PRUE-LAMP检测结核分枝杆菌在 中国区县实验室诊断性能评估

PRUE-LAMP检测结核分枝杆菌在

中国区县实验室诊断性能评估

Xichao Ou1., Qiang Li1., Hui Xia1., Yu Pang1, Shengfen Wang1, Bing Zhao1, Yuanyuan Song1,Yang Zhou1, Yang Zheng1, Zhijian Zhang5

, Zhiying Zhang2, Junchen Li2, Haiyan Dong2, Jack Zhang2, KaiMan Kam3, Junying Chi4, Shitong Huan4, Daniel P. Chin4*, Yanlin Zhao1*

摘要：背景：能够在早期有效的检测结核分枝杆菌，尤其是涂布阴性的结核病，对全球肺结核防控至关重要。环介导等温扩增法与快速DNA提取法（PURE-LAMP）相结合，可以高灵敏性、高特异性、快速检测痰液样本中结核分枝杆菌。尽管如此，PURE-LAMP尚缺乏足够的评估，尤其是在资源有限的基层实验室。本研究中，通过对来自中国两个县级实验室肺结核疑似患者进行检测，评估了PURE-LAMP 法在基层实验室检测结核分枝杆菌的性能。

方法与结果：自2011年4月-2012年2月，收集来自中国两个县级结核病实验室的肺结核疑似患者三种痰液标本（即时痰，晚间痰和晨痰）用于检测。用标准L-J培养法做对照，结果显示，PURE-LAMP法检测即时痰标本结核分枝杆菌的灵敏度达到70.67%。同时，

PURE-LAMP法在基于涂片呈阳性培养阳性，涂片阴性培养阳性的标本中灵敏度分别为92.12%和53.81%。PURE-LAMP法检测即时痰结核分枝杆菌中的特异性为98.32%。基于三种样本检测结核分枝杆菌，PURE-LAMP法的灵敏度和特异性分别为88.80%和96.86%。与固体培养法相比，PURE-ALMP法可显著降低污染率。

结论和意义：结果表明，在中国的基层结核病防治实验室检测结核分枝杆菌，PURE-LAMP法具有较高的灵敏度和特异性。其具有高效、

快速和安全的优点，值得在基层及偏远地区广泛推广使用。

结核病仍然是威胁全世界健康的重大疾病，2012年，据统计新发结核病约860万，死亡人数约130万[1]。快速准确的诊断对结核病有效治疗和防控至关重要[2-3]。目前，全世界范围内结核病常用的诊断方法是涂片镜检，众所周知该方法灵敏度低，特别是对感染HIV的低免疫力病人[4-5]。培养法是结核病诊断的金标准，灵敏度较涂片法高，但培养耗时长（2周-8周）。为了满足结核病防治快速灵敏的要求，一系列核酸扩增方法不断涌现[6-8]；然而，由于分子检测需要复杂的操作流程和昂贵的仪器，设施简陋、技能缺乏的广大基层实验室尚不能满足这些条件来开展。

LAMP法是一种崭新的恒温核酸扩增方法[12]，不需要昂贵的仪器设备。TB-LAMP是日本荣研公司基于LAMP技术开发的结核菌检测试剂盒。它具有的一系列特征为资源缺乏的基层实验室提供了分子检测平台：快速（40mins），恒温（只需加热快），稳定（对抑制剂和反应条件具有一定的容忍性），检测结果可以直接用肉眼观察判定[13-15]。2007-2010年，荣研公司与FIND基金会合作，成功研发出新一代TB-LAMP检测试剂盒，即PRUE-LAMP，该试剂盒包括一个简单的DNA提取过程[16]。PRUE-LAMP具有更高的灵敏度和特异性，并重新设计优化了反应引物。DNA的提取和扩增过程都可以在一个封闭的反应管中进行，这样可以有效减少污染风险。PRUE-LAMP包括3个步骤：样本准备（10-20min），扩增（40min），直接通过肉眼观察荧光检测结果（0.5-1min）[17]。

为了评估PURE-LAMP的临床性能，我们选择了中国河南省2个区县级实验室进行实验。

材料和方法

实验设计

本实验在中国河南省两个显微镜检实验室（获嘉县和新乡市）进行。收集2011年4月-2012年2月来自门诊就诊的连续纳入的肺结核疑似患者（连续咳嗽咳痰2周，咳血，伴有血样痰）痰液标本用于研究，每位患者采集3种痰液（即时痰、晚间痰、晨痰），每份痰样量至少2mL（0.1mL用于涂片，1mL用于培养，0.06mL用于PURE-LAMP实验）。每份痰液样本同时进行直接涂片抗酸染色、固体培养和PURE-LAMP实验，中国国家结核病参比实验室（NTRL）的实验员收集所有培养呈阳性菌并进行16S-23S rDNA ITS测序分析来鉴别菌种。以固体培养为参照来评估PURE-LAMP性能。

本实验之前，两个镜检实验室均未做过固体培养和PCR实验，为了确保LAMP检测和培养实验质量，所有实验员都在NTRL经过1周的培训。为了确保固体培养质量，新乡和获嘉的工作人员预先进行了9个月的TB培养实验培训。LAMP实验也在当地试验点进行了培训。方法

葁-尼染色镜检和罗氏培养：实验员按照《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[18]的要求做好实验室涂片镜检的室内和室间质量控制。固体培养时，痰液处理和接种方法参照WHO标准[19]，37℃培养8周。

PURE-LAMP：PURE-LAMP实验步骤参照[17]，各个实验室的操作人员均经过厂商培训并通过每人3个流程的熟练测试，操作流程如下：采用荣研公司生产的痰液专用大孔吸液器吸取60uL痰液于含有提取液的加热管中，混匀后90℃加热5min。然后将加热管和吸附试剂管组装并充分混匀直至白色试剂完全溶解。然后组装上滴注盖，挤压30uL样本于反应管中。盖好反应管盖子与反应试剂充分溶解后与67℃反应40min。反应结束后将反应管置于荧光检测装置中判定并记录结果。

菌种鉴定：所有培养呈阳性菌经过16S-23S rDNA ITS测序分析进行种属鉴定。

统计学分析

采用TB-LAMP实验特异性，灵敏性，阳性预测值（PPV），阴性预测值（NPV）来评估LAMP实验性能。以培养法为标准，所有数据经SPSS 19.0数据分析软件分析，P〈0.05为差异有统计学意义。

结果

样本来源

自2011年4月-2012年2月共收集了初诊可疑肺结核患者1378例，排除不合格的样本，最终有1329例用于数据分析（图1）。其中，888例是男性，441例是女性，53例年龄不到20岁，165 (12.42%)例涂片和培养呈阳性，210 (15.80%)例涂片呈阴性培养呈阳性，954(71.78%)培养呈阴性（表1）。

PURE-LAMP检测即时痰性能

在1329例疑似患者中，PURE-LAMP检测结核菌的灵敏度和特异性（表2，图1）。以固体培养法为参考标准，1203份（90.52%）与固体培养法一致，灵敏度为70.67%，对与涂片呈阳培养呈阳的样本，PURE-LAMP的灵敏度是92.12%，对于涂片呈阴培养呈阳的样本，PURE-LAMP的灵敏度是53.81%，PURE-LAMP的特异性是98.32%。PURE-LAMP检测不同时期痰标本以及不同时期混合标本性能

分析了不同时期取得的痰液样本（即时痰，夜间痰，晨痰）以及

不同时期痰标本混合（即时痰+夜间痰，即时痰+晨痰，夜间痰+晨痰，即时痰+夜间痰+晨痰）的灵敏度和特异性（表3），结果表明三个时期混合标本的特异性和灵敏度要高于单个时期取的痰液样本。

