实验四 细菌的革兰氏染色与芽孢染色

实验四细菌的革兰氏染色与芽孢染色

一、目的要求

1.学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。

2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。

二、实验材料

1.菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）大肠杆菌（E.coli）

2.试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液

3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。

三、实验原理

革染氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的。通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。

革染氏染色的基本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。经过此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革染氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革染氏阴性菌。大肠杆菌是标准的革染氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革染氏阳性菌。

革染氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。经结晶紫初染以后，所用的细菌都被染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革染氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革染氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。用蕃红复染时染上红色。

四、操作步骤

1.细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养约24h。

2.制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。

3.初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。

4.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。

5.脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载

玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色时，立即水洗。酒精的浓度、用量及涂片厚度都会影响脱色速度。脱色是革兰氏染色中最关键的一步。

6.复染：滴加番红液，染色2min，水洗。

7.用滤纸吸干，油镜镜检。

五、注意事项

为了保证革染氏染色结果的正确性，制片过程中要注意：要选用活跃生长的幼培养物作革染氏染色，涂片不宜过厚，火焰固定不已过热，脱色时间的控制。另外，可选用标准的革染氏阳性菌和革染氏阴性菌和未知菌一起混合涂片和染色。

六、实验内容

1.分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行革兰氏染色

2.对上述两种菌进行混合涂片，再进行革兰氏染色。

七、实验报告

1.图示所观察到的菌体细胞的形态与革兰氏染色结果；

2.为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄一般不能超过24小时？

3.在下表中依次填入革兰氏染色所用染料的名称，并填上革兰氏阳性和革兰氏阴性菌在每

步染色后菌体所呈的颜色。在不影响革兰氏反应的前提下，哪一步可被省略？

4.当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确保你的操作正确、结果可靠？

附录：细菌的芽孢染色

一、目的要求

学习芽孢染色的原理和方法

二、实验材料

1.菌种：枯草芽孢杆菌，肉汁斜面培养24h；

2.染料：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液

3.其他：显微镜、载玻片、接种环、香柏油、二甲苯等。

三、实验原理

芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、位置，芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的依据。由于芽孢壁厚、透性差、不易着色。当用结晶紫单染色时，菌体呈紫色，芽孢是无色透明。

芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚，透性低，着色、脱色均较困难，当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时，此染料可以进入菌体及芽孢使其着色，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。若再用番红复染，则菌体呈红色而芽孢呈绿色。

四、操作步骤

1.制备菌悬液加1~2滴水于小试管中，用接种环挑取2~3环菌苔于试管中，搅拌均匀，

制成浓的菌悬液。

2.染色加2~3滴孔雀绿于小试管中，并使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴的

烧杯中，加热染色15~20min。

3.涂片固定用接种环取试管底部菌液数环于干净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过

火焰3次温热固定。

4.脱色水洗，直至流出的水无绿色为止。

5.复染用蕃红染液染色2~3min，倾去染液并用滤纸吸干残液。

6.镜检干燥后用油镜观察，芽孢呈绿色，芽孢囊和营养细胞为红色。

注意：所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成芽孢为宜；取菌不宜太少。

细菌芽孢染色

姓名班级13级生命基地班学号同组者： 科目微生物学实验题目细菌芽胞染色组别3 【实验题目】 细菌芽孢染色 【实验目的】 1.学习并掌握芽孢染色法 2.了解芽孢的形态特征 【实验器材】 1、菌种： 枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物、梭状芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。 2、溶液和试剂： a) 5％孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、无菌水 b) 香柏油、二甲苯 3、仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、试管夹等 【实验原理】 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。是否产生芽孢，以及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。 与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚而致密，通透性低，不易着色，但是，芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时，菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍保留。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 【实验内容及步骤】 2、具体步骤： 1)洗片、干燥 取一块载玻片，用水浸湿，用手使用去污粉洗净玻片，竖立在一边自然干燥。干燥后在玻片的一面用记号笔做好标记。方便以后水洗染料，避免洗去细菌。 2)涂片 取一块载玻片，在上边用胶头滴管加半滴无菌水，用接种环无菌操作将沾有菌的接种环置于载玻片上的无菌水种涂抹，待看到微弱的浑浊即可；（注意取菌不要太多） 3)加热固定

