鸡抗猪大肠埃希氏菌卵黄抗体的研制与应用

2.2　试验操作程序

2.2.1　将包被用兔抗IBDV IgG加入平底96孔微量板,4℃冰箱过夜,取出甩干后加封闭液,37℃孵育30min,取出,洗涤,甩干。

2.2.2　加入PEG提纯的IBDV抗原,37℃孵育30min,取出,洗涤甩干,再加封闭液孵育,洗涤甩干后置4℃冰箱中备用。

2.2.3　检测样品时,向事先加好IBDV IgG的微量板中加入待测鸡血清,孵育一定时间后,取出,洗涤,甩干。

2.2.4　加入McAb2HRP,孵育后洗涤,甩干。

2.2.5　加入新配的底物H2O2,显色数分钟后观察,肉眼可以判断结果。也可加入1mol/L的H2SO4终止反应后,用酶联检测仪读取OD值。

2.3　样品检测　按上述方法和免疫琼脂扩散试验同步检测了45份鸡血清,EL ISA法检出阳性18份,免疫琼脂扩散试验检出阳性14份,两种方法的阳性符合率为93%。2.4　交叉反应试验结果　以IBDV抗原检测ND抗体及以IBD抗体检测NDV抗原,均为阴性。

3　讨论

3.1　本试验应用抗鸡IgG单克隆抗体建立了检测IBD抗体的EL ISA双抗体夹心法,由于采用了抗鸡IgG单抗酶结合物,提高了反应的特异性和敏感性,每一样品均经过多次试验,证明该方法重复性好,结果稳定。

3.2　用抗鸡IgG单抗2EL ISA双抗体夹心法检测45份鸡血清,有18份阳性,与免疫琼脂扩散试验的阳性符合率为93%,此法仅需60min左右即可判断结果,比免疫琼脂扩散试验快速、灵敏。

3.3　制备的IBDV IgG和酶标抗体在4℃保存半年仍很稳定。该方法的各项操作程序均可在室温下进行,用肉眼可判断结果,不需要培养箱、酶标检测仪等,为基层兽医工作者检测IBDV抗体提供了简便、快速、敏感、特异的方法。

鸡抗猪大肠埃希氏菌卵黄抗体的研制与应用

肖　驰　周淑兰　涂　志　罗建模　周兴举

(四川省养猪研究所　荣昌　402460)

肠毒素型大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)引起的腹泻是仔猪的一种常见病和多发病(Wilson, 1986),生产上对本病的防治除加强综合性预防措施外主要是使用大肠埃希氏菌多价苗或基因工程苗免疫接种妊娠母猪,以保护仔猪免受大肠埃希氏菌的侵袭。给仔猪口服超免疫血清也是生产上的常用方法,但其价格昂贵,易发生过敏反应,使实际应用受到限制。80年代以来,Bartz等开始探讨鸡蛋卵黄抗体对哺乳动物和人的病毒性疾病的防治效果,认为它是一种有前途的免疫球蛋白(Bartz等,1980;Hirage等,1990)。90年代以来,人们应用卵黄抗体预防治疗仔猪、犊牛和幼兔的大肠杆菌病,收到了满意的效果(Wiedemann等,1991;Tokoya2 ma等,1992;Ikemori等,1992;Farrelly等,1992)。在鸡蛋卵黄抗体的研制中,国内外所用方法不一致,国内一些学者采用大肠埃希氏菌疫苗免疫母鸡,国外则使用大肠埃希氏菌纤毛蛋白疫苗免疫。本试验旨在比较二者的临床效果,寻求一种更为实用的生产卵黄抗体的方法。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　试验动物　鸡为5月龄伊莎蛋用鸡,购于四川省畜牧兽医学院实验鸡场。猪为荣昌猪,出生后不让哺乳,移至实验动物房人工哺乳饲养,用于新生仔猪攻毒及治疗试验。

1.1.2　菌种　大肠埃希氏菌菌株代号为:C83912(K12∶K99), C83901(O8∶K87,K88ab),C83919(O101∶K30,F41∶h),C83917(987P),

中图分类号　S858.31 收稿日期　19970724购自中国兽药监察所。

1.1.3　培养基　TSA肉汤专用于培养K88抗原型菌,Minca 肉汤专用于培养K99和F41抗原型菌,Slanctz肉汤专用于培养987P抗原型菌。

1.2　方法

1.2.1　细菌培养及纤毛蛋白疫苗的制备　参照Ikemori等(1992)介绍的方法进行,即将C83912,C83901,C83919和C83917株大肠埃希氏菌分别接种于专用培养基,在37℃振荡培养18h, 12000g离心30min,取沉淀悬浮于p H7.0的50mmol/L PBS液中,60℃水浴30min,再经12000g离心30min,取上清液用直径0.45μm微孔过滤,除去菌体,即为粗制纤毛蛋白。然后以牛血清白蛋白为标准蛋白,用Folin酚法测蛋白浓度,最后加入福氏完全佐剂混匀,制成每1mL含1mg蛋白的纤毛蛋白疫苗。

1.2.2　大肠埃希氏菌疫苗制备　按上法培养该菌,12000g 离心洗涤2次,每次30min,收集沉淀,用生理盐水稀释并调节细菌浓度至2.5×109CFU/mL,加入体积分数0.5%甲醛, 37℃灭活24h,中间振荡3～5次,经无菌检验合格后加入200.0g/L Al(OH)3,用0.1g/L的硫柳汞防腐处理。

1.2.3　免疫方法

1.2.3.1　纤毛蛋白疫苗　使用5月龄伊莎蛋用鸡,剂量1 mL/只,对胸肌进行分点注射,首免后15和28d用同一剂量加强免疫,然后收集鸡蛋检测抗体效价。以后每2个月免疫1次,以维持抗体效价。

1.2.3.2　大肠埃希氏菌苗疫苗　免疫方法同上,如果效价不

12

中国兽医科技 1998年 第28卷 第4期

高,再用该苗静脉注射免疫1次。

1.2.4　卵黄抗体效价检测　采用凝集试验和甘露糖血凝抑制试验(MRHI)检测卵黄抗体效价。凝集试验用抗原制备是按疫苗制备方法培养细菌,离心收集细菌,悬浮于含体积分数0.5%甲醛的PBS(p H7.2)中,37℃过夜处理,调节含菌量,其光密度在629nm处为0.42。试验参照Ikemori等(1992)报道的方法进行。MRHI用于检测纤毛蛋白的抗体活性,试验参照曹澍泽等(1992)介绍的方法进行。

1.2.5　卵黄抗体的制备　免疫母鸡所产鸡蛋经新洁尔灭液清洗后晾干,福尔马林熏蒸消毒,无菌收集卵黄,置高速组织捣碎机中捣碎,按体积比1∶1加生理盐水混匀,再加入0.1g/L 硫柳汞防腐剂,分装。

