徒手切片方法

徒手切片法

特点不需要机械设备，能保持活体的情况。主要用在组织化学、生药鉴定、石蜡切片选材等。

方法要领切片最要紧是平而薄，无需切成完整的。例如茎的横切面，无须切成整圆形，只需一角就足够了。

步骤①一般用左手的大拇指、食指和中指这三个手指拿住材料，使材料突出在指尖上面，使刀片不会割伤它们。用右手拿刀片。两只手应该可以自由活动，不要使它们靠紧身体，或压在桌子上。②刀片刀口放在切面上，从刀片刀口下方起，斜向后拉切，切时要用臂力，不用腕力。不必太用力，否则就不易切薄。③连续切几片后，取下切片，转移到载玻片上的一滴水中，放在低倍显微镜下检查。假如切片充分透明，细胞重叠不明显，就可使用。否则得重切。④过于柔嫩的植物器官，如叶片，难以直接拿住，可以用坚固而易切的材料夹后再切，如胡萝卜片。⑤作临时观察的话，直接用水或甘油封片就行。如果要更清楚地显示细胞结构及其化学成分，则可以进一步染色。

徒手切片法

?实验材料：印度橡皮树叶片；芹菜叶柄；柳树枝条

?实验用具：双面刀片，镊子，毛笔，培养皿，载片和盖片，吸水纸，光学显微镜

?药品：蒸馏水，95％叔丁醇，甘油

细胞内含物观察——橡皮树叶片

?材料：橡皮树叶片

?方法：徒手切片

?观察重点：复表皮、钟乳体

–钟乳体：碳酸钙结晶

–形态：呈桑葚状

–问题：若在盖玻片一侧滴入盐酸，钟乳体如何变化？结晶体——背景知识

?种类：

–草酸钙晶体：针状、晶簇状等

–碳酸钙晶体：桑葚状

–二氧化硅结晶：禾本科

?细胞化学检验方法：

–酸检法：醋酸（－）；浓盐酸/硫酸（＋）

–醋酸铜－硫酸铁法：

?醋酸铜溶解草酸钙，形成草酸铜；

?加硫酸铁：黄色结晶

机械组织——芹菜叶柄

?实验材料：芹菜叶柄

?观察重点：

–芹菜叶柄：厚角组织

植物茎的次生结构——柳树茎

?观察重点：

–多年生植物茎的次生结构；–年轮，周皮等

植物组织染色

–番红——固绿对染

徒手切片制作方法(借鉴材料)

一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两

半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。 2、切片 （1）盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。 （2）右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 (3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。 (4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。 (5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固

组织切片制作步骤

组织切片制作步骤： 1.取材 确定所取材料的来源及部位，纵切还是横切； 取材要迅速，防止阻止发生进一步变化，材料体积要适宜。 下图为植物芽体取样实拍。 2.固定 （1）固定液的选择 最常用的固定液为FAA（万用固定液）。 它的优点是材料固定时间不受限制，固定时间短则数小时，长则数月或数年。（可做材料保存液） 配方：50％或70％酒精90ml 冰醋酸5 ml 福尔马林5 ml (柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制) （2）材料固定后的处理 冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。 (材料固定后，若暂时不能进行下一步操作，可于70%的酒精溶液或直接与FAA固定液中，于冰箱中4℃存放。) 下图为固定液浸泡的组织切块。 3.脱水 目的：水和透明剂不能互溶，只有脱去水分后，才能让透明剂进

入。 试剂：梯度酒精溶液 流程：70%---85%---95%--100%---100%每步1h-2h左右。 注意事项：保证脱水梯度和每一步脱水时间，水要完全脱净，但也不能过度脱水（过久使组织变脆、收缩，这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下，不必完全按照本操作来）。 下图为自动组织脱水机，适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。 4.透明 目的：纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。 (二甲苯是最常用的透明剂，可以很好地与石蜡互溶) 流程：二甲苯与酒精的等体积混合液1h---纯二甲苯1h---纯二甲苯1h。 5.浸蜡与包埋 目的：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。 浸蜡程序:(恒温) （1）低温浸蜡（36℃）：接上步，在有二甲苯和材料的烧杯中逐步加碎蜡至过饱和（石蜡不能溶解），过夜12-24h。 （2）高温浸蜡（55-60℃，高于石蜡熔点3℃）： 将上步二甲苯与石蜡的混合液倒出，不要倒掉材料，将烧杯中加入纯石蜡，共5-24h。纯石蜡需要更换三次。

