。Brett [16]等人用亚甲蓝吸附于石墨电极表面用于流动体系中血红蛋白和肌红蛋白的测定。Yang [17]等人将甲苯胺蓝等染料吸附在石墨电极表面制成相应的修饰电极对血红蛋白的电化学性质进行了研究，如在甲苯胺蓝修饰石墨电极上可以催化血红蛋白的还原，血红蛋白的加入使甲苯胺蓝的还原峰不断增加，其氧化峰相应的减小，其原因在于扩散至电极表面的血红蛋白能与电极反应生成的还原态甲苯胺蓝发生化学反应而被催化还原，甲苯胺蓝被氧化再生，使电极反应生成的甲苯胺蓝还原态量相应的减少，电位反扫时氧化峰电流下降。

黄宗利等

用吸附法制备染料电极方法简单、易于操作，但随着实验时间的延长，部分染料分子会从电极表面脱落而降低电极活性。Zhao [18]等人则利用1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐/Nafion修饰微柱碳纤维电极对Hb 的电化学性质进行了研究，利用Nafion膜将1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐固定在碳微电极的表面，降低了媒介体的传质速率，大大提高了微电极的电催化效率和使用寿命，在中性介质中有效的加速Hb的氧化，可用于人血清中血红蛋白含量的测定。

上世纪50年代以来，二茂铁(Ferrocene, Fc)的稳定性、结构和成键状况的独特性引发了科学家们的浓厚兴趣，有关二茂铁及其衍生物的合成、结构及性能的研究成为现代化学中的一个热点。二茂铁具有夹心结构和芳香性的高度富电子特性，具有易受环境影响的可逆氧化还原特点。利用二茂铁基团可逆的氧化还原性，使得控制其衍生物的电光学性成为可能，从而实现氧化还原的开关效应，这类氧化还原开关材料在电致变色、光电记忆和光通讯领域具有良好的应用前景；而且随着生物医药技术的发展，二茂铁及其衍生物被广泛应用在生物学、医学、微生物学等领域。已有报道称二茂铁可标记DNA [19]和蛋白质

[20]作为电化学探针，应用于特定序列DNA片断的识别、检测和DNA的损伤与保护的研究。二茂铁作

为电化学探针用于血红蛋白的检测也有报道，Scheller [21]等人用二茂铁硼酸做为电化学探针绑定糖基的N端，在溴化双十二烷基二甲基铵(DDAB)作为促进剂的情况下，检测糖化血红蛋白，在0.299 V (Vs. SCE)有可逆的氧化还原峰。Tanaka [22]等人用二茂铁甲酸标记血红蛋白的抗体，通过电化学方法检测血红蛋白，在0.35 V (Vs.SCE)出现可逆的氧化还原峰。在前人工作的指导下，以二茂铁为电化学探针，合成含有巯基的二茂铁衍生物[23]。重点考察几种二茂铁衍生物和血红素是否有分子间的相互作用。通过紫外–可见光谱法研究了二茂铁衍生物和血红素相互作用情况，实验结果表明二茂铁衍生物不仅具有良好电化学性质，而且是生物活性分子，在溶液中可与血红素相互作用[24]。因此，通过二茂铁衍生物等小分子，可以用简单的电化学方法和光谱法，从分子层面上研究二茂铁衍生物与血红素的作用。此外，血红素可在电化学传感器中起很重要的电子传递作用[25]。

在上述工作的基础上，通过电沉积法和溶液挥发法将含有巯基的二茂铁衍生物通过Au-S固定在金电极上，通过DPV法和EIS法获得电流差值与血红蛋白浓度满足的线性方程，计算相关系数和检测限，实现未知浓度血红蛋白的电化学方法检测。在此过程中，通过自组装[26]的方法制备了无标记阻抗型CRP 免疫传感器，对苯二甲醛缩邻氨基苯硫酚席夫碱镍配合物修饰纳米金为电化学探针，利用交流阻抗技术，建立了测定Ab-CRP含量的新方法[27]。将小分子多肽SGFPRGRYC偶联在二茂铁上，形成Fc-SGFPRGRYC，并通过Au-S键固定在裸金电极上，在凝血酶的作用下，对小分子多肽进行切割，形成Fc-SGFPR和GRYC 片段，在这个过程中会伴随着电化学信号的改变，通过电化学–化学–化学氧化还原循环法实现电化学信号的放大，从而提高蛋白酶检测的灵敏度[28]。电化学和荧光方面的研究结果[29][30]可对糖化血红蛋白的灵敏检测提供指导。

2.2. 测定糖化血红蛋白的方法及其影响因素

目前临床实验室中应用的糖化血红蛋白检测方法主要有两大类：一类方法基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白所带的电荷不同，如离子交换层析法、电泳法等方法；另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析、离子捕获法和免疫法等。

2.2.1. 离子交换色谱法

此法主要包含有高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC) [31]和手工微柱法。

离子交换HPLC法是目前分析检测HbA1c的“金标准”，可通过血红蛋白β链N-末端缬氨酸糖化作用产生不同电荷产物，制造中性pH环境，HbA1c所携带正电荷数量相对较少，以离子交换层析法进行处理，将其与HbS、HbF等分离处理。此法多使用Bio-Rad的D-10设备完成检测分析，所得结果准确度高、

黄宗利等

可重复性良好。此种检测方式所需仪器昂贵，其中的微柱法需人工操作，且操作步骤繁琐，难以控制微柱质量及层析反应时间，容易出现操作和技术误差而影响检测结果的准确度与可靠性。另外，此种检测技术没有很好的可重复性，检测结果容易受到pH、环境温度等众多因素干扰而出现偏差，且需仔细辨别检测中的图谱，以免因变异Hb、HbF等指标干扰微柱分离能力[32][33]。

2.2.2. 琼脂凝胶电泳法[34]

检测原理根据血红蛋白的不同结构所带的电荷情况不同，在琼脂糖凝胶上的电泳迁移速度也不同，Hb及HbA1带正电荷，电泳时向负极移动。因为HbA的β链N-末端所带电荷被糖基消除，带电量少，等电点低，迁移速度慢，HbA1本身带红色，可直接比色或扫描，从而达到分离的目的。普通电泳法对HbA和HbA1分离效果不理想，而毛细管电泳能够分离检测糖化血红蛋白和血红蛋白的变异体。目前还没有具有批量样本通过能力的仪器，在一定程度限制了该方法的临床应用。

2.2.