1.2.6　新生仔猪攻毒及治疗试验　选择新生荣昌仔猪42头,随机分成2组,每组21头,再按卵黄抗体效价分为3个小组,即0(对照组),1∶625组和1∶1250组。试验仔猪采用人工哺乳方法饲养。仔猪出生后4h分别用C83901(1×1012CFU/头)和C83917(1×1010CFU/头)株大肠埃希氏菌攻毒,攻毒后腹泻仔猪口服抗K88或抗987P纤毛蛋白卵黄抗体4mL,连用3d,3次/d。观察发病仔猪症状,进行粪便评分。粪便评分按Sherman等(1983)的方法进行,即正常(粪便较硬而成形)记为0分;软粪(粪便软而成形)记为1分;中度腹泻(粪便呈黄色液体状)记为2分;重度腹泻(粪便呈水样喷射状)记为3分。粪便评分时注意区分胎粪。

1.2.7　临床预防试验　试验在本所猪场内进行,方法是给出生后12h内的仔猪口服卵黄抗体,每头每次3mL,连用2次,观察记录仔猪12日龄内发生腹泻的情况。

1.2.8　临床治疗试验　选择黄痢、白痢病猪进行治疗,同时设抗菌药物治疗对照组。卵黄抗体治疗剂量每次2mL,2次/ d,连用5次未愈者判为无效。

2　结果

2.1　卵黄抗体效价　母鸡经3次免疫后,其卵黄抗K88,K99, 987P和F41的抗体凝集效价纤毛蛋白疫苗组依次为1∶1024, 1∶1024,1∶1024和1∶256,细菌疫苗组依次为1∶1024,1∶1024, 1∶1024和1∶64;MR HI效价纤毛蛋白疫苗组为1∶640,1∶640, 1∶640和1∶160,细菌疫苗组为1∶20,1∶20,1∶20和1∶20以下。表明用两种疫苗免疫母鸡所获得的卵黄抗体凝集效价基本一致,但纤毛蛋白疫苗组的MRHI效价比细菌疫苗组高。

2.2　新生仔猪攻毒及治疗试验　结果见表1。

表1　新生仔猪攻毒和治疗试验结果

组别试验菌株抗体效价

腹泻仔猪数/总数(粪便评分)

1d3d5d

死亡率(%)

1C83901(K88)

07/7(3.00)4/4(3.00)1/1(3.00)85.7(6/7) 1∶6253/7(0.40)1)0/7(0)1)0/7(0)1)0(0/7)1) 1∶12501/7(0.14)1)0/7(0)1)0/7(0)1)0(0/7)1)

2C83917(987P)

07/7(3.00)2/4(1.50)2/2(3.00)71.4(5/7) 1∶6253/7(1.14)1)0/7(0.42)1)0/7(0)1)0(0/7)1) 1∶12501/7(0.43)1)0/7(0)1)0/7(0)1)0(0/7)1)

注:1)与卵黄抗体效价为0组相比,差异极显著(P<0.01)

攻毒后12h所有仔猪都发生不同程度的腹泻,用效价为1∶625,1∶1250的卵黄抗体治疗,所有仔猪全部恢复正常,而试验结束时对照组仔猪死亡率分别为85.7%(C83901)和71.4% (C83917)。高效价抗体治疗组仔猪粪便评分明显低于低效价抗体治疗组,即仔猪虽有一定程度的腹泻,但粪便较稠,前者仔猪粪便转为正常粪便要比后者快。

2.3　临床预防试验　结果见表2。从表中可看出,纤毛蛋白疫苗组仔猪7日龄内和12日龄内腹泻发生率分别为9.4%和16.1%,比对照组降低38.0和50.1个百分点;细菌疫苗组7日龄和12日龄内腹泻发生率为18.6%和27.9%,比对照组降低28.8和38.3个百分点。表明免疫卵黄抗体对仔猪大肠埃希氏菌性腹泻具有很好的预防效果,纤毛蛋白疫苗卵黄抗体的预防效果优于细菌疫苗卵黄抗体。

2.4　临床治疗试验　结果见表3。

表2　卵黄抗体对仔猪大肠埃希氏菌性腹泻的预防效果

组　别窝数仔猪头数

发病率(%)

7日龄内8～12日龄1～12日龄纤毛蛋白疫苗组201809.4(17/180)1) 6.7(12/180)1)16.1(29/180)1)细菌疫苗组2122618.6(42/226)1)9.3(21/226)1)27.9(63/226)1)对照组2021347.4(101/213)18.8(40/213)66.2(141/213) 注:1)与对照组相比,差异极显著(P<0.01)

22Chinese Journal of Veterinary Science and Technology 1998 Vol.28 No.4

表3　卵黄抗体治疗仔猪黄痢的效果

组别治疗数治愈数治愈率(%)

卵黄抗体13112897.711)

庆大霉素685377.94

土霉素574578.95

痢特灵332369.69

注:1)与其他3组相比,差异极显著(P<0.005)

从表3可见,卵黄抗体对仔猪黄痢的治愈率高于庆大霉素、土霉素和痢特灵,表明用卵黄抗体替代抗生素治疗仔猪黄痢效果更好,但卵黄抗体对仔猪白痢的疗效较差。

3　讨论与小结

研究结果表明,K88,K99,987P和F41纤毛因子及L T,STa 和STb内毒素在仔猪大肠埃希氏菌性腹泻中具有重要的致病作用(Drskov等,1983;Wilson,1986;Buddle等,1992),生产上采用含这4种纤毛抗原的多价疫苗免疫母猪,提高初乳中的抗体水平,以防制仔猪大肠埃希氏菌性腹泻,然而母乳中的抗体水平往往不足以保护仔猪,于是人们试用超免疫血清保护仔猪,但其价格昂贵,且易导致过敏反应,应用鸡蛋卵黄抗体则避免了这些缺点。

本研究临床预防试验是在具有几十年历史的老猪场进行,该场大肠埃希氏菌血清型多达30余种(邬捷,等,1991),给初生仔猪投服卵黄抗体后7日龄内仔猪腹泻率由47.4%降至9.4%和18.6%,8～12日龄仔猪腹泻率也比对照组降低了9.5和12.1个百分点,这表明给仔猪灌服鸡蛋卵黄抗体具有与初乳一样的作用。卵黄抗体具有这种被动免疫效果是由于它能象初乳中的抗体一样通过小肠上皮进入机体,同时鸡蛋卵黄抗体和抗原的亲和力远比哺乳动物抗体和同种抗原的亲和力强(Y okoyama等,1993;Ikemori等,1993)。