实验二 徒手切片法和临时装片的制作方法以及植物细胞和组织观察

实验二临时装片的制作方法和徒手切片法以及植物细胞、组织观察 一、实验目的 1、掌握临时装片的制片方法、掌握徒手切片的方法 2、了解植物细胞结构。 二、实验材料 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、培养皿、毛笔、滴管、纱布、 0.9%的NaCl溶液；洋葱、马铃薯、芹菜、番茄 三、实验内容和实验方法 （一）临时装片的制作 1、擦净载玻片和盖玻片 （1）擦载玻片用左手的拇指和食指捏信载玻片的边缘，右手用纱布将载玻片上下两面包住，然后反复擦拭，擦好后放在干净处备用。 （2）擦盖玻片先用左手拇指和食指轻轻捏住盖玻片的一角，再将右手拇指和食指用纱布把盖玻片包住，然后从上下两面隔着纱布慢慢地进行擦试。 2、取样 用滴管滴一点水或其他溶液（根据需要）于载玻片的中央，把观察物放于载玻片上的液滴中，展开或摇匀。 3、盖盖玻片 右手持镊子，轻轻夹住盖玻片的一角，使盖玻片的边缘与液滴的边缘接触，然后慢慢倾斜下落，最后平放于载玻片上，避免气泡的产生。如盖玻片下的液体过多，可用吸水纸将多余的液体吸掉。

（二）徒手切片法 徒手切片法不需要任何的机械设备，只需要一把锋利的刀片就可以完成切片的制作，方法简单，也容易保持物的生活状态，有很大的实用价值。 1、选材 选择软适度的材料，先截成适当的段块。一般直径大小以3~5mm、长度以20~30mm为宜。若材料太软，如幼叶等，不能直接拿在手中进行切片，可用适当大小的马铃薯块茎或萝卜块根等作支持物，将材料夹入其中，一起切片。 2、切片 用左手拇指、食品指和中指夹住材料，使其稍突出在手指之上，拇指略低于食指，以免刀口损伤手指。材料和刀刃上蘸水，使其湿润。右手拇指和食指横向平握刀片，刀片要与材料断面平行，刀刃放在材料左前方稍低于材料断面的位置，以均匀的力量和平稳的动作从左前方向向右后方拉切。切片时要用臂力而不用腕力，手腕不要动，靠肘、肩关节的屈伸来切片，拉切要快，中途不要停顿，更不能用拉锯方式进行切片。 每切2~3片就要把刀片上的薄片用湿毛笔移入盛有清水的培养皿中暂存备用。如发现材料切面出现倾斜，应修平切面后再继续切片。 3、镜检观察 连续切下很多切片后，挑选最薄的切片放于加了1滴清水的载玻片，盖上盖玻片，制成临时装片，进行镜检、观察。 （三）植物细胞的结构观察 1、洋葱表皮细胞的观察 取一洁净载玻片，于载玻片中央加上一滴水。取洋葱一个，剥下一片新鲜的带紫色的南鳞叶，和刀片从外表面（或内表面）切一个面积为4mm2左右的方形小格，然后用镊子将表皮撕下，迅速入入载玻片上的小水滴中（表面向上）。并使其平展，盖上盖玻片，即制成临时装片。将装片放在显微镜下，用低倍镜观察细胞结构。

5G网络切片技术简介

5G网络切片技术简介 5G预计在2020年实现商用化因而被广泛提起，提到5G就不得不提起网络切片（NetworkSlicing），作为5G中被讨论最多的技术，网络切片对于5G的意义巨大。本文主要从以下几个方面对5G网络切片技术做一些简要介绍。 网络切片的定义网络切片可以理解为支持特定使用场景或商业模式的通信服务要求的一组逻辑网络功能的集合，是基于物理基础设施对服务的实现，这些逻辑网络功能可以看作是由EPC下的网络功能（NetworkFuncTIon）分解而来的一系列子功能（Networksub-FuncTIon）。可以看出网络切片是一种端到端的解决方案，这种端到端的解决方案不仅可以应用于核心网，还可以应用于无线接入网RAN。 网络切片从服务层（servicelayer）和基础设施层（infrastructurelayer）的角度来考虑问题。服务层从逻辑层面来描述系统架构，由网络功能和功能间的联系组成，这些网络功能通常以软件包的方式被定义，其中会提供定义部署和操作要求（连接、接口、KPI要求等）的模板。基础设施层从物理层面描述维持一个网络切片运行所需要的网络元素和资源，其中包括计算资源（例如数据中心中的IT服务器）和网络资源（例如聚合交换机、边缘路由器、电缆等）。 划分好基础设施层和服务层之后，需要考虑两个层之间的映射问题，这是一个典型的虚拟网络嵌入问题，主要包含以下两步： 1、从虚拟功能到物理功能的映射，包含网络转发元素和计算资源的选择，比如装置类型和装置地理位置的选定，需要资源的数量由服务层的需求决定。 2、从虚拟链路到物理链路的映射，分配多少物理链路带宽也取决于服务层的需求。 任何两个切片A和B之间的关系可以有以下情况中的一种： 不同服务层：比如切片A为M2M类型装置提供服务，切片B为人工操作装置提供服务。相同服务层，但是网络功能稍有修改：例如切片A支持高移动性用户，切片B提供相同

徒手切片制作方法

、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液）， 0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5?6毫米，长1? 1.5 厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等）中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。 2、切片 （1 ）盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2?3毫米，材料的切面必须保持水平方向。 (2) 右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。