PURE-LAMP和培养法污染率

用PURE-LAMP 检测475例新结核病疑似病人，只有一份样本污染，总污染率是0.21%。

4129份样本取自2个治疗室的1378例患者，每份样本分别接种2管培养，共培养8268份，其中276份污染，总污染率是3.3%。

不同方法差异分析

在培养呈阴性样本中有30份样本PURE-LAMP检测呈阳，2份涂

片呈阳。在PURE-LAMP检测呈阴性样本中，有42份培养呈阳性，其中，6份测序结果为非结核分枝杆菌，36份测序显示为结核分枝杆菌，涂片呈阴性。26 (72.22%)份培养菌落数<20。

讨论

结核病的早期诊断对结核病的防治至关重要，随着分子生物学的发展，一系列快速检测和诊断TB的方法不断涌现。LAMP技术是Notomi博士在2000年开发出的一种全新的核酸扩增技术[12]。PURE-LAMP是一种新颖，简便，防污染的TB检测试剂盒。

本研究中，PURE-LAMP对涂片呈阴培养呈阳的样本灵敏度是53.81%，整体灵敏度为70.67%，特异性为98.32%，与其他研究结果一致[11]。与涂片镜检相比，灵敏度要高，结果表明PURE-LAMP可以用于检测结核分枝杆菌。

中国相关规定推荐采集结核病疑似患者3个时期样本用于TB检测[21]，本实验中，我们评估了每种样本对于结核病诊断的影响，PURE-LAMP实验结果表明采集3个时期的痰液样本用于检测要比只采集即时痰意义更大。考虑到成本因素，避免给患者造成经济负担，今后有必要评估PURE-LAMP法检测不同时期样本组合成本。

本实验中PURE-LAMP的污染率是0.21%，2个试验点操作都进行了严格分区，包括试剂存储区，前处理区，扩增检测区。每个区都标明清楚防止来回取试剂或者设备时混淆。实验台等都经过5%的次氯酸钠溶液消毒，实验后经过UV照射处理。通过严格控制和封闭实验，极大的降低了污染率。

PURE-LAMP结果报告时间比固体培养快。2h以内即可根据肉眼观察荧光判定结果。判断时未发现模糊案例。20%的样本经过复检后重复率100%。

总的来说，PURE-LAMP是一种全新的诊断技术，可以快速、准确地检测结核病患者，该实验只需60ul痰液样本，非常适合检测肺结核病人，尤其是痰液较少患者，本研究表明PURE-LAMP可以用于实验室筛查结核病。

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2017年新项目结核分枝杆菌IgGIgM抗体检测(2)

湘雅博爱康复医院 开展医疗新技术新项目申请书项目名称：结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测 申请人：张艳 申请人职称：副主任技师 所在科室：检验科 申请日期：2017.06

医务部印制 说明 1、开展新技术新项目是医院可持续发展的重要建设内容，但新技术新项目的开展需严格执行准入制度，并遵循伦理原则，并具有实用、有效、安全、先进等技术特点。 2、项目各栏请认真填写，如无相关内容，请填写“无”，以确认该栏无需填写相关说明；各栏填写内容较多，可另附页。 3、填写本表，如涉及伦理问题，即视为申请者已提请本院医学伦理委员会针对所申请项目进行伦理审查和评议，可不再另行提交申请表。 4、项目审批过程包括填写申请表、专家预审、医疗技术管理或/和医学伦理委员会讨论，表格填写如存在字迹潦草、内容不完整等，视为废表，将不予预审和讨论。 5、凡未履行准入并填写该申请书的新技术新项目，不得参与医院年度新技术新项目成果奖励的申报。 6、本申请书及其审批结果，是申请项目完成后进行成果申请、鉴定的重要基本支持依据。 8、申请项目获得批准后，根据申请人、申请科室承诺，管理部门有责任对批准项目进行全程追踪管理、进度检查、伦理督查，可根据完成情况给予表彰和奖励。

一、新技术新项目开展的目的及主要内容（简述） 结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测基于免疫层析和胶体金显色技术开发而成的一步法检测。用于体外定性检测人血清、血浆或全血样本中的结核分枝杆菌IgG/IgM抗体。 应用目前国际医学基础研究最新进展及公认的最新抗原片段，采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，在确保灵敏度和特异性的基础上，更加符合《结核病管理办法》的核心要旨：“提高肺结核患者的发现水平”进而实现快速普及和广泛应用于结核病的辅助诊断、鉴别诊断和化疗过程中的动态监测及特殊人群体检筛查等。 二、该技术项目相关的国内外进展（简要说明） 肺结核主要由结核分枝杆菌复合群引起的一种慢性传染病，以肺结核常见，其他器官也可受感染致病。结核病主要通过飞沫传播，传染性强，各类人群易感，接种疫苗是有效的预防方式。结核病的常用诊断方法有痰结核菌检查，影像学诊断，PPD试验，抗体诊断方法是近几年引进的结核辅助诊断方法。 该技术的国内外使用单位综述： 《血清中结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测在肺结核诊断中的应用价值》 江西省胸科医院检验科实验与检验医学2015年8月第33卷第4期 《结核抗体IgG/IgM检测在肺结核诊断中的应用价值》 四川省绵竹市人民医院感染科实用临床医药杂志2016年第20卷第15期 该技术项目的国内外参考文献： 胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体对结核病诊断的应用价值--《中国人兽共患病学报》 现阶段结核抗体检测在我国临床应用的专家共识--《中国防痨杂志》 三、该技术项目的技术原理、先进性、有效性、安全性及应用价值 采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，定性检测血清中的结核分枝杆菌（IgG和IgM）。检测时，样本中的结核抗体可与胶体金标记的抗原形成结核抗体-金标抗原复合物，由于层析作用该复合物沿着试剂条向前移动，经过T1检测线时IgM抗体-金标抗原复合物与膜上包被的小鼠抗人IgM结合而显色，经过T2检测线时IgG抗体-金标抗原复合物与膜上包被的结核抗原结核

结核病知识测试题答案

单选题] 1、肺结核在我国民间又称为什么病？ A、肺痨 B、阴虚病 C、佝偻病 D、慢阻肺 标准答案A，您的答案A。本体得分：3.5 √ [单选题] 2、 2015版《耐药结核病化学治疗指南》中指出由于哪两种药物组合通常会导致较高的胃肠道不良反应和甲状腺功能减退症的发生率，因此，只有在需要3种第4组药一起使用时，这2种药物才会被联合应用。 A、丙硫异烟胺和对氨基水杨酸 B、丙硫异烟胺和对氨基水杨酸异烟肼 C、环丝氨酸和乙胺丁醇 D、环丝氨酸和吡嗪酰胺 标准答案A，您的答案A。本体得分：3.5 √ [单选题] 3、环丝氨酸成人剂量1g/d时，建议同时服用维生素B6，每服用250mg的环丝氨酸可给予多少量的维生素B6。（预防神经系统毒性） A、20mg B、30mg C、40mg D、50mg 标准答案D，您的答案D。本体得分：3.5 √ [单选题] 4、以下哪个不是一线抗结核药物？ A、利福平 B、异烟肼 C、乙胺丁醇 D、氧氟沙星 标准答案D，您的答案D。本体得分：3.5 √ [单选题] 5、在初治涂阳肺结核病治疗期间，尿液出现红色可怕吗？ A、怕 B、不可怕 标准答案B，您的答案B。本体得分：3.5 √ [单选题] 6、结核病的高危人群哪种不是？ A、肺结核可疑症状者 B、HIV/AIDS患者 C、糖尿病患者 D、冠心病患者 标准答案D，您的答案D。本体得分：3.5 √ [单选题] 7、正在治疗的学生肺结核病患者可以继续上学吗？ A、不可以 B、症状消失就可以 C、边吃药边上学 D、传染性消失后，根据结核病定点医院的诊断证明方可上学 标准答案D，您的答案D。本体得分：3.5 √ [单选题] 8、肺结核患者的哪种标本传染性最强？ A、痰液 B、血液 C、汗液 D、尿液 标准答案A，您的答案A。本体得分：3.5