本试验中卵黄抗体对仔猪大肠埃希氏菌性腹泻的治愈率高达97.71%,略高于德国Wiedemann等(1991)报道的治疗效果,这可能与制剂制备工艺不同有关。卵黄抗体效价越高疗效越好,一般卵黄抗体的效价应在1∶625以上。

试验结果表明,卵黄抗体是一种有前途的新的免疫球蛋白制剂,在控制哺乳动物肠道感染性疾病上具有预防和治疗作用,鸡抗猪大肠埃希氏菌K88,K99,987P和F41卵黄抗体能有效的预防和治疗仔猪大肠埃希氏菌性腹泻。

致谢　本试验承蒙四川农业大学文心田教授指导和本所有关同志的支持。

两种阿维菌素制剂对小白鼠寄生虫的驱杀作用

刘　彤　朱蓓蕾

(中国农业大学动物医学院　北京　100094)

阿维菌素(Avermectin,AVM)是北京农业大学研制的一种新型、安全、高效、广谱的抗寄生虫药。本试验进行了阿维菌素饮水剂和浇泼剂对小白鼠寄生虫驱杀作用的研究。试验结果表明,这两种制剂对小白鼠体内、外寄生虫均有良好的驱杀作用。

1　材料与方法

111　试验材料

11111　药品　阿维菌素(5g/L)浇泼剂:为阿维菌素与适量溶剂和促透剂配制而成的一种无色透明溶液;阿维菌素饮水剂:按预先配制5mg/L的阿维菌素丙二醇溶液,临用前分别以1∶10和1∶5稀释加入饮水中给药。

11112　对照药物　伊维菌素(10g/L)注射液,商品名害获灭(Ivomec),由美国默沙东公司生产,批号721000T。

11113　试验动物　昆明系小白鼠,购自309医院动物室。112　试验方法

11211　小白鼠寄生虫感染状况的调查　内寄生虫检查方法:颈椎脱臼法处死小白鼠,剖开腹腔,取盲肠和大肠,于盛有自来水的平皿中漂洗内容物,查找虫体,鉴定并计数。

中国分类号　S8591795　收稿日期　19970924

外寄生虫检查方法:颈椎脱臼法处死小白鼠,将其置于黑色纸上(四周粘有胶面向上的透明胶带,以防螨逃逸),于6h 后检查被毛上的虫体,以透明胶带分别在小白鼠头、颈、背和腹4个部位粘取被毛尖上的螨,显微镜(40×)下鉴定螨的种类并计数。

11212　阿维菌素浇泼剂对小白鼠寄生虫的驱杀作用　将试验小白鼠随机分为3组,每组10只,雌雄各半。第1组为空白对照组(不给药);第2组为给药组,按015mg/kg体重剂量(以原药计)给小白鼠背部浇注5g/L阿维菌素浇泼剂;第3组为药物对照组,按原药015mg/kg体重剂量给小白鼠皮下注射伊维菌素(鉴于注射量甚微,故将注射剂经稀释后再行注射)。分别于给药后第7d和第14d观察药物驱虫或杀虫效果,并按下列公式计算驱虫率和杀虫率。

　驱虫率(%)=

空白对照组荷虫数-给药组荷虫数

空白对照组荷虫数

×100%　杀虫率(%)=

空白对照组螨数-给药组螨数

空白对照组螨数

×100% 11213　阿维菌素饮水剂对小白鼠寄生虫的驱杀作用　将试验小白鼠随机分为4组,每组10只,雌雄各半。第1组为空白对照组;第2组为低剂量给药组,禁水一夜后按原药016mg/ kg体重剂量给小白鼠阿维菌素饮水剂;第3组为高剂量给药

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中国兽医科技 1998年 第28卷 第4期

卵黄抗体的制作和应用

卵黄杭体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病(IBD）的一种特效药。 卵黄抗体的作用 诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时～72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。强阳性反应时,24小时后就可见到沉淀线，即可判定试验鸡群发生了传染性法氏囊病。https://www.wendangku.net/doc/4c5911712.html, 治疗作用：当鸡群发生新城疫或传染性法氏囊病时，可立即皮下注射卵黄抗体1～2毫升，肉鸡可口服卵黄抗体2毫升／只，能阻止病毒进入细胞，形成再感染，中和病毒数量，经2小时就可发现鸡群精神好转，食欲增加，粪便恢复正常。目前，是治疗鸡新城疫、传染性法氏囊病的特效药物。 预防作用：卵黄抗体的使用，在免疫学理论中可成为被动免疫。当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时，可利用卵黄抗体注射、口服替代主动免疫接种，发挥抗病作用。 制作方法：将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌术取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1:20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。 卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体,IgG抗体。是母体血液中小分子抗体IgG 通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig,由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。沉淀系数7S，分子量160000 ～180000，含糖2.5%。现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。 卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1:64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周～4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。中国禽病网 应用方法 解冻．：一般包装有500毫升,250毫升、100毫升瓶装。要把药瓶放在新鲜井水中，浸泡2小时～4小时以上，反复振摇。用肉眼观察，瓶内无冰碴为宜。 注射：可将解冻后的卵黄抗体，在室温下放置半小时，接近室温时（15℃～20℃），再皮下注射1毫升～2毫升。先注射健康鸡群，再注射假定健康群，最后注射病鸡群。注射1只鸡要换1个针头。 注意事项卵黄抗体是生物制品，高温会失效，为方便生产与使用，须冷冻保存和运输，一般在-18℃条件下保存，运输时应特别注意温度变化，冷藏包装运输。 使用卵黄抗体前，一定要了解鸡群是否接种过同种疫苗，并要注意间隔时间；同时，应测定其效价，计算使用量和保护期。 在使用卵黄抗体防治鸡新城疫或传染性法氏囊病时，不得产生依赖思想，同时还要做好卫生、饲养管理和消毒工作，采取综合的防治措施，才能收到满意的效果。