3. 等电点聚集法

检测原理是在含有载体的两性介质的薄板上形成连续稳定的pH线性梯度中进行电泳，血红蛋白中各组份将移动到各自的等电点pH位置上，然后通过分辨率高的微量光密度进行仪扫描分析，便可以精确的对各组份进行定量测定。由于它的分辨能力好，准确度高，可以很好的避开各种物质的干扰，是一种理想的方法，但仪器非常昂贵，难于用作常规检测。

2.2.4. 亲和层析法[35]

检测原理利用硼酸衍生物与HbA1c分子上的葡萄糖顺位二醇进行可逆性反应，HbA1c通过共价结合凝胶柱，而非糖化血红蛋白会被洗脱下来，分离过后，再用高浓度含糖或含顺位二醇基的多经基复合物将所结合的糖化血红蛋白置换下来。但是除了HbA1c外，血液中的其他氨基酸的糖基化血红蛋白也会与凝胶柱结合，因此亲和色谱法检测的是总糖化血红蛋白的量，并不是单一组份的含量。优点：操作过程简单、快速、准确、价格低廉、无需特殊仪器设备，其特异性强，不受异常血红蛋白的干扰。

2.2.5. 离子捕获法

又称化学发光法[36]，它是近些年发展起来的新方法，其原理是糖化血红蛋白与其相应的抗体结合后，联以荧光标记物，形成一反应复合物，通过连接带负电荷的多阴离子复合物，吸附到带有正电的纤维表面，经过一系列清洗等步骤后，测定其荧光强度，进而得到糖化血红蛋白的浓度，该方法操作简便、准确度高，适用于大量糖化血红蛋白标本的检测[37]。

2.2.6. 免疫法

该方法运用的是单克隆抗体技术，是由英国DAKO公司最早研究发现的，针对血红蛋白的β链N-末端8个氨基酸糖基化的抗原位点，所研发出来的单克隆抗体，用酶免疫的原理来检测。随着不断研究已有很多种检测方法。

1) 胶乳凝集法[38][39]

检测原理：样本中HbA1c的与特异性的单克隆抗体和胶乳结合后，形复合物，并发生凝集，凝集量会由于胶乳表明所固化的HbA1c量的不同而不同。凝集量可用全自动生化分析仪来检测吸光度变化，求出样品中的百分含量。该糖化血红蛋白检测方法不会受异常Hb干扰，其特异性好，操作简便。

2) 免疫比浊法[40]

检测原理主要运用抗原、抗体反应的原理来测定。规范取血清标本后，将配制好的HbA1c抗体缓冲液混入受检标本内，使抗HbA1c抗体结合HbA1c产生抗原抗体复合物，之后继续加入多聚半抗原缓冲液以结合反应液中的残余抗HbA1c抗体产生不溶的抗原抗体复合物，以比浊法检测标本中HbA1c水平，

黄宗利等

并通过另一通道检测Hb含量，根据公式计算得出HbA1c的百分含量[41]。此种检测方式所需时间短、成本低、可重复、操作简便。但容易受交叉污染、黄疸标本及脂浊标本影响，高于浓度标准时难以完成检测，Hb和HbF变化可影响检测结果[42]。

3) 其他免疫法

放射免疫法不会受到任何因素干扰，因而检测得出的HbA1c水平更加接近真实水平，且此种检测方法适用于批量检测，可节省成本，有更好的特异性，但受高效价抗体制备限制难以推广；金标免疫渗滤法可配合床边血清检测共同完成，准确度和特异性好，可在短时间内得出检测结果，方便医生和护士随时了解患者HbA1c水平和病情变化。

2.2.7. 酶法[43]

该方法利用果糖基缬氨酸氧化酶的反应特性，它能够特异性的作用于糖基化的缬氨酸或其小肽，产生H2O2；然后利用辣根过氧化物酶与H2O2的反应使特定的色原显色。根据这一原理，血液样品中的血红蛋白首先被蛋白酶水解，产生糖基化的缬氨酸或小肽，然后在果糖基缬氨酸氧化酶和辣根过氧化物酶的作用下，与特定的色原产生显色反应。酶法检测糖化血红蛋白操作方便、简单、不受变异血红蛋白的干扰，还可应用于自动生化分析仪，具有良好的重复性和特异性。另外，利用酶法可以直接测定样品中的HbA1c的百分含量，而不像别的方法，还要同时测定样品的血红蛋白总量。该方法与HPLC法和免疫法相比呈良好的相关性。

3. 结论

血红蛋白是一种十分重要的生命物质，糖化血红蛋白是血液中和葡萄糖结合了的那一部分血红蛋白，糖化血红蛋白的增高对人体有多方面影响，因此准确测定血红蛋白的含量和糖化血红蛋白的含量具有至关重要的作用。综上所述，糖化血红蛋白含量测定方法到目前来说比较多，从精确度上考虑，HPLC是最理想的方法，但因其价格十分昂贵，基层医院商不能推广。目前我国多采用手工微柱法，但是易受到诸多干扰因素的影响，误差也较大，该方法也不理想。而从性价比的角度来评价，则为亲和色谱微柱法。

该法精确度高，价格也比HPLC低，不容易受其他因素干扰，还有酶法和电化学法也被广泛使用。有研究指出HbA1c会因年龄与种族的不同而不同，并且年龄每增长10岁，用HPLC法所测得的HbA1c百分值将增加0.11%~0.15%。所有的检测方法都不是十分完美的，都有着自己的缺点，相信随着对实验HbA1c 方法不断改进，HbA1c检测可以在临床上广泛应用。

基金项目

大学生创新创业计划项目(201510595044, 201510595207, 201510595057)资助，国家自然科学基金项目(61301038, 61661014)资助。

参考文献(References)

[1]William, T.C. (2013) Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. American Diabetes Association Diabetes Care,

34, S62-S69.

[2]韩文静. 糖化血红蛋白检测及临床应用[J]. 现代中西医结合杂志, 2007, 16(7): 959 -960.

[3]王笠, 李琳. 糖化血红蛋白的检测和临床应用[J]. 上海医学检验杂志, 2003, 18(2): 119-121.

[4]周佳烨, 吴炯. 糖化血红蛋白测定在DM诊断和治疗中的应用[J]. 检验医学, 2008, 25(8): 583-587.

[5]王东环, 陈文祥. 应注重糖化血红蛋白在糖尿病诊疗中的临床价值[J]. 中华检验学杂志, 2012, 35(6): 493-496.

[6]袁健. 《身体成分测定》实验综述报告[J]. 科技信息高校讲坛, 2013(9): 211.

[7]唐宁莉, 方业毅, 覃温露. 刚果红共振散射光谱法测定血红蛋白[J]. 分析试验室杂志, 2013(2): 102.

黄宗利等

[8]张亚男. 氰化高铁血红蛋白测定法对血红蛋白测定方法及临床意义[J].中国现代药物应用, 2013, 7(11): 48-49.

[9]Zwart, A., Assendelft, O.W. and Brian, S.B. (1996) Recommendations for Reference Method for Hemoglobinometry

in Human Blood and Specifications for International Hemoglobincyamide Standard. Journal of Clinical Pathology, 49, 271-274. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1136/jcp.49.4.271

[10]方跃强, 王文娟, 陈江, 等. HemoCue仪和临床血液分析仪测定血红蛋白结果的可比性研究[J]. 中国卫生检验杂

志, 2010(5): 988-990.

[11]冶保献, 周性尧. 血红蛋白在裸银电极上的直接电化学及其分析应用[J]. 高等学校化学学报, 1996, 17(1): 33-37.

[12]张荣丽. 卡托普利修饰电极测定血红蛋白[J]. 徐州医学院学报, 1998, 18(3): 201-202.

[13]袁倬斌, 张玉忠, 赵红. 聚天青I玻碳修饰电极对血红蛋白催化还原[J]. 分析化学, 2001, 29(11): 1332-1335.