病例分析——肺结核

` 第三章病例分析——结核病一、概述 1.概念 结核病是结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及多个脏器，以肺部受累形成肺结核最为常见。 痰中带菌者称为传染性肺结核，传染性肺结核病人排菌是结核传播的主要来源，主要为病人与健康人之间经飞沫传播。人体感染结核杆菌后不一定发病，当抵抗力降低时，才会引起发病。 其病理变化为渗出型、增生型、干酪样坏死三种类型。三种病变可以相互转化、交错存在，很少单一病变独立存在，而以某一种改变为主。 2.结核病分型 Ⅰ型：原发型肺结核，多见于儿童，典型病变包括肺部原发灶，引流淋巴管和肺门淋巴结的结核性炎症，三者联合称为原发综合征。多数原发综合征临床症状轻微，不治自愈，很少排菌。 Ⅱ型：血行播散型肺结核，儿童多来源于原发性肺结核；成人多由原发感染灶中的结核菌破溃进入血行引起。本型肺结核发生于免疫力极度低下者。 Ⅲ型：继发型肺结核，为成人与继发性肺结核最常见类型。好发于两肺上叶尖后段或下叶尖段，病灶趋于局限，易于有干酪坏死和空洞形成，排菌较多。 Ⅳ型：结核性胸膜炎：常见胸腔积液，为渗出液，草绿色，淋巴细胞为主，ADA明显升高。 V型：其他肺外结核 二、诊断要点 1.全身症状：发热，多数为长期低热，，可伴有倦怠、乏力、夜间盗汗、食欲减退、体重减轻、妇女月经不调、易激惹、心悸、面颊潮红等。 2.呼吸道症状：咳嗽、咳痰、咯血、胸痛、呼吸困难。 3.体征： 病灶以渗出型病变为主的肺实变且围较广或干酪性肺炎时，叩诊浊音，听诊闻及支气管呼吸音和细湿啰音。 继发型肺结核好发于上叶尖后段，故听诊于肩胛间区闻及细湿啰音，有极大提示诊断价值。 空洞性病变位置浅表而引流支气管通畅时有支气管呼吸音或伴湿啰音；巨大空洞可出现带金属调的空瓮音。 慢性纤维空洞性肺结核的体征有患侧胸廓塌陷、气管和纵隔间向患侧移位、叩诊音浊、听诊呼吸音降低或闻及湿啰音，以及肺气肿征象。 支气管结核有局限性哮鸣音，特别是于呼气或咳嗽末。 4.实验室和辅助检查 1）病原学检查 ①痰涂片抗酸染色直接镜检有助于诊断 ②痰培养具有较高的敏感性和特异性 ③结核菌抗原和抗体检测 2）影像学检查 ① X线胸片 文档Word ` 原发性肺结核典型特征有原发灶、淋巴管炎和肺门或纵隔肿大的淋巴结组成哑铃状病灶。

病例分析

(一)慢性阻塞性肺疾病 分级：轻度FEV1 ≥80％中度50％≤FEV1＜80％重度30％50％极重度30％ 老年人＋咳、痰、喘=慢性支气管炎 桶状胸＋过清音=肺气肿 老年患者＋咳、痰、喘＋桶状胸＋过清音＋肺功能=COPD 慢性呼吸系统病史＋右心衰体征=肺心病 鉴别诊断：1.支气管哮喘2.支气管扩张 进一步检查：1.肺功能检查2.胸部影像学检查3.血气分析4.痰培养 治疗原则：1.控制性氧疗，避免吸入氧浓度过高引起CO2潴留（2）抗生素：β内酰胺类等（3）支气管舒张剂：抗胆碱药和β2肾上腺素受体激动剂雾化吸入（4）短期静脉使用糖皮质激素 （二）肺炎 青壮年＋受凉＋高热＋湿哆音＋铁锈色样痰=大叶性肺炎 婴幼儿＋咳、喘＋呼吸困难体征（鼻翼扇动＋三凹征）=支气管肺炎 发绀＋鼻扇征（+）、三凹征（+ )＋两肺可闻及喘鸣音及湿罗音＋呼吸快、心率快=左心衰 肝大＋双下肢水肿=右心衰 儿童＋发热+阵发性刺激性咳嗽＋头痛及胸骨下疼痛+关节疼（肺外并发症）=支原体肺炎 鉴别诊断：（1）金黄色葡萄球菌肺炎（2）急性肺脓肿（3）肺癌 进一步检查：（1）X线胸片（2）胸部CT（3）痰培养+药敏试验（4）痰找癌细胞（5）痰找结核杆菌（6）必要时行纤维气管镜检查 治疗原则：1.抗感染使用抗生素2.对症治疗退热、祛痰等 （三）支气管哮喘 青少年＋过敏性鼻炎＋发作性喘憋＋满肺哮鸣音=支气管哮喘 鉴别诊断：1.心源性哮喘2.喘息型慢性支气管炎 进一步检查：1.动脉血气2.胸部X线检查3.肺功能检查 治疗原则：1.吸氧2.可静脉应用糖皮质激素3.支气管舒张剂4.急性发作控制后综合防治 （四）肺癌 中老年人＋吸烟史＋刺激性咳嗽（or痰中带血）＋毛刺（边缘不整齐）=肺癌鉴别诊断：1.肺炎2.慢性支气管炎3.肺结核 进一步检查：1.胸部CT 2.纤维支气管镜及活检3.痰脱落细胞检查，或CEA检测4.腹部B超 治疗原则：1.手术切除2.化疗、放疗配合 （五）呼吸衰竭 老年患者＋慢性呼吸系统病史＋紫绀＋血气=呼吸衰竭 1型呼衰PaO2 < 60 mmHg 2型呼衰PaO2 < 60 mmHg + PaCO2 > 50 mmHg pH < 7 . 35酸中毒 pH > 7 . 35碱中毒 慢性呼吸系统病史＋意识障碍=肺性脑病