(3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。 (4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。 (5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。固定时间为16 分钟或更长时间。 4、染色、脱水、透明 ( 1)用吸水管吸去70%酒精，染以1%番红( 50%酒精溶液)约30 分钟。 (2)再用吸管吸去番红，换用70%>85%>95%酒精进行冲洗、脱水，每级酒精3?5分钟。 ( 3)复染色。吸去酒精，用 0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色，时间为 0.5 分钟。 ( 4)冲洗、脱水。用95%酒精冲洗1 次，时间10 秒。后移入纯酒精中脱水2?3 次，每次3?5 分钟。 （5）透明。吸去纯酒精，放入二甲苯—纯酒精溶液中脱水和透明1 次，时间5 分钟。 （6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明2次，时间5 分钟。 5、封片、贴标签将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树胶，盖上盖玻片进行干燥。

徒手切片的基本要求

、目的与要求 1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。 2、学习徒手切片技术。 3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。 二、材料和用品 1、自备材料：解剖器（镊子、解剖针、单面刀片或双面刀片）；洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。 2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。 三、实验内容 1、临时装片的制作方法 2、徒手切片方法 四、实验方法 要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以及一些很微小的藻、菌植物等，这些用肉眼是无法看到的，必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察，首先必须制成各种制片，放在显微镜下才能观察。制片的方法很多，这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术。 1、临时装片的制作方法 临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料（如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等），把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。这种方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩。此法一般多做为临时观察使用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。 临时装片的制作方法和步骤如下： （1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净，再用纱布擦干，擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均匀。 注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心，用力要轻，右手食指和拇指要轻轻捻动，以免把盖玻片捏破。 （2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵……），放在载玻片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或分散开，勿使材料折叠或干燥。（3）加盖玻片及其它处理：为了避免产生气泡，盖盖玻片时，应该以大拇指和食指拿着盖玻片的两个角或用镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的水滴边缘接触，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将贴近载玻片时，则可放手或抽出镊子，使其自然轻轻复盖，这样可以使盖玻片下的空气挤出，免生气泡。注意载玻片中央的液滴要适中，既要使其充满盖玻片，又要不会使盖玻片浮动或使液滴从盖片下外溢，假如水不够，可用吸管小心地从盖玻片的边上再滴入一小滴水，使它和盖玻片下面的水相接触；如果水太多，溢出盖玻片，则可用吸水纸吸去，盖玻片的上面，一定不能被水浸湿，如果发生这种情况，应该小心地取下盖玻片，擦干以后，再按上述方法重新盖上。这样做好的装片，便可在显微镜下进行观察。根据需要，临时水装片做好后还可以进行简单的染色（例如用碘—碘化钾或番红等来染色），其方法是直接在盖玻片的一侧加一滴染液，用吸水纸条在盖玻片的另一侧吸水，引入染液，以使盖片下的材料染上色。

组织切片制作步骤

徒手切片法： 徒手切片法是指手持刀片将新鲜的或固定的实验材料切成薄片的制作方法。徒手切片法是指不需要专门的仪器设备，试样也不需要特殊的化学试剂处理，而直接将新鲜的或固定的材料(一般为木质化程度较低的植物)切成薄片的方法。 基本信息： 徒手切片前，应先准备好一个盛有清水的培养皿。在切片时，用左手的拇指与食指、中指夹住实验材料，大拇指应低于食指2～3mm，以免被刀片割破。材料要伸出食指外约2～3mm，左手拿材料要松紧适度，右手平稳地拿住刀片并与材料成垂直。然后，在材料的切面上均匀地滴上清水，以保持材料湿润。将刀口向内对着材料，并使刀片与材料切口基本上保持平行，再用右手的臂力（不要用手的腕力）向自身方向拉切。此时，左手的食指一侧应抵住刀片的下面，使刀片始终平整。连续地切下数片后，将刀片放在培养皿的水中稍一晃动，切片即漂浮于水中。当切到一定数量后，可在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。好的切片应该是薄且比较透明、组织结构完整，否则要重新进行切片。 对经检查符合要求的切片，如果只作临时观察，可封藏在水中进行观察。若要更清楚地显示其组织和细胞结构，可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤，做成永久玻片标本。 徒手切片技巧 如果不想切斜，要注意两点，一个是左手拿的露出来那截要短，