[14]张玉忠, 赵红, 袁倬斌. 大黄酸玻碳修饰电极对血红蛋白的催化还原[J]. 高等学校化学学报, 2002, 23(3): 391-

393.

[15]Liu, M.C., Li, P. and Zhang, L. (2005) Preparation of Nanosized CoHCF Modified Electrode and Its Application to

Electro Analysis of Hemoglobin. Chinese Journal of Chemistry, 23, 983- 989. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1002/cjoc.200590983 [16]Brett, C.M.A., Inzelt, G. and Kertesz, V. (1999) Poly(Methylene Blue) Modified Electrode Sensor for Haemoglobin.

Analytica Chimica Acta, 385, 119-123. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1016/S0003-2670(98)00808-3

[17]Yang, C.H., Xu, J.H. and Hu, S.S. (2007) Development of a Novel Nitrite Amperometric Sensor Based on Poly(Toluidine

Blue) Film Electrode. Journal of Solid State Electrochemistry, 11, 514-520.

https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1007/s10008-006-0188-x

[18]Zhao, G.C., Xu, M.Q., Ma, J. and Wei, X.W. (2007) Direct Electrochemistry of Hemoglobin on a Room Temperature

Ionic Liquid Modified Electrode and Its Electrocatalytic Activity for the Reduction of Oxygen. Electrochemistry Communications, 9, 920-924. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1016/j.elecom.2006.12.005

[19]Long, Y.T., Li, C.Z., Sutherland, T.C., Chahma, M., Lee, J.S. and Kraatz, H.B. (2003) A Comparison of Electron-

Transfer Rates of Ferrocenoyl-Linked DNA. Journal of the American Chemical Society, 125, 8724-8725.

https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1021/ja034684x

[20]Beer, P.D., Davis, J.J., Drillsma-Milgrom, D.A. and Szemes, F. (2002) Anion Recognition and Redox Sensing Ampli-

fication by Self-Assembled Monolayers of 1,1A-Bis (Alkyl-N-Amido) Ferrocene. Chemical Communications, 16, 1716-1717. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1039/B205340N

[21]Liu, S.Q., Wollenberger, U., Katterle, M. and Scheller, F.W. (2006) Ferroceneboronic Acid-Based Amperometric Bio-

sensor for Glycated Hemoglobin. Sensors and Actuators B-Chemical, 113, 623-629.

https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1016/j.snb.2005.07.011

[22]Tanaka, T., Izawa, K., Okochi, M., Lim, T.K., Watanabe, S., Harada, M. and Matsunaga, T. (2009) On-Chip Type Ca-

tion-Exchange Chromatography with Ferrocene-Labeled Anti-Hemoglobin Antibody and Electrochemical Detector for Determination of Hemoglobin A1c Level. Analytica Chimica Acta, 638, 186-190.

https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1016/j.aca.2009.02.016

[23]Han, G.C., Ferranco, A., Feng, X.Z., Chen, Z.C. and Kraatz, H.B. (2014) Synthesis, Characterization of Some Ferro-

cenoyl Cysteine and Histidine Conjugates, and Their Interactions with Some Metal Ions. European Journal of Inor-ganic Chemistr y,31, 5337-5347. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1002/ejic.201402470

[24]Han, G.C., Feng, X.Z., Liang, J.T., Xiao, W.X. and Chen, Z.C. (2016) Interaction Study of Ferrocene Derivatives and

Heme by UV-Vis Spectroscopy. Spectroscopy and Spectral Analysis, 36, 1585-1591.

[25]Han, G.C., Feng, X.Z. and Chen, Z.C. (2015) Hemin/G-Quadruplex DNAzyme for Designing of Electrochemical Sen-

sors. International Journal of Electrochemical Science, 10, 3897-3913.

[26]Zhang, J., Liu, Z., Han, G.C., Chen, S.L. and Chen, Z.C. (2016) Inhibition of Copper Corrosion by the Formation of

Schiff Base Self-Assembled Monolayers. Applied Surface Science, 389, 601-608.

https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1016/j.apsusc.2016.07.116

[27]Liu, Z., Li, W., Han, G.C., Yuan, S. and Chen, Z.C. (2014) Towards Label-Free Impedance Biosensors: CRP Probe

Based on Thiol Schiff-Nickel Complex Modified Gold Nanoparticles.Journal of the Electrochemical Society, 161, B75-B80. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1149/2.022405jes

[28]Han, G.C., Hou, J.T., Feng, X.Z., Huang, Z.L., Gu, W. and Chen, Z.C. (2016) Electrochemical Determination of Pro-

tease with Improving Sensitivity by Electrochemical-Chemical-Chemical Redox Cycling.International Journal of Electrochemical Science, 11, 8646-8653. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.20964/2016.10.16

[29]Zhao, X.Y., Liu, W., Zhou, B.B., Liu, S.S. and Han, G.C. (2015) Electrochemical MicroRNAs Biosensors Based on

Enzymatic Signal Amplification. International Journal of Electrochemical Science, 10, 8910-8925.

[30]La, M., Hao, Y.Q., Wang, Z.Y., Han, G.C. and Qu, L.B. (2016) Selective and Sensitive Detection of Cyanide Based on

黄宗利等

the Displacement Strategy Using a Water-Soluble Fluorescent Probe.Journal of Analytical Methods in Chemistry,

2016, Article ID: 1462013. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1155/2016/1462013

[31]Feng, X.Z., Han, G.C., Qin, J.H., Yin, S.M. and Chen, Z.C. (2016) Determination of Residual Solvents in Linezolid by

Static Headspace GC. Journal of Chromatographic Science, 54, 487-491. https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1093/chromsci/bmv175

[32]赵翠伶, 王丽娟, 王连英, 等. 不同糖化血红蛋白检测方法在临床中的应用探讨[J]. 中国医刊, 2013, 48(8): 35-36．

[33]陈斌, 黄庆, 府伟灵. 离子交换层析微柱法及亲和电泳法与液相色谱分析法对糖化血红蛋白含量测定的比较[J].

第三军医大学学报, 2001, 23(9): 1124-1125.

[34]吴宇芳, 关晓东. 琼脂糖凝胶电泳法测定糖化血红蛋白及其临床应用[J]. 西部医学, 2003, 1(2): 101-102.

[35]杜巧如, 何绍贵, 刘新民, 等. 亲和层析微柱法测定糖化血红蛋白及其临床应用[J]. 中国综合临床, 1994, 16(5):

39-41.

[36]Guo, Y.J., Liu, Z., Han, G.-C., Li, W., Hu, Y.J. and Chen, Z.C. (2016) A New Fluorescent Switch for Determination of

Pb2+ Based on Modified CdTe Quantum Dots. Journal of Nanoscience and Nanotechnology, 16, 12172-12178.

https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.1166/jnn.2016.13754

[37]李顺君, 黄文芳, 饶绍琴, 等. 糖化血红蛋白测定方法学评价[J]. 检验医学与临床, 2007, 4(5): 381-383.

[38]周萍, 王长江. 糖化血红蛋白与血管内皮功能及糖尿病肾病的相关性[J]. 放射免疫学杂志, 2009, 34(12): 13-14.