卵黄抗体制备及应用

抗鸡球虫卵黄抗体制备及初步应用 作者：钱玮霖指导老师：徐前明 （安徽农业大学植保学院合肥 230061） 摘要：本项目旨在研制抗鸡球虫卵黄抗体，为防治鸡球虫病提供一种新的手段。利用对临床所分离的球虫，经超声波裂解制备粗抗原，然后将所得抗原分别于弗氏完全佐剂和不完全佐剂混合，经肌肉注射方式对鸡蛋进行免疫，收集免疫后的卵黄；采用饱和硫酸铵法分离卵黄中的抗体，并用聚乙二醇浓缩获得较高浓度的抗体；采用凝集试验确定其抗体水平，并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法进行抗体纯度分析；最后将所分离的抗鸡球虫卵黄抗体用于鸡感染球虫保护试验。结果表明：（1）临床所分离得球虫多为混合感染，达3种以上；（2）蛋鸡经免疫后，经凝集试验可证实其抗体水平可达1:28，SDS-PAGE电泳显示：纯化后抗体大小为67.0kD 和23kD，且纯度较高。基于上述情况，认为本试验制备出抗鸡球虫卵黄抗体方法并初步阐明了其抗鸡球虫的基本功能。 关键词：鸡球虫病；卵黄抗体；保护试验 引言 鸡球虫病广泛存在于养鸡业中，常造成大批死亡，其死亡率可最高达80％，且病愈鸡生长严重受阻，抵抗力降低，易继发其他疾病。每年，全世界因为鸡球虫病造成的损失高达数十亿美元[1]。因此，鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一。在我国，特别是在南方地区，由于气温高、湿度大，这种环境利于球虫卵囊的孢子发育，本病常常呈暴发性流行，危害更加严重。 然而，目前对鸡球虫病的防治措施绝大部分多依赖于药物的预防和治疗上,即化学合成药物和抗生素两大类，自从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种，但是因为球虫对药物极易产生抗药性，大量使用化学药物势必会造成严重的药物残留问题等，这也是当今养禽业所遇到最棘手的问题之一。上述问题存在，为临床防治鸡球虫病提出紧迫任务。 卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。这种策略得到良好的运用，如鸡法氏囊卵黄抗体在一定程度上解决了临床治疗该病难题，为生产作出了一定的贡献。 卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：2。大部分蛋白质都是脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。因此IgY的分离纯化首先需要有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋白中分离 IgY[2]。多年来，已建立了许多较为高效而经济的方法，这些方法大多以PEG、硫酸葡聚糖、天然胶，如藻酸钠、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步纯化蛋白质。工业上大规模生产IgY的方法有：超临界二氧化碳气体抽提法、卡拉胶法、硫酸铵盐析法[3]。 开展抗球虫卵黄抗体的研究对家禽球虫病的预防及治疗具有重要意义：(1)该方法建立，为临床防治鸡球虫病提供新思路和策略，可在一定程度上减少抗生素的使用和减少化

单克隆抗体的制备及应用

单克隆抗体的制备及应用 单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇。单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。 1 单克隆抗体的优点与局限性： 单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。 总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。 单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。 (2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。 2 单克隆抗体的制备： 单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与免疫、细胞融合、选择杂交瘤细胞及抗体检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。 抗原准备 抗原，是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性。很多物质都可以成为抗原，抗原的具体分类可以参见抗原，在进行单克隆抗体制备过程中，很多物质都可以成为抗原，在常规的科研实验中，科研者经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug 重组蛋白、偶联多肽、偶联小分子等作为抗原产生特异性的单克隆抗体。 动物的选择与免疫

精制与粗制卵黄抗体的优劣势分析

精制与粗制卵黄抗体的优劣势分析随着养殖业的发展，疾病种类越来越多，某些病原体的变异也越来越快，疾病互传的可能性也越来越大，迫切需要有相应的快速有效的对策来控制疾病的发展，降低死亡，减小损失。毋庸置疑，外源性的特异性抗体是治疗某些特定传染病的最直接最快速最有效的方法。卵黄抗体作为一种价廉易得的外源性特异性抗体，其使用效果已经在临床兽医学上得到了验证和认同。但在畜牧生产实践中，越来越多的人却对卵黄抗体的使用效果产生了怀疑，到底出现了什么问题？ 本文试从精制和粗制卵黄抗体的优劣势分析来探讨这一问题的根源。 鸡、鸭、鹅等禽类的蛋在营养成分上大致相同，主要由蛋黄、蛋清（即蛋白）和蛋壳构成。其中蛋黄约占32%，蛋清约占57%，其余11%为蛋壳。其中蛋黄又由如下图所示的成分所构成： 抗体(免疫球蛋白，Ig)是机体受到外来抗原物质刺激后，机体免疫系统细胞产生的可以特异性地识别和结合外来抗原并使之失活的一类球蛋白。家禽经特定抗原免疫后，可产生相应的特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体在卵细胞中逐渐蓄积，并储存于卵黄中，这种抗体称为卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk，IgY)，它是卵黄中唯一的免疫球蛋白，具有特异性和针对性，无毒副作用。下图为抗体结构：

从图中可以看出，在治疗疾病使用卵黄抗体时，起到关键作用的是卵黄中的免疫球蛋白（IgY)，IgY的作用非常广泛，其中最主要的作用有以下几种： 特定的卵黄抗体能黏附于特定病毒的衣壳上，直接抑制病毒的生长繁殖（抑制作用）； 黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于粘膜上皮细胞，失去感染能力（阻滞作用）； 能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用（调理作用）； 中和细菌、霉菌等毒素的毒性（中和毒素）； 与病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力（中和病毒）。 但大量调查发现，目前市面上可见的家禽用粗制卵黄抗体几乎都是地下作坊生产的“三无”产品，生产环境及产品质量令人堪忧。这些粗制抗体不仅抗体效价难以保证，而且通常会污染禽呼肠孤病毒、禽淋巴白血病病毒、网状内皮增生因子、大肠杆菌、沙门氏菌、支原体等外源性致病原。在注射抗体预防或者治疗疾病时，极有可能造成垂直传播病原或其他一些细菌、病毒的扩散甚至疾病的爆发，带来严重的经济损失。 此外，由于粗抗生产者往往试图通过添加大剂量的甲醛，青、链霉素等措施来延长其产品的保质期，增加所谓的使用安全性，但结果往往是造成更大的应激和严重的药物残留。这就是粗制抗体的购买者和使用者对粗制抗体的使用效果产生疑问的重要原因之一。 精制就是将蛋黄中的免疫球蛋白进行分离纯化的过程。已知蛋黄是由水溶相（Water soluble fraction, WSF）和水不溶相（Water insoluble fraction, WIF）构成的乳浊液。WIF主要为脂蛋白构成，而蛋黄抗体存在于蛋黄的WSF中。WSF中的脂蛋白类含量甚微，

卵黄抗体作用机理

卵黄抗体 科技名词定义 中文名称：卵黄抗体 英文名称：vitelline antibody 定义：从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG，其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。 所属学科：免疫学（一级学科）；畜牧免疫（二级学科） 概述 卵黄抗体（yolk antibody, IgY）：通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。 IgY的性质 IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。其等电点约为5.2。IgY 与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY；高于80℃，大部分IgY失去活性。IgY 在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时活性亦有所下降。IgY 对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。将胃蛋白酶和IgY在pH2.0温育1h 后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳酶温育8h，活性分别保持39%和41%。 IgY的作用机理 特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；卵黄抗体可黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于肠道黏膜上皮细胞；一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片段含有抗体的可变小肽(Fab)部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进入血液后能与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附易感细胞而失去致病性，而IgY的稳定区(Fe部分)留在肠内。 IgY在动物疾病防治方面的应用