抗结核分枝杆菌感染的免疫机制

抗结核分枝杆菌感染的免疫机制 学生：何燕华学号：20111061 一、结核病及结核分枝杆菌 １、结核病简介 趣味背景：林黛玉的不足之症是什么病症呢？ 不足之症是中医的病症名，即民间常说的先天不足，泛指各种虚证。虚证是指人的正气虚弱不足，又分气虚、血虚，气虚可发展为阳虚，血虚可发展为阴虚，有些病人可气血皆虚或阴阳皆虚。气虚主要表现为少气、懒言、心悸、自汗、头晕、耳鸣、小便清而频、脉虚弱等。血虚主要表现为面色苍白、唇舌色淡、头晕目眩、心悸怔忡，疲倦乏力或手足麻木，脉细弱等。 根据小说的描写，林黛玉患的应是一种慢性病。她“从会饮食时便吃药，到今日未断，请了多少名医修方配药，皆不见效。”“每岁至春分秋分之后，必犯旧疾”，并且病症主要表现是咳嗽、咳痰、数量不等的咯血，“又咳嗽数声，吐出好些血来”。王大夫分析她的病症时说“这病时常应得头晕，减饮食，多梦，每到五更，必醒个几次。即日间听见不干自己的事，也必要动气，且多疑多惧。不知者疑为性情乖诞，其实因肝阴亏损，心气衰耗，都是这个病在那里作怪。”从她所患之病的症状及疾病演变和进展分析，林黛玉患的是肺结核病。 结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核菌可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病。结核病又称为痨病和“白色瘟疫”，是一种古老的传染病，自有人类以来就有结核病。结核病是青年人容易发生的一种慢性和缓发的传染病。人与人之间呼吸道传播是本病传染的主要方式。传染源是接触排菌的肺结核患者。解放后人们的生活水平不断提高，结核已基本控制，随着环境污染和艾滋病的传播，结核病又卷土重来，发病率愈演愈烈。 据世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)统计，全世界约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年约有880万新发病例，200万人因结核病而死亡，每15s就会有一个死亡病例。并且,随着社会人员流动，HIV感染者增多造成的交叉感染使我国的结核病感染率一直处于上升趋势,已经成为造成全球人类死亡的主要传染病类型。了解宿主的免疫系统及机体相关细胞与病原菌的相互作用机制非常重要,并且能对结核病的预防和治疗提供一定的帮助。 2、结核分枝杆菌 结核分枝杆菌( mycobacteriumtuberculosis,MTB)是一种抗酸阳性棒状杆菌，主要包括人型、牛型、非洲型和鼠型，其中对人致病的主要是人型结核菌。结核菌细长略弯曲，大小约1～4X0.4μm，无鞭毛、无芽孢、不能产生内、外毒素，专性需氧，培养要求高，生长缓慢，菌体成分主要有脂质、多糖、蛋白质等。 大量研究表明结核杆菌属于兼性寄生菌，原因是首先在感染的巨噬细胞内复制，故称为胞内菌；然后，随着病变发展又会出现在坏死组织中即巨噬细胞外进行复制结核杆菌的致病性与其在组织细胞内大量繁殖引起的炎症反应，菌体和细胞壁成分以及代谢物质的毒性和机体产生抗结核免疫反应等有关。 在结核杆菌胞壁中含有许多特殊脂类物质这种特殊的胞壁赋予结核杆菌能在宿主吞噬细胞内生存的能力，也为特异性T淋巴细胞提供了独特的糖脂抗原；而且从其基因组序列可以看出结核杆菌具有潜在的由一种代谢途径转变为其他代谢途径的能力，包括有氧呼吸（如氧化磷酸化）和厌氧呼吸（如硝酸还原反应）。这一代谢途径转换的灵活性对结核杆菌适应生存环境的变化有极大的意义，主要表现为结核杆菌既可以在人高氧压力的肺泡中生存繁殖，还可以在结核肉芽肿的微氧和厌氧的环境中存活。 二、结核分枝杆菌在细胞内的免疫机制 1．非特异性免疫机制

结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂注册技术审查指导原则

附件 结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂 注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、范围 结核病是由结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌和非洲分枝杆菌等引起的慢性传染性疾病，可累及全身各个器官，以肺结核最为多

见。其中，结核病的病原菌主要是结核分枝杆菌，牛结核分枝杆菌次之。结核分枝杆菌主要是经空气传播，大多数人在感染结核分枝杆菌后并无症状，称为潜伏感染。潜伏感染可持续几十年，仅有5%—10%的潜伏感染者发展为活动性肺结核。 在结核病的细菌学检验中，通常将分枝杆菌分为结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex）和非结核分枝杆菌（Nontuberculosis mycobacteria, NTM）。结核分枝杆菌复合群包括结核分枝杆菌（M.tuberculosis）、牛结核分枝杆菌(M.bovis)、非洲分枝杆菌（M.africanum）和田鼠分枝杆菌（M.microti）。在结核分枝杆菌复合群内各种中，除田鼠分枝杆菌对人无致病力外，其他三种菌均可对人致病，产生大致相同的临床表现。因此，临床上往往只做结核分枝杆菌复合群的鉴定而不进行亚种水平的鉴定，用于结核辅助诊断的核酸检测试剂也常采用结核分枝杆菌复合群共有的核酸序列作为靶标来进行检测。 核酸检测是肺结核病原学诊断的重要参考。2009年，美国疾病控制预防中心（CDC）更新了肺结核的诊疗指南，将核酸检测作为肺结核的辅助诊断方法，明确：对所有疑似肺结核患者，应至少进行一个呼吸道样本的核酸检测。我国《临床诊疗指南—结核病分册》也明确：结核分枝杆菌的DNA检测可作为肺结核诊断的参考。与其他实验室检查方法比较，核酸检测的价值在于：（1）可快速鉴别结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌，提高涂片阳性肺结核的诊断特异性；（2）与涂片比较，灵敏度较高，

病例分析报告完整公式

（完整版）病历分析答题公式---快速写出诊断 (增加辅助检查+鉴诊+治疗) （1）慢性阻塞性肺疾病 老年人＋咳、痰、喘=慢性支气管炎 桶状胸+过清音=肺气肿 老年患者+咳、痰、喘+桶状胸+过清音+肺功能=COPD（分期：急性加重期？稳定期？） 慢性呼吸系统病史＋右心衰体征=肺心病 补：肺功能分级：FEV1/FVC<70,FEV1于30、50、80间分别为轻、中、重、极重。伴慢性呼衰亦为极重。 查：肺功能、胸片、血气分析、痰培养。 治：控制性氧疗，维持氧合水平>60%，或血氧饱和度>90%。、抗生素、支气管舒剂、必要时糖皮质激素、并发症治疗、加强教育、戒烟等康复治疗。 （2）肺炎 青壮年＋受凉＋高热＋湿啰音＋铁锈色样痰=大叶性肺炎 婴幼儿＋咳、喘＋呼吸困难体征（鼻翼扇动＋三凹征）=支气管肺炎发绀＋鼻扇征(+)、三凹征(+)+两肺可闻及喘鸣音及湿罗音+呼吸快、心率快=左心衰 肝大＋双下肢水肿=右心衰 儿童+阵发性刺激性咳嗽+关节疼=支原体肺炎 鉴别：金葡菌炎、干酪样肺炎、肺脓肿、肺癌。

查：胸片、胸部CT、痰培养+药敏、痰找癌细胞、痰找结核杆菌、必要时行纤支镜。 治：抗感染，对症治疗。 （3）支气管哮喘 青少年+过敏性鼻炎+发作性喘憋+满肺哮鸣音=支气管哮喘 鉴别：心源性哮喘、喘息型慢性支气管炎、支气管肺癌、肺嗜酸细胞浸润（胸片肺部游走性淡片影，肺组织活检诊断） 查：血常规、痰涂片、动脉血气、肺功能、胸片、变应原。 治：吸氧、静脉运用糖皮质激素、支气管舒剂、控制急性发作后综合防治（减少接触危险因素、评估及检测哮喘、随访）。 （4）肺癌() 中老年人+吸烟史+刺激性咳嗽（or痰中带血）+毛刺（边缘不整齐）=肺癌 鉴别：肺炎、肺结核、慢性支气管炎、肺炎性假瘤、肺转移瘤慢性肺脓肿、肺门淋巴结肿大（结节病、淋巴瘤）、胸腔积液（胸膜间皮瘤、结核性渗出性胸膜炎）。 查：胸片、胸部CT、纤支镜、胸腔积液检查、痰脱落细胞检查、免疫学检查、肺组织活检，腹部B超 治：手术。配合化、放疗。 （5）呼吸衰竭（) 模拟诊断：慢性阻塞性肺疾病，急性加重；慢性肺源性心脏病；肺性脑病，Ⅱ型呼衰；高血压病2级，极高危。