[39]郑彤, 刘洪斌, 戴友良, 等. 胶乳凝集透射终点法测定糖化血红蛋白[J]. 上海医学检验杂志, 2001, 16(4): 231.

[40]胡应秀, 张红梅. 免疫透射比浊法测定HbAlc的可靠性研究[J]. 吉林医学, 2011, 32(24): 4969-4970.

[41]李钟响. 糖化血红蛋白检测对糖尿病诊断、血糖控制及疗效评价的临床意义[J]. 临床和实验医学杂志, 2009, 8(1):

110.

[42]王丽娟, 纪立农. 国际专家委员会关于糖化血红蛋白检测在糖尿病诊断中的作用的报告[J]. 中国糖尿病杂志,

2009, 17(8): 563-568.

[43]姚震. 新的酶法检测糖化血红蛋白[J]. 国外医学临床生物化学与检验学分册, 2003, 24(6): 387.

期刊投稿者将享受如下服务：

1. 投稿前咨询服务(QQ、微信、邮箱皆可)

2. 为您匹配最合适的期刊

3. 24小时以内解答您的所有疑问

4. 友好的在线投稿界面

5. 专业的同行评审

6. 知网检索

7. 全网络覆盖式推广您的研究

投稿请点击：https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/Submission.aspx

期刊邮箱：aac@https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,

糖化血红蛋白检测原理及意义

糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法及临床意义综述 2007年3月19日 糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法及临床意义综述 冯念伦范卫华刘捍东 （山东省立医院济南250021） 糖尿病(DM),主要是2型糖尿病的发病率，目前在世界上无论发达国家还是发展中国家均明显增加，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症已经成为病人至残和早亡的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。 有资料说美国用于糖尿病的治疗费约有1000亿美元，糖尿病已经成为世界各国的主要保健卫生问题，对糖尿病及其并发症防治的研究是2０世纪后２０年国际卫生保健研究的重点之一。 临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近2-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c有多种方法，目前临床上比较常用的方法有两种：乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法；分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自分析仪进行测定。 1、糖化血红蛋白（HbA1c）的形成及特点 血液中红细胞内的血红蛋白Hb会在高糖的作用下发生缓慢的非酶促糖化反应, 血红蛋白Hb的β链N末端缬氨酸上的氨基与葡萄糖的醛基发生可逆的加成反应,，形成不稳定的中间产物--- 醛亚胺（前GHbA1c）迅速重排成不可逆的酮胺，然后缓慢重构形成HbA1c。 糖化血红蛋白HbA1c的特点： 1．1 糖化血红蛋白HbA1c的百分比含量与即时所检测到的血糖水平无关。 1．2 由于红细胞在外周血中的寿命是90 －120天，所以糖化血红蛋白HbA1c百分比反映了测定前２－３个月的血糖平均水平。而GHbA1c的合成始终在进行，其糖化程度与血液中的葡萄糖浓度及持续时间呈正相关；病人用药治疗后，较血糖、尿糖含量下降晚３－４周，糖化血红蛋白HbA1c的百分比含量是对糖尿病长期控制有重要意义的一项指标。 2、测定糖化血红蛋白HbA1c的方法 测定糖化血红蛋白HbA1c的方法有（1）离子交换高压液相色谱法HPLC；包括：离子交换色谱及亲和色谱；（2）微柱法；（3）免疫分析法，包括：放射免疫法、酶免疫法和乳胶免疫凝集法。（3）电泳法

最全糖化血红蛋白测定的原理与仪器解析(参考资料)

糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与 仪器解析及临床意义 糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。 1HbA1c的临床意义 糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。 1．1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。 1．2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。 1．3作为糖尿病的病情监测指标 1．3．1作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。 1．3．2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。 1．3．3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。 1．4当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。 1．5对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。 1．6对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。 1．7对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸中毒等急性合并症的发生。

糖化血红蛋白(HbA1c)测定原理方法及临床意义

糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义 糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义 糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达 2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。 1HbA1c的临床意义 糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。 1．1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。 1．2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。 1．3作为糖尿病的病情监测指标 1．3．1作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。 1．3．2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。 1．3．3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。 1．4当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。 1．5对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。1．6对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。 1．7对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸中毒等急性合并症的发生。 2临床常用的测定糖化血红蛋白HbA1c的方法 2．1乳胶凝集反应法 乳胶凝集反应法是利用抗原抗体直接测定总血红蛋白Hb中的糖化血红蛋白HbA1c的百分含量。目前有国内外几家厂商可以提供HbA1c测定的试剂盒。这种免疫反应是由被测血样品中的总Hb和HbA1c与试剂中的抗体结合而形成凝集，凝集量随HbA1c浓度的大小而变化。使用生化分析仪器来进行比浊测定HbA1c的浓度，采用终点法，生化仪通过测定反应液的吸光度值，可直接反映出凝集量的多少；推算出

血红蛋白的测定方法

血红蛋白的测定方法 血红蛋白是一种色素蛋白，可以用比色法测定。血液中血红蛋白以各种形式存在，包括氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物。 1）氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法：血液中除了SHb以外，其他各种血红蛋白均可被试剂转化、生成HiCN，其最大的吸收峰为540nm波长，可经比色测定。此法为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的国际标准参考方法，操作简单，显色快且结果稳定医`学教育网搜集整理；但本法试剂中KCN有剧毒，测定过程中高白细胞和高球蛋白血症易致混浊，HbCO转化较慢。 2）十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）法：除SHb外，血液中各种Hb均可与低浓度十二烷基月桂酰硫酸钠（SLS）作用，生成SLS-Hb棕红色化合物。SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm，肩峰560nm.由于摩尔消光系数尚未最后确认，因此不能用吸光度“A”值直接计算血红蛋白浓度。本法操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求，且无公害。但SDS质量差异较大，并且SDS可破坏白细胞，不适合进行白细胞计数的血液分析仪使用。 3）叠氮高铁血红蛋白（HiN3）测定法：与HiCN法相似，但仍然有公害问题。 4）碱羟血红蛋白（AHD 575nm）测定法：试剂简单、不含有毒试剂、呈色稳定，但由于其吸收峰在575nm，限制了此法在血液分析仪的使用。 5）溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法：该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，可同时进行白细胞计数，可用于血细胞分析仪自动检测Hb和白细胞。缺点是对Hb测定结果的准确度和精密度较低。 近年来，多参数血细胞分析仪的应用，使Hb测定逐步以仪器法取代手工法，其优点是操作简单、快速，同时可以获得多项红细胞的参数，血液分析仪法测定血红蛋白的原理与手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型号仪器使用的溶血剂不同，形成Hb的衍生物不同医`学教育网搜集整理。某些溶血剂形成的衍生物稳定性较差，因此要严格控制溶血剂加入量及溶血时间，特别是半自动血细胞分析仪应严格控制实验条件。有些溶血剂内虽加入了KCN，但其衍生物并非是HiCN，仪器要经过HiCN标准液校正后，才能进行Hb测定。仪器法测定血红蛋白精确度CV约为1%.