幽门螺旋杆菌尿素酶抗体检测操作程序

幽门螺旋杆菌尿素酶抗体检测操作程序 （胶体金法） 1.目的 用于定性检测人血液样本中的胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体，可用于临床辅助诊断消化道胃幽门螺旋杆菌感染。 2.范围 适用于临床对幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的检测。 3.检验原理 试剂盒应用渗滤式间接法原理，将幽门螺旋杆菌尿素酶固定在硝酸纤维素膜载体上，待检血清中幽门螺旋杆菌尿素酶抗体IgGY与抗原结合形成抗原抗体复合物，加入胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体与复合物结合，根据是否形成肉眼可见的红色圆斑（T端），判断结果。硝酸纤维素膜上的质控区固定有兔抗鼠IgG,加入胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体后与之结合形成红色圆斑（C端）。 4.主要组成成分 反应板：××上下对合、中央有直径为±小孔的塑料小盒，其内主要为固定有油门螺旋杆菌尿素酶抗原的硝酸纤维素膜和吸水材料 试剂Ⅰ：L PH PBS溶液，内含吐温-20. 试剂Ⅱ：主要含有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体、稳定剂和防腐剂。5.储存条件及有效期 产品应储存在2℃-8℃条件中，不能冷冻；有效期9个月。拆封后未用完的反应板应放入密封袋2℃-8℃保存，应在一个月内用完。 6.样本要求 样本采集：按照临床采血技术规范操作采集静脉血，采集的静脉血置室温30分钟或37℃水浴15-20分钟后，低速离心（2000转/分-3000转/分）5-10分钟，分离血清。 样本保存：若分离后的血清不能及时检测，应将样本保存在2℃-8℃条件下，若保存时间超过7天，则需将样本保存在-20℃以下并避免反复冻融，以免抗体效价降低。 当明显溶血（血红蛋白浓度＞L）、黄疸（胆红素浓度＞L）、高血脂（甘油三酯

卵黄抗体的研究进展

文献综述 卵黄抗体的研究进展 郑译 西南大学荣昌校区动物医学系，重庆，荣昌402460 摘要：抗体（免疫球蛋白，Ig）是指机体受到外来抗原物质刺激后，B细胞识别抗原后活化、增殖分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的能与相应抗原特异性识别和结合的一类球蛋白。 关键词：卵黄抗体；免疫程序；研究进展 卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk，IgY）经特定抗原免疫后的母鸡可产生相应的特异性抗体，有研究证实[1]，产蛋鸡的卵黄对抗体有浓集作用，使其不断储存于卵黄中，这种抗体称为卵黄抗体。 1 卵黄抗体的概念 卵黄抗体，英文名（vitelline antibody） 定义：从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG，其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。 卵黄抗体是用特定抗原多次免疫产蛋母鸡，使机体产生相应的特异性抗体，并转移、贮存在卵黄中，经提取纯化的免疫球蛋白 卵黄抗体（Egg yolk antibodies eyAb），也称卵黄免疫球蛋白(Egg yolkimmunogbhin，IgY)。科学家在鸟类的血液循环壁发现三种免疫球蛋白(IgG、IgA 与IgM)，母鸡在细胞分裂产蛋的过程中，会将其免疫球蛋白转移至鸡蛋，母鸡血浆中之IgA与IgM，会在输卵管中与其他的蛋白质结合而构成鸡蛋蛋白的部分。 IgG：免疫球蛋白G (Immunoglobulin G，IgG)的缩写。IgG是血清主要的抗体成分，约占血清Ig的75%。其中40～50％分布于血清中，其余分布在组织中。 IGA：一种免疫球蛋白。异常情况下，在肾脏受到各种炎症反应刺激等因素下，导致IGA过度沉积在肾脏肾小球系膜区等部位，与抗原一起形成免疫复合物，造成肾脏结构病理损害，引起的一系列临床症状，称为IGA肾病。 IGM：免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)的缩写。根据结构的不同将免疫球蛋白分为五种，IgM是三种免疫球蛋白之一，其他还有lgA、lgG、IgD和lgE.。

幽门螺杆菌的实验室检查方法及优缺点

要检测病人胃内存在的幽门螺杆菌，一般常采用抽血采样、胃镜采样和呼气采样三种检测方法。 1.抽血采样检测：即采用抽血的方法检测血清中幽门螺杆菌的抗体水平。因为受到幽门螺杆菌感染后，可在人体内产生相应的抗体，使检测结果呈现阳性，但是一般需要数月半载才呈阳性，因而幽门螺杆菌感染初期作该项检测时，检测结果常常会出现假阴性，从而使患者失去治疗的最佳时机。此外，由于幽门螺杆菌即使被根除。但该抗体下降缓慢，患者往往需要1—2年才能转阴，这样必然使治愈者长期背着“阳性”的黑锅而接受着多余的治疗。 2.胃镜采样检测：可在患者需做胃镜检查时“搭车” 采样，在活检采样时一起作检查。检测是否有幽门螺杆菌。如果为阳性，即可确诊幽门螺杆菌感染阳性。为了给患者制定合适的治疗方案，有时还可加做培养和药物敏感试验。胃镜下采样后还可采用聚合酶链反应严CR）检测，这种方法灵敏度较高，结果也比较可靠；也可做快速尿素酶检测，该方法简便快速，但由于观察时间过短或某些因素的影响导致结果不够可靠。胃镜采样还存在下列问题：患者需要经受插镜之苦，若幽门螺杆菌呈灶性分布易导致漏诊（漏诊率达10％左右）。但凭借医生丰富的操作经验和正确采样，可降低其漏诊率。 3.呼气采样检测：即尿素[14C]呼气试验，14C-呼气试验是近年发展起来的非侵入性的HP重要检查方法。HP具有高活性的尿素酶可分解尿素产生NH3和CO2，当口服一定量的14C -尿素后，如胃有HP感染，示踪剂尿素被HP 所产生的尿素酶分解，14C以14CO2形式通过呼气排除，14CO2可被液闪仪探测到，从而可诊断有无HP感染。敏感性和特异性在95%以上，被国内外学者公认为诊断和追踪HP效果的非创伤性可靠标准。14C -呼气试验方法简单，口服14C-尿素胶囊15分钟后，对准呼气卡吹气约2分钟，检测呼吸卡计数即可得出结果。计数/分钟>100即为阳性。14C-呼气试验检测的敏感性为98.04%,准确性为97.78%,特异性为100%。 该项检测还有患者无痛苦。费用低等特点是近年来最受人们欢迎的一种检测幽门螺杆菌的方法。