结核分枝杆菌IgG抗体TB检测试剂盒

结核分枝杆菌IgG抗体(TB)检测试剂盒 一、检测原理------斑点金免疫渗滤法 二、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阳性 （一）、抗细胞壁脂多糖LAM抗体呈阳性 1、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，具有较强的免疫原性和免疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体。 2、检测到此抗体阳性，结合临床症状和其他检查要考虑是活动性结核病患者。 3、由于在某些呼吸道炎症等良性疾病中，此抗体也会呈现阳性，所以，请医生要结合其他的临床信息加以鉴别诊断。 （二）、38KDa抗体阳性 1、38KDa抗原是定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白。 2、检测到此抗体阳性，结合临床病史，非常有助于活动性结核的诊断。 3、由于此抗原和大肠埃希菌(简称大肠杆菌)同源蛋白有30％以上的交叉，所以，在肠道感染患者中有一定的假阳性，要注意加以鉴别。 4、值得注意的是在部分接种过卡介苗（BCG）的患者中，也会出现阳性，要注意鉴别。 （三）、16kDa抗体阳性 1、16kDa蛋白又被称为HSP16.3蛋白，是小分子热休克蛋白（sHSP）家族成员之一。 2、此抗体在结核病患者中有相当高的阳性率（46～50% )，检测到此抗体阳性，并结合临床要考虑是活动性结核病患者。 3、在大多数接种过卡介苗（BCG）的患者中，并不会出现阳性，能将结核病患者与BCG 接种患者区别开来。 4、作为儿童结核的早期诊断指标，敏感性为64.8%左右，特异性96.2%左右。

（四）、MPT63抗体阳性 1、MPT63抗原是结核杆菌的分泌蛋白之一。 2、它的灵敏度为15～40％，特异性很高，约为98％左右。即在检测到此抗体阳性时，临床 上基本就可诊断是活动性结核病患者。 三、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阴性 （一）不是结核病患者 （二）病情好转 （三）在结核病患者病情加重、合并人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的结核病患者、痰涂片、 痰培养呈阴性的患者中，由于机体免疫能力低下等原因，导致产生的抗体滴度太低，以至于 不能被检测到，会呈现假阴性的结果，需要结合临床加以鉴别。 四、多指标联合检测的优势 （一）多指标联合检测，提高了阳性率 由于单个抗原不可能捕获全部或大多数抗体，所以，多指标联合检测，提高了阳性率，减少 了漏检，是结核血清学诊断的发展趋势。 指标组合灵敏度 LAM 56.5% LAM+38KD 68.3% LAM+38KD+16KD 75.2% LAM+38KD+16KD+MPT63 77.4% （二）多指标独立的检测结果，有助于医生对患者病情的监控 结核菌侵入机体后刺激机体产生一系列体液免疫反应，体液免疫随着病变的加重（或血行播散）而增加。当多个抗体呈现阳性时，提示病情有加重的迹象，所以，临床医生可以根据不 同时期的抗体谱，并结合患者的临床病症，进行病情的监控和疗效的判断。

抗结核分枝杆菌感染的免疫机制

抗结核分枝杆菌感染的免疫机制 1．非特异性免疫机制 结核杆菌作为兼性胞内寄生菌，以巨噬细胞为宿主细胞。组织中的巨噬细胞可以吞噬多种病原微生物并处理衰老死亡的组织, 其自身还能分泌多种细胞因子和其他炎性介质参与局部炎症反应、发热反应等。巨噬细胞可以通过氧依赖性和非氧依赖性杀菌系统发挥杀伤和消除病原菌的作用。 （１）巨噬细胞的识别作用 巨噬细胞是MTB进入机体内首先侵入的细胞, 是MTB感染过程中的主要靶细胞。巨噬细胞有两种识别MTB的方式：①直接识别：巨噬细胞能通过其表面的激素样受体直接识别侵入机体的MTB。②间接识别：巨噬细胞可以通过表达补体受体识别MTB。（２）巨噬细胞的杀菌作用 巨噬细胞能通过自身凋亡等杀灭菌体。巨噬细胞系统的细胞毒素具有两个系统:一个是氧依赖系统, 在抗微生物效应中起决定性的作用；另一个是氧不依赖的系统，溶菌酶等属于该系统产物，这个系统也参与杀微生物活性。巨噬细胞主要通过氧依赖系统杀伤侵入机体的MTB,激活的巨噬细胞发生呼吸暴发，产生反应性氧中间产物(ROIs)和反应性氮中间产物(RNIs)，释放溶菌酶等活性蛋白质，这些物质有强的氧化作用和细胞毒作用，对MTB有强的杀伤作用。另外，巨噬细胞与病原菌作用后处于激活状态的巨噬细胞可以通过病原菌与TLR相互作用激活caspase-8，诱导其自身凋亡，破坏MTB的生存环境，杀灭入侵的MTB。 （３）ＭＴＢ的免疫逃逸机制 MTB能在巨噬细胞内定居存活以及引起机体一系列的病理反应是与其免疫逃逸的机制分不开的。MTB进入巨噬细胞胞膜内化形成吞噬小体，然后与溶酶体结合形成吞噬溶酶体，溶酶体分泌的胞内酶可以促使吞噬溶酶体酸化，外源性抗原在吞噬溶酶体的酸性环境中被水解为抗原多肽。而MTB之所以能够在巨噬细胞内存活是因为它能够阻止吞噬溶酶体的酸化。MTB可以通过降低磷脂酶D的活性，抑制活性氧中间体和活性氮中间体的产生，下调MHCⅡ的表达,抑制吞噬溶酶体的成熟，进而抑制巨噬细胞的氧依赖杀伤作用。 2．特异性免疫在抗结核中的作用 MTB的感染过程，分为初始感染,潜伏感染,再次大量增殖造成的疾病复燃三个阶

病例分析——肺癌

第三章病例分析——肺 癌 一、概论 1.概念 肺癌是最常见的肺部原发性恶性肿瘤，起源于支气管粘膜或腺体，亦称支气管肺癌，常有区域性淋巴结转移和血行播散，早期常有刺激性咳嗽、痰中带血等呼吸道症状，病情进展速度与肿瘤的组织学类型、分化程度等生物学特性有关。本病发病随年龄增长而增加，发病高峰在60～79岁之间。 2.病因 病因和发病机制迄今尚未明确。大量资料说明肺癌的发病与下列因素有关：吸烟；空气污染；职业致癌因子；电离辐射；饮食与营养；遗传因素以及其他，如病毒感染、某些慢性肺部疾病与支气管肺癌的发生也有一定关系。 3.分类 按解剖学部位分类 （1）中央型肺癌：发生在段支气管至主支气管的癌肿称为中央型，约占3/4，以鳞状上皮细胞癌和小细胞未分化癌较多见。 （2）周围型肺癌：发生在段支气管以下的癌称为周围型，约占l／4，以腺癌较为多见。

