细胞计数板使用方法.

细胞计数板使用方法

实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：

1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：

细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104

说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：

1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3 而1ml=1000mm3

（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液）

细胞计数板的使用

血球计数板-基本构造

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。

使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。

细胞计数板-使用方法

1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。

2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见下图：即本格中计数细胞为3个。

6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。

7．测数完毕，取下盖玻片，用水将细胞计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

细胞计数板-计数公式

1、16格×25格的细胞计数板计算公式：细胞数/ml=100小格内细胞个数

/100×400×10000×稀释倍数

1、25格×16格的细胞计数板计算公式：细胞数/ml=80小格内细胞个数

/80×400×10000×稀释倍数

血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差,力求准确?

血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。其中由于操作人员采血不顺利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差，由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差（filed error）。仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。因此，搞好红细胞计数的质量控制一般需采用以下措施。1．避免技术误差，纠正仪器误差

（1）所用器材均应清洁干燥，计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正。①计数板的鉴定：要求计数室的台面光滑、透明，划线清晰，计数室划线面积准确。必要时采用严格校正的目镜测微计测量计数室的边长与底面积，用微米千分尺测量计数室的深度。美国国家标准局（NBS）规定每个大方格边长的误差应小于1%，即1±0.01mm，深度误差应小于2%，即0.1±0.002mm。若超过上述标准，应弃之不用。②血盖片应具有一定的重量，平整、光滑、无裂痕，厚薄均匀一致，可使用卡尺多点测量（至少在9个点），不均匀度在0.002mm之内。必要时采用平面平行仪进行测量与评价，要求呈现密集平行的直线干涉条纹。最简单的评价方法是将洁净的盖片紧贴于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的时间不脱落，落下时呈弧线形旋转，表示盖片平整、厚薄均匀。同时，合格的盖片放置在计数室表面后，与支持柱紧密接触的部位可见到彩虹。精选出的盖片与其他盖片紧密重合后，在掠射光线下观察，如见到完整平行的彩虹条纹表示另一枚盖片质量也符合要求。③目前临床实验室多采用一次性微量采血管采集毛细血管血，除注意定点购买使用信誉较好厂家的产品外，还应对每一批量的采血管进行抽样检查，可通过水银称重法或有色溶液比色法进行校正，误差不应超过±1%。

（2）红细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒。

（3）严格操作，从消毒、采血、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是

血样稀释及充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。

（4）报告法定计量单位。

2．缩小计数域误差或分布误差由于血细胞在充入计数室后呈随机分布或称Poisson分布（），而我们所能计数的细胞分布范围是有限的，由此造成的计数误差称为计数域误差或分布误差。缩小这种误差的有效方法就是尽量扩大细胞计数范围和计数数目，一般先进行误差估计，然后决定所需计数的数目和计数范围，只要能将误差控制在允许范围内即可。Berkson指出，当使用同一支吸管、同一面计数室，计数0.2mm2面积的细胞数，有望将CV控制在可接受的7%以内。对于红细胞计数而言，由于红细胞数量较多，在计数室中显得比较“拥挤”，根据Poisson公式（）推断，。欲将误差控制在变异百分数5%以内，至少需要在计数室中计数400个红细胞，因此要求计数五个中方格的红细胞。事实上Berkson 还通过实验证明，红细胞的计数域误差为s=0.92 ，较理论误差（Poisson分布误差）要小。

3．排除异常标本的干扰白细胞数量在正常范围时，相对于红细胞数量来讲，其影响可忽略，但如白细胞过高（>100×109/L），则应对计数结果进行校正。方法是：①实际RBC=计得RBC-WBC。如当红细胞换算后为3.5×1012/L、白细胞换算后为100×109/L时，病人实际红细胞数应为3.4×1012/L。②在高倍镜下计数时，避开有核细胞。有核细胞体积比正常红细胞大，中央无凹陷，无草黄色折光，可隐约见到细胞核。此外，当病人急性严重贫血时网织红细胞可提前大量释放，也给红细胞计数带来一定的干扰，而且影响网织红细胞绝对值计算结果。其校正方法有待探讨。

Using a Counting Chamber

For microbiology, cell culture, and many applications that require use of suspensions of cells it is necessary to determine cell concentration. One can often determine cell density of a suspension spectrophotometrically, however that form of determination does not allow an assessment of cell viability, nor can one distinguish cell types.

A device used for determining the number of cells per unit volume of a suspension is called a counting chamber. The most widely used type of chamber is called a hemocytometer, since it was originally designed for performing blood cell counts.