实验2 细菌的芽孢染色和荚膜染色

实验二细菌的芽孢染色和荚膜染色 生物111班杨明轩1102040128 一、实验目的 1、学习并掌握细菌芽胞染色的原理和方法。 2、学习并掌握细菌荚膜染色的原理和方法。 二、实验原理 （一）细菌的芽孢染色 芽孢通常指某些细菌在生长后期于细胞内形成的一种圆形、椭圆形或圆柱形的、厚壁、折光性高、含水量极低而抗逆性极强的内生休眠体。 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈现出不同的颜色而加以区别。芽孢通常具有厚而致密的壁，透性低，不易着色和脱色，当用着色力强的弱碱性染色剂孔雀绿在加热条件下染色师，芽孢和菌体同时着色，进入菌体的染色剂可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。经对比度大的复染液番红染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，呈绿色；而菌体被复染剂染成红色，易于区别。 （二）细菌的荚膜染色 荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形。荚膜染色通常采用衬托染色法或称负染法，即将菌体和背景分别着色，从而把不着色且透明的荚膜给衬托出来。 三、实验材料 1、菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26~28℃培养2~3天； 钾细菌（Bacillus mucilaginosus），点接于阿须贝平板上，26~28℃培养3天。 2、染色剂：孔雀绿染液、番红染液，石炭酸复红、墨汁（已过滤） 3、其他：载玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具 四、实验方法 （一）细菌的芽孢染色 1、制片：将枯草芽孢杆菌涂片、干燥固定。 2、染色：用吸水纸块盖住涂片处，然后在吸水纸张滴加孔雀绿染液至饱和。加热使染液微冒蒸汽后，保持5min。加热时应不断添加染液，不要使吸水纸干燥。 3、水洗：待玻片冷却后，用镊子除去吸水纸，再用水平轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 4、复染：用番红染液染色2~3min。 5、镜检：涂片干燥后，置油镜下观察。 6、清理：整理桌面，将显微镜恢复原样，将废片放入废片缸内。 （二）细菌的荚膜染色 1、制片：在洁净的载玻片的中央滴加1滴无菌水，取少许钾细菌制成涂片，在空气中风干。 2、染色：用石炭酸复红在涂片处染色4~5min，水洗，稍风干。 3、滴加一滴墨汁在载玻片的一侧，左手持此玻片，右手拿一干净玻片作推片用。将推片边缘凭证的一端与混合菌液成30°胶接触，顺势将菌液推开（不要太用力），使其涂成一薄层，并在空气中充分自然干燥。 4、镜检：玻片自然干燥后，置油镜下观察。

实验四 细菌的芽孢染色

实验四细菌的芽孢染色 生物112 周泓兆1102040226 一、目的 学习并掌握细菌芽孢染色的原理及方法。 二、原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色而加以区别。芽孢具有厚而致密的壁，因此想要将芽孢染色需要在较高的温度（煮沸）的条件下，用强染色剂（孔雀绿）将菌体和芽孢同时染色。而同时，实验利用了孔雀绿可经水洗脱色的特点，通过水洗将菌体的着色洗脱，而芽孢因具有致密的壁而不会被水将染色洗脱。接下来用番红染色，将菌体染为红色，而在常温下品红无法将芽孢着色，因此在显微镜下形成了芽孢为绿色而菌体为红色的现象。而实验中如果要观察芽孢在菌体中的着生位置，一定要根据各菌的特点来确定培养时间。 三、材料 1.菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26℃-28℃，培养2-3天。 2.染色剂：孔雀绿染液，番红染液。 3.其它：载玻片，无菌水，洗瓶，酒精棉球，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，接种环，酒精灯，镊子。 四、实验步骤 1.制片：将枯草芽孢杆菌涂片并干燥固定。 2.染色：撕取一块比载玻片略窄的吸水纸，覆盖在涂片出，在吸水纸上滴加孔雀绿直至饱和。用酒精灯加热是染液保持微沸，其间不断添加适量孔雀绿染液，保持吸水纸湿润，染色5min。 3.水洗：待玻片冷却后，用镊子出去吸水纸，再用水瓶轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 4.复染：用番红染液染色1-2分钟，水洗。 5.镜检：涂片干燥后，滴加香柏油置于油镜下观察。 6.清理：用二甲苯与干净擦镜纸擦净镜头，将涂片放入废片缸，将固体垃圾放入垃圾桶，液体垃圾倒入废液缸，无腐蚀性毒性液体可倒入下水道，用酒精棉球擦洗器材将溅出的染料擦除。 五、结果与讨论： 这个实验成功率很高，主要原因是步骤简单，染色效果明显而且影响因素少，洗脱时间对结果影响要比革兰氏染色中酒精脱色时间的影响小很多。最后结果的小遗憾是孔雀绿绿色的着色较浅，我觉得可以通过适当增加涂片的菌体密度和增加染液煮沸时间，可能会获得更好地效果。 六、思考题： 1.为什么在孔雀绿加热染色时，要待玻片冷却后才能冲洗？ 答：我推测的原因如下：①菌体在突然遇冷之后会变形甚至破裂，影响观察。②在沸腾的情况下染料能更方便地进入芽孢，那么高温下染料也应该更容易从芽孢中被洗出，所以等到冷却使得孔雀绿尽可能留在芽孢内。③防止载玻片在高温下突然遇冷而炸裂。