糖化血红蛋白项目推荐书

方便快速精确 GH-900Plus 糖化血红蛋白分析仪 购置建议书 深圳普门科技有限公司 Shenzhen Lifotronic Technology Co., Ltd 目录 一、公司简介 (3) 二、糖化血红蛋白基本知识简介 (4) (一)糖尿病简介 (4) (二)糖化血红蛋白简介 (4) 三、GH-900 Plus全自动糖化血红蛋白分析仪 (4) (一)GH-900 Plus检测原理 (5) (二)GH-900 Plus卓越的仪器特点 (6) (三)GH-900 Plus参数.................................. (10) 四、糖化血红蛋白分析仪GH-900Plus配套试剂 (11)

(一)试剂盒主要组成成分 (11) (二)待测样本采集和处理............................ .. (11) 五、经济效益分析 (12) (一)糖化血红蛋白检测收费标准 (12) (二)效益分析.............................................. .. (12) 六、仪器操作 (13) 七、售后服务承诺 (15) 一、公司简介 深圳普门科技有限公司是一家专业从事医疗设备研发、制造、营销的医疗设备供应商。 公司核心团队由北美归国的博士和硕士及资深专家所组成，是一家高起点、高素质的高新技术企业。主要创始人均拥有二十余年高科技医疗产品的行业经验和在北美和欧洲多年的行业工作经验，分别来自全球业内着名的医疗设备厂家。 公司获得“国家高新技术企业”认证，是国家科技部重大项目“科技支撑计划”项目执行单位。 作为国家级高新技术企业，普门科技秉承自主创新理念，致力于全球领先的床旁诊疗设备及家庭医疗产品的研发与制造。不断增加和完善临床急需的专业诊疗方案，以实现临床多科室的床旁诊疗技术普及与发展，为医疗机构创造更为显着的多重效益。 二、糖化血红蛋白基本知识简介 （一）、糖尿病简介

糖化血红蛋白的检测方法

Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2017, 7(3), 163-170 Published Online August 2017 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/journal/aac https://https://www.wendangku.net/doc/4b2422626.html,/10.12677/aac.2017.73022 Methods for Detection of Glycosylated Hemoglobin Zongli Huang, Zhirong Gan, Wan Lan, Jiating Hou, Xiaozhen Feng, Guocheng Han* College of Life and Environmental Sciences, Guilin University of Electronic Technology, Guilin Guangxi Received: Jul. 3rd, 2017; accepted: Jul. 28th, 2017; published: Jul. 31st, 2017 Abstract Diabetes mellitus is one of the highest morbidity in the world. At present, the detection of glycosy-lated hemoglobin has become the standard diagnostic method of diabetes monitoring. Hemoglo-bin plays an important role in human body, as a macromolecular protein which is mainly respon-sible for carrying oxygen. And the combination of high blood glucose in patients with diabetes will induce glucose and hemoglobin in HbA1c generation function, blood oxygen capacity, so the de-termination of glycosylated hemoglobin in blood shows great significance. There are more than 30 methods used for the determination of glycosylated hemoglobin in clinical laboratories. According to the principle of the reaction, which can be divided into two categories, the first category is based on the different charge of GHb and non GHb, including ion exchange chromatography, electropho-resis, isoelectric focusing, etc. The second category is based on the structural characteristics of GHb, including affinity chromatography, ion capture, immunization, etc. This article overviewed detection methods of glycosylated hemoglobin in clinical practice. Keywords Diabetes Mellitus, Standard Diagnostic, Hemoglobin, Glycosylated Hemoglobin, Detection 糖化血红蛋白的检测方法 黄宗利，甘志荣，兰万，侯嘉婷，冯小珍，韩国成* 桂林电子科技大学生命与环境科学学院，广西桂林 收稿日期：2017年7月3日；录用日期：2017年7月28日；发布日期：2017年7月31日 *通讯作者。

影响糖化血红蛋白测定的因素及实验室检测注意事项

影响糖化血红蛋白测定的因素及 实验室检测注意事项 （张秀明，中山大学附属中山市人民医院检验医学中心主任）糖化血红蛋白A1c（hemoglobin A1c，HbA1c）是评价糖尿病血糖控制水平的首选指标，并且与糖尿病慢性并发症的发生和发展密切相关。近年来，许多国家糖尿病学会和WHO推荐将其作为糖尿病的首选诊断标准，拓宽了HbA1c的应用范围。然而在某些特定的情况下，尤其是当病人有血红蛋白变异体存在时常导致HbA1c测定结果的极度异常或与血糖水平不一致，甚至误导临床；而且多种因素可致HbA1c出现假性升高或降低，不能准确反映糖尿病病人血糖控制状况，影响临床诊断和治疗。本文简要讨论糖化血红蛋白的生物化学特性，重点介绍糖化血红蛋白的测定方法、血红蛋白变异体对HbA1c测定的干扰，以及引起HbA1c 假性升高或降低的因素，并提出实验室检测注意事项。 一、HbA1c的生物化学： 成人血红蛋白（hemoglobin，Hb）通常由HbA（97％）、HbA2（2.5%）和HbF（0.5%）组成。在健康人，几乎94%的HbA是非糖化的血红蛋白即HbA0，而6%的是糖化血红蛋白（glycated hemoglobin,GHb）即HbA1。HbA1又包括HbA1a、HbA1b 和HbA1c，前二者含量较少约占GHb的1%，HbA1c是主要的糖化血红蛋白，约占GHb的5%。HbA1a又由HbA1a1和HbA1a2组成，两者分别是血红蛋白β链N-末端与1，6-二磷酸果糖和6-磷酸葡萄糖发生糖基化作用的产物，HbA1b是血红蛋白β链N-末端与丙酮酸的结合物，HbA1c由葡萄糖与血红蛋白β链N-末端的缬氨酸残基缩合而成。 HbA1c的形成主要依赖血糖浓度和红细胞寿命。全部过程经历两个非酶促反应：第一步是快速反应期，葡萄糖粘附在血红蛋白N-末端的缬氨酸残基上，形成一个不稳定的醛亚胺中间产物即Schiffs碱；第二步是Schiffs碱经历漫长的葡糖胺（Amadori）重排反应形成稳定的酮胺化合物即HbA1c；或逆向转变成葡萄糖和血红蛋白。由此可以看出，HbA1c与血液中葡萄糖浓度密切相关，因红细胞的平均寿命是120d，理论上HbA1c可反映过去120d血糖的平均水平，但在红细胞120d寿命中，近期血糖水平对HbA1c的检测值贡献更大，标本采集前30d的影响达50%，而采前集第31～90d的影响为40%，而91～120d的影响仅为10%，因此，HbA1c检测主要反映过去2～3月的平均血糖水平。 红细胞寿命受基因学、血液学和相关疾病等因素的影响，当解释临床结果时必须考虑这些因素，特别是能改变红细胞生成和红细胞结构的因素，临床医生应知晓这些因素可能导致

血红蛋白检测试剂盒(比色法)