幽门螺旋杆菌抗体阳性怎样治疗呢

幽门螺旋杆菌抗体阳性怎样治疗呢如果检查发现幽门螺旋杆菌抗体呈阳性的话，患者需要注意很多事项，比如要养成良好的饮食习惯，为了避免传染，家庭之间要避免共同使用餐具，最好不要在一起就餐，除此之外，患者饮食一定要清淡，千万不要吃坚硬和刺激性的食物，在做好这些防范基础上，要采取下列方法及时治疗。 ★第一、幽门螺杆菌治疗 幽门螺杆菌感染是引起慢性胃炎的主要病因，包括幽门螺杆菌感染在内的各种病因引起的胃粘膜慢性炎症，大多数幽门螺杆菌可以被根除。目前针对幽门螺杆菌的方法主要有以下几种：幽门螺杆菌三联疗法、幽门螺杆菌新型卫舒元益生菌疗法以及幽门螺杆菌四联疗法。随着三联四联的广泛使用，幽门螺杆菌对三联四联的耐药性渐高，达不到理想的根除效果，而且其副作用较大，一般极易产生腹泻等不良反应。

★第二、临床意义 Hp-Ab阳性见于胃、十二指肠幽门螺杆菌感染，如胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡等，其敏感性大于90%，特异性为85%。 ★第三、症状 1、幽门螺杆菌感染的症状主要是反酸、烧心以及胃痛、口臭。这主要是由于幽门螺杆菌诱发胃泌素疯狂分泌，而发生发酸烧心，而具有胃溃疡疾病的患者，幽门螺杆菌更是引起了主要症状胃痛的发生，口臭最直接的病菌之一就是幽

门螺杆菌了。 2、幽门螺旋杆菌能够引起慢性胃炎。所发生的主要临床表现有：上腹部不适、隐痛，有时发生嗳气、反酸、恶心、呕吐的症状，病程较为缓慢，但是容易反复发作。 3、患者感染幽门螺杆菌后产生多种致病因子，从而引起胃黏膜损害，临床疾病的发生呈现多样性，而且患者多会出现反酸、嗳气、饱胀感等等，均是感染幽门螺杆菌的患者比没有感染幽门螺杆菌的患者多数倍。 4、幽门螺杆菌感染一般有时没有特别明显的症状，这时一般是通过检查来判断有无幽门螺杆菌感染的，幽门螺杆菌这种致病菌，很容易诱发胃肠疾病的发生。

《幽门螺杆菌抗原抗体检测试剂技术审查指导原则》

《幽门螺杆菌抗原/抗体检测试剂 技术审查指导原则》 （征求意见稿） 本指导原则旨在指导注册申请人对幽门螺杆菌抗原/抗体检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对幽门螺杆菌抗原抗体检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、范围 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，HP)是一种寄生在胃部和十二指肠的革兰氏阴性微量需氧细菌，其感染非常普遍，全球自然人群感染率超过50%。影响幽门螺杆菌感染率

的因素包括经济状况、居住条件、文化程度、职业及饮水习惯等，普遍来说，发展中国家高于发达国家。目前认为，在自然环境中，人是幽门螺杆菌唯一的传染源，传播途径推测为经口感染。 几乎所有的幽门螺杆菌感染者在组织学上均存在慢性活动性炎性反应，最新的专家共识将HP胃炎明确为“一种感染（传染）性疾病”，但其中约70％以上感染者无症状，其他可导致慢性胃炎、消化性溃疡等，常见症状包括胃上部不适感以及疼痛、胀气、厌食、恶心、呕吐以及深色或焦油色粪便等。研究表明幽门螺杆菌是胃炎、消化性溃疡的主要致病因素，并且与功能性消化不良、胃黏膜相关性淋巴组织（MALT）淋巴瘤、胃癌的发生密切相关，世界卫生组织国际癌症研究机构已将其纳入一类致癌因子。有关幽门螺杆菌感染的国际指南中指出，根除幽门螺杆菌可显著减少胃和十二指肠疾病包括胃癌的发病率，并可在未来减少幽门螺杆菌感染的新发病例。 幽门螺杆菌感染的诊断方法依据取材有无创伤性分为两大类：侵入性检测方法和非侵入性检测方法。前者是指依赖胃镜取材的检测方法，包括组织学检测（如HE染色、Warthin-Starry银染、改良Giemsa染色、甲苯胺蓝染色、丫啶橙染色、免疫组织化学染色等）、细菌培养和快速尿素酶试验（RUT）等；后者则包括血清学（抗体）检测、粪便抗原检测和尿素呼气试验（UBT）等。不同的诊断方法有各自的优势和局限性。 有关HP感染诊断最新的国际、国内专家共识认为： 1. 对于（未使用抗生素治疗患者）HP感染的诊断，①

单克隆抗体的制备及应用

单克隆抗体的制备及应用 The latest revision on November 22, 2020

单克隆抗体的制备及应用 单克隆是由杂交瘤产生的、只针对复合上某一单个。技术(monoclonalantibodytechnique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的，并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。1单克隆抗体的优点与局限性： 1.1单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA 等。(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。 总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。 1.2单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。 2单克隆抗体的制备： 单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与、细胞融合、选择杂交瘤细胞及检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。 2.1抗原准备 抗原，是指能够刺激产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生（特异性反应）的物质。抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性。很多物质都可以成为抗原，抗原的具体分类可以参见抗原，在进行单克隆抗体制备过程中，很多物质都可以成为抗原，在常规的科研实验中，科研者经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug重组蛋白、偶联多肽、偶联小分子等作为抗原产生特异性的单克隆抗体。 2.2动物的选择与 2.2.1动物的选择纯BALB/c小鼠，较温顺，离窝的范围小，体弱，食量及排污较小，一般洁净的实验室均能饲养成活目开展杂交瘤技术的实验室多选用BALA/c小鼠。 2.2.2免疫方案选择合适的免疫方案对于杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前两月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据的特性不同而定。 （1）可溶性抗原性较弱，一般要加，应先制备免疫原，再加佐剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。初次免疫抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～1ml，0.2ml/点），3周后第二次免疫，剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml），3周后第三次免疫，剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后测其），2～3周加强免疫，剂量50～500μg宜，ip或iv（内