实验五 细菌芽孢染色法

细菌的芽孢染色法 09级生命基地林剑锋（200900140065） 周三下午第四排 摘要 细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置，芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。通过芽孢染色和复染色，使细菌的菌体和芽孢呈现不同颜色，在显微镜下，我们就能够跟容易观察到芽孢，并对其特征进行识别，从而达到区分菌种甚至鉴定菌种的目的。 关键词 芽孢Schaeffer-Fulton氏染色法梭状芽孢 前言 芽孢又叫内生孢子（endospore），是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。由于芽孢壁厚、透性低上不易着色，当用石炭酸，番红，结晶紫等进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颇色，很难观察。 1．实验材料与方法 1.1 实验材料 枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌（Clostridium Prazmowski），5%孔雀绿，0.5%番红，酒精灯，酒精，木夹，香柏油，二甲苯。 1.2实验方法 1.2.1 ．制片 按常规涂片、下燥、固定。 1.2.2 ．染色 加数滴5%孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸汽并开始计时。维持5min。加热过程中及时补充染液。切勿让涂片干涸。 1.2.3 ．水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，直至流出的水无色为止。 1.2.4 ．复染 用0.5%番红染液复染2min 。 1.2.5 水洗 用缓流水洗后，吸干。 1.2.6 ．镜检 先低倍镜，再高倍镜，最后油镜观察。

2．实验结果与分析 2.1 实验结果 芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色。枯草芽孢杆菌芽孢呈椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，菌体基本无大变化；梭状芽孢杆菌芽胞呈圆形，比菌体粗，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。 图一枯草芽孢杆菌芽孢染色（x~400）图二梭状芽孢杆菌芽孢染色（x~400） 2.2 实验分析 由于芽孢壁厚、透性低上不易着色，当用番红、结晶紫等进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽孢呈淡红或淡蓝紫色的圈。但是用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条件下染色，使染料不仅进人菌体也可进人芽孢内，进人菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经染色便难以被水洗脱。当用对比度大的复染色剂番红染色后，芽孢仍保留初染剂孔雀绿的绿色，而菌体和芽孢囊被染成复染色剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 3．实验小结 此次芽孢染色实验，首先，收获到的当然是芽孢的染色方法。其次，对芽孢有了一个系统的认识。芽孢不仅仅是生物的休眠体而已。芽孢的各种特性还是进行生物物种鉴定和分析的重要依据。对细菌的芽孢的描述方法也有了一定的了解。 参考文献 【1】詹火元生物学通报1995年底30卷第2期p34 【2】沈萍，陈向东.微生物学.第二版.北京:高等教育出版社，2006 【3】沈萍，陈向东.微生物学实验.第4 版.北京:高等教育出版社，2007 【4】Madigan, MT; Martinko J, Parker J (2004). Brock Biology of Microorganisms (10th ed.). Lippincott Williams & Wilkins ISBN 0-13-066271-2.

细菌芽孢染色

微生物学实验报告 题目：细菌芽孢染色 姓名：学号：组别：年级班级： 同组者：时间： 【实验器材】 1．菌种：枯草芽孢杆菌。 2．染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液 3．仪器、材料：二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇、显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。 【实验目的】 1．学习并掌握细菌的芽胞染色法，初步了解芽孢杆菌的形态特征。 2．巩固显微操作技术及无菌操作技术。 【基本原理】 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子(endospore)，通常为圆形或椭圆形。是否产生芽孢及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，但是，芽孢一旦被着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿或石碳酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进如芽孢，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍然保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样可将两者区别开来。 【操作步骤】 1．制片。 按常规方法涂片、干燥及固定。 2．加热染色。 向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热染液冒蒸气计时并维持5min，加热时注意补充染液，切勿让涂片干涸。3．脱色。 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。 4．复染。 用0.5%番红水溶液复染2min。 5．水洗。 用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。 6．镜检。 将载玻片晾干后油镜镜检。 【实验结果】