尽量只能连续切2刀的样子(一般是可以切4，5刀的），一个是切口一定要水平，同时右手的刀片也要水平，拉刀的时候保持在一个平面上（拉快点容易做到）。这是根和茎的切法，不过每次的量会有所减少。对于叶，有三种切法，一个是直接切；一个是卷成管状，当茎来切；还有就是用三层刀片夹起来。其中，第一种适合于裸子植物那种针叶，方法要领和上面说的差不多；第二种适合于比较软的叶片，要领是要卷的细，中间的洞不要太大（大了容易斜）；第三种适用于比较坚韧，硬的叶片，绝对要放在载玻片之类的地方，要用划的，凌空切会很不顺，容易切不断。还有一种特殊的方法是切成小块的先，再夹到萝卜里面（事先挖个洞或切条槽），再一起切，这个适用于全部，根茎叶，软的硬的均可（就是那种针叶不太好用它，我都切不好）。所以克服柔软就是要注意，想办法使它变厚变硬（对叶：卷，夹，或者垫玻璃；对根茎，夹，或者用左手捏紧一点，捏上面一点，使它不会晃）。至于弯曲，我觉得不用太在意，要么舍弃掉这一段，要么用手压紧，关键只是上面要平。还有，如果切含有楞或者有叶脉的部分，一定要从这些地方开始切，先切硬的部分（朝向刀口）。平时切两到三层差不多，一层的细胞会破损，有空洞；这样也比较适合染色。 徒手切片的优缺点 徒手切片是用手持双面刀片或剃刀，将新鲜材料或预先固定好的材料（切前水洗）切成薄片，不经染色或经简单染色后，用水封片作临时装片观察。徒手切片法的优点是不需要复杂的设备，方法简便，制片迅速，而且能观察到植物组织的自然色泽和活体结构，常用于研

切片实验技术

Cross section experiment introduction Cross section experiment introduction ECSM QE department Issue date:Sep. 2006

Preface-----金相切片分析方法特點n破壞性方法 n試樣製備週期長（1d以上，最好3d）n試樣製備要求高 n可直觀地獲取材料內部大量資訊 n對操作和分析人員要求較高

內容 一. 切片前焊接性評估 二. 切片的目的和意義 三. 名詞解釋 四. 設備及材料介紹 五.操作步驟. 六. 相關標准 七. 不良圖片分析 八. 注意事項

X光檢驗(X-ray inspection) (1) 檢驗零件重點：BGA Evaluation components: BGA (2) 檢驗錫洞、錫橋以及大小錫球 Inspect for voids or bridges, large/small balls 4.4.3.3 切片檢驗Crossing sectioning: (1) 檢驗零件重點：BGA, IC, PTH connector,Via hole, RLC. Evaluation components: BGA, IC, PTH connector, Via hole, RLC (2) 著重在檢驗焊錫外觀、錫裂、錫洞及PTH連接器零件腳的吃錫狀況。 Inspection for solder joint structure, crack, void, solder fill condition of PTH connector.

徒手切片制作方法

一、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1 、选材所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5?6毫米，长1?1.5厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等）中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷 成筒状再切

2 、切片 (1) 盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住 材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2?3毫米，材料的切面必须保持水平方向。 (2) 右手执刀( 剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内， 自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 (3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损 伤材料或切得不平。 (4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。 (5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察; 等切到相当数量后; 再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。固定时间为16 分钟或更长时间。 4、染色、脱水、透明

石蜡切片的制作过程(精)

石蜡切片的制作 目的要求:了解生物制片的基本原理和方法;了解石蜡切片制作的基本过程;学会制作石蜡切片。 一、生物制片的基本原理 (一生物制片的目的与发展概况 生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法,其目的是提供在显微镜下以适度的样品,有效地对其进行形态和功能观察研究。 (二生物制片的方法 当我们研究生物体的组织或细胞时,除了某些生物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达到观察目的外,其余大部分生物体,因为组织较厚,光线不易透过内部等关系而达不到观察的要求,为了达到此目的,就必须将生物体的组织切成薄切片或不切片,经过一系列处理,使光线易于透过,即可进行观察。因此,根据标本的制作方法分为切片法和非切片法两种。这些方法,各有优缺点,应该适当的配合使用,才能获得比较理想的结果。 1.切片法 (1切片法的种类 切片法就是利用锐利的刀具,将器官组织或幼小个体分割成许多极薄的薄片,而制成切片标本的一种方法。切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗透某种支持物质。使组织保持一定的硬度,然后利用切片机进行切片。根据所用支持物质的不同切片法又可分为石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。现分述如下: ⅰ.石蜡切片法

石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法,因此用得最多,它有很多优点:比较省时间,容易操作,可切成极薄的切片(4um 以下,能制作连续切片,组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块,较大的组织块不易切好,容易破碎,组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。 ⅱ.火棉胶切片法 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及石蜡,不经高温,可避免组织收缩及变脆,适于精细材料(如脑的切片,也引火棉胶有韧性切片不知有折卷或破裂,适宜于大块组织及多空洞的组织(脑、眼球,硬度较高的组织(骨、肌腱。缺点:手续麻烦、费时间,切片不能切薄,起码在10um以上,不能作连续切片,因此,在生物制片技术上已经不经常采用。 ⅲ.冰冻切片法 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药剂(如氯乙烷在变成气体时吸收大量的热使组织迅速结成冰块而后再进行切片的方法。目前国内外用半导体致冷调节器来代替二氧化碳的冰冻,冷冻速度更快更为方便。 冰冻切片法的优点是较前两种方法简便,组织不经脱水、透明、包埋等手续即可切片,因而可节省很多时间,十分钟左右即能制成切片。常用于临床病理手术诊断,银材料不经溶媒处理就可直接进行切片,材料不受试剂的激烈刺激及温度影响,所以组织没有显著的收缩,细胞形态不致有大的改变,也引冰冻切片不需有机溶剂处理,所以能保存脂肪、类脂等成分,所以冰冻切片法常用于组织化学,尤其是神经组织,临床病理学等方面的研究。 新鲜的组织或已经固定的组织,经短时间处理后即可进行切片。用任何固定及处理的材料均适合冰冻切片,但一般的经验用福尔马林固定的材料最适合冰冻切片,而用酒精、甘油保存的材料必须充分水洗后才易于冰冻,否则不易切成完整的切片