幽门螺杆菌的检测方法

检测幽门螺杆菌方法 1. 抽血采样检测：即采用抽血的方法检测血清中幽门螺杆菌的抗体水平。因为受到幽门螺杆菌感染后，可在人体内产生相应的抗体，使检测结果呈现阳性，但是一般需要数月半载才呈阳性，因而幽门螺杆菌感染初期作该项检测时，检测结果常常会出现假阴性，从而使患者失去治疗的最佳时机。此外，由于幽门螺杆菌即使被根除．但该抗体下降缓慢，患者往往需要1—2年才能转阴，这样必然使治愈者长期呈现假阳性而接受着多余的治疗。 2．胃镜采样检测：可在患者需做胃镜检查时采样，在活检采样时一起作显微镜检查．检测是否有幽门螺杆菌，。如果为阳性，即可确诊幽门螺杆菌感染阳性。为了给患者制定合适的治疗方案，有时还可加做细菌培养和药物敏感试验。胃镜采样还存在下列问题：患者需要经受插镜之苦，若幽门螺杆菌呈灶性分布易导致漏诊(漏诊率达10％左右)。但凭借医生丰富的操作经验和正确采样，可降低其漏诊率。 3．呼气采样检测：该项检查灵敏度高．检出率和符合率也很高，患者无痛苦．是近年来最受人们欢迎的一种检测幽门螺杆菌的方法。具体方法可分为两种：14C呼气试验和13C呼气试验。其中14C呼气试验费用较低，但由于该项检查存在放射线危害，儿童、孕妇、哺乳妇女和年迈体弱者应慎用：对同一患者来说，也宜避免反复多次采用该种方法检测。13C呼气试验则无放射性，对人体无损害，而且检出率和符合率更高(接近100％)，各种年龄的患者都可采用该法，检查前受检者需空腹三个小时，在采样过程中，受检查者在半小时内服一颗胶囊，并先后呼三口气留取样本，就能十分准确地检测出是否存在幽门螺杆菌感染，13C呼气试验已被公认为目前检测幽门螺杆菌的最佳方法。 呼气试验 呼气试验，又名14C或13C尿素呼气试验，是一种敏感性高、特异性强、快速、简单、安全、廉价的Hp诊断方法，其准确率达95%以上，被国内外专家一致推荐为诊断Hp的金标准，在临床上已被广泛应用。 一、原理 Hp可产生高活性的尿素酶。当病人服用14C标记的尿素后，如患者的胃内存在Hp感染，胃中的尿素酶可将尿素分解为氨和14C标记的CO2，14C标记的CO2通过血液经呼气排出，定时收集呼出的气体，通过分析呼气中14C标记的CO2的含量即可判断患者是否存在幽门螺杆菌感染。 二、适用人群 1．临床怀疑有幽门螺杆菌感染的患者 2．急慢性胃炎和胃、十二指肠溃疡、黏膜相关性淋巴组织淋巴瘤患者 3．预防胃癌或有胃癌家族史者 4．幽门螺杆菌根除治疗后疗效评价和复发诊断 5．幽门螺杆感染的流行病学调查与筛选 三、检测方法 （一）病人准备：受检者必须停用抗生素和铋剂30天，停用质子泵抑制剂二周。检查前禁食6小时以上。

单克隆抗体的制备及应用教学提纲

单克隆抗体的制备及 应用

单克隆抗体的制备及应用 单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇。单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。 1 单克隆抗体的优点与局限性： 1.1 单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。 总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。1.2 单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。 2 单克隆抗体的制备： 单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与免疫、细胞融合、选择杂交瘤细胞及抗体检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。 2.1 抗原准备 抗原，是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性。很多物质都可以成为抗原，抗原的具体分类可以参见抗原，在进行单克隆抗体制备过程中，很多物质都可以成为抗原，在常规的科研实验中，科研者经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug 重组蛋白、偶联多肽、偶联小分子等作为抗原产生特异性的单克隆抗体。 2.2动物的选择与免疫

卵黄抗体的制作

卵黄抗体的制作 This manuscript was revised by the office on December 10, 2020.

卵黄抗体的制作 卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。沉淀系数7S，分子量，含糖%。现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。强阳性反应时，24小时后就可见到沉淀线，即可判定试验鸡群发生了传染性法氏囊病。治疗作用：当鸡群发生新城疫或传染性法氏囊病时，可立即皮下注射卵黄抗体1-2毫升，肉鸡可口服卵黄抗体2毫升/只，能阻止病毒进入细胞，形成再感染，中和病毒数量，经2小时就可发现鸡群精神好转，食欲增加，粪便恢复正常。目前，是治疗鸡新城疫、传染性法氏囊病的特效药物。 预防作用：卵黄抗体的使用，在免疫学理论中可成为被动免疫。当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时，可利用卵黄抗体注射、口服替代主动免疫接种，发挥抗病作用。应用方法解冻：一般包装有500毫升、250毫升、100毫升瓶装。要把药瓶放在新鲜井水中，浸泡2小时~4小时以上，反复振摇。用肉眼观察，瓶内无冰碴为宜。注射：可将解冻后的卵黄抗体，在室温下放置半小时，接近室温时（15℃~20℃），再皮下注射1毫升~2毫升。先注射健康鸡群，再注射假定健康群，最后注射病鸡群。注射1只鸡要换1个针头。口服：将解冻后的卵黄抗体以1∶10的比例，加入凉开水或新鲜井水及适量的抗生素，制成混悬液，让鸡在半小时内饮完，并要备足饮水器，让鸡都有位置饮水。注意事项卵黄抗体是生物制品，高温会失效，为方便生产与使用，须冷冻保存和运输，一般在-18℃条件下保存，运输时应特别注意温度变化，冷藏包装运输。使用卵黄抗体前，一定要了解鸡群是否接种过同种疫苗，并要注意间隔时间；同时，应测定其效价，计算使用量和保护期。卵黄抗体兑

幽门螺杆菌抗体疗法

【协会分享】幽门螺杆菌hp根除失败后的 解决方案讨论 幽门螺杆菌（HP）是引发慢性胃炎、消化性溃疡、甚至于胃癌等胃部疾病中最常见的原因之一。按照国内现行幽门螺杆菌指南，正规HP四联疗法（质子泵 抑制剂+铋剂+2个抗生素），治疗14天，抗生素也按指南推荐选用（我国目 前常用的为如下6款：阿莫西林、克拉霉素、呋喃唑酮、左氧氟沙星、四环素、甲硝唑），HP根除率在50%～90%。 那么一次治疗如果没有根除的话该怎么办？ 根除失败后方案 首次治疗失败 医生会建议等3个月以后在进行第二次治疗。这是因为在使用过抗生素以后幽门螺杆菌会将自己进入休眠状态来保护自己，这时候用抗生素是无效的，需要等菌体重新活跃以后再进行杀出。第二次治疗时，会选择和之前不同的2种抗生素和质子泵抑制剂，时间也会延长到14天；另外也有医生会根据患者的情况选择3种抗生素，也就是要吃5种药了。