实验四 细菌的革兰氏染色与芽孢染色

实验四细菌的革兰氏染色与芽孢染色 一、目的要求 1.学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验材料 1.菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）大肠杆菌（E.coli） 2.试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。 三、实验原理 革染氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的。通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。 革染氏染色的基本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。经过此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革染氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革染氏阴性菌。大肠杆菌是标准的革染氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革染氏阳性菌。 革染氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。经结晶紫初染以后，所用的细菌都被染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革染氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革染氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。用蕃红复染时染上红色。 四、操作步骤 1.细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养约24h。 2.制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 3.初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。 4.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 5.脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载 玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色时，立即水洗。酒精的浓度、用量及涂片厚度都会影响脱色速度。脱色是革兰氏染色中最关键的一步。 6.复染：滴加番红液，染色2min，水洗。 7.用滤纸吸干，油镜镜检。 五、注意事项 为了保证革染氏染色结果的正确性，制片过程中要注意：要选用活跃生长的幼培养物作革染氏染色，涂片不宜过厚，火焰固定不已过热，脱色时间的控制。另外，可选用标准的革染氏阳性菌和革染氏阴性菌和未知菌一起混合涂片和染色。 六、实验内容 1.分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行革兰氏染色 2.对上述两种菌进行混合涂片，再进行革兰氏染色。 七、实验报告

实验四.细菌芽孢染色

实验四.细菌芽孢染色 一. 目的要求： 目的：掌握细菌芽孢染色方法 内容：１．学习并掌握芽孢染色法 ２．初步了解芽孢杆菌的形态特征 二. 基本原理： 芽孢壁厚，透性低，着色脱色较困难。因此先用着色力较强的孔雀绿，在加热的条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体内的染料经水洗脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂（如沙黄、番红、碱性复红）染色后，芽孢仍保留初染色剂的颜色，此时菌体被染成红色，芽孢呈绿色。 三. 器材 1.菌种：培养了16-20小时左右的枯草杆菌（37℃） 2.染色剂：5%的孔雀绿水溶液.0.5%番红水溶液石炭酸复红染液 0.05%碱性复红蒸馏水 3.仪器或其他用品：小试管.滴管.烧杯.试管架.载玻片.木夹子.显微镜等 二甲苯.香柏油 四. 操作步骤： 一）方法1： 1.取37℃培养了18-24小时的枯草杆菌作涂片，并干燥固定。 2.于载玻片上滴入3-5滴5%孔雀绿水溶液 3.用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计时约5min ,加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料 4.倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 5.用0.5%的番红溶液（或0.5%沙黄水溶液或0.05%碱性复红）复染2分钟，水洗. 6.制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体呈红色。 二）方法2： 1.加1-2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环培养16—20小时的枯草杆菌于试管中，充分混匀打散，制成弄的菌悬液。 2.加5%的孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。 3.将此试管浸于沸水浴中，加热20-30min . 4.用接种环从试管底部挑取数环欲洁净的载玻片上，并涂布均匀，将玻片通过微火3次固定。 5.水洗至流出的水中无孔雀绿颜色为止。 6.加复染液染2-3分钟，水洗。 7.干燥后用油镜观察，芽孢绿色，菌体红色。 五.实验报告： 1.绘图：枯草杆菌的芽孢形态，芽孢的着色位置。 2.芽孢染色的操作要点？ 资料介绍： 1、菌种培养：37℃、18-24小时为宜。 2、染色剂的配制： A.5%的孔雀绿水溶液 孔雀绿 5g 蒸馏水 100ml

实验 二 细菌的芽孢染色

实验二细菌的芽孢染色, 鞭毛染色, 荚膜染色生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节 一、实验目的 1 学习细菌的芽孢染色法 2 学习细菌的鞭毛染色法 3 学习细菌的荚膜染色法 二、实验原理 1 芽孢染色的原理: 细菌的芽孢具有厚而致密的壁。透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则；除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色。当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 2 鞭毛染色的原理: 细菌的鞭毛极细，直径一般为0.01～0.02μm，只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色的方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理、让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 3 荚膜染色的原理: 荚膜是细菌分泌到菌体周围的一层黏液状物质,通常是多糖和多肽类物质. 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定。以免荚膜皱缩变形。 三、实验器材 1菌种：培养24h的枯草杆菌（Bacillcus subtilis）、培养12-16h的变形杆菌斜面,培养3d的固氮菌。 2染色液和试剂：5％孔雀绿水溶液、番红水溶液, 鞭毛染色液A液与B液，蒸馏水，香柏油，显微镜擦拭液,绘图墨水或黑色素溶液． 3器材：酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。 四、实验方法 （一）芽孢染色： 1涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 2晾干固定；待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过3次。 3 染色： A 加染色液。加5％孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片用试 管夹夹住，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽对开始计算时问，约维持４～５min。加热过程中要随时交替添加染色液和蒸馏水，切勿让标本干涸（加热时温度不能太高）。 B 水洗：待玻片冷却后，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。