数字切片处理系统的生产技术

本技术提供一种数字切片处理系统，属于病理组织切片分析处理技术领域，包括：云服务器，用于建立切片库存储数字切片的相关信息；管理器，连接云服务器，用于记录关联于数字切片的用户操作，对切片库以及用户操作进行数据分析得到相应的算法方案，根据算法方案管理切片库；多个远程会诊平台，分别连接云服务器，用于提供给用户对数字切片进行用户操作；多个终端，分别通过云服务器连接远程会诊平台，用于提供给用户向云服务器传输相关信息以及提供给用户对数字切片进行用户操作。本技术的有益效果：优化存储方式和算法分析，解决了数字病理大数据集成分析上的归档分类问题，使用户能够有效利用数字切片。 权利要求书 1.一种数字切片处理系统，其特征在于，包括： 云服务器，用于建立切片库存储数字切片的相关信息； 管理器，连接所述云服务器，用于记录关联于所述数字切片的用户操作，对所述切片库以及所述用户操作进行数据分析得到相应的算法方案，根据所述算法方案管理所述切片库； 远程会诊平台，连接所述云服务器，用于提供给用户对所述数字切片进行所述用户操作；

多个终端，通过所述云服务器连接所述远程会诊平台，用于提供给用户向所述云服务器传输所述相关信息以及所述提供给用户对所述数字切片进行所述用户操作。 2.根据权利要求1所述的数字切片处理系统，其特征在于，每个所述终端分别包括： 信息采集模块，用于采集所述数字切片的所述相关信息并输出。 3.根据权利要求2所述的数字切片处理系统，其特征在于，每个所述终端分别包括： 分类处理模块，连接所述切片扫描模块，用于接收所述相关信息，并根据预设规则对所述相关信息进行分类得到分类信息并输出。 4.根据权利要求3所述的数字切片处理系统，其特征在于，每个所述终端分别包括： 存储模块，连接所述切片扫描采集模块和所述分类处理模块，用来接收所述相关信息和所述分类信息。 5.根据权利要求4所述的数字切片处理系统，其特征在于，每个所述终端分别包括： 上传模块，连接所述存储模块，用于接收所述相关信息和所述分类信息并输出至所述云服务器。 6.根据权利要求1所述的数字切片处理系统，其特征在于，所述相关信息包括所述数字切片的图像数据、免疫组化分类信息、病变结论信息以及备注信息。 7.根据权利要求1所述的数字切片处理系统，其特征在于，所述终端为台式电脑、或便捷 式电脑、或平板电脑、或移动智能手机。 8.根据权利要求1所述的数字切片处理系统，其特征在于，所述远程会诊平台包括：