二次治疗失败 通常会进行个体化处理，从患者胃部取出菌体来进行药敏试验，看看哪些抗生素对患者体内的HP才是有用的，从而选择敏感抗生素来进行第三次治疗。但由于体外的环境和体内胃部环境有很大的差异，会出现在HP在体外对某些抗生素敏感但是在体内却有无效的情况。 在这个过程中，也会有医生建议患者同时用一些益生菌来让患者的菌群恢复正常，同时降低一些抗生素的副作用。在选择益生菌的时候，建议选择适合中国人肠胃的菌株；很多国外的益生菌虽然牌子很大，但其实并不能在中国人的体内定植并繁殖，所以很多国外的益生菌对中国人来说是没太大用处的。 幽门螺杆菌抗体疗法 除了不停地吃抗生素，更推荐患者使用幽门螺杆菌抗体疗法。幽门螺杆菌抗体疗法是满足对人体少毒副作用、对幽门螺杆菌强针对性以及适用人群广这三个条件的治疗幽门螺杆菌的新路径。 所谓抗体疗法就是采用幽门螺杆菌特异性卵黄抗体来专门祛除幽门螺杆菌，本身无毒副作用，也不存在耐药性一说，对其他细菌病菌无作用。卵黄抗体早在1996年就已经被美国食品和药品管理局（FDA）列为了“一般公认安全物质”，所以无论是老人孩子，只要是能吃鸡蛋黄的人都是可以使用的。但是对于那些蛋黄过敏的患者，现有的幽门螺杆菌卵黄抗体疗法就不适用了。

单克隆抗体的制备及应用

单克隆抗体的制备及应 用 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】

单克隆抗体的制备及应用 单克隆是由杂交瘤产生的、只针对复合上某一单个。技术(monoclonal antibody technique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的，并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。 1 单克隆抗体的优点与局限性： 单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。 总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。 单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。 2 单克隆抗体的制备： 单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与、细胞融合、选择杂交瘤细胞及检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。 抗原准备 抗原，是指能够刺激产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生（特异性反应）的物质。抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性。很多物质都可以成为抗原，抗原的具体分类可以参见抗原，在进行单克隆抗体制备过程中，很多物质都可以成为抗原，在常规的科研实验中，科研者经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug 重组蛋白、偶联多肽、偶联小分子等作为抗原产生特异性的单克隆抗体。 动物的选择与 动物的选择纯BALB/c小鼠，较温顺，离窝的范围小，体弱，食量及排污较小，一般洁净的实验室均能饲养成活目开展杂交瘤技术的实验室多选用BALA/c小鼠。 免疫方案选择合适的免疫方案对于杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前

卵黄抗体的应用研究进展

卵黄抗体的应用研究进展 【摘要】卵黄抗体又称“卵黄免疫球蛋白（IgY）”，具有强大的免疫功能，目前研究最多、应用最广的是鸡源IgY。卵黄抗体以其化学性质稳定、制备简单、使用方便、成本低廉等优点，近年来逐渐引起学者的注意，在生物技术、医药卫生、食品科学等方面应用越来越广泛。随着特异性IgY研究的日益深入，在各个领域显示出令人振奋的应用前景。 【关键词】卵黄抗体；诊断；治疗 卵黄免疫球蛋白（egg yolk immunoglobulin）简称IgY，是从免疫后的禽蛋卵黄中提取出的针对某种特定抗原的抗体，多数为IgG，具有强大的免疫功能，因此又称之为“卵黄抗体”。目前研究最多、应用最广的是鸡源性的卵黄免疫球蛋白。鸡源性特异性IgY的制备先根据需要选定抗原对产蛋母鸡进行免疫，之后在蛋黄内就会产生抵抗该特定抗原的特异性抗体。IgY抗体的获取无需采血，只需收集免疫蛋鸡产下的鸡蛋即可大量制备质量均一的特异性抗体[1]。自20世纪50年代，研究学者就发现鸡卵黄中存在大量抗体，含量与鸡血清中的相当甚至更高；之后随着诸如标准IgY商品试剂的生产、IgY特异性纯化试剂盒的面市，开创了卵黄抗体应用的新时代。1996年，IgY抗体的生产和应用技术被统称为“IgY技术”[2]，现在它已被列为一个国际化的标准应用技术。另外由于亲缘关系较远以及结构差异，禽类的IgY与哺乳动物免疫球蛋白之间血清学鉴定不会发生交叉反应[3]，这进一步扩展了IgY的应用范围。近年来卵黄抗体以其化学性质稳定、制备简单、使用方便、成本低廉等优点，逐渐引起人们的注意，在医药卫生、食品科学、生物技术等方面的应用越来越广泛。 1 IgY在医学疾病诊断方面的应用 1.1 细菌性疾病的诊断 Kim等人用单核李斯特菌的鞭毛蛋白作为抗原免疫蛋鸡，制备抗鞭毛蛋白抗原的特异性IgY，并通过ELISA法以抗鞭毛蛋白的单抗为包被抗体、特异性IgY 为检测抗体进行该菌的检测，结果显示此特异性IgY的敏感度高，特异性强，并且不与其它菌种发生交叉反应[4]。Vasconcellos等人采用三种不同的测试方法对多克隆抗体和特异性IgY进行包被以检测人体血液中的钩端螺旋体，得出最佳包被模式的检测限为l0个钩端螺旋体/ml[5]。大肠杆菌O157：H7常存在于日常食品中，由于低剂量就会导致出血型大肠炎感染，严重危及生命，因此需要快速、精确、高灵敏度的检测体系；Sunwoo[6]等人采用灭活的大肠杆菌O157：H7为免疫抗原免疫蛋鸡，分离制备了抗大肠杆菌O157：H7的特异性IgY，以O157：H7的单抗为检测抗体，用此特异性IgY为包被抗体，进行分析，结果显示此检测体系可检测到的大肠杆菌O157：H7的最低剂量是40CFU/mL，大大提高了检测的灵敏度。 1.2 病毒性疾病的诊断 Juliarena等人表达制备了牛白血病病毒包膜糖蛋白gp51上的重要蛋白抗原-p24的融合蛋白，并用此蛋白来免疫蛋鸡制备特异性抗体，用于免疫诊断牛白血病病毒的存在，结果显示此IgY抗体在检测过程中避免了常规哺乳动物IgG所带来的交叉反应现象[7]。Ivano等人制备了抗蜱传脑炎病毒（TBEV）的鸡IgY 抗体，并建立了ELISA方法用于检测TBEV抗原的存在[8]。SARS病毒的主要结构蛋白是核衣壳（NP），感染SARS病毒的病人在感染一周后在其血浆和鼻咽