实验三 细菌芽胞染色

实验三细菌芽胞染色 一．实验目的 1．学习并掌握细菌的芽孢染色法。 2．了解并观察细菌芽孢的结构和形态。 二．实验原理 1.芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子（endospore），通常为圆形或椭圆形。是否产生芽孢及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。 2.芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色而便于区别。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，但是，芽孢一旦着色就难以被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿或石炭酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍然保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样可将两者区别开来。 三．实验器材 1．菌种： 枯草芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌 2．溶液和试剂： 5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇 3．器材： 显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸 四．实验步骤 1．制片 取一块载玻片，在中央滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌（梭状芽孢杆菌)斜面上挑数环菌置于载玻片液滴上，小液滴呈混浊状即可。并按常规方法干燥、固定（每隔几秒在酒精灯火焰上过一遍）。 2．加热染色 向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽（此时开始计时）并维持5min，加热时注意补充染液，切勿让涂片干涸。3．脱色 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。 4．复染 用0.5%的番红水溶液复染2min。 5．水洗 用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。 6．镜检

芽孢染色

细菌的芽孢染色和形态观察 胡雪芳 201300261033 【实验目的】 1.掌握芽孢染色方法，观察芽孢形态特征。 2.了解芽孢的性质与染色的关系。 3.巩固显微镜的使用和无菌操作技术。 【实验原理】 1.芽孢 1.1 芽孢性质 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子（endospore），通常为圆形和椭圆形。是否产生芽孢以及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。 与正常菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，一般染色法只能使菌体染色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状），但是，芽孢一旦着色就很难被脱色。 芽孢染色法根据芽孢特点设计，除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色。当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。

1.2 芽孢的结构 芽孢的结构如下： 图1. 细菌芽孢构造模式图 芽孢囊：是产生芽孢菌的营养细胞外壳 孢外壁：主要含脂蛋白，通透性差（有的芽孢无此层） 产芽孢细菌芽孢衣：主要含疏水性角蛋白，抗酶解、抗药物，多价 阳离子难通过 芽孢皮层：主要含芽孢肽聚糖及DPA-Ca，体积大，渗透压高 芽孢壁：含肽聚糖，可发展为新细胞的壁 核心芽孢质膜：含磷脂、蛋白质，可发展成新细胞的壁 芽孢质：含DPA-Ca、核糖体、RNA和酶类 核区：含DNA 2.芽孢染色的染料——孔雀绿 孔雀绿是一种弱碱性染料，芽孢染色主要依赖于对芽孢结构特征的染色和利用——壁厚，通透性差等。通过依靠加热的方法促进该染料穿过厚壁进入了芽孢，然后利用壁厚，在水洗脱时又难以出来的特征，使芽孢保有初染染料。而该染料与细胞的结合能力较弱，被水洗后，结合了着色力强的复染染料。

实验二细菌的芽孢染色, 鞭毛染色, 荚膜染色

实验二细菌的芽孢染色, 鞭毛染色, 荚膜染色 一实验目的 1 学习细菌的芽孢染色法 2 学习细菌的鞭毛染色法 3 学习细菌的荚膜染色法 二实验原理 1 芽孢染色的原理: 细菌的芽孢具有厚而致密的壁。透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则；除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色。当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 2 鞭毛染色的原理: 细菌的鞭毛极细，直径一般为0.01～0.02μm，只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色的方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理、让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 3 荚膜染色的原理: 荚膜是细菌分泌到菌体周围的一层黏液状物质,通常是多糖和多肽类物质. 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定。以免荚膜皱缩变形。 三实验器材 1 菌种：培养24h的枯草杆菌（Bacillcus subtilis）、培养12-16h的变形杆菌斜面,培养3d 的固氮菌。

2 染色液和试剂：5％孔雀绿水溶液、番红水溶液, 鞭毛染色液A液与B液，蒸馏水，香柏油，显微镜擦拭液,绘图墨水或黑色素溶液． 3 器材：酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。四实验方法 （一）芽孢染色： 1 涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 2 晾干固定；待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过3次。 3 染色： A 加染色液。加5％孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片用试管夹夹住，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽对开始计算时问，约维持４～５min。加热过程中要随时交替添加染色液和蒸馏水，切勿让标本干涸（加热时温度不能太高）。 B 水洗：待玻片冷却后，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。 C 复染：用番红液染色２－３min。 D 水洗、晾干或吸干。 4镜捡：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽孢和菌体的形态。 （二）鞭毛染色 １制片：吸取少量蒸馏水滴在洁净玻片的一端，无菌操作在斜面上取菌少许，在蒸馏水中轻沾，立即将玻片倾斜，使菌液缓慢地流向另一端。用吸水纸吸去多余的菌液。涂片放空气中自然干燥。 2染色： 1）滴加A液，染4～6min。 2）用蒸馏水充分洗净A液。 3）用B液冲去残水，再加B液于玻片上，在酒精灯火焰上加热至冒气，约维持0.5～lmin (加热时应随时补充蒸发掉的染料，不可使玻片出现干涸)。 4) 用蒸馏水洗，自然干燥。 3 镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查。 （三）荚膜染色： 1 制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。 2 推片：取一清洁载玻片一端接触混合液，以30°角进行推片。 3 晾干：在空气中自然晾干。 4镜检：先用低倍镜、再用高倍镜、油镜观察。