显微镜标本切片的制作方法

1.涂片、铺片、磨片标本的制备 涂片标本的制备;涂片（smear）法是常用的一种方法，如血液等可直接涂于载玻片上制成涂片标本，干燥后进行固定、染色及封固。 铺片标本的制备;（stretched preparation）法用于疏松结缔组织、神经等柔软组织或肠系膜等薄层组织，可将其铺于载玻片上，撕开、展平制成铺片标本，待干燥后进行固定染色。 磨片标本的制备;（ground section）法是用于坚硬组织的标本制作，如骨和牙等坚硬组织除用酸（如稀硝酸）脱钙后再按常规制成切片标本外，也可直接将其磨成薄的磨片标本进行观察。 2.切片标本的制备 观察机体各部的微细结构时，首先要制成薄片，就是切片法，其中以石蜡切片（Paraffin section）最为常见。其制备程序大致如下： ①取材与固定：取材要尽量以人体材料为主，辅以动物材料。取得新鲜材料后，切成适当的小块1.0立方厘米大小）立即投入固定剂（fixative）中进行固定，使组织中蛋白质迅速凝固，防止组织自溶或腐败，以保持生活状态下的结构。常用的固定剂有甲醛、酒精、醋酸、苦味酸、饿酸等。 ②脱水（dehydtation）、透明（clearing）与包埋（embedding）:把固定好的材料用乙醇将组织内的水分脱掉，经二甲苯透明后，再浸入已融化的石蜡中进行浸透、包埋。 ③切片（section）与染色（staining）：用切片机（microtome）切成5～10μm的薄片，贴于载玻片上，脱蜡后进行染色，最常用的染色法是苏木精（hematoxylin,haematoxylin)和伊红（eosin）染色简称HE染色。配制后的苏木精染波呈碱性，可使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体等染成蓝紫色，称嗜碱性（basophilia)；伊红是酸性染料，可使多数细胞的细胞质染成粉红色，称嗜酸性（acidophilia）；耐碱性和酸性染液亲合力都不强的，称为中性（neutroPhilia）； ④封固（mounting）：切片经脱水、透明后，于切片上滴加中性树胶和盖片进行封固后，贴标签备用。 除HE染色外，还有多种染色方法。有的能特异性的显示细胞内某些结构，如使用雷锁辛品红 （resorcin-fuchsin)染液显示组织内的弹性纤维；有的细胞经重铬酸盐处理后，呈棕褐色，称嗜铬性（chromaffinity）；有的组织成分经硝酸银处理时，可使硝酸银还原，形成银微粒附着在组织中呈棕黑色，该特性称为亲银性（argentaffin）；有的组织结构成分，本身不能使硝酸银还原，需加还原剂方能使硝酸银还原，形成棕褐色很微粒附着在组织结构上，这种性质称为嗜银性（argyrophilia）；如肥大细胞中的颗粒经甲苯胺蓝（tofuidine blue）等碱性染料染色后,呈紫红色，这种现象称异染性(metachromasia），其原理可能是染料在溶液中以单体存在时呈蓝色，当它与颗粒中具有大量阴离子的多糖成分耦合后，聚合成多聚体而呈紫红色。 除石蜡切片外，在制作较大结构（如眼球、睾丸等）的切片时，常用火棉胶包埋法；骨和牙等坚硬的组织，可用弱酸（稀硝酸）脱钙后，用石蜡或火棉胶切片（celloidin section）法制成切片标本；还有，为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要，可选用冷冻切片（frozen section），它是将组织先在低温下快速冻结，经直接切片后进行染色，或将组织块置入液氮（-196℃）内快速冷冻，用恒冷箱切片（cryostat section）后进行染色。

徒手切片制作方法

、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5?6毫米，长1?1.5厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等）中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。 2、切片 (1)盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2?3毫米，材料的切面必须保持水平方向。

( 2) 右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 (3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。 (4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。 (5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。固定时间为16 分钟或更长时间。 4、染色、脱水、透明 (1)用吸水管吸去70%酒精，染以1%番红( 50%酒精溶液)约30 分钟。 (2)再用吸管吸去番红，换用70%-85%-95%酒精进行冲洗、脱水，每级酒精3?5分钟。(3)复染色。吸去酒精，用 0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色，时间为0.5 分钟。 (4)冲洗、脱水。用95%酒精冲洗1次，时间10秒。后移入纯酒精中脱水2?3 次，每次3?5 分钟。

病理切片的制作过程

1.7.1 修整组织 将手术切取的乳腺肿瘤切成一个平整面，各组织块不宜太大，以便固定剂穿透和组织脱水等操作，通常以10 mm×10 mm×3mm或5mm×5mm×3mm为宜。找到不同的部位切取2块，以备后用。 1.7.2 组织洗涤 组织经修整后，组织中的福尔马林等必须冲洗干净，尤其是含有重金属的物质存在。因为残留在组织中的福尔马林，有的不利于染色，有的产生沉淀或结晶影响观察，所以组织修整后应冲洗12h左右。 1.7.3 组织脱水 组织经洗涤后，组织中含有大量水分，由于水与石蜡不能互溶，所以必须将组织中的水分除去。 80%乙醇溶液：2h 95%乙醇溶液:1h 95%乙醇溶液:1h 100%乙醇溶液:30min 100%乙醇溶液:30min 1.7.4 组织透明 由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明状态。 二甲苯Ⅰ：30min 二甲苯Ⅱ：10min 1.7.5 组织浸蜡 浸蜡的目的是除去组织中的透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便组织包埋。浸蜡时间根据组织的透蜡时间较长，需3h左右。浸蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在55℃左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。 石蜡Ⅰ：1h

石蜡Ⅱ：1h。 石蜡Ⅲ：1h 1.7.6 组织包埋 将经过透蜡的组织连同熔化的石蜡，一起倒入容器内，然后立即投入冷水中，使其立刻凝固成蜡块的过程。包埋时，将纸盒放在温箱旁边，用镊子夹取组织平放于纸盒底部，，再用温镊子轻轻拨动组织，从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，沿壁倒入包埋用的纸盒中，速度要慢。待石蜡凝固（约30min）后放入冰箱保鲜层内以备后用。包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素，选择不同熔点的石蜡，新的石蜡一般要熬顿几次，以免石蜡固定后有气泡，影响切片。用于包埋的石蜡的熔点在50~60℃之间。 1.7.7 组织切片 （1）从冰箱里拿出蜡块，进行修快 （2）将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。 （3）将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。 （4）摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。 （5）调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。 （6）调整厚度调节器到所需的切片厚度，先调约为25um，待切平后改为5um。 （7）一切调整好后方可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-60r/min。 （8）切成的蜡带到10-20cm长时，右手用另一支毛笔轻轻地将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。 （9）感觉效果较好的蜡片一小段，用单面刀片切取，再放入约43℃的水浴锅中展片，观察切片是否良好。 （10）切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保存。 1.7.8 贴片