微生物的计数——血球计数板法

微生物得计数——血球计数板法 【摘要】测定微生物细胞数量得方法很多，有分光光度法、显微直接计数法与平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但就是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小.?显微计数法适用于各种含单细胞菌体得纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质，常不易分辨.菌体较大得酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(PetｒｏｆHausｓｅr)细菌计数板。两种计数板得原理与部件相同，只就是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜，计数板下部得细菌不易瞧清.本实验采用血球计数板法，主要目得就是了解血球计数板法得构造与使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目得与要求 １、了解微生物计数常用得三种方法：分光光度法;平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板得构造与使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，就是一种常用得微生物计数方法。此法得优点就是直观、快速.将经过适当稀释得菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间得计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室得容积就是一定得（０、1mｍ2），所以可以根据在显微镜下观察到得微生物数目来换算成单位体积内得微生物总数目。由于此法计得得就是活菌体与死菌体得总与，故又称为总菌计数法. 血球计数板,通常就是一块特制得载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间得平台又被一短横槽隔成两半，每一边得平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间得大方格即为计数室，微生物得计数就在计数室中进行。 计数室得刻度一般有两种规格,一种就是一个大方格分成１６个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种就是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论就是哪种规格得计数板,每一个大方格中

血细胞计数板的应用

血细胞计数板及其应用 (1)血细胞计数板：通常有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。但无论哪种规格的计数板，每个大方格都有16×25＝400个小方格。一个大方格长和宽各为 1 mm，深度为0.1 mm，体积为0.1 mm3。 (2)计数方法：对于16×25的计数板而言，计四角的4个中方格共计100个小方格中的个体数量；而对于25×16的计数板而言，计四角和正中间的(共5个)中方格共计80个小方格中的个体数量。(如图所示) (3)计算方法： ①16×25型的计数板： 酵母细胞个数/mL＝(100个小方格细胞总数/100)×400×10000×稀释倍数。 ②25×16型的计数板： 酵母细胞个数/mL＝(80个小方格细胞总数/80)×400×10000×稀释倍数。 附： 1.镜检计数方法 ①方格内细胞的计数顺序为左上→右上→右下→左下。②压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数。③酵母细胞若有粘连，要数出团块中的每一个细胞。④出芽酵母的芽体体积若超过细胞体积的1/2，则算独立个体。⑤计数总数不少于300个细胞。 2．注意事项 （1）进行计数前，应先将试管摇匀，目的是使酵母菌在培养液中混合均匀，以减少计数误差。 （2）显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应取相邻两边及顶角计数。

（3）若一个小方格内酵母菌数量过多，难以数清时，则可将培养液稀释一定倍数后再计数。 （4）本实验无另设对照实验，酵母菌每天的数量变化可形成前后对照。 （5）血细胞计数板使用后，切勿用硬物洗刷，可采用浸泡和冲洗的方法清洗。 例1：检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0.1 mm3。 现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻个／mL。(5n×105) 例2：为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16（1mm×1mm×0.1mm）型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上色细胞的个数应不少于，才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。（无30）

血球计数法计数原理

一、血球计数板的使用原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。 计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由 16×25=25×16=400个小方格组成。 1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算： 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数

血细胞计数板计算方法

血细胞计数板计算方法 血细胞可以说是人类身体的一种微型结构，而且细胞计数吧，通常是用来计算血细胞数量的一种生物学工具。血细胞计数板计算公方法是怎样的呢？如果你对这个问题感兴趣，不妨跟小编一起来研究一下吧。 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数（即80个小格）。 6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 通过上文的介绍，你对血细胞计数板的计算方法是否增加了了解呢？血细胞是存在于我们人体血液中的一种重要组成成分，对人类的健康来说具有举足轻重的影响。而医生通过测量你的血细胞分布状况和数量，对于判断身体的病灶具有重大的作用。因此我们都应该对血细胞的计算方法有所了解。

细胞数的测定(血球计数板的使用方法)

、目的与要求了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。 二、原理 用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的厚载玻 片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分为16个小方格（即25X 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一个大方格边长为 1 mm则每一个大方格的面积为 1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片 与载玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1 mm3 实磴圈-石血球计弦板杓构jfi 三、血球计数板的使用方法 （一）菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5?10个酵母为 宜，可采用10倍系列稀释法。 （二）加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。由盖玻 片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。 （三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。当芽抱菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。 （四）计数时若使用刻度为25X 16 （大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。如用刻 细胞数的测定 D申決甌裕牧我

血球计数板使用方法

血球计数板介绍 用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。 使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的 计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。 6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 计数公式 1、16格×25格的血球计数板计算公式： 细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数 1、25格×16格的血球计数板计算公式： 细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数