微生物学实验报告

微生物学实验报告（格式标准） (生命科学专业) 教师：黎勇

目录索引 实验一油镜的使用和细菌的简单染色法3 实验二细菌的革氏染色与芽孢染色5 实验三常用培养基的配制7 实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8 实验五、微生物大小的测定与显微计数10 实验六环境中微生物的检测和分离纯化11 实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12 实验八（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化13 课程名称：微生物学实验班级：化生系生命科学本科 实验日期：指导教师：黎勇 实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的

运动性的基本方法。 〔基本原理〕 1. N·A=n·sinα 2. D=λ/ 3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。 4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。 〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的. 菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。 〔方法步骤〕： （一）油镜的使用 镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）仔细观察并绘图 取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。 （二）细菌的简单染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察 （三）细菌运动性的观察取洁净盖玻片，四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察 〔结果分析〕 1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。（描绘时按视野实际大小5－10倍绘制）

实验五 细菌芽孢染色

实验五——细菌芽孢染色 山东大学生命科学学院09级四班 张行润 200900140177 摘要 细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于一个原则：除了用着色强的染料外，还须要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 关键词 芽孢（gemma of a fungus）芽孢染色法（Spore staining）复染（counterstain）前言 细菌的芽孢的某些细菌的特殊结构。芽孢是某些细菌生长到一定阶段在体内形成的一个圆形或椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴定细菌的重要依据。在一般实验室中通常用芽孢染色法来观察其形态。此外，由于芽孢具有很强的抗性，因此在生产实践中都以是否有杀死抗性最强的芽孢来评定高温灭菌及某些化学杀菌剂的效果。 一、实验目的 1.学习并掌握芽孢染色法 2.了解芽孢杆菌的形态特征 3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术 二、实验原理 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，液被称为内生孢子，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚、透性低而不易着色，但是芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力较强的染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。再用对比度大的复染剂（如番红液）染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样就可以将两者区别开来。 三、实验器材

芽孢染色液(Moeller法)

芽孢染色液(Moeller 法) 简介： 细菌是否有芽孢以及芽孢的形状和位置都是细菌的重要特征，细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁结构复杂、致密、通透性低，着色和脱色都比营养细胞困难。芽孢有很强的抗热和抗化学物质的特性，当采用碱性染料并加热或延长染色时间时，使菌体和芽孢都能着色，再用蒸馏水冲洗脱去菌体颜色，但芽孢的颜色仍然可以保留，可以在显微镜下明显区分芽孢和营养体的形态。 Leagene 芽孢染色液(Moeller 法)主要由石炭酸染色液、Moeller 亚甲蓝染色液、Moeller 脱色液组成，芽孢会被染成红色，菌体呈红色，操作简单，结果判断更可靠。但应注意，观察芽孢应在成熟期，但也不能过久，否则只能看到芽孢，而营养体已经消失。该染色液仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。 组成： 自备材料： 1、 酒精灯 2、 载玻片 3、 蒸馏水 4、 接种环 5、 显微镜 操作步骤(仅供参考)： 1、 在洁净无油脂的载玻片上滴加1滴蒸馏水。 2、 用接种环挑取少许巨大芽孢杆菌斜面的菌体，与蒸馏水混合。 3、 制成涂片，自然干燥。 4、 在涂液处滴加石炭酸染色液，使细菌分布均匀，并用弱火加热，使染色液冒蒸汽，冷后 水洗。 5、 Moeller 脱色液脱色 编号 名称 DM0028 3×20ml DM0028 3×50ml Storage 试剂(A): 石炭酸染色液 20ml 50ml RT 避光 试剂(B): Moeller 脱色液 50ml 100ml RT 试剂(C): Moeller 亚甲蓝染色液 20ml 50ml RT 避光 使用说明书 1份

