EGFR靶向抗体融合蛋白激活免疫细胞杀伤肝癌细胞Huh7的研究

EGFR靶向抗体融合蛋白激活免疫细胞杀伤肝癌细胞Huh7

的研究

杜志娜，曲韬，尉迟敏

【摘要】摘要：目的探究靶向表皮生长因子受体（EGFR）的抗体西妥昔单抗（Cetuximab）与 MHC-I（major histocompatibility complex-I）相关抗原分子MICB（MHC class I-related chain molecules B）的融合蛋白对肝癌细胞Huh7的杀伤效果。方法通过重叠PCR（polymerase chain reaction）的方法通过柔性肽G4S将西妥昔单抗重链C末端及人MICB胞外区基因连接，构建成工程载体，并通过毕赤酵母进行表达；流式检测融合蛋白对Huh7细胞的结合能力；噻唑蓝（MTT）法检测Huh7细胞的增殖抑制；通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）实验验证融合蛋白是否能激活NK细胞杀伤肿瘤细胞。结果通过基因工程手段和毕赤酵母表达，成功获得融合抗体蛋白，经Western blot鉴定结果说明融合蛋白Cetuximab-MICB表达及装配正确。流式细胞术检测Cetuximab-MICB与肝癌细胞Huh7的结合率为72．8%，与母体西妥昔单抗结合率（75．5%）相当。细胞增殖抑制实验，与PBS组对照相比，西妥昔单抗、融合蛋白组对肝癌细胞Huh7均有抑制作用，且抑制作用呈浓度依赖性。在蛋白浓度为400 nmol／L时，Cetuximab-MICB融合蛋白组抑制率（66．09%）强于西妥昔单抗组（56．54%）。将免疫细胞PBMC （peripheral blood mononuclear cell）／NK92和肿瘤细胞 Huh7共孵育，通过检测LDH（lactate dehydrogenase）的释放，发现融合蛋白比西妥昔单抗更有效地介导NK细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤，以PBMC为效应细胞，效靶比为100：1时Huh7细胞裂解率可以达到43．58%，优于西妥昔单抗组