按组织学分类 按细胞分化程度、形态特征和生物学特点，目前将肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，后者包括鳞癌，腺癌，大细胞癌和鳞腺癌。 二、诊断要点 1.40岁以上男性，长期重度吸烟史。 2.症状体征 ①原发肿瘤引起的症状体征 咳嗽：多为阵发性刺激性呛咳，无痰或少许泡沫痰；肺泡癌可有大量粘液痰。 咯血：以中央型多见，多为痰中带血或间断性血痰。 喘鸣、气急、胸闷、发热、厌食、乏力、体重下降等。 ②肿瘤局部扩展引起的症状体征 胸痛、呼吸困难、吞咽困难、声音嘶哑。 上腔静脉阻塞综合征：胸壁静脉曲张和上肢，颈面部水肿。 Horner综合征：肺上沟瘤（Pancoast's tumor），癌肿侵犯或压迫颈交感神经导致患侧眼睑下垂，瞳孔缩小，眼球内陷，同侧额部无汗。 ③肿瘤远处转移引起的症状和体征 脑，中枢神经系统转移，骨转移。 ④肺癌作用于其他系统引起的肺外表现--副肿瘤综合征。 Ⅰ.异位内分泌综合征：如抗利尿激素分泌异常综合征，异位ACTH综合征，神经肌肉综合征，高钙血症，类癌综合征。 Ⅱ.其他肺外表现：多发性周围神经炎，肌无力样综合征，肥大性肺性骨关节病。 3.实验室和辅助检查 ①胸部X线检查 1）中心型肺癌 直接X线征象：多为一侧肺门类圆形阴影，边缘毛糙，可有分叶或切迹等表现。与肺不张，阻塞性肺炎并存时，可呈现反“S”形征象，有诊断意义。

结核分枝杆菌痰培养及耐利福平药敏试验分析

结核分枝杆菌痰培养及耐利福平药敏试验分析 发表时间：2018-07-13T13:57:23.327Z 来源：《心理医生》2018年16期作者：张婷 [导读] 在进行结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的过程当中。 （甘肃省临夏州疾病预防控制中心甘肃临夏 731100） 【摘要】目的：研究结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的结果。方法：选择2016年1月—2017年10月临夏地区结核病定点医院接诊的痰涂片阳性病患200例，对所有病患都施以痰培养和耐利福平试验，并对其痰培养和药敏试验的结果进行综合分析。结果：本组200例病患当中，有195例痰培养提示阳性，占总比例的97.5%；有1例为涂阳培阴，占总比例的0.5%；有4例污染，占总比例的2.0%。患者耐利福平药敏试验的结果提示，新患者的耐利福平率为10.63%，复治者的耐利福平率为22.86%，初治失败者的耐利福平率为40.0%。结论：严格按照相关的标准和流程进行结核分枝杆菌培养与药敏试验，复治者与初治失败者明显比新患者多。 【关键词】耐利福平；结核分枝杆菌；药敏试验；痰培养 【中图分类号】R52 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）16-0106-02 在进行结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的过程当中，比较容易受多种因素的影响而出现涂阳培阴亦或者是污染的情况[1]，所以，在实际操作期间要严格按照相关的步骤和标准进行，全面落实标本的收集、接种与保存等环节。此研究，笔者将以200例痰涂片阳性病患（接诊于2016年1月—2017年10月）为对象，重点分析结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的结果，现作出如下报道。 1.资料与方法 1.1 一般资料 2016年1月—2017年10月临夏地区结核病定点医院接诊的痰涂片阳性病患200例，包含男性患者104例，女性患者96例；年龄在18～76岁的范围之内，平均（46.28±11.34）岁；复发者，35例；新患者，160例；初治失败者，5例；职业为农民者，92例；无业者，11例；工人；60例；离退休人员，37例。所有患者都自愿参与此研究，临床资料完整，依从性良好，获得医学伦理委员会批准。 1.2 纳入标准[2] （1）既往有结核病史且现痰涂片检查提示阳性。（2）痰涂片检查提示（++）-（++++）。（3）治疗5个月后痰涂片检查提示阳性。 1.3 方法 将所选病例都转录到肺结核患者培养与药敏登记表中，并对患者的基本信息进行详细的记录，比如：性别、职业、来源以及痰检结果等。采集患者的痰标本，并将之置于冰箱中进行低温保存。 根据临床要求对采集到的痰标本进行登记，并在生物安全柜中，同时采取分枝杆菌分离培养法，对痰标本进行规范化的处理。所有试验用品和废弃物都经高压蒸汽进行消毒灭菌处理。以结核杆菌涂片镜检的相关操作规程，对痰标本进行结核分枝杆菌痰培养，并将培养结果准确记录在化验单以及结核病细菌学实验室登记册上。痰培养选择使用改良罗氏培养基（由“省结核病实验室”提供），利用分枝杆菌分离培养法进行痰培养，同时根据分枝杆菌分离培养法的要求，对生长结果进行准确的记录，并报告结果。 药敏试验时，选取经抗酸染色明确为结核分枝杆菌的阳性标本。培养基产自“省结核病实验室”，利用结核分枝杆菌药敏试验法，同时根据结核分枝杆菌药敏试验的标准，对结果进行记录和报告。 1.4 统计学分析 用SPSS20.0统计学软件分析研究数据，t用于检验计量资料，即（x-±s），χ2用于检验计数资料，即[n（%）]，P＜0.05差异有统计学意义。 2.结果 本组200例病患当中，痰培养提示阳性者有195例，占总比例的97.5%，当中有27例耐利福平，上述菌株都根据实验室的要求进行保存。新患者的耐利福平率为10.63%，初治失败患者的耐利福平率为40.0%，复发患者的耐利福平率为22.86%。经比较发现，新患者的耐利福平率明显低于初治失败患者以及复发患者，P＜0.05。本组的涂阳培阴率为0.5%（1/200），污染率为2.0%（4/200）。详见表。 3.讨论 现阶段，肺结核病在我国临床上比较常见，属于是一种慢性传染性疾病，能经呼吸道进行传播，可对人类的生命健康造成较大危害[3]。因不合理亦或者是不规则化疗、贫困、病后监测力度削弱以及健康水平低下等因素的影响，可引发结核菌耐药的情况，从而导致获得性耐药、自然耐药、初始耐药以及原发性耐药[4]。所以，临床需要充分了解耐药结核菌株的形成情况，然后再为患者制定出具有较高针对性的结核病治疗方案以及结核病疫情防控方案。如此，方可有效降低结核病的发病率，提高患者临床病症控制的效果。 此研究中，选择了200例痰涂片阳性病患，当中有35例为复发患者，占总比例的17.5%；有5例为初治失败患者，占总比例的2.5%；有160例为新患者，占总比例的80.0%。200例病患当中有92例为农民，占总比例的46.0%；有11例无业，占总比例的5.5%；有60例为工人，占总比例的30.0%；有37例为离退休人员，占总比例的18.5%。可见，农民感染结核病的概率明显高于无业人员、工人以及离退休人员，P ＜0.05，这和农民的生活习惯、营养状况与休息等因素密切相关。患者药敏试验的结果提示，新患者的耐利福平率为10.63%，复治患者的耐利福平率为22.86%，初治失败患者的耐利福平率为40.0%。经比较发现，复治患者以及初治失败患者的耐利福平率明显比新患者高，P ＜0.05，这和患者不合理亦或者是不规则化疗有着较密切的关系。涂阳培阴1例，原因为：（1）标本保存不恰当，在制作好痰涂片后，需将涂片放在冰箱中进行保存，并于24h内严格按照相关的标准和流程进行培养；（2）过处理，应利用浓度为4%的氢氧化钠溶液进行处理，用量为1～2倍体积，处理时间为20min[5]；（3）痰标本选择不恰当，需选择标本中干酪样亦或者是脓样的可疑部分；四，患者未停药，在进行结核分枝杆菌痰培养的过程当中，需要求患者停药；五，接种量比较小，通常情况下，每管的接种量应为0.1ml。污染4例，原因为：