6、用水轻轻冲洗。 7、用Moeller亚甲蓝染色液复染，用水冲洗。 8、镜检：干燥后镜检，观察芽孢的形状、大小，在菌体中的位置以及是否使菌体胀大。 染色结果： 芽孢红色 菌体蓝色 附注：镜检应注意观察： 形态圆形或卵圆形 位置中央，末端，次末端 大小菌体细胞是否膨大 注意事项： 1、玻片应洁净，无油污。 2、芽孢形成于生长发育期，观察芽孢应在成熟期，但也不能过久，否则只能看到芽孢，而 营养体已经消失。 3、染色过程应小心操作，防止菌脱落。 4、固定时不宜用高热火焰固定。 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 相关： 编号名称 CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DC0032 Masson三色染色液 DC0041 天狼星红染色液 DG0005 糖原PAS染色液 DM0002 姬姆萨染色液(1:9) PS0013 RIPA裂解液(强) PW0053 Western抗体洗脱液(碱性) TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)

细菌的芽孢染色

细菌的芽孢染色 姓名：俞华军班级：09生科三班学号：200900140157 日期：2010/10/29 组别：四同组者：谢英健余振洋岳永胜张刚刚 一．实验目的 1．学习并掌握细菌的芽孢染色法。 2．了解并观察细菌芽孢的结构和形态。 二．实验原理 芽胞又称内生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形状、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。 芽胞壁厚，透性低，不易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色（芽胞呈无色透明状），而一旦染上色后又难以脱色。 芽胞染色法：根据芽胞特点设计，除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。 三．实验器材 1．菌种：枯草芽孢杆菌（芽孢位于菌体中央）、梭状芽孢杆菌（中部膨大）。 2．溶液和试剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、二甲苯、香柏油、蒸 馏水、95%乙醇。 3．器材：显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。 四．实验步骤 1．制片 取一块载玻片，在中央滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆 菌（梭状芽孢杆菌)斜面上挑数环菌置于载玻片液滴上，小液滴呈混浊状 即可。并按常规方法干燥、固定（每隔几秒在酒精灯火焰上过一遍）。 2．加热染色 向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在 微火上加热至染液冒蒸汽（此时开始计时）并维持5min，加热时注意补 充染液，切勿让涂片干涸。 3．脱色 带玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。 4．复染 用0.5%的番红水溶液复染1.5min。 5．水洗 用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。 6．镜检 带载玻片自然干燥后（可在酒精灯火焰上每隔几秒过一遍）油镜镜检， 观察芽孢的形态并绘图。

细菌芽孢染色及酵母菌的观察

细菌芽孢染色及酵母菌的观察 一、实验目的 1、学习芽孢染色法，了解芽孢的形态特征。 2、观察酵母菌的形态及出芽方式，区分酵母菌的死活细胞。 3、学习酵母子囊孢子的观察方法。 二、实验原理 1、用美兰浸片法染酵母菌的原理：由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。 2、孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。 3、芽孢染色原理：芽孢壁厚、透性差、不易着色，无法用单染色的方法使其着色用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，当用对比度大的复染色剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，是芽孢和菌体更易区分 三、菌种 芽孢：枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌 酵母：酿酒酵母（产孢培养基） 四、实验步骤 1、观察枯草芽孢杆菌及梭状芽孢杆菌的形态特征 （1）涂片：用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上，涂成薄膜 (2) 加热干燥固定

（3）木夹夹住，孔雀绿覆盖，微火加热，有蒸汽时开始计时5分钟，期间可用孔雀绿补染 （4）冷却水洗 （5）复染：用番红复染2分钟 （6）镜检：干燥后用油镜观察 2、观察酵母菌 （1）美兰浸片（观察其出芽的形式以及辨别酵母菌的死活） ①在载玻片中央加一滴美兰试剂 ②用接种环接种酿酒酵母 ③盖上盖玻片 ④放置三分钟的时候用40倍镜观察 ⑤放置三十分钟的时候再观察一次 （2）酵母菌子囊的观察 ①涂片②开始涂片③用孔雀绿覆盖一到一分钟半④水洗⑤用番红染色30秒到一分钟⑥水洗干燥镜检 五、实验结果 1、枯草芽孢杆菌及梭状芽孢杆菌的形态结构 A:梭状芽孢杆菌 B：枯草芽孢杆菌 2、酵母菌的出芽方式及酵母菌死活细胞的分辨