细胞计数方法细胞计数板法

细胞计数方法——-－-—细胞计数板法 实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。 具体操作: １. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。 ２、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置３miｎ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。 3。计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。然后按公式计算: 细胞数/ｍL=四大格细胞总数/4×1０个／ml (注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有１6 个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×1６即每个格得平均值。所以,细胞密度=m×1６×10个／ml) 说明:公式中除以4,因为计数了４个大格得细胞数。 公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为: １。0mm(长)×1.0mm(宽)×０。１mm(高)=0.1mm 而1ml=1０00ul＝１0０0ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10% 以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。) =========＝===============＝==＝=＝=＝＝===＝=＝＝====＝== 细胞计数板得使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为１６个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成２5个小方格;另一种就是一个计数区分成２5个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成1６个小方格。但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、

血球计数板的使用(有图指导)

血球计数板的构造和使用 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3. 计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.

血球计数板的使用 以计数酵母菌为例 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央计数室上加盖专用的厚玻片. (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内. (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.

(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 3.计算公式 (1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.

微生物的计数_血球计数板法

微生物的计数——血球计数板法 【摘要】测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目的与要求 1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板的构造和使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方

细胞计数方法 细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml (注：当细胞很多时，可在四个大格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后对选定的小格计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个大格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml) 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。） ================================================ 细胞计数板的使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

血细胞计数板的构造和使用方法简介

血细胞计数板的构造和使用方法简介 【摘要】人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。本文简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。 【关键词】血细胞计数板的构造计数方法使用方法 人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。下面简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。 1.血细胞计数板的构造 血细胞计数板(血球计数板)是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞、细菌等一些微小物体的长度，测量单位体积细胞的数量等。血细胞计数板是由一块比普通玻片大而厚的特制玻璃片制成的，它的两边有两个凸起部分，中间有四条槽沟构成三个平台，中央的平台较宽，而且被一短槽隔成两半，每个半边上各刻有一个方格网，每个方格网共有九大格，中央的大格就是计数室、中央的平台比两边稍低，加盖盖玻片后，中央平台要比两边平台低0.1mm,也就是盖上盖玻片后计数室深度为0.1mm.。（见图A、B、C、D） 1.1 计数室的规格有两种，一种是由25中格组成，每个中格又分为16个小格（共25×16＝400小格）（见图E）；另一种是由16中格组成，每个中格又分成25个小格（共16×25＝400小格）(见图F)。可见，尽管计数室有两种规格，但是，不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是16×25=25×16=400个小方格组成。 1.2 计数室的大小有两种，一种是边长为1mm,则计数室面积为1mm2,每个小格面积为〖SX(〗1〖〗400〖SX)〗mm 2 ，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm。所以，一个计数室的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗4000〖SX)〗mm 3 ；另一种是边长为2mm，则计数室的面积为4mm2，每个小格面积为〖SX(〗1〖〗100〖SX)〗mm2，盖上盖玻片后计数室的高度为0.1mm，所以，一个计数室的体积为0.4mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗1000〖SX)〗mm3。 〖XC12.TIF；%50%50〗 2.计数方法 2.1 25×16计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个中格，即5×16＝80个小方格的细菌数，若这80个小方格细菌数为A(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室的边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗A〖〗80〖SX)〗×400×10×1000=50000A（若菌液被稀释，还要乘以

细胞计数方法--细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml (注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml) 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。）

================================================ 细胞计数板的使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为 1/4000mm3。 使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 二、细胞计数板-使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

血细胞计数板的构造和使用方法简介(必3)

血细胞计数板的构造和使用方法 一、血细胞计数板的构造 血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制 玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平 台；中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两 半，每半边上面刻有一个方格网（见图B ——侧视 图、图A ——俯视图；1.计数板 2.盖玻片 3.计数 室）。方格网上刻有9个大方格（见图C 、E ），其 中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物（细 胞）计数用。计数室通常有两种规格：一种是 25×16型，即大方格内分为25个中方格（中方格 之间用双线分开，见图C 、D ），每一中方格又分为 16个小方格；另一种是16×25型，即大方格内分为16个中方格（见图E ），每一中方格又分为25个小方格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点：即每一大方格都是由25×16=16×25=400个小方格组成（见图D ）。 计数室边长为1mm （或2mm ），面积为l mm 2（或4 mm 2），盖上盖玻片后，计数室的深度为0.1mm ，所以计数室的容积为0.1mm 3（或0.4 mm 3）。（图A ——俯视图：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的深度；1/400mm 2表示计数室面积是1mm 2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm 2）。 C D E