血红蛋白检测试剂盒(比色法) 简介： 血红蛋白(Hemoglobin ，Hb 或HGB)是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是能使血液呈红色的蛋白。血红蛋白由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。Hb 在氧含量高的区域，容易与氧结合；在氧含量低的区域，又容易与氧分离。血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。 Leagene 血红蛋白检测试剂盒(比色法)( Hemoglobin Colorimetric Assay Kit)在酸性条件下产物呈红色，吸收峰在530nm ，产物红色越深，说明Hb 含量越高，反之则越低，通过分光光度比色法测定530nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出血清血红蛋白含量水平。该试剂盒主要用于检测溶血血清样本，亦可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液等中血红蛋白含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制检测工作液： ① 配制显色工作液：取Hb Assay buffer 至室温，取显色底物溶解于Hb Assay buffer ， 即为显色工作液。 ② 配制标准品工作液。 2、 准备样品： ① 溶血标本血清：溶血血清按照常规方法制备后，-80℃冻存。使用时用生理盐水稀 释100倍。 ② 细胞或组织样品：取恰当的细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速 离心取上清，-80℃冻存。 3、 加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入， 并注意避免产生气泡。如果样品中的血红蛋白含量过高，可以减少样品用量或适当稀释 编号 名称 TC0205 50T TC0205 100T Storage 试剂(A): Hb Assay buffer 2.5ml 5ml -20℃ 避光 试剂(B): 显色底物 100μl ×2 100μl ×3 RT 试剂(C): Acid Assay buffer 10ml 20ml RT 试剂(D): Hb(1mg/ml) 10μl ×2 10μl ×3 -20℃ 试剂(E): ddH 2O 1ml 1ml RT 使用说明书 1份

血红蛋白测定实验

血红蛋白测定实验 一、实验目的与任务 了解XF—1B型（或Hb—2000型）血红蛋白仪的使用方法，掌握血红蛋白的测定技术。有训练运动员在较好训练效果的影响下血红蛋白正常值高于正常成年人，因此，血红蛋白的测定是评定训练效果的重要指标。 二、原理 测定血红蛋白的方法很多，常见的有直接比色，光电比色法，沙利氏比色法（间接比色法）。 我们现在实验室用的是XF—1B型和Hb—2000型血红蛋白仪。此仪器是采用氰化高铁法，应用光电比色的原理测定血红蛋白值的，其原理是：将全血样品20ul注入5ml氰化高铁血红蛋白稀释液内（亦称文—齐氏液），作251倍稀释，溶化红细胞释出血红蛋白。稀释剂将血红蛋白先转变成高铁血红蛋白，再转化为氰化高铁血红蛋白。然后，再用XF—1B 型（或Hb—2000型）Hb仪比色法直接测定显示浓度数，不需任何换算（每次测定只需5秒钟）。 三、实验器材 XF—1B型和Hb—2000型血红蛋白仪、一次性血细胞吸管（刻度10～20ul）、采血针、75%酒精、消毒棉球、培养皿、烧杯、可调加液器、试管架、血红蛋白测定试剂（文—齐氏液）、氰化高铁血红蛋白标准液。 四、实验步骤 1、插上电源，打开血红蛋白仪电源开关，按动进样开关，重复三次吸入蒸馏水，并通电预热20～30分钟。观察显示是否为“零”。（按出Hb仪器左下角“测试—定标”按键，使之处于“测试”状态。）

2、取试管一支，加入Hb测定试剂（文—齐氏液）5ml，放在试管架上备用。 3、采血、比色：先消毒，再用采血针在耳垂或无名指尖处采血，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用血细胞吸管取血液20ul（注意：吸管内不可有气泡，否则需重新采血）。擦去吸管外血液后，轻轻吹入测定管底部，并回吸数次洗净吸管，然后充分混合均匀。待5分钟后，置Hb仪上比色。 4、记录：直接读数，记录下来。 Hb值通常以每100 ml血液中含Hb若干克来表示。（g/ml）。 本仪器采用国际单位制（g/L），可直接显示Hb值（g/L）。 我国正常成人，男子约：120～150 g/L 女子约：110～140 g/L 男运动员不超过：170 g/L， 女运动员不超过：160 g/L。 五、注意事项 1、每人每次测试前应先将Hb仪进样处吸入蒸馏水，冲洗流通池。使显示数值为“000”。 2、比色前将仪器前部左下角“测试—定标”键置于测试状态。 3、Hb仪采样吸管一定要全部侵入液体中，避免气泡吸入，否则影响测定结果，若有气泡请重新操作测试一次。 4、若“零点”漂移绝对值>2g/L，需调整“调零”旋钮，使仪器显示回到“000”。

全糖化血红蛋白测定的原理与仪器解析

全糖化血红蛋白测定的原理与仪器解析

————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：

糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与 仪器解析及临床意义 糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。 1HbA1c的临床意义 糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。 1．1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。 1．2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。 1．3作为糖尿病的病情监测指标 1．3．1作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。 1．3．2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。 1．3．3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。 1．4当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。

糖化血红蛋白项目书

方便快速精确GH-900Plus 糖化血红蛋白分析仪 购置建议书 (二)GH-900 Plus卓越的仪器特点 (6) (三)GH-900 Plus参数.................................. (10) 四、糖化血红蛋白分析仪GH-900Plus配套试剂 (11) (一)试剂盒主要组成成分 (11)

(二)待测样本采集和处理............................ .. (11) 五、经济效益分析 (12) (一)糖化血红蛋白检测收费标准 (12) (二)效益分析.............................................. .. (12) 设备及家庭医疗产品的研发与制造。不断增加和完善临床急需的专业诊疗方案，以实现临床多科室的床旁诊疗技术普及与发展，为医疗机构创造更为显着的多重效益。 二、糖化血红蛋白基本知识简介 （一）、糖尿病简介

糖尿病的特征是高血糖，是因为机体不能充分将葡萄糖作为能源加以利用。在1型糖尿病中，胰腺不能产生足够的胰岛素，从而使血糖不能被利用；在2型糖尿病，或者是胰岛不能产生足够的胰岛素，或者是机体不能正常对胰岛素发生反应。不论1型还是2型均会发生包括微血管方面的眼，肾，神经及大血管方面的心脏，脑和四肢等并发症。全世界约有5%的人群患有糖尿病。 (IDF)和 的诊 糖化血红蛋白临床意义：用于临床糖尿病的筛选、诊断、血糖控制、疗效考核。具体应用： 1.评价血糖的总体控制情况 血糖越高，糖化血红蛋白就越高，反映血糖控制水平。

2.鉴别糖尿病性高血糖及应激性高血糖 前者糖化血红蛋白水平增高而后者正常。 3.检验治疗方案是否有效 如果某糖尿病患者定期监测糖化血红蛋白均在6％－7％，而最近一次为8.2％，这表明以往的治疗方案已不能较好的控制血糖，需重新调整。 -- ）测量 普门GH-900Plus——快速： 自动添加溶血素，样本自动温育 3分钟检测，检测结果立等可取 普门GH-900Plus——精确：