切片制作方法

切片制作步骤 取材与分割→固定→洗涤→脱水→透明→浸蜡和埋蜡→切片→粘片→脱蜡→染色→脱水→透明→封片 1、固定液 （1）FAA：福尔马林—冰醋酸—酒精 50%或70%乙醇90mL+冰醋酸5 mL+福尔马林（37%-40%甲醛）5 mL 固定时间最短需10h，一般不低于24h，可兼做保存液 幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。如材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林；如材料易收缩，可稍增冰醋酸。久置时可加5 mL甘油，以防止蒸发和材料变硬。如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果更好： 50%乙醇89mL+冰醋酸6 mL+福尔马林（37%-40%甲醛）5 mL （2）卡诺氏固定液：酒精—醋酸—氯仿 配方1：纯酒精3+冰醋酸1（3:1） 配方2：纯酒精6+冰醋酸1+氯仿3（或纯酒精30 mL +氯仿5 mL +冰醋酸10 mL） 一般材料不超过24h，固定根尖和花药只需40-60min，固定后用95%酒精（85%酒精）冲洗，每级20min;如不能立即处理，需转入70%酒精中保存。 2、洗涤：FAA固定液无需洗涤直接脱水。 3、脱水：材料中含水，水与石蜡不能混合，通常由50%、70%、80%、90%、无水乙醇， 每次1h，其中无水乙醇需2次。材料大的需延长脱水时间（一般此后进行预染色） 4、透明：常用透明剂为二甲苯和氯仿。先经乙醇和二甲苯混合液（1/2乙醇+1/2二甲苯）， 后纯二甲苯（2次），每次1-2h 氯仿不宜在染色后透明。5级进行;1/5氯仿（4/5无水乙醇）→2/5→3/5→4/5→纯氯仿（2次）每级3-4h；最后一次纯氯仿中，放入纯石蜡粉末数次，盖好瓶盖，36℃温箱36h，使材料慢慢浸蜡。 5、浸蜡、包埋：石蜡必须纯净、不含杂质；浸蜡是使石蜡逐渐取代透明剂 石蜡:熔点52-56℃，一般50-60℃ 选用与乙醇和石蜡均能互溶的有机溶剂，如二甲苯，温箱设置高于石蜡熔点2℃ 25%→50%→75%（石蜡、二甲苯溶液） 材料透明好后，换入新的二甲苯，然后加入等体积的碎蜡，40℃温箱，不断加入碎蜡至饱和，然后升温保持3-5h，其间换纯蜡3次，每次约1-2h。（30min也可）包埋是将材料和石蜡一块倒入小盒中，用加热的镊子迅速将材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐，将小盒放入冷水中，凝固 6、修块：包埋好的材料，按需要的切面将蜡块切成梯形，然后用蜡铲把蜡块底部牢固的粘在木质蜡座上

6徒手切片制作与观察.

徒手切片的制作与观察 徒手切片简介 徒手切片法是指手持刀片将新鲜的或固定的实验材料切成薄片的制作方法。徒手切片前,应先准备好一个盛有清水的培养皿。在切片时,用左手的拇指与食指、中指夹住实验材料,大拇指应低于食指 2~3mm ,以免被刀片割破。材料要伸出食指外约 2~3mm ,左手拿材料要松紧适度,右手平稳地拿住刀片并与材料成垂直。然后,在材料的切面上均匀地滴上清水,以保持材料湿润。将刀口向内对着材料,并使刀片与材料切口基本上保持平行,再用右手的臂力 (不要用手的腕力向自身方向拉切。此时, 左手的食指一侧应抵住刀片的下面, 使刀片始终平整。连续地切下数片后,将刀片放在培养皿的水中稍一晃动,切片即漂浮于水中。当切到一定数量后,可在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。好的切片应该是薄且比较透明、组织结构完整,否则要重新进行切片。对经检查符合要求的切片,如果只作临时观察,可封藏在水中进行观察。若要更清楚地显示其组织和细胞结构, 可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤,做成永久玻片标本。 徒手切片技巧 如果不想切斜,要注意两点,一个是左手拿的露出来那截要短,尽量只能连续切 2刀的样子 (一般是可以切 4, 5刀的, 一个是切口一定要水平,同时右手的刀片也要水平, 拉刀的时候保持在一个平面上 (拉快点容易做到。这是根和茎的切法,不过每次的量会有所减少。对于叶,有三种切法,一个是直接切;一个是卷成管状,当茎来切;还有就是用三层刀片夹起来。其中,第一种适合于裸子植物那种针叶,方法要领和上面说的差不多;第二种适合于比较软的叶片,要领是要卷的细, 中间的洞不要太大(大了容易斜; 第三种适用于比较坚韧, 硬的叶片, 绝对要放在载玻片之类的地方, 要用划的, 凌空切会很不顺, 容易切不断。还有一种特殊的方法是切成小块的先, 再夹到萝卜里面(事先挖个洞或切条槽,再一起切,这个适用于全部,根茎叶,软的硬的均可(就是那种针叶不太好用它,我都切不好。所以克服柔软就是要注意,想办法使它变厚变硬(对叶:卷,夹,或者垫玻璃;对根茎,夹,或者用左手捏紧一点,捏上面一点,使它不会晃。