三种不同检测方法诊断结核病的比较

三种不同检测方法对诊断结核病的比较 池云生张东浩吉林省结核病医院检验科 130500 【摘要】目的将诊断结核病的蛋白芯片法与金标法及抗酸染色法三种检测方法进行比较，以评价三种方法在临床中的应用价值。方法用蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检测125例确诊结核病人、50例肺部其它疾病患者和健康体检者的血清标本，并进行相关统计分析。结果蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检出结核分枝杆菌的灵敏度为64%，72%及22.7%，前两者比较无显著性差异(P>0.05)，但均高于抗酸染色法(P<0.05)。三者的特异性分别为90%，76.7%及96.7%。结论蛋白芯片法检测结核分枝杆菌，与金标法及抗酸染色法比较，具有简便、快速、敏感性较高和特异性强等优点，是临床辅助诊断结核病的有效方法。【关键词】蛋白芯片；结核分枝杆菌；比较；诊断 结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病，被列入我国法定重大传染病。为了实现早发现、早诊断、早治疗的目标，临床上现已开展了多种针对于结核病诊断的实验室检测项目。我院以开展的检测项目有蛋白芯片法、金标法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、结核菌培养等多种方法。根据临床应用情况，现就相对简便易行的蛋白芯片法、金标法、抗酸染色法进行比较，来评价三种方法在临床中的应用价值，以便更好地为结核病防治的临床应用提供及时准确的信息。 结核蛋白质芯片(protein chip，PC)是近年来蛋白质组学研究中兴起的一种新方法，其基本原理是以微孔滤膜为载体，利用微阵列技术将纯化的结核菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)、蛋白16 KDa(rT—PA16)和38KDa(rTPA38)等三种抗原固相于同一膜片上，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫金作为标记物在膜上显色，然后放入芯片阅读仪，在专门软件的支持下对抗原点阵的灰度值进行分析，以达到检测结核分枝杆菌的目的。为了评价此方法的临床应用价值，本文将此法与免疫胶体金法及常规的抗酸染色法作一比较，现报告如下： 1 材料与方法 1.1 材料①标本来源：125例确诊结核病人血清由我院内科肺结核确诊病人提供，50例肺部其它疾病患者和健康体检者的血清来源于本院胸外科、内科和门诊体检人员。②主要仪器和试剂：蛋白芯片阅读仪、结核分枝杆菌蛋白芯片试剂盒均为南京大渊生物技术公司提供；结核分枝杆菌免疫胶体金诊断试剂盒为

病例分析——肺结核

第三章病例分析——结 核病 一、概述 1、概念 结核病就是结核分枝杆菌引起得慢性传染病,可侵及多个脏器,以肺部受累形成肺结 核最为常见。 痰中带菌者称为传染性肺结核,传染性肺结核病人排菌就是结核传播得主要来源,主 要为病人与健康人之间经飞沫传播。人体感染结核杆菌后不一定发病,当抵抗力降低时, 才会引起发病。 其病理变化为渗出型、增生型、干酪样坏死三种类型。三种病变可以相互转化、交错存在,很少单一病变独立存在,而以某一种改变为主。 2、结核病分型 Ⅰ型:原发型肺结核,多见于儿童,典型病变包括肺部原发灶,引流淋巴管与肺门淋巴 结得结核性炎症,三者联合称为原发综合征。多数原发综合征临床症状轻微,不治自愈,很少排菌。 Ⅱ型:血行播散型肺结核,儿童多来源于原发性肺结核;成人多由原发感染灶中得结核菌破溃进入血行引起。本型肺结核发生于免疫力极度低下者。 Ⅲ型:继发型肺结核,为成人与继发性肺结核最常见类型。好发于两肺上叶尖后段或下叶尖段,病灶趋于局限,易于有干酪坏死与空洞形成,排菌较多。 Ⅳ型:结核性胸膜炎:常见胸腔积液,为渗出液,草绿色,淋巴细胞为主,ADA明显升高。 V型:其她肺外结核 二、诊断要点 1、全身症状:发热,多数为长期低热,,可伴有倦怠、乏力、夜间盗汗、食欲减退、体重减轻、妇女月经不调、易激惹、心悸、面颊潮红等。 2、呼吸道症状:咳嗽、咳痰、咯血、胸痛、呼吸困难。 3、体征: 病灶以渗出型病变为主得肺实变且范围较广或干酪性肺炎时,叩诊浊音,听诊闻及支 气管呼吸音与细湿啰音。 继发型肺结核好发于上叶尖后段,故听诊于肩胛间区闻及细湿啰音,有极大提示诊断 价值。 空洞性病变位置浅表而引流支气管通畅时有支气管呼吸音或伴湿啰音;巨大空洞可出现带金属调得空瓮音。 慢性纤维空洞性肺结核得体征有患侧胸廓塌陷、气管与纵隔间向患侧移位、叩诊音浊、听诊呼吸音降低或闻及湿啰音,以及肺气肿征象。 支气管结核有局限性哮鸣音,特别就是于呼气或咳嗽末。 4、实验室与辅助检查 1)病原学检查 ① 痰涂片抗酸染色直接镜检有助于诊断 ② 痰培养具有较高得敏感性与特异性 ③ 结核菌抗原与抗体检测 2)影像学检查 ① X线胸片 原发性肺结核典型特征有原发灶、淋巴管炎与肺门或纵隔肿大得淋巴结组成哑铃状病

结核分枝杆菌抗体检测 (胶体金法) 规程操作

结核分枝杆菌抗体检测(胶体金法) 规程操作 1、检验目的 本试剂盒可定性检测人血清中结构分枝杆菌抗体，用于临床结构病的辅助诊断。 2、检验原理 本试剂盒利用斑点免疫胶体金渗滤技术（DIGFA），将结核分枝杆菌特异性膜蛋白抗原分离纯化，点样并固化在硝酸纤维素膜上，膜上TB抗原捕获人血清样品中结核分枝杆菌抗体，被捕获的结核IgG 抗体可用葡萄球菌A蛋白（SPA）胶体金缀合物标呈色（SPA能与IgG 特异性结合），形成红色斑点，根据是否出现红色斑点即可判断阴、阳结果从而判断是否存在结核分枝杆菌抗体。 3、样本要求 必须使用新鲜血清标本，血浆标本必须用玻璃棒剥离纤维蛋白，保证血清无混浊沉淀。 4、试剂 4.1试剂名称：结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒（胶体金法） 4.2生产厂家：上海奥普生物医药有限公司 4.3包装规格：20人份/盒 4.4贮存条件及有效期：2-8℃干燥处保存，有效期12个月。 5、检验方法： 5.1在反应板的反应孔中间，加入2滴封闭液，等待薄膜吸入；5.2 取40μl新鲜的血清标本，加入反应孔中间，等待薄膜吸入； 5.3 在反应孔中间加入6滴洗活液，等待薄膜吸入； 5.4 在反应孔中间加入2滴金标液，等待薄膜吸入；

5.4 在反应孔中间加入6滴洗涤液，等待薄膜吸收，目测结果； 6、结果判断 6.1 阳性——质控点显示红色，反应孔中间有红色斑点出现。 6.2 阴性——质控点显示红色，反应孔中间无红色斑点出现或仅为痕迹。 检验方法的局限性 少数标本（急性感染、高血脂、溶血等）可出现背景偏红，一般不影响结果判断，可通过将标本用封闭液1:3稀释，加样80μl背景将获得改善。严重乳糜血标本可能会阻塞硝酸纤维素膜孔，使背景很红，影响中间红色斑点有无的判别，不宜用本法测定。 7、注意事项 7.1 必须以单人份操作，严禁多标本同时检测，每个标本的操作步骤需要连续进行，不宜停顿过长。 7.2 质控点显示红色表明试剂盒有效；阴、阳性对照也是确保定性结果可靠的一个环节，但临床阳性标本显色深浅可以与阳性对照不同。 7.3 血清、包括健康人血清属潜在生物危害物质，操作者应戴手套，测试后凡接触血清的物品应消毒后再丢弃。