糖化血红蛋白测定标准化

糖化血红蛋白测定标准化 糖尿病（Diabetes Mellitus）是一种多病因的代谢疾病，特点是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌不足或/和作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，可导致不同脏器的（长期）损伤、功能障碍和衰竭。2003年全球糖尿病患者数量接近2亿，预测2005年将再增加1倍，人群患病率将从0.67%上升到2.3%。中国现有糖尿病患者4000万，占全球总数的1/5。我国每年用于治疗糖尿病的直接医疗成本超过180亿，占医疗总费用的4%。监测血糖水平，对糖尿病的诊治是非常重要的，监测结果可用于评价治疗效果、调节饮食、活动和治疗，以达到最好的血糖控制效果。血、尿葡萄糖和尿酮体测定对糖尿病的日内管理提供了有用的信息，但无法评价一段时期内的平均血糖控制水平。糖化蛋白测定，主要是糖化血红蛋白和血清蛋白测定，进一步完善了糖尿病的实验室检测手段，其检测结果可以定量过去数月和数星期的血糖平均水平。 糖化血红蛋白（Glycated hemoglobin, GHB）实验通常是检测由血红蛋白和葡萄糖经缓慢过程且非酶促反应所形成的稳定部分，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比,积累并持续于红细胞120天生命期中。由于红细胞允许葡萄糖自由渗透，血液样本中糖化血红蛋白水平反应过去120天内的平均血糖水平。GHB 检测用于常规实验室始于二十世纪七十年代末期，且稳定发展至今，成为评价血糖控制水平的重要指标。临床实验室中应用的GHB检测方法主要分为两大类，一类方法基于GHB与非GHB的电荷不同，如离子交换色谱、电泳和等电聚焦方法；另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析和免疫实验，每种方法各有优缺点，对临床实验室而言，尚无“最佳”方法可以选择。虽然方法不同，结果的表示不同，但在正确操作和解释的情况下，方法间可以有较好的相关性，并能为临床提供有用的信息。 基于在美国进行的糖尿病控制和并发症临床研究（diabetes control and complications trial, DCCT），表明了糖尿病患者病程的发展和合并症与血糖控制的密切关系，及血浆葡萄糖水平与HbA1c水平间的关系。在此基础上，美国糖尿病协会（American Diabetes Association）提出了糖尿病治疗的建议，指明测定HbA1c重要性，并在世界范围内被广泛应用。为了更好地应用DCCT的结果治疗糖尿病人，为临床医生提供准确的实验室数据，美国临床化学协会（AACC）在1993年成立分委会进行GHB 测定的标准化工作，使不同实验室（方法）的结果可溯源至DCCT的参考结果。标准化工作由美国国家糖化血红蛋白标准化计划（National Glycohemoglobin Standardization Program, NGSP）指导委员会于1996年完成。这一工作使得美国临床实验室间GHB测定的结果有了大的变化：2000年，90%实验室以HbA1c报告糖化血红蛋白的结果，所有参加NGSP活动实验室测定结果的室间CV小于5%，HbA1c结果与靶值的偏差小于0.8%。目前，美国绝大多数实验室报告的结果，均可溯源至DCCT结果，使对糖尿病及其并发症的治疗和预防工作有了统一的参考标准。美国临床实验室标准委员会（NCCLS）采纳了NGSP的GHB测定的标准化模式[2]。

糖化血红蛋白检测技术的评价与展望

糖化血红蛋白检测技术的评价与展望 黄琼坚，磨现斌 ［摘要］血糖和血红蛋白结合的产物糖化血红蛋白（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，ＧＨｂ），是糖尿病诊断、治疗、 监控的重要指标。通过对近年文献进行综合分析得知，目前临床实验室的ＧＨｂ测定方法有３０余种，根据其检测原理的差异可分为３类：第一类基于ＧＨｂ与非ＧＨｂ所带电荷差异的方法，如电泳法、等电点聚焦法、阳离子交换层析法等；第二类基于ＧＨｂ的分子结构差异的方法，如亲和层析法和免疫法等；第三类基于生化反应差异的方法，如酶法、硫代巴比妥酸比色法等。各实验室可依据自身情况，选择合适的ＧＨｂ检测方法。 ［关键词］糖尿病；糖化血红蛋白；检测技术 ［中图分类号］Ｒ４４６畅１１＋ ２；Ｒ５８７畅１ ［文献标志码］Ａ ［文章编号］２０９５－３０９７（２０１３）０６－０３７４－０４ｄｏｉ：１０畅３９６９／ｊ畅ｉｓｓｎ畅２０９５－３０９７畅２０１３畅０６畅０１６ ［作者单位］５３０００３广西南宁，南宁市第三人民医院检验科（黄琼 坚，磨现斌） 近年来，随着生活水平和方式的改变，糖尿病 （ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ，ＤＭ）的发病率呈现持续上升趋势，已成为第三大死亡原因（仅次于心血管疾病和癌症）。目前我国的ＤＭ发病率高达９畅７％。临床上对ＤＭ诊疗和监测常采用空腹、餐后血糖或葡萄糖耐量试验等，但其只能反映采血时的瞬间血糖水平，且易受到各种因素影响而致使检测结果只能作为参考。糖尿病并发症的发生、发展与血糖水平、血糖波动密切相关。血糖水平控制不好易并发感染，增加致死、致残率；血糖大幅波动可因激发多种代谢 途径而致使微血管、大血管损伤［１－２］ 。试验证实，把ＧＨｂ控制在７％左右，可使糖尿病并发症（如视网 膜、肾脏和神经等病变）的危害性大幅降低［３］ 。国际糖尿病联盟明确指出，ＧＨｂ是国际公认的糖尿病监测的金标准；美国糖尿病协会在枟２０１０年糖尿病诊疗指南枠中主张把结合糖类的一种亚型ＨｂＡ１ｃ作 为诊断ＤＭ的优先指标［４］ 。也有不少国内学者提出 类似主张，但对ＧＨｂ测定方法看法不一［５－６］ 。ＧＨｂ作为糖尿病血糖监测指标，可以指导对糖尿病患者的病情评估、制定治疗方案。目前临床实验室检测ＧＨｂ的方法有３０余种，各有优劣，现对ＧＨｂ检测方法进行综述、分析。 １　ＧＨｂ的生物特性 ＧＨｂ在广义上是指结合了碳水化合物的血红蛋白（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，Ｈｂ）。成人血红蛋白是由ＨｂＡ（约占总Ｈｂ的９７％）、ＨｂＡ２（２畅５％）和ＨｂＦ（０畅５％）组成。而ＨｂＡ中未结合糖类的为ＨｂＡ０（约占ＨｂＡ的９０％）；结合糖类的为ＨｂＡ１，即ＨｂＡ１ｃ（５％～７％）［７］ 。实验室所测定的糖化血红蛋白主要是指ＨｂＡ１ｃ，是ＨｂＡ１的一种亚型，占总ＨｂＡ１的６０％～７０％，它是血糖与血红蛋白通过非酶促糖化反应而形成的一种糖蛋白，其分子结构很稳定且最有特征性。ＨｂＡ１ｃ 可以反映患者过去２～３个月内的总体血糖水平，且不受近期进食、运动和血糖波动的影响，其血中含量主要取决于血糖与Ｈｂ接触的时间以及前期血糖浓 度，并具有正相关性［８－９］ 。因此，ＨｂＡ１ｃ可反映患者血糖的控制情况，对糖尿病的预防、诊断和治疗均有重要意义。 ２　ＧＨｂ的检测技术２畅１　电泳法　其检测原理（以琼脂凝胶电泳为例）是在酸性缓冲液（ｐＨ６畅０）中，因ＧＨｂ和非ＧＨｂ各组分的等电点及泳动速度不同而进行分离检测。电泳后离负极端最近的是含糖基最少的ＨｂＡ１ａ和ＨｂＡ１ｂ，其次是ＨｂＡ１ｃ，最远是Ｈｂ的主要成分ＨｂＡ０，通过光密度仪扫描，最终计算出ＨｂＡ１ｃ的百分含量。该方法优点是样本用量少，重复性好，分辨率高；缺点是测定需成批样本进行分析，自动化程度 差，测定速度较慢［１０］，故应用受限。另有报道［１１］ ，采用３０ｃｍ、内径２５μｍ的未涂层熔融石英毛细管，利用血红蛋白在波长４１５ｎｍ处的特异性吸收峰，通过二极管阵列检测。ＨｂＡ１ｃ和非ＨｂＡ１ｃ成功分离后对前者进行定量分析，仅用几分钟即可完成检测。可见毛细管电泳法快速、高效、重复性好。 ２畅２　等电点聚焦法　原理类同电泳法。在聚丙烯肽凝胶薄板中加入载体两性介质（如ａｍｐｈｏｌｉｎｅ），形成从阳极到阴极递增的ｐＨ梯度，当样本通过薄板时，全血中各组分移动到各自等电点的ｐＨ位置上，凝胶经固定、染色、脱色后，所得的色带比电泳法更为精细和集中，通过高分辨率光密度仪扫描，可测出各组分的含量。因为血液中各类Ｈｂ一级结构及等电点不同，理论上该法可以避免交叉干扰，是一种理 想的检测方法；但实验设备非常昂贵［１２］ ，难以用于常规检验。２畅３　阳离子交换层析法　其检测原理是因ＧＨｂ和非ＧＨｂ所带电荷差异而进行分离。ＨｂＡ和ＨｂＡ１在偏酸性的阳离子交换树脂中均具有阳离子的特 ? ４７３?枟转化医学杂志枠２０１３年１２月第２卷第６期 ＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＪｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．２Ｎｏ．６，Ｄｅｃ２０１３ 万方数据