芽孢染色及酵母菌的观察

芽孢染色及酵母菌的观察 作者：喻曙光学号：。。。。。。。。。。。。生院10级生命基地班组别：生北308周五第四组同组者：。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 实验目的 1、学习芽孢染色法，了解芽孢的形态特征。 2、观察酵母菌的形态及出芽方式，区分死酵母及活酵母细胞。 3、学习酵母子囊孢子的观察方法。 实验材料 菌种枯草芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,梭状芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，酿酒酵母。 溶液和试剂孔雀绿水溶液美蓝染液番红染液95%乙醇。 仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，载玻片夹子，滴管，无菌水，显微镜，接种环等。 实验原理 （一）细菌芽孢的染色及观察 简单染色法适用于一般的微生物菌体染色，而某些微生物具有一些特殊的结构，如芽孢、荚膜和鞭毛，对它们进行观察前需要进行针对性染色。 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。是否产生芽孢及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色而便于区别。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，但是，芽孢一旦着色就难以被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿或石炭酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍然保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样可将两

实验报告2-细菌的荚膜染色、芽孢染色及其运动性观察实验报告

细菌的荚膜染色、芽孢染色及其运动性观察 实验报告 马子午 生命科学学院食品科学与工程专业 14101班 02号 1.引言 1.1实验目的 学习荚膜染色技术，观察和分辨细菌的荚膜形态，进一步理解细菌细胞的特殊结构；了解细菌芽孢染色的原理意义，掌握芽孢染色的方法。学习水浸片的制作方法，观察细菌的运动。 1.2实验原理 芽孢染色法：芽孢具有厚而致密的壁，通透性低，对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。因此，当用一般染色方法染色时，只能使菌体着色，芽孢不易着色（芽孢呈透明）或仅显很淡的颜色。威力使芽孢着色便于观察，需采用特殊染色法——芽孢染色法。先用一弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件在进行长时间染色，此染料不仅可以进入菌体，也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经睡洗脱掉，而进入芽孢的染料则难以透出。若再用复染液（如番红染液）或衬托染液（如黑色素液）处理，芽孢和菌体就呈现不同的颜色，借此将芽孢与菌体区别开。 荚膜染色法：荚膜的主要成分是多糖，多糖与染料亲和力差，不易着色，但荚膜通透性较好，某些染料可通过荚膜使菌体着色，正因如此，染色后呈浅色或无色的菌体就形成了一个明显的色差，荚膜染色常采用负染法，即将背景染成淡蓝色，此法使菌体和背景显色以衬托无色的荚膜。 细菌的运动性观察：细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的主要特征之一，因鞭毛较细，在普通光学显微镜下不易观察，但有鞭毛的细菌在液体中能借助鞭毛的旋转和摆动使菌体能定向的运动，可以借此判断细菌是否有鞭毛。 2.材料与方法 2.1材料与试剂 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），孔雀绿，番红染液，无菌水，6%的葡萄糖，胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus），黑色素液，甲醇，甲基紫染液，香柏油，二甲苯。 2.2仪器与设备 显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环，镊子，试管，凹玻片，擦镜纸，吸水纸。 2.3方法与步骤 2.3.1细菌的芽孢染色法 取一支试管，滴一滴无菌水，用接种环取2~3环枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）充分混合成菌悬液，再滴加两滴孔雀绿，沸水浴15~20分钟后用接种环取3~5环菌悬液涂抹在载玻片上，自然干燥，固定，冷却后水洗至水流无色，用吸水纸吸干后滴加番红染液复染5

实验二 细菌的革兰氏染色与芽孢染色

实验二细菌的革兰氏染色与芽孢染色 一、目的要求 1.学习微生物涂片、染色的基本技术，学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验材料 1.菌种：金黄色葡萄球菌（StapHylococcus aureus）大肠杆菌（E.coli） 2.试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。 三、实验原理 革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的。通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。 革兰氏染色的基本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。经过此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革兰氏阴性菌。大肠杆菌是标准的革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革兰氏阳性菌。 革兰氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。经结晶紫初染以后，所有的细菌都被染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。用蕃红复染时染上红色。 四、操作步骤 基本流程：涂片→干燥→固定→染色（初染→媒染→脱色→复染）→镜检。 1.制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 常规涂片法： 取一洁净的载玻片，用特种笔在载玻片的左右两侧标上菌号，并在两端各滴一小滴蒸馏水，以无菌接种环分别挑取少量菌体涂片，干燥、固定。玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。“三区”涂片法： 在玻片的左、右端各加一滴蒸馏水，用无菌接种环挑取少量枯草芽孢杆菌与左边水滴充分混合成仅有枯草芽孢杆菌的区域，并将少量菌液延伸至玻片的中央。再用无菌的接种环调取少量大肠杆菌与右边的水滴充分混合成仅有大肠杆菌的区域，并将少量的大肠杆菌液延伸到玻片中央，与枯草芽孢杆菌相混合含有两种菌的混合区，干燥、固定。 要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。2.染色 （1）初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。 （2）媒染：，用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 （3）脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗，终止脱色，将载玻片上水甩净。 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性菌被