二、血细胞计数板的使用（以计数酵母菌为例） (1)视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释。样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。 (2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净，在计数室上盖上一块专用的盖玻片。 (3)将稀释后的酵母菌悬液摇匀，用吸管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数室，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。 (4)静置片刻，待酵母菌全部沉降到计数室低部，将血细胞计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 (5)计数时若计数室是由16个中方格组成（见图E），数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100个小方格）的菌数；如果是由25个中方格组成的计数室，除数上述四个中方格外，还需数中央l个中方格（即80个小方格）的菌数（见图C、D）。 若菌体位于中方格线上，一 般只计数中方格的上方和左方线 上的酵母细胞（如右图用圈标出 者），以减少误差。计数时应不 时调节细准焦螺旋，才能观察到 不同深度的菌体。 (6)计数一个样品要以两个计 数室中计得的平均数值来计算， 每个样品计数应重复3次（每次 数值不应相差过大，否则应重新 操作），再取其平均值，最后换算出10毫升（或其他体积）（10毫升等于104mm3）菌悬液所含酵母菌细胞数量（注意考虑稀释倍数）。 (7)测数完毕，取下盖玻片，用清水将血细胞计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

细胞计数板使用方法.

细胞计数板使用方法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3 而1ml=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液） 细胞计数板的使用 血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 细胞计数板-使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见下图：即本格中计数细胞为3个。

实验五、微生物的计数——血球计数板法

实验五、微生物的计数——血球计数板法测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目的与要求 1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板的构造和使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方

实验8 血细胞计数板的使用

血球计数板的使用 Questions： 1.亚甲蓝染色液怎么配制？ 2.计数时是全部计数还是选取其中一部分计数？ 3.菌悬液怎么制备？ 4.加样时可以先加样再盖玻片么？ 5.计数时，若有菌体处于边界线上应怎么计数？ 一、实验目的 1.能正确进行染色操作； 2.能正确使用显微镜； 3.能用血球计数板对微生物进行计数。 二、实验原理 血球计数板可计算活菌和死菌的数目，其用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm².容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。 三、实验仪器

显微镜、血球计数板、接种环、酒精灯 四、实验步骤 1.菌悬液的制备 用平板培养的微生物怎么制备菌悬液？ 操作过程中是否需要无菌操作？ 2.染色 注意染色剂浓度过稀菌体不能充分染色的情况。 3.血球计数板计数室洁净度检查 若有污染，清洗吹干后方能使用。 4.加样 血球计数板盖上盖玻片后，从盖玻片边缘加入菌液，此过程不可有气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽内多余菌液。 用什么加样？ 5.显微计数 静止5min后，观察技术，以每小格内有5-10个菌体为宜。先用低倍镜，再用高倍镜。观察时注意调整光源亮度（可适当调弱）。 为什么要静止5min？ 6.计算 7.清洗血球计数板 用水冲洗，不要用硬物擦洗，以免损坏网格刻度。自行晾干或吹干放入盒内保存。 五、注意事项

细胞计数板的使用方法

血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 细胞计数板-使用方法

1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍？），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见下图：即本格中计数细胞为3个。 （细胞压线，仅计数相邻的两条线上的细胞）

微生物显微计数--血球计数板法

微生物显微计数-－血球计数板法 一、目的要求 1．了解血球计数板的构造和使用方法。 2．学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0．1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即16×25=400小方格。 每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。 在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数 因1ml=1cm3=1000mm3， =50000A·B（个） 同理，如果是16个中方格的计数板，设五个中方格的总菌数为A＇，则 三、器材 酿酒酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管。 四、操作步骤 1．稀释 将酿酒酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。 2．镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。 3．加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。 4．显微镜计数 静止5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。

血细胞计数板相关知识及练习

血细胞计数板

(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。 (3)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。 (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内。 (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞) 。 (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。 ２、计算公式： (1)16格×25格的血细胞计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数 (2)25格x16格的血细胞计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数 ３.血细胞计数板的清洁： 血细胞汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止. 三、不足之处 血细胞计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，简便快捷。但是在计数时包括死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。这样得出结果往往偏高，因此适用于对形态个体较大的菌体或孢子进行计数。 四、相关练习： 1．在一定量的酵母菌培养液中放人活酵母菌若干，抽样镜检，视野下如图甲所示（图中小点代表酵母菌）。将容器放在适宜温度下恒温培养5小时后，稀释100倍，再抽样镜检，视野下如乙图所示。根据实验结果判断，以下叙述正确的是（）