甲胎蛋白免疫测定用国家标准品的建立
中国医药生物技术2019年4月第14卷第2期Chin Med Biotechnol, April 2019, V ol. 14, No. 2 185 DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2019.02.015·
技术与方法·甲胎蛋白免疫测定用国家标准品的建立
孙彬裕*，曲守方*，于婷，孙楠，孙晶，胡泽斌，黄杰
甲胎蛋白（AFP）是一种血清糖基化蛋白，在正常成人血清中含量极少。AFP 主要由胎儿卵黄囊和肝脏产生，其次是胃肠道黏膜、肾脏也可少量合成。AFP 是单链糖蛋白，分子量65 ~ 70 kD，其物理化学特性和氨基酸组成类似于血清白蛋白，但抗原性不同[1-3]。作为一种肿瘤标记物，AFP 可以用于肿瘤的诊断疗效监控，70% ~ 95% 的原发性肝癌患者呈现AFP 水平升高，AFP 异常升高提示原发性肝癌的发生[4-7]。妊娠期可通过AFP 监测进行疾病的筛查和诊断，产前普查羊水中AFP 水平可监控胎儿异常，孕妇血清异常升高提示胎儿神经管缺陷畸形，如脊柱裂、无脑儿、脑积水等，AFP 降低提示未出生的婴儿有唐氏综合征的危险性[8-11]。
目前国内外有70 多家具有注册证的AFP 测定试剂盒应用于临床，检测方法包括化学发光法、酶联免疫法和时间分辨免疫荧光法等。但各家试剂盒产品质量参差不齐，使用的抗体不同，使其对同一份标本测定的同一肿瘤标记的结果可能会有所差异，导致不同实验室的测定结果不具有可比性[12]。为了解决这一问题，AFP 检测的标准化极为重要。临床实验室测定的标准化关键在于测定结果的量值溯源。实现量值溯源，一般可通过参考方法（或参考测量程序）和标准物质来进行，AFP 没有参考方法，但有国际标准物质[13-14]。而研制AFP 国家标准品，能够规范我国AFP 测定试剂盒的质量，促进我国AFP 检测结果的标准化。本实验室开展了AFP 国家标准品的研制，并进行协作标定工作。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1仪器AutoLumo A2000 Plus 全自动化学发光测定仪由郑州安图生物工程股份有限公司提供；Maglumi 2000 Plus 全自动化学发光测定仪由深圳市新产业生物医学工程股份有限公司提供；卓越C1800 全自动化学发光测定仪由上海科华生物工程股份有限公司提供；iMark Bio-Rad 酶标仪由艾康生物技术（杭州）有限公司提供；DR6608 时间分辨荧光免疫分析仪由广州市达瑞生物技术股份有限公司提供；Advia Centaur XPT 和Immulite 2000 全自动化学发光免疫分析仪由西门子医学诊断产品（上海）有限公司提供；Access 2 全自动免疫分析仪由贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司提供；Cobas e411 电化学发光全自动免疫分析仪由罗氏诊断产品（上海）有限公司提供；Liaison XL 全自动化学发光免疫分析仪由索灵诊断医疗设备（上海）有限公司提供；HISCL-5000 全自动免疫分析仪由希森美康医用电子（上海）有限公司提供。1.1.2试剂盒甲胎蛋白定量检测试剂盒（磁微粒化学发光法）为郑州安图生物工程股份有限公司产品；甲胎蛋白测定试剂盒（化学发光免疫分析法）为深圳新产业生物医学工程股份有限公司产品；甲胎蛋白定量测定试剂盒（化学发光法）为上海科华生物工程股份有限公司产品；甲胎蛋白检测试剂盒（酶联免疫法）为艾康生物技术（杭州）有限公司产品；甲胎蛋白定量测定试剂盒（时间分辨免疫荧光法）为广州市达瑞生物技术股份有限公司产品；甲胎蛋白测定试剂盒（直接化学发光法）和甲胎蛋白测定试剂盒（化学发光法）为西门子医学诊断产品（上海）有限公司产品；甲胎蛋白测定试剂盒（化学发光法）为贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司产品；甲胎蛋白检测试剂盒（电化学发光法）为罗氏诊断产品（上海）有限公司产品；甲胎蛋白检测试剂盒（化学发光免疫分析法）为索灵诊断医疗设备（上海）有限公司产品；甲胎蛋白检测试剂盒（化学发光法）为希森美康医用电子（上海）有限公司产品。
1.1.3标准品AFP 国际标准品（Alpha fetoprotein, Human, NIBSC code: AFP，100 000 IU/支）由中国食品药品检定研究院提供。
1.2 方法
1.2.1AFP 国家标准品候选品制备精确量取来源于脐带血提取的甲胎蛋白原料，加至赋形剂（去激素血清）内，充分混匀后，配制成理论浓度约为900 IU/ml 的AFP 国家标准品候选品溶液，置于 2 ~ 8℃过夜，次日经0.22 μm 滤膜无菌过滤，每支安瓿0.5 ml 进行分装，冻干制备成AFP 国家标准品候选品。
1.2.2AFP 国家标准品候选品瓶间精密度实验随机抽取10 支候选品，使用郑州安图生物工程股份有限公司甲胎蛋白定量检测试剂盒（磁微粒化学发光法），平行进行分析测定，计算其效价比的变异系数（CV%）。
1.2.3AFP 国家标准品候选品热稳定性实验每次随机选取候选品 2 支，37 ℃放置 1 ~ 12 周后，以–20 ℃保存的AFP 国家标准品候选品（记为0 周）为对照，使用郑州安图生物工程股份有限公司甲胎蛋白定量检测试剂盒，对稳定性候选品样本平行进行分析测定，计算其效价比。
作者单位：100050 北京，中国食品药品检定研究院体外诊断试剂检定所
通信作者：黄杰，Email：jhuang5522@https://www.wendangku.net/doc/413605914.html,；胡泽斌，Email：huzbcmba@https://www.wendangku.net/doc/413605914.html,
收稿日期：2019-01-14
*同为第一作者