糖化血红蛋白 HbA1c 测定的原理方法与仪器解析及

糖化血红蛋白HbA1c 测定的原理 方法与仪器解析及 糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而 我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白(HbA1c)浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白(HbA1c)占总血红蛋白(Hb)的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。1 HbA1c的临床意义糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。1.1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2~3个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。1.2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。1.3作为糖尿病的病情监测指标1.3.1作为轻症、Ⅱ型、隐性糖尿病的早期诊断指标。1.3.2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。1.3.3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。1.4当HbA1c>9%时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。1.5对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。1.6对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖(测血糖当然增高)抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸1.7诊断的价值。． 中毒等急性合并症的发生。2临床常用的测定糖化血红蛋白HbA1c的方法2.1乳胶凝集反应法乳胶凝集反应法是利用抗原抗体直接测定总血红蛋白Hb中的糖化血红蛋白HbA1c的百分含量。目前有国内外几家厂商可以提供HbA1c测定的试剂盒。这种免疫反应是由被测血样品中的总Hb和HbA1c与试剂中的抗体结合而形成凝集，凝集量随HbA1c浓度的大小而变化。使用生化分析仪器来进行比浊测定HbA1c的浓度，采用终点法，生化仪通过测定反应液的吸光度值，可直接反映出凝集量的多少；推算出HbA1c占Hb的百分含量，测定时，仪器多采用660nm单

临检--血红蛋白测定 图文

血红蛋白测定 【检测原理】 1.氰化高铁血红蛋白HiCN测定法：除SHb外 ICSH推荐参考方法，具有操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。致命的弱点是氰化钾（KCN）试剂有剧毒，使用管理不当可造成公害。 氰化高铁血红蛋白测定法操作 （1）直接测定法 ①加转化液：试管内加5ml HiCN转化液 ②采血与转化：取全血20μl，加到盛有转化液的试管底部，用上清液反复冲洗吸管3次，充分混合，静置5min ③测定：以符合WH0标准的分光光度计，波长540nm处，光径（比色杯内径）1.000cm，HiCN转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A） ④计算：根据样本的吸光度（A）直接计算出血红蛋白浓度（g/L） （A为测定管吸光度，44为毫摩尔消光系数，64458/1000为1mol/L Hb溶液中所含Hb 克数，251为稀释倍数） （2）HiCN标准液比色法测定 ①标准曲线绘制和K值计算 HiCN参考液（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L），分别测得540nm处的吸光度，以参考液血红蛋白含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线或求出K值。 ②样本吸光度（A） ③通过标准曲线查出样本血红蛋白浓度，或用K值计算，血红蛋白浓度Hb（g/L）＝K ×A 注意事项 （1）标本：异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过30×109/L、脂滴等可产生浊度，干扰Hb测定。 （2）HiCN转化液是一种低离子强度、pH近中性的溶液（7.2±0.2）。样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时，HiCN比色液会出现浑浊。解决方法：白细胞过高引起的浑浊，可离心后取上清液比色；球蛋白异常增高（如肝硬化者）引起的浑浊，可向比色液中加入少许固体氯化钠或碳酸钾，混匀后溶液澄清再比色。 （3）氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应收集于广口容器中，首先以水稀释废液（1:1），再按每升上述稀释液加次氯酸钠35ml，充分混匀，敞开容器，放置15h以上，使CN一氧化成C02和N2挥发，或水解成C032-和NH4＋，再排入下水道。废液不能直接与酸性溶液混合，因为氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体。

血红蛋白测定及注意事项

（2）以上述同样的方法取血，并使血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白。然后以转化液作空白，测定标本吸光度A。 （3）通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2) 3.使用沙里氏血红蛋白计测定 沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 （1）沙里血红蛋白计主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。 （2）具体测定方法如下： ①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。 ②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。 ③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。 ④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。 ⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。 ⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。 [注意事项] 1.取血前要做好充分的消毒。 2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤采血管1～2次，使采血管内干净、干燥。作为学生练习，微量采血管可反复使用。 3.使用血红蛋白仪测定时，吸样管应插入试管底部，避免吸入气泡，否则会影响测试结果。仪器连续使用时，每隔4小时要观察一次零点，即吸入文齐试剂，用“调零旋钮”使仪器恢复到零点。仪器用完后，关机前要用清洗液清洗。否则会影响零点的调整。 [实验结果] 报告该实验动物的血红蛋白浓度。并将全班的结果加以统计,用平均值±标准差表示。[思考题] 血红蛋白的含量与年龄的关系？ 影响血红蛋白含量的主要因素？※1.HiCN转化液：即文齐氏液，有标准商品出售。也可配制：高铁氰化钾(K3Fe（CN）6)200 mg，氰化钾（KCN）50 mg，无水磷酸二氢钾（KH2PO4）140 mg，Triton X-100 1.0 ml，蒸馏水加至1000 ml。过滤后为淡黄色透明液体，pH 7.0～7.4，置有色瓶中加盖、冷暗处保存。如发现试剂变绿、变浑浊则不能使用。 2.用分光光度计直接测定血红蛋白 （1）取血、血红蛋白转化和比色同前述1、2的方法，得到标本的吸光度A。 （2）根据标本吸光度A直接计算出血红蛋白浓度：