病理组织切片制作过程详解

病理组织切片制作过程详解 -森贝伽生物实验代做中心 公司中心实验室建设有病理学，分子生物学，细胞生物学，免疫学，蛋白质组学，实验动物模型构建，生物芯片，生物信息学等实验技术服务平台。此外，还提供技术咨询培训，课题合作设计与申报，论文翻译润色等实验技术服务。 1．取材 取材的好坏，直接影响切片的质量。取材时，首先要有一把锋利的取材刀，在切割组织时要避免取材刀来回拖拉，切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以0.2 ～0.3cm 为适，较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌组织等可适当厚一点，而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。在取材中还应十分注意组织内是否有缝线或骨组织，如碰到不可避免的钙化组织，一定要非常小心。在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠道时，应注意纤维及肌肉的走向，取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。 (1）材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2）组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm ×2.0cm ×0.2cm ，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm ，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 （3）勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 （4）规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 （5）选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 南京森贝伽生物科技有限公司 实验技术服务，代做实验

徒手切片法

徒手切片法 用光学显微镜观察的样品必须是透明的，因此，无论是临时装片还是永久制片的玻片标本，制作前都必须先将材料切成薄片。 徒手切片法简称手切片法，即以手持刀片将材料切成能在显微镜下观察其内部结构的薄片的方法。是植物形态解剖学实验及研究中最简单和最常用的切片方法，也是最重要的基本技能之一。这种切片方法简便易行，节省时间；而且所需工具简单，只要有一把锋利的剃刀或双面刀片就可以操作。还有一个独特的优点，就是可以看到组织细胞内的自然结构和天然颜色。其缺点是不易做到将整个切面切得薄而完整，往往厚薄不一；过软过硬的材料比较难切。 徒手切片一般处理的是新鲜材料，有时也可将材料预先固定好。 一般材料的徒手切片的方法如下： 1. 材料的准备： 一般选择正常、软硬适中的植物器官或组织为材料，直接切成长约2～3厘米的小段，削平切面。所取的新鲜材料应及时放入水中，以免萎蔫。取材的大小，一般直径不超过5mm，长度以15-25mm为宜。 过于柔软或微小的材料，难以直接执握手切，可夹入坚固而易切的夹持物中切。常用的夹持物有去除木质部的胡萝卜根、土豆块茎、接骨木的髓部等。切前先将夹持物切成长方小体，上端削平。对于较薄的叶状体材料，可将夹持物纵切一缝，材料夹于其中即可；如不是叶状体，即将材料夹于其中，或在缝里挖一个和材料形状相似、大小相同的凹陷，把材料夹在凹陷里。然后用手握住夹持物，采用上述方法将夹持物和其中的材料一齐切成薄片，除去夹持物的薄片，便得到材料的薄片。 坚硬的材料要经软化处理后再切。软化的方法：对于比较硬的材料，切成小块煮沸3～4 h，再浸入软化剂（50%酒精∶甘油＝1∶1）中数天至更长些时间，而后再切。对于已干或含有矿物质，更为坚硬的材料，要先在15%氢氟酸的水溶液中浸渍数周，充分浸洗后，再置入甘油里软化后再切。 2. 执握刀片和材料的方法： 左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料，使之固定不动。为防止刀伤，拇指应略低于食指，并使材料上端超出手指2～3毫米，不可高出过多，否则切片时材料容易弯折，也不容易切薄。 右手大拇指和食指捏住刀片的右下角，刀口向内，并与材料切面平行，切片前先将材料和刀口上蘸些水，使之切时滑润。 3. 切片： 左手保持不动，以右手大臂带动前臂，使刀口自外侧左前方向内侧右后方拉切，同时观察切片的进展情况。注意只用臂力而不要用腕力或指关节的力量，不要两手同时拉动，两手不要紧靠身体或压在桌子上，并且动作要敏捷，材料要一次切下，切忌中途停顿或推前拖后作“拉锯”式切割。关键是要切得薄而平。如此连续切片，切下数片后，用湿毛笔将切片轻轻移入培养皿的清水中备用。 4. 注意： 在切片过程中刀口和材料要不断蘸水，以保持刀口锋利和避免材料失水变形。所切的材料和刀片一定要保持水平方向，不要切斜，否则细胞切面偏斜，同样会影响观察。 5. 镜检： 连续切片，从中挑选薄而平的切片做成临时装片供镜检，必要时也可以制成永久装片。挑选切片时，材料关键是切得平而薄，不要求切得很完整，有时只要有一小部分就可以看清 其结构了。一次可多选几片置于载玻片上，制成临时装片，通过镜检再进一步选择理想的材 料用以观察