国境口岸结核分枝杆菌复合群鉴定

国境口岸结核分枝杆菌复合群鉴定 1 范围 本标准规定了国境口岸结核分枝杆菌复合群鉴定的生物安全要求，鉴定程序，鉴定方法，结果报告等内容。 本标准适用于国境口岸入出境人员感染结核分枝杆菌复合群的检测鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 结核病实验室生物安全手册世界卫生组织 人间传染的病原微生物名录卫生部 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PAGE（polyacrylamide gel electrophoresis）：聚丙烯酰胺凝胶电泳 TBE （Tris-Boric acid）：Tris-硼酸核酸电泳缓冲液 bp（base pair）：碱基对 4 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 4.1 结核分枝杆菌复合群Mycobacterium Tuberculosis Complex；MTC 传染性结核病的病原菌复合群，包括结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、非洲分枝杆菌。MTC的细菌呈杆状，菌体大小0.6 μm×(1 μm～4 μm)，抗酸染色阳性，革兰氏染色阳性。生长缓慢，约10 h繁殖一代，据接种量的多少，10 d～30 d肉眼可见菌落生长。罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基上的菌落粗糙、致密，呈颗粒、结节、或菜花样，乳白或米色，不透明。 5 生物安全措施 根据WHO《结核病实验室生物安全手册》与GB 19489和《人间传染的病原微生物名录》的要求，结核分枝杆菌复合群相关检测鉴定材料的生物安全要求如下： ——样本处理与检测应于生物安全二级（BSL-2）实验室，在IIA级或以上级别生物安全柜内进行； ——大量活菌操作，如培养物鉴定，药敏检测等，应在生物安全三级（BSL-3）实验室或结核病防护实验室内的生物安全柜中进行。结核病防护实验室，是指在生物安全二级实验室基础上，实验区域与实验室外部由缓冲区域物理隔离，实验区域控制为单向气流； ——MTC的细菌培养物运输包装分类为A类，UN编号为UN2814； ——操作人员佩戴医用N95口罩，穿着一次性防护服，戴一次性医用橡胶手套，更换防水工作鞋； ——操作人员需要每年进行胸部X光检查、血清HIV检查。

结核分枝杆菌感染

3.结核分枝杆菌感染 3-1,痰结核菌检查阳性 肺阴菌结核的诊断：3次痰涂片及一次培养阴性的肺结核 患者连续三周以上的咳嗽，咳痰，若同时痰中带有血丝，就因想到肺结核病。 包括疑似病例，确诊病例，肺阴菌结核的诊断。 （1）典型肺结核临床症状和胸部X线表现； （2）抗结核治疗有效； （3）临床可排除其他非结核性肺部疾患； （4）PPD(5IU)强阳性，血清抗结核抗体阳性； （5）痰结核菌PCR+探针检查阳性； （6）肺外组织病理证实结核病变； （7）BALF检出抗酸分枝杆菌； （8）支气管或肺部组织病理证实结核病变。（不用写进PPT） 3-2 (1)全身症状表现为午后低热、乏力、食欲减退、消瘦、盗汗等。若肺部病灶进展播散，常呈不规则高热。妇女可有月经失调或闭经。 (2)呼吸系统症状 咳嗽咳痰：通常为干咳或带少量粘液痰，继发感染时，痰呈粘液脓性。 咳血：约1/3患者不同程度咯血，中等程度咯血，多为小血管损伤或空洞血管瘤破裂。咯血后常有低热。大咯血时可发生失血性休克;偶因血块阻塞大气道引起窒息。此时患者极度烦躁、心情紧张、挣扎坐起、胸闷气促、发绀，应立即进行抢救。 气急：慢性重症肺结核时，呼吸功能减退，常出现渐进性呼吸困难，甚至缺氧发绀。若并发气胸或大量胸腔积液，其呼吸困难症状尤为严重。 胸痛：固定性针刺胸痛，随呼吸和咳嗽加重，侧卧位症状减轻，常是胸膜受累缘故；当炎症波及壁层胸膜，可有不剧烈的胸壁刺痛。可放射至肩部或上腹部。 3-3肺结核的特征性病理改变包括肉芽肿和结核结节，病变包括渗出性病变出现浆液性和纤维素性炎症，形成病灶，导致咳嗽咳痰；增生性病灶形成肉芽肿，可发生毛细血管破裂，出现不同程度的咯血症状；当机体出现坏死性病变时，结核

结核性胸膜炎的护理查房

结核性胸膜炎的护理查房 一、定义 结核性胸膜炎是由结核菌及其代谢产物进入高度过敏状态的机体胸膜腔而引起的胸膜炎症。是最为常见的胸膜炎。 结核性胸膜炎的病原是结核分枝杆菌（简称结核菌）。它的发生与两个重要因素有关，即结核菌及其代谢产物对胸膜的刺激和机体敏感性增强。当机体处于高度变态反应时，结核菌及代谢产物侵入胸膜，则引起渗出性胸膜炎，当机体对结核菌过敏反应较低，则只形成局限性干性胸膜炎。少数病人由干性胸膜炎进展为渗出性胸膜炎。 二、临床表现 结核性胸膜炎包括干性胸膜炎、渗出性胸膜炎和结核性脓胸，其临床表现各异。 ㈠干性胸膜炎主要症状为胸痛，为剧烈针刺样痛，深呼吸及咳嗽时更甚，多发生腋侧下胸部。少数病人有轻中度发热、干咳及其他结核毒性症状。体征为患侧呼吸运动受限，呼吸音减低和闻及胸膜摩擦音。 ㈡渗出性胸膜炎临床症状因发病部位、积液量不等，有较大差异。常急性起病，亦可缓发。 ⒈结核中毒症状80%患者有发热，多为中度热，常伴有乏力、纳差、盗汗等症状。 ⒉胸痛与病程的发展阶段及部位有很大关系，常见于疾病初期及病程后期、呈针刺样 或隐痛。 ⒊咳嗽多数为阵发性刺激性干咳。 ⒋大量积液可出现气急、呼吸困难。 积液体征随胸液多寡而异，胸液量较多时，患侧胸廓饱满，呼吸运动减弱、叩诊浊音，听诊呼吸音降低或消失。大量胸腔积液气管移向健侧。 ㈢结核性脓胸一般起病缓慢，症状轻微，多数有结核中毒症状。胸膜下空洞突然破裂，严重感染胸膜，起病急剧，全身中毒症状明显，可出现高热、剧烈胸痛、呼吸困难。若伴有支气管胸膜瘘，可有剧烈刺激性咳嗽，常由于继发细菌感染加重病情。体征大致与渗出性胸膜炎相似。慢性者胸廓塌陷，肋间隙变窄，呼吸音减低，纵隔移向患侧，常伴有杵状指（趾）。 三、病例分析 基本资料 姓名：孙曼性别：女年龄：21岁床号：53 入院日期：2012年9月26日 入院诊断：胸腔积液原因待查：结核性？类肺炎性？ 主诉：胸疼一周，发热伴气促2天 现病史：患者于一周前出现胸痛，为右侧季肋区闷胀样不适及胀痛感，于2天前出现发热，最高体温达39.2℃，并有咳嗽、干咳为主，感轻度胸闷、气促。 查体：T37.7 P88 R20 BP115/70 神志清，精神可，右下肢呼吸音低，右肺叩诊浊音。 辅助检查：血常规WBC7.7g/l N85.6% HB136g/l PLT364g/l CRP45mg/l 胸腔B 超：右侧胸腔积液胸片：支气管炎，右侧胸腔积液血气分析：PH7046 PCO232mmhg PO2 81mmhg BE-0.4 HCO3 22.8 SPO2 97% 四、护理诊断