分光光度法原理

分光光度法



目录



?第一节 基本原理

?第二节 仪器结构

?第三节 显色与测量条件的选择

?第四节 723N型分光光度计操作维护

第一节 基本原理

?在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法,主要有: ?红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5?1000 ?m ,主要用于有机化合物结构鉴定。 ?紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200?400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。

?可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400?750 nm ，

主要用于有色物质的定量分析。

光的吸收定律

?1.朗伯—比耳定律

布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度成正比：A∝b

1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有成正比的关系：A∝ c

二者的结合称为朗伯—比耳定律：当一束平行的单色光通过均匀、非散射的稀溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。



朗伯—比耳定律

?朗伯—比耳定律

是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各种光度法的吸收测量。它不仅适用于可见光，也适用于紫外光和红外光；不仅适用于均匀非散射的液体，也适用于固体和气体。



朗伯—比耳定律，数学表达式

?其数学表达式为



?式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度

?b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位；

?c：溶液的摩尔浓度，单位mol/L；

?ε：摩尔吸光系数，单位L/mol/cm；

摩尔吸光系数ε的讨论



? 摩尔吸光系数ε在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时,该溶液在某一波长下的吸光度；



摩尔吸光系数ε的讨论

?（1）摩尔吸光系数是吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数；

?（2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，ε仅与吸收物质